Informe trabajo practico N1 :Comportamiento de frmacos en los diferentes tipos de msculo-mecanismos de accin.

Musculo Cardiaco:

Preparado:Corazn de rata aislado perfundido por tcnica de Langendorff con solucin Krebs a temperatura ambiente (a 6 ml/min/g), con frecuencia espontnea (Se conservan las aurculas).Se registra la presin intraventricular por medio de un globito conectado a un transductor de presin, se registra continuamente la presin en un ordenador.

Previo a la realizacin de las intervenciones, las aurculas dejaron de responder, por lo que se perdi la frecuencia espontnea y se estimul elctricamente el corazn.

Calibracin:

Intervenciones:Se utiliz una solucin de Krebs con Ca+2 0,5 mM como condicin control para comparar los efectos de los posteriores agregados.

1) Control Krebs con Ca+2 0,5 mM

Durante el transcurso del trabajo prctico se utilizara esta solucin como condicin control para referir los cambios producidos por los posteriores agregados. La frecuencia de contraccin es constante y definida por el equipo utilizado para la estimulacin elctrica. Ntese la forma de las ondas de presin, se puede observar el rpido aumento de la presin durante la sstole, y la velocidad de relajacin durante la distole, es importante observar la variacin de estos parmetros durante el agregado de adrenalina.

2) Krebs con Ca+2 0,3 mM

La disminucin del calcio extracelular produjo una disminucin de la amplitud de las ondas de presin, consecuencia de la menor fuerza contrctil desarrollada. La frecuencia cardiaca no se vio afecta porque el preparado se encuentra bajo estimulacin elctrica.La disminucin de la fuerza contrctil es producto del menor influjo de Ca+2. Al reducirse la concentracin de Ca+2 extracelular, se reduce el gradiente de concentracin a favor de la entrada de Ca+2 (entra menos calcio por los canales tipo L), si bien este influjo es insuficiente para desencadenar la contraccin, la cantidad de Ca+2 liberada desde el retculo sarcoplasmtico es proporcional al influjo de Ca por los canales tipo L, el efecto neto es una [Ca+2]Intra menor. (La frecuencia de despolarizacin del nodo S.A disminuye por el menor ingreso de calcio, y debera bajar la frecuencia cardaca, no se observa debido a la estimulacin elctrica)

3) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

El regreso a la concentracin control de Ca+2 0,5 mM produce un aumento en la fuerza, por el mecanismo ya explicado.( Aumento neto de la [Ca+2]Intra )

4) Solucin Krebs con Ca+2 0,8 mM

Se produce un aumento de la fuerza Contrctil, por aumento neto de la [Ca+2]Intra por el mecanismo ya explicado ( Amplificacin de la seal de Ca+2 , por liberacin del RS inducida por Ca+2).La frecuencia debera aumentar tambin, pero este evento queda enmascarado por la estimulacin elctrica.

5) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

6) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + adrenalina 0,08 mM. Para este agregado se cort la estimulacin elctrica.El agregado de Adrenalina produjo un aumento de la fuerza contrctil, esto es debido a la estimulacin de los receptores adrenergicos. La estimulacin de los receptores activa la protena Gs asociada, que activa la adenilato ciclasa , la cual aumenta [Ampc] , esto activa la PK-A (protena quinasa A). La PK-A fosforila los canales de Ca+2 tipo L, aumentando su probabilidad de apertura (fomenta ingreso de Ca+2),tambin fosforila la SERCA (transportador de Ca+2 del RS), aumentando su actividad, por lo que aumenta la velocidad de recaptacin del Ca+2 , el efecto neto es el aumento en la fuerza contrctil y la velocidad de relajacin diastlica. (la fosforilacin de los canales tipo L aumenta la frecuencia de despolarizacin del nodo S.A, aumentando la frecuencia cardiaca). Se puede observar una segunda onda de presin en el grfico, esto se debe a que las aurculas comenzaron a responder, produciendo las ondas anmalas.

7) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

El preparado se estabilizo, pero a una fuerza mayor a la de controles anteriores, probablemente se debi que aun se encontraba activa la cascada intracelular descripta en el inciso anterior.

8) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + Acetilcolina 0,25 mg/ml.

Para esta observacin, se suspendio la estimulacin electica, se puede ver la disminucin de la frecuencia, y un leve efecto inotrpico negativo. La disminucin de la frecuencia se debe a la accin de la Ach sobre los receptores M2 en las clulas del nodo SA, la estimulacin del receptor activa una protena Gi , la cual inhibe la AC (adenilato ciclasa), contraponindose a los receptores 1, a su vez, la subunidad G fomenta la apertura de canales de K+, lo cual produce hiperpolarizacion y la consecuente disminucin en la velocidad de despolarizacin diastlica del nodo S.A, disminuyendo la frecuencia cardiaca.

9) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

El preparado se estabiliza luego del lavado, pero aun con marcado inotropismo positivo.

10) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + ouabana 0,25 mg/ml.Se produjo un incremento neto de la fuerza contrctil respecto del control, se suspendi la estimulacin elctrica para verificar efectos sobre la frecuencia. El mecanismo del aumento en la contractilidad es la disminucin del eflujo de calcio por el intercambiador Ca+2/Na+ lo que aumenta la cantidad de Ca+2 recaptada por el RS y liberada en la prxima despolarizacin. La inhibicin de la actividad del intercambiador no es directa, sino consecuencia del bloqueo de la bomba Na+/K+ por parte de los Digitlicos. Esto produce un aumento de la [Na+]intra, lo cual disminuye el gradiente a favor de la entrada de sodio (necesario para la actividad del intercambiador, entrada de sodio y salida de calcio)

11) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

El preparado se estabilizo, con frecuencia espontanea, se puede observar el inotropismo positivo persistente ocasionado por los digitalicos.

12) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + Droga XLa droga X tuvo un efecto inotrpico negativo, el efecto sobre la frecuencia cardiaca no es confiable, debido a las respuestas irregulares del preparado.

13) Regreso a solucin control Krebs con Ca+2 0,5 mM

Se observa mejor el efecto de la droga X al regresar al control, la fuerza contrctil vuelve a elevarse al eliminar la droga X del medio.

14) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + Verapamil 0.01MSe observa efecto inotrpico negativo, la frecuencia cae levemente y comienzan a aparecer anomalas cardiacas, las ondas auriculares se hacen visibles. Probablemente se deba al bloqueo de la conduccin inducido por bloqueo de los canales de Ca+2.

15) Solucin Krebs con Ca+2 0,5 mM + Verapamil 1MEl preparado responde irregularmente, aunque el agregado inicial causo una mayor cada de la fuerza contrctil, ya no se distinguen las contracciones ventriculares, hay fibrilacin.