Procedimiento examen 2011

Análisis microbiológico de alimentos

Determinación de coniformes totales de un pepino:

Procedimiento:1º) Cogemos 20g de pepino, y en la bolsa del stomacher echamos 80mL de ringer y el pepino.2º) Colocamos la bolsa en el stomacher durante 2 min.3º) En una botella estéril, colocamos una gasa, y filtramos el pepino, para obtener un solución sin trozos grandes, de ese modo será más fácil el trabajo con este.4º) Como la muestra tiene todavía demasiados sedimentos, vamos a hacer una dilución en 90mL de ringer con 10mL del pepino.5º) Preparamos el montaje de la filtración por membrana, con filtro incluido, y realizamos la filtración.6º) Colocamos el filtro en la placa de endo-agar.7º) Incubamos 24h a 37ºC.8º) Anotamos resultados.

Medios:Endo-agar 37ºC 24h en placa de 55mmRinger

Esquema:

Daniel Gil Artabe1

Dilución 10-1

Incidencias:Como no filtraba con la dilución madre, tuve que hacer una nueva filtración

Resultados:Presencia de microorganismos, no son colonias características por lo tanto podríamos hablar de un positivoImagen:

Determinación de enterococos fecales coniformes totales de un mosto:

Procedimiento:1º) Cogemos 100ml2º) Preparamos el montaje de la filtración por membrana, con filtro incluido, y realizamos la filtración.3º) Colocamos el filtro en la placa de KF-agar.4º) Incubamos 24h a 37ºC.5º) Anotamos resultados.

Medios:KF-Agar 37ºC 24h

Daniel Gil Artabe2

Esquema:

Incidencias:

Coloqué el filtro al revés en el medio, por lo que las colonias quedaban atrapadas entre el filtro y el agar.Imagen:

Resultado:En la imagen no se aprecia, pero podíamos entender que había algo de crecimiento, aunque su lectura estaba complicada.

Daniel Gil Artabe3

Pruebas bioquímicas de la cepa cultivada durante el curso :

Agotamiento por estrías de la cepa:Procedimiento:1º) Recoger la muestra inicial guardada en la nevera.2º) En una placa de 90mm de AN dividirla en 4 partes y numerar cada una de ellas.3º) Con un asa de siembra, estéril, coger un inóculo de la cepa y extenderla por todo el cuadrante nº1.4º) Quemar de nuevo el asa, y sin coger inóculo, tocar una parte del agar para enfriar el asa, que debe estar ese punto reservado únicamente para enfriar el asa, y a partir del cuadrante uno seguimos extendiendo por el cuadrante 2.3º) Volvemos a quemar el asa y lo pasamos del 2 al 3.4º) Volvemos a quemar y del 3 al 4.5º) Incubar durante 24h a 37ºC

Medios:Agar nutritivo 37ºC 24h

Esquema:

Incidencias:No hubo

Resultados:Aparición de cultivo en los cuadrantes 1 y 2.Imagen:

Daniel Gil Artabe4

Pruebas bioquímicas:

Todas las pruebas bioquímicas realizados han sido a partir de las colonias obtenidas por el aislamiento en placa ya que pedían un cultivo fresco, menos de 24 horas.

IMViC:

Procedimiento Indol:1º) En un tubo con caldo de tristona sembramos nuestra cepa.2º) Lo ponemos en la estufa durante 24h 37ºC.3º) Una vez pasado el tiempo de incubación le echamos el reactivo de kovacs, un par de gotas.4º) Si en la superficie aparece un anillo rojo-morado, quiere decir que la prueba es positiva en indol, sino en cambio es amarillo será negativo.

Medios:Caldo de tristona 37ºC 24hReactivo de kovacs 2-3 gotas

Daniel Gil Artabe5

Esquema:

Incidencias:No hubo

Resultado:Indol (+)Imagen:

Procedimiento citrato:

1º) En un tubo con agar citrato de Simmons se inocula la cepa.2º) Se introduce en la estufa 24h 37ºC.

Daniel Gil Artabe6

3º) Si se observa cambio de color de verde a azul la prueba es positiva, y diremos que el microorganismos tiene como única fuente de alimentación citrato.

Medios:Agar Citrato de Simmons

Esquema:

Incidencias:No hubo

Resultados:

Citrato (-)

Daniel Gil Artabe7

Imagen:

Procedimiento RM-VP:1º) En un tubo con RMVP inoculamos la bacteria.2º) Dejamos incubar 37ºC durante 24h.3º) En un tubo estéril echamos 1mL del RMVP.4º) En el tubo de 1mL echamos indicador rojo de metilo, si la muestra se pone roja será un tubo (+), si se queda amarillo, será negativo.5º) En el tubo con el resto de RMVP, echamos 0,6mL de reactivo A y 0,2 de reactivo B; si en un máximo de 5min aparece un color rosado-violaceo, la prueba será (+),si no aparece ningún color será (-).

Daniel Gil Artabe8

Esquema:

Rojo metilo

Incidencias:En el rojo de metilo como daba un color naranja hemos cogido uno estéril y le hemos echado unas gotas de rojo de metilo para comparación.

Resultados:RM: (+)VP: (-)

Manitol movilidad:

Procedimiento:1º) En un tubo con Agar manitol-movilidad sembramos el inoculo por picadura.2º) Dejamos incubar a 37ºC durante 24h.3º) Observamos cambios en el color y desplazamiento en el agar.

Medios:Agar Manitol movilidad

Daniel Gil Artabe9

VP:

Esquema:

Incidencias:No hubo

Resultados:

Manitol: (+)Movilidad: (+)

Imagen:

Tinción de Gram:

Procedimiento:1º) Colocar una gota de agua en el portaobjetos.2º) Poner un poco de muestra en la gota de agua y realizar un frotis.3º) Fijar al portaobjetos con calor.4º) Colocar el porta en la cubeta de tinción y echar violeta cristal, durante 2 min.5º) Quitar el exceso sin utilizar agua.6º) Cubrir con lugol.7º) Quitar el exceso sin agua.8º) Decolorar con alcohol de 96º o con alcohol-acetona durante 1min.9º) Lavar abundantemente con agua para evitar que el decolorante siga haciendo efecto.10º) Teñir con safranina durante 1min.11º) Lavar con agua.

Daniel Gil Artabe10

12º) Secar la preparación al aire.

Esquema:

Medios:Violeta cristalLugolAlcohol de 96ºSafranina

Incidencias:No se dieron.

Resultados:La muestra observada al microscopio indica que son bacterias Gram (-)

Imagen:

Daniel Gil Artabe11

Incidencias en general:

Tanto la prueba de nitratos de la cepa propia como la prueba de hongos en manos y uñas no han podido ser realizadas debido a que el primer día olvidé poner los medios en la lista de solicitud, debido a una mala comprensión.

Daniel Gil Artabe12

Pruebas bioquímicas de la cepa propia realizadas durante el curso:

IMViC:

Indol: (+)Citrato: (-)RMVP: RM: (+) VP: (-)

Manitol movilidad:

Manitol: (+)Movilidad:(+)

McConkey: (+)

ADNasa: (+)

Kliger: Crecimiento en superficie y en la picadura, formación de gases y cambio de rojo a amarillo.

Imágenes:Las imágenes que se encuentran en el apartado de esquema son imágenes obtenidas de google, mientras que las del apartado “imagen” son las fotos reales de la práctica hecha en clase.

Daniel Gil Artabe13