IDENTIFICACION DE Erwinia amylovora Y ALTERNATIVA DE

CONTROL EN MANZANO

XII Simposium Internacional sobre Manzano y frutales de clima templado

Asociación de Manzaneros de

Cuauhtémoc, A. C.

CIAD, A. C.

Centro de Investigación en Alimentación

y Desarrollo, A.C.

Unidad Cuauhtémoc, Chih.

Fisiología y Tecnología de Alimentos de la Zona Templada

Víctor M. Guerrero-Prieto, Alejandro Romo Chacón, Ana LuisaMartínez-López, Roberto Martínez-Campos y José Soria-Carrillo

Cuauhtémoc, Chih. 8-11 de Nov., 2006.

Introducción

La mancha o tizón de fuego, tiene como agente causal a Erwinia amylovora. Se considera una de las enfermedades bacterianas más destructivas en árboles de manzano, peral y otros, ya que puede infectar desde flores, frutos, y diversos órganos, pudiendo provocar la muerte del árbol.

CIAD, A. C.

El control tradicional se ha basado en el uso de los diferentes tipos de antibióticos como son: estreptomicina, gentamicina, tetraciclina, oxitetraciclina y otros, que pueden o han inducido resistencia en las bacterias contra algunos de ellos (estreptomicina), lo que ha dificultado más su control.

CIAD, A. C. Control Tradicional

Otro factor que ha dificultado el control de la

bacteria, es que en ocasiones, los síntomas

visibles que provoca en el árbol, se pueden

confundir con los daños de otras bacterias,

de ahí la necesidad de partir de la base de

identificar con seguridad al agente causal

de la enfermedad.

CIAD, A. C.Agente Causal (¿Erwinia amylovora?)

Pseudomonas syringaePseudomonas syringaeProvoca sProvoca sííntomas similaresntomas similares

a a Erwinia amylovoraErwinia amylovora

Objetivos

� Identificación de Erwinia amylovora, por medio de PCR

� Evaluación de cuatro fracciones del aceite esencial de orégano mexicano (Lippia berlandieri Schauer) como bactericida contra Erwinia amylovora en campo.

CIAD, A. C.

� Bacteria Gram Negativo.

� Sacarolitica.

� Aerobia facultativa.

� Temperatura óptima de

crecimiento de 28º C.

� Fitopatógena para el manzano,

peral y otras rosáceas.

� Presenta dos fases de virulencia:

epifítica y endofítica.

Erwinia amylovoraCIAD, A. C.

Erwinia amylovora

Cráter característico

de Erwinia amylovora

en cultivo

Cráter característico

de Erwinia amylovora

en cultivo

Erwinia amylovora

Varias coloniasde Erwinia amylovora

en cultivo

Fase Fase EpifEpifííticatica Fase Fase EndofEndofííticatica

Erwinia amylovora

Infección de Erwinia amylovora

en flores

CCááncer invernal con ncer invernal con

exudados de exudados de Erwinia amylovoraErwinia amylovora

Exudados de Exudados de Erwinia amylovora Erwinia amylovora en en

crecimientos vegetativoscrecimientos vegetativos

Exudados de Exudados de Erwinia amylovoraErwinia amylovora en en

frutofruto

Erwinia amylovora

*Impresiones de estigmas en CCTTemperaturaHumedadEstadio de plena floración (%)

Erwinia amylovora

* *

Factores paradecidir cuándo

aplicar

� Extracto de Lippia berlandieri Schauer

� Se considera bactericida y fungicida.

� Su acción es por contacto; al estar dentro del

grupo de los compuestos fenólicos

� Varios compuestos activos, principalmente

fenoles volátiles monoterpenicos como:

~Carvacrol

~Timol

Aceite esencial del orégano mexicano CIAD, A. C.

� Actúan a nivel de membrana celular, dañando la

integridad estructural.

� Interfieren con procesos de transporte y

metabolismo energético.

� Provocan la pérdida de constituyentes

citoplásmicos.

� Inactivación irreversible de oxidasas y

deshidrogenasas de membrana.

� Desnaturalización de proteínas.

Mecanismos de acción del

carvacrol y timolCIAD, A. C.

Identificación de Erwinia amylovora

Se realizó por PCR, mediante la amplificación de un fragmento de 987 pares de bases (pb) del gen de patogenicidad del plasmido pEA29.

CIAD, A. C.

RESULTADOS

Identificación de Erwinia amylovoraCIAD, A. C.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

2000

567

2000

567

Erwinia amylovora (987)

Erwinia amylovora (987)

Estudios previos:Evaluación de Agentes de control

biológico:

•Pseudomonas fluorescens

•Pantoea agglomerans

CIAD, A. C. Alternativas de control en campo.

Alternativa de control en campo.

Estudios previos, evaluación

productos naturales:

•Evaluación de cuatro

fracciones del aceite esencial

del orégano mexicano (procedente de Chihuahua, zonas

centro y sur)

Concentración de carvacrol (ppm)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

100 250 500 750 1000 1250 1500

F1

F2

F3

F4

C+

Crecimiento de Erwinia amylovoraErwinia amylovora a diferentes

concentraciones de las 4 fracciones del aceite

Ciclos logarítm

icos (U

FC/m

L)

CIAD, A. C.

Concentración de carvacrol (ppm)

Ciclos logarítmicos (UFC/ml)

0

2

4

6

8

10

F1 F4 Testigo

200 250 300 350 400

Crecimiento de Erwinia amylovora a diferentes concentraciones

de las fracciones F1 y F4. (Dosis mínima bactericida, 250 ppm, F4)CIAD, A. C.

Las dosis se determinaron en base al contenido de

carvacrol de la fracción y para campo se duplicó la

dosis mínima bactericida encontrada en los

trabajos de laboratorio

CIAD, A. C.

Evaluación de cuatro fracciones del aceite contra:

Erwinia amylovora en campo

2.0Testigo productor

2.3F4, 500 ppm*

2.8Aceite 80%

1200 ppm*(1)

n. s.3.1Testigo

Significancia estadística

Media

Racimos florales

Tratamiento

Control deControl de Erwinia amylovoraErwinia amylovora en campo. en campo.

Guerrero Chih. 2006. Guerrero Chih. 2006. RomeRome BeautyBeauty..

*contenido de carvacrol en ppm

CIAD, A. C.

(1) Orégano, zona centro

Control deControl de Erwinia amylovoraErwinia amylovora en campo. en campo.

CuauhtCuauhtéémoc Chih. 2006. moc Chih. 2006. GoldenGolden DeliciousDelicious..

CIAD, A. C.

Tratamientos

Racim

os Florales dañados / árbol

5

15

25

35

45

ab

ab

a

ab

b

Testigo Agri-Mycin 100 Agrigen Plus 800 Cuprimicin 100 Aceite de orégano

Punta plateada

Punta Verde

Media pulgada Verde

Racimo Estrecho

Punta Rosa

Rosa Completo

Flor Rey

Completa Floración

Caída de Pétalos

Yem

as (%)

0

20

40

60

80

100

7 de Abril

11 de Abril

13 de Abril

17 de Abril

19 de Abril

21 de Abril

24 de Abril

26 de Abril

28 de Abril

CIAD, A. C.

Etapas fenológicas de floración.

Cuauhtémoc Chih. 2006.

•La bacteria es Erwinia amylovora

•El aceite esencial de orégano mexicano, en

base a su contenido de carvacrol, controla la

bacteria in vitro eficientemente, pero en

Campo:

• En el cultivar Rome Beauty, no presentó

diferencias entre tratamientos

• En el cultivar Golden Delicious;

si hubo control

CIAD, A. C.

CONCLUSIONES:

¡GRACIAS!

CIAD, A. C.

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A. C.CIAD, A. C. Unidad Cuauhtémoc, Chih.