PREPARACIONES HISTOLÓGICAS DEL SISTEMA NERVIOSO.

TÉCNICAS DE TINCIÓN

Aragonés, Fernández Vicente

1º Psicología

Grupo C

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ÍNDICE

1. Tinción de Nissl.2. Tinción de Cajal con nitrato de plata (AgNo3).3. Tinción con hematoxilina y eosina.4. Tinción de Golgi.5. Tinciones par mielina (métodos Weigert)

a. Tinción con tetróxido de osmio.b. Tinción Klüver-barrera.

6. Tinciones para la glíaa. Tinción de Cajal con oro sublimado.

7. Tinciones para revelar neurotransmisores.a. Tinción por fluorescencia inducida por

formaldehído y ácido glioxílico.b. Tinción mediante inmunocitoquímica.

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1. TINCIÓN DE NISSL

Permite teñir el pericarion (soma), pues contiene proteínas que se tiñen bien con colorantes.

Usa colorantes como: Violeta de cresilo, tionina y azul de toluidina. Proporciona una panorámica general y exhaustiva de la distribución,

tamaño y morfología de las neuronas, pero no ofrece información alguna sobre sus ramificaciones.

En la figura de la izquierda, se muestra una sección histológica con tinción de Nissl del hipocampo de un roedor mostrando varios tipos de

neuronas.

Detalle de una neurona, que en este

corte muestra tres terminaciones. Se

puede distinguir claramente el núcleo celular y los núcleos

gliales (puntos pequeños).

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2. TINCÓN DE CAJAL CON NITRATO DE PLATA

Se basa en la adición de nitrato de plata y dicromato potásico en un tejido. Formando un precipitado oscuro que impregna completamente las células del SN.

Obtiene acceso a la morfología completa de neuronas y células gliales. El marcaje de los axones permite obtener información acerca de la conectividad neuronal

Tiñe selectivamente a un grupo muy bajo de células.

Tinción de Cajal. En la imagen de la izquierda se muestran una serie de fibras y axones colaterales a las células de Purkinje.

En la imagen de la derecha, se muestra una neurona con el núcleo y el nucléolo bien diferenciados. Esta célula pertenece

a un bulbo raquídeo humano

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3. TINCIÓN CON HEMATOXILINA Y EOSINA

La hematoxilina se fija a estructuras ácidas como la cromatina del núcleo y los grandes acúmulos ribosomales del citoplasma como el retículo endoplasmático rugoso.

La hematoxilina no es un colorante en sentido estricto si no que lo es la hematina (compuesto oxidado)

La eosina se une a elementos del citoplasma y la matriz extracelular.

El tiempo de diferenciación depende de la intensidad de tinción de la eosina que se desea en la muestra.

En la imagen de la izquierda, se muestra el primer plano de un ganglio espinal teñido con hematoxilina-eosina donde se pueden ver las células que lo componen.

En la figura, se observan neuronas pseudounipolares (más grandes), vasos

sanguíneos, axones y células de Schwann que forman las vainas de mielina que recubren estos axones.

En la imagen siguiente se muestran tanto células

satélites (pequeñas), como neuronas (grandes) y

vasos sanguíneos (capilares). La imagen

corresponde a un ganglio con el objetivo 40x.

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4. TINCIÓN DE GOLGI

Permite diferenciar morfológicamente cada una de las células del SN, por lo que es posible agruparlas según sus características externas.

Tiñen un porcentaje muy bajo de células. La tinción se localiza en toda la extensión de la célula, no en una

determinada zona. Los resultados se obtienen en un periodo breve de tiempo. Excelente impregnación de axones, aunque no se tiñen completamente

las arborizaciones terminales por lo que aparecen con un aspecto más claro y despejado.

En la figura, se observan células de Purkinje correspondientes al cerebelo, mediante la técnica de tinción de Golgi.

Gracias a la tinción de Golgi puede distinguirse una única célula en todo su

esplendor: El soma triangular que constituye el citoplasma y del cual

parte el largo axón y las dendritas. En imágenes como esta Cajal llegó a

distinguir incluso las espinas dendríticas que recubren las

ramificaciones y el cono axonal.

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5. TINCIONES PARA MIELINA (MÉTODOS DE WEIGERT)

Usan colorantes afines a proteínas unidas a fosfolípidos. Sirven para identificar tractos de fibras. Se puede combinar con la tinción de Nissl.

5.1. Tinción con tetróxido de osmio.

La imagen de la izquierda muestra una fibra mielinizada preparada con tetróxido de osmio. Se observa un nódulo de Ranvier hacia a mitad de la fibra. La tinción más

oscura de la mielina se interrumpe en el nodo, donde la fibra está cubierta sólo por el citoplasma de la célula de Schwann.

Preparación de fibras separadas teñidas con

tetróxido de osmio, mostrando una clara degeneración axonal.

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En la imagen se muestra un corte transversal de un nervio periférico. Se observan claramente los axones neuronales.

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5.2. Tinción de Klüver-Barrera

Marca de un color los somas neuronales y de otro distinto los axones. Permite detectar las principales rutas por las que las neuronas se

proyectan a otras áreas. El colorante rojo neutro tiñe cuerpos en la sustancia gris y el azul de

luxol pone de manifiesto las vías de la sustancia blanca. Reactivos: Luxol rápido, ácido periyódico de Schiff y hematoxilina (rojo

neutro).

Esta preparación digital muestra una parte de la corteza del cerebelo del mono. Se pueden distinguir

distintas capas de l corteza cerebelosa. El tipo de célula más representativo son las células de Purkinje, que se encuentran de forma dispersa en la capa ganglionar y pueden ser claramente reconocidas por su soma de gran tamaño.Otra capa significativa de la corteza es la capa granular, compuesta por una gran cantidad de células pequeñas, núcleo redondeado, localizada entre la capa ganglionar (células de Purkinje) y la materia blanca.

Imagen de una corteza cerebelosa de un mono con pocos aumentos teñida con la técnica de Klüver-

barrera. Se puede distinguir fácilmente la sustancia blanca y la

sustancia gris.

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6. TINCIONES PARA LA GLÍA6.1 Tinción de Cajal con oro sublimado.

Permite identificar los dos tipos de células gliales, especialmente los astrocitos, rebeldes a la tinción con otros métodos.

La imagen muestra una sección del cerebro de un paciente con Enfermedad de Alzheimer, teñido con el método de Cajal con oro sublimado. Se observa una baja densidad en la población neuronal.

Células neuroglicas de la sustancia blanca del cerebro humano (astrocitos). En la imagen inferior también se observan varias neuronas de tamaño considerable.

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7. TINCIONES PARA REVELAR NEUROTRANSMISORES

Pueden usarse para medir la actividad cerebral mediante la detección de proteínas que se sintetizan cuando las neuronas se activan.

7.1. Fluorescencia inducida por formaldehído y ácido glioxílico. Permite la visualización de monoaminas debido a la unión con el

formaldehído. Estimación semicuantitativa de los terminales y la distribución de la

densidad de los somas neuronales en los tejidos del SNC.

7.2. Inmunocitoquímica Permite identificar elementos como orgánulos celulares,

neurotransmisores, enzimas, receptores de NT... La técnica consiste en crear de forma artificial sustancias químicas que

reconozcan específicamente al elemento a estudiar (Anticuerpos).

Neurona de rata marcada con fluorescencia. Fotografía tomada con microscopía láser. Tinción con anticuerpos contra tubulina en neuronas cultivadas in vitro.

A la derecha, secciones del cerebro del ratón inmunoteñidas con anticuerpo antineuroglobulina.

A-Corteza. B- Hipocampo y surco dentado. C- Tallo cerebral D-Cerebelo y células de

Purkinje.

A la izquierda, detección de tiroxina hidroxilasa mediante inmunocitoquímica usando un anticuerpo primario sin marcar, un anticuerpo secundario conjugado con biotina y el complejo avidina-biotina.peroxidasa.

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REFERENCIAS

Fundamentos de Psicobiología. Libro de prácticas. Vinader Caerols C.

Fundamentos de Psicobiología. Libro de Prácticas 1. Escarbajal Urrieta. M.D.

Histología y biología molecular: introducción a la anatomía patológica. Kierszenbaum.A.

Neuroimagen. Técnicas y procesos cognitivos. Ríos M. The histological slides and drawings of cajal. García López P.,

García Marín V. y Freire M. (2010).

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