СРАВНЕНИЕVIROCULT

®

ПРИ ТРАНСПОРТИРОВКЕДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕЙ

КУЛЬТУРАЛЬНМОЛЕКУ

Мартин Валетт1, Мод

Симон Ламбер

1 Городские больницы г.Лион, Национальныйрусологии - Бат-A3, 59

Симпозиум по клиническойДейтона

InfluenzaA Virus

СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СИСТЕМ®

, Σ-SWAB®

И Σ-VIROCULTТРАНСПОРТИРОВКЕ ВИРУСА ГРИППА

ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ДИАГНОСТИКИКУЛЬТУРАЛЬНЫМ И УЛЯРНЫМИ МЕТОДАМИ

Мод Бускамбер-Душам1, Реми

Симон Ламбер1 и Бруно Лина1

Национальный центр по гриппу (юг ФранцииA3, 59 бульвар Пинель, F-69677 Брон Седекс

по клинической вирусологииДейтона - Бич (Daytona Beach)

СИСТЕМ

VIROCULT®

ГРИППА А ДИАГНОСТИКИ

МЕТОДАМИ

, Реми Фанже1,

1

Франции), Лаборатория ви-Седекс, Франция

вирусологии 2010,

)

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ

Изучение особенностей циркуляции вируса гриппа среди населения напрямую

зависит от качества клинических образцов, отобраных терапевтами и педиатрами из

Региональной группы эпиднадзора за гриппом (прим.: пер. с фр. Groupes Régionaux

d’Observation de la Grippe, далее – GROG), использующей транспортные системы

Virocult®. Обычно эти клинические образцы отправляют в лабораторию для иссле-

дования по почте. Транспортировка в среднем длится до 4-х дней. Даже если диаг-

ностика осуществляется при помощи ПЦР с обратной транскриптазой, внутрикле-

точное культивирование все равно остается основным методом для выделения и де-

тального изучения вируса. Более того, вирусологическое изучение с применением

внутриклеточного культивирования стало особенно важным при появлении панде-

мичного вируса гриппа А H1N1. Попытки выделения вируса могут осложняться в

случае длительного промежутка между моментом отбора пробы и началом культи-

вирования.

В данной работе мы провели сравнительный анализ функциональных возмож-

ностей транспортных систем Virocult®, Σ-swab® и Σ-Virocult®. Для исследования

был использован эталонный образец штамма вируса гриппа

А/Уругвай/716/2007/H3N2/.

Для культивирования штамма применялась линия клеток Мадин - Дарби почек

собак (MDCK). Вирус высевали в различных концентрациях в 3 транспортные сис-

темы. После того, как штаммы были внесены в транспортные пробирки, их хранили

при комнатной температуре и при + 4°С в течение 1- 4 дней, перед тем, как иноку-

лировать на субстрат MDCK. Каждый образец был исследован при помощи метода

ПЦР с обратной транскриптазой и иммуноферментного анализа для выявления ан-

тигена.

Результаты показали, что во время транспортировки в трех системах вирус со-

хранялся в жизнеспособном состоянии, а, следовательно, детекция и культивирова-

ние вируса были возможны в течение 4 суток. Однако, вирусы гриппа А, перенесен-

ные в транспортные системыVirocult® и Σ-Virocult®, лучше сохранили свою инфек-

тивность.

ВВЕДЕНИЕ

В странах с умеренным климатом эпидемии гриппа случаются ежегодно в

осеннее - зимний период. Масштаб эпидемий варьируется в зависимости от специ-

фики вируса и процента заболеваемости и смертности. Лабораторное исследование

является важным инструментом контроля вспышки заболеваний, а также при описа-

нии циркулирующего вируса. Во Франции изучением особенностей циркуляции ви-

руса гриппа среди населения занимаются сотрудники GROG. В своей практике те-

рапевты и педиатры осуществляют отбор клинических образцов у пациентов с сим-

птомами острой респираторной инфекции. Образцы включают мазки из носовой по-

лости и носоглотки, взятые в течение 36 часов с момента появления первичных

симптомов заболевания. Клинические образцы, отобранные в амбулаторных усло-

виях, направляют в лабораторию по почте. Для оптимизации процесса восстановле-

ния образцов были использованы транспортные системы Virocult®. Целью лабора-

торной диагностики является ранняя идентификация циркулирующего вируса, вы-

явление новых штаммов или разновидностей

масштаб распространения вируса

На практике в каждом клиническом

при помощи иммуноферментного

щи метода ПЦР с обратной

вируса в лаборатории Национального

культивируют на линии клеток

лярной диагностики, бесспорно

ходимости детального описания

вирусов все же остается эталонным

В данной работе представлены

возможностей транспортных

портировке вируса гриппа А/Уругвай

пературных условиях в течение

Д-р А. Хей, сотрудник Всемирного

доставил выбранный для данного

H3N2. Вирус культивировали

наносились на поверхность тупферов

ственно созданы условия (темп

для процесса транспортировки

хода эксперимента представлено

МЕТОД

ли разновидностей вирусов, оценка вирусной

распространения вируса.

каждом клиническом образце выявляют антиген

иммуноферментного анализа или выделяют вирусную

обратной транскриптазой. Для выделения и детального

Национального центра по гриппу все клинические

клеток Мадин - Дарби почек собак (MDCK

бесспорно, является быстрым и результативным

описания метод внутриклеточного культивирования

эталонным методом лабораторного исследования

представлены результаты сопоставления

портных систем Virocult®, Σ-swab® и Σ-Virocult

гриппа А/Уругвай/716/2007/H3N2 / и хранении

течение длительного времени.

сотрудник Всемирного центра по гриппу (Лондон

для данного исследования образец штамма

культивировали на клеточном субстрате MDCK,

поверхность тупферов. В ходе проведения эксперимента

условия (температурный режим, концентрация

транспортировки образцов в лабораторию. Схематичное

представлено ниже.

оценка вирусной популяции и

выявляют антиген вируса гриппа

вирусную РНК при помо-

выделения и детального описания

все клинические образцы

MDCK). Метод молеку-

ультативным, но при необ-

культивирования живых

исследования.

сопоставления функциональных

Virocult® при транс-

хранении в различных тем-

Лондон), любезно пре-

штамма вируса гриппа А

, после чего образцы

эксперимента были искус-

концентрация вируса), типичные

Схематичное изображение

РЕЗУЛЬТАТЫ

После культивирования в течение 3 дней на клеточном субстрате MDCK была

получена вирусная масса гриппа А/Уругвай/716/2007/H3N2, которая впоследствии

была использована в качестве «посевного» фонда. В соответствии с протоколом, на

аппликаторы всех тупферов было нанесено 100 µл вирусной культуры либо в разве-

денном состоянии, либо в концентрации 10-2

, после чего транспортные системы

хранились при комнатной температуре или при 4°С. После хранения в течение соот-

ветствующего периода времени экспериментальные и клинические образцы, ото-

бранные специалистами GROG, были обработаны следующим образом: 2 мл среды

Игла добавляли к клеточной культуре в транспортных системах Virocult® и Σ-

swab® , и 1 мл – в системе Σ-Virocult®. На следующем этапе было проведено тести-

рование образцов на вирусную нагрузку при помощи метода ПЦР с обратной транс-

криптазой, метода ИФА на ускоренное выявление антигена и перевивка на клеточ-

ные линии MDCK. Вирусный рост оценивали после инкубирования в течение 3-5

дней при температуре 33°С с определением цитопатического действия, результаты

верифицировали при помощи ИФА супернатантов.

ВЫВОДЫ

В течение длительного периода транспортные системы Virocult® использова-

лись для отбора клинических образцов, содержащих вирус гриппа, среди населения.

Транспортировка клинических образцов в лабораторию, как правило, происходит

при температуре окружающей среды и занимает до 4 суток, а иногда и дольше. Тес-

тируемые транспортные системы оказались эффективными при диагностике вируса

при помощи молекулярного метода, "прямого" иммуноферментного анализа для вы-

явления антигена и метода внутриклеточного культивирования.

Сравнение двух транспортных систем и системы Virocult® не выявило суще-

ственных различий функциональных возможностей при хранении при температуре 4

°С с высокой вирусной нагрузкой. Эффективность тупферов различна при хранении

образцов при температуре окружающей среды. Используя ПЦР с обратной транс-

криптазой, мы получили сходные результаты для Virocult® и Σ-Virocult®, однако

система Σ-Virocult® дольше сохраняла вирусы в жизнеспособном состоянии. При-

чина того, что жизнеспособность вирусов и эффективность при их выделении оказа-

лась ниже в случае с сухим пенополиуретановым тупфером, может заключаться в

отсутствии транспортной среды. Эти результаты доказывают, что по сравнению с

Virocult® транспортная система Σ-Virocult® является вполне надежной и обеспечи-

вает высокие показатели жизнеспособности вируса гриппа А H3N2. Тупферы без

транспортной среды также могут быть эффективными для этих целей, но только в

случае, если образцы будут обработаны в течение 2 суток (например, если не требу-

ется транспортировка в лабораторию, расположенную в другом городе). Σ-Virocult®

также вполне может использоваться для диагностики новых вирусов гриппа и воз-

будителей других острых респираторных инфекций.

Ссылки 1. Lina. В., et al. 1996. Survellance of Community-Acquired Viral infections Due to

Respiratory Viruses in Rhône-Alpes,France) during Writer 1994 to 1995. J. Clin. Micro-

biol.. 34: 3007-3011.

2. Rudsdale. A., and Shedden. D.. 20th April 2009. Investigated of the Suitability of

the Virocult ®Swab ransport Device for Influenza A Specimens which are to be Analyzed

by Cell Culture or Molecular Techniques. Poster 42. 25th Clinical Virology Symposium

2009. Daytona Beach.

3. Rudsdale. A.. 2009. Evaluation of a Virology Specimen transport Device with Six

Viruses Using Clsi Standard M40-A. Poster C-053 ASM 109th General Meeting 2009.

Philadelphia.

4 Scansen. К. A. et al. 2010. Comparison of polyurethane loam lo nylon flocked

swabs for collection of secretions from the anterior nares in performance of о rapid in-

fluenza virus antigen test in a pediatric emergency department. J.Clin. Microbiol. 48: 852-

856.

Транспортные системы для данного исследования были

предоставлены компанией Medical Wire.