Upload
others
View
1
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
1
INFORME FINAL
PROYECTO
Diagnóstico y prevención de contaminación mercurial en el personal que maneja
equipos médicos desincorporados y desechos mercuriales de centros de salud
públicos del estado Miranda, Venezuela.
INTRODUCCIÓN
El mercurio y compuestos que contiene mercurio es considerado un contaminante
global debido a su grado de toxicidad, forma de propagación y usos. Se encuentra
entre las principales sustancias peligrosas descritas por la Agencia para Sustancias
Tóxicas y el Registro de Enfermedades (ATSDR) [1] y la Agencia de Protección
Ambiental de los Estados Unidos (US EPA) [2], ya que es empleado en diferentes
áreas como las baterías, pinturas, tintes, aparatos electrónicos, tubos de lámparas
fluorescentes, aparatos para uso en la salud, entre otros [3]. Muchos investigadores
tienen especial atención a los niveles de mercurio en el aire como Hgov, ya que la
mayor contaminación que se da en el ser vivo es cuando este metal es inhalado,
causando en el humano, por ejemplo, neumonías, disneas, disfunción renal, incluso
estudios indican que afecta la reproducción humana [4,5], y si la exposición es
prolongada puede causar la muerte [6]. Esta forma química no necesariamente es
la única forma que causa toxicidad debido a su fácil adsorción, metabolización y
acumulación, ya que muchos factores de exposición pueden hacer que se consigan
mercurio en cabello y orina [7,8], los cuales son usados como biomarcadores de
exposición aguda [9].
El mercurio en orina, por ejemplo, es medido como mercurio total ya que solo el
aproximadamente el 10% de este es excretado como metilmercurio CH3Hg+ [10].
En sangre se encuentra el mercurio en su forma Hg(II) el cual al poco tiempo se
transporta hacia otros compartimentos distribuyéndose en tejidos como hígado,
riñón, huesos y cerebro [11].
2
Trabajadores de todo el mundo se han contaminado con este metal, ya sea por el
contacto directo e indirecto en sus sitios de trabajo. Un ejemplo de ello es el ocurrido
en el 2012 en Asturias, España [12], donde unos trabajadores se encontraban
limpiando un intercambiador de calor en una fábrica de zinc. Estos trabajadores
manifestaron a los pocos días, síntomas de intoxicación mercurial y en sus estudios
sanguíneos encontraron altos niveles de este metal. La investigación concluyó en
que 50 de los trabajadores intoxicados estuvieron expuestos a vapores de mercurio
y que la vía de ingreso fue por inhalación. Estudios realizados tres años después de
la exposición de estos trabajadores [13], indicaron que estos presentaban presencia
de mercurio como Hg(II), CH3Hg+ y CH3CH2Hg+ en cabello, sangre y orina.
No solo a nivel industrial es que pueden ocurrir contaminación mercurial en
trabajadores [14]. Existe casos como la contaminación en hospitales, donde un alto
porcentaje se refiere a la contaminación de los dentistas que usan amalgamas de
mercurio para restaurar piezas [8] y otros porcentajes menores se refieren a
trabajadores de limpieza que manipularon inadecuadamente residuos hospitalarios
durante su clasificación o personas que ingresan de manera voluntaria a los
depósitos de los residuos hospitalarios a recolectar metales; prácticas comunes en
muchas regiones del mundo, especialmente en países de bajos ingresos. Los
manipuladores de residuos corren el riesgo inmediato de lesiones por pinchazo de
aguja y exposición a sustancias tóxicas o infecciosas [15].
Por accidentes como los descritos anteriormente, es que se hace necesario la
evaluación de la exposición ocupacional del personal que maneja equipos
desincorporados y desechos mercuriales a fin de establecer medidas de
manipulación adecuadas de manera de garantizar la minimización de los efectos de
este metal en el personal.
Entre las técnicas empleadas para el análisis de mercurio se encuentran la
Espectroscopia de Absorción Atómica de Vapor Frío (Cold Vapor Atomic Absorption
Spectrometry, CVAAS) [16], Espectrofotometría de Absorción Atómica con
Generador de Hidruros, (Hydride Generation Atomic Absorption Spectrophotometry,
HG-AAS) [17], Espectroscopia de Fluorescencia Atómica de Vapor Frío (Cold Vapor
3
Atomic Fluorescence Spectrometry, CVAFS) [18], cromatografía gaseosa acoplada
a un espectrómetro de masas (gas chromatography inductively coupled plasma
mass spectrometry GC-ICP-MS) [19] voltamperometría de redisolución anódica
(Anodic Stripping Voltammetry, ASV) [20], Cronopotenciometría [21] y la
descomposición térmica y amalgamado [22]. Una característica importante de
resaltar es que, para poder emplear estas técnicas, excepto la última, se debe
preparar la muestra a analizar utilizando métodos físicos y químicos como
digestiones, radiación de microondas, temperaturas elevadas, precipitaciones y
cromatografía, de manera de separar el mercurio de la matriz de la muestra [23].
En este trabajo se pretende determinar los niveles de mercurio en orina en una
muestra representativa poblacional del personal que labora directamente con
equipos médicos desincorporados de los hospitales del estado Miranda para
establecer el riesgo ocupacional y así adecuar la debida prevención y minimización
de los riesgos de contaminación acompañados de jornadas educativas de
concientización y sensibilización. Para ello, se establecerán los niveles de mercurio
total en orina en el personal del hospital que labora con estos equipos
desincorporados empleando la técnica de descomposición térmica y amalgamado
(TDA-AAS) con un analizador directo de mercurio DMA-80 TRICELL Milestone.
Luego se compararán los niveles de mercurio total obtenidos en las muestras
biológicas con los estándares internacionales, con el fin de determinar el riesgo de
toxicidad y exposición ocupacional.
Este trabajo será desarrollado en el marco del Acuerdo Multinacional Ambiental para
honrar los compromisos internacionales del Convenio de Basilea al cual Venezuela
se encuentra suscrita en coordinación con el Ministerio del Poder Popular para
Ecosocialismo y Aguas (MINEA) y cuyo financiamiento está cubierto por el Convenio
Basilea-Centro Regional Convenio de Estocolmo para América Latina y Caribe.
Palabras Clave: Mercurio, orina, desechos hospitalarios, TDA-AAS.
4
ANTECEDENTES
Mercurio (Hg)
El mercurio es un elemento natural que se encuentra en la roca de la corteza
terrestre, como en los depósitos de carbón. En la tabla periódica, tiene el símbolo
"Hg" y el número atómico es 80 [2]. Es un metal blanco-plateado que en estado
líquido a 0 ºC, es muy denso y poco compresible; de tensión superficial muy alta y
débil reacción calorífica, posee gran capacidad de amalgamar a casi todos los
metales. Se evapora a 13 °C y encontramos trazas de él en cualquier producto que
se analice [24].
Las fuentes naturales de mercurio son los volcanes, minas, incendios forestales,
combustibles fósiles como el carbón y el petróleo, y volatilización de los depósitos
oceánicos. En la naturaleza existe como sulfuros de mercurio (cinabrio, rojo), de
arsénico (rejalgar), hierro (piritas), mixto (metacinabrio, negro), de antimonio
(estibina), pero también se le encuentra directamente unido a minerales de zinc,
cobre, oro y plomo. Actualmente su extracción se realiza en España, China,
Kirguistán y Argelia y muchas de las minas son propiedad nacional. También existe
minería artesanal de mercurio a pequeña escala en China, Rusia (Siberia), Mongolia
Exterior, Perú y México. En España se encuentra el yacimiento más grande de
mercurio llamada mina de Almadén. En Suramérica se encuentran las minas de
Huancavelica, explotadas desde la colonia y fueron las mayores productoras de
intoxicaciones laborales por este metal en el Perú [24]. Aparte del estado natural,
existe un importante aporte antropogénico proveniente de actividades mineras de
extracción de oro, plata y cobre, fundición primaria y secundaria de metales,
producción de carbón y coque, combustión de combustible y carbón en la
generación de electricidad, industria de cloro-sosa, incineración de residuos
peligrosos y biológicos infecciosos, por ejemplo: la cremación de personas con
empastes de amalgama provoca que el mercurio se libere a la atmósfera y se
deposite en el suelo, así como la incineración de residuos hospitalarios,
5
electrónicos, la ruptura de instrumentos que lo contienen como termómetros y
barómetros. También, la incineración de residuales domésticos, fabricación de cloro
en celdas de mercurio y producción de metales no ferrosos [25]. Se calcula que
cada año mil toneladas son liberadas desde redes de alcantarillado a la superficie
de la tierra [24]. Se estima que la incineración de residuos, tanto médicos como
municipales representa el 13% de las emisiones de mercurio antropogénico en
América del Norte, quedando solo por detrás de la combustión de carbón (55%)
como fuente de emisión. Además, al menos el 3% de las emisiones antropogénicas
mundiales de mercurio provienen de la incineración de residuos [26].
Entre las principales aplicaciones se encuentra la producción de cloruro y sosa
cáustica, insecticidas, industrias farmacéutica y metalúrgica, amalgamas dentales
para la reconstrucción de los dientes (las cuales, también contienen otros metales
como plata, estaño, cobre y zinc). Se emplea como catalizador en la producción de
polímeros sintéticos, en la explotación minera del oro, amalgamación, en la
fabricación de instrumentos de medición como termómetros y barómetros, así como
también en la industria cosmética [25,27].
Podemos observar en la Figura 1, la proporción de las emisiones antropogénicas
globales de mercurio al aire de varias secciones para el 2005, donde la cantidad de
emisión de mercurio antropogénico global se estimó en 1930 toneladas. Aquí se
muestra que la combustión de combustibles fósiles para la producción de y
calefacción energía (principalmente carbón) fue la mayor fuente de emisión de
mercurio antropogénico, ocupando el 45% de la cantidad total de emisión
antropogénica [28].
La exposición a algunos metales pesados ha sido asociada a una gran variedad de
efectos adversos sobre la salud, incluyendo el cáncer. Aunque algunos elementos
son esenciales para los humanos, pueden ser peligrosos a altos niveles de
exposición. Otros metales pesados resultan muy nocivos al no ser degradados
fácilmente de forma biológica, ya que no poseen funciones metabólicas específicas
6
para los seres vivos [25]. En el caso del mercurio, este es considerado un metal
peligroso debido a su toxicidad y alta de capacidad de bioacumulación.
Figura 1. Proporción de las emisiones antropogénicas mundiales de mercurio a la atmósfera en 2005 procedentes de diversos sectores.
Los seres vivos se exponen al mercurio de tres formas [27]:
• Ingestión: mayormente al consumo de pescado [4, 9]
• Inhalación: por los vapores del mercurio elemental [8, 28]
• Contacto: por derrames accidentales o manipulación inadecuada [4]
Formas y circulación del Mercurio en el ambiente:
El mercurio puede encontrarse en el ambiente atmosférico en diferentes especies.
Se llama THg al mercurio total que es la suma de todas las especies de mercurio.
Se define al TGM como el mercurio gaseoso total que es la suma de todos los
compuestos gaseosos junto con el mercurio elemental gaseoso GEM (Hg0),
mercurio oxidado gaseoso reactivo o RGM (Hg2+) que son los compuestos químicos
de la forma oxidada de mercurio divalente, y el GOM (mercurio oxidado gaseoso)
que es el mercurio gaseoso en su forma oxidada. También está el mercurio
7
particulado (Hgp) que son todos los compuestos de mercurio contenidos en
partículas de diferente forma química y tamaño de partículas no especificada. El Hg0
sufrirá una serie de reacciones químicas en las fases gaseosa y acuosa para
transformarse en Hg2+ o Hgp. Debido a la alta volatilidad del Hg0, puede permanecer
en la atmósfera durante 6 a 18 meses. Sin embargo, El tiempo de residencia del
Hg2+ gaseoso y Hgp en la atmósfera se estima en horas y días. Luego, Hg2+ y Hgp
se depositarán en el suelo, las plantas o el agua, que pueden combinarse con
moléculas orgánicas para formar metilmercurio (MeHg; CH3Hg+). Por lo tanto, hay
cuatro formas comunes de mercurio en el medio ambiente, a saber, Hg0, Hg2+, Hgp
y MeHg [28,29]. En la Figura 2 se muestra el diagrama esquemático del ciclo global
de mercurio en la atmósfera, modificado de Travnikov [28,30].
Figura 2. Diagrama esquemático del ciclo general del mercurio en la atmósfera, modificado de Travnikov (30).
La mayoría de los compuestos de mercurio atmosférico son transformados al
precipitarse en el suelo y al agua superficial y es justamente en el sedimento
acuático donde ocurre el principal proceso de transformación de los compuestos de
mercurio llamado metilación. En la ecuación 1, se muestra la transformación común
de mercurio [26]:
8
𝐻𝑔0𝑅𝑒𝑑𝑢𝑐𝑐𝑖ó𝑛←
𝑂𝑥𝑖𝑑𝑎𝑐𝑖ó𝑛→
𝐻𝑔+ 𝑜 𝐻𝑔2+𝐷𝑖𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑎𝑐𝑖ó𝑛←
𝑀𝑒𝑡𝑖𝑙𝑎𝑐𝑖ó𝑛 →
𝐻𝑔𝐶𝐻3/𝐻𝑔𝐶𝐻3𝐻𝑔 Ec. 1
Efectos en la salud, Toxicidad
La exposición al mercurio sea de corto o largo tiempo, causa daños a la salud ya
que todas las formas son consideradas tóxicas [19]. Dependiendo del tipo de
especie y de la forma en que ingresó al organismo, podemos clasificarlas en
mercurio orgánico e inorgánico. El mercurio inorgánico o sales de mercurio
(mercurio metálico, usado en termómetros, esfigmomanómetros y amalgama
dental, por ejemplo), mercurio monovalente Hg(I), (Hg-Hg)2+, mercurio divalente
Hg(II) y orgánicos como compuestos organometálicos en los cuales el mercurio esta
covalentemente enlazado a cadenas de moléculas orgánicas, por ejemplo,
metilmercurio CH3Hg+ (MeHg), etilmercurio C2H5Hg+, dimetilmercurio (CH3)2Hg,
fenilmercurio C6H5Hg+ [31]. Estos compuestos se forman a partir de mercurio
inorgánico como consecuencia de procesos naturales (conversión bacteriana), así
como de síntesis directa siendo estos más tóxicos que los inorgánicos [32].
El mercurio y sus compuestos son altamente tóxicos especialmente para desarrollo
del sistema nervioso. Su toxicidad depende de la reactividad de la especie química,
la cantidad, la ruta de exposición y la vulnerabilidad del organismo expuesto [31].
Esto es debido a la gran afinidad que tiene el mercurio por grupos sulfhidrilos
presentes en proteínas con actividad enzimática, con funciones de transporte y
estructurales que se expresan en diferentes tejidos [33]. La ingesta de mercurio
líquido Hg0, como el mercurio de los termómetros que se ingiere de manera
accidental en muchos casos, no produce intoxicación aguda ya que las cantidades
son mínimas. El problema surge cuando este mercurio líquido es calentado y pasa
a fase gas, donde causa efectos neurológicos graves, daños en los riñones, efectos
negativos en el aparato respiratorio, problemas cardiovasculares, daños en el
aparato digestivo, efectos en la glándula tiroidea, problemas en el sistema
inmunitario, entre otros. La vida media biológica de Hg absorbido del vapor a la
9
sangre es de aproximadamente dos a cuatro días cuando se excreta el 90% a través
de orina y heces. La absorción de Hg2+ a través del tracto digestivo es
comparativamente bajo. Sin embargo, una gran ingesta de Hg2+ de manera
accidental o suicida, provoca trastornos del tracto digestivo y del riñón que provocan
la muerte [30]. En la Figura 3, podemos observar un esquema representando los
diferentes compartimentos donde el mercurio se puede alojar [24].
Figura 3. Modelo toxicocinético del mercurio inorgánico.
No existe unanimidad en cuanto al umbral medio de toxicidad humana, ya que como
mencionamos anteriormente, este elemento no es un oligoelemento y su sola
presencia puede alterar el organismo. Sin embargo, debido a la contaminación
mundial, se han establecido ciertos criterios sobre su tolerancia y dependerá del
país y organismo internacional que lo aplique. Por ejemplo, la OMS considera como
valor de mercurio ‘normal’ en sangre
10
corporal y, en función de esta recomendación, la EPA estableció un límite de MeHg
en pelo
11
inclusive se pudiera sospechar que hubo ingesta accidental por la mala
manipulación y aseo de las personas involucradas. Si la familia no hubiese recurrido
al médico, con el tiempo, la exposición hubiese aumentado, cayendo en una
intoxicación crónica, donde se pudo presentar alteración de mucosas (estomatitis y
gingivitis que pudo haber llevado a la pérdida de piezas dentarias) además de un
temblor involuntario que se inicia en los dedos de manos, párpados, labios y lengua,
progresando posteriormente a las extremidades [33]. Sin tratamiento, esta familia
pudo tener un desenlace mortal.
Tabla 1. Niveles Urinarios de Hg inorgánico (pre y post tratamiento) en familia
afectada.
Paciente Niveles Urinarios Hg Inorgánico*
Pretratamiento ug/g Creat Post-tratamiento** ug/g Creat
Menor de 13 años 287 198
Hermana de 12 años 1291 321
Hermano de 10 años 152 155
Madre de 37 años 534 534
*Técnica: Mercurio, Espectrofotometría de absorción atómica, generación de hidruros; creatinina, espectrofotometría UV-Vis. Según niveles de creatinina en orina los valores de mercurio pueden expresarse en ug/L o ug/g. Valor normal: < 10 ug/L ó < 50 ug/g creatininuria. **Tratamiento realizado con ácido dimercaptosuccínico vía oral por 19 días. Control post tratamiento se realizó 3 semanas después.
Actualmente existen varias moléculas quelantes de uso clínico especialmente
indicadas en intoxicación por metales pesados pero que podrían asociarse a efectos
adversos graves:
• Ácido Calcio Disódicoetilenediamintetraacético (CaNa2-EDTA).
• D-Penicilamina.
• BAL (2,3 Dimercaprol); DMPS (Na 2,3 Dimercaptopropanosulfonato).
• Succimer (Ácido Dimercaptosuccínico)
Exposición ocupacional a sustancias tóxicas como el mercurio
La toxicología ocupacional es el estudio de los efectos adversos de agentes que los
trabajadores pueden encontrar durante el transcurso de su trabajo. Los toxicólogos
12
ocupacionales buscan prevenir riesgos exposiciones en el lugar de trabajo, como
exposición a químicos en fábricas, agricultura y trabajo de oficina. El campo de la
toxicología laboral está estrechamente alineado con las disciplinas de higiene
industrial y medicina ocupacional [37]. Puede ser difícil establecer una relación
causal entre una sustancia tóxica y una enfermedad en entornos ocupacionales
complejos. Para el caso del mercurio, las industrias y ambientes de trabajos son
fáciles de identificar ya que la mayoría de los países en el mundo estas asociados
a alguna organización internacional o convenios como el Convenio de Minamata,
Rotterdam o Basilea, por ejemplo, donde están registrados las cantidades y
movilidades de este elemento tóxico.
Trabajadores expuestos por algún derrame accidental de mercurio en su trabajo,
por ejemplo, están expuestos a los vapores de este sin darse cuenta. Si no se
maneja de manera adecuada, el aire se contamina rápidamente y si el espacio de
trabajo es cerrado puede acumularse y sobrepasar los límites permisibles
recomendados y traer consecuencias graves para la salud. En el sector salud, es
muy común este tipo de accidentes, ya que muchos equipos que se emplean para
evaluar pacientes en el área de triaje y salas operatorias tienen válvulas, balones
cerrados o soluciones que contengan mercurio, que se rompen fácilmente. Por lo
general están en pequeñas cantidades, pero por las mismas propiedades de este
metal líquido, si no se utiliza una adecuada limpieza, pequeñas bolitas de este metal
se pueden depositar en ranuras, esquinas o grietas y pasar desapercibidas en el
tiempo, exponiendo a pacientes y personal a una contaminación mercurial.
El diagnóstico ocupacional pasa por considerar los antecedentes de trabajo y lugar
de procedencia, los factores determinantes de toxicidad, el estado físico y tipo de
compuesto mercurial y la vía de ingreso. Con respecto a la vía de ingreso, en salud
ocupacional la más importante para el mercurio es la respiratoria, sin descartar las
otras. Luego se establece cual va a hacer el indicador biológico a evaluar [24]. Las
principales matrices biológicas que pueden utilizarse para conocer la prevalencia de
intoxicaciones por mercurio son: la sangre, la orina, el cabello, la saliva y las uñas.
13
Si bien la sangre y la orina son las que más se asocian a este tipo de estudio, la
orina constituye la matriz fundamental para el diagnóstico de la intoxicación por
mercurio para exposiciones ocupacionales a niveles ambientales constantes, ya
que la sangre es para medir mercurio en personas que han estado expuestas en
corto tiempo. Medir mercurio en orina en trabajadores expuestos de manera puntual,
es decir la primera micción de la mañana no es conveniente dado la marcada
variación circadiana de la muestra, que inclusive no puede compensarse totalmente
corrigiéndola por densidad o excreción de creatinina, por lo que necesariamente se
debe emplear muestras de orina de 24 horas. Por otro lado, la recolección de esta
muestra es no invasiva, reduce el riesgo de trasmisión de enfermedades, no
requiere supervisión médica y es una matriz que se puede almacenar por largo
tiempo [38].
En Venezuela, la intoxicación ocupacional por mercurio es tratada y existen los
mecanismos para atender de forma especial la salud de los trabajadores a través
del Ministerio del Poder Popular Para la Salud y el Instituto Nacional de Prevención,
Salud y Seguridad Laborales (INPSASEL). Este último es un organismo autónomo,
con personalidad jurídica propia, adscrito al Ministerio del Poder Popular para el
Proceso Social de Trabajo y es el que se encarga de la fiscalización, sanción y
estímulo para el cumplimiento de la LOPCYMAT a nivel nacional. La LOPCYMAT
es la Ley Orgánica de Prevención, Condiciones y Medio Ambiente de Trabajo, el
cual abarca las normas que deben adoptar las empresas con el propósito de
preservar la integridad física de trabajadores, el mejoramiento de medidas de
seguridad en las instalaciones de la empresa, determinación de los procesos
peligrosos, capacitación a los trabajadores, prevención de accidentes de trabajo,
enfermedades ocupacionales y responsabilidad de la empresa antes infortunios
laborales [39].
14
Productos que contienen mercurio en el sector salud
En conjunto, el mercurio contenido en la amalgama dental y en los dispositivos de
laboratorio y médicos representa alrededor del 53% del total de las emisiones de
este metal [34]. Las personas quedan expuestas al mercurio elemental cuando se
rompen dispositivos médicos que lo contienen, y también cuando el mercurio líquido
se derrama o se evapora mientras si se están llenando estos dispositivos. Los
derrames de mercurio en hospitales, clínicas y laboratorios plantean riesgos para
los médicos, las enfermeras, otros trabajadores de la salud y los pacientes. Las vías
de exposición más comunes son por inhalación o por contacto con la piel. El riesgo
de exposición al mercurio es más alto en las habitaciones caldeadas o mal
ventiladas. El uso de productos y dispositivos con mercurio en los hospitales
también puede afectar entornos más alejados con los que pueden entrar en contacto
ulteriormente. Los desechos médicos que contienen mercurio, incluso los restos que
pueden quedar después de la limpieza de un derrame, pueden llegar a medios
acuáticos y a la atmósfera debido a una eliminación incorrecta [40]. Es por ello que
se hace necesario identificar equipos y reactivos que contengan este metal tóxico.
A continuación, una lista de la algunos de los equipos y reactivos que contienen
mercurio utilizados en este sector [41-43]:
• Indicadores de presión
• Esfingomanómetros
• Tubos o sondas gastrointestinales
• Termostatos: interruptores de temperatura controlada
• Termómetros
• Pilas o baterías en aparatos de uso médico (baterías secas de larga
duración)
• Lámparas
• Productos químicos y farmacéuticos con trazas de mercurio: antisépticos,
cremas, vacunas, entre otros.
15
En los últimos años, la OMS ha trabajado con los ministerios de salud de los países
del continente para incentivar la eliminación del mercurio en el sector de la salud, y
buscar reemplazarlo por otras alternativas que resulten económicas y precisas, así
como controlar las emisiones provenientes de esta área. En Venezuela, el Decreto
Presidencial Nº 2218 [44], regula las normas técnicas para la clasificación y manejo
de desechos en establecimientos de salud” y establece las condiciones bajo las
cuales se debe realizar el manejo de los desechos generados en establecimientos
relacionados con el sector salud, humana o animal, con la finalidad de prevenir la
contaminación e infección microbiana en usuarios, trabajadores y público, así como
su diseminación ambiental [42, 45, 46]. En ella los residuos que contienen mercurio
son desechos especiales o Tipo E, que son productos y residuos farmacéuticos o
químicos, material radioactivo y líquidos inflamables e indica que el manejo de los
mismos se hará por separado y se regirá por lo establecido en la norma para el
control de la recuperación de los materiales peligrosos y el manejo de desechos
peligrosos (Decreto Nº 2635). Esta norma proporciona las herramientas de higiene
y seguridad para manipular el mercurio y evitar de esta manera daños a la salud,
que en la mayoría de los casos pueden ser irreversibles [42, 47].
Actualmente en nuestro país existen pocos datos estadísticos que reflejen la
situación del uso, consumo de productos que contienen mercurio, generación de
desechos, fuentes de contaminación y niveles de concentración en el personal que
labora directamente con este tipo de desechos hospitalarios, por lo que este
proyecto permitirá establecer un “plan piloto de acción” en los hospitales mirandinos
con la finalidad de que pueda ser escalable a nivel nacional.
MÉTODO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE MERCURIO TOTAL
La técnica de descomposición térmica y amalgamado con detección por
espectroscopia de absorción atómica (TDA-AAS, Thermal Decomposition
Amalgamation Atomic Absorption Spectrometry) es una técnica que surgió de las
bondades de dos técnicas usadas para determinar mercurio [48]. Por un lado, el
16
mercurio es un metal que tiene fuerte afinidad por el oro, formando una amalgama
que al calentarla a 360 ºC se logra separar el mercurio, ya que el oro se funde a
1000 ºC. Esta técnica de amalgamación con oro es usada en la ASV, por ejemplo.
Luego los vapores de mercurio pueden luego ser detectados con un espectrómetro
atómico a una longitud de onda de 253,65 nm. También se aprovechó la
descomposición térmica para la destrucción de la matriz de la muestra elevando la
temperatura a valores mayores a los 700 ºC para la liberación del mercurio. Al
acoplar estas técnicas se logró obtener una técnica híbrida que logra disminuir el
procedimiento rutinario que se tenían con las otras técnicas como CVAAS, CVAFS,
HG-AAS, ICP-MS, donde necesariamente la matriz de la muestra debe ser destruida
para liberar al mercurio y dejarlo en medio acuosa para poder insertarlo en los
sistemas de introducción de muestras de estos equipos. Las muestras por lo general
son tratadas con métodos como digestión ácida, trayendo como consecuencia
pérdidas del analito, afectado esto las mediciones. También se debe llevar un
control cuidadoso de niveles en blanco después del uso de estos reactivos [48]. Por
otro lado, estos procedimientos conllevan a que los análisis sean largos, tediosos y
de más alto costo, eso sin dejar de mencionar el uso de una cantidad de reactivos
y generación de desechos, los cuales hacen de estas técnicas no sean amigables
con el ambiente [23].
El analizador directo de mercurio (DMA-80 Milletone®, direct mercury analizer),
emplea la técnica TDA-AAS para el análisis de mercurio en muestras sólidas,
liquidas y gaseosas sin pretratamiento de las muestras o preconcentraciones del
mercurio [49,50, 51]. En esta técnica de análisis y como se observa en la Figura 4,
la muestra (sólida, líquida o gaseosa) es sometida a temperaturas alrededor de los
650 °C dentro de un horno que la seca y descompone, generando vapores
mercuriales y otros gases que son arrastrados por una corriente de oxígeno de alta
pureza (grado UAP) a un horno catalizador, que asegura la transformación de todos
los compuestos orgánicos volátiles VOx (NOx y SOx) a especies menos
contaminantes y/o interferentes [52, 53]. El analito en su forma de vapor metálico,
es posteriormente retenido y preconcentrado sobre el amalgamador de oro por un
17
corto tiempo permitiendo de esta manera alcanzar límites de detección bastante
bajos. El amalgamador luego se calienta electrotérmica y rápidamente a 850 °C,
liberando el vapor de mercurio hacia el sistema de absorción atómica compuesto
por tres celdas dentro de otro horno. La detección se realiza a una longitud de onda
de 253,7 nm. Este sistema esta descrito en el método US-EPA 7473 [54].
Figura 4. Diagrama de funcionamiento de la técnica TDA-AAS en un DMA-80 Tricelda, Milestone.
Los equipos para el análisis directo de mercurio, como el DMA-80 tricelda de
Milestone mostrado en la Figura 5, poseen bajos límites de detección y altas
sensibilidades, permitiendo determinaciones analíticas de hasta ng kg-1 si la
muestra es sólida y de ng L-1 si es líquida [55].
18
Figura 5. DMA-80 Tricelda, Milestone.
En este trabajo se realizará la determinación de mercurio en orina empleando el
analizador de mercurio, donde el mercurio a determinar es el mercurio total que hay
en la muestra. Refleja el contenido de Hg2+ y parte del Hg0 absorbido, por tanto,
este biomarcador se emplea tanto para la exposición reciente como para la
exposición prolongada, como en este caso que se estará evaluando la exposición
ocupacional. Por otra parte, relacionando la concentración de Hg en orina con la
concentración de creatinina se obtiene una medida más confiable del contenido de
Hg en muestras de este fluido biológico [56].
La creatinina un desecho biológico derivado de la degradación de la creatina (ácido
orgánico nitrogenado útil para la función muscular) a nivel de las células musculares.
Este desecho es normalmente excretado por la orina después de pasar a través de
los riñones y su producción diaria es directamente proporcional al contenido de
creatinina en el cuerpo, el cual es de aproximadamente 2 %. Esto permite que la
creatinina sea empleada como parámetro de normalización para estudios de la
función renal y niveles de mercurio en orina, de manera que se puedan corregir las
fluctuaciones en la concentración de Hg. Sin embargo, la cantidad de creatinina
excretada por la orina depende de varios factores importantes como edad, sexo,
peso, enfermedades, lesiones, stress emocional y ejercicios rigurosos y es
independiente del flujo urinario [57,58]. Los resultados de la determinación de
creatinina se reportan como concentración de Hg por gramo de creatinina (μg/g
19
creat), conociendo que la OMS establece que este valor no debe exceder los 50
μg/g creat [27].
El método que se utiliza para determinar creatinina en orina es el método de Jaffe
modificado. Este método se basa en la reacción de la creatinina, previa
desproteinización de la muestra, con una solución alcalina de picrato de sodio para
formar un complejo rojo de Janowski, cuya absorbancia se mide entre 510 y 520
nm, utilizando temperaturas constantes menores a 30 ºC. Para reducir las
interferencias con sustancias cromógenas como la glucosa, proteínas, cetonas,
ácido ascórbico, se realiza la determinación de creatinina entre los 20 y 60 s, así los
iones pícricos reaccionan más específicamente con creatinina durante este tiempo
[57,59].
OBJETIVO PRINCIPAL
El objetivo de este proyecto es determinar los niveles de mercurio en orina en una
muestra representativa poblacional del personal que labora directamente con
equipos médicos desincorporados de los hospitales del estado Miranda para
establecer el riesgo ocupacional y así adecuar la debida prevención y minimización
de los riesgos de contaminación acompañados de jornadas educativas de
concientización y sensibilización.
RECURSOS FINANCIEROS
De acuerdo a lo establecido entre Naciones Unidas Medio Ambiente y el BCCC-
SCRC, el presupuesto que el BCCC-SCRC dispuso a Venezuela fue un máximo de
U$S 20.000 (Veinte mil dólares de los Estados Unidos). Los fondos referidos fueron
gestionados por el BCCC-SCRC como Agencia Ejecutora. El desglose del
presupuesto se puede observar en la Tabla 2.
20
Tabla 2. Presupuesto
Categoría Ítem Cantidad Costo
Unitario (USD)
Costo Total (USD)
Equipamiento Reactivos para Análisis 1 2.000 2.000
Equipamiento Dispositivos para análisis químicos
1 18.000 18.000
Costo Total del Proyecto 20.000
PRINCIPALES RESULTADOS Y PRODUCTOS ESPERADOS
Resultados
• Lograr la sensibilización del personal involucrado en la manipulación,
reparación y gestión de equipos y productos que contienen mercurio.
• Evaluación de la exposición al mercurio por parte de los trabajadores del
sector de la salud en 20 (veinte) hospitales y centros de salud del estado de
Miranda.
Productos
• Estudio de datos de análisis de mercurio total por triplicado (3 análisis por
muestra) en la orina de los trabajadores de departamentos sanitarios (5
personas por departamento), en 20 (veinte) hospitales y centros de salud del
Estado Miranda.
• Estimación del riesgo de exposición potencial de estos trabajadores con los
análisis obtenidos en el punto anterior, también se realizará un análisis de
creatinina en las mismas muestras para completar la interpretación de los
resultados.
METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
En la Figura 6 se muestra el esquema representativo del protocolo de análisis
llevado a cabo en esta investigación.
21
Figura 6. Esquema del protocolo analítico.
SELECCIÓN DE LOS CENTROS HOSPITALARIOS
Se tomaron como muestra poblacional, todos los centros de salud que se
encuentran en el estado Miranda. Como podemos ver en la Figura 7, se muestran
las ubicaciones de estos centros, cuyos nombres son los siguientes:
• Hospital Victorino Santaella, Municipio Guaicaipuro.
• Hospital San Juan de Dios, Municipio Baruta.
• Hospital Ana Francisca Pérez de León. Municipio Sucre.
• Hospital Domingo Luciani. Municipio Sucre.
• Hospital Santa Teresita de Jesús. Municipio Independencia.
• Hospital General Valles del Tuy “Simón Bolívar”. Municipio Tomás Lander.
• Hospital Dr. Luis Razetti, Santa Lucia del Tuy. Municipio Paz Castillo.
• Hospital Hermógenes Rivero Saldivia de Caucagua, Municipio Acevedo.
• Hospital Dr. Osío de Cúa y Hospital Dr. Francisco R. García (los dos están
ubicados en el mismo sitio, uno al lado del otro). Municipio Urdaneta.
• Hospital Dr. Luis Salazar Domínguez. Municipio Plaza.
• Maternidad de Carrizal. Municipio Carrizal.
• Hospital José Ramón Figuera, Charallave. Municipio Cristóbal Rojas.
• Complejo Hemato Oncológico y Radiocirugía Dr. Domingo Luciani. Municipio
Sucre.
• Ambulatorio Dr. José González Navarro. Municipio Baruta.
• Ambulatorio de Cúa. Municipio Urdaneta.
22
• Hospital General Guatire-Guarenas Dr. Eugenio P. D’Bellard. Municipio
Zamora.
• Hospital General de Higuerote. Municipio Brión.
• Materno infantil Dr. Joel Valencia Parpacen. Municipio Sucre.
• Hospital Dr. Ernesto Regener. Municipio Paez.
Figura 7. Ubicación de los Centros Hospitalarios en el estado Miranda, Venezuela (Tomado de Wikipedia).
MUESTRAS
Para la recolección de las muestras de orina, se entregó a los directores de los
centros de salud, una carta informativa, una carta de consentimiento y una encuesta
para los participantes en este estudio (ver anexos). Los participantes en este estudio
forman parte del equipo de Electromedicina, Bienes Nacionales, Servicio Generales
y/o Mantenimiento, los cuales están encargados de traslado, almacenamiento y en
algunos casos reparación de los equipos médicos desincorporados con contenido
23
mercurial. Cada participante accedió de manera voluntaria al estudio y para cada
hospital se estimó un máximo de 5 personas.
Para la recolección de las muestras de orina se realizó el siguiente procedimiento:
• Orina de 24 horas recolectada por el participante en recipiente plástico de un
litro suministrado por el analista, el cual será lavado de manera especial con
ácido nítrico concentrado (1 ml por cada litro). Esta orina debe recogerse
desde la primera micción de la mañana hasta la primera micción del día
siguiente. No es necesario una preparación dietética del participante y no
debe recogerse orina entre días.
• El envase recolector debe permanecer refrigerada (no congelado) hasta el
momento de la toma de muestras por parte del analista. Recordar marcar el
recipiente con el nombre del participante y del hospital.
• El envase recolector no debe estar refrigerado por más de una semana.
• El analista recolecta del total, dos muestras por separado de 120 ml previa
agitación y envasarse en recipiente de plástico previo lavado con ácido
nítrico. Una de las muestras será para el análisis de mercurio total y el otro
para el análisis de creatinina.
• El analista recolecta del total, dos muestras por separado: La primera alícuota
de 10 mL almacenada en un tubo Falcon, previo lavado con ácido nítrico. La
segunda alícuota de 120 mL recolectada en recipiente de orina estéril con 1
mL de HNO3 para conservar el mercurio en solución. Una de las muestras
será para el análisis de creatinina y la otra para el análisis de mercurio total,
respectivamente.
TRASLADO
Las muestras se colocaron en cavas refrigeradas para ser transportadas al
laboratorio el mismo día de su recolección. En el laboratorio, fueron refrigeradas a
4 ºC hasta el día del análisis.
24
MATERIALES Y REACTIVOS
• Tubos Falcon BD.
• Recipientes de orina esterilizados, Urolab, Laboratorio Relab, C.A.
• Cubetas de cuarzo.
• Ácido nítrico suprapuro, 70% EM SCIENCE.
• Agua desionizada (Mili-Q 18 MΩ cm, Milipore).
• Oxígeno 99,999% ultra alta pureza.
• Solución patrón de 1000 µg mL-1 Hg2+, 2-5% HNO3, AccuStandard.
• Material de vidrio (Pyrex).
• Ácido pícrico 90% pureza, J.T. Baker.
• Hidróxido de sodio 99% pureza, MERCK.
• Estándar Creatinina puro Riedel-de Haen.
MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO
Materiales referencia certificados por el National Institute of Standarsd & Technology
(NIST) y el National Bureau of Standars (NBS), los cuales fueron NBS-2672 Freeze
Dried urine certified for mercury Low level, NBS-2672 Freeze Dried urine certified
for mercury Elevated level y NBS-1641b mercury in wáter, empleados para la
validación del método en la técnica de TDA-AAS.
EQUIPOS Y MÉTODOS
1. Determinación analítica de la creatinina en la orina empleando el método de
“Jaffé Modificado” (método cinético).
Procedimiento: Las muestras se llevan a temperatura ambiente y se homogenizan
por agitación. Se agrega 5 mL de una disolución de ácido pícrico (Reidel-de Hae,
90% p/p) al 1% p/v en un balón de 25 mL, luego se adiciona 0,38 mL (380 µL) de
hidróxido de sodio (Merck, 99% p/p) 2,5 M y una alícuota de la muestra de 0,3 mL
25
(300 µL). Se deja la mezcla en reposo durante media hora, para garantizar que se
complete la reacción, luego se lleva a un volumen final de 25 mL con agua
desionizada [59]. Posteriormente fueron introducidas en el equipo UV-vis
empleando celdas de cuarzo y analizadas a una longitud de onda de 510 nm.
Curva de Calibración: para la realización de la curva de calibración se preparó una
solución estándar de creatinina 500 mg/L a partir del estándar sólido (Riedel-de
Haen, 100% p/p). La Tabla 3 muestra las concentraciones de los patrones para la
curva
Tabla 3. Preparación de la curva de calibración de creatinina
Conc. patrón (mg/L)
Vol. NaOH (µL)
Vol. ácido pícrico (mL)
Vol. Madre (µL)
Vol. Enrase (mL)
Blanco 380 5 0 25
2 380 5 100 25
5 380 5 250 25
10 380 5 500 25
20 380 5 1000 25
Equipo: Espectrofotómetro GENESYS 10S UV-vis (Thermo Fisher Scientific) como
el que se muestra en la Figura 8. El equipo necesita para su funcionamiento una
fuente de alimentación 110 / 220V, 50/60 Hz, cuenta con un rango de longitud de
onda 190 -1100 nm y un doble haz que pasa por la celda de cuarzo de volumen 3
mL y paso óptico de 1 cm. Las soluciones se colocan en las celdas y se mide la
respuesta instrumental, que en este caso es la medida de la absorbancia a una
longitud de onda 510 nm.
Figura 8. Espectrofotómetro GENESYS™ 10S UV-Vis.
26
2. Determinación analítica de Mercurio Total en la orina empleando TDA-AAS.
Equipo: Para la determinación de mercurio total en orina se empleó un analizador
directo de mercurio DMA-80 TriCell MILLESTONE (Italia) como el mostrado en la
Figura 5. Este es alimentado con oxígeno de grado UAP (ultra alta pureza) para su
funcionamiento, ya que es el gas de arrastre de los vapores mercuriales. Las
soluciones estándares de mercurio para la curva de calibración se prepararon a
partir de una solución patrón de mercurio (1000 ug mL-1 de Hg2+, 2-5% HNO3,
AccuStandard).
Muestras y soluciones: Para la preparación de todas las soluciones se utilizó agua
desionizada (Mili-Q 18 MΩ cm, Milipore). Estas soluciones se colocaron en cubetas
de cuarzo proporcionadas por Milestone para el análisis de líquidos en el DMA-80.
En cuanto a las muestras de orina, el volumen de muestra (0,3 mL) fue colocado
dentro de cubetas de cuarzo para ser luego introducidas al equipo DMA-80 por
triplicado. El equipo se enciende con alimentación continua con oxígeno grado UAP
(gas portador) a una presión interna de 3,1 bar con un flujo de 7 L h-1.
Programa de calentamiento: consistió en una rampa que inicia a 200 °C
(temperatura de secado) en el horno de secado y de descomposición del analito y
toma 150 s para alcanzar los 650 °C (temperatura de descomposición), donde se
mantiene por 180 s adicionales. Tras la descomposición de la muestra, el analito
volatilizado pasa junto con el resto de los gases residuales a través del horno
catalizador de Co-MnO2 que se encuentra a una temperatura constante de 650 °C.
El analito luego es retenido y preconcentrado en el amalgamador de Au/Pt durante
12 s, para luego ser calentado rápidamente a 850 °C y todo el vapor de mercurio
liberado es llevado por el flujo de oxígeno a las celdas espectroscópicas para su
detección. El equipo registra la señal como altura máxima de absorbancia a una
longitud de onda de 253,7 nm durante 60 s antes de realizar una purga del sistema
y eliminar los gases residuales. Los datos son representados en el Software
27
Milestone easyCONTROL® en la pantalla táctil del DMA-80, donde es posible
extraerlos desde un puerto USB.
Los parámetros de operación del equipo y Calibración: los parámetros son
mostrados en la Tabla 4 y en la Tabla 5 se muestra el método de calibración para
orina del DMA-80. Para la realización de este trabajo se considerarán todos los
parámetros de seguridad descritos en la Norma COVENIN 3027:1998, debido a que
el mercurio es perjudicial para la salud [60].
Tabla 4. Parámetros operacionales del analizador de mercurio DMA-80.
Tabla 5. Método de calibración para medir mercurio total en orina con el DMA-
80.
Nº Hg (ng) Detección Método
1 0,0 Celdas 0 y 1 0
2 0,5 Celdas 0 y1 100 µL de 5 ppb
3 1,0 Celdas 0 y 1 100 µL de 10 ppb
4 2,0 Celdas 0 y 1 100 µL de 20 ppb
5 3,0 Celdas 0 y 1 100 µL de 30 ppb
6 5,0 Celdas 0 y 1 100 µL de 50 ppb
7 10,0 Celda 1 100 µL de 100 ppb
8 20,0 Celdas 2 100 µL de 200 ppb
9 50,0 Celda 2 100 µL de 500 ppb
10 100,0 Celda 2 100 µL de 1 ppm
11 200,0 Celda 2 100 µL de 2 ppm
12 500,0 Celda 2 100 µL de 5 ppm
13 700,0 Celda 2 100 µL de 7 ppm
14 1000,0 Celda 2 100 µL de 10 ppm
Una vez obtenida la curva de calibración tanto para el UV-vis y el analizador, se
evaluaron las siguientes figuras de mérito:
Parámetros Temperatura (ºC) Tiempo (s)
Secado 200 30
Rampla de descomposición 650 90
Retención de descomposición 650 90
Temperatura de catálisis 600 -
Tiempo de purga - 60
Amalgamación 850 12
Tiempo de grabación - 60
28
El límite de detección, el cual es definido como la concentración de analito que
proporciona una señal igual a la señal del blanco más tres veces la desviación
estándar del blanco, y corresponde a la medida más pequeña que se puede detectar
en un determinado procedimiento analítico [61]. El límite de detección será
determinado midiendo cinco veces la señal del blanco, que es la matriz sin el analito
(agua desionizada), para luego realizar los cálculos estadísticos correspondientes.
En el caso del DMA-80, Existe un blanco instrumental que es la medida de las
respectivas cubetas vacías y que para nuestro análisis solo será tomado para la
corrección de la línea base del instrumento.
Límite de cuantificación, el cual se define como la concentración mínima del analito,
que se puede determinar con un método analítico de manera reproducible y con
criterios de exactitud y precisión conocida.
La sensibilidad, la cual es definida por la IUPAC como sensibilidad de calibrado y
en las áreas de metrología y química analítica viene determinada por la pendiente
de la curva de calibración. Siempre que el trazado sea lineal, la sensibilidad puede
calcularse en cualquier punto de la recta y su valor representa una medida de la
capacidad de un instrumento o del método para diferenciar pequeñas variaciones
en la concentración del analito [61]. En este trabajo la sensibilidad se determinará a
partir de la pendiente de la curva de calibración obtenida con los patrones [62, 63].
El intervalo lineal en un método analítico va desde la concentración más pequeña
que puede ser cuantificada, hasta la concentración en la cual la curva de calibrado
se desvía de la linealidad. La utilidad de un método analítico depende de los órdenes
de magnitud de este intervalo, el cual en este trabajo se optimizará evaluando la
linealidad y rango de trabajo de la curva de calibración obtenida para el analito [61].
La exactitud expresa la concordancia entre el valor estimado (o medido) y el valor
real o de referencia [64] y se utilizará para evaluar la validación del método analítico,
el cual indica cuán apropiado es un análisis para proveer la información deseada
29
[61, 65]. La validación de la metodología se realizará con estudios de recuperación
para el caso del UV vis y para el analizador de mercurio se realizará evaluando
materiales referencia certificados por el National Institute os Standarsd &
Technology (NIST) y el National Bureau of Standars (NBS). NBS-2672 Freeze Dried
urine certified for mercury Low level, NBS-2672 Freeze Dried urine certified for
mercury Elevated level, NBS-1641b mercury in water y Seronorm trace elements in
serum level 1.
La precisión es definida como la cercanía o concordancia entre los valores
obtenidos para una serie de resultados [66, 67]. Es un término amplio que involucra
desde la repetibilidad instrumental, hasta la reproducibilidad entre laboratorios. La
precisión se verificará mediante la repetibilidad y reproducibilidad instrumental,
midiendo por triplicado tres soluciones de trabajo diferentes, conteniendo cada una
las mismas concentraciones de mercurio, para finalmente expresar el resultado
como porcentaje de desviación estándar relativa (%DER).
ANÁLISIS ESTÁDISTICO
Si los datos cumplen con una distribución normal, y hay homocedasticidad, se
procederá a realizar un ANOVA y a aplicar la prueba a posteriori de rangos múltiples
de Duncan. Si los datos no siguen una distribución normal, y no hay
homocedasticidad, se requerirá utilizar un método alternativo de análisis de varianza
que no dependa del supuesto de normalidad de los datos. En ese caso, se empleará
la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis y los resultados se representarán
mediante gráficos de cajas y bigotes, empleando el Software estadístico R.
30
RESULTADOS EXPERIMENTALES
RECOLECCIÓN DE MUESTRAS:
En la Tabla 6 está plasmada la recolección de muestras por centros de salud y
participantes.
Observación: En este proyecto participaron doce (12) centros de salud del total de
veinte (20) que se tenían previsto y el personal que se tenía estimado por centro de
salud, tampoco se logró. Las razones son varias:
• Tres centros de salud alegaron no poseer personal de riesgo, ya que no
tenían equipos con contenido mercurial o los depósitos con equipos médicos
desincorporados estaban clausurados y nadie ya entraba en los mismos.
Estos Centros fueron: Complejo Hematoncológico Domingo Luciani, San
Juan de Dios y Ambulatorio de Cuá IVSS.
• Tres hospitales recibieron las cartas, pero los directores nunca dieron
respuesta, por lo que no se pudo acceder al personal para realizar el estudio.
Estos fueron: Domingo Luciani, Dr. Luis Salazar Domínguez y General
Guarenas-Guatire.
• Dos hospitales donde los directores apoyaron el proyecto, pero el personal
no entregó las muestras. Esos fueron: Ana Francisca Pérez de León II y
General Valles del Tuy.
31
Tabla 6. Hospitales y personal participante en el proyecto.
Hospital Participante Sexo Fecha Código
Victorino Santaella R. F. M Julio 2019 110701
E. G. M Julio 2019 110702
Maternidad de Carrizal W. V. M Julio 2019 120701
Materno Infantil de Este J. M.. M Junio 2019 210601
F. A. M Junio 2019 210602
Ambulatorio Dr. José González Navarro
M. G. F Junio 2019 310601
M. L. F Junio 2019 310602
N. R. F Junio 2019 310603
J. A. F Junio 2019 310604
José Ramón Figuera L. B. F Julio 2019 410701
Dr. Osio de Cuá (dos centros hospitalarios en uno)
I. D. M Julio 2019 430701
F. V. M Julio 2019 430702
M. M. F Julio 2019 430703
D. S. Julio 2019 430704
P. V. M Julio 2019 430705
Dr. Francisco García
I. M. M Junio 2019 510601
L. O. M Junio 2019 510602
J. R. M Junio 2019 510603
L. V. F Junio 2019 510604
General del Higuerote
I. V. M Junio 2019 610601
M. H. M Junio 2019 610602
R. S. M Junio 2019 610603
L. G. M Junio 2019 610604
Dr. Ernesto Regener L. Q. M Julio 2019 620701
B. F. F Julio 2019 620702
Hermógenes Rivero Saldivia de Caucagua
C. D. M Julio 2019 630701
Dr. Luis Razetti
F. M. M Enero 2018 10101
L. G. M Enero 2018 10102
C. V. M Enero 2018 10103
A. G. M Enero 2018 10204
Santa Teresita de Jesús
J. M. F Marzo 2018 20302
M. D. F Marzo 2018 20303
Y. M. F Marzo 2018 20304
E. P. M Marzo 2018 20305
T. M. F Marzo 2018 20306
Control D. B. M Junio 2019 000000
32
CALIBRACIÓN DE EQUIPOS
1. Equipo DMA-80 para medir HgT:
Limpieza de las cubetas: Antes de comenzar el análisis, todo el material de vidrio
y cubetas de cuarzo deben ser preparadas. Las cubetas de cuarzo fueron lavadas
con una solución jabonosa preparada con detergente neutro, luego se sumergieron
en una solución de HNO3 al 15% (v/v) por 24 horas a temperatura ambiente.
Posteriormente, se enjuagaron cinco veces con agua desionizada (Mili-Q 18 MΩ
cm, Milipore) y se secaron a temperatura ambiente para finalmente, someterlas a
una temperatura de 650 ºC por 120 min en una mufla (Heraeus). Terminado este
proceso, las cubetas fueron introducidas en el equipo para realizar una corrida de
limpieza (sin muestra), hasta que los valores de absorbancia obtenidos fueran igual
al blanco instrumental ≤ 0,0040. En las Figuras 9-11 y Tabla 8 y 9 se muestra la
curva de calibración obtenida para el analizador de mercurio DMA-80.
Figuras 9. Curva de Calibración de la celda cero del DMA-80
y = 0,1185x + 0,0269R² = 0,99320,0000
0,1000
0,2000
0,3000
0,4000
0,5000
0,6000
0,7000
0,0000 1,0000 2,0000 3,0000 4,0000 5,0000 6,0000
Ab
sorb
anci
a
ng Hg
Celda 0
33
Figuras 10. Curva de Calibración de la celda uno del DMA-80
Figuras 11. Curvas de Calibración de la celda dos del DMA-80
Pruebas estadísticas:
Para comprobar la linealidad en el intervalo o rango de trabajo establecido, se
realizó una curva de calibración denominada “curva manual”, la cual consistió en
analizar una serie de soluciones patrón (0 a 700 ng) por duplicado y graficar
absorbancia versus contenido de Hg de la solución patrón (ng). A esta curva manual
se le realizó una regresión lineal mediante la cual se obtuvo la mejor línea recta con
una pendiente (b) e intercepto (a) y un R2. Para verificar que estadísticamente existe
una relación lineal entre la respuesta instrumental (Absorbancia) y el contenido de
mercurio (ng) se realizó un análisis de varianza ANOVA. Por otra parte, se evaluaron
estadísticamente mediante la prueba de t student, la pendiente y el intercepto de la
y = 0,0458x + 0,0139R² = 0,9959
0,0000
0,1000
0,2000
0,3000
0,4000
0,5000
0,0000 2,0000 4,0000 6,0000 8,0000 10,0000 12,0000
Ab
sorb
anci
a
ng Hg
Celda 1
y = 0,0007x + 0,0116R² = 0,99790,0000
0,2000
0,4000
0,6000
0,0000 200,0000 400,0000 600,0000 800,0000
Ab
sorb
anci
a
ng Hg
Celda 2
34
curva de calibración para determinar si existen errores sistemáticos que afecten la
relación entre las variables. Para finalizar se comparó estadísticamente la curva
manual con la curva de calibración generadas por el equipo para así validar que con
ambas se pueden determinar valores de mercurio total en las muestras de orina.
Se realizó el análisis de varianza ANOVA, donde se establecieron las siguientes
hipótesis de criterio de aceptación para la regresión:
H0: Cantidad de ng y absorbancia no se relacionan linealmente.
H1: Cantidad de ng y absorbancia se relacionan linealmente.
F𝒆𝒙𝒑>F𝒗1,2, 𝑆𝑒 𝑟𝑒𝑐ℎ𝑎𝑧𝑎 𝑙𝑎 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑛𝑢𝑙𝑎
Hipótesis nula (H0), hipótesis alternativa (H1), F𝒆𝒙𝒑 (F experimental), F𝒗1,2 (F
tabulado para determinados grados de libertad), 𝒗= grados de libertad (n-1), donde
n es el número de medidas, con un intervalo de confianza de 95%. Los resultados
obtenidos para el análisis estadístico se presentan en la Tabla 7.
Tabla 7. Resultados de los análisis estadísticos de la curva manual.
Celda F exp F1,1 Pendiente ± SD t exp Intercepto ± SD t exp t1,0.05
0 8383,48
647,8
0,1249 ± 0,0014 91,561 0,0117 ± 0,0035 3,356
12,71 1 3398,49 0,0475 ± 0,0008 58,296 0,0233 ± 0,0080 2,919
2 2200,03 0,0007 ± 0,0001 46,904 0,0133 ± 0,0062 2,149
F1,1: Valor tabulado para 1 grado de libertad SD: desviación estándar de la medida t exp: t experimental t𝒗,∝: t tabulado a 1 grado de libertad, con intervalo de confianza de 95%, (∝= 0,05)78
Los resultados indican que existe una relación lineal entre las variables analizadas.
Es decir, la curva de calibración se ajusta al modelo matemático lineal con R2 >0.990
lo que ratifica que el intervalo de trabajo empleado se comporta linealmente. Una
vez comprobada la linealidad se continúa con los estudios estadísticos, de la
pendiente e intercepto de la curva aplicando pruebas de t student.
35
Se debe demostrar que la pendiente es significativamente diferente de cero, de esta
manera se verifica que el método responde a pequeños cambios en el contenido de
Hg ya que la pendiente proporciona un valor numérico a la sensibilidad del método.
Para ello, se plantearon las siguientes hipótesis:
H0: la pendiente no es significativamente diferente de cero
H1: la pendiente es significativamente diferente de cero
𝒕𝒆𝒙𝒑>𝒕𝒗,∝, 𝑆𝑒 𝑟𝑒𝑐ℎ𝑎𝑧𝑎 𝑙𝑎 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑛𝑢𝑙𝑎
El valor obtenido t exp se compara con el valor tabulado de t para un intervalo de
confianza del 95%, (∝: 0,05) y 𝒗: 1. Los resultados de t exp para cada una de las
celdas se encuentran en la Tabla 7, donde se puede observar que para todas las
celdas la hipótesis nula se rechaza, es decir la pendiente es significativamente
diferente de cero. Lo que valida que el método es sensible a los pequeños cambios
que existan en el contenido de Hg.
Por otra parte, se debe estudiar si el intercepto es un valor significativamente
cercano a cero. Ya que en el ajuste lineal planteado supone que todos los errores
residen en los valores de la respuesta instrumental (eje y) y no en el contenido de
Hg (eje x). Por lo cual, un intercepto cercano a cero indicaría que la presencia de
errores aleatorios es baja. Es por ello, que se aplicó la prueba t student, con las
siguientes hipótesis:
H0: El valor del intercepto es cercano a cero
H1: El valor del intercepto no es cercano a cero
𝒕 𝒆𝒙𝒑 < 𝒕𝒗,∝, 𝑆𝑒 𝑎𝑐𝑒𝑝𝑡𝑎 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑛𝑢𝑙𝑎
En la Tabla 7, también se encuentran los valores obtenidos para t exp del intercepto,
como se puede observar todos los valores se encuentran por debajo del valor
tabulado de t, por consiguiente se acepta la hipótesis nula. Indicando que el
intercepto es significativamente cercano a cero y que la presencia de errores
36
aleatorios debido a la respuesta instrumenta se baja. Los parámetros de linealidad
son aceptables, el R2 es cercano a la unidad, la pendiente es significativamente
diferente de cero y el intercepto es significativamente cercano a cero, lo que indica
que la curva de calibración manual cumple con la linealidad en el intervalo de trabajo
establecido.
Finalmente, para comprobar que la curva manual y la curva de calibración generada
por el equipo no son significativamente diferentes, se realizó un análisis de varianza
ANOVA, donde la H0 es que la curva manual no es significativamente diferente de
la curva de calibración lineales generadas por el equipo. Las F exp fueron menores
a la F tabulado por lo que la hipótesis nula se acepta (ver anexo), es decir, que la
curva manual no es significativamente diferente de la curva generada por el equipo
por consiguiente ambas curvas pueden ser empleadas para la determinación de
mercurio total en las muestras reales.
La precisión fue evaluada es términos de repetibilidad y reproducibilidad, el valor de
la repetibilidad es menor al 5% valor aceptable para un intervalo de confianza del
95%, mientras que para la reproducibilidad el valor obtenido fue mayor. Sin
embargo, la AOAC (Association of Oficial Analitycal Chemists) indica que la
precisión puede variar con la concentración y reporta que para una concentración
de 10 µg L-1 el % DER ≤ 15, también reportan que para muestras de control de
calidad el límite de precisión máximo es 15%. El porcentaje de desviación estándar
relativa para este ensayo fue de (6,15 ± 0,59)%, valor que se encuentra por debajo
del límite reportado por AOAC, debido a esto se puede concluir que el método
cuenta con una buena precisión, tanto en términos de repetibilidad como en
reproducibilidad87. La caracterización analítica se describe en la Tabla 8.
37
Tabla 8. Caracterización analítica del DMA-80
Celda IL (ng) LD (ng) LC (ng) S (ng-1) Repetibilidad
% DER
Reproducibilidad
% DER
0 0,0276 – 4,8321
0,0083* 0,0276**
0,1185
2,20 ± 0,72*** 6,15 ± 0,59*** 1 0,4498 – 9,7642 0,0458
2 42,4286 – 705,7143 0,0007
IL: Intervalo lineal, LD: Limite de detección, LC: Limite de Cuantificación, S: Sensibilidad *LD: 0,0827 µg L-1 Hg2+, **LC: 0,2759 µg L-1 Hg2+82, ***n=3, [Hg2+]=10 µg L-1
Validación del DMA-80
Para la validación del método se empleó el análisis de la composición de material
de referencia certificado (MRC), como lo son NBS-2672 Freeze Dried urine certified
for mercury Low level, NBS-2672 Freeze Dried urine certified for mercury Elevated
level y NBS-1641b mercury in wáter. Los dos primeros MRC biológicos se
encontraban en presentación liofilizada, por ende, se debió restituir el material para
poder proceder con el análisis, la restitución se describe en los anexos. El MRC
water in mercury, como su nombre lo dice se encontraba en estado líquido, por lo
que no requirió tratamiento previo al análisis, cada MRC se analizó por duplicado.
En la Tabla 9, se observan los valores promedios obtenidos en el análisis de los
MRC y la comparación con el valor reportado por la NIST, a través de una prueba t
de comparación de medias con el valor verdadero se demostró que los valores
obtenidos son significativamente cercanos al valor reportado, para dicha prueba se
empleó la Ecuación que se presenta a continuación:
𝑡 𝑒𝑥𝑝 = (�̅� − 𝜇)√𝑛
𝑆𝐷
�̅�= valor experimental promedio
µ= valor reportado
n= número de réplicas
38
Las hipótesis planteadas para esta prueba fueron:
H0: valor promedio es igual al valor reportado
H1: valor promedio no es igual al valor reportado
𝒕𝒆𝒙𝒑 < 𝒕𝒗,∝, 𝑆𝑒 𝑎𝑐𝑒𝑝𝑡𝑎 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑛𝑢𝑙𝑎
Tabla 9. Validación del método de determinación de mercurio total
MRC Valor rep. Hg (mg L-1 ±
SD)
Valor exp. Hg
(mg L-1 ± SD) t exp t 1,0.05
NBS-2672 Low level 0,0498 ± 0,0042 0,0441 ± 0,0009 -8,95
12,71 NBS-2672 Elevated level 0,294 ± 0,024 0,2443 ± 0,0072 -9,76
NBS-1641b 1,52 ± 0,04 1,5242 ± 0,0039 1,52
Valor rep. Valor reportado por la NIST. Valor exp. Valor experimental
Los t exp de los MRC dieron por debajo al t tabulado, por tanto, se acepta la
hipótesis nula, es decir no existe diferencias significativas entre el valor experimental
promedio y el valor reportado de cada MRC. Los porcentajes de exactitud obtenidos
para cada MRC fueron de 88, 83 y 100% respectivamente. A pesar de que son un
poco bajos estadísticamente los valores obtenidos son cercanos al valor reportado.
Lo que indica que el método empleado alcanza valores que concuerdan con el valor
de referencia, validando que los resultados obtenidos experimentalmente son
exactos.
39
2. Equipo UV-vis para medir Creatinina:
En la Figura 12 se muestra la curva de calibración obtenida con el equipo
Espectrofotómetro GENESYS™ 10S UV-Vis con el cual se medirá la creatinina.
Figura 12. Curva de calibración del Uv-vis para medir creatinina.
Pruebas estadísticas:
Cada patrón se analizó por triplicado y se evaluó estadísticamente la linealidad de
la curva de calibración, empleando un análisis de varianza ANOVA y pruebas t
student. Las hipótesis empleadas para cada prueba estadística son iguales a las
descritas para el DMA-80. En la Tabla 10, se desglosan los resultados obtenidos
para cada prueba estadísticas.
El análisis de varianza, en el cual se obtuvo un F exp mayor al F tabulado por lo que
la hipótesis nula se rechaza, es decir, los mg L-1 Ct y la absorbancia se relacionan
linealmente, comprobando que estadísticamente existe una linealidad entre la
variable dependiente (y) y la variable independiente (x).
y = 0,0797x - 0,007R² = 0,9997
-0,200
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
1,200
1,400
1,600
1,800
0 5 10 15 20 25
Ab
sorb
anci
a
[Ct] (mg L-1)
Curva de Calibración Espectrómetro UV-visible
40
Tabla 10. Resultados de los análisis estadísticos de la curva de calibración.
F exp F1,1 Pendiente ± SD t exp Intercepto ± SD t exp t1,0.05
10600,43 161,4 0,0797±0,0008 120,96 -0,0071±0,0077 -0,89 12,71
Además, se quiso demostrar que la pendiente es significativamente diferente de
cero y para ello se realizó una prueba t. Donde se obtuvo un valor de t exp mayor
que la t tabulada (Tabla 10), por consiguiente, se rechaza la hipótesis nula.
Indicando que el valor de la pendiente es significativamente diferente de cero. Por
otra parte, para la evaluación del intercepto se obtuvo una t exp menor a la t tabulado
por lo que la hipótesis nula se acepta, que en este caso indica que el intercepto es
significativamente cercano a cero. Esto demuestra que la curva de calibración se
ajusta a la ecuación lineal en un intervalo lineal (0,096-20,099) mg L-1 Ct. La recta
de la curva posee un intercepto cercano a cero y una pendiente positiva diferente
de cero, lo que indica que los errores aleatorios de la respuesta instrumental son
bajos y que el método es sensible a pequeños cambios en la concentración de
creatinina.
La precisión del método se evaluó a través de la repetibilidad y la reproducibilidad,
empleando tres soluciones patrones independientes de 5 mg L-1 Ct, las cuales se
analizaron por triplicado bajo las mismas condiciones experimentales. Los
resultados obtenidos se presentan en la Tabla 15, la repetibilidad se evaluó por
separado para cada solución patrón obteniendo un valor promedio de la dispersión
de las medidas menor al 0,4%, mientras que para la reproducibilidad se obtuvo una
dispersión del 5%. Debido a que los valores de% DER se encuentran dentro del el
valor establecido por la AOAC, se demuestra que la metodología empleada para la
determinación de creatinina en muestras de orina de 24 h es precisa.
Tabla 11. Caracterización analítica UV- Visible
LD (mg L-1) LC (mg L-1) S (L mg-1) Repetibilidad
% DER Reproducibilidad
% DER
0,017 0,055 0,0797 0,324 ± 0,100* 5,073 ± 0,347*
*n=3, [Hg2+] = 5 mg L-1 Ct.
41
Validación del UV-vis
La validación de la metodología empleada para la determinación de creatinina en
orina de 24 h se realizó empleando el porcentaje de recuperación (% R), debido a
que no se disponía de un MRC de creatinina. El mismo se realizó a partir del
enriquecimiento de una muestra denominada como “endógena” (ORINA 000000).
Esta muestra fue recolectada de un individuo que afirma no haber tenido ningún
contacto con el mercurio, ni amalgamas, ni accidentes con termómetros. Cada
replica se analizó por triplicado siguiendo la misma metodología planteada y el %
Recuperación se calculó empleando la siguiente ecuación:
% 𝑅 = 𝑥𝑜𝑏𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑜 − 𝑥𝑒𝑛𝑑𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜
�̂�𝑥100
En la Tabla 12 se presentan los resultados promedio obtenidos de las muestras
enriquecidas con su respectivo el % Recuperación. La verificación de los resultados
se realizó aplicando una prueba t student con las siguientes hipótesis:
H0: el% R es cercano al 100%
H1: el% R no es cercano al 100%
𝒕 𝒆𝒙𝒑 < 𝒕𝒗,∝, 𝑆𝑒 𝑎𝑐𝑒𝑝𝑡𝑎 ℎ𝑖𝑝𝑜𝑡𝑒𝑠𝑖𝑠 𝑛𝑢𝑙𝑎
Tabla 12. Exactitud evaluada a partir del % Recuperación
[Ct] añadida
(mg L-1)
X obtenido
(mg L-1 ± SD)
% Recuperación
(% R ± SD) t exp t 2,0.05
1 10,427 ± 0,010 99,425 ± 0,995 -1,00
4,30 2 11,410 ± 0,010 98,851 ± 0,995 -4,00
5 14,444 ± 0,010 100,230 ± 0,995 2,00
% R: porcentaje de recuperación, [Ct]: concentración de creatinina, xendógeno: 9,433 mg L-1
El % Recuperación para las tres soluciones evaluadas se encontró entre (98-100)%
valores que se encuentra dentro de los valores porcentuales establecidos por AOAC
(98-102)%. Sin embargo, se realizaron pruebas de contraste para validar que los
42
resultados obtenidos son estadísticamente cercanos al 100% de recuperación. Los
resultados de los t exp se encontraron por debajo del t tabulado, por tanto, se acepta
la hipótesis nula (los % Recuperación son significativamente cercanos al 100%), lo
que indicó que las características de desempeño del método cumplen con los
requisitos para las aplicaciones analíticas previstas.
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE CREATININA Y DE MERCURIO TOTAL
(HgT) EN LAS MUESTRAS.
MUESTRAS: Las muestras de orina de 24 h preservadas con HNO3 y conservadas
a 4 ºC se dejaron aclimatar a temperatura ambiente y se homogenizaron mediante
una agitación manual. Posteriormente se tomaron 3 alícuota de 300 µL de cada
muestra, las cuales fueron colocadas en las cubetas de cuarzo que se encontraban
en el carrusel del equipo, se configuró el sistema con la calibración y método
deseado, nombre de las muestras y volumen empleado, para de esta manera
comenzar el análisis el cual tuvo un tiempo aproximado de 7 minutos por muestra.
La detección del mercurio se realizó mediante EAA a una longitud de onda de 253,7
nm, el cual registra una respuesta instrumental en absorbancia que tiene asociada
su correspondiente cantidad de mercurio en ng, esta cantidad es relacionada con el
volumen empleado. Los resultados obtenidos se encuentran en la Tabla 13 y 14 y
fueron reportados en cantidad de Hg (ng) y concentración en ppb (µg L-1) y fueron
medidos por duplicado dado la alta exactitud y precisión obtenida en la calibración
y validación.
Es importante resaltar que se tiene el dossier de todas las cartas firmadas por los
directores y por los participantes, pero no se anexan en trabajo debido a la
confidencialidad que se estableció durante la investigación.
La población estudiada fue de 36 individuos con edades de (47 ± 9) años, entre los
cuales se encuentra personal de Servicios Generales, Mantenimiento, Laboratorio,
Bienes Naciones, Electromedicina y Asistentes Administrativos. Del 100% de la
43
población participante, 40% eran mujeres y el resto hombres. La población se dividió
en dos grades grupos A y B para su fácil estudio y discusión de resultados.
En el Grupo A mostrado en la Tabla 13, se encuentran personas con edades
promedio de 41 ± 9 años, donde:
• 1 individuo endógeno, el cual expresó mediante su encuesta no haber tenido
ningún contacto con el mercurio y cuya muestra fue denominada ORINA
000000. Esta muestra se empleó como referencia para los valores de
contenido de mercurio total y para la validación de método de creatinina.
• Las muestras correspondientes a este grupo se encuentran: 4 individuos
provenientes del hospital Luis Razetti, que laboran en el área de Servicios
Generales y 5 individuos del hospital Santa Teresita de Jesús, entre los
cuales 3 laboran en el área de mantenimiento, 1 enfermera y 1 médico.
Tabla 13. Contenido de HgT en las muestras de orina grupo A.
MUESTRA HgT (ng ± SD) HgT (µg L-1 ± SD)
ORINA 000000 0,0863 ± 0,0135 0,2876 ± 0,0451
ORINA 010101 < LC < LC
ORINA 010102 0,1059 ± 0,0518 0,4553 ± 0,0097
ORINA 010103 0,3275 ± 0,0571 1,0918 ± 0,1903
ORINA 010104 ND ND
ORINA 020302 ND ND
ORINA 020303 0,0846 ± 0,0068 0,2819 ± 0,0227
ORINA 020304 0,1670 ± 0,0263 0,5566 ± 0,0877
ORINA 020305 ND ND
ORINA 020306 < LC < LC
ND: No Detectado. < LC: por debajo del límite de cuantificación
Las muestras de orina estudiadas en las cuales no se obtuvieron valores que
reportar (ND), representan el 30% de la población de este grupo. A pesar de que el
contenido de mercurio no se pudo determinar en estas muestras no es una prueba
44
contundente de que los individuos estén libre del Hg, sino que los valores con la
metodología empleada no pudieron ser detectados. Por otra parte, se tienen las
muestras detectadas, pero no cuantificables, es decir el valor obtenido de las
mismas se encontraba por debajo de los niveles estadísticamente confiables, estas
muestras representan el 20% la población.
Para el 50% de la población restante se obtuvieron valores cuantificables de HgT,
los cuales estuvieron entre (0,2819-1,0918) µg L-1. Sin embargo, los mismos se
encontraron por debajo de los límites permisibles reportados por la OMS para
personas expuesta el cual es 50 µg L-1.
A pesar de que el individuo endógeno refirió no haber tenido contacto alguno con el
mercurio, este presenta valores cuantificables de HgT, lo que puede deberse a
muchas razones, pero una de ellas puede ser la exposición por contaminación
ambiental, ya que el mismo reporta que en la zona donde habita se inhala
constantemente humo proveniente de la quema de basura en un vertedero
municipal ubicado a no más de 2 km de su vivienda. Sin embargo, el valor obtenido
de 0,2876 µg L-1 se encuentra por debajo del límite permisible para personas no
expuesta según OMS de 5 µg L-1 HgT.
Para el 30% de la población con valores cuantificables se puede resaltar que son
trabajadores con más de 10 años de antigüedad laboral en el área de Servicios
Generales, Mantenimiento y Enfermería. Donde el individuo con mayor contenido
de HgT (1,0918 µg L-1) ha laborando por 34 años en el área de Servicios Generales
del centro de salud y no emplea ningún tipo de protección personal. El 10% restante
de la población con valor cuantificable tiene una antigüedad laboral de 5 años pero
refirió que sufre de una enfermedad por la cual debe tomar un medicamento de
manera permanente (Pentoxifilina), el cual se excreta por la orina y pudo haber
influido en el valor obtenido de HgT, ya que este medicamento contiene aditivos
como dióxido de titanio y eritrosina (E127) que puede contener Hg en cantidades
menores a 1 mg Kg-1 según el reglamento 231/2012 de la Unión Europea.
45
Para el grupo B mostrado en la Tabla 14, el total de la población estudiada fue de
26 individuos, con un promedio de edades de (47 ± 9) años.
Tabla 14. Contenido de Hg total en las muestras de orina grupo B.
MUESTRA HgT (ng ± SD) HgT (µg L-1 ± SD)
ORINA 110701 ND ND
ORINA 110702 < LC < LC
ORINA 120701 ND ND
ORINA 210601 < LD < LD
ORINA 210602 ND ND
ORINA 310601 < LC < LC
ORINA 310602 0,1573 ± 0,0018 0,5242 ± 0,0600
ORINA 310603 0,1396 ± 0,0054 0,4652 ± 0,0179
ORINA 310604 ND ND
ORINA 410701 0,9591 ± 0,1685 3,1970 ± 0,5615
ORINA 430701 < LC < LC
ORINA 430702 ND ND
ORINA 430703 ND ND
ORINA 430704 0,1231 ± 0,0060 0,4103 ± 0,0199
ORINA 430705 ND ND
ORINA 510601 0,2555 ± 0,0225 0,8518 ± 0,0749
ORINA 510602 < LC < LC
ORINA 510603 0,2969 ± 0,0143 0,9896 ± 0,0477
ORINA 510604 < LC < LC
ORINA 610601 0,2205 ± 0,0018 0,7351 ± 0,0060
ORINA 610602 < LC < LC
ORINA 610603 0,3028 ± 0,0501 1,0092 ± 0,1670
ORINA 610604 0,2471 ± 0,0215 0,8237 ± 0,0716
ORINA 620701 ND ND
ORINA 620702 0,2113 ± 0,0101 0,7042 ± 0,0338
ORINA 630701 ND ND
46
Las muestras con resultados de HgT no detectado o por debajo de los niveles
cuantificables representan el 61,5% de la población en este grupo. Mientras que
para el 38,5% de la población si se obtuvieron valores cuantificables de HgT los
cuales se encontraron entre (0,4103-3,1970) µg L-1. A pesar que estos resultados
son superiores a los obtenidos en el grupo A, aún se encuentran por debajo de lo
establecido por OMS. Es importante resaltar que todos los individuos con contenido
de HgT cuantificable tienen más de 11 años de antigüedad laboral y el 50% de ellos
laboran el área de Servicios Generales. La muestra con mayor contenido de HgT
(3,1970 µg L-1) proviene de un individuo que labora en el área de Bienes Nacionales
desde hace 25 años, el mismo comenta que no usa ningún equipo de protección
personal al momento de manipular equipos desincorporados. El segundo valor más
alto en contenido de HgT fue 1,0092 µg L-1, el cual proviene de un individuo que
labora en el área de Servicios Generales hace 11 años y la única protección
personal que usa son tapa bocas.
RELACIÓN CONTENIDO DE MERCURIO TOTAL/CREATININA (HgT/Ct)
En esta sección se muestra la relación HgT/Ct de los 36 individuos participantes.
Los resultados fueron obtenidos por triplicado y lo que se muestra en la Tabla 15 es
el promedio de los valores. Hay un grupo de participantes que no aparece reflejado
en esta tabla debido a que no se logró medir con el equipo de mercurio ya que estos
valores estaban por debajo del LD. Los resultados obtenidos para la relación HgT/Ct
se encuentran entre (0,1477-0,8986) µg g-1 Ct. Dato curioso es que el individuo con
mayor contenido de HgT no es el mismo que posee el mayor valor de la relación µg
g-1 Ct. La muestra que presentó una relación de HgT/Ct mayor fue ORINA 020304
con un valor de 0,8986 µg g-1 Ct. Esta muestra pertenece a un individuo femenino
que se encontraba en el periodo menstrual al momento de la toma de muestras por
lo que los valores de creatinina pudieron haberse afectados. Ya que la hemoglobina
hace que cambie la coloración del complejo ác. Picrico-Creatinina en el transcurso
de la reacción, alterando y disminuyendo la coloración de la reacción68.
47
Tabla 15. Resultados de la relación mercurio/creatinina.
MUESTRA HgT/Ct
(µg g-1 Ct ± SD)
ORINA 000000 0,1477 ± 0,0229
ORINA 010102 0,4111 ± 0,0175
ORINA 010103 0,4308 ± 0,0752
ORINA 020303 0,1945 ± 0,0158
ORINA 020304 0,8986 ± 0,1408
ORINA 310602 0,1253 ± 0,0681
ORINA 310603 0,4408 ± 0,0332
ORINA 410701 0,9808 ± 0,1212
ORINA 430704 0,6721 ± 0,1752
ORINA 510601 0,7889 ± 0,1100
ORINA 510603 0,8821 ± 0,1500
ORINA 610601 0,4123 ± 0,6390
ORINA 610603 0,6534 ± 0,1026
ORINA 610604 0,4399 ± 0,0439
ORINA 620702 0,4521 ± 0,0854
µg g-1 Ct: microgramos HgT entre gramos de Ct
Los valores de HgT en orina y la relación de creatinina reportados por la OMS y y la
Conferencia Americana de Higienistas Industriales (ACGIH) indican que deben
estar por debajo de 50 µg L-1 para HgT y de 50 HgT/Ct (µg g-1 Ct). La comparación
de los valores obtenidos para el HgT y la relación de HgT/Ct con los valores límites
para personas expuestas al mercurio en estos dos entes internacional permite
observar que los niveles obtenidos se encuentran muy por debajo de lo establecido.
Indicando que a pesar de que existe la presencia del metal los niveles son normales
por debajo del valor establecidos.
48
CONCLUSIONES
La validación a los métodos analíticos TDA-AAS y UV-Visible permitió cuantificar y
evaluar experimentalmente las figuras de mérito. El límite de detección, límite de
cuantificación, linealidad, sensibilidad, precisión y exactitud, permitieron demostrar
que las metodologías pueden ser usadas para la cuantificación de HgT y creatinina
en muestras de orina.
Se determinaron los niveles del contenido de HgT en muestras de orina de 24 h de
treinta y seis (36) personas que labora con equipos médicos desincorporados que
contienen mercurio y desechos mercuriales en los depósitos de doce (12) centros
de salud pública del estado Miranda. Con el método empleado no se pudo detectar
ni cuantificar HgT en el 58,3% de la población. Sin embargo, para el 41,7% restante
si se obtuvieron valores cuantificables de HgT. Los valores de HgT oscilaron entre
(0,2819-0,4103) µg L-1. La antigüedad laboral forma parte de las variables
importantes que influyen en el contenido de HgT del personal estudiado. El individuo
con menor contenido de Hg refiere tener una antigüedad laboral de 25 años en el
área de Bienes Nacionales y no usa ningún equipo de protección personal al
momento de manipular los equipos médicos desincorporados y el individuo con
mayor contenido de HgT ha laborado por 34 años en una de las instituciones. Otro
de los factores importantes que influyen en el contenido de Hg es la toma de
medicamentos, los cuales pueden contener trazas de Hg que agudicen los niveles
del mismo en cada individuo. A pesar de que esta población presentó contenido de
Hg estos se encuentran por debajo de los estándares internacionales según la OMS,
ACGIH de 50 µg L-1.
La determinación del contenido de creatinina en las muestras de orina de 24 h indicó
que solo al 58,3% de la población se le determinó el valor de la relación HgT/Ct, ya
que el resto no obtuvo valores cuantificables. Los valores obtenidos para esta
relación van desde (0,1477-0,8986) µg g-1 Ct, donde el mayor valor proviene de un
individuo femenino que labora en el área de Mantenimiento desde hace 12 años.
49
Sin embargo, este individuo no es la que contiene mayor contenido de HgT por lo
que se debe evaluar las posibles causas de interferencias negativas en la
determinación de creatinina y una de ellas puede ser, que en la recolección de
muestra este individuo se encontraba en su periodo menstrual lo que aporta niveles
de hemoglobina a la muestra que puede afectar en el análisis del contenido de
creatinina. A pesar de que se cuantificaron niveles de HgT en el 5
