43
HISTOLOGI HISTOLOGI E E Lucrare Lucrare practic practic ă ă 1 1

Histologie Lp 1

Embed Size (px)

Citation preview

HISTOLOGHISTOLOGIIEE

Lucrare Lucrare practicpracticăă 1 1

HISTOLOGIAHISTOLOGIA Ştiinţa care se ocupă cu studiul structurii Ştiinţa care se ocupă cu studiul structurii

microscopice a celulelor, ţesuturilor şi microscopice a celulelor, ţesuturilor şi organelororganelor

Compartimente:Compartimente: Citologia Citologia Histologia generalăHistologia generală: : studiul ţesuturilorstudiul ţesuturilor Histologia specială:Histologia specială: studiul organelor: studiul organelor: org. tubulo-org. tubulo-

cavitarecavitare, , org. parenchimatoaseorg. parenchimatoase

LegăturiLegături: : Biologia celulară Biologia celulară Histopatologia Histopatologia

HISTOLOGIAHISTOLOGIA

Ramuri:Ramuri:

Histologia de diagnostic Histologia de diagnostic Obţine continuu date privitoare la structura şi Obţine continuu date privitoare la structura şi

funcţia unui anumit ţesut sau organ funcţia unui anumit ţesut sau organ

Histologia de cercetare Histologia de cercetare Evidenţiază şi studiază:Evidenţiază şi studiază: - o categorie celulară - o categorie celulară // tisulară nedescoperită încă tisulară nedescoperită încă

- modul de comportament al celulelor şi - modul de comportament al celulelor şi ţesuturilor în condiţii fiziologice şi patologice ţesuturilor în condiţii fiziologice şi patologice neexplorateneexplorate

HISTOLOGIAHISTOLOGIA

ŢESUTURILEŢESUTURILE StructuriStructuri supracelulare alcătuite din supracelulare alcătuite din

celulecelule unite între ele printr-o unite între ele printr-o substanţă intercelularăsubstanţă intercelulară

CCelulelelulele îndeplinesc în organism aceeaşi e îndeplinesc în organism aceeaşi funcţie sau acelaşi grup de funcţii.funcţie sau acelaşi grup de funcţii.

4 categorii de ţesuturi: 4 categorii de ţesuturi: epitelialepitelial, , conjunctivconjunctiv, , muscularmuscular, , nervosnervos

Ţesuturile alcătuiesc Ţesuturile alcătuiesc ORGANE ORGANE

Metode de studiere a Metode de studiere a celulelor celulelor şşi i ţţesuturiloresuturilor

Metode utilizate Metode utilizate îîn practica n practica clinicclinicăă

Metode utilizate Metode utilizate îîn cercetaren cercetare

I. Metode utilizate I. Metode utilizate îîn n practica clinicpractica clinicăă

ColoraColoraţţia uzualia uzualăă – Hematoxilin – Hematoxilinăă--eozineozinăă

ColoraColoraţţiiiilele speciale speciale Examenul microscopic Examenul microscopic

extemporaneuextemporaneu ColoraColoraţţiiiilele imunohistochimice imunohistochimice

Preparatele microscopicePreparatele microscopice

OObiectelbiectelee pregătite pentru a fi examinate la pregătite pentru a fi examinate la aparate optice măritoare în vederea studierii aparate optice măritoare în vederea studierii structurii lor.structurii lor.

Componentele: Componentele:

1.1. ObiectulObiectul

2.2. Suportul: lamaSuportul: lama

3.3. Lamela Lamela

Sunt de 2 tipuri: Sunt de 2 tipuri: extemporaneeextemporanee şi şi permanentepermanente

Preparatul microscopic Preparatul microscopic I. RI. Recoltareecoltareaa

Biopsie Biopsie NecropsieNecropsie De la animale De la animale

Preparatul microscopic Preparatul microscopic RRecoltareecoltareaa

InciziaIncizia Excizia Excizia Rezecţia Rezecţia PuncPuncţţia biopsieia biopsie

Preparatul microscopicPreparatul microscopicII. FII. Fixareixareaa

Piesa e introdusă în Piesa e introdusă în fixatorifixatori care care previn degradarea enzimaticprevin degradarea enzimatică ă (autoliza)(autoliza) şi şi ppăăstrstreeaazăză intact intactăă structur structuraa tridimensional tridimensionalăă a a ţţesutuluiesutului..

FormaldehidaFormaldehida

Fixatorii acţionează asupra proteinelor din ţesuturi prin 3 Fixatorii acţionează asupra proteinelor din ţesuturi prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare şi precipitaremecanisme: denaturare, coagulare şi precipitare

Preparatul microscopicPreparatul microscopicFiFixarexareaa

Aspectul unui fragment de Aspectul unui fragment de ţţesut esut dupdupăă fixare fixare

Preparatul microscopicPreparatul microscopicIII. SpălIII. Spălareareaa

Îndepărtează excesul de fixatorÎndepărtează excesul de fixator Se face cu apă sau alcool Se face cu apă sau alcool

(deshidratarea)(deshidratarea)

Decalcificarea Decalcificarea Preparatele de os sau dintePreparatele de os sau dinte Se face cu acizi şi răşini schimbătoare Se face cu acizi şi răşini schimbătoare

de ioni sau prin electrolizăde ioni sau prin electroliză

Preparatul microscopicPreparatul microscopicIV. IIV. Includerea ncluderea îîn parafinn parafinăă

Piesa e îmbibată şi înglobată într-o substanţă Piesa e îmbibată şi înglobată într-o substanţă solidificabilă, denumită solidificabilă, denumită masă de includere.masă de includere.

Piesa devine rigidă şi poate fi secţionată în Piesa devine rigidă şi poate fi secţionată în felii de ordinul felii de ordinul µmµm ((55μμm)m)..

AceastAceastăă sec secţţionare este necesarionare este necesarăă pentru a permite luminii s pentru a permite luminii săă treactreacăă prin preparatul microscopic prin preparatul microscopic şşi apoi si apoi săă ajung ajungăă la la

ochiul obsevatorului, care va ochiul obsevatorului, care va examinaexamina imaginea imaginea

microscopicmicroscopicăă a a ţţesutuluiesutului

Preparatul microscopicPreparatul microscopicIIncluderea ncluderea îîn parafinn parafinăă

Etape: Etape: 1.1. DeshidratareDeshidratareaa- introducer- introducereea a îîn bn băăi de alcool i de alcool

de concentrade concentraţţii crescii crescâânde → alcoolul va nde → alcoolul va îînlocui nlocui apa din apa din ţţesut;esut;

2.2. ClarificareClarificarea a cucu solvensolvenţţi organicii organici (xilen, (xilen, toluen) miscibili attoluen) miscibili atâât t îîn alcool cn alcool câât t şşi i îîn n parafinparafinăă, vor scoate al, vor scoate alccoolul din oolul din ţţesutesut

3.3. Îmbibarea cu parafină: Îmbibarea cu parafină: parafina topitparafina topităă intr intrăă îîn celule → n celule → ţţesutul va fi complet inclus esutul va fi complet inclus îîn n parafina care se va parafina care se va îîntntăări ri şşi va forma un bloc i va forma un bloc solid ce consolid ce conţţine ine ţţesutul;esutul;

4.4. Includerea propriu-zisăIncluderea propriu-zisă

Preparatul microscopicPreparatul microscopicIIncluderea ncluderea îîn parafinn parafinăă

Ţesuturi incluse în blocuri de parafină

Preparatul microscopicPreparatul microscopicV. SV. Sececţţionareaionarea

Preparatul microscopicPreparatul microscopicSSececţţionareaionarea

 

 

Preparatul microscopicPreparatul microscopicVI.VI. Colorarea Colorarea

EvidenEvidenţiază elementele structuraleţiază elementele structurale Coloranţii histologici Coloranţii histologici se fixează pe anumite se fixează pe anumite

componente structurale componente structurale

Coloranţi artificialiColoranţi artificiali: derivaţi din hidrocarburi aromatice : derivaţi din hidrocarburi aromatice şi, în funcţie de natura cromoforului, pot fi: şi, în funcţie de natura cromoforului, pot fi:

1.1. Bazici:Bazici: albastrualbastrull de metilen, albastru de metilen, albastrull de toluidină, de toluidină, fuxina bazicăfuxina bazică

2.2. Acizi: Acizi: eozina, fuxina acidă, eritrozina, orange Geozina, fuxina acidă, eritrozina, orange G

3.3. Neutri:Neutri: eozinatul de azur de metileneozinatul de azur de metilen

4.4. Indiferenţi: Indiferenţi: Sudan III, Sudan III, Sudan negru, Sudan negru, Scharlach RothScharlach Roth

Coloranţi naturali: Coloranţi naturali: carminul, hematoxilina, orceinacarminul, hematoxilina, orceina

Preparatul microscopicPreparatul microscopicColorarea Colorarea

BazofilieBazofilie AcidofilieAcidofilie NeutrofilieNeutrofilie

Termeni care se referă la afinitatea Termeni care se referă la afinitatea tinctorială (de coloraţie) a diferitelor tinctorială (de coloraţie) a diferitelor elemente elemente structurale tisulare structurale tisulare faţă de faţă de baze, acizi sau substanţe neutre.baze, acizi sau substanţe neutre.

Preparatul microscopicPreparatul microscopicColorarea Colorarea

Clasificarea coloraţiilorClasificarea coloraţiilor

1.1. După După electivitateelectivitate: : difuzedifuze şi şi electiveelective

2.2. După După modul de acţiunemodul de acţiune: : directedirecte şi şi indirecteindirecte

3.3. După După procedeul de executareprocedeul de executare: : progresiveprogresive şi şi regresiveregresive

4.4. După După numărul de coloranţi folosiţinumărul de coloranţi folosiţi: : simplesimple şi şi combinate: combinate: succesive sau simultanesuccesive sau simultane

Coloraţia ortocromaticăColoraţia ortocromatică

Coloraţia metacromatică Coloraţia metacromatică

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţia HEia HE

ColoraColoraţţie uzualie uzualăă (95% din lame); (95% din lame); e o metodă directă, e o metodă directă, progresivă, combinată, succesivă, ortocromatică.progresivă, combinată, succesivă, ortocromatică.

HematoxilinaHematoxilina-colorant bazic-colorant bazic- coloreaz- coloreazăă îîn n ALBASTRUALBASTRU structurile structurile bazofile: bazofile: aaciziciziii nucleici- nucleici- ADN-nucleu; ARNADN-nucleu; ARN-- ribozomiribozomi

EozinaEozina –colorant acid- –colorant acid- coloreazcoloreazăă îîn ROn ROŞŞU U structurile structurile acidofile acidofile sausau eozinofile: eozinofile: pproteineroteinelele – – îîn citoplasmn citoplasmă ă şişi în în matricematriceaa extra extraccelularelularăă

Structurile cu conStructurile cu conţţinut ridicat de inut ridicat de substansubstanţţe lipidice e lipidice (cel(celuleule adipoase, mielina) r adipoase, mielina) răămmâân optic vide;n optic vide;

MucusulMucusul şi şi glicogenulglicogenul nu se evidenţiază în coloraţia nu se evidenţiază în coloraţia HEHE

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţia HEia HE

CCeluleleelulele: : funcţia biochimică şi distribuţia funcţia biochimică şi distribuţia elementelor componente. elementelor componente.

Nucleii Nucleii Celulele tinereCelulele tinere sau/ sau/şi active metabolic, prezintă şi active metabolic, prezintă

nucleii eucromi nucleii eucromi sau sau hipocromi hipocromi (eucromatina (eucromatina este palidă)este palidă) și cu nucleolul bine vizibil. și cu nucleolul bine vizibil.

Celulele adulte sau îmbătrânite, cu activitate Celulele adulte sau îmbătrânite, cu activitate metabolică redusă, au metabolică redusă, au nuclei hipercrominuclei hipercromi (heterocromatina inactivă se colorează intens (heterocromatina inactivă se colorează intens bazofil) bazofil)

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţia HEia HE

CitoplasmaCitoplasma Celulele care sintetizează proteine conţin numeroşi Celulele care sintetizează proteine conţin numeroşi

ribozomi liberi şi RER bine dezvoltat şi prezintă un ribozomi liberi şi RER bine dezvoltat şi prezintă un aspect aspect bazofilbazofil al citoplasmei ( al citoplasmei (H H colorează ARN din colorează ARN din ribozomi în ribozomi în albastrualbastru))

Celulele implicate în transportul de ioni conţin Celulele implicate în transportul de ioni conţin numeroase mitocondrii şi prezintă un aspect numeroase mitocondrii şi prezintă un aspect eozinofileozinofil al citoplasmei (al citoplasmei (E E colorează proteinele colorează proteinele cationice: citocromii în cationice: citocromii în roşuroşu). ).

Fibrele musculare au aspect Fibrele musculare au aspect intens eozinofil intens eozinofil datorită fixării eozinei pe proteinele contractile din datorită fixării eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.miofibrile.

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţia HEia HE

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţia HEia HE

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Tricrom MassonTricrom Masson, , tricrom Mallory tricrom Mallory

-- pune pune îîn evidenn evidenţăţă ţţes. conjuntives. conjuntiv

Fibrele de colagen Fibrele de colagen se coloreazse coloreazăă îîn n verdeverde, respectiv , respectiv albastrualbastru

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

RRezorcină ezorcină FFuxină uxină WWeigert:eigert: f fibrele ibrele elastice sunt colorate elastice sunt colorate îîn n violet violet îînchisnchis

OrceinOrceinăă:: f fibreleibrele elastice sunt colorate elastice sunt colorate îîn n maro maro îînchisnchis

RFW Orceina

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Impregnarea argenticImpregnarea argenticăă:: pune pune îîn n evidenevidenţăţă fibrele de fibrele de

reticulinreticulinăă, , neuroneurofibrfibrileilele le din din neneuuroronini şşi i cimentul intercelular cimentul intercelular îîn epitelii n epitelii (negru/maro)(negru/maro)

Ficat-impregnare argentică Ţesut nervos- impregnare argentică

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Sudan IIISudan III, Sudan negru, Scharlach , Sudan negru, Scharlach RothRoth- - folositfolositee pentru a pune pentru a pune îîn evidenn evidenţăţă lipidele lipidele îîn n ţţesuturi, pe care le coloreazesuturi, pe care le coloreazăă îîn galbenn galben, negru şi , negru şi respectivrespectiv roşu roşu..

!!! Fragmentele de !!! Fragmentele de ţţesut esut

nu sunt preparate cunu sunt preparate cu

solvensolvenţţi organici, i organici,

pentru apentru a nu dizolva nu dizolva

subst. lipidice. subst. lipidice.

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Coloraţia PAS (Periodic Acid Coloraţia PAS (Periodic Acid Schiff)Schiff)

ColoreazColoreazăă carbohidra carbohidraţţiiii

îîn roz intens. n roz intens.

Evidenţiază Evidenţiază

membrana bazalmembrana bazalăă

a epiteliilor.a epiteliilor.

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Acidul osmicAcidul osmic - coloreaz- coloreazăă îîn n brun/negru substanbrun/negru substanţţele lipidiceele lipidice

Evidenţiază teaca de mielinăEvidenţiază teaca de mielină

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

Hematoxilina Ferică HeidenheimHematoxilina Ferică Heidenheim-- colorează în negru colorează în negru discurile discurile întunecate ale întunecate ale miofibrilelmiofibrilelor şi or şi evidenţiază aspectul striat al fibrelor evidenţiază aspectul striat al fibrelor musculare.musculare.

Preparatul microscopicPreparatul microscopicCColoraoloraţţiii specialei speciale

ŢŢesutesutulul osos compact osos compact şşlefuitlefuit, montat , montat în balsam de Canadaîn balsam de Canada !!! Preparat !!! Preparat necoloratnecolorat

Preparatul microscopicPreparatul microscopic

VII. MontareaVII. Montarea

VIII. EtichetareaVIII. Etichetarea

Preparatul microscopicPreparatul microscopicEExamenul extemporaneu (la xamenul extemporaneu (la

gheagheaţăţă))Permite un diagnostic rapidPermite un diagnostic rapid (15-20 (15-20

min), care orienteazmin), care orienteazăă decizia decizia terapeuticterapeuticăă chirurgical chirurgicalăă

Frecvent utilizat Frecvent utilizat îîn chirurgia n chirurgia oncologiconcologicăă

Nu are precizia examenului histologic Nu are precizia examenului histologic clasicclasic

Preparatul microscopicPreparatul microscopic-examenul extemporaneu--examenul extemporaneu-

ImunohistochimiaImunohistochimia-principiu--principiu-

UtilizeazUtilizeazăă principiul antigen-anticorp principiul antigen-anticorp (Ag-Ac) pentru a identifica (Ag-Ac) pentru a identifica prezenprezenţţa/absena/absenţţa unor proteine a unor proteine specifice la nivelul specifice la nivelul ţţesuturilor.esuturilor.

antigen cautat

anticorp primar (invizibil)

anticorp secundar (brun)

ImunohistochimiaImunohistochimia-principiu--principiu-

Metoda directMetoda directă ă Metoda indirectăMetoda indirectă

ImunohistochimiaImunohistochimia-principiu--principiu-

Metoda imunoperoxidazeiMetoda imunoperoxidazei: Ac este cuplat : Ac este cuplat cu o enzimă (ex. peroxidaza sau fosfataza cu o enzimă (ex. peroxidaza sau fosfataza alcalina) care poate cataliza o reacţie alcalina) care poate cataliza o reacţie chimică cu un substrat cromogenic (ex. DAB chimică cu un substrat cromogenic (ex. DAB - diaminobenzidina) cu formarea unui produs - diaminobenzidina) cu formarea unui produs colorat (maro). Distribuţia culorii este colorat (maro). Distribuţia culorii este examinată la MOexaminată la MO

Metoda imunofluorescenţeiMetoda imunofluorescenţei: Ac este : Ac este cuplat cu un fluorofor (ex. fluoresceină). cuplat cu un fluorofor (ex. fluoresceină). Preparatul este examinat la MO cu Preparatul este examinat la MO cu fluorescenţă.fluorescenţă.

ImunohistochimiaImunohistochimia-principiu--principiu-

ImunohistochimiaImunohistochimia

Imunoperoxidază Imunoperoxidază ImunofluorescenţăImunofluorescenţă

IIII. Metode utilizate . Metode utilizate îîn n cercetarecercetare

SEMSEM - - scanning electron scanning electron microscopymicroscopy

TEMTEM - - transmision elecron transmision elecron microscopymicroscopy