Université de La Rochelle

Identification sur tro

is jours d'une souche

bactérienne issue d'un mélange

A la découverte de la microbiologie

29/05/17

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IUT La Rochelle

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Bonjour !

Bienvenue à l’IUT de la Rochelle, dans le

département Génie Biologique.

Ce diaporama a été réalisé par un groupe d’élèves de 1ère

année dans le cadre d’un projet tutoré afin de présenter la

démarche d’identification d’une souche bactérienne en 3

jours en microbiologie.

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La microbiologie

C’est quoi ?

C’est une science permettant l'étude des micro-organismes (bactéries, champignons, …)

Les objectifs ?

- Apprendre les manipulations courantes pratiquées en laboratoire

- Savoir identifier et caractériser les différents types de micro-organismes

Comment ?

Regardez la suite...

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Primordial: le lavage des mains

Tes indispensables : → ta blouse → un briquet → ton cahier de microbiologie → un marqueur

Le vestiaire

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Jour 1

État frais: observation microscopique utile pour découvrir la forme de la bactérie et sa mobilité

Bacille = forme de bâton

Coque= forme circulaire

Pour nous orienter vers une catégorie de bactéries, on peut réaliser un ÉTAT FRAIS.

2 formes possibles

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La coloration de GRAM:Chez les bactéries : 2 types de parois cellulaires

→ donne un indice supplémentaire pour l'orientation de notre identification.

But : découvrir quelle paroi possède la bactérie.

Jour 1

Interprétation :VIOLET => Gram +ROSE => Gram -

Coloration cristal violet

Décoloration à

l'éthanol

Contre coloration safranine

Mélange bactérien

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Jour 1Une coloration de gram

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Dans notre échantillon, nous avons 3 bactéries différentes et nous voulons en identifier une seule : réalisation d’isolements.

Isolements = mise en culture sur différents milieux en boite afin de séparer les bactéries. Colonie = résultat de la multiplication d’une bactérie initiale

Jour 1

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Jour 2

Lecture des boites ensemencées le jour 1:

Ce milieu permet de visualiser les différentes colonies du mélange

Ce milieu permetuniquement la culture desbactéries Gram-

Objectif : identifier la bactérie de la colonie entourée en rouge (Bacille Gram -) !

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Colonie entourée en rouge  = Bacille Gram – à identifier remise en →suspension :

Jour 2

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Tests enzymatiques : les bactéries possèdent certaines enzymescaractéristiques

Ces tests nous permettent d'avancer dans notre démarched'identification => tests d’orientation de l’identification

Jour 2

Pas de coloration violette => Test oxydase négatif

C'est un indice supplémentaire pour trouver le nom de la bactérie...

Ici, nous avons réalisé le test oxydase

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Ensemencement de la galerie API 10S :

Jour 2

Galerie vide

Eau physiologique + 1 colonie de bactérie.

Aspiration de la suspension bactérienne dans la pipette Pasteur

Remplissage des puits

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Suite des ensemencements : Tests complémentaires en tubes et boites

Jour 2

Viande-Foie → type respiratoire

MMN → mobilité, utilisation

du mannitol

HK→fermentation du glucose, oxydation du lactose , H2S

TCS → vérification de

la puretéMacConkey

→ culture de Gram – & oxydation du lactose

Caractères mis en évidence :

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Lecture des milieux ensemencés :

Jour 3

TCS de contrôle de pureté :

● Colonies semblables = culture pure → Tests validés !

Mac Conkey 

● Culture sur le milieu bacilles Gram -→

● Les colonies ne sont pas roses, le milieu est jaune lactose - →

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Lecture des milieux ensemencés :

Jour 3

Viande Foie

Ensemble du tube flou 

→ aéro-anaérobie facultatif (AAF)

Présence de bulles

→ gaz+

Mannitol Mobilité Nitrate

Le milieu est orange

→ mannitol +

La piqûre est floue

→ mobilité +

Hajna Kligler

La pente est rouge lactose -→

Noircissement → H2S +

Le fond du tube est orange → glucose +

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Lecture de notre galerie Api10S ensemencée au J2 :

Jour 3

- + + + + + + - - -

Les couleurs obtenues indiquent les résultats des tests

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Exploitation des résultats : identification via cheminement logique

Jour 3

Bacille Gram-

BG -AAF

Oxydase -Glucose +

Enterobacteriaceae2) Détermination de la famille :

Mannitol +Mobilité +

H2S +Lactose -ONPG -

3) Détermination du genre : Salmonella

GRACILICUTES Non exigeant et AAF } Groupe 5

1) Détermination du grand groupe :

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On recherche une bactérie avec ce profil :

Jour 3

Caractère ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX NO2

Bacterie - + + + + + + - - - - +

Notre bacille Gram – serait donc Salmonella spp

Noir +→Blanc -→

4) Détermination de l’espèce :

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Nous vérifions ensuite nos résultats grâce à un programme sur Excel :

Jour 3

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Fin

Les techniques pratiquées à l’IUT sont variées, efficaces et permettent de déterminer l’espèce d’une bactérie inconnue.

Cependant, au sein des entreprises toutes ces techniques sont

automatisées afin d’obtenir des résultats plus rapidement.

Bonne visite ! Et peut-être à l’année prochaine … ?