Columna

La columna es el elemento fundamental de un

cromatografo de lquidos, puesto que es en ella donde

tiene lugar la separacin. Construidas normalmente con

acero inoxidable.

Columna adecuada= Buenos resultados

Partes de la

columna

Caractersticas de la columna que

influye sobre la capacidad de separacin

Dimetro interno

Longitud

Conexiones (reducciones)

Relleno

Tamao de partcula del relleno

Dimetro interno

La eleccin del dimetro interno de la columna se realiza

en funcin de la cantidad de muestra a separar.

Para las separaciones a escala analtica se suelen usar

columnas de pequeos dimetros (1 a 6 mm) mientras que

en los trabajos a escala preparativa se superan los 10 mm

de dimetro interno

Columnas de dimetro pequeo

Dimetro: entre 2 y 0.5 mm

Longitud: entre 25 y 100 cm .

Para reducir el consumo de disolventes, por lo que

facilitan acoplar esta cromatografa a otras tcnicas

analticas (espectrometra de masas)

Longitud de la columna

Las columnas de cromatografa liquida en ningn caso

pueden tener longitudes muy grandes.

Para tamaos de partcula de 10 a 5 nm deben ser

columnas de una longitud menos a 30 cm.

Para tamaos de partcula de 3 nm la longitud no debe ser

superior a 20 cm.

Conexiones

Unin entre el tubo de la columna con el capilar que

conecta con el resto de los dispositivos del cromatografo.

Estas uniones no deben presentar volumen muerto, deben

permitir el paso de secciones anchas de tubo a capilares

deben ser fcilmente montables y desmontables.

Relleno

Tamao de partcula

Los tamaos de partcula habituales se encuentran

comprendidos entre 10 y 3 nm de dimetro, aunque la

gran mayora de los casos, los anlisis se estn realizando

con rellenos de 10 o 5 nm.

Columna mas utilizada en HPLC

Las columnas mas utilizadas en cromatografa de lquidos

son las de relleno; que consiste en un tubo de acero,

relleno de una fase estacionaria adecuada.

El dimetro interno varia entre 2 y 60 mm dependiendo su

utilizacin, a escala analtica o semipreparativa y su

longitud varia entre 5 y 30 cm.

FASES

FASE DIRECTA

fase estacionaria polar

fase mvil de baja polaridad

FASE REVERSA

fase estacionaria de polaridad baja

fase mvil de polaridad alta

Las fases estacionarias en HPLC, estn constituidas generalmente por

partculas de materiales rgidos o semirrgidos. La ms comn es slice.

Funciones de la slice: Superficie adsorbente, soporte de la fase

estacionaria y substrato micro poroso.

Propiedades de la slice que proporcionan su utilizacin como soporte:

Gran resistencia mecnica, amplia gama de formas, tamaos y

dimetros de poro y gran variedad de slices en cuanto a superficie

especifica.

Slica (90%) y almina (10%) son las fases estacionarias

ms comunes.

Tanto las molculas de solutos como de disolvente son atradas hacia los lugares activos polares de la fase estacionaria.

Unos solutos sern ms atrados que otros por la fase estacionaria y as se lograr su migracin diferencial.

Se usan mezclas de disolventes para conseguir el poder de elucin y la selectividad adecuadas. Normalmente un disolvente apolar (n-hexano) unido

a otro ms activo (acetona, cloruro de metilo, etc.).

Fuentes de informacin

http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografi

a/cromatografia_liquida_de_alta_eficacia.pdf

http://www.upct.es/~minaeees/fundamentos_analisis_cromatografico.pdf

http://eprints.uanl.mx/1795/1/1080128425.PDF