Inmunología · 17.00 -19.00 SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (2ª PARTE) (Sala Magna) Società Italiana Immunologia, Immunologia clinica e Allergologia y Sociedad

InmunologíaPublicac ión of ic ia l de la Soc iedad Española de Inmunologíawww.inmunologia.org

COMITÉ DIRECTOR

J.M. Rojo (Madrid), Director Ejecutivo, Á. Corbí (Madrid), A. Ferreira (Santiago de Chile), M.Fresno (Madrid), M. López-Botet (Barcelona), F. Lozano (Barcelona), I. Melero (Pamplona), A. Nieto(Montevideo), F. Sánchez-Madrid (Madrid).

COMITÉ EDITORIAL

J. Alberola-Ila (Pasadena), P. Aparicio (Murcia), J. Aramburu (Barcelona), C. Ardavín (Madrid),A. Arnaiz-Villena (Madrid), J.A. Brieva (Cádiz), E. Carosella (Paris), E. Cuadrado (San Sebastián),M. de la Fuente (Madrid), M. del Val (Madrid), G. Dighiero (Paris), P. Engel (Barcelona), G. Ercilla(Barcelona), E. Fernández-Cruz (Madrid), G. Fontán (Madrid), T. Gallart (Barcelona), F. García-Cozar (Cádiz), F. Garrido (Granada), M.L. Gaspar (Madrid), A. Gayá (Palma de Mallorca), C. Gelpí(Barcelona), R.F. González-Amaro (México), Á. González (Vigo), D. Jaraquemada (Barcelona), C.López-Larrea (Oviedo), M. López-Trascasa (Madrid), J. Madrenas (New London), A. Madrigal(Londres), R.A. Margni (Buenos Aires), E. Martínez-Naves (Madrid), N. Matamoros (Palma deMallorca), F. Merino (Bilbao), F. Mollinedo (Salamanca), E. Osinaga (Montevideo), P. Patiño(Medellín), J. Peña-Martínez (Córdoba), G. Rabinovich (Buenos Aires), J.R. Regueiro (Madrid), M.Rincón (Burlington), J.L. Rodríguez-Sánchez (Barcelona), J. Sancho (Granada), M. Santamaría(Córdoba), L. Santos-Argumedo (México), R. Solana (Córdoba), J.L. Subiza (Madrid), M.L. Toribio(Madrid), C. Vilches (Madrid), R. Vilella (Barcelona), J. Yagüe (Barcelona).

SECRETARÍA EDITORIAL

Maria Luisa del Pozo, Departamento de Inmunología, Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC,Ramiro de Maeztu, 9, E-28040 Madrid, España. Tel: +34 91 837 3112; Fax: +34 91 536 0432; E-mail: [email protected]

SECRETARÍA DE REDACCIÓN

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SUMARIO Vol. 27, Supl. 1, Mayo 2008

PROGRAMA CIENTÍFICO . . . . . . . . . . . . . . . . 6

COMUNICACIONES ORALES . . . . . . . . . . . 15

Sesión 1: Autoinmunidad - I . . . . . . . . . . . . . . . 15

Moderadores: Joana Ferrer, Julia Sequí

Sesión 2: Inmunogenética . . . . . . . . . . . . . . . . 19

Moderadores: Estela Paz Artal, Jordi Yagüe

Sesión 3: Inmunología y trasplante . . . . . . . . . 21

Moderadores: Joan Milá, Alfredo Minguela

Sesión 4: Inmunología tumoral - I . . . . . . . . . 25

Moderadores: Francisco Ruiz-Cabello, Ignacio Melero

Sesión 5: Inmunodeficiencias: alergia ycomplemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

Moderadores: Margarita López-Trascasa, Núria Matamoros

Sesión 6: Células B y NK . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34

Moderadores: África González, Miguel López-Botet

Sesión 7: Inmunologia tumoral - II . . . . . . . . . 37

Moderadores: Federico Garrido, Luis Álvarez Vallina

Sesión 8: Inmunidad e infección . . . . . . . . . . . 40

Moderadores: Francisco Lozano, Margarita Bofill

Sesión 9: Células dendríticas . . . . . . . . . . . . . . 43

Moderadores: Ángel Corbí, Francisco Borrás

Sesión 10: Células T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46

Moderadores: Manel Juan, Mª Luisa Toribio

Sesión 11: Autoinmunidad - II . . . . . . . . . . . . . 48

Moderadores: Carmen Gelpí, Mª Rosa Julià

POSTERS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55

Sesión 1: Autoinmunidad - I . . . . . . . . . . . . . . . 55

Moderadores: Joana Ferrer, Júlia Sequí

Sesión 2: Inmunogenética . . . . . . . . . . . . . . . . . 62

Moderadores: Estela Paz Artal, Jordi Yagüe


SUMARIO Vol. 27, Supl. 1, Mayo 2008

Sesión 3: Inmunología y trasplante . . . . . . . . . 66

Moderadores: Joan Milá, Alfredo Minguela

Sesión 4: Inmunología tumoral - I . . . . . . . . . 72

Moderadores: Francisco Ruiz-Cabello, Ignacio Melero

Sesión 5: Inmunodeficiencias: alergia ycomplemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75

Moderadores: Núria Matamoros, Margarita López-Trascasa

Sesión 6: Células B y NK . . . . . . . . . . . . . . . . . 85

Moderadores: África González, Miguel López-Botet

Sesión 7: Inmunología tumoral - II . . . . . . . . . 90

Moderadores: Luis Álvarez Vallina, Federico Garrido

Sesión 8: Inmunidad e infección . . . . . . . . . . . 96

Moderadores: Francisco Lozano, Margarita Bofill

Sesión 9: Células dendríticas . . . . . . . . . . . . . 104

Moderadores: Ángel Corbí, Francisco Borrás

Sesión 10: Células T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107

Moderadores: Manel Juan, Mª Luisa Toribio

Sesión 11: Autoinmunidad - II . . . . . . . . . . . . 114

Moderadores: Mª Rosa Julià, Carmen Gelpí

Índice de Autores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121


PROGRAMA CIENTÍFICO

MIÉRCOLES, 21 DE MAYO

10.00-14.00 ENTREGA DE DOCUMENTACIÓNCOLOCACIÓN DE PÓSTERS (Sala Termas)1. Autoinmunidad I2. Inmunogenética

13.00-14.00 REUNIÓN DE LA JUNTA DIRECTIVA

15.00-16.15 TALLER DE INMUNOQUÍMICA (Sala Ramón Llull)Coordinadores: Cándido Juárez, Hospital Sant Pau (Barcelona). Juan José Rodríguez Molina,Hospital G. Universitario Gregorio Marañón (Madrid). Julia Sequi Navarro, Hospital CarlosIII (Madrid). Luisa Mª Villar, Hospital Ramón y Cajal (Madrid)

16.15-17.30 TALLER DE AUTOINMUNIDAD (Sala Luis de Molina A)Coordinadores: Rita Álvarez, Hospital Universitario La Paz (Madrid). Marcos López Hoyos, Hospital Universitario Marqués de Valdecilla (Santander)

17.30-19.00 SIMPOSIUM DIASORIN: ENFERMEDAD CELÍACA (Sala Magna)Inmunopatogenia de la enfermedad celíaca Eduardo Arranz, Universidad de Valladolid, Presidente de la Sociedad Española de Enfermedad Celíaca. La detección de la enfermedad celíaca, una labor multidisciplinarCarme Farré, Hospital Sant Joan de Deu (Barcelona)

19.00-20.00 CONFERENCIA INAUGURAL (Sala Magna)Complexity and complementarity of cellular and humoral innate immunityAlberto Mantovani. Instituto Clinico Humanitas (Milán)

20.00 BIENVENIDA E INAUGURACIÓN OFICIAL (Sala Magna)Cóctel de bienvenida

JUEVES, 22 DE MAYO

08.30-10.00 COLOCACIÓN DE PÓSTERS (Sala Termas)1. Autoinmunidad I2. Inmunogenética


09.00-11.00 SIMPOSIUM PLENARIO: INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS (Sala Magna)Patrocinador: BAXTEREmilio Gómez de la Concha. Hospital Clínico San Carlos (Madrid) Common Variable Immunodeficiency-genetic dissection of a complex disorderUlric Salzer. University Hospital FriburgoSíndromes de hiper-IgMMari Cruz García. Hospital Universitario la Paz (Madrid)Mecanismos etiopatogénicos de un nuevo grupo de inmunodeficiencias primarias. Enfermedades autoinflamatorias sistémicasJordi Yagüe. Hospital Clínico (Barcelona)Up to date: REDIP: Registro Español de inmunodeficiencias primariasNatalia Martínez Pomar. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca)

11.00-12.00 CAFÉ Y VISITA A PÓSTERS1. Autoinmunidad I2. Inmunogenética

12.00-13.30 COMUNICACIONES ORALES 1. AUTOINMUNIDAD I (Sala Luis de Molina A)Moderadores: Joana Ferrer (Palma de Mallorca). Julia Sequi (Madrid)

COMUNICACIONES ORALES 2. INMUNOGENÉTICA (Sala Ramon Llull)Moderadores: Estela Paz Artal (Madrid). Jordi Yagüe (Barcelona)

TALLER HLA (Sala Luis de Molina B)Coordinadores: Mª Rosario De Pablo y Carlos Vilches, Hospital Puerta de Hierro (Madrid). José Luis Vicario, Centro Regional de Transfusiones (Madrid)

SIMPOSIUM BECTON DICKINSON (Sala Magna)¿ALGO MÁS EN HIV?Actualización en los aspectos patogénicos de la infección por HIVRosa García Delgado, Servicio de Inmunología. Fundación Jiménez Díaz (Madrid) Vacunas terapéuticas en HIV. Perspectivas actuales y futurasMontse Plana. Grupo de Investigación de Enfermedades Infecciosas. Hospital Clínic/ IDIBAPS (Barcelona)

INMUNIDAD Y ADHESIÓN Dianas y Terapias anti-adhesión en enfermedades autoinmunes y neurodegenerativas Francisco Sánchez Madrid, Servicio de Inmunología. Hospital La Princesa (Madrid)

13.30-15.00 ALMUERZO DE TRABAJO

15.00-16.30 SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (1ª PARTE) (Sala Magna)Società Italiana Immunologia, Immunologia Clinica e Allergologia y Sociedad Española de Inmunología.Moderadores: Miguel López-Botet, IMIM-Hospital del Mar (Barcelona). Francisco Lozano, Hospital Clínic (Barcelona)Epithelial cell-dendritic cell cross-talk in bacterial handlingMaría Rescigno. Department of Experimental Oncology. European Institute of Oncology (Milan)Gene expression profiling on human macrophages: identification of LSECtin as a novel pathogen-attachement factor in alternatively activated macrophagesAngel Corbí. Centro de Investigaciones Biológicas. CSIC (Madrid)Advances in neutrophil-derived cytokinesMarco Cassatella, Department of Pathology. University of Verona (Italy)

16.30-17.00 CAFÉ Y VISITA A PÓSTERS


17.00 -19.00 SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (2ª PARTE) (Sala Magna)Società Italiana Immunologia, Immunologia clinica e Allergologia y Sociedad Española de InmunologíaNK cells at the interface between innate and adaptative immunityAlessandro Moretta, Molecular Immunology Laboratories. University of Genova (Italy)Negative regulation of macrophage activationLisardo Boscá. Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols (Madrid)Matricellular protein SPARC at the interface of macrophage-tumor cell interactionMario Colombo. Fondazione IRCCS. Istituto Nazionale Tumori (Italy)

19.00 ACTIVIDAD LÚDICO-CULTURALVisita guiada a la Catedral de Palma de Mallorca.

VIERNES, 23 DE MAYO

08.30-10.00 COLOCACIÓN DE PÓSTERS (Sala Termas)3. Inmunología y trasplante4. Inmunología tumoral I5. Inmunodeficiencias, alergia y complemento6. Células B y NK7. Inmunología tumoral II

12.00-13.30 VOTACIONES SEI 15.00-17.00

09.00-11.00 SIMPOSIUM PLENARIO: HOMENAJE AL PROFESOR JEAN DAUSSET (Sala Magna)Moderadora: Rocío Álvarez. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia)Jean Dausset. Un visionario del siglo XX Edgardo Carosella, Hospital Saint Louis (Paris)La serología HLA como fundamento del trasplanteGuadalupe Ercilla. Hospital Clínic (Barcelona)Papel de los sistemas menores de histocompatibilidad en los trasplantes de órganos sólidosAntonio Núñez. Hospital Virgen del Rocío (Sevilla)De la supresión de la respuesta alogénica in vitro al estudio del proceso de tolerancia en trasplantesRocío Alvarez. Hospital Virgen de la Arrixaca (Murcia)Functional characterization of killer cell Ig-like receptors expressed by normal and malignant human CD4+ T lymphocytesArmand Bensussan. Directeur de Département. INSERM U841. Faculté de Médecine de Créteil. Président de la Société Française d’Immunologie (París)

09.00-10.30 SIMPOSIUM IZASA (Sala Luis de Molina A)La tecnología de los tetrámeros de CMH: herramientas para el estudio de la respuesta T específicaFélix A. Montero-Julian. Directeur du Departement Analyse Cellulaire. Beckman Coulter Immunotech (Marseille) Flow Cytometric Analysis of Signal Transduction PathwaysT. Vincent Shankey. Advanced Technology Center. Beckman Coulter, Inc. (Miami)Células Madre Hematopoyéticas: algo más que hematopoyesisJosé Carlos Segovia Sanz. Jefe de la Unidad de Diferenciación y Citometría. División de Hematopoyesis. CIEMAT (Madrid)


11.00-12.00 CAFÉ Y VISITA PÓSTERS (Sala Termas)3. Inmunología y trasplante4. Inmunología tumoral I5. Inmunodeficiencias, alergia y complemento

11.15-12.00 SIMPOSIUM ANÁLISIS Y GENÉTICA (Sala Ramon Llull)Designers antigens as diagnostic targets for autoantibody determinationW. Schlumberguer. Member of Board of Directors. Division Immunobiochemical Diagnostics. Euroimmun (Lübeck)

12.00-13.30 COMUNICACIONES ORALES 3. INMUNOLOGÍA Y TRASPLANTE (Sala Luis de Molina B) Moderadores: Joan Milà (Palma de Mallorca). A. Minguela (Murcia)

COMUNICACIONES ORALES 4. INMUNOLOGÍA TUMORAL I (Sala Ramon Llull)Moderadores: I. Melero (Navarra). Francisco Ruiz-Cabello (Granada)

COMUNICACIONES ORALES 5. INMUNODEFICIENCIAS, ALERGIA Y COMPLEMENTO (Sala Luis de Molina A) Moderadores: Margarita López Trascasa (Madrid). Núria Matamoros (Palma de Mallorca)

MESA REDONDA: PROTOCOLOS CLÍNICOS EN AUTOINMUNIDADConsenso europeo. Experiencias españolas (Sala Magna) Moderadora: María Rosa Julià (Palma de Mallorca)Comités de enfermedades autoinmunes en los hospitales: una utopía que puede ser realidad Lucio Pallarés, Servicio Medicina Interna. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca)Grupo de trabajo en autoinmunidad: Propuestas y posibilidades Aresio Plaza. Servicio Inmunología. Hospital Puerta de Hierro (Madrid)Protocolos clínicos en autoinmunidad: nuestra experienciaMª Rosa Julià. Servicio Inmunología. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca)

13.30- 15.00 ALMUERZO DE TRABAJO

15.00-16.30 COMUNICACIONES ORALES 6. CÉLULAS B Y NK (Sala Luis de Molina B) Moderadores: África González (Vigo), Miguel López-Botet (Barcelona)

COMUNICACIONES ORALES 7. INMUNOLOGÍA TUMORAL II (Sala Ramon Llull) Moderadores: Luis Álvarez-Vallina (Madrid), Federico Garrido (Granada)

SIMPOSIUM MENARINI: INMUNOLOGÍA OCULAR (Sala Magna) Moderadores: José Mª García Ruiz de Morales (León).Autoimmunity in the eye: pathogenic and regulatory T cellsRachel Caspi. Laboratory Immunology. NEI. NIH (Bethesda)Protocolos clínicos en uveitisJosé Luis Olea. Servicio Oftalmología. Hospital. Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca)Uveitis autoinmune: avances en el diagnóstico e inmunoterapia José Mª García Ruiz de Morales. Servicio Inmunología Hospital de León / Laboratory Immunology. NEI. NIH (Bethesda)

TALLER DE CITOMETRÍA (Sala Luis de Molina A) Coordinadores: Natalia Maruri, Hospital de Cruces (Bilbao). Francisco Ruiz-Cabello (Granada)

16.30-17.00 CAFÉ Y VISITA A PÓSTERS

17.00-18.30 ASAMBLEA DE LA SEI (Sala Magna)

21.00 CENA DE CLAUSURAAutobuses hoteles


SÁBADO, 24 DE MAYO

08.30-10.00 COLOCACIÓN DE PÓSTERS (Sala Termas)8. Inmunidad e infección9. Células dendríticas10. Células T11. Autoinmunidad II

09.00-10.30 COMUNICACIONES ORALES 8. INMUNIDAD E INFECCIÓN (Sala Luis de Molina A)Moderadores: Margarita Bofill (Barcelona). Francisco Lozano (Barcelona)COMUNICACIONES ORALES 9. CÉLULAS DENDRÍTICAS (Sala Ramon Llull)Moderadores: Francisco Borrás (Barcelona). Angel Corbí (Madrid)COMUNICACIONES ORALES 10. CÉLULAS T (Sala Luis de Molina B)Moderadores: Manel Juan (Barcelona). Mª Luisa Toribio (Madrid)COMUNICACIONES ORALES 11. AUTOINMUNIDAD II (Sala Magna)Moderadores: Carmen Gelpí (Barcelona). Mª Rosa Julià (Palma de Mallorca)

10.30-11.45 MESA REDONDA: PRESENTE Y FUTURO DE LA INMUNOLOGÍA (Sala Magna)Moderadores: Eduardo Fernández-Cruz. Presidente de la Comisión Nacional de Inmunología. Miguel López-Botet. Presidente de la Sociedad Española de InmunologíaInmunología en los Hospitales: situación actual y nuevos modelosMargarita López-Trascasa. Vocal de la Junta Directiva de la Sociedad Española de Inmunología Formación Especializada: Mapa de Unidades docentes y Plan de futuroMaría José Herrero. Representante de la Sociedad Española de Inmunología en la Comisión Nacional de InmunologíaLa Troncalidad en las Especialidades de LaboratorioAdolfo Campos. Vicepresidente de la Comisión Nacional de Inmunología

11.45-12.15 CAFÉ Y VISITA A POSTERS (Sala Termas)8. Inmunidad e infección9. Células dendríticas10. Células T11. Autoinmunidad II

12.15-13.15 CONFERENCIA DE CLAUSURA (Sala Magna)State of the art: class switch recombination and DNA repair activityQ. Pan-Hammarstrom. Karolinska Institute (Estocolmo)

13.15 PRESENTACIÓN DE LOS PRÓXIMOS CONGRESOS (Sala Magna)CÓCTEL DE DESPEDIDA


SESIÓN 1: AUTOINMUNIDAD - I

Moderadores: Dra. Joana Ferrer (Palma de Mallorca), Julia Sequí (Madrid)

TLRs EN EL SISTEMA INMUNE INTESTINAL. De Andrés A, MarínN, Mirete S, Camarero C, Roy G. Hospital Ramón y Cajal de Madrid.

En la enteropatía celíaca (EC) tiene lugar una respuesta inmuneinnata a nivel del epitelio intestinal, cuyo estímulo y mecanismos pato-génicos son prácticamente desconocidos.

Dentro de los receptores del sistema inmune innato intestinal, sehallan los PRRs (pattern recognition receptors), amplios sensores decomponentes microbianos filogenéticamente conservados. Actualmen-te se especula que una disfunción de los toll-like receptors (TLRs) reco-noce a los péptidos del gluten como “no propios/tóxicos”, generandouna respuesta inflamatoria inicial innata. Ningún estudio ha examina-do el papel de los TLRs y de sus ligandos específicos en el fenotipo dela EC.

Objetivo. Analizar la expresión de los TLRs, tanto en el epiteliocomo en las distintas subpoblaciones de linfocitos intraepiteliales (LIEs),en mucosa intestinal control, para conocer los niveles de expresión nor-males, o en celíacos, con objeto de definir un estadío inicial en la pato-genia de la enfermedad celíaca.

Metodología. Se han analizado un total de 34 biopsias de duo-deno: 14 celíacos activos y 19 controles. Expresión y cuantificación porcitometría de flujo, de los TLR2 y TLR4 en superficie y de los TLR3 yTLR9 intracelulares, en los distintos subtipos celulares.

Resultados

Celíacos activos (n = 14) No celíacos (n = 19)

LIEs Epitelio LIEs EpitelioMedia ± ES Media ± ES Media ± ES Media ± ES

TLR2 13 ± 1.5 1.5 ± 0.5 11.3 ± 2.3 1.5 ± 0.5TLR4 34.5 ± 5.1 22 ± 3.9 29.5 ± 2.5 16.8 ± 2.7TLR3 66 ± 9.1 51.8 ± 6.1 56.7 ± 8 70.2 ± 3.4TLR9 61.4 ± 6.1 48.4 ± 5.5 45.6 ± 7.1 48.3 ± 4.0

Conclusiones: No parece que una diferencia en la expresión delos sensores TLRs analizados esté implicada en el inicio de una res-puesta inflamatoria innata en el compartimento epitelial del intestino.

PERFIL DE LINFOCITOS INTRAEPITELIALES EN EL DIAGNÓS-TICO DE LA ENFERMEDAD CELIACA. Sánchez M, Gutierrez EI,Toca M, Gonzalo Ocejo-Vinyals J, Leyva-Cobián F, López-Hoyos M.Servicio de Inmunología, Hospital Universitario “Marqués de Valdecilla”, Ser-vicio Cántabro de Salud. Santander.

Introducción. La enfermedad celiaca (EC) es una enteropatía cró-nica mediada por el sistema inmunitario caracterizada por alteracio-

nes histológicas en la mucosa intestinal, principalmente atrofia vello-sitaria y aumento de linfocitos intraepiteliales (LIEs).

Objetivo. Estudio del perfil de LIEs en pacientes con sospecha clí-nica de EC en nuestro medio.

Métodos. De 97 biopsias remitidas de junio del 2006 a febrero del2008 para el estudio del linfograma por citometria, seleccionamos 70con datos valorables, para realizar una revisión prospectiva de las his-torias clínicas de los sujetos (40 mujeres, 25 hombres).

Resultados. EC activa: 66%, EC. Silente: 6%, EC potencial: 15%,EC latente: 1% .

EC activa

Clínica FrecuenciaDistensión abdominal 78%Diarrea 72%Retraso del crecimiento 59%Anemia 54%Hipertransaminemia 50%Trombocitosis 46%

Biopsia FrecuenciaAtrofia total 9%Atrofia subtotal 67%Atrofia parcial 20%Cambios mínimos 2%

Marcadores serológicos y genéticos (HLA-II) FrecuenciaAc antigliadina + 79%Ac antitransglutaminasa + 88%DQ2 90%DQ8 7%

Linfograma Porcentaje de pacientes1.LIEs totales ≥ 10% 92%2.LIEs γ δ ≥ 10% 89%3.LIEs CD3- ≤ 10% 60% 1+2+3 54%

LIEs en pacientes ≤ 3 años Xm ± DE % LIE totales 27 ± 14% LIE Á‰ 29 ± 15%LIE CD3- 13 ± 8%

LIEs en pacientes > 3 años Xm ± DE %LIE totales 22 ± 13%LIE γ δ 29 ± 19%LIE CD3- 10 ± 5%

EC silente. Hipertransaminemia 75%.Marcadores serológicos Ac antigliadina +: 33% Ac antitransgluta-

minasa + 75%. Linfograma, 1+2+3: 100%.EC latente y potencial. 1+2+3: 20%.Conclusiones. En la población estudiada el perfil: LIEs totales

≥10% - LIEs γδ LIE ≥ 10% -LIEs CD3- ≤ 10% constituye un marcadorútil tanto para el diagnostico de la EC activa como silente. En este últi-mo caso, podría ser el mejor marcador de esta forma de presentación.

15

Comunicaciones OralesInmunología

Vol. 27 / Supl. 1/ Mayo 2008: 15-53

Para la EC latente y potencial, el infiltrado linfocitario suele ser < 10%pero los LIEs γδ se mantienen elevados y los LIE CD3- disminuidos.

PAPEL DEL GEN PXR EN ENFERMEDAD INFLAMATORIAINTESTINAL. Márquez Ortiz AM1, Martínez Doncel A1, Mendoza JL2,Taxonera C2, Fernández-Arquero M1, Díaz-Rubio M2, Gómez de la Con-cha E1, Urcelay E1. 1Servicio de Inmunología Clínica, Hospital Clínico SanCarlos. 2Servicio de Gastroenterología, Hospital Clínico San Carlos.

Recientemente, se ha descrito una asociación del gen del receptorde pregnano (PXR/NR1I2) con la susceptibilidad a padecer enferme-dad inflamatoria intestinal (EII). PXR es un receptor nuclear que regu-la genes involucrados en procesos de detoxificación, entre ellos MDR1.Nuestro objetivo es investigar el impacto de este locus en la predispo-sición a padecer EII en población española.

Para el estudio caso-control se utilizaron 365 enfermos de CU, 331pacientes de EC y 550 controles. Se analizaron mediante sondas Taq-Man tres polimorfismos en el gen PXR así como los seis haplotiposconformados por ellos. Incluimos el marcador -25385C/T (rs3814055)por ser el más fuertemente correlacionado con la enfermedad en elestudio inicial y otros dos polimorfismos (rs6784598 y rs2276707) conel fin de cubrir toda la variabilidad.

Al comparar las frecuencias genotípicas y alélicas entre enfer-mos y controles no encontramos diferencias significativas. Sin embar-go, al estratificar los enfermos de colitis por extensión observamos queel alelo -25385T era más frecuente en pacientes con la forma extensaque en los pacientes con colitis izquierda (p=0.049), y que en los con-troles (p=0.009). Este efecto se debe principalmente al haplotipo deriesgo TCC significativamente aumentado en colitis extensa con res-pecto a colitis izquierda [p=0.032; odds ratio (95% IC)=1.51 (1.02-2.24)]y controles [p=0.001; odds ratio (95% IC)= 1.66 (1.20-2.30)].

Posteriormente, analizamos la posible interacción entre los genesPXR y MDR1 encontrando que un polimorfismo del gen MDR1(rs3789243), localizado en el intrón 3 y previamente asociado a colitisulcerosa, presentaba una distribución genotípica significativamente dife-rente al comparar portadores y no portadores del alelo de riesgo -25385T(p=0.005). Nuestro estudio confirma la asociación del gen PXR con laenfermedad inflamatoria intestinal, concretamente con colitis extensa,y encontramos evidencias de interacción entre este gen y MDR1.

ANÁLISIS DEL POLIMORFISMO DEL GEN MBL2 EN ENFERME-DAD DE CROHN. Rodríguez Gutiérrez JF1, Rodríguez Bayona B1,Piñero A2, Rodríguez C1, Correro F2, Brieva JA1, Nieto A1. 1Hospital Puer-ta del Mar. 2Servicio de Digestivo, Hospital Puerta del Mar.

Introducción. Genes de la inmunidad innata intervienen en la sus-ceptibilidad y forma de presentación de la enfermedad de Crohn (EC).La lectina de unión a manosa (MBL) codificada por el gen MBL2 es unimportante componente de la inmunidad innata que se une a un ampliorango de microorganismos y activa complemento por la vía de las lec-tinas. Los niveles séricos de MBL y su actividad funcional están par-cialmente regulados por variaciones genéticas, las cuales se han aso-ciado a otros procesos relacionados como la enf. de Beçhet.

Objetivo. Analizar la posible influencia del polimorfismo en laregión 5’ del gen MBL2 en la forma de presentación de EC.

Pacientes y Métodos. Se han determinado en 120 pacientes lossiguientes SNPs: -550 H/L y -221 Y/X en la región promotora; +4 P/Q

en la región 5'UTR y tres variantes en los codones 52, 54 y 57 (exón 1)conocidas como alelos D, B y C, respectivamente, mediante PCR-SSOinversa (Innogenetics). A todos los pacientes se les realizó además deter-minación de acs anti-S cerevisiae (ASCA) mediante técnica de ELISA(Aeskulisa) El análisis estadístico se realizó mediante los programasSPSS (v.11.0) y EpiInfo (v.6.0); se analizaron tanto los SNPs como loshaplotipos comunes en los que éstos se organizan.

Resultados. Las características clínicas estudiadas fueron sexo,tabaquismo, edad al dco, localización, patrón evolutivo, manifesta-ciones extradigestivas, necesidad de cirugía, tratamiento con inmu-nosupresores y presencia de ASCA. En el análisis por SNPs se haobservado una mayor tendencia a desarrollar un patrón fistulizan-te (B3 de clasif. de Viena) en los pacientes portadores del alelo 550L(p=0.027; OR=4.97, IC95% 1.02-47.31). Asimismo, dicho alelo se aso-cia con una mayor necesidad de cirugía (p=0.009; OR=9.97, IC95%1.38-432). En el análisis por haplotipos encontramos que en portado-res del haplotipo secretor HYPA la enfermedad se limita al colon (L2de clasif. de Viena) con menor frecuencia (p=0.02; OR=0.31, IC95%0.08-0.99).

Conclusión. El polimorfismo en el gen MBL2 puede influenciarla forma de presentación de la EC.

GENES IL12B E IL23R: ANÁLISIS DE SUSCEPTIBILIDAD E INTER-ACCIÓN EN ARTRITIS REUMATOIDE. Varadé López J1, PerdigonesN1, Fernándes-Arquero M1, Jover JA2, Gómez de la Concha E1, Martínez-Doncel A1, Fernández Gutiérrez B2, Urcelay E1. 1Inmunología Clínica Hos-pital Clínico San Carlos. 2Reumatología Hospital Clínico San Carlos.

La artritis reumatoide (AR) es una patología de genética comple-ja que afecta aproximadamente al 1% de la población. Se ha postula-do que existen genes comunes a distintas enfermedades autoinmunes.Recientemente se han descrito polimorfismos de un solo nucleótido(SNP) en los genes IL12B e IL23R asociados a la enfermedad de Crohn.La IL23 es un heterodímero compuesto por las cadenas p19 y p40, codi-ficadas por IL23 e IL12B respectivamente; su receptor es también unheterodímero compuesto por los productos de dos genes diferentesIL23R e IL12RB. Nuestro objetivo es dilucidar si dichos polimorfismosde IL12B e IL23R están asociados al desarrollo de AR, tanto de formaindividual como combinada.

Analizamos 550 pacientes de AR y 546 individuos control. Todosellos se genotiparon para 4 SNPs con sondas TaqMan. Dos SNPs estánlocalizados en el gen IL2B (rs688765 y rs3212227) y los otros dos en elgen IL23R (rs7517847 y rs11209026). Las frecuencias genotípicas y alé-licas de los cuatro SNPs se compararon por el test de c2 o el test exac-to de Fisher. La Odds ratio (OR) y los valores de p se calcularon con elpaquete estadístico Epi Info v. 6.02.

Los alelos minoritarios de los dos polimorfismos de IL23R son másfrecuentes en AR que en controles (rs7517847, p=0.019; rs11209026, p=0.026), contrariamente a los descrito en Crohn. Por el contrario no encon-tramos ninguna asociación de los dos polimorfismos IL12B con AR.

También observamos una interacción entre los marcadoresrs7517847 (IL23R) y el rs3212227 (IL12B) [GG/CC vs(TT+TG)/(AA+AC) p=0.004]. Esto se ve reflejado en que un 13% delos enfermos rs7517847-GG son a su vez rs312227-CC siendo la fre-cuencia de este último genotipo en controles del 5%, lo que supone unincremento del 8% (p=0.006).

Nuestros datos sugieren que los alelos minoritarios de los poli-morfismos estudiados en IL23R (rs7517847 y rs11209026) incrementan

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COMUNICACIONES ORALES VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

la susceptibilidad a AR. También apuntan a la existencia de una inter-acción entre los genes IL12B e IL23R.

INTERACCIONES GENÉTICAS: MIF COMO FACTOR DE SUS-CEPTIBILIDAD EN ENFERMOS DE ARTRTITIS REUMATOIDE.Perdigones Borderías MN1, Varadñe J1, Núñez C1, Fernández-GutiérrezB2, Jover JA2, Urcelay E1, Martínez A1. 1Unidad de Inmunología Clínica,Hospital Clínico San Carlos, Madrid. 2Departamento de Reumatología, Hos-pital Clínico San Carlos, Madrid.

La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad crónica e inflamato-ria de etiología desconocida que afecta al 1% de la población mundial.El carácter poligénico de esta inmunopatía ha suscitado en el último añovarios estudios de asociación genómica (GWA, genome wide association).Mientras, investigaciones en otros ámbitos como son las interaccionesintergénicas o genético-ambientales se encuentran aún en sus comienzos.En este trabajo analizamos polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs)potencialmente implicados en enfermedades inflamatorias, en busca deinteracciones genéticas involucradas en la susceptibilidad a AR.

Se genotiparon 45 SNPs correspondientes a 17 regiones cromo-sómicas en 528 pacientes con AR y 518 controles sanos españoles. Paradetectar interacciones genéticas evaluamos el desequilibrio de liga-miento (LD) entre loci no ligados con el programa Haploview©.

Se observaron tres interacciones estadísticamente significativas (pMIF se perfila como un potente factor de susceptibilidad en un

determinado grupo de enfermos de AR. Este hecho implica que el efec-to de protección o susceptibilidad de una mutación depende del con-texto o “background” genético de cada individuo.

MAPEO DE LA REGIÓN 3 ' UTR DEL GEN CTLA4 EN ARTRITISREUMATOIDE Y LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO. EscaleraA1, Torres B1, García-Lozano JR1, Abad C1, Fernández O1, Orozco G2,Sánchez E2, Núñez-Roldán A1, Martín J2, González-Escribano MF1.1Servicio de Inmunología. HU Virgen del Rocío. Sevilla. 2Instituto de Para-sitología y Biomedicina "Lopez Neyra". Granada.

Introducción. La respuesta inmunológica mediada por células Testá regulada por una serie de moléculas coestimuladoras y coinhibi-doras que intervienen en la sinapsis inmunológica. Entre los coinhibi-dores de la respuesta T se encuentra la molécula de CTLA4. El genCTLA4 es un candidato para determinar la susceptibilidad a enferme-dades autoinmunes y aunque no se ha determinado completamentela región del gen responsable de la asociación, estudios anteriores denuestro grupo y otros la han situado en la región 3' UTR del mismo.

Objetivo. Acotar la región de susceptibilidad encontrada en laregión 3' UTR del gen CTLA4 en artritis reumatoide (RA) y lupus eri-tematoso sistémico (SLE).

Material y métodos. Se incluyeron 455 pacientes con RA y 459 conSLE que cumplían los criterios de la ACR para ambas enfermedades.El grupo control incluía 463 donantes voluntarios de médula ósea. Segenotiparon 12 SNPs localizados en la región 3' UTR del gen CTLA4que abarcaban una región de 86.367 bp. El genotipado se realizó uti-lizando sondas Taqman. Para el cálculo de haplotipos se utilizó el pro-grama Haploview. La comparación de la distribución de frecuenciasgenotípicas, alélicas y haplotípicas se realizó mediante ?2.

Resultados. Se analizaron 11 de los 12 SNPs incluidos en un prin-cipio, ya que uno de ellos resultó no polimórfico. Estos 11 SNPs pre-

sentaban una distribución de frecuencias del alelo minoritario que osci-laba entre el 14 y el 49% en controles. Varios SNPs resultaron asocia-dos en una o ambas patologías. Se detectó un haplotipo asociado conambas patologías con frecuencias del 24.7% en RA, 28.2% en SLE y18.4% en controles (OR 1.45, 95%CI 1.15-1.83 para RA y OR 1.74, 95%CI 1.38-2.20 para SLE). La región de asociación se localiza en las pri-meras 33 Kb rastreadas y se detectó un SNP marcador que sólo seencuentra en el haplotipo de riesgo.

Conclusión. El presente estudio confirma asociación entre la región3' UTR del gen CTLA y la susceptibilidad a padecer RA y SLE.

MAPEO DEL GEN TIM1 EN ARTRITIS REUMATOIDE Y LUPUSERITEMATOSO SISTÉMICO. Abad C1, Torres B1, García-Lozano JR1,Escalera A1, Fernández O1, Sánchez E2, Orozco G2, Núñez-Roldán A1,Martín J2, González-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunología. HU Vir-gen del Rocío. Sevilla. 2Instituto de Parasitología y Biomedicina "López-Ney-ra". Granada.

Introducción. La respuesta inmunológica mediada por células Testá regulada por una serie de moléculas coestimuladoras y coinhibi-doras que intervienen en la sinapsis inmunológica. TIM1 es una molé-cula coestimuladora que influencia la diferenciación de las células T yla activación dependiente de TCR y puede estar involucrada en dife-rentes fases del desarrollo de las enfermedades autoinmunes.

Objetivo. Mapear el gen TIM1 para determinar la existencia deposibles regiones de susceptibilidad en artritis reumatoide (RA) y lupuseritematoso sistémico (SLE).

Material y métodos. Se incluyeron 289 pacientes con RA y 398con SLE que cumplían los criterios de la ACR para ambas enferme-dades. El grupo control incluía 371 donantes voluntarios de médu-la ósea. Se genotiparon 6 SNPs que abarcaban una región de 22.000bp. El genotipado se realizó utilizando sondas Taqman. La compara-ción de la distribución de frecuencias genotípicas y alélicas se reali-zó mediante ?2.

Resultados. Los 6 SNPs incluidos resultaron polimórficos con unadistribución de frecuencias del alelo minoritario que oscilaba entre el2 y el 37% en controles. Se detectó un SNP (A/T) asociado a ambaspatologías, si bien, el sentido de la asociación sería contrario en RA ySLE. En RA la asociación se ajustaría a un modelo recesivo, en el quelos homocigotos AA fueron mas frecuentes en RA (14.9%) que en SLE(5.6%) y controles (9.2%, p=0.02, OR=1.73 95%CI 1.05-2.82); mientrasque en SLE se encontró elevada la frecuencia del alelo T (73%) compa-rado con RA (67%) y controles (68%, p=0.03, OR=1.27, 95%CI 1.01-1.59).

Conclusión. El presente estudio sugiere asociación entre el genTIM1 y la susceptibilidad a padecer RA y SLE.

ASOCIACIÓN ENTRE EL HLA Y LOS NIVELES DE ANTICUER-POS ANTI PÉPTIDOS CITRULINADOS CÍCLICOS Y DE FACTORREUMATOIDE EN PACIENTES CON ARTRITIS DE RECIENTECOMIENZO. Cabezón Sánchez A1, Ramiro Latienda S1, Cobo IbáñezT1, Orozco G2, Balsa Criado A1, San José Valiente B1, Martín IbáñezJ2, López-Nevot MA3, Pascual-Salcedo Pascual D1. 1Hospital Universi-tario La Paz de Madrid. 2Hospital Virgen de las Nieves de Granada. 3Institu-to de Parasitología y Biomedicina López Neyra, CSIC, Granada.

Introducción. La producción de anticuerpos anti péptidos citruli-nados (ac anti-CCP) se asocia con la presencia de los alelos HLA DRB1

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INMUNOLOGÍA COMUNICACIONES ORALES

con el epítopo compartido (EC) y con la artritis reumatoide (AR). ElHLA DR3 se asocia con la AR seronegativa para Factor Reumatoide(FR) y los alelos HLA DRB1 que codifican la secuencia DERAA pro-tegen del desarrollo de AR.

Pacientes y Métodos. En pacientes de una consulta de artritis dereciente comienzo se estudió la presencia de alelos HLA DRB1 con elEC, el HLA DR3 y alelos que codifican la secuencia DERAA. En el sue-ro de estos pacientes se cuantificaron los ac anti-CCP y FR. Las com-paraciones estadísticas se realizaron mediante los test de Kruskal-Wallisy U de Mann-Whitney con la corrección de Bonferroni.

Resultados. De los 322 pacientes incluidos en el estudio, un 71,4%fueron diagnosticados de AR y un 28,6% de otras artropatías. El FR ylos ac anti-CCP fueron positivos respectivamente en el 72,6% y 62,3%de los pacientes con AR y en el 9,2% y 3,5% de pacientes con otras artro-patías. Se encontraron diferencias en el título de ac anti-CCP y de FRsegún el número de alelos con el EC, obteniendo los niveles más bajosen los pacientes que no tenían ningún alelo con el EC (p

No observamos diferencias en la producción de ac anti-CCP yFR según el alelo HLA DRB1 con el EC aunque sí se encontró un efec-to de inhibición de la producción de ac anti CCP de los alelos que codi-fican la secuencia DERAA o del HLA DR3, sobre el efecto producidopor el EC (p

Conclusión. La presencia del EC está asociada con la producciónde ac anti-CCP y con la magnitud de esta producción. Observamos unefecto inhibitorio de la producción de ac anti-CCP cuando el alelo HLADR3 o los alelos que codifican la secuencia DERAA están presentesjunto a otro alelo con el EC.

EFFECTS OF DISEASE MODIFYING DRUGS IN THE DISTRIBU-TION AND MIGRATORY PROPERTIES OF PERIPHERAL BLO-OD MONOCYTES IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS.Chara L1, Chevarría J1, Díaz D1, Sánchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prie-to A1, Turrión A2, León MJ2, Álvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociadaUAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alca-lá, Alcalá de Henares, Madrid, España. 2Servicio de Enfermedades del Siste-ma Inmune, Hospital Universidario Príncipe de Asturias, Alcalá de Hena-res, Madrid, España.

Background. Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic inflamma-tory disease characterized by a massive synovial infiltration oflymphocytes and macrophages. Functionally altered blood monocy-tes are associated with joint inflammation and higher disease acti-vity. Disease-modifying anti-rheumatic drugs (DMARDs) have beenshown to reduce disease activity with excellent clinical results. OBJEC-TIVES: To determine the effect of traditional DMARDS and anti-TNFaagents in the distribution of the different peripheral blood monocy-tes from RA patients compared with healthy controls, and to relatethat subset distribution with their migratory properties and diseaseactivity.

Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 46 rheuma-toid arthritis patients and 15 healthy controls were purified and cha-racterized in a FACSCalibur cytometer using fluorochrome-labeledmonoclonal antibodies to label CD14, CD16, CD62L and CX3CR1antigens. The DAS28 score was calculated in each patient in order todetermine the disease activity (active disease was considered whenDAS28> 3.2). Comparisons between patients and healthy controlswere carried out using the Student`s T test and considered signifi-cant when p<0.05.

Results. Treated and untreated non active RA patients showed asignificant decrease in the percentage of classical CD14+highCD16-monocytes respect to healthy controls without relationship with dise-ase activity. On the other hand we found a significant increase in theinflammatory CD14+lowCD16+ monocytes in active RA patients tre-ated with anti-TNFa agents with respect to healthy controls and untre-ated and treated with methotrexate RA patients. We did not find dif-ferences in non active disease RA patients. Inflammatory monocytesshowed a significant decrease in the expression of CX3CR1 (Fractalki-ne) in non active untreated patients compared with healthy controls.The Treatment with anti-TNFa agents normalized this altered fractal-kine expression.

Conclusions: There is an altered distribution of the differentmonocytic cell subsets in peripheral blood of RA patients that is cha-racterized by a decrease in the “classical” monocytes and an increaseof inflammatory monocytes, as well as changes in their migratory pro-perties. This phenomenon is related with the disease activity and thepatient treatment.

POLIMORFISMOS DE Fc RIIA (CD32A) Y Fc RIII A (CD16A) ENLA RESPUESTA A LA TERAPIA CON INFLIXIMAB EN PACIEN-TES CON ARTRITIS REUMATOIDE. Suárez B1, Cañete JD2, Hernández MV, Rego I3, Sanmartí R2, Pinto JA3, Blanco FJ3, LozanoF1. 1Servicio de Inmunología, Hospital Clínico de Barcelona. IDIBAPS,Facultad de Medicina, Univ. de Barcelona. 2Servicio de Reumatología, Hospital Clínico de Barcelona. IDIBAPS, Facultad de Medicina, Univ. de Barcelona. 3Servicio de Reumatología, Hospital Juan Canalejo. A Coruña.

El polimorfismo de los receptores of Fc gamma (Fc R) influye ensu afinidad por las inmunoglobulinas (Ig) y ello puede afectar la efi-cacia de las terapias basadas en Ig. En el presente trabajo analizamosla relación entre polimorfismos funcionales de los genes Fc R IIA(CD32A) y IIIA (CD16A) y la respuesta a la terapia con infliximab (anti-TNF ) en pacientes con artritis reumatoide (RA). Para ello se analiza-ron 91 pacientes (89% mujeres; 76.7% Factor Reumatoide positivo). Lospacientes fueron evaluados a las semanas 0, 6 y 30 usando los criteriosde respuesta ACR y EULAR. El genotipado de los polimorfismos deCD16A (F158V) y CD32A (R131H) se realizó por PCR-SSP y secuen-ciación, respectivamente. Se aplicaron los test Chi-square and Fisher'sexact test para mostrar diferencias en las variables analizadas. Los indi-viduos homo y heterocigotos para las variantes de alta afinidad de losdos Fc R analizados se agruparon en una sola categoría para realizarcomparaciones más robustas con los individuos homocigotos para ale-los de baja afinidad.

Se encontraron diferencias estadísticamente significativas alas 6 semanas en el ACR50 en función del genotipo CD16A (baja afi-nidad o F/F: 24.1%; alta afinidad o F/V-V/V:2.2%; p =0.003) y a las30 semanas en el ACR20 en función del genotipo CD32A (baja afi-nidad o RR: 60 %; alta afinidad o R/H-H/H: 33.3%;p= 0.035). Lareducción de los niveles de proteína C reactiva durante la terapiafue siempre mayor en los portadores de variantes de baja afinidad(CD16A-F/F; CD32A-R/R). En conclusión, la respuesta al tratamien-to anti-TNF (infliximab) en pacientes con RA está influenciada porlos genotipos tanto de CD16A como de CD32A y este efecto se obser-va a diferentes tiempos del seguimiento (6 y 30 semanas, respecti-vamente) reflejando la naturaleza dinámica de la interación Fc Rversus Ig.

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SESIÓN 2: INMUNOGENÉTICA

Moderadores: Dra. Estela Paz Artal (Madrid), Dr. Jordi Yagüe (Barcelona)

IDENTIFICACIÓN Y SECUENCIACIÓN COMPLETA DE 17 NUE-VOS ALELOS HLA DE CLASE. Balas Pérez A1, Sánchez-Gordo F2,Sánchez-García F3, Bustamante L1, García-Sánchez F1, Vicario JL1.1Centro de Transfusión de Madrid. 2Centro de Transfusión de Málaga. 3Hos-pital Doctor Negrin. Gran Canaria.

Diecisiete nuevos alelos HLA clase I fueron detectados y poste-riormente completamente caracterizados mediante secuenciación:A*020115, *0281, *0289, *9224, *0326, *0339, *2631, *68020103, *6836,B*0829, *3579, *4077, *9523, Cw*0220, *030203, *0736, *0742.

La detección de nuevas variantes alélicas se realizó en el tipaje deintermedia resolución mediante PCR-SSO y tecnología Luminex debi-do a patrones anómalos de hibridación así como en el tipaje median-te secuenciación de los exones 2/3/4. Las muestras portadoras de losnuevos alelos fueron unidades de cordón umbilical, pacientes y donan-tes no emparentados. La detección de nuevos polimorfismo en los exo-nes 2/3/4 se confirmo posteriormente mediante clonaje y secuencia-ción de las regiones codificantes restantes.

La tabla compara las nuevas secuencias con las secuencias de losalelos más homólogos, así como la étnia de los individuos portado-res y el haplotipo que contiene a los nuevos alelos. Los residuos ennegrita corresponden con nuevos residuos polimórficos.

Nuevo alelo Alelo más Cambios de Cambios Raza Haplotipo/Tipaje HLA I homólogo codón aminoacid.

A*020115 A*02010101 245GCG>GCC Cau.Español A*020115-B*5002-Cw*060201A*0281 A*9224 265GGT>GTT Gly>Val Cauc.Aleman A*0281-B*440201-Cw*050101A*0289 A*02010101 192CAC>CAA His>Gln Cauc.Español A*0289-B*3701-Cw*0602A*9224 A*0281 265GTT>GGT Val>Gly Cauc.Español A*9224,*23 ; B*40,*56A*0326 A*03010101 268AAG>GAG Lys>Glu Cauc.Español A*0326,*24020101;B*3701,

B*400201; Cw*04010101,*06020101A*0339 A*03010101 102GAG>TAC Asp>Tyr Cauc.Español A*0339-Cw*070101-B*080101A*2631 A*260101 62CGG>CCG Arg>Pro Cauc.Español A*2631-B*440201-Cw*050101A*68020103 A*68020101 Deleción ocho Cauc.Español A*01,*68020103;B*530101,*5601

nucleotidos en Cw*010201,*04010101el intron 2

A*6836 A*680101 76GTG>GAG Val>Glu Ecuatoriano A*02,*6836; B*40,*51; Cw*06,*1577GAG>AAG Asp>Asn79GGG>CGG Gly>Arg80ACC>ATC Leu>Ala81CTG>GCG82CGC>CTC Arg>Leu83GGC>CGC Gly>Arg

B*0829 B*080101 82CGC>CAC Arg>His Desconocida A*01,A*-;B*0820,*1402B*3579 B*3543 211GCG>GAG Ala>Gly Ecuatoriano A*24020101-B*3579-Cw*010201B*4077 B*401401 116TAC>TTC Tyr>Phe Cauc.Español A*01,*02; B*08,*4077

131AGC>CGC Arg>Ser147TTG>TGG W>Leu

B*9523 B*1591 167TGG>TCG Ser>Trp Cauc.Español No definidoB*1503 152GAG>GTG Glu>Val

Cw*0220 Cw*020202 169CGC>CAC Arg>His Cauc. Español A*3301-B*440301-Cw*0220Cw*030203 Cw*030201 271ACC>ACT Desconocida A*020104-B*5801-Cw*030203Cw*0736 Cw*070101 17CGC>CAC Arg>His Cauc.Español A*020101-B*180101-Cw*0736Cw*0742 Cw*070201 113TAT>TTT Tyr>Phe Cau. Hungaro B*070201-Cw*0742

Se definieron dos nuevas variantes caracterizadas por mutacionesno productivas, A*020115 y Cw*030203. Asimismo se han definido dosvariantes de A*02, *0281 y *9224 que presentan un epítopo Bw4 equi-valente al presente en alelos A*25 y A*32. De forma similar, se ha carac-terizado y detectado en dos muestras procedentes de donantes ecua-torianos un nuevo alelo, A*6836, que presenta el epítopo Bw4 pre-sente en alelos A*23 y A*24.

El alelo A*68020103 presenta variabilidad intrónica debido a unadeleción de ocho nucleótidos en el inicio del intron 2. Esta variaciónno afecta, sin embargo, a su expresión en superficie.

ESTUDIO DE ALGUNOS ALELOS HLA EN ENFERMOS DE ALZ-HEIMER. Leon Moya V1, Cacho Gutierrez J2, Chong Espino Y2. 1ServAnalisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Serv. Neurologia.Hospital Universitario de Salamanca.

Introducción. Los alelos HLA relacionados con la susceptibilidadó resistencia a ciertas enfermedades, hacen que su presencia modulela presentación antigénica, inhibiendo ó activando la respuesta inmu-ne frente a exo ó auto antígenos. Hemos aplicado el análisis individua-lizado de los alelo HLA A3, B7, DR2 y DR4, mediante PCR, habiendoselecionado estos alelos por su relación con ciertas enfermedades autoin-munes.

Material y Métodos. 62 pacientes de Alzheimer,EA, de acuerdocon los criterios de NINCDS-ADRDA, y 84 sujetos sanos como gru-po control, GC, fueron estudiados. El ADN fue extraído mediante elkit DNA Direct II (Dynal), fundamentado en una resina con núcleometálico que permite separar el complejo ADN-resina mediante unimán.

Los primers para el estudio del gen HLAA3 : For 5’ AgC gAC gCCgCg AgC CA 3’, Rev 5’ CAC TCC Acg CAC gTg CCA 3’ ; para HLAB7: For 5` ggA gTA TTg ggA CCg gAA C 3`, Rev 5´ TAC Cag CgC gCTCCA gCT 3’; para DR2 : For 5´ TCC TgT ggC AgC CTA AgA g 3´, Rev5´ CgC TgC ACT gTg AAg CTC TC 3´ y DR4: For 5´gTT TCT Tgg AgCAgg TTA AAC A 3´, Rev 5´ CgC TgC ACT gTg AAG CTC TC 3´.

Las condiciones de PCR fueron: 95º, 5 min, 1 ciclo; 95º 30 seg, 53º30 s, 72º 30s 34 ciclos, y 72º 10 min. Los amplicones fueron visualiza-dos en electroforesis de agarosa al 2%

Resultados. La frecuencia génica de alelo HLA A3 fue 21,3 EA (13,6% en GC), el alelo HLA B7 se un 18,3 EA ( 12,5 % en GC) el aleloDR 2 17,6 %EA (15,5 % en el GC), El DR4 32,4% EA ( 15,6% GC).

Las diferencian estatisticas entre las frecuencias génicas , Chi Cua-drado, entre enfermos y controles fueron significativas , p> 0.001, en todoslos alelos. Poniendose de manifiesto la posbilidad de emplearl como mar-cadoes genicos los alelos HLA estudiados en enfermos de Alzheimer.

EL ORIGEN DE LOS HABITANTES DE LAS ISLAS ALEUTIANAS(ESTRECHO DE BERING) SEGÚN LOS GENES HLA. Moscoso J1,Vicario JL2, Crawford M3, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Ferri A1, Abd-El-Fatah-Khalil S4, Millan P1, Arnaiz-Villena A1. 1Dept. Inmunología,Universidad Complutense, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid,Madrid. 2Dept. Inmunología, Centro de Transfusión de la Comunidad deMadrid, Madrid. 3Dept. Anthropology, University of Kansas, Lawrence, USA.4Dept. Hematología, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid,Madrid.

Los Aleutianos son una población que vive en las Islas Aleutianassituadas entre las actuales Alaska y Rusia, en la zona Sur del Estre-cho de Bering. Su lengua no pertenece a ninguna familia conocida,incluidas las lenguas Amerindias, Na-Dene (Atabascos), Eskimales oSiberianas.

Se han identificado los alelos de los genes HLA-A, -B, -C y -DRB1mediante técnicas estándar de alta resolución en 58 individuos Aleu-tianos no emparentados.

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Los resultados se compararon con poblaciones de todo el mundo,que incluían Amerindios, Eskimos, NaDene (Atabascos), Europeos,Asiáticos, Africanos y Australianos; en total, se analizaron 12.298 cro-mosomas.

No se encontraron los alelos HLA característicos de Amerindios.Los cálculos realizados usando distancias genéticas, dendrogramasNeighbour-Joining, análisis de correspondencia y haplotipos HLAextendidos muestran que genéticamente, los Aleutianos están estre-chamente relacionados con los actuales Europeos Finlandeses y Lapo-nes, que emigraron hacia el Oeste desde los montes Altai de Siberiahasta los lugares que actualmente ocupan en Escandinavia. Se dis-cute la hipótesis de que los Aleutianos representen una migraciónhacia el Este de las poblaciones originarias de los montes Altai Sibe-rianos.

LA IgD DE EUBLEPHARIS MACULARIUS. UN GEN GENERAMÚLTIPLES ANTICUERPOS. Magadán Mompó S1, Sánchez EspinelC2, Gambón-Deza F2. 1Hospital Meixoeiro. 2Instituto Superior de Saúde doAlto Ave.

Al igual que la IgM, la IgD se expresa en la membrana de los lin-focitos B maduros como receptor para el antígeno. La ausencia de IgDen aves y su descripción en peces óseos contribuyó a la confusión rela-tiva a sus orígenes evolutivos. Recientes estudios han establecido lapresencia de IgD en el anfibio Xenopus tropicalis, siendo esencial elestudio genético en reptiles para conocer mejor el proceso evolutivode la IgD en vertebrados. En trabajos realizados por nuestro grupo des-cribimos en el reptil Eublepharis macularius (Gecko leopardo) el genpara la IgD. Está constituído por 11 dominios Ig y un dominio TM. Enel presente estudio describimos diferentes ARNs mensajeros genera-dos a partir del gen de la IgD, indicando la presencia de varias formassecretadas y de membrana. El gran número de dominios Ig y la diver-sidad de ARNs mensajeros sugiere una actividad funcional de la IgDrelevante.

Metodología. Se obtuvo ARNm a partir de sangre periférica, bazoy tracto digestivo. Se realizaron RT-PCR con primers específicos paradiferentes dominios variables (V) y constantes (C) de inmunoglobu-lina y TM. Los amplificados obtenidos fueron clonados utilizando elvector pGEM®-T y/o secuenciados. Las secuencias obtenidas fueronanalizadas utilizando el software DNAstar.

Resultados. El análisis de las secuencias de ADNc obtenidasmediante RT-PCR y/o posterior clonación, indican la expresión demúltiples ARNm generados, a través de splacing, a partir del gen dela IgD. A su vez, los resultados indican la producción de ARNm quecodifica para dos formas de IgD secretada. Ambas presentan tallo secre-tor en el dominio CH11, el cual tiene un menor número de aminoáci-dos que el descrito en la IgM e IgA , y no presenta cisteínas, sugirien-do que no polimeriza en formas múltiples. Con respecto a la formatransmembrana, hemos descrito al menos 4 formas de ARN mensaje-ro, siendo los dominios CH4, CH9 y CH11, los que realizan splicingcon el exón TM.

Conclusiones. Un único gen de anticuerpo IgD puede generarnumerosos anticuerpos con capacidades funcionales diferentes, loque debe conferir ventajas evolutivas que condicionan la perma-nencia de la IgD en los reptiles. Estos mismos resultados podríanobtenerse en otras especies, como peces y anfibios, en los que seencuentran Igs con un gran número de dominios, como la IgW eIgY.

DIVERSIDAD ALELICA DEl gen MICA Y HAPLOTIPOS mica/hla-b EN UNA POBLACIÓN DE LA REGION DE MURCIA. Lucas D,Campillo JA, López M, Salgado G, Botella C, López-Hernández R, San-chís MJ, Alemany JM, Minguela A, Álvarez-López MR, Muro M. Ser-vicio de Inmunología, Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia,CIBERehd, Spain.

MICA esta localizado a 46 kb centromérico a HLA-B. Su estructu-ra genómica es similar a los genes HLA de clase I, aunque no se aso-cia a β2-microglobulina. Los exones 2, 3 y 4 del gen codifican los 3dominios extracelulares (α1, α2 y α3, respectivamente), y el exón 5codifica el dominio transmembrana. MICA es muy polimórfico y sehan descrito hasta ahora 63 alelos. El significado funcional de estospolimorfismos no se conoce aún, aunque cambios en la secuencia ami-noacídica de MICA influencian la afinidad de la interacción conNKG2D, su ligando en la células NK, Tγδ y T CD8. Así, la presencia demetionina o valina en el codón 129 del dominio α2 confiere fuerte odébil afinidad, respectivamente.

Nuestro propósito fue establecer la diversidad alélica de MICA ysu ligamiento a HLA-B (gen HLA próximo) en nuestra población. DNAfue extraído con el extractor Maxwell16 (Promega, WI). Genotipaje deMICA y HLA-B se realizo por PCR-SSO y PCR-SSP alelo específica.Las frecuencias génicas y haplotípicas se analizaron mediante el pro-grama Arlequin (Universidad de Ginebra).

El alelo MICA*008 fue el más frecuente (25.3%), seguido porMICA*002 (15.6%), MICA*004 (14.9%), MICA*001 (7.8%), MICA*009y MICA*016 (7.2%), y MICA*010 (4.6%). Los alelos menos representa-dos fueron MICA*005, MICA*007, MICA*017, MICA*023, MICA*030,MICA*033, MICA*046, MICA*050 y MICA*052.

En el análisis de haplotipos, el más frecuentemente observado esMICA*008-B*07 (9.4%), seguido de MICA*004-B*44 y MICA*001-B*18(8.1%), MICA*002-B*35 (6.7%), MICA*008-B*44 y MICA*004-B*49 (4.7%)y, MICA*008-B*08 y MICA*002-B*38 (4.1%). Combinaciones no vis-tas ocasionalmente y no reportadas en población española serianMICA*010-B*1501, MICA*015-B*45, MICA*008-B*13 y MICA*008-B*4001.

En conclusión, la diversidad alélica de nuestra población es simi-lar a otras poblaciones ibéricas, aunque encontramos una serie de ale-los poco frecuentes, así como determinadas asociaciones haplotípi-cas no descritas en otras poblaciones de la Península Ibérica.

EFECTO DE LOS RECEPTORES KIR EN LA RESPUESTA AL TRA-TAMIENTO COMBINADO EN PACIENTES CON HEPATITISCRÓNICA C. Vidal-Castiñeira JR1, López-Vázquez A1, Díaz-Peña R1,Pruneda L1, Alonso-Árias R1, Pérez R2, Rodrigo L2, López-Larrea C1.1Servicio de Inmunología, Unidad de Histocompatibilidad y Transplantes,Hospital Universitario Central de Asturias, Oviedo. 2Servicio de Digestivo,Hospital Universitario Central de Asturias, Oviedo.

Los receptores KIR (killer immunoglobulin-like receptors) estánrelacionados con la activación e inhibición de las células NK, y pue-den jugar un papel muy importante en la respuesta innata frente ainfecciones virales, tales como el HCV. El propósito de este estudio erainvestigar la posible implicación de los receptores KIR en la respues-ta al tratamiento con interferon pegilado (Peg-IFN-α-2b) y ribavirina.

Para ello se seleccionó un grupo de 186 pacientes diagnosticadosde infección por HCV crónica. Todos los pacientes recibieron trata-miento combinado a lo largo de 6-12 meses y fueron clasificados en

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función de su respuesta al finalizar el periodo de seguimiento post-tratamiento: 77 fueron no respondedores (NR) y 109 alcanzaron unarespuesta viral sostenida (RVS). Todos fueron tipados para HLA-B,HLA-Cw y KIR mediante PCR-SSOr por la tecnología Luminex.

Se observó que la presencia KIR2DL3 estaba significativamenteincrementada en pacientes RVS (61.93% vs. 45.46%, p= 0.001). Ademáseste receptor en homocigosis también se encontraba aumentado en estegrupo (p=0.05). Por otro lado, la frecuencia de KIR2DL2 era mayor enpacientes NR (54.54% vs. 38.07%, p=0.001, OR= 1.95). Este receptor enhomocigosis también se encontraba significativamente aumentado enNR (p=0.005, OR=2.52). También se analizaron las distintas interaccio-nes de estos receptores con sus ligandos HLA. Se observó que el geno-tipo KIR2DL2/KIR2DL2-HLA-C1C2 estaba aumentado en el grupoNR (p=0.007, OR=3.15) frente al genotipo KIR2DL3/KIR2DL3-HLA-C1C1 que se encontraba aumentado en el grupo RVS (p= 0.028).

Como conclusión hemos observado que la mayoría de los pacien-tes con el genotipo KIR2DL3/KIR2DL3-HLA-C1C1 responden ade-cuadamente al tratamiento antiviral. Este genotipo “buen responde-dor” parece facilitar la consecución de una respuesta viral sostenida.En cambio, la mayoría de los pacientes con el genotipoKIR2DL2/KIR2DL2-HLA-C1C2 no responden adecuadamente al tra-tamiento y no pueden eliminar el RNA viral.

ANÁLISIS DEL POLIMORFISMO ALÉLICO DE KIR3DL1 Y SUASOCIACIÓN CON ESPONDILITIS ANQUILOSANTE EN LAPOBLACIÓN ESPAÑOLA. Díaz Peña R, Blanco Gelaz MA, VidalCastiñeira JR, López Vázquez A, Suárez Álvarez B, López Larrea C.Hospital Universitario Central de Asturias.

Los diferentes loci de receptores KIRs (Killer cell immunoglobu-lin-like receptors) y antígenos leucocitarios humanos (HLA) son alta-mente polimórficos, y algunas moléculas HLA de clase I se unen a estosreceptores KIRs. En el presente estudio se ha realizado un análisisdel polimorfismo alélico del loci KIR3DL1 y se ha examinado si la com-binación de los diferentes subtipos junto con genotipos HLA-B27 estáasociado con susceptibilidad a desarrollar espondilitis anquilosante(EA). Para llevar a cabo el estudio, fue seleccionada una población espa-ñola HLA-B27 positiva (56 pacientes con EA y 55 controles sanos).Nuestros resultados mostraron que la diferente distribución deKIR3DL1 en la población española se debe principalmente al descen-so de los subtipos KIR3DL1*001 y KIR3DL1*004 en pacientes EA (15.6%vs. 4.5%, p<0.05 y 31.8% vs. 15.2%, pc<0.05; respectivamente). Puestoque existen indicios que sugieren que la fuerza de la señal inhibitoriagenerada por el reconocimiento de HLA-B Bw4 por KIR3DL1 tambiénvaría dependiendo del alelo presente, también se analizó si el ligandonatural de KIR3DL1 podría estar involucrado en la susceptibilidad adesarrollar EA junto con algún subtipo o algún grupo de subtipos, cla-sificados éstos en alelos con alta expresión en membrana, con bajaexpresión y con ausencia de expresión (KIR3DL1*004). Por una par te,se observó que no existían pacientes EA que tuviesen formas homo-cigóticas 3DL1/3DL1 que se expresen en membrana junto con Bw4I80,mientras que su presencia en controles era significativamente mayor(pc<0.005). Además, también se observó un aumento significativo dela frecuencia de KIR3DL1*004 junto con Bw4I80 en pacientes EA(pc<0.05). De esta manera, la susceptibilidad a desarrollar EA podríaestar determinada por un balance de activación e inhibición compues-to de genotipos KIR-HLA, en el que la interacción 3DL1-Bw4I80 pare-ce ser decisiva.

REGULACIÓN EPIGENETICA DEL MHC EN LINEAS EMBRIO-NARIAS HUMANAS. Lopez-Larrea C, Bravo-Mendoza C, Suarez-Alvarez B. Hospital Central de Asturias.

Las células embrionarias humanas (hESC) son capaces de diferen-ciarse a la mayoria de tipos celulares y cultivarse durante largos perio-dos de tiempo. Estas caracteristicas las hacen ser una fuente importan-te de células capaces de ser utilizadas para el futuro del trasplante y lamedicina regenerativa. Uno de los problemas principales es el recono-cimiento alogénico del injerto y la activación del sistema inmune con-duciendo al rechazo del órgano transplantado.

Las hESC expresan niveles muy bajos de MHC-I, pudiendo incre-mentarse pero núnca alcanzando los niveles detectados en una célu-las somáticas. No existe expresión de MHC-II y HLA-G. Los mecanis-mos epigeneticos (metilación del ADN y modificación de histonas) sonclaves en la regulación de genes en eucariotas, implicando la activa-ción o silenciamientos de los mismos. Las hESC presentan patrones demetilación y acetilación únicos que afectan a la regulación de genesimplicados en su pluripotencialidad y diferenciación.

Todos esto nos ha llevado a estudiar la expresión de MHC en lalínea de hESC Shef-1 (Sheffield, UK) en diversos estadios, así como lasmoléculas implicadas en la maquinaria de procesamiento antigénico,factores de transcripción y los mecanismos epigeneticos que podrianregular su expresión.

Hemos observado una deficiencia en los niveles de expresión delMHC-I en hESC como consecuencia de la disminución de expresiónen los genes implicados en la maquinaria de procesamiento antigéni-co (Tapasina, TAP y Erp57), además de la ausencia de expresión deHLA-DR y de los factores de transcripción CIITA y RFX-5. Mediantetécnicas de secuenciación de bisulfito, detectamos hypermetilación enlos genes HLA-DR, CIITA, LMP7 y HLA-G. Adicionalmente, y median-te ensayos de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) se obser-vó que modificaciones especificas en las histonas H3 y H4 participantambien en la regulación de estos genes. Tratamiento de las hESC coninhibidores de deacetilasas de histonas (HDACs), sólo o en combina-ción con agentes desmetilantes del ADN, inducen la reexpresión ensuperficie de las moléculas MHC.

En conclusión, determinamos que la expresión del MHC-I y II enlineas embrionarias humanas puede estar regulada mediante meca-nismos epigenéticos.

SESIÓN 3: INMUNOLOGÍA Y TRASPLANTE

Moderadores: Dr. Joan Milá (Palma de Mallorca),Dr. Alfredo Minguela (Murcia)

FRECUENCIAS ALÉLICAS Y HAPLOTÍPICAS HLA EN PACIEN-TES ESPAÑOLES EN BÚSQUEDA DE DONANTE DE PROGENI-TORES HEMATOPOYÉTICOS. IMPLICACIONES EN LA OBTEN-CIÓN DE DONANTE HLA COMPATIBLE 12/12. Balas Pérez A, Gar-cía-Sánchez F, Bustamante L. Centro de Transfusión de Madrid.

El trasplante de células progenitoras hematopoyéticas de donan-te no emparentado (DNE) es la mejor opción cuando no existe undonante familiar HLA idéntico. Los resultados para este tipo de tras-plante han demostrado ser mejores cuando existe identidad a nivel alé-lico para los genes HLA-A, -B, -C, -DRB1 y –DQB1.

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A pesar de la expansión de los registros de donantes, la identidada nivel alélico sigue siendo un obstáculo debido a la gran diversidadde alelos y haplotipos HLA. Pacientes con variantes HLA comunessobre haplotipos conservados presentarían mas ventaja a la hora deencontrar donantes con compatibilidad 12/12 (HLA-A, -B, -C, -DRB1-DRB3/4/5, -DQB1), que aquellos con alelos raros o haplotipos infre-cuentes. En éstos últimos, aproximaciones alternativas han demostra-do ser mejores que el mantenimiento del paciente en búsqueda duran-te un periodo de tiempo prolongado.

Los registros de donantes no emparentado están compuestos pordonantes tipados para HLA-A, -B, -DRB1 a resolución baja/media. Esimprescindible por tanto el conocimientos de las frecuencias de cadauna de las poblaciones con el fin de evaluar en cada caso la estrate-gia de búsqueda a seguir.

En el presente estudio incluimos 253 pacientes españoles cauca-soides en búsqueda de DNE entre los años 1992-2008 de los que se tie-nen datos de segregación familiar con el fin de conocer la distribuciónhaplotípica de clase I o clase I y II. Todos ellos fueron tipados paralos genes HLA-A, -B, -C, -DRB1, -DRB3/4/5, y –DQB1 mediantesecuenciación. A partir de este grupo de pacientes se obtuvieron 506haplotipos HLA de clase I y 436 incluyendo también los genes HLAde clase II.

Para este grupo de pacientes se recibió, y tipo al mismo nivel deresolución, un total de 493 DNE. De los 253 pacientes en búsqueda, 172recibieron al menos un donante, obteniéndose en 81 casos al menos undonante compatible 12/12.

El análisis de frecuencias alélicas de clase I demostró la presen-cia en población española de 33, 57 y 31 alelos para los genes HLA-A, -B y –C, lo cual representa un 5,5%, 5,8% y 9,1% de las variantes des-critas para estos tres genes respectivamente. Asimismo, entre 6-8 ale-los representan para los tres genes de clase I, entre un 55% y un 75%del total de alelos encontrados. Esta limitada variabilidad contrasta sinembargo con los datos obtenidos de frecuencias alélicas, ya que apa-recen un total de 245 haplotipos de clase I distintos, de los cuales 169(69%) aparecen una sola vez. Dieciséis haplotipos de clase I presentanuna frecuencia superior al 1%. Cuando se analizan haplotipos comple-tos, únicamente son 11 los que presentan una frecuencia superior al1%.

El análisis de las asociaciones haplotípicas HLA-B-C demostró ladistribución atípica que presenta el antígeno B*510101 pudiéndoseencontrar asociado hasta con 10 diferentes alelos HLA-C.

La comparación de las poblaciones de pacientes que recibie-ron al menos un donante compatible 12/12 y aquellos para los queno se obtuvo ningún donante completamente idéntico demostróque:1. Se encuentra una diferencia significativa en la frecuencia de haplo-

tipos con frecuencia superior al 1% (p<0,0001).2. Existe una diferencia significativa en la frecuencia del alelo B*510101

entre ambas poblaciones (p= 0,004).3. Existe una diferencia significativa en la frecuencia de alelos HLA

con una frecuencia inferior al 1% entre ambas poblaciones(p<0,0001).

4. Se encuentra una mayor frecuencia de asociaciones haplotípicasinfrecuentes B-C y DRB1-DQB1 en la población de pacientes sindonante HLA idéntico.Por lo tanto, considerando todos estos factores asociados al pacien-

te, junto con los datos obtenidos de la búsqueda en el Bone MarrowDornor Worldwide, es posible realizar una predicción sobre la posibi-lidad de obtener un DNE HLA 12/12 idéntico.

PIG CHONDROCYTES TRIGGER A XENOGENEIC CELLULARIMMUNE RESPONSE. Sommaggio R, Máñez R, Costa C. Institut d'In-vestigació Biomédica de Bellvitge (IDIBELL).

Xenotransplantation may be a solution to the shortage of humancells, tissues and organs for transplantation. In particular, transplan-tation of porcine chondrocytes may benefit patients who suffer articu-lar, nasal or other cartilage defects. Cartilage is an avascular tissue withvery low regenerative capacity that is subjected to a not well unders-tood process of xenograft rejection. In this work, we sought to eluci-date the molecular bases of cell-mediated rejection of xenogeneic car-tilage. To this end, we isolated pig costal chondrocytes (PCC) and con-ducted a series of functional studies that included treatment withhuman inflammatory cytokines and xenogeneic cell-based assays. First,we determined by flow cytometry the cell surface expression of SLA-I, SLA-II, VCAM-1, ICAM-1, E-selectin, CD86 and CD40 in resting con-ditions or after treatment with 10 ng/ml TNF-alpha, IL-1-alpha−fnfnorIL-1-beta for 24 hours. Some molecules were not expressed (SLAII,E-selectin), or barely detected (CD40), at any of the conditions assa-yed. On the contrary, TNF-alpha and to a lesser extent IL-1-alpha ledto a marked upregulation of SLA-I, VCAM-1 and ICAM-1 on PCC.CD86, constitutively expressed at moderate levels, was only slightlyelevated by these cytokines. We next studied the interaction of thehuman monoblastic cell line U937 with untreated or cytokine-activa-ted porcine chondrocytes in an adhesion assay testing variouseffector:target ratios. U937 demonstrated significant adherence to thePCC in resting and cytokine-stimulated conditions. VCAM-1 playeda role in this process, as demonstrated with a specific blocking anti-body. Finally, coculture of PCC with Jurkat for various days led alsoto an increase in IL-2 secretion. In summary, porcine chondrocytes res-pond to human inflammatory cytokines and trigger a xenogeneic cellu-lar immune response.

AFFINITY STUDIES OF PORCINE TUMOR NECROSIS FACTORRECEPTOR 2 TO ELUCIDATE ITS ROLE IN XENOGRAFT REJEC-TION. Bosch L, Uribe-Herranz M, Costa C. Institut d’Investigació Bio-mèdica de Bellvitge (IDIBELL)

Clinical xenotransplantation is precluded by a strong immuneresponse in which innate immunity plays a role. In particular, tumornecrosis factor (TNF) produced by NK cells and macrophages con-tributes to xenograft rejection by promoting endothelial cell activa-tion and recruitment of inflammatory cells. To elucidate its molecu-lar mechanism, we previously cloned the cDNA of porcine TNF-Receptor 2 (pTNFR2) and obtained two isoforms. The longest onecomprised the 4 TNFR cysteine-rich domains conserved between spe-cies, whereas the short variant lacked the sequence corresponding toexon 4 and one of the cysteine-rich repeats. We have now assessedtheir affinity for TNF. We produced two recombinant proteins con-taining the extracellular domain of each pTNFR2 variant fused toGST at the carboxyterminal end and examined their ability to bindpig and human TNF-alpha (pTNF and hTNF) by surface plasmonresonance. In one set of experiments, the GST-fusion proteins wereimmobilized directly on a CM5 chip and the pig and human TNFwere injected at multiple concentrations. It generated very robustresults and calculated a comparable KD for pTNFR2 binding to eitherpTNF or hTNF (2,5E-9 and 2,4E-9 M, respectively) with a 1:1 bindingfit. The dissociation was slightly faster for hTNF. In this experiment,

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we also obtained the KD for hTNFR2 binding hTNF (4,2E-9 M) andpTNF (9,9E-9 M) for comparison. In a second series, we orientatedthe receptor with an anti-GST antibody bound to the chip and obtai-ned one-order-of-magnitude higher affinities overall but with lowerreproducibility. In this setting, the pTNFR2 variant lacking exon 4showed no binding to hTNF and very little to pTNF. In conclusion,pTNFR2 binds hTNF with high affinity, whereas the shorter isoformdoes not. We continue to work on further elucidating the potentialbiological function of these variants, which may participate in theprocess of xenograft rejection.

CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DE LOS RECEPTORES ILT-3(INMUNOGLOBULIN LIKE TRANSCIPT-3) E ILT-4 EN RECEPTO-RES DE TRASPLANTE RENAL SEGÚN LA EDAD DEL DONAN-TE Y RECEPTOR. Benito Almazan MJ1, Fernández Fresnedo G2, RuizJC2, Benito A2, San Segundo D1, Alamillo C2, Arias M2, López HoyosM1. 1Servicio de Inmunologia. 2Servicio de Nefrología. Hospital Universita-rio Marqués de Valdecilla.

Entre los nuevos mecanismos tolerogénicos con relevancia en laevolución del trasplante de órganos se ha implicado la generación decélulas dendríticas con fenotipo y función tolerogénica. Este mecanis-mo está muy estudiado en modelos animales pero existen pocas evi-dencias en humanos. Además, es posible que la edad pueda influir enla generación y/o mantenimiento de estas células presentadoras dealoantígenos.

Objetivo. Determinar el fenotipo de las células dendríticas san-guíneas en receptores de trasplante renal a los 12 meses del trasplan-te, con especial atención a las diferencias de edad entre receptor ydonante.

Métodos. Se incluyeron 49 receptores de trasplante renal conse-cutivos de nuestro centro. Se analizó el número de células dendríticasinmaduras y maduras en sangre mediante tinción con anticuerposmonoclonales específicos y citometría de flujo, junto con la expresiónde receptores inhibidores de la función de las células dendríticas (ILT-3, ILT-4). Para el estudio se seleccionaron cuatro grupos de parejasreceptor/donante según la edad avanzada (M: >60 años) o joven (J:

Resultados. A los 6 meses del trasplante se encuentra un aumen-to significativo de la frecuencia de células dendríticas que expresanILT-3 en el grupo DJ/RM respecto a DM/RM. No hay cambios en losreceptores jóvenes donde la expresión es incluso menor que en losreceptores mayores. En cambio, ILT-4 aumenta en las células dendrí-ticas a los 6 meses del trasplante en la combinación DJ/RJ respecto ala DM/RJ pero no hay diferencias en los receptores mayores. Obser-vamos además una correlación significativa entre el número absolu-to de células dendríticas ILT-4+ y las células T reguladorasCD4+CD25high tanto en el momento pre-trasplante (r=0,476; p=0,004)como a los 6 meses post-trasplante (r=0,408; p=0,013) y a los 12 meses(r=0,517, p=0,041).También encontramos correlación significativa deestas células con la subpoblación CD8+CD28- en el momento pre-tras-plante (r=0,540; p=0,001) y a los 12 meses post-trasplante (r=0,609;p=0,012).

Conclusión. El trasplante renal con un injerto joven, tanto en recep-tor mayor como joven, parece inducir más células dendríticas con feno-tipo tolerogénico (definido por la expresión de ILT-3 e ILT-4) que eldonante mayor.

Financiación: FIS, Fundación Mutua Madrileña, Fundación Mar-qués de Valdecilla-IFIMAV.

INFLUENCIA DEL GENOTIPO MBL2 (MANNOSE BINDING LEC-TIN) DE DONANTE Y RECEPTOR EN LA EVOLUCIÓN DELTRASPLANTE HEPÁTICO. Pascal M1, Cervera C2, Suarez B1, Balde-rramo D3, Prieto J3, Fuster F3, Moreno A2, Navasa M3, Lozano F1. 1Ser-vicio Inmunología. 2Servicio Enfermedades Infecciosas. 3Servicio Hepatolo-gía. Hospital Clinic i Provincial de Barcelona.

Introducción. MBL es una colectina sérica de producción hepáti-ca que se fija a la superficie de múltiples patógenos contribuyendo asu eliminación por opsonofagocitosis y/o lisis mediada por comple-mento. Sus niveles plasmáticos están determinados por polimorfismosdel promotor/exón 1 del gen MBL2. El objetivo del trabajo fue evaluarlos genotipos MBL2 de donante y receptor de un injerto hepático ysu influencia en las infecciones y evolución del trasplante.

Métodos. Se determinaron por secuenciación los genotipos deMBL2 de donante y receptor correspondientes a trasplantes hepáticosrealizados en nuestra institución entre 2003 y 2007. Los genotipos sedividieron en silvestre (A/A) y variante (A/O; O/O). Se analizaronvariables pre y peri trasplante, incidencia de infecciones, rechazo ysupervivencia post-trasplante con objeto de identificar variables rela-cionadas con el desarrollo de infecciones y supervivencia.

Resultados. Se analizaron 96 parejas donante-receptor de trasplan-te hepático. La frecuencia de genotipo variante fue del 38% en donan-tes y 48% en receptores. No existieron diferencias significativas entrelas características del trasplante en función del genotipo del donanteo del receptor. La tasa de incidencia total de infecciones fue similar enlos receptores de un donante con genotipo salvaje o variante (p= 0.835).Los receptores de un injerto hepático de genotipo variante presenta-ron una mayor tasa de mortalidad por infección. No se observarondiferencias en cuanto a tasa de infecciones o evolución en funcióndel genotipo del receptor. En el análisis multivariado, genotipo varian-te del donante (HR 2.83, IC95% 1.00-7.95), puntuación MELD (HR 1.13,IC95% 1.05-1.22) e infección bacteriana post-trasplante (HR 11.0, IC95%2.8-43.0) fueron factores independientes predictivos de mortalidad.

Conclusión. El genotipo MBL2 variante del donante se asocia deforma independiente con una peor evolución del trasplante, funda-mentalmente por una mayor severidad de las infecciones.

IDENTIFICACIÓN DE NUEVAS DIANAS ANTIGÉNICAS ENPACIENTES TRASPLANTADOS DE CORAZÓN Y DIAGNOSTI-CADOS DE ENFERMEDAD VASCULAR DEL INJERTO. AcevedoCalado MJ1, Álvarez Márquez A1, Aguilera I1, Caro Oleas JL1, LageGallé E2, Wichmann Schlipf I1, Nuñez Roldan A1. 1Servicio Inmunolo-gía. 2Servicio de Cardiología. Hospital Universitario Virgen del Rocío.

La Enfermedad Vascular del Injerto (EVI) se caracteriza por unengrosamiento progresivo de la íntima arterial. Es la causa principalde morbilidad y mortalidad después del primer año del trasplante.Aunque de patogenia desconocida, la EVI podría ser la manifestaciónde una respuesta inmunitaria crónica, entre otras posibles causas.

Objetivos. El objetivo principal de nuestro trabajo es identificarnuevas dianas antigénicas, presentes en el suero de los pacientes, quepuedan tener relevancia en la EVI post-trasplante cardiaco.

Pacientes y Métodos. Se seleccionaron 22 pacientes trasplantadosde corazón con más de un año de evolución y con EVI diagnosticadapor IVUS (ecografía intravascular). Se estudió la presencia de anticuer-pos anti-endoteliales en sueros previos y posteriores al trasplantemediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) en portas de células

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HUVEC y la identificación de los antígenos se realizó mediante el ras-treo inmunológico de una genoteca de expresión de arteria coronariahumana.

Resultados. Dieciocho de los 22 pacientes presentaban un patrónnuclear similar, sólo o en combinación con otros patrones citoplasmá-ticos. Se seleccionó el suero de uno de estos pacientes para efectuarel rastreo y se obtuvieron 4 clones positivos que, tras ser secuenciados,correspondían a las siguientes proteínas: hnRNP K, IFI16, TYMS yZIP14. El antígeno hnRNP K es una ribonucleoproteína nuclear hete-rogénea que está implicada en la regulación de la expresión génica. Supatrón nuclear, se confirmó en IFI con un anticuerpo monoclonal comer-cial frente a ésta proteína y en WB de lisado de células HUVEC en elque da una banda de 64KDa también reconocida por el suero motivodel rastreo.

El resto de los antígenos se encuentran bajo estudio. Conclusiones

1. Hemos descrito la presencia de anticuerpos frente a 4 nuevos antí-genos en trasplantados de corazón.

2. El antígeno hnRNP K es reconocido por anticuerpos presentesen el suero de al menos 7 de estos pacientes.

IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS INUSUALES EN PACIEN-TES POST-TRANSPLANTE HEPATICO. Alvarez Doforno R1, Alva-rez L2, Yañez F1, Diaz MC3, Larrauri J4, Jara P3, Fontan G1. 1ServicioInmunología. Hospital La Paz. Madrid. 2Unidad Investigación. Hospital LaPaz. Madrid. 3Servicio Hepatología. Hospital Infantil La Paz. Madrid. 4Ser-vicio Anatomía Patológica. Hospital La Paz. Madrid.

Introducción. La hepatitis autoinmune de novo (HAI) tras trans-plante hepático es una patología inflamatoria del hígado caracteriza-da por hipergammaglobulinemia, presencia de autoanticuerpos y bue-na respuesta a dosis crecientes de inmunosupresores. Caso 1 Pacien-te de 13 años de edad en la actualidad, que a los 3 años de vida se some-te a transplante hepático por una colestasis crónica. A partir de los 3años y medio posttransplante sufre varios episodios de disfunción delinjerto. Caso2 Paciente de 7 años que a los dos años de vida se some-te a transplante hepático con diagnostico previo de enfermedad deJarabe de Arce. A los 5 años post transplante presenta una disfunciónhepática.

Objetivos. 1) Estudiar la presencia de autoanticuerpos en dos niñostransplantados que presentan episodios de disfunción hepática. 2) Iden-tificar los antígenos reconocido 3) Determinar si los episodios de dis-función están relacionados con los anticuerpos.

Materiales y Métodos. Las técnicas empleadas fueron inmuno-fluorescencia indirecta (IFI) sobre triple tejido de rata(hígado/riñón/estómago), Inmunoblot (IMB) sobre extracto de híga-do y/o proteínas purificadas ó recombinantes.

Resultados. Caso 1, Biopsia patrón histológico con colestasis ytransformación gigantocelular. Se detecta anticuerpos anti-canalículosbiliares a título alto, que van dirigidos contra la proteína BSEP. En ensa-yos in vitro de transporte de ácidos biliares, se observa que estos anti-cuerpos son capaces de inhibir la funcionalidad del BSEP. Caso 2, Biop-sia: Tejido hepático con lesiones de rechazo agudo ligero con modera-da fibrosis portal. Se detecta Ac anti Mitocondriales a titulo alto tipoM2. Estos Ac reconocen al complejo deshidrogenasa de los α cetoáci-dos de cadena ramificada.

Conclusiones. En algunos pacientes sometidos a transplante hepá-tico se generan anticuerpos que pueden ser bloqueantes contra una

proteína del órgano donante y que pueden llegar a reproducir en algu-nos casos la enfermedad original. Es fundamental detectar y caracte-rizar cualquier anticuerpo aunque sea inusual en pacientes tras trans-plante con el fin de predecir las disfunciones y poder entender el meca-nismo que las produce.

ANÁLISIS DE LA EVOLUCION DE LA RESPUESTA HUMORALEN UN RECEPTOR CON DOS TRASPLANTES RENALES. MarinCrespo N, Andres Martin A, Mirete Bachiller S, Castañer Alabau JL.Hospital Ramón y Cajal. Madrid.

Caso clínico. Varón de 43 años con IRC secundaria a GMN mesan-gial IgA, sin sensibilización previa anti-HLA. Recibe un primer tras-plante renal en 1996 con prueba cruzada negativa e incompatibilida-des A29, A11, B57, B08, DR4, DR8. Rechazo agudo tardío y nefrecto-mía a los 6 años post-trasplante. Segundo trasplante renal en marzode 2000 con prueba cruzada negativa e incompatibilidades A31, B51,DR7. Recidiva de GMN mesangial IgA diagnosticada a los cuatro añosy diagnóstico AP de nefropatía crónica del injerto en 2006. Transplan-tectomía del segundo injerto en 2007.

Objetivos. Estudio de la evolución de las especificidades anti-HLA a lo largo del tiempo y análisis estructural de la respuesta de anti-cuerpos.

Materiales y métodos. Detección de anticuerpos anti-HLA-I, HLA-II y MICA y estudio de sus especificidades mediante citometría de flu-jo. Análisis de tripletes incompatibles mediante el algoritmo Match-maker.

Resultados. Tras el rechazo del primer injerto se detectan anti-cuerpos dirigidos frente a la incompatibilidad A1 y frente a antíge-nos con reactividad cruzada, esta respuesta estaría dirigida frente a lasregiones relacionadas con los tripletes incompatibles 9f y 90D. No sedetectan anticuerpos frente a las otras incompatibilidades del injerto.Tras la nefrectomía se detectan anticuerpos frente a las incompatibili-dades A29, B8 y B57 así como las especificidades comentadas anterior-mente. El nuevo espectro de especificidades se correlaciona como míni-mo con las regiones relacionadas con los tripletes 62RMN/66ASA,62 qif y193av/207s/253q.

Tras el rechazo del segundo injerto aparece un patrón de reac-tividad similar al anterior. Destaca la detección de reactividad fren-te a la incompatibilidad A31 del segundo injerto tanto en los sue-ros pre- como post-TX2 y que se explica por la región que com-parte con A29. No aparecen sin embargo anticuerpos frente al res-to de incompatibilidades del segundo injerto. En el suero posteriora la nefrectomía no se observan variaciones con respecto a los sue-ros previos.

Conclusiones: Tras el rechazo del primer injerto solo se detec-tan anticuerpos frente a la incompatibilidad A1, aunque la retiradadel injerto evidencia la presencia de anticuerpos frente a todas lasincompatibilidades del trasplante. El tratamiento inmunosupresorcon acondicionamiento previo ha sido efectivo en la supresión dela respuesta humoral frente al segundo injerto. La presencia pre-TX2 de anticuerpos frente al antígeno A31 del segundo injerto plan-tea su implicación en el rechazo tardío de éste, aunque los datosanatomo-patológicos no permiten confirmarlo. Las intensidades defluorescencia de los anticuerpos anti-A31 post-nefrectomía indi-carían el secuestro de éstos en el injerto. La pérdida del segundoinjerto, así como su posterior extirpación no altera el patrón de anti-cuerpos anti-HLA.

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PERFIL DE ANTICUERPOS DONANTE ESPECÍFICOS ENPACIENTES TRASPLANTADOS RENALES CON RECHAZOMEDIADO POR ANTICUERPOS Y DEPÓSITOS DE C4d. Caro Ole-as JL1, Álvarez Márquez A1, Aguilera García I1, Gentil MA2, AcevedoCalado MJ1, Cabello V2, Fernández J3, Wichmann Schlipf I1, Gonzá-lez Escribano MF1, Núñez Roldán A1. 1Servicio de Inmunología. 2Serviciode Nefrología. 3Servicio de Anatomía Patológica del Hospital UniversitarioVirgen del Rocio

Objetivos. La producción de anticuerpos anti-HLA donante especí-ficos post-trasplante se asocia con rechazo y fallo del injerto. Sin embar-go, otros anticuerpos no HLA se asocian también al rechazo. Por otro lado,los anticuerpos anti-GSTT1 fueron descritos por nuestro grupo en 2001 enel suero de pacientes con trasplante hepático. Son muy específicos frenteal antígeno del donante y aparecen en pacientes que carecen del gen de laGSTT1 cuando reciben un injerto de un donante positivo, dando lugar auna hepatitis inmune de novo. GSTT1 se expresa además en riñón. Porotra parte la presencia de anticuerpos frente a MICA se ha relacionado conuna menor supervivencia del injerto renal. El objetivo principal de nues-tro trabajo es identificar el perfil de anticuerpos donante específicos enpacientes con rechazo mediado por anticuerpos (RMA), que se pone demanifiesto por la detección de anticuerpos circulantes donante específi-cos (ADE) y el depósito de C4d en biopsias del injerto renal

Pacientes y métodos. Se seleccionaron 19 pacientes que cumplíanlos criterios histopatológicos de RMA y que presentaban depósitos deC4d en biopsias renales. Se estudió la presencia, en sueros previos yposteriores al trasplante, de anticuerpos anti-HLA clase I, clase II yMICA específicos del donante mediante tecnología Luminex. Los anti-cuerpos anti-GSTT1 se analizaron mediante IFI y/o ELISA.

Resultados. En el momento de la biopsia, 4 pacientes (21%) tení-an anticuerpos anti-HLA de clase I, tres (15.8%) anti-GSTT1, dos (10.5%)tenían anti-HLA de clase II y dos (10.5%) tenían anti-MICA; 4 pacien-tes tenían una combinación de anticuerpos: HLA+MICA (n=1); HLA-I + GSTT1 (n=2) y GSTT1+MICA (n=1). En 4 pacientes (21%) no seencontró ningún anticuerpo. La presencia de anti-GSTT1 se asociabasignificativamente con RMA (p=0.026).

Conclusión. Además de los anticuerpos anti-HLA, los anticuer-pos anti GSTT1 y MICA pueden estar implicados en el rechazo media-do por anticuerpos en el trasplante renal.

INMUNOSUPRESION SISTEMICA AMPLIADA EN TRASPLAN-TE CORNEAL CON ALTO RIESGO DE RECHAZO. Sarmiento E1,Balado P2, Baeza A2, Vicario JL3, Acero A2, Palka M4, Carbone J1. 1Ser-vicio de Inmunología. 2Servicio de Nefrología. 3Servicio de Anatomía Patoló-gica del Hospital Universitario Virgen del Rocio 1Servicio de Inmunología. Hospital Gregorio Marañón. Madrid. 2Serviciode Oftalmología. Hospital Gregorio Marañón. Madrid. 3Centro de Transfu-siones. CAM. 4Facultad de Medicina. UCM. Madrid.

Introducción. Sin inmunosupresión sistémica los trasplantes cor-neales (TCor) de alto riesgo presentan más del 50% de rechazo en elprimer año.

Objetivo. Evaluar los riesgos y utilidad de la implementaciónde un protocolo individualizado de profilaxis y tratamiento de recha-zo en pacientes sometidos a TCor de alto riesgo.

Métodos. Resultados preliminares del estudio de 14 pacientes. Etio-logía del TCor: rechazo crónico (7; 1-3 queratoplastías previas), rechazoagudo (1), perforaciones corneales (4), otros (2). PROTOCOLO: Pre-TCor:

Inmunoglobulinas séricas, subclases de IgG, complemento, proteína Creactiva, ANA, tipaje HLA y ac citotóxicos, subpoblaciones linfocitarias,Rx tórax, prueba tuberculínica y booster, hemograma, bioquímica, mar-cadores tumorales. Profilaxis de rechazo: Micofenolato mofetil (1-3g/24hVO) profiláctico durante 1-2 años. Esta terapia es complementaria al tra-tamiento habitual con ciclosporina y corticoides tópicos y prednisonaoral (4-6 semanas tras el TCor). Tratamiento de rechazo: Tacrolimus (nive-les 2-8 ng/ml) o Ciclosporina (niveles 125-175 ng/ml) según perfil deefectos adversos, y prednisona a bajas dosis según respuesta. Profila-xis antiinfecciosa: Isoniacida (si riesgo de TBC) y TMP-SMX.

Resultados. Excluídos: 7, en lista de espera: 2, tratados: 5. Moti-vos de exclusión: tumores activos (3), enfermedad sistémica descom-pensada (1), infección grave activa (1), otros (2). Estudio pre-TCor:Prueba tuberculínica o booster positivo: 4/9 pacientes; hipogamma-globulinemia: 4/14, 451-746 mg/dl; ac citotóxicos positivos: 1/12. Evo-lución: En 2 retrasplantes nuevos: los 2 libres de rechazo (1 en pacien-te con 3 injertos previos rechazados y anticuerpos anti-HLA elevados,se realizó selección de donante sin los Ag HLA que reconoce). En 3TCor con rechazo: 1 injerto transparente sin vascularización y buenaAV, 1 injerto transparente con persistencia de vascularización y buenaAV, 1 sin mejoría. Complicaciones: 2 episodios de infecciones respi-ratorias sin consolidación.

Conclusión. La aplicación del protocolo descrito podría impactarpositivamente en el resultado del TCor de alto riesgo.

SESIÓN 4: INMUNOLOGÍA TUMORAL - I

Moderadores: Dr. Francisco Ruiz-Cabello (Granada), Dr. Ignacio Melero (Navarra)

THERAPEUTIC ANTI-TUMOR EFFICACY OF ANTI-CD137 AGO-NISTIC MONOCLONAL ANTIBODY IN MOUSE MODELS OFMYELOMA. Murillo O2, Dubrot J2, Arina A2, Hervás-Stubbs S2, Mele-ro I1. 1CIMA, Clínica Universitaria. 2CIMA.

Purpose. Eradication of post-treatment residual myeloma cells is nee-ded to prevent relapses and immunostimulatory monoclonal antibodies(mAbs) such as anti-CD137, CTLA-4, CD40, etc, that enhance the immu-ne response against malignancies represent a means of achieving this pur-pose. This study explores anti-CD137 mAbs for mutiple myeloma (MM)treatment in preclinical models of the disease because they safely augmenttumor immunity and are in clinical trials for other cancers.

Experimental design. The anti-tumor effect of anti-CD137 mAbon mouse plasmacytomas derived from HOPC and NS0 cell lines wasstudied and compared with that of anti-CTLA-4, anti-CD40 and anti-ICAM-2 mAbs. The anti-tumor effect of anti-CD137 mAb was also exa-mined in a mouse syngeneic disseminated myeloma (5TGM1) model,which more closely resembles human MM. Depletions of specific cellpopulations and gene-targeted mice were used to unravel the requi-rements for tumor rejection.

Results. Agonistic mAb against CD137 and blocking anti-CTLA-4 mAb showed activity against intra-peritoneal HOPC tumors, resul-ting in extended survival of mice that also became immune to re-cha-llenge. Anti-CD137 mAbs induced complete eradications of establis-hed subcutaneous NS0-derived tumors that were dependent on IFN-Á, NK cells and CD8+ T lymphocytes. NK cells accumulated in tumordraining lymph nodes (TDLNs) and showed increased IFN-γ produc-

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tion. Anti-tumor efficacy of anti-CD137 mAb was preserved in CD28-deficient mice, despite the fact that CD28 signaling increases the expres-sion of CD137 on CD8+ T cells. Importantly, anti-CD137 mAb treat-ment significantly decreased systemic tumor burden in the dissemi-nated 5TGM1 model.

Conclusions. Anti-CD137 mAb’s immune-mediated anti-tumor acti-vity in mouse models holds promise for myeloma treatment in humans.

IN VIVO DEPLETION OF DENDRITIC CELLS IMPAIRS BUTDOES NOT COMPLETELY ABROGATE THE ANTI-TUMOREFFECT OF AGONISTIC ANTI-CD137 MONOCLONAL ANTIBO-DIES. Murillo O2, Arina A2, Azpilicueta A2, Pérez-Gracia JL3, Hervás-Stubbs S2, Melero I1. 1CIMA, Clínica Universitaria. Universidad de Nava-rra. 2CIMA. 3Clínica universitaria.

Anti-CD137 monoclonal antibodies (mAbs) are capable of inducingtumor rejection in several murine syngeneic tumor models. This anti-tumour effect is thought to involve the activation of naive CD8 T cellsthat are specific for tumor antigens cross-presented by dendritic cell(DCs). However, whether DCs are required for the efficacy of anti-CD137treatment has never been examined. This study investigates the invol-vement of DCs in the rejection of EG7-OVA tumors upon treatment withanti-CD137 agonistic mAb. This thymoma expresses chicken ovoalbu-min (OVA) as a traceable antigen to which specific immune responsescan be monitored in vivo and in vitro following anti-CD137 mAb tre-atment. The administration of anti-CD137 mAbs cause the eradicationof EG7-OVA derived tumors by a CD8+ T cell-dependent mechanismthat correlates with increased cytotoxic T lymphocyte (CTL) activityagainst the immunodominat OVA epitope. Although tumor cells aredetectable in the tumor draining lymph nodes (TDLNs) of EG7-OVA-bearing mice, tumor antigen presentation to OVA-specific CD8+ Tlymphocytes in this model depends primarily on cells derived from thehost. Ex vivo analyses to determine the identity of the cell type(s) res-ponsible for tumor antigen cross-presentation has revealed that CD11c+cells, most likely DCs, mediate this function. Using DTR-GFP → C57BL/6bone marrow chimeric mice, which allow for sustained in vivo ablationof DCs with diphtheria toxin, we confirmed the involvement of this cellsubset in tumour antigen cross-presentation and in CTL induction againstEG7-OVA. However, exhaustive depletion of DCs incompletely abroga-tes antitumor efficacy of anti-CD137 mAb indicating that DC-mediatedcross-presentation is not an absolute requirement.

LA INMUNIZACIÓN CON VECTORES LENTIVIRALES EN RATO-NES TRANSGÉNICOS INDUCE RESPUESTA CELULAR Y HUMO-RAL FRENTE AL ANTÍGENO TUMORAL NY-ESO-1. Casado JF1,Janda J2, Colombetti S2, Lévy F2. 1Facultad de Veterinaria de la Universi-dad de Extremadura. 2Ludwig Institute for Cancer Research, Lausanne Branch.

Los vectores lentivirales infectan células dendríticas permitien-do la expresión estable de un gen y el desarrollo de una repuesta inmu-ne cuantitativa y cualitativamente superior. En este trabajo hemos ana-lizado la respuesta inmune en ratones transgénicos HLA-A2+ inmu-nizados vía subcutánea con vectores lentivirales que codifican para elantígeno tumoral NY-ESO-1. La inmunización subcutánea con lenti-vectores disparó una respuesta de células T CD8+ específicas para dife-rentes epítopos. Esta respuesta fue mayor y más duradera que la obte-nida mediante inmunización con péptidos. Las células T CD8+ antí-

geno-específicas mostraron un fenotipo efector/memoria (CD127pos,CD62Lneg). El análisis del repertorio de TCRs demostró un uso pre-dominante de las cadenas Vbeta4 y Vbeta6 para el reconocimiento delepítopo NY-ESO-1 (157-165). Se observó además una potente respues-ta de células T CD4 específicas para NY-ESO-1, que incrementó sig-nificativamente la respuesta CD8 así como una fuerte respuesta humo-ral frente a diferentes epítopos lineales de NY-ESO-1.

En conclusión, la inmunización con el antígeno tumoral NY-ESO-1 en ratones transgénicos usando vectores lentivirales estimula unarespuesta celular y humoral similar a la observada en pacientes contumores NY-ESO-1+.

INDUCCIÓN DE APOPTOSIS POR AGENTES DESMETILANTESEN CÉLULAS T LEUCÉMICAS. Ruiz Magaña MJ, Morales CaminoJC, Ruiz Ruiz MC. 1Centro de Investigaciones Biomédicas.

La hipermetilación del ADN es un mecanismo epigenético rela-cionado con el desarrollo del cáncer que provoca el silenciamientode genes supresores de tumores. Al contrario de lo que ocurre conlos cambios genéticos, esta alteración epigenética se puede revertirmediante agentes farmacológicos que inducen la hipometilación delADN, lo que sugiere el uso de las llamadas drogas epigenéticas, solaso en estrategias combinadas, en la terapia del cáncer.

El objetivo de este trabajo es conocer el efecto que tienen los agen-tes desmetilantes decitabine y zebularine, solos o en combinación conel ligando de muerte TRAIL, sobre líneas de células leucémicas T ysobre células T no transformadas. Hemos analizado la inducción deapoptosis por ambos agentes desmetilantes, así como la posible sensi-bilización a la muerte mediada por TRAIL, tanto en células T leucémi-cas como en T normales, mediante determinación del ciclo celular conyoduro de propidio. También se han estudiado las señales implicadasen la inducción de apoptosis por decitabine y zebularine y la regula-ción de genes pro- y anti-apoptóticos por dichos agentes, mediante lastécnicas de Western-blot y RT-PCR.

Los resultados obtenidos indican que tanto el decitabine como elzebularine inducen apoptosis dependiente de caspasas y de la acti-vación de la ruta mitocondrial en líneas de células T leucémicas. Sinembargo, no son capaces de potenciar la muerte mediada por TRAILen este modelo tumoral. Por otro lado, se ha observado que estos agen-tes desmetilantes no presentan efectos sobre la viabilidad de células Tnormales lo que sugiere su baja toxicidad y por tanto su posible utili-zación en terapia anti-turmoral.

CORRELACIÓN ENTRE LA EXPRESIÓN DE HLA DE CLASE I YLA PROGRESIÓN/REGRESIÓN DE LAS METÁSTASIS DE MELA-NOMA EN DOS PACIENTES SOMETIDOS A INMUNOTERAPIA.Carretero R1, Romero JM1, Rodriguez AB1, Maleno I1, Camacho F2,Rodriguez F2, Real LM3, Ruiz-Cabello F1, Garrido F1, Cabrera T1. 1Hos-pital Universitario Virgen de las Nieves. 2Hospital Universitario Virgen Maca-rena, 3Neocodex.

A pesar de los buenos resultados obtenidos por la inmunotera-pia en estudios preclínicos, solo se ha conseguido una regresión tumo-ral significativa en una pequeña proporción de pacientes. Estos pobresresultados pueden deberse a mecanismos de escape inmunitario porparte de las células tumorales, uno de ellos es la alteración en la expre-sión de HLA de clase I.

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Hemos estudiado la expresión de MHC de clase I en 16 metásta-sis obtenidas de dos pacientes con melanoma sometidos a inmunote-rapia. Seis fueron obtenidas de un paciente tratado con vacunaciónautóloga más BCG (M-VAX) y 10 de otro paciente sometido a dos tra-tamientos inmunoterápicos, 5 tras interferón-alfa-2b y 5 tras vacuna-ción autóloga más BCG (M-VAX). Once de las metástasis estaban enregresión en el momento de la extirpación mientras que 5 estaban enprogresión, según los PET y TAC realizados. Las metástasis en regre-sión mostraban altos niveles de expresión de HLA de clase I mien-tras que las metástasis en progresión tenían niveles bajos de HLA declase I, estos estudios se realizaron mediante técnicas inmunohistoquí-micas con anticuerpos monoclonales específicos frente a diferentesmoléculas de HLA de clase I y cuantificación de la beta 2 microglo-bulina, cadena pesada y los locus A,B y C mediante PCR a tiempo real.

Nuestros resultados apoyan la hipótesis de que la alteración en laexpresión de moléculas HLA de clase I juega un papel esencial en elescape tumoral del sistema inmunitario que puede ser determinanteen la progresión o regresión de las metástasis. La diferente expresiónde moléculas HLA de clase I en los dos grupos de metástasis puedeser debida a la modificación del microambiente tumoral por la inmu-noterapia, la cual podría aumentar la expresión de clase I solo en lasmetástasis con alteraciones reversibles.

CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES: VEHÍCULOS Y FACTO-RÍAS DE ANTICUERPOS TERAPÉUTICOS. Compte Grau1, SanzAlcober L2, Vicario JL1, Álvarez-Vallina L1. 1Unidad de Inmunología Mole-cular, Hospital Universitario Puerta de Hierro. 2Unidad De Histocompatibi-lidad, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid.

Las células madre mesenquimales (MSC, del inglés MesenchymalStem Cells) son células multipotentes y con alta capacidad regenera-tiva. En los últimos años se han desarrollado distintos ensayos paraevaluar su utilidad y su potencial terapéutico en protocolos de terapiaregenerativa y terapia celular antitumoral.

Estudios recientes han demostrado que MSCs se incorporan ysobreviven en el microambiente tumoral donde contribuyen activa-mente a la formación del estroma tumoral, constituyendo así un mode-lo potencialmente útil para la liberación local de agentes terapéuticos.

En este trabajo nos planteamos modificar genéticamente MSCs huma-nas (hMSCs), obtenidas de médula ósea, para estudiar su potencial como“factorías” de un anticuerpo biespecífico recombinante con formato dia-body, con especificidad frente a la cadena epsilon del complejo TCR/CD3humano y frente al antígeno carcinoembrionario (CEA) humano (anti-CEA/antiCD3). Para llevar a cabo esta estrategia, generamos un vectorlentiviral (pRRL-dAb-IRES-GFP), derivado del HIV-1, tricistrónico quecontiene los genes del diabody biespecífico (dAb cadena 1 y dAb cade-na 2) y el gen de la proteína verde fluorescente (eGFP) unidos a través desecuencias IRES derivadas del virus de la encefalomiocarditis.

En ensayos in vitro, comprobamos que hMSCs infectadas expre-saban, de forma estable, altos niveles de eGFP (85%) durante más deun mes y secretaban niveles apreciables de diabody antiCEA/antiCD3funcional. Empleando técnicas de imagen molecular in vivo, observa-mos que hMSCs se distribuían de forma homogénea en el depósitotumoral y expresaban eGFP al menos 30 días postimplantación de unamezcla (1:2) de hMSCs modificadas genéticamente con células tumo-rales gástricas humanas. El estudio inmunohistoquímico de las piezastumorales demostró la presencia de diabody antiCEA/antiCD3 en elestroma peritumoral. El uso de hMSCs ofrece ventajas potenciales debi-

do: (i) al tropismo selectivo de este tipo celular por ciertas clases detumores sólidos, (ii) a la producción local y mantenida de agentes tera-péuticos que, en muchos casos, presentan importantes limitaciones far-macocinéticas y de toxicidad sistémica.

ANTICUERPOS RECOMBINANTES TRIVALENTES PARA LAIMAGEN MOLECULAR DEL CÁNCER. Cuesta Martínez A, Sán-chez López M, Sanz L, Álvarez-Vallina L. Hospital Universitario Puertade Hierro.

El descubrimiento de los anticuerpos monoclonales y el desarrollode las técnicas de ingeniería genética, ha propiciado que los anticuerposrecombinantes (AcR) se conviertan en una sólida tecnología de platafor-ma para producir moléculas diagnósticas, con utilidad para localizardepósitos tumorales in vivo. Los AcR que carecen de la región Fc, comolos fragmentos scFv (del inglés, single chain Fv), ofrecen ventajas: 1) sonfáciles de producir en sistemas bacterianos, 2) se extravasan más eficaz-mente y 3) tienen una mayor capacidad de penetración tisular. Sin embar-go, su vida media es muy corta, ya que las proteínas recombinantes conun tamaño inferior a 60 Kd son filtradas por el glomérulo y excretadaspor la orina rápidamente. Para aumentar su vida media se han propues-to diferentes sistemas, siendo el más obvio su oligomerización. Los AcRmas utilizados son los bivalentes con formato: diabody (scFv con linkerscortos se impiden el apareamiento intramolecular entre dominios VH yVL intracatenarios) y minibody (scFv unido a un dominio CH3/Fc).

En este trabajo proponemos un nuevo AcR trivalente (AcR-T) for-mado por un scFv unido al dominio de trimerización del colágenoXVIII. Empleando esta estrategia se generaron AcR-Ts a partir de losscFv: B1.8 (anti-hapteno NIP), L36 (anti-laminina) y MFE-23 (anti-CEAhumano). Todos los AcR-Ts se comportaron como trímeros en solucióny fueron muy estables. Para los ensayos de localización tumoral (tumortargeting) los AcR-Ts se conjugaron con el fluorocromo cianina 5 (Cy5)que emite en el infrarrojo cercano, y se emplearon técnicas de ima-gen molecular, que permiten una visualización no invasiva en orga-nismos vivos, y un seguimiento continuado en tiempo real. La conju-gación de los AcR-Ts con Cy5 no alteró sus características molecularesy funcionales. Después de su administración sistémica, en ratones por-tadores de tumores humanos, el AcR-T B1.8 no demostró localiza-ción tumor-específica, el AcR-T MFE23¬ demostró localización espe-cíficamente en tumores CEA+, y el AcR-T L36 demostró localizacióntumor-específica en todos los modelos estudiados.

Estos datos indican que el formato AcR T es un armazón con pro-piedades farmacocinéticas muy favorables y que equipado con un scFvadecuado presenta una excelente capacidad de localización tumoral.Nuestros resultados abren nuevas vías para el desarrollo de procedi-mientos diagnósticos no invasivos del cáncer humano.

DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN MODELO DE ANGIOGÉ-NESIS HUMANA IN VIVO MONITORIZABLE MEDIANTE TÉC-NICAS DE IMAGEN MOLECULAR. Sanz Alcober L1, Santos-ValleP1, Vicario JL2, Serrano A3, Álvarez-Vallina L1. 1Hospital UniversitarioPuerta de Hierro. 2Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusión dela Comunidad de Madrid. 3Servicio de Inmunología, Hospital UniversitarioDoce de Octubre, Madrid.

El proceso angiogénico, clave en el crecimiento tumoral, implicacomplejas interacciones moleculares y celulares que no pueden ser

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recapituladas in vitro. Sin embargo, no disponemos de modelos in vivode angiogénesis humana validados para el screening de agentes poten-cialmente antiangiogénicos.

Recientemente se ha descrito, en ratones inmunodeficientes, la for-mación de vasos humanos mediante la coimplantación de células endo-teliales humanas de vena umbilical (HUVEC) y células madre mesen-quimales (MSC) murinas, capaces de diferenciarse en células muralesde soporte. Con el fin de desarrollar un modelo de angiogénesis huma-na, simple y no invasivo, células HUVEC fueron transducidas conun vector lentiviral que codifica el gen reportero de la luciferasa. Ladetección de la bioluminiscencia, producida tras la administraciónintraperitoneal del sustrato, permite la monitorización no invasiva dela actividad angiogénica de las células HUVECluc. Con el objeto deque este modelo fuera completamente humano, las células endotelia-les fueron coimplantadas con MSC humanas (HMSC) derivadas demédula ósea.

La actividad luciferasa de las células HUVECluc implantadas enratones atímicos pudo ser detectada durante más de 120 días, y se corre-lacionó, a nivel histológico, con la formación de una vasculatura huma-na madura y estable. La presencia de células HMSC resultó crítica parala maduración de la vasculatura neoformada. Para estudiar la utilidadde este modelo de angiogénesis humana, en el screening de compues-tos antiangiogénicos, un grupo de ratones portadores de estos implan-tes vasculares recibió el fármaco antiangiogénico SU5416. La monito-rización seriada de la actividad luciferasa demostró una disminuciónestadísticamente significativa de la actividad luciferasa en el grupo tra-tado, en comparación con el grupo control.

En conclusión, este modelo ofrece nuevas oportunidades para elestudio longitudinal de mecanismos implicados en el proceso de neo-formación vascular y la monitorización de las respuestas a agentesinhibidores de angiogénesis.

LOS LINFOCITOS CIK (CYTOKINE-INDUCED KILLERS) EXPAN-DIDOS A PARTIR DE SANGRE DE CORDÓN UMBILICAL Y SAN-GRE PERIFÉRICA PUEDEN SER REDIRIGIDOS MEDIANTEANTICUERPOS BI-ESPECÍFICOS. Bustamante L, García-SánchezF, Vicario JL, Balas A. Centro de Transfusión de Madrid.

Las células CIK (Cytokine-Induced Killer) son un grupo heterogé-neos de linfocitos que incluyen fundamentalmente células CD3+CD8+CD56+. Los linfocitos CD3+CD56+ están presentes tanto en sangreperiférica (1-5%), como en sangre de cordón umbilical (0,1%). Pre-sentan capacidad antitumoral mediante mecanismos independientesdel complejo principal de histocompatibilidad (MHC), habiendo demos-trado especificidad por un número limitado de células diana (K562,Jurkat), incluyendo leucemias mieloides agudas y crónicas, así comolinfomas B.

Partiendo de unidades de cordón umbilical y sangre periférica deindividuos sanos se han realizado expansiones 'in vitro'. Mediante elempleo de IFNγ, OKT3 e IL-2, se ha conseguido expandir en 21 días 1.461veces la población inicial de células CD3+CD56+ presente en sangre peri-férica, y hasta 3.000 veces en 14 días, la misma población presente enunidades de cordón umbilical. Todas las poblaciones incrementan laintensidad de expresión del receptor de activación NKG2D, así como deperforina, indicando un incremento en la capacidad citotóxica de lascélulas. Tras 14-21 días de expansión los cultivos se componen de célu-las CD3+ 96,2 ± 0,9, CD8+ 60% ± 12, CD4+ 40 ± 10. La poblaciónCD3+CD56+ no demostró uso preferencial de ninguna cadena V.

Se estudió la citotoxicidad de las células expandidas y de las dife-rentes sub-poblaciones mediante ensayos de liberación de 51Cr. No seobservaron diferencias en la capacidad de lisis entre cultivos expandi-dos a partir de células de cordón umbilical y sangre periférica.

La comparación de la citotoxicidad exhibida por las sub-poblacio-nes CD8+CD56+ y CD8+CD56- demostró que si bien ambas presen-tan capacidad citotóxica, esta es superior en la población CD56+. Seevidenció citotoxicidad frente a líneas celulares con ausencia o dis-minución en la expresión de moléculas HLA de clase I, sugiriendo elempleo de mecanismos TCR independientes de citotoxicidad.

Las células CD8+CD56+ presenta capacidad lítica frente a un núme-ro determinado de células diana. Con el fin de determinar si las célu-las CD3+CD56+ pueden ser re-direccionadas frente a células dianasno susceptibles, mediante el empleo de anticuerpos monoclonales bi-específicos, empleamos tetrámeros bi-específicos CD3:CD20 yCD3:CD19. Utilizando esta aproximación hemos conseguidos incre-mentar de forma significativa la citotoxicidad de los cultivos de célu-las totales así como de poblaciones CD3+CD56+ tanto frente a líneastumorales CD19+ y CD20+ como a células leucémicas primarias.

UTILIDAD Y RIESGOS DE LA DETECCIÓN DEL FENOTIPO ABE-RRANTE CD19+CD10+CD38-/+ EN LA ENFERMEDAD MÍNIMARESIDUAL. Alcalá Peña MI, Rodríguez Martín E, Martínez Viñam-bres E, Coll Martí J, Roldán E. Hospital Ramón y Cajal. Madrid.

Introducción. La detección de fenotipos aberrantes en los blastosde las leucemias agudas (LA) al diagnóstico resulta fundamental en elseguimiento de la enfermedad mínima residual (EMR). Sin embargo,no siempre se tienen datos disponibles sobre la aparición de tales pobla-ciones en otro tipo de patologías o en médulas óseas (MO) en recons-titución.

Objetivos. Estudiar la expresión de distintos antígenos de super-ficie en precursores B de pacientes con leucemia linfoide aguda (LLA),otras patologías y MO sanas, con el fin de determinar si dicha expre-sión es útil en el estudio de la EMR.

Métodos. Detección de linfocitos B (LB) CD10+CD38-/+ (baja inten-sidad) en MO por citometría de flujo (CTF). Se tuvieron en cuenta aque-llos eventos que por tamaño, granularidad e intensidad de CD19 podí-an considerarse LB viables. Determinación de la capacidad prolifera-tiva de LB CD10+ por BrdU.

Resultados. Se estudiaron por CTF muestras de diez pacientescon el objeto de detectar un fenotipo considerado clásicamente abe-rrante: CD19+, CD10+, CD38-/+ (baja intensidad). Cinco fueron con-troles sanos, dos leucemias mieloides agudas en remisión comple-ta, dos leucemias crónicas y un LNH. En 5 de ellos no se detectaroncélulas con dicho fenotipo, mientras que en los casos restantes sí sedetectaron estas células, con un porcentaje comprendido entre0,0034%-0,029% sobre la celularidad total (media de 0,015%). Por otrolado, el índice proliferativo de esta subpoblación de precursores B(células BrdU+) fue variable (5,79%-23,88%), al igual que el observa-do en enfermos con LLA (1,48%-13,54%), por lo que tal característi-ca no diferenció a las células de enfermos con LLA de las de los otrosgrupos.

Conclusiones. Aunque el fenotipo aberrante CD19+CD10+CD38-/+ (baja intensidad) puede considerarse como un fenotipo útil en elseguimiento de la EMR, su detección en enfermos de LLA en porcen-tajes inferiores al 0,03% de la celularidad total medular no excluye laposibilidad de que se trate de blastos linfoides normales.

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DETECCIÓN DE CÉLULAS TUMORALES CIRCULANTES EN UNLINFOMA DE EFUSIÓN PRIMARIA. Alcalá Peña MI, MartínezViñambres E, Villar Guimerans ML, Benito Berrinches A, Coll MartíJ, Roldán Santiago E. Hospital Ramón y Cajal. Madrid.

Introducción. El linfoma de efusión primaria (PEL), un tipo de lin-foma de cavidades, se caracteriza por efusiones y crecimiento en faselíquida de células tumorales dentro de cavidades corporales, en ausen-cia de un tumor sólido, además de infección por herpesvirus 8. Aun-que se ha descrito que el PEL posiblemente se origine en los centrosgerminales o postgerminales de los ganglios, hasta el momento no seha descrito la presencia de células tumorales circulantes.

Objetivos. Descripción inmunofenotípica de un caso de PEL enlíquido ascítico (LA) en varón VIH- y detección de células clonalesen sangre periférica (SP) como posibles células precursoras.

Métodos. Muestras de SP, médula ósea (MO) y LA. El estudio delas poblaciones se llevó a cabo por citometría de flujo.

Resultados. Paciente diagnosticado desde 2001 de una leucemiamielo-monocítica crónica (LMMC). En 2007 el paciente desarrolló asci-tis en la cavidad abdominal. En la muestra de LA estudiada se detec-tó una población mayoritaria (87% de la celularidad total) con carac-terísticas citológicas aberrantes y cuyo perfil antigénico no correspon-día con el de la LMMC original. Los resultados inmunofenotípicos des-cartaron población blástica, de estirpe mielo-monocítica o linfoide. Sinembargo, dicha población presentaba fenotipo de célula plasmática(CP), con fenotipo CD38+ high, CD138+, CD19-, inmunoglobulina (Ig)de superficie -, kappa citoplásmica+. Mediante la técnica de inmuno-fijación no se detectó Ig clonal ni en LA ni en suero.

Además de la población descrita, se detectó tanto en SP como enMO una población de linfocitos B (LB) CD19+ con una intensidad deCD79b inferior a lo habitual y kappa de superficie +.

Conclusión. Por vez primera se detecta una población tumoral cir-culante en un PEL, cuyo perfil antigénico (LB con una pérdida parcialde CD79beta) sugiere una fase madurativa previa a la población mayo-ritaria que se detecta en LA (célula plasmática o pre-plasmática).

SESIÓN 5: INMUNODEFICIENCIAS: ALERGIA Y COMPLEMENTO

Moderadores: Dra. Margarita López-Trascasa (Madrid), Dra. Núria Matamoros (Palma de Mallorca)

ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS SOCS EN LINFO-CITOS CD4+ Y EOSINÓFILOS DE PACIENTES CON PATOLOGÍARESPIRATORIA. López Cernada ME1, Sastre B1, Gámez C1, Chacár-tegui M1, del Álamo C1, Cárdaba B1, Palomino P2, Lahoz C2, del PozoV2. 1Fundación Jiménez Díaz-Capio y Ciberes (ISCII). 2Fundación JiménezDíaz-Capio.

Introducción. Los supresores de la señalización de citocinas (SOCS)representan una familia de proteínas descubierta recientemente que estánimplicadas en la regulación negativa de la señalización de citocinas, aso-ciada a la ruta JAK-STAT. Se ha visto que la señal reguladora a través demiembros SOCS puede tener un papel importante en el balance de cito-cinas que determinan las respuestas mediadas por Th1 y Th2. SOCS-3y SOCS-5 son principalmente expresadas en Th2 y Th1 respectivamen-te y ejercen una inhibición recíproca sobre la diferenciación de dichascélulas Th. Estudios recientes han descrito a SOCS-3 como un nuevo

marcador de enfermedades alérgicas, ya que la expresión de dicha pro-teína se relaciona directamente con la severidad de la enfermedad.

Objetivo. Estudiar la expresión de las proteínas SOCS-1, 3 y 5 enlinfocitos CD4+ y eosinófilos de sangre periférica de pacientes con pato-logía respiratoria Th2 (asma extrínseco y bronquitis eosinofílica) e indi-viduos sanos.

Metodología. Se analizó por PCR cuantitativa a tiempo real, losniveles de expresión génica de SOCS-1,3 y 5 en los linfocitos CD4+ yeosinófilos de sangre periférica de pacientes con patología respirato-ria (asma extrínseca y bronquitis eosinofílica) y donantes sanos. Tam-bién se realizó un análisis inmunohistoquímico y por inmunofluo-rescencia en los eosinófilos para corroborar la expresión de la proteí-na SOCS-3 en dichas células.

Resultados y conclusiones. Los resultados en los linfocitos CD4+indican que hay diferencias en la expresión de los genes de SOCS-1 ySOCS-3, siendo este último mayor en el grupo de sujetos enfermosfrente a los individuos sanos. Sin embargo, no existen diferencias esta-dísticamente significativas, entre los grupos de sujetos, en la expresiónde SOCS-5. En el caso de los eosinófilos, se encuentran diferencias enla expresión de SOCS-3, siendo más elevada en los eosinófilos de lospacientes. Por lo tanto, se describe por primera vez la expresión de lasproteínas SOCS en los eosinófilos humanos, existiendo una correla-ción en los niveles de SOCS-3 en linfocitos CD4+ y eosinófilos de pacien-tes, postulando a SOCS-3 como un marcador de enfermedad.

MUTACIONES EN STAT3 EN EL S. DE HIPER IgE. Español Boren1,Garces P1, Caragol I1, Hernández M1, Soler P2, Woellner C3, Grimba-cher B3. 1U. Immunologia. H. Vall d´Hebron.Barcelona. 2U. Infecciosas eInmunodeficiencias pediatricas. H. Vall D´Hebron. Barcelona. 3Immunologyand Molecular Pathology. Dept. Royal Free Hospital. Londres.

Objetivos. El síndrome de Hiper Ig E (HIES) es una inmunodefi-ciencia primaria (IDP) caracterizada por infecciones recurrentes por hon-gos y bacterias, eczema, fracturas óseas espontáneas, lesiones intraora-les, eosinofilia y niveles elevados de Ig E > 2000 IU/ml. Los patrones clí-nicos, inmunológicos y hereditarios son altamente heterogéneos, y eldiagnostico diferencial difícil en muchas ocasiones.

Se presentan datos clínicos de nuestra serie de casos con los prime-ros análisis mutacionales.

Material y Métodos. Revisión de antecedentes clínicos, familiarese inmunológicos de cinco pacientes diagnosticados de HIES desde 1979y el posterior análisis mutacional.

Resultados. Los pacientes (3 hombres y 2 mujeres) de entre 4 y 40años de edad, se diagnosticaron de HIES. La infección por Cándida y/oAspergillus fue detectada en cuatro de cinco casos. Dos pacientes presen-taron neumonia por Staphylococcus aureus con neumatoceles secunda-rios y fallecieron a los 4 y 14 años de edad. Las dos mujeres se diag-nosticaron a los 2 y 30 años de edad. Actualmente ambas presentan secue-las pulmonares y reciben tratamiento antibiótico profiláctico y gam-maglobulina ev en la primera paciente.

Los niveles de IgE oscilaron entre 2500 y 32000 IU/ml. Se han demos-trado dos mutaciones diferentes en el gen STAT3 (cambios aminoací-dicos N466T y R382Q) según estudio realizado en el Royal Free Hospi-tal de Londres, en un caso familiar (herencia autosómica dominante) yen uno aislado, respectivamente. Los demás casos están en estudio.

Conclusiones. HIES es una IDP muy poco frecuente y de clínicamuy heterogénea. Los estudios genéticos abren una puerta importantepara facilitar el diagnóstico específico y permitir el consejo genético.

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IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS ALERGENOSDEL EXTRACTO DEL POLEN DE SENECIO JACOBEA. GámezGámez C1, Luengo O2, Mollá R1, López E1, Sastre B1, Lahoz C1, del PozoV1. 1Fundación Jiménez Díaz-Capio y Ciberes. 2Hospital Vall d´Hebrón. Bar-celona.

Introducción. La familia de las Asteraceae es una de las familiasmás representadas con más de 1100 géneros y 20000 especies. Aunquecosmopolita, principalmente se localiza en las regiones templadas ysubtropicales; en la Península Ibérica han sido descritas más de 1500especies siendo Senecio vulgaris y Senecio jacobea las más comunes.

Objteivos. Determinar la importancia alergénica de S. jacobea eidentificar sus alergenos principales; así como estudiar si presenta reac-tividad cruzada con otras plantas.

Material y Metodos. Se reclutan 50 pacientes con rinoconjuntivis yprueba cutánea positiva frente a extracto de S. jacobea. La identificaciónde sus alergenos se ha llevado a cabo mediante SDS-PAGE, geles 2D einmunodetección. Posteriormente, la identificación de estos alergenos hasido realizada por espectrometría de masas y los resultados obtenidoscomprobados por inmunoblot y microarray. Se realizan inmunoblot yELISA de inhibición para estudiar la reactividad cruzada de S. jacobeacon otras especies de la misma familia y con Parietaria judaica.

Resultados. El extracto del polen de S. jacobea presenta bandas deproteínas entre 14-100KDa. Se han identificado 3 alergenos mayorita-rios de 59, 39-42, y 31KDa. El análisis 2D revela 8 spots de alrededorde 59KDa y 39-42KDa. Estos spots han sido identificados como mala-to deshidrogenasa y pectato liasa por espectrometría de masas. Se hacomprobado que la malato deshidrogenasa y la pectato liasa son aler-genos de S. jacobea ya que son reconocidos por los sueros de los pacien-tes alérgicos. Los ensayos de inhibición demuestran la existencia dereactividad cruzada entre S. jacobea y Artemisia vulgaris, así como entreS. jacobea y P. judaica.

Conclusión. Se ha demostrado que S. jacobea es una nueva fuentealergénica y presenta reactividad cruzada con A. vulgaris y P. judaica.

Se han identificado dos alergenos mayoritarios, una pectato liasa(alergeno ya descrito en Artemisia y Ambrosía) y una malato deshi-drogenada, siendo la primera vez que esta enzima se describe comoalergeno en plantas.

PAPEL DEL GEN TACI EN PACIENTES CON DEFICIENCIA DEIgA EN POBLACIÓN ESPAÑOLA. López Mejías R1, del Pozo N1,García-Rodríguez MC2, Ferreira A2, Gómez de la Concha E1, FontánG2, Núñez C1, Fernández-Arquero M1. 1Servicio Inmunología Clínica. Hos-pital Clínico San Carlos. 2Servicio de Inmunología Clínica. Hospital La Paz.

La deficiencia selectiva de IgA (DIGA) es la inmunodeficiencia pri-maria más común en caucásicos. Presenta un importante componen-te genético pero hasta el momento sólo se ha descrito asociación condiversos alelos del HLA, que explican el 40% de la influencia genéti-ca. TACI (transmembrane activator and CAML interactor), codificadopor TNFRSF13B, es un receptor de la superfamilia de TNFR, presen-te en la superficie de linfocitos B periféricos. La unión de su ligando,APRIL (a proliferation-inducing ligand), induce el cambio de isotipo(fundamentalmente a IgA e IgG) independientemente de las células T.Mutaciones funcionales en TNFRSF13B se han visto asociadas al sín-drome variable común (SVC), y se ha postulado un posible papel enDIGA. Nuestro objetivo fue analizar la posible influencia de polimor-fismos en este gen en pacientes españoles con DIGA.

Realizamos un estudio caso-control con 199 enfermos y 389 con-troles sanos. Se estudiaron con sondas Taqman 3 mutaciones funcio-nales descritas (C104R, A181E, R202H) y 8 SNPs adicionales (rs3751988,rs34562254, rs3818716, rs2274892, rs4985700, rs8074984, rs4985762,rs8079130) para estudiar la variabilidad del gen. Las diferencias en fre-cuencias genotípicas y alélicas fueron comparadas por el test chi-cua-drado o test exacto de Fisher. Las frecuencias haplotípicas se estima-ron mediante el algoritmo EM (Expectation-Maximization).

Todos los polimorfismos se ajustaron a las proporciones Hardy-Weinberg en nuestra muestra control. Ningún polimorfismo mostródiferencias significativas entre casos y controles. Sin embargo, se encon-tró un haplotipo constituido por esos 8 SNPs cuya frecuencia estabaincrementada en pacientes: 8,9% en enfermos vs. 5,1% en controles,p=0,002; pc.

Nuestros datos preliminares sugieren que algún elemento enTNFRSF13B, distinto de los asociados a SVC, puede modular la pre-disposición a padecer DIGA. En la actualidad, pretendemos confirmaresta asociación en una muestra familiar de DIGA y pacientes con SVC.

LA MUTACIÓN GLY90SER EN EL GEN CD8A, CAUSANTE DEINMUNODEFICIENCIA DE CD8, SE CONFINA EN POBLACIÓNGITANA ESPAÑOLA. Mancebo Sierra ME1, Moreno Pelayo MA2,de la Calle Martín O3, Allende Martínez LM1, Kalaydjieva L4, Bertran-petit J5, Coto E6, Calleja Antolín S1, Ruiz Contreras J7, Paz Artal E1.1Servicio de Inmunología. Hospital Universitario 12 de Octubre. 2Unidad deGenética Molecular. Hospital Ramón y Cajal. 3Servei d'Immunologia. Hos-pital de la Santa Creu i Sant Pau. 4Western Australian Institute for MedicalResearch and Centre for Medical Research. University of Western Australia.5Unitat de Biologia Evolutiva, Departament de Ciencies Experimentals i dela Salut. Universitat Pompeu Fabra. 6Unidad de Genética. Hospital Uni-versitario Central de Asturias. 7Unidad de Inmunodeficiencias. Hospital Uni-versitario 12 de Octubre.

En este trabajo se describe el segundo caso de inmunodeficienciade CD8, confirmando que el efecto patogénico de la mutaciónp.Gly90Ser consiste en una ausencia completa de linfocitos T CD8+,aunque las manifestaciones clínicas varían en severidad. Al igual queel primer caso descrito, este paciente es de origen gitano español yhomocigoto para la mutación p.Gly90Ser en la cadena alpha del CD8.El paciente sufrió infecciones respiratorias de repetición desde la infan-cia pero con conservación del parénquima pulmonar, al contrario queel primer paciente, que murió debido al daño respiratorio. Se ha desa-rrollado un método de screening de la mutación por PCR-RFLP con laenzima de restricción AluI, para el estudio de un total de 1127 con-troles no relacionados: 734 de origen gitano y de diferentes localiza-ciones geográficas de Europa, y 393 controles españoles (no gitanos).Los resultados indican que p.Gly90Ser está confinada a la poblacióngitana española, donde la tasa de portadores es del 0,4%. El análisis demicrosatélites flanqueantes del gen CD8A mutado (D2S2232, D2S388,D2S417, STSCD8A, STSCD8B, D2S2216, D2S2181), reveló un únicohaplotipo polimórfico lo que sugiere un origen común para la muta-ción p.Gly90Ser que causa la deficiencia de CD8 en la población gita-na española. La inmunodeficiencia de CD8 debe tenerse en cuenta enel diagnóstico de gitanos españoles con infecciones recurrentes, paraestablecer recomendaciones específicas en vacunación y en hábitos desalud y para el consejo genético de familias afectadas.

Molecular Immunology 45(2):479-84; 2008. Financiación FIS PI06/0170 y PI06/0614

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SÍNDROME DE WISKOTT-ALDRICH CAUSADO POR UNAMUTACIÓN PREVIAMENTE ASOCIADA A XLT. Martínez-Martí-nez L1, González-Santesteban C1, Ribes S2, Badell I3, de la Calle-Mar-tín O1. 1Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. 2Hospital Sant Joan de Deu.3Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Pediatría).

El Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad liga-da al X que se caracteriza por trombocitopenia con microplaquetas,eczema e infecciones recurrentes, y que está causada por alteracionesen el gen WASP. Mutaciones en este gen también son responsablesde la trombocitopenia ligada al X (XLT), que cursa sólo con trombo-citopenia y microplaquetas.

Presentamos el caso de un niño de 1 año de edad, segundo hijo depadres no consanguíneos, que a partir de los 3 meses padece diarre-as sanguinolentas sin relación clara con infección y un eczema medio-severo. El examen hematológico reveló trombocitopenia con plaque-tas pequeñas. Los estudios de función linfocitaria mostraron una res-puesta aloreactiva alterada, mientras que la respuesta a mitógenos esta-ba conservada. El análisis de las inmunoglobulinas mostró una IgE ele-vada (764 UI/mL).

El estudio de la proteína WASP en linfocitos T activados del pacien-te mediante citometría de flujo y western blot mostró una ausenciacompleta de dicha proteína. El estudio del cDNA de WASP reveló lafalta de tránscrito normal y la presencia de uno de mayor tamaño quecontenía un fragmento del intrón 6. La secuenciación del gen WASPdeterminó que el paciente tenía la mutación IVS6+5:G>A, que pro-voca una alteración en el splicing, incorporando 38 nucleótidos con uncodón stop. La madre era la única portadora de la mutación (mutaciónde novo).

La mutación IVS6+5:G>A ha sido reportada en pacientes con XLTasociada a tránscritos normales residuales que comportan una expre-sión disminuida de la proteína. Nuestro paciente presenta una ausen-cia total de tránscrito normal y, con ella de proteína, lo que explicaríael fenotipo de WAS y no de XLT.

El paciente fue sometido a un trasplante de progenitores hemato-poyéticos procedentes de su hermano mayor, HLA idéntico. El análi-sis de la expresión de la proteína WASP en linfocitos T activadosmediante citometría de flujo ya mostraba una reexpresión de dichaproteína 3 semanas después del trasplante.

CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LA PRIMERA MUTA-CIÓN DE NOVO EN UN PACIENTE CON DEFICIENCIA DE C5.López Lera A1, Garrido S1, Mena de la Cruz R1, Ramos JM2, Fontán G1,López Trascasa M1. 1Hospital Universitario La Paz. 2Hospital General Uni-versitari d'Elx.

El componente C5 del sistema del complemento es esencial parala formación del complejo de ataque a membrana en las rutas clásica,alternativa y de las lectinas. Su deficiencia causa una enfermedad auto-sómica recesiva que se asocia generalmente con episodios de menin-gitis recurrentes por N. meningitidis.

Aquí presentamos el caso de un paciente que sufrió varios episo-dios de meningitis bacteriana durante la infancia, con ausencia totalde C5 en suero y perteneciente a una familia sin historia de consangui-nidad.

Por nefelometría se obtuvieron valores normales de C3 y C4 para elpropositus, así como para sus padres y sus dos hermanos. La activi-dad hemolítica de las rutas clásica y alternativa (CH50, AP50) era nor-

mal en todos los miembros de la familia excepto en el propósitus, en elque era indetectable y se reconstituía con la adición de C5 purificado.

Se analizó el gen de C5, localizado en el cromosoma 9, medianteRT-PCR de 6 fragmentos solapantes a partir de RNA total obtenido desangre periférica, detectándose la sustitución AG>CTCT en el exón 15del propósitus y en su padre. Esta mutación afecta a una putativasecuencia exónica reguladora del splicing (ESE) y causa skipping delexón 15, generando una proteína truncada en el extremo C-terminalde la cadena alfa, que no es secretada. La secuenciación del DNA genó-mico de los 41 exones de C5 reveló una segunda mutación de novo yen trans respecto a la anterior, Y846H, presente solo en el propósitus.

En conclusión, aquí describimos el primer caso de un deficientede C5 heterocigoto compuesto para dos mutaciones, de las que una esde novo.

EL FACTOR NEFRÍTICO (C3Nef), UN AUTOANTICUERPO DIRI-GIDO FRENTE A LA C3 CONVERTASA DEL COMPLEMENTO:ASOCIACIONES CLÍNICAS Y ANÁLISI DE FACTORES QUE PUE-DEN MODULAR LA APARICIÓN DE ESTE AUTOANTICUERPO.Domínguez MA1, Garrido S1, Vlagea A1, Martínez Ara J1, Fontán Casa-riego G1, Lutz H2, Harris C3, Rodríguez de Córdoba S4, López Trasca-sa M1. 1Hospital Universitario La Paz. Madrid. 2Institute of BiochemistryEth, Zurich. 3School of Medicine, Cardiff University. 4Centro de Investiga-ciones Biológicas. CSIC. Madrid.

La Glomerulonefritis membranoproliferativa (GNMP) es una nefro-patía caracterizada por depósitos de C3, en la que a menudo se detec-ta la presencia de un autoanticuerpo (autoAc), C3Nef asociado a la acti-vación de la vía alternativa del sistema del complemento. Reciente-mente se ha puesto de manifiesto la existencia de mutaciones/poli-morfismos en genes reguladores de la C3 convertasa de la vía alterna-tiva, tanto en el Síndrome Hemolítico Urémico (SHU) como en laGNMP. Se desconoce si este autoAc puede estar relacionado con la apa-rición de la enfermedad o con la evolución clínica de la misma.

En la presente comunicación se presentan varios pacientes con esteautoAc.1. Paciente diagnosticado de GNMP tipo II hace más de 25 años, en

el que se detectó la presencia de este autoAc durante 10 años. Unanálisis detallado de su especificidad ha mostrado la existencia deAc anti-C3 y anti-idiotipo. Recientemente, estudios genéticos eneste paciente han mostrado la existencia de dos mutaciones en elgen de factor H, análogas a las encontradas en pacientes con SHU.

2. Paciente diagnosticado de GNMP tipo II, presentaba además delautoAc un polimorfismo en factor B. En este paciente se observóque el efecto estabilizador en la C3 convertasa sólo se debía al C3Nef.

3. Se ha encontrado la presencia de C3Nef en al menos dos pacien-tes sin ninguna evidencia de glomerulonefritis. Una de las pacien-tes había sufrido meningitis y la segunda una neumonía con derra-me pleural.

4. Paciente con un pico monoclonal y un consumo elevado de todoslos componentes iniciales del complemento. La IgG purificada delsuero de esta paciente no es capaz de estabilizar la C3 converta-sa de la vía alternativa por lo que vamos a explorar si pudiera estardirigido frente a la C3 convertasa de la vía clásica o del complejode ataque.Estos resultados nos llevan a considerar que la desregulación indu-

cida por C3Nef podría tener distintos efectos fisiopatológicos lo queexplicaría su asociación con patologías variadas.

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DEFICIENCIA RECESIVA PARCIAL DE IFN-GAMMAR1 (IFN-GR1).Sologuren I1, García-Laorden I1, Santiago E1, Hernández-López J1, Domín-guez A1, Gonzalez-Quevedo N1, Chapgier A2, Florido Y1, Casanova J-L2,Rodríguez Gallego JC1. 1Servicio de Inmunología. Hospital Universitariode Gran Canaria Dr. Negrín, Las Palmas de Gran Canaria. 2Dpto. de Genéti-ca Humana de Enfermedades Infecciosas, Universidad René Descartes, Paris.

La deficiencia de IFN-γR1 se ha descrito en pacientes con infección gra-ve por micobacterias ambientales, BCG, o raramente por Mycobacteriumtuberculosis. No suele observarse otro tipo de infecciones, excepto salmo-nelas en algunos casos. La mayoría presentan un defecto recesivo comple-to (RC, 27 pacientes) o dominante parcial (DP, 54 pacientes). El defecto DPexpresa receptores anómalos que ejercen un efecto dominante, y respon-den a antimicobacterianos, y a IFN-γ. En ocasiones presentan recidivas. Enel defecto RC no se expresa el receptor o expresan receptores mutados queno unen IFN-γ, la micobacteriosis es crónica y no se resuelve con el trata-miento; el único tratamiento efectivo es el TMO, en su ausencia los pacien-tes fallecen antes de los 12 años. Se han descrito 3 pacientes con defectorecesivo parcial (RP) debido a la mutación I87T, clínicamente menos seve-ros que el defecto RC. Se presenta el estudio inmunológico y clínico de 6pacientes homocigotos para la mutación I87T y 4 pacientes homocigotospara V63G, la cual se creía que causaba un defecto RC. Se han desarrolla-do diversas técnicas que permiten afirmar que los homocigotos para V63Gpresentan un defecto RP. De los 10 pacientes, 4 presentaron BCGosis trasvacunación y 1 tuberculosis clínica. Los 6 pacientes con infección por mico-bacterias no-BCG presentaron la enfermedad con una media de 11±9 años(1,8-22 años). No se han observado recurrencias, y todos los pacientes hansobrevivido hasta una edad media de 15,6±11,4 años (5 son mayores de 21años). Sólo 1 paciente ha presentado salmonelosis. Como en el defecto DP,es frecuente la osteomielitis como única presentación, lo que no ha ocurri-do en ningún paciente con defecto RC. Esta IDP es más frecuente de lo sos-pechado inicialmente, puede debutar en edad adulta y no se aconseja TMO.En vista de las importantes implicaciones de pronóstico y tratamiento esindispensable un meticuloso diagnóstico inmunológico y molecular enpacientes con deficiencia de IFN-γR1.

AUTOINMUNIDAD Y CÁNCER EN LA DEFICIENCIA DEL RECEP-TOR BETA-1 DE LA IL-12 (IL-12RB1). ESTUDIO DE LINFOCITOSTH1, TH2 Y TH17. García Laorden MI1, Sologuren I1, Santiago E1, Cara-gol I2, Hernández-López J1, Florido Y1, Domínguez A1, Fieschi C3, Casa-nova J-L3, Rodríguez-Gallego C1. 1Servicio de Inmunología. Hospital Uni-versitario de Gran Canaria Dr. Negrín, Las Palmas de Gran Canaria. 2Servi-cio de Inmunología. Hospital Vall d'Hebron, Barcelona. 3Laboratory of HumanGenetics of Infectious Diseases, University of Paris René Descartes, Paris.

IL-12RB1 forma parte del receptor de la IL-12 y de la IL-23. Los pacien-tes con deficiencia de IL-12RB1 son susceptibles a infección grave pormicobacterias. La recurrencia es muy rara y la vacunación con BCG pare-ce prevenir de posteriores infecciones por micobacterias, sugiriendo laexistencia de repuesta secundaria. La salmonelosis es menos frecuente.En ratón, IL-12 e IL-12R son necesarios para la generación de linfocitosTh1, la IL-23 es necesaria para la expansión de linfocitos Th17, e IL-12/IFN-γ e IL-23/IL-17 están implicados en autoinmunidad y cáncer.

Se estudiaron 6 pacientes de dos familias con deficiencia de IL-12RB1. Cuatro presentaron infecciones diseminadas por salmonellasy uno por M. avium. Dos padecieron infección por M. tuberculosis(MTBC), y su hermana de 21 años, con la deficiencia, nunca ha presen-tado infecciones reseñables. Un paciente falleció a los 7 años con ane-

mia y trompocitopenia autoinmunes, y otro a los 29 años por carci-noma epidermoide de esófago. Los pacientes producían cantidadesnormales de IFN-γ en respuesta a PHA y BCG, aunque no respondíana IL-12, y prácticamente no se observó producción de IL-17. El análi-sis de Th1 y Th2 también mostró valores normales. Por otra parte, lapaciente sana presentó una alta producción de IFN-gamma y TNF-α.El estudio de linfocitos de memoria mostró que no se producía IFN-γen respuesta a S. enteritidis, toxoide tetánico y Cándidas, y el análisisde producción de IFN-gamma en repuesta a antígenos de M. tubercu-losis (Quantiferon TB-Gold) fue negativo en los tres pacientes de lafamilia con dos afectos de MTBC. La presentación de autoinmuni-dad y cáncer amplia el espectro clínico de la deficiencia de IL-12RB1.En humanos con ausencia de señalización IL-12 e IL-23, se observa trasactivación policlonal un número normal de linfocitos Th1, un profun-do defecto de Th-17, y no se observa incremento de Th2. No se ha detec-tado la presencia de células de memoria productoras de IFN-γ.

ESTUDIO DEL GEN TNFRSF13B EN LA INMUNODEFICIENCIAVARIABLE COMÚN. PAPEL DE LA MUTACIÓN p.C104R. Martí-nez-Pomar N1, Detkova D2, Arostegui JI3, Escobar D1, Ferrer J1, SerraA1, Vidaller A4, Soler P5, Vendrell M6, Alvarez A6, de Gracia J6, Cara-gol I2, Español T2, Yagüe J3, Matamoros N1, Hernández M2. 1Serviciode Inmunología. Hospital Son Dureta. Palma de Mallorca. 2Unidad de Inmu-nología. Hospital Vall d'Hebron. Barcelona. 3Servicio de Inmunología. Hos-pital Clinic. Barcelona. 4Servicio de Medicina Interna. Hospital Bellvitge. Bar-celona. 5Unidad de Inmunología Pediátrica. Hospital Vall d'Hebron. Barce-lona. 6Servicio de Neumología. Hospital Vall d'Hebron. Barcelona.

La inmunodeficiencia variable común (IVC) es la inmunodeficien-cia predominante de anticuerpos sintomática de mayor prevalencia.Aproximadamente el 10% de pacientes presentan mutaciones enTNFRSF13B que codifica para la proteína TACI. Se han identificado 17variantes alélicas, si bien, sólo se ha demostrado alteración en la expre-sión y/o funcionalidad de TACI en algunas de ellas (p. ej. p.C104R).

Objetivo. Analizar el gen TNFRSF13B en pacientes con IVC. Material y métodos. Secuenciación directa del gen de TNFRSF13B

en 98 IVC y en 198 controles sanos. Resultados. El análisis mutacional entre los pacientes identificó 4

individuos homocigotos y 2 heterocigotos sencillos para la mutaciónp.C104R y 1 individuo heterocigoto compuesto p.C104R/p.A181E. Entreotras variantes describimos 1 homocigoto y 2 heterocigotos para p.L171R;3 heterocigotos sencillos para cada una de las variantes: p.C89Y, p.E117G,p.E140K. El análisis de 29 familiares de primer grado de pacientes conla mutación p.C104R reveló dicha variante en 19 individuos sin pato-logía infecciosa (16 heterocigotos, 3 homocigotos y 1 heterocigoto com-puesto p.C104R/p.A181E). Los niveles séricos de IgG en 2 familiareshomocigotos y en el heterocigoto compuesto se hallaron en el límite infe-rior de la normalidad. El análisis de 198 controles sanos (Igs norma-les), reveló 5 individuos heterocigotos para p.C104R.

Discusión. Células B de pacientes homocigotos para p.C104R pre-sentaron alteraciones en su función (Saltzer et al). Garivan et al. sugirie-ron un efecto dominante-negativo para esta mutación en heterocigo-sis. Sin embargo, en nuestra serie de controles sanos y familiares de pri-mer grado, observamos un elevado porcentaje de heterocigotos (n=21)y homocigotos (n=3) sin expresión clínica, lo que indicaría que la muta-ción p.C104R tiene una penetrancia variable, secundaria a un sistemaredundante de señalización. Se está estudiando la posible relación delas variantes p.C89Y, p.E117G y p.E140K y la funcionalidad de TACI.

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ASOCIACIÓN FENOTIPO-GENOTIPO EN DOS CASOS DE SÍN-DROME DE INMUNODISREGULACIÓN, POLIENDOCRINOPA-TÍA Y ENTEROPATÍA LIGADA AL CROMOSOMA X (IPEX). Esco-bar D1, Álvarez Doforno R2, Julià MR1, Delgado Cerviño E2, Martí-nez-Pomar N1, Melgosa M2, Lamas R2, Rosell A3, Fontan CasariegoG2, Matamoros N1. 1Servicio de Inmunología. Hospital Son Dureta. Palmade Mallorca. 2Servicio de Inmunología. Hospital La Paz. Madrid. 3Servicio dePediatría. Hospital Son Dureta. Palma de Mallorca.

Introducción. IPEX es un síndrome secundario a mutaciones en FOXP3,ligado al cromosoma X, caracterizado por poliendocrinopatía autoinmu-ne en el primer año de vida, enteropatía y dermatitis eczematosa.

Caso 1. Varón: a los 2 meses enteropatía grave de evolución tórpiday dermatitis eczematosa. Requiere: corticoides, gammaglobulina intrave-nosa (IVIG) y tacrolimus. A los 6 meses: bacteriemias múltiples e hiper-glucemia ocasional controlada con insulina y posterior normalización.Evolución favorable. Tratamiento de mantenimiento: IVIG. A los 3 añosretraso pondoestatural, debut brusco diabetes insulino-dependiente.

Caso 2. Varón: a los dos meses enteropatía secretora; a los 5 añosdiagnóstico enteropatía autoinmune. Tratamiento: corticoides y ciclos-porina. Desaparición de la sintomatología digestiva, que reaparece alretirar la inmunosupresión. A los 19 años insuficiencia renal aguda.

Materiales y métodos. Secuenciación directa de FOXP3. Inmuno-fluorescencia, ELISA, nefelometría y citometría de flujo.

Resultados. Caso 1 linfopenia T, CD4CD25 1%. Hipogammaglo-bulinemia. IgE elevada (pico 13200 UI/ml); ANCA y AntiGAD: posi-tivos. Biopsia intestinal: atrofia de vellosidades. Mutación p.R397Q.Caso 2 CD4CD25 2%. Hipogammaglobulinemia. Antienterocito y anti-membrana basal tubular positivos. Biopsia renal: nefritis tubulointers-ticial aguda y nefropatía membranosa con IR. Mutación p.E249K.

Conclusiones. Presentamos 2 casos de IPEX con distinto fenotipoclínico. Caso 1. Enteropatía, dermatitis y diabetes mellitus. Evolu-ción tórpida desde la infancia. Inclusión en lista para TMO. Caso 2.Enteropatía desde la infancia, con evolución a brotes. Larga supervi-vencia. A los 19 años nefropatia autoinmune. Diagnóstico IPEX. Posi-ble relación fenotipo-genotipo: Caso 1: fenotipo severo, la mutaciónafecta al dominio forkhead que regula la transcripción. Caso 2: fenoti-po leve, larga supervivencia, una mutación en el motivo CC, posiblealteración parcial de la función proteica.

MUTACIÓN p.V131F EN LA REGIÓN TRANSMEMBRANAL DECD3G: ¿FACTOR DE RIESGO O POLIMORFISMO? Recio HoyasMJ1, Busto E1, Crespo A1, Pérez V1, Reiné J1, Allende L2, Moreno-Pela-yo MA3, Van Montfrans J4, Lefranc G5, Regueiro JR1. 1Inmunología. Facul-tad de Medicina. Universidad Complutense. Madrid. 2Inmunología. Hospi-tal 12 de Octubre. Madrid. 3Unidad de Genética Molecular. Hospital Ramóny Cajal. Madrid. 4Wilhelmina Children's Hospital. Utrecht. Holanda. 5Insti-tut de Génétique Humain. Montpellier. Francia.

Casos: 1) Paciente con clínica SCID, homocigoto para la mutaciónp.V131F en CD3G, familia consanguínea de origen libanés, fallece a los7 años de edad. La hermana, heterocigota para la mutación, presenta unaclínica y analítica similares. Respuesta T normal a mitógenos, pero dis-minuida frente a OKT3 y antígenos. Padres sanos, heterocigotos para lamutación. 2) Niño de 2 años de edad, heterocigoto para la mutación, fami-lia no consanguínea, que ingresa con un episodio severo de neumoníapor HHV-6. Niveles disminuidos de Igs y una leve linfopenia TCD4. Res-puesta T defectuosa frente a antígenos pero normal a mitógenos.

Filogenia. El hecho de que la mutación se encuentre en una posi-ción muy conservada a lo largo de la evolución desde peces y en unazona crucial para el ensamblaje del TCR, plantea la posibilidad de quepudiera ser un factor de riesgo. Por otro lado, el único individuo falle-cido al empezar el estudio era homocigoto para la mutación y además,aparece en heterocigosis en otro paciente de familia no relacionada,aunque con una clínica menos severa.

Fenotipo. Analizamos la conformación del TCR/CD3 en los lin-focitos T de los heterocigotos disponibles y observamos los niveles deexpresión de CD3 disminuidos. Este inmunofenotipo es similar alencontrado en los heterocigotos para mutaciones deletéreas en el genCD3G, lo que sugiere que p.V131F pudiera serlo también.

Genotipo. El estudio poblacional realizado en controles españolessanos muestra la presencia de p.V131F en homocigosis, lo que la descar-ta como causa de enfermedad, aunque no como factor de riesgo.

DESARROLLO DE VECTORES LENTIVIRALES TRANSCRIPCIO-NALMENTE REGULADOS PARA LA TERAPIA GÉNICA DEL SÍN-DROME DE HIPER IgM LIGADO AL CROMOSOMA X(XHIM1).Romero Z1, Unciti JD1, Carranza D1, Cobo M2, Martín F2, Molina IJ1.1Centro de Investigación Biomédica. Universidad de Granada. 2IPB "LópezNeyra" CSIC. Granada.

La terapia génica de las inmunodeficiencias primarias requiereel desarrollo de vectores seguros y eficientes que minimicen los efec-tos adversos de una expresión incontrolada del transgen. Esto es crí-tico en el desarrollo de terapia génica en el Síndrome de Hiper IgM(XHIM1). En efecto, la reconstitución de los progenitores hematopo-yéticos de ratones deficientes en CD40L con vectores retrovirales cons-titutivos consiguió una expresión del transgen en células periféricasque logró reconstituir la respuesta humoral y celular: No obstante,estos animales desarrollaron una severa enfermedad linfoproliferati-va tímica, de causa no definida pero ligada a la expresión no reguladadel transgen terapéutico. Por ello, nos hemos propuesto desarrollarvectores lentivirales transcripcionalmente regulados que produzcanuna expresión fisiológica y tejido-específica en células CD4+ de CD40L.Como punto inicial, hemos modificado nuestro vector lentiviral WW,que dirige la transcripción regulada hematopoyético-específico del genWAS a través de un fragmento proximal de 500 bp del promotor endó-geno del gen WAS. Hemos reemplazado en este vector el cDNA deWAS por el de CD40L, amplificado a partir de mRNA de linfocitos Tactivados, obteniendo así el vector lentiviral WCD40L. Como con-trol, hemos generado el vector lentiviral constitutivo SCD40L, en elque la expresión del trangen es controlada por el promotor constituti-vo SFFV. El empaquetamiento viral se realizó mediante cotransfecciónen células 293T del plásmido terapéutico más el plásmido contenien-do la envuelta VSVg y un tercero con gag-pol. Los sobrenadantes vira-les fueron titulados y se utilizaron para translucir un panel de célu-las hematopoyéticas y no hematopoyéticas, a fin de comprobar si elpromotor proximal de WAS es capaz de mantener la transcripción teji-do-específica de CD40L. El análisis de la expresión se realizó median-te citometria de flujo sobre células en las que en paralelo se determi-nó el número de inserciones del transgen mediante PCR en tiempo real.Los resultados obtenidos sugieren que el promotor proximal de WASconsigue su máxima regulación tejido-específica dirigiendo la trans-cripción del propio gen WAS, pero su eficacia para dirigir la expresiónregulada de otros genes específicos del linaje hematopoyético, comoCD40L, es menor.

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EXPRESIÓN DE WASP EN LINFOCITOS T DE PACIENTES CON SÍN-DROME DE WISKOTT-ALDRICH TRAS EL TRATAMIENTO CONINHIBIDORES DE LA CALPAÍNA Y EL PROTEASOMA. Zaldivar G1,Torres S1, Srivastava GK1, Vidal C2, Matamoros N2, Molina IJ1. 1Institutode Biopatología y Medicina Regenerativa, Centro Investigación Biomédica. Par-que Tecnológico de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada. 2Servicio deInmunología. Hospital Universitario "Son Dureta". Palma Mallorca.

El síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad ligadaal cromosoma X caracterizada por eczema, trombocitopenia e inmu-nodeficiencia progresiva. El gen mutado, WASP, codifica para la pro-teína WASP que es específicamente degradada por calpaína. La prote-ína WIP (WASP Interacting Protein) se une a WASP en su dominioEVH1, presente en el extremo N-terminal de WASP, y se ha demostra-do que las mutaciones por cambio de sentido que afectan a la zona deunión WASP-WIP dan como resultado que WIP no pueda unirse aWASP. Hemos postulado, por tanto, que WIP podría proteger a WASPde una degradación acelerada, y que por consiguiente, aquellos pacien-tes con mutaciones por cambio de sentido que afectan a la zona deinteracción con WIP podrían alcanzar niveles apreciables de WASPtras el tratamiento con inhibidores de la calpaína. Igualmente, WIPactúa como chaperona protegiendo a WASP a su paso por el proteaso-ma, por lo que estos mismos pacientes podrían beneficiarse de un tra-tamiento con inhibidores del proteasoma. Por ello, hemos secuencia-do a una serie de pacientes con sospecha de WAS y generado líneascelulares aloespecíficas de aquellos que presentaban mutaciones quedaban lugar a cambios de aminoácidos en la zona de interacción WASP-WIP. El análisis de la expresión de WASP se realizó mediante WesternBlot cuantitativo, encontrando niveles ausentes o muy reducidos deWASP. Las células T fueron tratadas con calpeptina (inhibidor de lacalpaína) o con Velcade o MG-132 (inhibidores del proteasoma). Laexpresión de WASP fue examinada por Western Blot tras 6 horas detratamiento con los mencionados agentes. Hemos podido comprobarque estos tratamientos conseguían alcanzar niveles de expresión deWASP en dos de los tres pacientes estudiados equivalentes al 25% dela cantidad de WASP encontrada en individuos sanos. El tercer pacien-te tiene una mutación en el nucleótido 336 T>G, lo que da lugar a uncambio en el AA 101 Leu>Prol. Esta mutación afecta a la zona final deldominio EVH1, y probablemente se encuentre fuera del lugar de aco-plamiento de WIP. Por tanto, el tratamiento con inhibidores de la cal-paína y proteosoma sólo sería efectivo en pacientes con mutacionesque afecten directamente a la zona de interacción WASP-WIP.

INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUN CON DISFUNCIÓNT, SÍNDROME LINFOPROLIFERATIVO, PANCITOPENIA Y SHUNTHEPATO-PULMONAR: ¿INDICACIÓN DE TRASPLANTE HEMA-TOPOYÉTICO? Sampalo A, Rodriguez-Gutierrez JF, Bernal MJ, Nie-to A, Fernandez-Valle C, Giron JA, Español T, Barrenechea C, Juliá A,Brieva JA. Servicios de Inmunología, Hematología y Medicina Interna. Hos-pital Puerta del Mar (Cádiz), Hospital Vall d´Hebron (Barcelona).

Mujer de 32 años diagnosticada hace 11 de IDVC por infecciones oto-sinusales de repetición que comienzan a partir de una mononucleosisinfecciosa de evolución torpida. Al diagnóstico presenta panhipogam-maglobulinemia (IgG 258 mg/dl; IgA: < 5 mg/dl, IgM: 9 mg/dl, IgE: <2 UI/ml), incapacidad de producción de anticuerpos, baja respuesta pro-liferativa T y ausencia de linfocitos B (<0.2%) . Tiene una hermana condeficiencia de IgA. El estudio fenotípico inicial confirma un perfil MB0

y una expansión de linfocitos T CD8 CD57+ DR+. Se inicia tratamientosustitutivo con IGIV, con adecuado control de las infecciones. A los dosaños debuta con episodios recurrentes de fiebre sin foco, plaquetopenia,neutropenia y anemia, coincidentes con expansiónes de T CD8 y conadenopatías, gran esplenomegalia e infiltración nodular en higado y riño-nes. Se realiza esplenectomía en un intento de controlar la plaquetope-nia. Dos años después desarrolla una neumonía por P. carinii (linfocitosT CD4: 723/mmc), corroborandose la disfunción T (muy bajas respues-tas proliferativas a PHA, IL2 y anti-CD3). Se detectan asimismo con-centraciones séricas muy elevadas de IL6, TNFalfa, IFNgamma y CD95L.En Diciembre de 2007 la paciente desarrolla una insuficiencia hepato-renal severa tras un episodio de diarrea, fiebre, pancitopenia y sínto-mas B, coincidentes con infiltración sistémica por linfocitos T CD8 decarácter oligoclonal. Los síntomas se atenuan con corticoides y se plan-tea la posibilidad de un Tx hematopoyético de hermano HLA-identico,como posible solución teórica a la inmunodeficiencia B y T y a la expan-sión de linfocitos T clínicamente agresiva. Se traslada al hospitalVall´d´Hebron para valoración, y se diagnostica un shunt hepato-pulmo-nar añadido. El shunt hepato-pulmonar es una patología de mal pronos-tico, habitualmente asociada a cirrosis y/o hipertensión portal, y que nose ha descrito en la IDVC. En este punto se replantea la idoneidad deTx hematopoyético versus inmunosupresión.

SESIÓN 6: CÉLULAS B Y NK

Moderadores: Dra. África González (Vigo), Dr. Miguel López-Botet (Barcelona)

LA LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA B MIGRA EN RESPUES-TA A LOS LIGANDOS DE CCR7 A TRAVÉS DE UN MECANISMODEPENDIENTE DE PI3K Y RHO. Cuesta Mateos C, Alfonso Pérez M,López Giral S, Muñoz Calleja C. Hospital Universitario de la Princesa.

Nuestro grupo de investigación ha demostrado que las neoplasiasde células B con amplia diseminación a ganglio linfático expresan altosniveles de los receptores de quimioquinas CCR7, CXCR4 y CXCR5,que median la entrada de los linfocitos en los órganos linfoides secun-darios. Los índices de migración de la leucemia linfática crónica decélulas B (LLC-B) en respuesta a los ligandos de CCR7, CCL19 y CCL21,correlacionan con la presencia de linfadenopatía clínica y medianteexperimentos in vitro demostramos que anticuerpos anti-CCR7 elimi-nan células de LLC y bloquean su migración.

El objetivo de este estudio es estudiar las vías de señalización quemedian la migración de células de LLC en respuesta a CCL19/21 dadala posible relevancia de CCR7 como diana terapéutica. Así, medianteensayos de inmunoblot y quimiotaxis in vitro, analizamos la partici-pación de las MAPKs, de PI3K y de la familia Rho de pequeñas GTPa-sas, que se encuentran entre los principales mediadores de la qui-miotaxis linfocitaria.

Los ligandos de CCR7 indujeron una fuerte activación de ERK1/2,y en menor medida de p38 y JNK, que sin embargo no jugaron ningúnpapel en la migración de células LLC. En cambio, las vías PI3K y Rhosí regularon la quimiotaxis dependiente de CCR7 de esta leucemia.Así, inhibidores de PI3K y del efector de Rho, ROCK, redujeron nota-blemente la migración celular de LLC en respuesta a los ligandos deCCR7. Ensayos de inmunoblot evidenciaron niveles de Akt constitu-tivamente fosforilado que aumentaron tras estimulación con CCL19/21.

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Confirmamos el papel de PI3K y Rho en la migración de LLC-B media-da por CCR7 mediante nucleofecciones transitorias con mutantes domi-nante negativo y constitutivamente activo de ambas moléculas.

Por tanto, la serín/treonín quinasa PI3K y la pequeña GTPasa Rhojuegan un papel primordial en la migración in vitro de la LLC en res-puesta a las quimioquinas homeostásticas CCL19/21, apoyando suposible participación en la infiltración ganglionar de esta leucemia.

AID, LA DEAMINASA INDUCIDA POR ACTIVACIÓN, ESHAPLOINSUFICIENTE. Vidal Sernández I, Rodríguez Ramiro A. Cen-tro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO).

En respuesta al antígeno, los linfocitos B tienen la capacidad úni-ca de remodelar somáticamente los genes de inmunoglobulinas (Igs)mediante dos mecanismos: hipermutación somática (SHM) y cambiode isotipo (CSR). Ambos son iniciados por la enzima Deaminasa Indu-cida por Activación (AID) a través de la deaminación de citosinas enel loci de Igs. Además, AID promueve la generación de translocacio-nes cromosómicas (TCs) linfomagénicas lo que tiene una enorme rele-vancia clínica, ya que la gran mayoría de los linfomas diagnosticadosen occidente se originan a partir de células B maduras. El estudio dela regulación de AID es por ello de vital importancia. Nuestro objeti-vo ha sido determinar si los niveles de expresión de AID son limitan-tes para su actividad.

Analizamos el efecto funcional de la dosis de AID usando linfoci-tos B de bazo de ratones AID+/+, AID+/- y AID-/- cultivados in vitroen condiciones que promueven el CSR. Observamos por citometríaque las células B que portan una copia única de AID reducen la eficien-cia de CSR un 50% respecto a cuando existen dos copias. Ocurre tan-to para el CSR a IgG1 como a IgG3.

Para conocer el efecto de la dosis de AID en la generación de lesio-nes linfomagénicas, estudiamos la generación de TCs c-myc/IgH enanimales transgénicos para IL6 y deficientes en p53. Nuestros resulta-dos indican que los ratones IL6tgAID+/-, a diferencia de los controlesIL6tgAID+/+, carecen de TCs distales Salfa y que la frecuencia de TCsproximales Smu está reducida al 50% en animales AID+/-p53+/-, conrespecto a ratones con dos alelos funcionales de AID (AID+/+p53+/–).

Concluímos que AID es haploinsuficiente, lo cual es excepcionalen genes que codifican actividades enzimáticas. Los niveles fisiológi-cos de AID están sometidos a una regulación estricta, probablementepara asegurar una respuesta humoral eficiente sin comprometer la esta-bilidad genómica de la célula B.

LOS MICRORNAS REGULAN LA GENERACIÓN DE CÉLULASB. Belver Miguel L, Rodríguez Ramiro A. Centro Nacional de Investiga-ciones Oncológicas (CNIO).

Los microRNAs (miRNAs) son moléculas pequeñas de RNA nocodificantes que actúan como reguladores de la expresión génica, inhi-biendo la traducción o induciendo la degradación de mRNAs. Los miR-NAs controlan importantes funciones celulares y su expresión aberran-te se ha ligado a procesos de transformación celular y linfomagénesis.

Los miRNAs se generan a partir de precursores de RNA de mayorlongitud que son procesados por la RNAsa Dicer. Para estudiar el papelde los miRNAs en la diferenciación y función de células B, hemos gene-rado ratones en los que el gen Dicer está eliminado específicamente encélulas B (Dicer-flox/flox CD19-Cre ki/+).

Nuestros resultados indican que la ausencia de miRNAs 1) blo-quea parcialmente la diferenciación de células B en la médula ósea, loque da lugar a una reducción de la población B en los tejidos linfoidesperiféricos, 2) las proporciones de las distintas poblaciones de linfo-citos B en bazo se encuentran alteradas, existiendo un incremento dela población de zona marginal y una reducción de la población folicu-lar, 3) las células deficientes para Dicer muestran también patrones dehiperactivación en placas de Peyer. Estos datos indican que los miR-NAs tienen un papel crucial en la diferenciación del linaje B y en lageneración de sus distintas subpoblaciones.

CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS DE LOS CUERPOS NUCLE-ARES EN LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA DE LINFOCI-TOS B. Góngora Fernández R, Martín Martín N, Alonso Chamorro L.Universidad de Salamanca.

Objetivos. Los cuerpos nucleares (NBs) son complejos proteicoscuyo significado funcional permanece todavía mal conocido, aunquepueden regular la expresión génica, y en consecuencia aspectos tanesenciales como el control de ciclo celular y la apoptosis. PML, el com-ponente prototípico de estos NBs es esencial en la ontogenia y apop-tosis de progenitores mieloides, y por otra parte, la proteína de fusiónPML-RXR es el agente causal de la leucemia promielocítica aguda, unaleucemia aguda mieloide. Nosotros hemos visto en ratón que PML noes esencial para el desarrollo y apoptosis de progenitores B, mientrasque Daxx otro componente de los NBs, si es esencial para la apoptosisinducida por interferón en estos progenitores. Nuestro interés actualse centra en estudiar la dinámica de los NBs en el crecimiento y apop-tosis de células con leucemia linfoblástica aguda (B-ALL) en el hom-bre, la vertiente tumoral de una normal ontogenia B.

Métodos. Nuestro interés se centró en el análisis de la línea celu-lar EU-12, que muestra distintas subpoblaciones de linfocitos B en con-tinua diferenciación. Se estudió la expresión y localización de proteí-nas de PML y Daxx en estas células, así como su comportamiento enapoptosis, mediante inmunofluorescencia y microscopía confocal.

Resultados. No se observó una obvia colocalización nuclear deDaxx y PML (como en progenitores mieloides), y la expresión y loca-lización de estas proteínas no se vio alterada en los mecanismos deapoptosis analizados. El interferón no indujo apoptosis ni la expresiónde Daxx (como en progenitores primarios de ratón).

Conclusiones. Los componentes de los NBs no se vieron afecta-dos en expresión/localización durante la diferenciación y apoptosisde estas células leucémicas. Los NBs podrían estar involucrados enel crecimiento aberrante de estos progenitores, pero se hace necesa-rio el estudio de progenitores leucémicos “frescos” obtenidos de pacien-tes y de progenitores normales en médula ósea.

CD38 IS RELEASED IN ASSOCIATION WITH CD81 AND HSC-70IN EXOSOMES IN HUMAN LYMPHOBLASTOID B CELLS. Zuma-quero Martínez EC1, Muñoz Fernández P1, Pavón Castillero EJ1, Gar-cía Pérez A1, García Veguillas A1, Sancho López J1, Zubiaur MarcosM1,2. 1Instituto de Parasitología y Biomedicina "López-Neyra". CSIC. 2Ins-tituto de Salud Carlos III.

CD38 a type-II transmebrane protein is specifically recruited tomembrane rafts in human lymphoblastoid B cell lines. We have iden-tified several cellular proteins that preferentially associate with CD38

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in the B cell membrane rafts: 1) CD38/CD19/Lyn; 2) CD38/CD81; and3) CD38/HSC70. These associations are dependent of membrane raftsintegrity since they are disrupted in the presence of 60 mM n-octyl-[beta]-D-glucopyranoside. Stress and tetrapanin proteins, includingHSC-70 and CD81, have been identified in a discrete population ofnano-vesicles (40-90 nm in diameter) called exosomes, which are secre-ted by a variety of cells including B cells. We set for to isolate exoso-mes from Namalwa B cells and demonstrate that CD38 is released inassociation with these vesicles. Examining multiprotein complexesfrom CD38-exosomes vesicles we found that are enriched in HSC-70,Lyn and CD81. Our results present evidence supporting i) the expor-tation of CD38 out of the cells through the exosome pathway, and ii)the identification in membrane rafts and in exosomes of key signalingcomponents of CD38-protein complexes.

LA DUPLICACIÓN DE LOS GENES KIR2DL5-KIR2DS3 FACILI-TA LA GENERACIÓN DE HAPLOTIPOS CON NUEVAS DELECIO-NES Y DUPLICACIONES DE VARIOS GENES KIR. Ordóñez delValle D1, Meenagh A2, Gómez-Lozano N1, Castaño J1, Middleton D2,Vilches C1. 1Inmunología. Hospital Universitario Puerta de Hierro. 2N.Ireland Regional Histocompatibility and Immunogenetics Laboratory, Bel-fast, UK.

En el complejo KIR (19q13.4), los genes KIR2DL5 y KIR2DS3 estánlocalizados de manera consecutiva y muestran una fuerte asociaciónentre ellos. A lo largo de la evolución, se han producido recombinacio-nes que han resultado en la duplicación de ambos genes, formándo-se un grupo centromérico y otro telomérico de 2DL5-2DS3 separadospor otros cinco genes KIR. La duplicación debió haberse producido enun periodo reciente de la historia evolutiva humana, ya que ambosgrupos 2DL5-2DS3 difieren uno de otro en pocos cambios de nucleó-tido. La casi total identidad en las secuencias de ambos grupos de genesprobablemente facilite que se produzcan nuevas recombinaciones entreellos.

En este trabajo presentaremos la existencia de dos haplotiposinusuales (uno en una familia española y otro en una irlandesa), cuyoorigen aparente es una misma recombinación entre los dos grupos2DL5-2DS3. En el haplotipo de la familia española hay una deleciónde siete genes KIR localizados en la region central (100 kb aproxima-damente), que yuxtapone el gen 2DL5 centromérico con el gen 2DS3telomérico. El otro haplotipo presenta la duplicación de los mismosgenes que están delecionados en la familia española, formando unhaplotipo largo de 18 genes KIR.

CMV-SPECIFIC CD8 T CELLS ARE EXPANDED IN THE ELDERLY:EXPRESSION OF COSTIMULATORY MOLECULES AND NKASSOCIATED RECEPTORS. Pita ML1, Gayoso I1, Alonso C1, Peral-bo E1, de la Rosa O1, Casado JG2, Tarazona R2, Solana R1. 1Inmunolo-gía. Hospital Universitario Reina Sofia, Universidad de Córdoba. 2Unidad deInmunología, Universidad de Extremadura, Cáceres.

Immunosenescence is a complex series of alterations that are depen-dent not only on chronological ageing itself, but also on exogenous fac-tors such as persistent antigenic stress leading to chronic activation ofthe immune system. Ageing is associated with immunological chan-ges in the T cells primarily due to thymus involution resulting in adecreased production of naive cells. The decrease of naïve CD8 cells

in the elderly, likely as a consequence of thymus involution, accompa-nied by the expansion of effector and effector-memory cells is well esta-blished. Moreover, recent evidences also support that many alterationsobserved in the CD8 T cell compartment can be explained by the chro-nic activation of the immune system by latent viruses such as CMV.The possibility that this abnormal subset distribution is the consequen-ce of chronic antigen stimulation by latent viruses as CMV has beenpreviously proposed by ourselves and others. The relevance of CMVin this process is underlined by the demonstration of oligoclonal expan-sion of CMV-specific CD8 T cells. However, it is unclear to what extentthe accumulation of CMV-specific CD8 T cells is a major factor contri-buting to the phenotypic changes found in CD8 T cells. The phenoty-pic analysis of CMV-specific CD8 cells has demonstrated that the pro-portion of cells coexpressing CD27 and CD28 is strongly decreasedin the elderly when compared with young individuals. Furthermore,the analysis of the differentiation stages defined by the combined useof CCR7 and CD45RA also showed that in elderly donors CMV-speci-fic CD8 T cells exhibit a phenotype associated with effector-memory(CCR7? CD45RA low) or effector (CCR7? CD45RA+) T cells, whereasin young individuals a significant proportion of CMV-specific CD8cells are included in the naïve subpopulation (CCR7+CD45RA+). The-se results indicate that the majority of CMV-specific CD8 cells in elderlyindividuals have effector-memory 2 and terminally differentiated effec-tor phenotypes. These cells also have an increased expression of NKassociated receptors. The findings that CMV-specific CD8 T cell phe-notype in elderly individuals is similar to the predominant phenoty-pe of CD8 T cells in the elderly and that the accumulation of CD28nullT cells expressing CD57 and CD56 is preferentially observed in CMV-seropositive elderly suggest that the latent infection with CMV can beconsidered a major factor contributing to the differentiation of CD8 Tcells to poorly functional senescent cells with an effector-memory 2phenotype.

LOS iNKRs REGULAN LA PRODUCCIÓN DE IFN-γ INDUCIDATRAS LA ACTIVACIÓN DE CÉLULAS NK CON DENDÍTICASINMADURAS O PRODUCTOS VIRALES. Morel Bárcena E, BellónHeredia T. Hospital Universitario La Paz.

Las células Natural Killer (NK) se activan en respuesta a patóge-nos, tumores y transplantes de células hematopoyéticas alogénicas.Sus funciones principales son: citotoxicidad y producción de citoqui-nas, principalmente IFN-γ. Se ha descrito que la interacción de célulasNK y dendríticas inmaduras (iDCs) conduce, a través de la señaliza-ción de NKp30, a una importante liberación de esta citoquina. Ade-más, las células NK pueden participar en la respuesta contra infeccio-nes virales mediante el reconocimiento directo, a través de los Toll-likereceptors (TLRs), de productos virales. Así, el agonista de TLR3 polyI:C sinergiza con IL-12 para inducir la secreción de IFN-γ. La respues-ta NK se regula a través de receptores específicos de moléculas delcomplejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I. En huma-nos existen tres familias: KIRs (killer cell Ig-like receptors), LIRs/ILTs(leukocyte Ig-like receptor/ Ig-like transcripts) y los heterodímeros dela familia de las lectinas CD94/NKG2. El papel que desempeñan losreceptores NK inhibidores (iNKRs) en el control de la citotoxicidad hasido ampliamente estudiado; pero existen pocos trabajos acerca delefecto que puedan tener en la liberación de citoquinas. Por tanto, seestudió el posible papel regulador de los iNKRs sobre la producciónde IFN-γ inducida en células NK tras la interacción con iDCs alogé-

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nicas o mediante el tratamiento con poly I:C. La concentración de IFN-γ liberado al medio se cuantificó mediante Cytometric Bead Array FlexSet (CBA). Los resultados indican que CD94/NKG2A e ILT2/CD85jregulan la producción de IFN-γ inducida tras el cocultivo con iDCs alo-génicas o estimulada específicamente a través de NKp30 en un siste-ma libre de células. Finalmente, se comprobó que los iNKRs modulanla producción de IFN-γ en NKs estimuladas con poly I:C y dosis subóp-timas de IL-12. Los resultados sugieren los iNKRs participan en la regu-lación de la producción de IFN-γ inducida por iDCs o ligandos de TLRsa través del reconocimiento de moléculas del MHC de clase I.

EXPRESIÓN Y LOCALIZACIÓN INTRACELULAR DE LAS PROTE-ÍNAS v-SNARE DE LA VÍA EXOCÍTICA EN LAS CÉLULAS NKHUMANAS. Delgado-Pérez L, Campos-Caro A. Hospital U. Puerta del Mar.

El principal mecanismo por el que las células NK ejercen su activi-dad citotóxica es la exocitosis de los lisosomas de secreción. Existen variasenfermedades hereditarias en las que este proceso se encuentra altera-do y entre ellas la causada por la mutación del gen de la sintaxina 11 -un miembro de la familia de proteínas SNARE (Soluble N-ethylmalei-mide-sensitive factor Attachment protein REceptors)- y la causada porla mutación del gen de la munc13-4 –un regulador de las proteínas SNA-RE-. Sin embargo, y a pesar de que las proteínas SNARE se consideranen eucariotas los mediadores universales de la fusión entre membranas,se desconoce qué miembros de esta familia de proteínas participan enla exocitosis citotóxica de las células NK. Este trabajo se centró en la fami-lia VAMP (vesicle-associtated membrane protein) cuyos miembros cons-tituyen habitualmente el componente v del complejo SNARE. Se estu-diaron células NK aisladas de sangre periférica así como líneas celula-res NK. Se identificaron los transcritos primarios (RT-PCR) y las prote-ínas (western blot) correspondientes a varios SNARE previamente iden-tificados como elementos de la vía exocítica en otros tipos celulares deorigen hematopoyético: VAMP-2, 7 y 8. Además, se confirmó su expre-sión y se determinó su localización mediante microscopía de fluorescen-cia confocal. Destaca la localización ampliamente coincidente de VAMP-7 con los gránulos citotóxicos, en consonancia con estudios previos deotros autores. En conclusión, las células NK humanas expresan las pro-teínas v-SNARE VAMP-2, VAMP-8 y VAMP-7, y la localización intrace-lular de esta última sugiere un posible papel de la misma en la exoci-tosis de los lisosomas de secreción.

SESIÓN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL - II

Moderadores: Dr. Federico Garrido (Granada), Dr. Luis Álvarez Vallina (Madrid)

REGULACION PROTEOLITICA DEL FACTOR DE TRANSCRIP-CION STAT6 POR AGENTES ALQUILANTES. Perez-G M, CortesJR, Rivas MD, Borrega P, Zamorano J. Hospital San Pedro de Alcantara.

El factor de transcripción STAT6 se ha implicado en diversas enfer-medades por lo que la investigación de compuestos capaces de regu-lar su activación tiene importancia biológica y médica. La activaciónde STAT6 está estrechamente regulada por quinasas, fosfatasas y pro-teasas. En este estudio, se pretendió inicialmente investigar la utilidadde inhibidores de proteasa en la regulación de STAT6. Entre los inhi-

bidores analizados, se encontró que la clorometilcetona TPCK inhibíala activación de STAT6 dependiente de IL-4. Sorprendentemente, estainhibición estaba acompañada por la pérdida de proteína de STAT6por un mecanismo sensible al inhibidor de serina-proteasas AEBSF.Sin embargo, este efecto de TPCK no parecía estar mediado por la inhi-bición de proteasas puesto que múltiple inhibidores de proteasas notenían efecto en la expresión de STAT6. Los datos encontrados indicanque el efecto de TPCK fue mediado por su actividad alquilante. Así,compuestos reactivos con cisteínas y tiol antioxidantes previenen ladegradación de STAT6 inducida por TPCK. Además, otros agentesalquilantes como la mecloretamina también inducen la pérdida deSTAT6. De hecho, tratamientos conteniendo ciclofosfamida disminu-yen la expresión de STAT6 como se observó en células obtenidas depacientes con cáncer de mama. Análisis de otras moléculas indican quelos agentes alquilantes promueven la pérdida de otros miembros de lafamilia STAT pero no de Shc y c-Rel. Estos datos revelan un novedosomecanismo por el que agentes alquilantes pueden promover la degra-dación de factores de transcripción STAT, lo que podría ser relevantepara comprender su mecanismo de acción.

ACTIVACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE LAS UL16-BINDING PRO-TEINS POR HDAC2 Y REPRESIÓN POR HDAC3 EN TUMORESEPITELIALES. González Rodríguez S, Rodríguez Folgueras A, Seto E,López Soto A. Universidad de Oviedo.

Las ULBPs son ligandos del receptor activador NKG2D presenteen las células T y NK. La expresión de las ULBPs se induce en célulasestresadas, infectadas y transformadas, marcando a estas células paraser eliminadas por el sistema inmune. En este trabajo caracterizamosque los mecanismos epigenéticos desempeñan un papel esencial en larepresión de la expresión de ULBP1-3. Nuestros resultados muestranque los promotores de las ULBP1-3 no están metilados, pero que laestructura de la cromatina desempeña un papel crucial en su expre-sión. Hemos caracterizado que la desacetilasa de histona HDAC3 seune a los promotores de ULBP1-3 y reprime de una forma muy sig-nificativa la trascripción de estos genes. La sobreexpresión de HDAC3,que se observa frecuentemente en tumores de pacientes con cáncer decolon y diversos tumores epiteliales, reprime la expresión de ULBP1-3; mientras que el bloqueo de su expresión usando siRNA induce sig-nificativamente su expresión. Mediante análisis de sus regiones pro-motoras y técnicas de inmunoprecipitación de cromatina caracteriza-mos que HDAC3 reprime la expresión de las ULBP1 por la interaccióncon los factores de trascripción Sp1/Sp3. Significativamente, HDAC2desempeña un papel opuesto al de HDAC3, ya que induce la expre-sión de las ULBPs. Esto sugieren que dado que diferentes desacetila-sas de histonas desempeñan un papel opuesto en la expresión de lasULBPs sería necesario desarrollar inhibidores específicos para cadaHDAC para mejorar su eficacia terapéutica.

ERp5 SE ASOCIA EN LA MEMBRANA DE LAS CÉLULAS TUMO-RALES CON MICA Y PARTICIPA EN SU LIBERACIÓN COMOFORMA SOLUBLE. González Rodríguez S1, Kaiser BK2, Yim D2, ChowI-T2, Dai Z2, Mann HH2, Strong R2, Groh V2, Spies T2. 1Universidad deOviedo. 2Fred Huthcinson Cancer Research Center, Seattle, USA.

MICA es un ligando del receptor activador NKG2D. La expresiónde MICA se induce en células tumorales por el daño genotóxico y el

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estrés celular, causando la activación de las céluas NK y la coestimu-lación de los linfocitos T. En tumores avanzados, MICA es liberado enforma soluble de la superificie celular por proteolisis. MICA solubleinhibe la respuesta inmune mediada por NKG2D y favorece la activa-ción de linfocitos T NKG2D+CD4+ con características inmunosupre-soras, lo que favorece la evasión inmune de las células cancerígenas.En este trabajo demostramos que MICA está asociado en la superfi-cie de las células tumorales con la isomerasa disulfuro ERp5. La inhi-bición farmacológica de la actividad tioreductasa y el silenciamientode la expresión de ERp5 indican que la actividad de ERp5 es esencialpara la liberación o “shedding” de MICA soluble. ERp5 y MICA for-man complejos transitorios mediante la formación de enlaces disulfu-ro en la membrana de las células tumorales, de los cuales es liberadoMICA soluble después del procesamiento proteolítico en el dominioα3 próximo a la membrana celular. La reducción de un enlace disulfu-ro aparentemente inaccesible en el dominio α3 de MICA por ERp5 pro-duce un cambio conformacional que permite la digestión proteolíticade MICA. Estos resultados describen un nuevo mecanismo por el quese forma MICA soluble, promoviendo de esta manera la evasión de larespuesta inmune. Además identifica ERp5 como una diana.

INTERACCIÓN ENTRE REGULADORES DEL CICLO CELULARY DE LA APOPTOSIS EN EL DESARROLLO DE AUTOINMUNI-DAD Y LINFOMA. Santiuste I1, Iglesias M1, Buelta L3, Sánchez M2,Tamayo E4, Merino J4, Merino R4. 1Instituto de Biomedicina y Biotecno-logía de Cantabria. 2Sección de Inmunología, Hospital Universitario Mar-qués de Valdecilla. 3Departamento de Ciencias Médicas y Quirúrgicas, Uni-versidad de Cantabria. 4Departamento de Biología Molecular, Universidad deCantabria.

En el desarrollo de enfermedad autoinmune participan conjun-tamente múltiples factores genéticos, epigenéticos y ambientales. Elacúmulo de un número suficiente de estos factores por encima de undeterminado umbral impacta sobre los mecanismos que regulan latolerancia inmunológica hacia lo propio. Además, muchas de las ano-malías genéticas que promueven el desarrollo de patologías autoin-munes, también están involucradas en la aparición de neoplasias lin-foides. Sin embargo, la relación causa-efecto entre autoinmunidad ycáncer aun no se ha clarificado. En el presente estudio, se ha analiza-do la posible interacción entre anomalías en la regulación del ciclo celu-lar y de la apoptosis linfocitaria sobre el desarrollo de autoinmunidady linfomas en ratones C57BL/6 (B6), no susceptibles a autoinmunidad.Para ello, ratones B6 deficientes en p21 (CIP1/WAF1) (B6-p21-/-), quedesarrollan espontáneamente un cuadro autoinmune ligero, se cruza-ron con ratones B6 que sobre-expresan un transgén (Tg) de la molécu-la anti-apoptótica Bcl-2 humana (hBcl-2) en linfocitos B, obteniéndose4 tipos de ratones B6: p21+/+-hBcl-2-; p21+/+-hBcl-2+; p21-/--Bcl-2-y p21-/--Bcl-2+. Se ha analizado el desarrollo de lupus en los 4 gru-pos, estudiando los niveles séricos de autoanticuerpos en suero, la apa-rición de nefropatía y la supervivencia de los animales. Nuestros resul-tados muestran que, en comparación con los ratones B6 normales o losmutantes simples, los mutantes dobles p21-/--hBcl-2+ presentan títu-los elevados de anticuerpos anti-DNA circulantes a los 8 meses de edady desarrollan una glomerulonefritis severa a los 10 meses de edad, loque acelera su mortalidad. Así mismo, los ratones B6 mutantes doblesp21-/--hBcl-2+, a diferencia de los Tg simples y no Tg, presentan unaincidencia muy alta de linfomas de células B. Estos tumores son poli-clonales, de aspecto plasmocitoide, tienen desregulada la expresión de

c-myc y presentan traslocaciones cromosómicas t(12:15). En conclu-sión, nuestro estudio muestra la existencia de sinergias entre alteracio-nes en la regulación del ciclo celular y de la apoptosis linfocitaria en eldesarrollo de patologías autoinmunes y linfoproliferativas.

ANTICUERPOS ANTI-SOX1 COMO MARCADOR DE PARANE-OPLASIA EN EL SÍNDROME MIASTÉNICO DE LAMBERTEATON. Sabater L, Titulaer M, Saiz A, Verschuuren J, Gure AO, GrausF. Servicio de Neurologia, Hospital Clínic, Universidad de Barcelona, Insti-tut d' Investigació Biomèdica August Pi i Sunyer (IDIBAPS). Departmentof Neurology, Leiden, University Medical Center, The Netherlands Molecu-lar Biology and Genetics Department, Bilkent University, Ankara, Turkey

El síndrome miasténico de Eaton-Lambert (LEMS) es un desordende la transmisión neuromuscular mediado por anticuerpos contra cana-les de calcio. El origen de la enfermedad, en el 50% de los pacientes,es paraneoplásico, esto es, existe una neoplasia subyacente que provo-ca el síndrome neurológico, generalmente cáncer de pulmón de célu-la pequeña (CPCP).

Actualmente no existe ningún marcador biológico eficaz para pre-decir los pacientes de LEMS que desarrollarán cáncer.

Previamente encontramos que el 43% de pacientes con LEMS yCPCP tenían un anticuerpo, que llamamos AGNA (anti-glial nuclearantibody), definido por la inmunoreacción con los núcleos de la gliade Bergmann del cerebelo. Este estudio se abordó para identificar elantígeno reconocido por AGNA y para confirmar la asociación con elLEMS paraneoplásico en una serie mayor de pacientes. Cribamos unagenoteca de cDNA de cerebro fetal con sueros positivos para AGNA.La presencia de anticuerpos contra el antígeno aislado se detectó porinmunoblot de calvas de lisis de fagos de dos clones positivos. Estu-diamos 105 pacientes con LEMS (55 con CPCP). Como resultado delcribaje de la genoteca de expresión de cerebro fetal con sueros AGNAaislamos el gen SOX1, un antígeno tumoral altamente inmunogénicoen CPCP. La elución de la IgG que se unía a los clones SOX1 produ-cía la misma immunoreactividad cerebelar que los sueros AGNA. Losanticuerpos SOX1 estaban presentes en el 64% de los pacientes conLEMS y CPCP y en ninguno de los pacientes LEMS idiopáticos(p<0.0001). La detección de los anticuerpos SOX1 en pacientes conLEMS predice la presencia de CPCP y puede usarse para un segui-miento más preciso de aquellos pacientes con LEMS sin evidencia decáncer al inicio de la enfermedad.

GENERACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ANTICUERPOSRECOMBINANTES HUMANOS FRENTE AL RECEPTOR DELDOMINIO GLOBULAR DEL SUBCOMPONENTE DEL COMPLE-MENTO 1Q (GC1QR). Sánchez-Martín D1, Fogal V2, Ruoslahti E2,Álvarez-Vallina L1. 1Unidad Inmunología Molecular, Hospital Universita-rio Puerta de Hierro, Madrid. 2Burnham Institute for Medical Research (atUCSB), University of California, Santa Barbara, CA, USA.

El receptor para el dominio globular de C1q (gC1qR/p33) es unaproteína celular expresada de forma ubicua que también se encuentraen el plasma y en la matriz extracelular. Además de su implicación enla modulación de la activación del sistema de complemento y la cas-cada de quinina, gC1qR se ha identificado como un ligando putativode patógenos endovasculares y como potencial diana antitumoral enun modelo experimental con ratones inmunodeficientes portadores de

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tumores humanos —MDA-MB-435— en los que, al ser tratados conanticuerpo policlonal de conejo frente a la región aminoterminal degC1qR (obtenido por la inmunización con secuencias peptídicas corres-pondientes a esa región), se observó una disminución significativa delcrecimiento tumoral.

El presente estudio tiene como objetivo la obtención de una colec-ción de anticuerpos humanos en formato de fragmentos variables decadena única (scFv – single chain Fragment variable) empleando latecnología de exposición de bibliotecas combinatorias en la superficiede fagos filamentosos. Tras dos rondas de selección con la bibliotecaGriffin.1 (de origen humano y con una diversidad de 1.2x109 clonesdistintos) frente a gC1qR recombinante humano se obtuvo un sesentapor ciento de clones con capacidad de reconocimiento del antígeno,seleccionándose diez anticuerpos distintos –con representantes de lasprincipales familias de cadenas: IGHV1, IGHV3, IGLV1 e IGLV3, asícomo un clon perteneciente a la familia IGHV4– para estudios preli-minares de especificidad y características de unión mediante ELISA.Tres anticuerpos, sintetizados en formato soluble y purificados, hanmostrado su capacidad para detectar la proteína en la superficie delíneas celulares por citometría de flujo. Actualmente se está estudian-do el posible efecto terapéutico en modelos animales portadores detumores humanos así como su valor diagnóstico empleando herra-mientas de imagen molecular in vivo.

EL CANCER RENAL SE ASOCIA A UN INCREMENTO EN LAEXPRESION DE MOLECULAS HLA DE CLASE I. Sáenz-LópezGarrocha P, Vazquez F, Rodríguez AI, Jiménez P, Cózar JM, Tallada M.Hospital Universitario Virgen de las Nieves.

Una de las características de las células tumorales es la adquisi-ción de un estado de baja inmunogenicidad al que contribuyen fac-tores intrínsecos de la célula tumoral y factores extrínsecos, por undeterioro progresivo, al menos “in situ”, de la respuesta inmune anti-tumoral. El mecanismo mejor estudiado, y que contribuye a esta bajaInmunogenicidad son las alteraciones en la expresión de antígenosHLA de clase I y en la maquinaria de presentación antigénica.

Hemos observado que la transformación celular en el epitelio tubu-lar renal, lleva aparejada un incremento en la expresión de los nive-les de mRNA de la cadena pesada y de b2m . Este incremento de expre-sión se correlaciona con la mayor expresión de citoquinas proinflama-torias. Estos hallazgos en cáncer renal difieren de lo encontrado en unavariedad amplia de tumores, que cursan con alteraciones frecuentesen la expresión de antígenos HLA de clase I. En nuestro estudio hemosquerido analizar, por inmunohistoquímica, la expresión HLA de claseI en tejido normal y neoplásico en 93 casos de tejidos tumorales deriñón de pacientes y 29 muestras de tejido normal.

Nuestros resultados confirmaron, el análsis previo a nivel de RNAsobre muestras microdisectadas: la mayoría de los tumores expresa-ron moléculas HLA de clase I en la superficie. La expresión detecta-da en tejido neoplásico, contrastó en intensidad y homogenidad conlo observado a nivel de los túbulos en las muestras de riñon normal.Sólo en un 16% de las muestras de tejido normal, se detectó expresiónde moléculas HLA. Es probable que el incremento en la expresión demoléculas HLA de clase I sea inducido por la mayor infiltración linfo-citaria en el tejido neoplásico. Si el incremento en la expresión obser-vada es una estrategia para evadir la respuesta de células NK (que seencuentran en un número elevado en el infiltrado del cáncer renal)es algo que quedaría por demostrar.

POLIMORFISMO DE LA REGIÓN TRANSMEMBRANA DEL GENMICA EN CÁNCER DE MAMA ESPORÁDICO. Lavado Valenzue-la R1, Bravo Romero MJ1, Benavides Orgaz M2, Alés Díaz I2, CobosDols M2, Alonso Ortiz A1, Caballero González A1. 1Servicio de Inmuno-logía. 2Sección de Oncología Médica. Hospital R. U. Carlos Haya.

Introducción. La respuesta antitumoral la realiza sobre todo lainmunidad innata (NKT, NK y células T ?/?). Las células tumoralesson reconocidas por el sistema inmune a través de receptores comoNKG2D. MICA es un ligando de este receptor y se expresa en célulasestresadas, tales como células transformadas. MICA es muy polimór-fico. Su exón 5 codifica el dominio transmembrana que tiene un STR(repeticiones GCT), que da lugar a los alelos A4, A5, A6 y A9. El aleloA5.1 produce una forma soluble de la proteína.

Objetivo. Analizar el polimorfismo de la región transmembranade MICA en pacientes con cáncer de mama esporádico.

Material y método. Se incluyeron 110 pacientes de la provincia deMálaga y 121 controles sanos de la misma región geográfica. El aná-lisis del STR se hizo por PCR y análisis de fragmentos en secuenciadorautomático.

Resultados. Al comparar pacientes y controles, sólo se obser-varon diferencias en la frecuencia del alelo MICA-A5, la cual seencontró reducida en pacientes frente a controles (11% vs 20%, X2(1 d.f.)=6.971; p=0.008). Dado que se había descrito una asocia-ción entre HLA-B7 y cáncer de mama en nuestras pacientes, se ana-lizó la frecuencia de los alelos MICA en pacientes con HLA-B7 fren-te a controles HLA-B7. Se encontró que la frecuencia del alelo MICA-A5.1 era mayor en pacientes que en controles (58% vs 16%, X2 (1d.f.)=15.776; p=0.0002). Al comparar la frecuencia del alelo MICA-A5.1 en pacientes HLA-B7 y pacientes con otros alelos de HLA-B,los resultados mostraron que se encontraba aumentada en pacien-tes HLA-B7 (58% vs 22%, X2 (1 d.f.)=20.837; p=0.00005). Esta dife-rencia no se encontró en controles sanos. Se observó que el 100% delas pacientes que portaban el alelo HLA-B7 también tenían el ale-lo MICA-A5.1.

Conclusiones. El alelo MICA-A5 parece conferir protección fren-te al cáncer de mama esporádico en nuestras pacientes. La combina-ción HLA-B7/MICA-A5.1 parece conferir susceptibilidad al cáncer demama esporádico en nuestra área geográfica.

CÉLULAS TUMORALES CON PÉRDIDA TOTAL DE EXPRESIÓNDE MOLÉCULAS MHC DE CLASE I MUESTRAN BAJA EXPRE-SIÓN DE LOS GENES: AP-2·, MYC, GLIS Y FHIT. Romero García I,Stefanski J, Berruguilla Pérez E, Linares Dickler I, Garrido C, Garri-do Torres-Puchol F, García Lora AM. Hospital Universitario Virgen delas Nieves.

En nuestro laboratorio, hemos generado un modelo tumoral murí-no compuesto por diferentes líneas celulares metastásicas derivadasde metástasis espontáneas generadas a partir de un mismo clon tumo-ral obtenido desde un fibrosarcoma inducido por metilcolantreno. Estaslíneas celulares metastásicas presentan diferente expresión en super-ficie de moléculas MHC de clase I, mostrando dos diferentes fenoti-pos: el primero presenta expresión en superficie de las moléculas declase I Kd, Dd y Ld; el segundo fenotipo H-2 se caracteriza por la pér-dida total de expresión de moléculas de clase I debida a una baja regu-lación coordinada a nivel transcripcioonal de varios componentes dela maquinaria de presentacion y procesamiento antigénicas (APM). En

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este estudio, teniendo en cuenta que todas las líneas metastásicas deri-van del mismo clon tumoral, analizamos los posibles genes que pue-den estar implicados en esta pérdida de expresión de varios compo-nentes de la APM.

Se ha realizado una librería de sustracción de cDNAs, así comomicroarrays, comparando las metástasis H-2 positivas con las H-2negativas. Los genes encontrados expresados diferencialmente, hansido analizados mediante RT-PCR cuantitativa utilizando sondas Taq-man.

En la librería de sustracción encontramos 12 genes expresados dife-rencialmente, entre los que debemos destacar cuatro: AP-2·, Myc, Glis1y Fhit. Estos genes eran expresados en las metástasis H-2 positivas ysu expresión disminuía en las metástasis H-2 negativas. Esta expresióndiferencial fue corroborada por RT-PCR a tiempo real. Estos resulta-dos podrian indicar una relación directa en tre la perdida de expresiónde estos genes y la perdida de expresión de los componentes de la APMy de las moéculas MHC de clase I. a continuación realizaremos estu-dios de transfección y de bloqueo de estos genes mediante siRNA parapoder determinar claramente su implicación en la expresión de molé-culas MHC de clase I.

SESIÓN 8: INMUNIDAD E INFECCIÓN

Moderadores: Dr. Francisco Lozano (Granada), Dra. Margarita Bofill (Barcelona)

LOS FAGO-RECEPTOSOMAS DE IFN-GAMMA/IL-6 SON COM-PARTIMIENTOS DE SEÑÁLIZACIÓN Y LISTERICIDAS. Fernán-dez Prieto L, Gomez Lopez MT, Madrazo Toca F, del Cerro Vadillo E,Alvarez Domínguez C, Carrasco Marin E. Hospital Universitario Mar-qués de Valdecilla-IFIMAV.

Los fagosomas son compartimientos intracelulares de destrucciónde Listeria monocytogenes; así si dichos fagosomas pertenecen a macró-fagos activados con ciertas citocinas su potencial listericida es más exa-cerbado. Aquí describimos una nueva ruta de señalización mediadapor Stat1 que implica a las citocinas: IFN-gamma e IL-6 y que se com-partamentaliza en fago-receptosomas de IFN-gamma/IL-6. Esta com-partimentalización permite que tanto la destrucción del patógeno, larespuesta immune específica y la regulación de la IL-6 queden ligadosen el mismo microambiente. La ruta listericida y compartimentaliza-da induce dos ondas de señalización Stat1-Rab5a dependientes y liga-das a la acción listericida de dos proteínas lisosomales; la esfingo-mielinasa ácida y la catepsina-D. Como parte de estas dos señales Stat1-dependientes se regulan positivamente los mediadores de la phox:p67phox/Rac2-GTP y se activa la iNOS fagosomal. Por otro lado, laactivación de Rab5a en esta vía, induce la transformación de dichosfago-receptosomas listericidas IFN-gamma/IL-6 en compartimientosde MIIC, donde se localizan moléculas MHC-II cargadas con péptidos,se degrada el antígeno listeriolina O y se detectan otros marcadoresMIIC como Lamp-2 y Limp-2, pero de forma independiente a Stat1.Nuestro grupo ha verificado la existencia de esta vía de compartimen-talización en macrofagos deficientes geneticamente en los posiblesmediadores iniciales de esta vía como Stat1 y Stat3 y mediadores fina-les como esfingomielinasa ácida, catepsina-D, Lamp-2 y Limp-2; locuál ha confirmado el papel de estos últimos en la inmunidad innatafrente a este patógeno.

NFAT5 PARTICIPA EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓNGÉNICA EN RESPUESTA A LA ACTIVACIÓN DE LOS RECEPTO-RES TIPO TOLL. Minguillón J1,2, Buxadé M1,2, Berga R1, Aramburu J1,López-Rodríguez C1. 1Unidad de Inmunología, Departamento de CienciasExperimentales y de la Salud (DCEX), Universitat Pompeu Fabra (UPF),Parc de Recerca Biomédica de Barcelona (PRBB), Barcelona. 2Estos autoreshan participado por igual en el trabajo presentado.

Los receptores tipo Toll (TLRs) participan directamente en la respues-ta inmune innata ya que, tras su activación por reconocimiento de patro-nes moleculares asociados a los patógenos, desencadenan una cascadade señales intracelulares destinada a la inducción de los genes responsa-bles de la respuesta inflamatoria contra los patógenos. Aunque el controltranscripcional de la expresión de genes proinflamatorios en respuesta apatógenos resulta clave, nuestro conocimiento de las interacciones mole-culares que ocurren a este nivel es todavía relativamente limitado.

En respuesta a la activación de los TLRs en células inflamatorias–macrófagos-, NFAT5 no sólo se induce, sino que además es reclutadoespecíficamente a las regiones que regulan la expresión de diferentesgenes proinflamatorios. Asimismo, los macrófagos derivados de médu-la ósea que carecen de NFAT5 son deficientes en la expresión (mRNAy proteína) de diferentes mediadores inflamatorios y antimicrobianosque se inducen tras la activación de los TLRs. Nuestro trabajo revela queNFAT5 actúa como un regulador transcripcional durante la activaciónde los TLRs y por lo tanto incrementa el conocimiento de los mecanis-mos moleculares que actúan durante esta respuesta.

VACUNAS: EL DIRECCIONAMIENTO AL RECEPTOR DE LA SIA-LOADHESINA MEJORA LA PRESENTACIÓN DE ANTÍGENO ALAS CÉLULAS T. Poderoso García T, Revilla Calvo C, Álvarez VegaB, Chamorro Pérez S, Martínez de la Riva S, Alonso Moreno F, Ezque-rra Martínez A, Domínguez Juncal J. INIA (Instituto Nacional de Inves-tigación y Tecnología Agraria y Alimentaria).

El principal objetivo de una vacuna es inducir una respuesta inmu-ne capaz de proteger de forma duradera frente un determinado pató-geno. Una de las estrategias que se están investigando para poten-ciar la respuesta frente antígenos poco inmunogénicos es el direccio-namiento de éstos a células presentadoras de antígeno (APCs), median-te su conjugación con anticuerpos específicos. La sialoadhesina (Sn) esun miembro de la familia de proteínas Siglec (sialic acid binding Ig-like lectins) cuya expresión está restringida a subpoblaciones de macró-fagos tisulares, monocitos inflamatorios y algunas células dendríticas.En este estudio hemos analizado la expresión de la sialoadhesina entejidos porcinos, su regulación por citocinas y su potencial como recep-tor para el direccionamiento antigénico. En el cerdo, la sialoadhesinase expresa en macrófagos de la zona marginal del bazo y en célulasdendríticas derivadas de monocitos cultivados con GM-CSF y IL-4(MoDC). Los monocitos sanguíneos (Mo) no expresan esta moléculapero puede inducirse mediante un tratamiento previo con IFN-a. Paraanalizar si el direccionamiento de antígeno hacia este receptor favore-ce la presentación a las células T, comparamos la respuesta prolifera-tiva obtenida con un anticuerpo monoclonal anti-Sn (1F1) con la obte-nida con una Ig control del mismo isotipo (1D9). Como células respon-dedoras se utilizaron células T sanguíneas de cerdos inmunizados conun pool de Igs de ratón y, como APCs, MoDc o Mo incubados con IFN-a. Para obtener niveles similares de proliferación se necesitaron de 100a 1000 veces menos cantidad de Ig control que de Ab anti-Sn. En con-

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sonancia con estos resultados, la incubación de macrófagos y MoDCcon mAb 1F1 y 1D9 marcados con Alexa 488 a 37ºC durante 30 minu-tos, demostró que la Sn es un receptor endocítico. Estos datos sugie-ren que el direccionamiento de antígenos hacia la molécula de Sn podríamejorar la eficiencia de su captación y/o procesamiento por las APCs.Actualmente se está evaluando el potencial in vivo de esta moléculacomo diana del direccionamiento de antígenos.

MECANISMOS DE ADYUVANCIA INMUNOLÓGICA: PAPEL DEGITR EN EL EFECTO PROADYUVANTE DE LA ENTEROTOXINATERMOLABIL DE ESCHERICHIA COLI. Tamayo E1, Postigo J1, San-tiuste I2, Riccardi C3, del Giudice G4, Merino R2, Merino J1. 1Departa-mento de Biología Molecular, Universidad de Cantabria. 2Instituto de Biome-dicina y Biotecnología de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDI-CAN. 3Departamento de Medicina Clínica y Experimental, Universidad dePerugia. 4Research Center, Novartis Vaccines.

La administración de antígenos proteicos en superficies mucosasinduce tolerancia sistémica a los mismos. Este efecto se evita administran-do determinados “adyuvantes orales”, como la enterotoxina termolabilde Escherichia Coli (LT) junto al antígeno vacunal. No obstante, el uso deLT en vacunación en mucosas se ve lastrado por su gran toxicidad y porel desconocimiento de los mecanismos inmunológicos implicados en suefecto adyuvante. Para investigar estos mecanismos se analizó la capaci-dad de LT para inducir la activación y proliferación de los linfocitos a dife-rentes periodos tras su administración por vía parenteral. El análisis dela expresión de diferentes marcadores de activación linfocitaria y de laincorporación de BrdU en linfocitos, muestra que LT induce selectiva-mente la expresión de GITR en linfocitos T, pero no su proliferación. Esteefecto es dependiente de la actividad mono-ADPribosiltransferasa de LT,dado que LTK63, un mutante atóxico de LT carente de esta actividad ycon un efecto pro-adyuvante reducido, no es capaz de inducir GITR enlinfocitos T. Así mismo, otro adyuvante inmunológico ampliamente uti-lizado en animales de experimentación como el adyuvante completo deFreund, tampoco induce la expresión de GITR en linfocitos T.

El tratamiento de ratones adultos con gammaglobulina humanamonomérica (GGHM) induce un estado de tolerancia linfocitaria queimpide la respuesta frente a la forma inmunogénica del antígeno, la gam-maglobulina humana agregada (GGHA). Usando este modelo experi-mental, observamos que LT, pero no LTK63, bloquea la inducción detolerancia a la GGH. Un bloqueo similar se observa si se administra DTA-1, un AcM agonista anti-GITR, al mismo tiempo que la GGHM. Por elcontrario, LT no bloquea la inducción de tolerancia a la GGH en ratonesdeficientes en GITR. En conjunto, nuestros resultados demuestran quela inducción de GITR en linfocitos T por LT constituye uno de los meca-nismos implicados en la actividad adyuvante de esta toxina.

RESPUESTA CELULAR INMUNE ESPECÍFICA AL VIRUS DE LAHEPATITIS C (VHC) EN PAREJAS HETEROSEXUALES DE PACIEN-TES INFECTADOS. Roque Cuellar MC1, Aguilar Reina J1, AlvarezMáquez MA2, García Lozano JR2, González Escribano MF2, Nuñez Rol-dan A2, Sánchez Sánchez B2. 1Sección de Hepatología. Servicio de AparatoDigestivo. 2Servicio de Inmunología. Hospital Universitario Virgen del Rocio.

En algunas series se ha encontrado respuesta inmune celular espe-cífica al VHC en parejas y familiares de pacientes con infección agudao crónica.

Objetivo. Conocer la prevalencia de la respuesta inmune de célu-las T frente al VHC en parejas heterosexuales de pacientes con hepa-titis crónica VHC.

Método. Se han incluido 30 parejas heterosexuales, sin Anticuer-pos-VHC ni ARN-VHC (PCR a tiempo real, Taqman, Roche y Elisa,Bep III, Dade Behring). Se realizó encuesta sobre riesgos de exposición.Además se estudiaron 15 pacientes en diferentes situaciones respectoal VHC (infección activa, respondedores y aclaramiento espontáneo)y 10 controles sanos. Para la detección de una población de células Tmemoria que responden a antígenos del VHC solubles, se partió desangre completa, que se enfrentó a los siguientes 6 péptidos del VHC:1)NS3 (aa 1241-1260); 2)NS3 (aa 1531-1550); 3 NS3 (aa 1581-1600);4)NS4b (aa 1771-1790); 5)NS5b (aa 2571-2590); 6)NS5b (aa 2941-2960).

Tras 6 horas de incubación en presencia de moléculas coestimula-doras y brefeldina A (BFA), se lisaron los hematíes y fijaron los leuco-citos, para proceder al análisis mediante citometría de flujo, donde seanalizaron la siguientes combinaciones: CD69/CD3; CD69/CD4;CD69/CD8; IFN?-IL-4/CD3; IFNγ-IL-4/CD4; IFNγ-IL-4/CD8. Todosestos datos se analizaron estadísticamente mediante el programa SPSSv.14.0 (H de Kruskal-Wallis y U de Mann Whitney).

Resultados. Los valores mayores que la media de los 10 controles,y mayores que la media más dos desviaciones estándar de los 10 con-troles para cada mezcla, fueron considerados positivos.

Se comprobó mayor activación de CD4+ frente al péptido 5) en pare-jas que en controles. Estos signos de respuesta inmune son significativa-mente mayores en pacientes que en controles, y se comprobó mayor por-centaje de células CD3+ y CD8+ que secretan IL-4 frente al péptido 3).

Conclusiones. Las parejas de pacientes infectados crónicamente porVHC muestran signos de haber entrado en contacto con el virus y de res-puesta inmune celular específica a péptidos VHC. El papel potencial de estarespuesta en la protección contra la infección por VHC es de gran interés.

LA APOPTOSIS DE LINFOCITOS MADUROS INDUCIDA PORLA TOXINA TERMOLABIL DE E. COLI IMPLICA TANTO A LOSRECEPTORES DE MUERTE EN MEMBRANA COMO A LA VIAMITOCONDRIAL. Postigo J1, Tamayo E1, Fernández-Rey M1, Meri-no R2, Merino J1. 1Departamento de Biología Molecular, Universidad de Can-tabria. 2Instituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria, CSIC-Uni-versidad de Cantabria-IDICAN.

En estudios previos hemos demostrado que la enterotoxina termo-labil de Escherichia Coli (LT) promueve apoptosis en linfocitos T y B inma-duros en el timo y médula ósea, respectivamente. Esta apoptosis noimplica a las vías de membrana de Fas o TNF, pero es inhibida tras lahiperexpresión de Bcl-2. Así mismo, demostramos que LT induce la secre-ción por las glándulas suprarrenales de niveles elevados de glucocor-ticoides que son los responsables directos de la apoptosis en linfocitosinmaduros. En vista de estos hallazgos, nos planteamos analizar en pri-mer lugar la posible participación de receptores de muerte diferentes deFas y TNFR, o de mecanismos independientes de la activación de cas-pasas mediados por AIF, en el efecto pro-apoptótico de LT sobre los timo-citos inmaduros (como ejemplo de linfocitos inmaduros). En segundolugar, analizamos si LT promueve también apoptosis en linfocitos T y Bmaduros y sus posibles mecanismos. Para ello, estudiamos el efecto pro-apoptótico de LT sobre timocitos y linfocitos T maduros en ratones defi-cientes AIF en linfocitos T o en Bim así como en animales transgénicospara un dominante negativo de FADD (FADD-DN Tg) en linfocitos T,que bloquea la apoptosis inducida por todos los receptores de muerte.

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Nuestros resultados muestran que la ausencia de AIF o la sobre-expre-sión de FADD-DN en timocitos no bloquea la apoptosis inducida porLT. La ausencia de Bim reduce significativamente esta apoptosis en con-cordancia con el papel regulador de Bcl-2 en la misma. Por el contrario,la apoptosis inducida por LT en linfocitos T maduros esta reducida enlos animales FADD-DN Tg a un nivel similar al observado en ratonesque sobre-expresan Bcl-2 en linfocitos T o adrenalectomizados. En estesentido, la inhibición fue completa en ratones FADD-DN/Bcl-2 doble-Tg. Estudios preliminares con ratones lpr o tratados con un mAb anti-TRAIL sugieren que el receptor Fas es el responsable de la muerte indu-cida por LT mediada a través receptores de membrana. En conclusión,nuestro estudio demuestra que LT promueve apoptosis de linfocitosmaduros e inmaduros mediante mecanismos diferentes.

CARACTERIZACIÓN DE LAS CÉLULAS PRODUCTORAS DE IL-10 EN ÓRGANOS LINFOIDES DE CERDOS AFECTADOS NATU-RALMENTE POR CIRCOVIROSIS PORCINA. Crisci E1, DomínguezJ2, Segalés J1,3, Montoya M1. 1Centre de Recerca en Sanitat Animal (CRe-SA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona, Bar-celona. 2Departamento de Biotecnología, Instituto Nacional de Investigacióny Tecnología Agraria y Alimentaria (INIA), Madrid. 3Department de Sani-tat i d’Anatomia Animals, Facultat de Veterinaria, Universitat Autònoma deBarcelona (UAB), Barcelona.

La circovirosis porcina es una enfermedad de distribución mun-dial que afecta a los cerdos. Se considera un proceso multifactorial cau-sado esencialmente por circovirus porcino tipo 2 (PCV2). Esta enfer-medad se caracteriza patológicamente por depleción linfocitaria e infla-mación granulomatosa en los órganos linfoides, y actualmente se sabeque el sistema inmune es clave en la patogénesis de la enfermedad.Estudios previos han revelado un perfil de citoquinas indicativo deinmunosupresión de células T, una discapacidad en la respuesta inna-ta y sugieren que la interleuquina 10 (IL-10) tiene una importante fun-ción durante el curso de la infección. El objetivo principal de este estu-dio fue caracterizar y localizar las subpoblaciones de células inmuni-tarias involucradas en la secreción de IL-10. Para ello, se usó la inmu-nofluorescencia indirecta en criosecciones de órganos linfoides (bazoy linfonodo mediastínico) de 4 animales sanos y 4 animales afecta-dos con la enfermedad. Los resultados obtenidos mostraron que lassubpoblaciones linfocitarias CD4+ y CD8+ producen IL-10 en los teji-dos estudiados, mientras que en las células presentadoras de antíge-no (MHCII+), los macrófagos/monocitos (CD163+) y los granulocitosno se detectó co-localización con la IL-10. Mediante el contaje visualde las células doblemente positivas, los resultados indicaron que elnúmero de células productoras de IL-10 es aproximadamente el dobleen los animales enfermos en comparación con los sanos. Este es el pri-mer estudio de caracterización de las células productoras de IL-10 enanimales con circovirosis porcina. Actualmente se está estudiando sucorrelación con la presencia de PCV2 en las mismas secciones.

NIVEL, FENOTIPO Y ACTIVACIÓN DE LAS CÉLULAS T REGULA-DORAS FOXP3+CD4+ EN PACIENTES CON INFECCIÓN POR LOSVIRUS DE LA HEPATITIS C Y/O VIH. Ibón Rallón N, López M, Soria-no V, García-Samaniego J, Romero M, Labarga P. Hospital Carlos III.

Introducción. Las infecciones por VIH y VHC pueden alterarla población de células T CD4+ reguladoras (Treg). Esta población

contribuye a la persistencia viral inhibiendo la respuesta inmunecelular específica. En este estudio se analiza el nivel, fenotipo y gra-do de activación de las Treg en pacientes con infección por VHCy/o VIH.

Métodos. Se estudiaron 91 pacientes: 20 controles, 20 pacientesVHC-/VIH+, 20 VHC+/VIH- y 31 coinfectados VHC+/VIH+. Las Tregse definieron como CD4+Foxp3+. El nivel, fenotipo (basado en CD25,CD45RA, CD27 y CD127) y el grado de activación (basado en CD38)de estas células fueron analizados por citometría de flujo de 5 colores.Las diferencias entre grupos se evaluaron con pruebas estadísticasno paramétricas.

Resultados. El nivel de Treg fue mayor en pacientes VIH+ que encontroles y que en pacientes VHC+/VIH- (p=0.01). Tanto en pacientescomo en controles sólo el 50% de las Treg expresaron CD25. El 95% delas Treg CD25+ tenían fenotipo CD45RA-CD127- en todos los grupos,mientras que las Treg CD25- fueron más heterogéneas en su fenoti-po. El 65% de las Treg fueron CD45RA- CD27+ (memoria central),sin diferencias entre controles y pacientes. Sin embargo, las TregCD45RA+CD27+ (naive) fueron menos frecuentes en pacientes que encontroles (p=0.04). La activación de las Treg fue mayor que la de célu-las CD4+ totales en todos los grupos (p<0.0001).

Conclusiones. La infección por VIH induce un incremento de lasTreg activadas. CD25 define dos poblaciones de Treg con diferente per-fil fenotípico. El nivel de Treg aumenta en paralelo a la disminuciónde CD4, lo que podría contribuir al curso acelerado de la lesión hepá-tica en pacientes VHC+/VIH+.

ESTIMACIÓN DE LA INFECCIÓN TUBERCULOSA EN DONAN-TES DE SANGRE DE LA COMUNIDAD DE CANTABRIAMEDIANTE LA DETERMINACIÓN DE IFN-GAMMA TRAS ESTI-MULACIÓN CON ANTÍGENOS DE MYCOBACTERIUM TUBER-CULOSIS. Villegas N1, Gonzalo Ocejo-Vinyals J1, Amunárriz C2, AusínF1, Leyva-Cobián F1, Arroyo JL2. 1Hospital Universitario Marqués de Val-decilla. 2Banco de Sangre y Tejidos de Cantabria.

Introducción. Las comunidades del norte de España, comoCantabria, junto con Portugal tienen la mayor incidencia y preva-lencia de infección tuberculosa en Europa. En los últimos años,la introducción de un ensayo para medir mediante enzimoinmu-noanálisis (ELISA) la producción específica de IFN-gamma (inter-feron-gamma release assay, IGRA) tras estimulación de las célulaslinfoides con antígenos de Mycobacterium tuberculosis, ha contri-buido a aumentar la sensibilidad y especificidad en el diagnósti-co inmunológico de la infección tuberculosa. Nuestro objetivo hasido utilizar el IGRA para conocer la prevalencia de la infecciónpor M. tuberculosis en la población sana donante de sangre de nues-tra Comunidad.

Materiales y Métodos. Se incluyeron en este estudio 167 donan-tes de sangre (111 varones, 56 mujeres) con edades comprendidasentre 19-65 años y que tras ser adecuadamente informados consin-tieron participar en este estudio. Todos fueron sometidos a los cues-tionarios y análisis habitualmente establecidos en un Banco de San-gre. Para este estudio, el IGRA utilizado fue el comercialmente cono-cido como QuantiFERON®-TB Gold In-Tube. Se obtuvieron tres mues-tras de sangre circulante en tubos estériles con vacío previo. Un tubocontenia antígenos de M. tuberculosis (ESAT-6, CFP-10 y TB 7.7), otrouna concentración óptima de fitohemaglutinina y un tercero sin adi-tivos. Todos los tubos se incubaron (37ºC, 16-24 hr) y tras centrifuga-

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ción (4oC, 15 min, 2,000 X g), se determinó la concentración de IFN-gamma presente en el plasma recogido mediante ELISA. Los resul-tados se interpretaron con un soporte informático proporcionado porel proveedor. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba de Chi 2con corrección de Yates o la prueba exacta de Fisher cuando fue nece-saria.

Resultados. De los 167 individuos analizados, 27 presenta-ban concentraciones elevadas de IFN-gamma y fueron considera-dos positivos (16,17%). No se encontró una diferencia estadística-mente significativa entre sexos (20 varones, 7 mujeres). Sin embar-go, si que existían diferencias significativas cuando se agruparonlos donantes en tres grupos de edad (18-35, 36-50 y 51-65 años) sien-do la prevalencia mayor en el grupo de más edad (prueba de homo-geneidad entre niveles, p = 0.02; prueba de tendencia lineal, p =0.006).

Conclusión. La utilización del IGRA supone una ventaja para eldespistaje de la infección por M. tuberculosis frente al método clásicode la intradermorreacción de Mantoux, pues aporta mayor sensibili-dad y especificidad. Los resultados de este estudio apuntan a una ele-vada prevalencia de infección tuberculosa en la población sana donan-te de sangre de Cantabria.

SESIÓN 9: CÉLULAS DENDRÍTICAS

Moderadores: Dr. Ángel Corbí (Madrid),Dr. Francisco Borrás (Barcelona)

MHC DE CLASE I PROTEGE DEL RECORTE POR AMINOPEPTI-DASAS DEL RETÍCULO ENDOPLÁSMICO IN VITRO. Infantes S1,Samino Y2, Lorente E1, Jiménez M1, del Val M2, López D1. 1Unidad deProteómica. 2Unidad de Inmunología Viral. Centro Nacional de Microbiolo-gía. ISCIII.

En la denominada vía clásica de presentación antigénica asociadaa moléculas MHC de clase I, las proteínas virales sufren diversos cor-tes proteolíticos que generan péptidos de diferente longitud, algunosde los cuales pueden ser posteriormente transportados al lumen delRetículo Endoplásmico (ER) en donde se encuentran expuestos a laactividad de aminopeptidasas del ER (ERAAP).

Actualmente, se han propuesto dos modelos diferentes para expli-car el mecanismo de acción de ERAAP. El primero denominado "mole-cular ruler" propone la unión del sustrato largo por sus extremos a laenzima. El carboxilo terminal interacciona con un “pocket” hidrofóbi-co y el amino terminal queda accesible al sitio activo de la enzima queva eliminado los residuos de forma no procesiva. Los productos fina-les de 9-10 aminoácidos se unirían después a MHC. El segundo mode-lo propuesto o “template model” supone que los precursores peptídi-cos largos se unen primero a MHC por su extremo carboxilo, dejan-do accesible su extremo amino protuberante a la actividad de la enzi-ma.

Hemos estudiado la degradación por ERAAP de un ligando natu-ral de 16 aminoácidos que es reconocido por linfocitos T citolíticos. Losdatos in vitro obtenidos indican que este péptido amino-protuberan-te es eficientemente recortado por ERAAP hasta el epítopo mínimo de9 residuos mientras se encuentra soluble y que su unión a la molécu-la de histocompatilibidad lo protege de la actividad proteolítica de laenzima.

LA EXPRESION DE LA MOLECULA MR1 (MHC-RELATED 1)HUMANA EN LA SUPERFICIE CELULAR NECESITA LIGANDOSQUE SON INDEPENDIENTES DE LA ACTIVIDAD DEL PROTE-ASOMA. Abos Gracia B, Gómez del Moral M, Gozalbo López B, Cede-nilla Horcajuelo M, Martínez Naves E. Universidad Complutense. Madrid.

Introducción. MR1 (MHC-related 1) es una molécula HLA de cla-se I no clásica que restringe el desarrollo de los linfocitos MAIT (Muco-sal Associated Invariant T cells), caracterizados por poseer un TCRinvariante. La función de las células MAIT se desconoce, pero parecentener propiedades inmunoreguladoras. Tampoco se conoce el ligandopresentado por MR1 a los MAIT.

Objetivos. Analizar la expresión de MR1 en la superficie celular,su dependencia de temperatura (como marcador de dependencia deligando) y de la actividad del proteasoma.

Metodología. La expresión celular de MR1 se analizó mediantetécnicas de citometría de flujo e inmunohistoquímica utilizando anti-cuerpos monoclonales y policlonales anti-MR1. Se analizaron líneascelulares de diferente linaje incluyendo L721.221 y C1R transfectadascon MR1 y denominadas MR1.221 y MR1.C1R respectivamente.

Resultados. Las líneas transfectadas MR1.221 y MR1.C1R expresa-ron altos niveles de MR1 en la superficie, a diferencia del resto de líne-as analizadas. Sin embargo a 26 ºC MR1 fue detectable en todas las líne-as linfoblastoides y las células transfectadas también incrementaron laexpresión de MR1. Esto sugiere que la expresión de MR1 en la superfi-cie celular está limitada por la disponibilidad de ligandos ya que su com-portamiento es similar a las moléculas HLA de clase I clásicas.

También estudiamos la dependencia de la expresión de MR1 delproteasoma. Para ello analizamos la re-expresión en superficie de MR1en la línea MR1.221 después de someterla a condiciones de “elución”a pH ácido. Hemos observado que MR1 es sensible al tratamiento áci-do, al igual que lo son las moléculas HLA de clase I clásicas. Sin embar-go, al contrario de lo que sucede con éstas, la re-expresión de MR1 enla superficie después de la elución ácida no es bloqueada por inhibi-dores específicos del proteasoma.

Conclusión. La expresión de MR1 en la superficie celular necesi-ta de ligandos que son independientes de la actividad del proteasoma.

FUNCTIONAL ANALYSIS OF THE IREM-2 RECEPTOR (CD300e)IN HUMAN MONOCYTES. Brckalo T1, Cassatela MA2, López-BotetM1. 1Universitat Pompeu Fabra. 2University of Verona.

The CD300e (IREM-2) was originally reported to be expressedby mature monocytes and peripheral blood myeloid dendritic cellsThe receptor was associated with the DAP-12 adaptor in co-transfec-ted cells and was capable of inducing NFAT transcriptional activityupon engagement by a specific mAb (Aguilar et al. 2004. J. Immunol.173:6703-6711). In this study we have investigated the functional effectsof CD300e ligation in various responses of human monocytes. Uponengagement by an agonistic mAb, CD300e triggered an intracellularcalcium mobilization and the release of reactive oxygen intermediatesin freshly isolated cells. Stimulation via CD300e triggered the releaseof pro-inflammatory chemokines and cytokines (i.e. IL-8/CXCL8 andTNF·), up-regulated the expression of cell surface activation markers(i.e. CD25, CD83 and CD86) and promoted cell survival. Primarymonocytes differentiated into alternatively activated macrophagesfollowing the activation through CD300e, as evidenced by higherexpression of CD14, CD16 and CD163 cellular markers. Monocytes sti-

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mulated by IL-4, GM-CSF, but not M-CSF modulated CD300e expres-sion within the first 24h of culture. Overall, our data demonstrate thatCD300e is a functional activating receptor in human monocytes invol-ved in regulating the innate immune response.

CARACTERIZACIÓN DE MACRÓFAGOS PERITONEALESALTERNATIVAMENTE ACTIVADOS (MAA): IMPLICACIONESPARA UN PAPEL EN MECANISMOS DE FIBROSIS RELACIONA-DOS CON ANOMALÍAS EN LA MEMBRANA PERITONEAL. Mar-tínez Cabeza V, Lucendo B, Auxiliadora Bajo M, Castro MJ, del PesoG, Selgas R, Bellón T. Hospital Universitario La Paz, Madrid.

La diálisis peritoneal puede desencadenar un proceso de fibrosisperitoneal que finalmente condiciona el estado funcional de la mem-brana peritoneal. Las infecciones peritoneales y la composición de loslíquidos de diálisis influyen en el estado del peritoneo. Los macrófa-gos peritoneales (Mp) no han sido asociados con capacidades defen-sivas eficientes contra infecciones en pacientes de diálisis peritoneal.Esto sugiere que los Mp podrían haber desarrollado otras funcionescomo las que presentan los macrófagos alternativamente activados(M2/MAA) cuya capacidad para participar en fibrosis de órganos hasido demostrada. Se ha usado citometría de flujo, RT-PCR y qRT-PCRpara analizar el fenotipo de los macrófagos de efluente peritoneal enpacientes a los que se les realiza diálisis peritoneal, y se ha probado sucapacidad para estimular la proliferación de la línea celular de fibro-blastos humanos IRM90 y de fibroblastos primarios de piel. Se hancomparado Mp de pacientes con y sin peritonitis activa. Los resulta-dos muestran la presencia de M2/MAA en el peritoneo y sugieren quedistintas subpoblaciones de M2/MAA podrían participar en fibrosisperitoneal produciendo citoquinas y quimioquinas profibrogénicas yestimulando el crecimiento de fibroblastos.

VISUALIZACIÓN DE NANOPARTÍCULAS POR LA TÉCNICA DESEM-FIB EN EL INTERIOR DE MACRÓFAGOS. Díaz-Freitas B1,Méndez J2, Pastoriza I3, Sánchez-Espinel C1, Faro J1, Magadán S5, LízMarzán L3, González-Fernández A1. 1Área de Inmunología -Campus Lago-as Marcosende, Universidad de Vigo (Pontevedra). 2Centro de Apoyo Cientí-fico-Tecnológico a la Investigación (CACTI)-Campus Lagoas Marcosende, Uni-versidad de Vigo (Pontevedra). 3Grupo de Química Coloidal- Campus LagoasMarcosende, Universidad de Vigo (Pontevedra). 4Estudos Avançados de Oei-ras, Instituto Gulbenkian de Ciência, Oeiras, Portugal. 5Instituto Superior deSaude do Alto Ave (ISAVE), Quinta de Matos, Geraz do Minho, Portugal.

Antecedentes. La nanotecnología ha irrumpido con fuerza en elcampo biomédico especialmente en el campo del diagnóstico, pero enlos últimos años también se está evaluando su gran potencial en terapiahumana. La mayoría de las nanoparticulas (Nps) son reconocidas y rápi-damente fagocitadas por los macrófagos del sistema retículo endote-lial (fundamentalmente en hígado y bazo). Este proceso depende deltamaño, cobertura e hidrofobicidad de las Nps. Las Nps pequeñas (infe-riores de 90 nm de diámetro) son fácilmente visualizables mediantemicroscopía electrónica de transmisión (TEM), pero ésta es una técnicacostosa y tediosa, mientras que la técnica de microscopía electrónica debarrido (SEM), no permite visualizar el interior de las células. Por todoello, el desarrollo y uso de nuevas técnicas de microscopía electrónicapodrían ayudar a conocer las rutas de internalización de estas nanoes-tructuras, proporcionando mapas intracelulares.

Objetivos. Implementar una metodología “Dual Beam System”(SEM/FIB) - que combina las técnicas ya conocidas de microscopíaelectrónica de barrido (SEM) con aquellas derivadas del uso de uncañón de iones (FIB), como la obtención de cortes en láminas muy finas(técnica de milling)- que permita la localización y el seguimiento denanopartículas de oro en el interior celular.

Metodología. Se incubaron macrófagos peritoneales durante 24hcon Nps de oro recubiertas con sílice (NPs de 50nm de diámetro). Sefijaron y se incluyeron en resina Epoxy y se realizaron cortes de dichaspreparaciones mediante la técnica de miling. Las preparaciones fue-ron visualizadas mediante SEM (detector de electrones retrodispersa-dos) y se realizó una composición tridimensional del conjunto de lasobservaciones.

Resultados. Las Nps de oro aparecen fundamentalmente en losfagosomas y endosomas de los macrófagos, sin observarse la llegadade ninguna Np al núcleo celular. El estudio de diversos cortes realiza-dos con un Dual Beam System y la posterior composición tridimensio-nal, muestra varias Nps en el interior del mismo fagosoma, y hasta untotal de 14 vesículas mostraron en su interior nanopartículas. No seobservó una polarización del proceso de fagocitosis, observándose NPsdistribuidas bastante homogéneamente por el interior de los macrófa-gos. El estudio se completó mediante la técnica de TEM, que permitióconfirmar los datos obtenidos por SEM-FIB.

Conclusiones. La combinación de las técnicas de SEM y FIB puedeser empleada con éxito para la visualización intracelular de nanopartí-culas de oro en el interior de distintos compartimentos celulares.

TLR-TRIGGERING ON TOLEROGENIC DENDRITIC CELLSRESULTS IN TLR2 ENHANCEMENT AND AN IMPAIRED PRO-INFLAMMATORY PROGRAMME. Chamorro Pérez S1, García-Valle-jo JJ1, Unger W2, Fernandes R1, Bruijns S CM1, Laban S2, Roep BO2,T´Hart BA3, Van Kooyk Y1. 1VUmc, Ámsterdam, 2 LUMC, Leiden, 3 BPRC,Rijswijk.

Dendritic cells modulated with either cytokines or pharmacologi-cal mediators offer a therapeutic potential to ameliorate or preventautoimmune diseases. These modulated tolerogenic cells (TDC) inhi-bit adaptative immune responses by using immunosuppressive mecha-nisms as anergy induction or Treg generation. However, little is knowabout their TLR repertoire and how TLR agonists different than LPSmodulate their responses.

We here have made a full analysis and comparison of the innatecharacteristics of three types of human tolerogenic DC obtained byaddition of either IL10 (IL10-DC), dexamethasone (DX-DC) or calci-triol (1,25(OH)2D3-DC) to monocyte-derived dendritic cells. A detai-led analysis of TLR mRNA expression (TLR1-TLR10) was performedby qRT-PCR. Likewise we investigated the effects on maturation, cyto-kine release, allostimulatory capacity and T cell driven differentiationon TDC triggered by TLR2, 3, 4 and 5 agonists.

We show that TDC are endowed with the same TLR set as monocy-te-derived dendritic cells although responding differently to TLR-mediated stimulation. Strikingly, only tol-DC upregulated the expres-sion of TLR2 (mRNA and protein) in response to specific TLR agonists(pam3CSK4, poly I:C, LPS and flagellin). TLR2 increase decodes TDCto further pam3CSK4 restimulation and it is partially modulated byp38MAP kinase. TDC expressed low/no IL12-related cytokines andremarkably elevated IL10 levels. Nevertheless differences among sti-mulated-TDC were detected, DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC upregula-

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ted TLR2 irrespective the TLR triggered whereas LPS-mediation wasobserved on IL10-DC. Likewise DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC exhi-bited reduced allostimulatory properties, impaired ability to matura-te and hampered capacity to differentiate naïve T cells to effector Th1cells. Therefore both DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC display the stron-gest tolerogenic and anti-inflammatory features and might be benefi-cial for the treatment of autoimmune diseases.

IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA, MOR-FOLÓGICA Y FUNCIONAL DE LOS PRECURSORES DE CÉLU-LAS DENDRÍTICAS PLASMOCITOIDES EN MÉDULA ÓSEA DEADULTOS SANOS. Martín Martín L1,2, Almeida Parra J1,2, Hernán-dez Campo PM2, Sánchez García ML2, Lécrevisse Q1, Orfao de MatosA1,2. 1Centro de Investigación del Cáncer (CSIC/USAL), Salamanca. 2Servi-cio de Citometría y Departamento de Medicina, Universidad de Salamanca.

Introducción. Actualmente se desconoce la secuencia de madura-ción de los precursores de células dendríticas plasmocitoides (pre-CDp). Objetivo: analizar las características fenotípicas, morfológicas yfuncionales de los pre-CDp durante su maduración en médula óseanormal (MON) de adultos.

Metodología. El estudio fenotípico (n=33 MON) se realizó median-te citometría de flujo con combinaciones séxtuples de anticuerpos mono-clonales; la caracterización morfológica (n=4) sobre pre-CDp purifica-dos, teñidos con May-Grümwald-Giemsa; la secreción de IFN-alfa (n=3)se determinó mediante ELISA, tras estimulación de poblaciones puri-ficadas con CpG, y la capacidad de endocitosis (n=3), mediante capta-ción de dextrano.

Resultados. Sistemáticamente se identificaron tres estadios madu-rativos de pre-CDp, de acuerdo a la expresión de HLA-DR/CD34/CD45/CD123. La expresión de moléculas presentadoras de antígenose mantuvo alta a lo largo de la maduración, mientras que la de lasmoléculas asociadas a CDp aumentó progresivamente. Curiosamen-te, CD86 se expresaba en las células más inmaduras, siendo indetecta-ble en las más maduras, mientras que CD40 sólo se detectó en el esta-dio más maduro. El análisis morfológico de las subpoblaciones puri-ficadas de pre-CDp de MON reveló un aumento progresivo de la inden-tación nuclear y una disminución de la basofilia citoplasmática conla maduración. Sólo se observaron prolongaciones citoplasmáticasen los pre-CDp estimulados con CpG. La única población capaz desecretar IFN-alfa tras estimulación fue la más madura, mientras que lade mayor capacidad endocítica fue la más inmadura.

Conclusiones. En MON de adultos existen al menos tres estadiosde diferenciación de la línea de CDp, con características fenotípicas,morfológicas y funcionales distintas; además, nuestros hallazgos seña-lan que los pre-CDp más inmaduros tendrían capacidad de endoci-tosis y/o presentación antigénica, lo que sugiere que podrían tener unpapel relevante en la inducción de tolerancia.

EXPRESIÓN DE FAS, FASL E ILT2 POR LAS CÉLULAS DENDRI-TICAS DE DECIDUA HUMANA NORMAL Y DE ABORTOESPONTÁNEO. Tirado González I, Muñoz-Fernández R, Blanco O,Leno E, de Lamata Espinosa C, Ortiz-Ferrón G, Abadía Molina AC,Olivares G. Centro de Investigación Biomédica.

Introducción. La decidua es el tejido materno que se encuentra eníntimo contacto con el trofoblásto fetal. Es un lugar privilegiado en el

que la actividad inmunitaria está disminuida. La apoptosis de las célu-las inmunitarias ha sido propuesta como un mecanismo para el man-tenimiento del privilegio inmunológico, participando no solo el sis-tema TRAIL-TRAIL-R sino también el sistema FAS-FASL. Por otro ladola expresión de receptores inhibidores, como el ILT2, participarían enla deshinibición de las funciones citotóxicas. La actividad inmunoló-gica materna frente al feto podría ser un mecanismo biológico eficien-te para eliminar fetos cuando se presente algún problema con la ges-tación, determinándose que solo los fetos en un estado adecuado lle-garán al final de la gestación.

Objetivo. El objetivo del presente trabajo es determinar la expre-sión de FAS, FASL e ILT2 en decidua de aborto espontáneo y deciduanormal.

Materiales y métodos. Las muestras de decidua normal (ABI) yde aborto espontáneo (ABE) fueron procesadas y tratadas por gradien-te de Ficoll-Histopaque. Las células dendríticas fueron estudiadasmediante citometría de flujo en base a la expresión de DC-SIGN (mar-cador característico de las DC inmaduras, iDC), estudiándose median-te doble marcaje la expresión de FAS, FASL e ILT2.

Resultados. La población DC-SIGN+ (marcador de iDC) indi-ca una población principal de iDC, confirmada por la baja expre-sión de CD83 (marcador de mDC). Se ha podido ver la co-expre-sión de FAS, FASL e ILT2 tanto en ABI como en ABE, siendo estaexpresión inferior en ABE y con diferencia estadísticamente signi-ficativa.

Conclusiones. Las DC de ABE participarían en menor grado enlos mecanismos de apoptosis que tiene lugar en la decidua, y seríanmenos susceptibles a ella en comparación con las DC de ABI. Ademásestarían menos protegidas de la actividad citotóxica celular debido ala menor expresión del receptor inhibidor ILT2.

CONTRIBUCIÓN DE LAS CÉLULAS DENDRÍTICAS PLASMA-CITOIDES INTRATÍMICAS A LA GENERACIÓN DE CÉLULAS TREGULADORAS NATURALES. IDENTIFICACIÓN DE PROGE-NITORES FISIOLÓGICOS. Martin Gayo E, Toribio García ML. Cen-tro de Biología Molecular.

El timo constituye un órgano clave en la educación de los linfoci-tos T. Durante el desarrollo intratímico, los progenitores de los linfo-citos T generan timocitos CD4+CD8+ (DP) que expresan por primeravez un TCR·‚, que participa directamente en los procesos de selec-ción positiva y negativa mediante el reconocimiento de antígenos pre-sentados por células del epitelio cortical (TEC) o por células dendrí-ticas medulares (DCs), respectivamente. Además, el timo es tambiénel lugar de generación de las células T reguladoras naturales (Treg),caracterizadas por el fenotipo CD4+ CD25+ Foxp3+. Estas células sonpotentes inmunosupresoras, que pueden inhibir la proliferación de lin-focitos periféricos vía la secreción de citoquinas tales como IL-10 yTGF‚. Actualmente, el origen de las Treg intratímicas es desconocido,aunque algunos estudios sugieren que estas células podrían procederde timocitos auto-reactivos que logran escapar de la selección negati-va. En el timo humano habitan dos tipos de DCs: DCs convencionales(cDCs) y DCs plasmacitoides (pDCs). Estudios previos sugieren unaimplicación de las cDCs intratímicas en la generación de Treg, mien-tras que la capacidad de las pDCs en dicho proceso no ha sido anali-zada. En este estudio demostramos que las pDCs intratímicas activa-das con CD40L e IL3 (MpDCs), pero no las pDCs inmaduras, son capa-ces de inducir la generación de células CD25+Foxp3+, con caracterís-

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ticas funcionales idénticas a las descritas para células Treg, a partir detimocitos 4SP y linfocitos CD4+ periféricos alogénicos. Además, hemosidentificado una población de timocitos DP TCRhiCD69hi que contie-ne progenitores capaces de generar células Treg en respuesta a MpDCsautólogas.

Por último, hemos descrito la expresión de la molécula HLA-Gen las pDCs intratímicas y su implicación en el proceso de inducciónde Treg. Por tanto, estos resultados indican que las pDCs intratími-cas podrían desempeñar una importante función en el establecimien-to de la tolerancia central vía la generación de Treg naturales en eltimo.

SESIÓN 10: CÉLULAS T

Moderadores: Dr. Manel Joan (Barcelona), Mª Luisa Toribio (Madrid)

LA PROTEÍNA ADAPTADORA AKAP450 REGULA LA TRANS-LOCACIÓN DEL MTOC, LA ORGANIZACIÓN DE LA SINAPSISINMUNE Y LA SEÑALIZACIÓN TRAS LA ACTIVACIÓN DEL TCREN CÉLULAS T. Robles Valero J1, Martín-Cófreces NB1, LamanaDomínguez A1, Ríos RM2, Sánchez-Madrid F1. 1Hospital UniversitarioLa Princesa. 2Departamento de Microbiología, Facultad de Biología, Univer-sidad de Sevilla.

La translocación del centro organizador de microtúbulos (MTOC)es un evento temprano que tiene lugar cuando una célula T o NK inter-acciona con una célula presentadora de antígeno (APC), con la consi-guiente formación de la denominada sinapsis inmune. Sin embargo,es ahora cuando se empiezan a conocer los mecanismos molecularesimplicados en la polarización del MTOC al área de contacto. AKAP450,miembro de la familia de las proteínas de anclaje a PKA (AKAPs) loca-lizada fundamentalmente en el centrosoma, es una proteína adapta-dora de gran peso molecular capaz de ensamblar y compartimentali-zar múltiples moléculas señalizadoras y estructurales, además de ser-vir de nexo entre el MTOC y el aparato secretor.

En el presente estudio abordamos el posible papel que podríadesempeñar AKAP450 en la polarización del MTOC, la organizaciónde la sinapsis inmune y la activación de la célula T. La sobreexpre-sión del dominio C-terminal de AKAP450 unido a GFP, que actúacomo dominante negativo, y oligos de interferencia (siRNA) espe-cíficos que reducen considerablemente la expresión de la proteína,previenen el anclaje del MTOC en la zona de contacto entre la célu-la T y la célula presentadora, llegando a evitar la propia transloca-ción, utilizando tanto un sistema antígeno como superantígeno espe-cífico. Además, AKAP450 es requerida para una correcta señaliza-ción tras la activación del TCR en respuesta a presentación de antí-geno, ya que el silenciamiento de la proteína provoca un descensoconsiderable de la fosforilación de proteínas tales como LAT, PLCÁ1o PKCı. Este defecto en señalización corrobora con una reducciónconsiderable de la producción de IL-2 medida mediante ELISA. Igual-mente, AKAP450 es necesaria para la polarización a la sinapsis deciertas moléculas básicas para la formación correcta de la misma, talescomo PKCı.

Por ello, nuestros resultados sugieren un papel fundamental deAKAP450 en la organización de la sinapsis inmune y en la reorienta-ción antígeno específica del MTOC.

NOTCH1 CONTROLA LA EXPANSIÓN DE LOS PROGENITORESHUMANOS DE CÉLULAS T Y DE CÉLULAS LEUCÉMICAS ATRAVÉS DE LA REGULACIÓN DEL RECEPTOR DE IL-7. Gonzá-lez García S1, García Peydró M1, Martín Gayo E1, Ferrando AA2, Tori-bio ML1. 1Centro de Biología Molecular Severo Ochoa, Madrid. 2Institute forCancer Genetics, Columbia University. New York, USA.

La diferenciación de los linfocitos T implica la adquisición de unpatrón de expresión génica específico, el silenciamiento de genes de desa-rrollo de linajes no-T y la expansión de los progenitores T. En este pro-ceso participan coordinadamente las vías de señalización de Notch1 ydel receptor de interleuquina 7 (IL-7R). Recientemente mostramos quela cadena alfa de IL-7R (IL-7R·) es una diana transcripcional directa deNotch1, vía el factor de transcripción CSL. En este estudio hemos ana-lizado el papel funcional de la vía de Notch y de IL-7R durante el desa-rrollo intratímico humano. Estudios de expresión génica muestran unaalta correlación en el patrón de expresión de ambas vías durante la madu-ración de los linfocitos T. En ensayos funcionales de diferenciación decélulas T, demostramos que la inhibición de la señal de Notch provocauna drástica reducción en los niveles de expresión en membrana deIL-7R, bloqueando la proliferación de células pre-T. Sin embargo, estebloqueo en proliferación es rescatado tras la sobre-expresión de IL-7R·mediante vectores retrovirales, indicando que el papel de Notch duran-te los estadios más inmaduros de diferenciación T es el mantenimientode la proliferación en respuesta a IL-7. Así mismo, mostramos que estemecanismo de regulación del IL-7R mediado por Notch ocurre tambiénen leucemias linfoblásticas agudas T dependientes de Notch, en las cuá-les la sobre-expresión del IL-7R es capaz de rescatar el bloqueo en pro-liferación consecuente a la inhibición de Notch. Por tanto, propone-mos que la señalización por Notch1 contribuye a la proliferación delos precursores T y de células T leucémicas regulando los niveles deexpresión del receptor de IL-7 y la capacidad de respuesta a IL-7.

ICOS (CD278) ES NECESARIO PARA LA HOMEOSTASIS PERI-FÉRICA DE LAS CÉLULAS Treg CD4+CD25+FoxP3+. Ojeda G1, PiniE1, Bello R2, Portolés P1, Rojo JM2. 1Centro Nacional de Microbiología, I.S.Carlos III. 2Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC.

ICOS (CD278) es una molécula coestimuladora de la familia de CD28,expresada de modo característico por los linfocitos T activados. Compa-rando linfocitos de ratones genéticamente deficientes en ICOS (ICOSko)y de ratones normales, se ha examinado el posible papel de ICOS en eldesarrollo y las funciones de la población de células T reguladoras natu-rales CD4+CD25+FoxP3+ derivadas del timo. En primer lugar, se haobservado que las células CD4+CD25+ de ratones deficientes en ICOSson plenamente funcionales, de acuerdo con los datos de ensayos de Treg“in vitro”. Así, la capacidad para suprimir la proliferación o la produc-ción de IL-2 en células CD4+CD25- es comparable usando Treg de rato-nes ICOSko o de ratones normales, independientemente del origen (ICOS-ko, o normales) de las células respondedoras y accesorias. Esto indicaque ICOS no es necesario para la función supresora de estas células. Encambio, el número de células Treg CD4+CD25+ se encuentra significa-tivamente reducido en el bazo de ratones ICOSko, si se compara con elbazo de ratones normales de la misma edad y sexo. Esta reducción no esdebida ni a una expresión más baja de CD25 por las células TregCD4+FoxP3+ en los ratones ICOSko, ni a una generación deficiente en eltimo de las células Treg CD4+CD25+FoxP3+. Además, las células T CD4+de ratones ICOSko pueden recibir eficientemente coestímulos de CD28

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y producir IL-2, que son dos factores muy importantes en la generacióneficiente de células Treg CD4+CD25+. En cambio, sí se ha observado unamayor susceptibilidad a la apoptosis espontánea en las células TregCD4+CD25+ procedentes de ratones deficientes en ICOS. Esto podríacontribuir a su menor número en estos animales y a explicar algunosfenómenos ligados a ICOS, incluyendo la mayor sensibilidad de los rato-nes ICOSko a enfermedades autoinmunes como EAE.

CARACTERIZACION FUNCIONAL DE CELULAS TH17/1 INTES-TINALES EN PACIENTES CELIACOS. Santamaria Ossorio M2, Fer-nandez S1, Ortega C1, Carillo J2, Rodriguez F2, Sánchez F2. 1Unidad deinmunologia Facultad de Medicina Universidad de Cordoba. 2H.U. Reina Sofia.

Se ha estudiado la presencia de celulas productoras de IL-17 en biop-sias de duodeno distal de pacientes con enfermedad celiaca. Las biopsiasfueron cultivadas en presencia de Il-2 (20UI) durante 12 dias. Las pobla-ciones de celulas T obtenidas clonadas mediante dilucion limite y los clo-nos resultantes fueron testados mediate RT-PCR para determinar si expre-saban señal especifica de Il-17 e IFNgamma. Se encontraron clonos pro-ductores de cada una de ellas de manera aislada y conjunta. El analisis delos clonos positivos indica que son celulas memoria/efctoras, con un feno-tipo caracterizado por la expresion en superficie de CCR6 y receptor deIL-23. las celulas resultaron Th17/1 en base al patron de citounas que secre-tan y que se determinaron mediante ELISA y marcaje intracelular. Es inte-resante que ademas d las citoquinas mencionadas, las celulas Th17/1 depacientes celiacos expresan TGF beta 1. Il17 se ha demostrado estar regu-lada por el factor de transcripcion RORA y C en humano. Tambien se nece-sita IRF4 para su diferenciacion en el raton. Nosotros encontramos expre-sion elevada de RORC y aun mas marcada de IRF4. Esta es la primerademostracion de que en humanos IRF4 se encuentr upregulado en celu-las diferentes de Th2. Funcionalmente se trata de celulas capaces de res-ponder a estimulos mediados por CD3/TCR, no son citotoxicas ni regu-ladoras y tampoco sensibles a regulacion al igual que sucede con este tipocelular en enfermedades autoinmunes digestivas como enfermedad infla-matoria intestinal. Nuestros datos indican que el papel de TGF beta secre-tado por ellas parece ser facilitar la regulacion positiva de RORC e IRFsiguiente a la estimulacion CD3/TCR.

EXPANSIONES MONOCLONALES DE LINFOCITOS GRANDESGRANULARES (LGG)-T CD4+ RECONOCEN ANTÍGENOS DECITOMEGALOVIRUS (CMV). Rodríguez Caballero MA1, GarcíaMontero AC1, Bárcena P1, Almeida J1, Ruiz-Cabello F2, Tabernero MD3,Garrido P4, Muños-Criado S5, Balanzategui A6, Orfao A1. 1Centro deInvestigación del Cáncer/IBMCC. CSIC-Universidad de Salamanca. 2Ser-vicio de Análisis Clínicos. Hospital Universitario Virgen de Las Nieves. Gra-nada. 3Unidad de Investigación, IECSCYL. Hospital Universitario de Sala-manca. 4Servicio de Hematología. Hospital Universitario Virgen de Las Nie-ves. Granada. 5Servicio de Microbiología, Hospital Universitario de Salaman-ca. 6Servicio de Hematología, Hospital Universitario de Salamanca.

Introducción. Estudios recientes sugieren que las linfocitosis mono-clonales LGG-TCD4+ se originarían por una estimulación antigénicacrónica, como se ha demostrado en otros síndromes linfoproliferati-vos cuyo desarrollo está favorecido por infecciones víricas persisten-tes (p.ej. HTLV-1, EBV, HHV8). El hecho de que en individuos sanosseropositivos frente a CMV, se hayan detectado expansiones (oligo)clo-nales de células T CD4+ con fenotipo de LGG en respuesta a CMV,

apunta a un posible papel de este virus en el origen y expansión de laslinfocitosis monoclonales LGG-TCD4+.

Objetivo. Analizar la especificidad de la respuesta inmunológi-ca frente a CMV de las células T clonales de pacientes con distintos sín-dromes linfoproliferativos crónicos T, SLPcT.

Metodología. Se analizó “in vitro” la respuesta funcional frente aCMV y EBV en 30 sangres periféricas de pacientes con linfocitosis LGG-TCD4+TCRalphabeta+ (n= 12) u otros SLPcT (n= 18). En 4 pacientescon expansión monoclonal de LGG-TCD4+TCRVbeta13.1+ se evaluóla respuesta al péptido de CMV “MQLIPDDYSNTHSTRYVTVK” com-plementario de HLADRB1*0701. Mediante microarrays de expresiónse identificaron los genes que experimentaban cambios en los LGG-TCD4+ en respuesta a CMV.

Resultados. Los casos con linfocitosis LGG-TCD4+ mostraron unarespuesta funcional frente a CMV característica y específica, que no seencontró en otros SLPcT. Esa respuesta se reprodujo frente al péptido“MQLIPDDYSNTHSTRYVTVK” en los pacientes con haplotipoHLADRB1*0701+ y expansión monoclonal de LGG-TCD4+TCRVbe-ta13.1+. Además la respuesta a CMV en los LGG-TCD4+ clonales seasociaba a cambios específicos en la expresión de genes implicados enrespuesta inflamatoria e inmune, progresión de ciclo celular, resis-tencia a apoptosis e inestabilidad génica.

Conclusiones. Por primera vez se demuestra que las células clo-nales de un grupo de neoplasias de células T (LGG-TCD4+) son espe-cíficas de antígenos de CMV, que podrían ser responsables de la ini-ciación y mantenimiento de la enfermedad.

REEVALUACIÓN DE LA CONTRIBUCIÓN DE HLA-DRB3 EN LARESPUESTA CELULAR T. Faner Canet MR1, James E2, Yang J2, Hous-ton L2, Pujol-Borrell R1,3, Kwok WW2,4, Juan M5. 1Laboratory of Immu-nobiology Research and Applications to Diagnosis (LIRAD). Banc de Sangi Teixits. 2Benaroya Research Institute at Virginia Mason, USA. 3Departmentof Cell Biology, Physiology and Immunology. Universitat Autònoma de Bar-celona (UAB). Badalona, 4 Department of Immunology, University of Was-hington, Seattle, USA. 5Servei d’Immunologia. Centre de Diagnòstic Biomè-dic. Hospital Clínic. Barcelona.

En la región HLA hay diversos loci DRB (DRB1/3/4/5) que codi-fican para diferentes cadenas DR beta. Dichas cadenas beta se combi-nan con la misma cadena alfa y forman las diferentes moléculas HLA-DR que se encuentran en la superficie de las células presentadoras deantígeno. La funcionalidad y relevancia de la molécula DRB1 ha sidoextensamente estudiada, pero habitualmente se ha despreciado la con-tribución de las moléculas DR generadas a partir de los loci DRB3/4/ 5 a la presentación de antígenos. Tanto es así que aún hay cierta con-troversia en referencia al nivel de expresión de dichos loci DRB secun-darios. Por ello hemos cuantificado los niveles de mRNA producidospor DRB3 y comparado con los producidos por el DRB1 de su haplo-tipo DR52 [DRB1(52)]. Esta comparación se ha realizado en célulasCD19+ y CD14+, observando en ambos tipos celulares una menor pro-ducción de DRB3 en relación a su DRB1, pero una muy diferente dis-tribución de la abundancia relativa de dichos transcritos, mostrando enlas células CD14+ una proporción mayor de DRB3 respecto a DRB1.Estos resultados se han corroborado a nivel proteico analizando latinción de superficie de ambas moléculas en dichos tipos celulares.

Para analizar el papel funcional de DRB3 hemos generado tetrá-meros de HLA-DRB3 y usado TGEM (Tetramer-guided epitope map-ping) en la valoración de la contribución de DRB3 a la respuesta inmu-

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ne T frente a antígenos altamente inmunogénicos como el toxoide tetá-nico y la proteína de la matriz del virus de la gripe. En ambos antíge-nos hemos identificado epítopos presentados por DRB3 y al evaluar elnúmero de linfocitos T CD4+ que responden a ellos, hemos observa-do que es similar al descrito para DRB1.

Todos nuestros resultados sugieren que DRB3 juega un papel enla presentación de antígenos equivalente al atribuido a DRB1 pero conun repertorio de epítopos que al ser diferente se complementa. De estemodo DRB3 parece ampliar y completar el repertorio peptídico quepuede ser presentado por HLA-DR.

Financiado por ayuda FIPSE 36487/05, FIS 07/0329 y Profit FIT010000-2006-38.

EPH/EPHRINAS B COMO REGULADORAS DE LA MADURA-CIÓN DE LOS TIMOCITOS Y LA MORFOGÉNESIS EPITELIALTÍMICA. Cejalvo Goyanes T1, García-Ceca J1, Alfaro Sánchez D1, Jimé-nez Pérez E2, Muñoz Oliveira JJ3, Zapata González A1. 1Dpto. BiologíaCelular, Facultad de Biología, UCM. 2Dpto. Biología Celular, Facultad deMedicina, UCM. 3Centro de Citometría y Microscopia, UCM.

Resultados previos de nuestro grupo demuestran que los recepto-res EphB2 y EphB3 son expresados tanto por timocitos como por célu-las epiteliales tímicas (TECs) y participan tanto de forma autónoma comono autónoma en la diferenciación y el desarrollo de ambos tipos celula-res así como en las interacciones que los dos realizan entre si.

Con el fin de definir la importancia de las señales trasmitidas porestos receptores y profundizar en el conocimiento de su papel en lasinteracciones celulares tímicas se analizó el efecto de diferentes muta-ciones en las ephrinas B1 y B2, ligandos de Eph B2 y Eph B3, sobre losdistintos componentes celulares del timo

El análisis de la diferenciación T, en animales con timocitos deficien-tes en la ephrina B1 o en la ephrina B2, mutantes condicionados genera-dos mediante tecnología LoxP-Cre, revela una reducción en la celularidadtímica y alteraciones en la diferenciación T con diferente grado de seve-ridad dependiendo del background genético de la cepa de ratón utiliza-da, lo que confirma un papel autónomo de estas moléculas sobre la madu-ración del timocito. Sin embargo, al menos en el caso de los mutantes parala ephrina B2, la red epitelial no presenta alteraciones importantes.

Por otro lado, animales ephrinaB2 LacZ/+ y ephrina B2 LacZ/LacZen los que el alelo ephrina B2 LacZ codifica para una forma de ephri-na B2 que carece del dominio citoplásmico, mostraban nuevamentemenor celularidad tímica pero, en este caso, también alteraciones his-tológicas en la red epitelial tímica indicando la necesidad de estas pro-teínas no solo como estimuladoras de Ephs sino como receptores, asícomo su participación autónoma en el establecimiento de la red epite-lial. El presente trabajo discute finalmente el papel global de las inter-acciones Eph-ephrinas B en la modulación de las interacciones celula-res tímicas homo y/o heterotípicas que determinan la histogénesis delórgano y la diferenciación de los linfocitos T.

ESTUDIO DE NFAT5, UN FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN DE LAFAMILIA REL, EN EL DESARROLLO Y LA HOMEOSTASIS DELOS LINFOCITOS T. Berga Bolaños R, López Rodríguez C. Parc deRecerca Biomèdica de Barcelona.

El NFAT5 es un factor de transcripción que pertenece a la familiade proteínas Rel (NF-kB y proteínas NFATc) (Aramburu et al., 2006).

De este modo, el NFAT5 selecciona los mismos elementos de DNA queunen in vivo las proteínas NFATc (López-Rodríguez et al., 1999) y, porotra parte, el NFAT5 conserva la estructura presente en todas las pro-teínas NF-ÎB para controlar su dimerización, unión a DNA y transac-tivación (López-Rodríguez et al., 2001; Stroud et al., 2002). Aunque elNFAT5 se caracterizó inicialmente como un importante regulador deun programa de expresión de genes osmoprotectores (López-Rodrí-guez et al., 2004; Aramburu et al., 2006), también regula la migraciónde células de carcinoma, participa en la miogénesis de músculo esque-lético, y actúa como factor huésped para el HIV (Jauliac et al., 2002;O´Connor et al., 2006; Ranjbar et al., 2006). La expresión del NFAT5 encélulas primarias y órganos está bastante restringida a ciertos tejidosproliferantes (Aramburu et al., 2006), como linfocitos T activados ytimocitos (Trama et al., 2000; López-Rodríguez et al., 2001; López-Rodrí-guez et al., 2004), donde los niveles de NFAT5 son relativamente altosy su distribución subcelular es predominantemente nuclear (Trama etal., 2000; López-Rodríguez et al., 2001; datos de nuestro laboratorio).

Modelos de ratón desarrollados recientemente (Trama et al., 2002;López-Rodríguez et al., 2004; Go et al., 2004) apoyan la idea de un papelde NFAT5 durante el desarrollo de los linfocitos T y sugiere su impli-cación en la proliferación de células T y su supervivencia. Los ratonesdeficientes en NFAT5 presentan una inmunodeficiencia consistente enuna linfopenia de células T que es más acusada para las células CD8+.Estas observaciones son de relevancia sustancial ya que, in vivo, losratones deficientes en NFAT5 son incapaces de producir una respues-ta inmune mediada por células CD4+ (Go et al., 2004) o CD8+ (datosde nuestro laboratorio).

Datos recientes de nuestro laboratorio indican que los ratones defi-cientes en NFAT5 sufren de hipernatremia en plasma como resultadode su incapacidad de inducir un programa de expresión de genes osmo-protectores a nivel sistémico (López-Rodríguez et al., 2004). Para ana-lizar selectivamente los efectos intrínsecos de las células T derivadosde la falta de NFAT5, y con ayuda de la tecnología CRE-LOX, hemosllevado a cabo un modelo de ratón que elimina la expresión de NFAT5en estadíos tempranos (Lck-CRE NFAT5Flox/Flox) o más tardíos (CD4-CRE NFAT5Flox/Flox) del desarrollo de los timocitos. El análisis deestos ratones revela que NFAT5 participa en la ontogenia de las célu-las T en estadíos tempranos. Asimismo, nuestros datos indican quela falta de NFAT5 altera la homeostasis de diferentes poblaciones decélulas T en periferia.

SESIÓN 11: AUTOINMUNIDAD - II

Moderadores: Dra. Carmen Gelpí (Barcelona), Dra. Mª Rosa Julià (Palma de Mallorca)

ESTUDIO ANATOMOPATOLOGICO DE ANTICUERPOS DE CLA-SE IgG, IgM Y COMPLEMENTO EN LA ESCLEROSIS MÚLTIPLE.Sádaba Argaiz MC1, Tzartos J2, Sloan C2, González-Porqué P1, Espi-ño Martínez M1, Álvarez-Cermeño JC1, Villar-Guimerans LM1, EsiriM2. 1Servicio Inmunología. Hospital Ramón y Cajal. 2Neuropathology Depart-ment. John Radcliffe Hospital.

Introducción. La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad infla-matoria de posible etiología autoinmune. Su principal característicapatológica es la placa de desmielinización, aunque también se hademostrado daño axonal desde los primeros estadios. Si bien se ha con-

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siderado clásicamente a la EM como una enfermedad Th1, existen evi-dencias de la importancia de los anticuerpos y el complemento en sufisiopatología.

Objetivos. Estudiar la presencia de IgM, IgG y complemento encortes de pacientes con EM.

Materiales y métodos. Bloques de tejido del sistema nervioso cen-tral incluidos en parafina y fijados con paraformaldehido. Se analiza-ron 62 cortes de 15 pacientes y 5 cortes de 2 controles. Se pusieron apunto las técnicas inmunohistoquimicas correspondientes para anali-zar la presencia de IgG, IgM y C3B en las muestras obtenidas. Se rea-lizaron mediante inmunofluorescencia dobles marcajes IgG/C3b eIgM/C3b.

Resultados. Se pudo observar heterogeneidad en las lesiones den-tro de un mismo paciente. Un 20% no mostraban depósitos de anti-cuerpos ni complemento, en un 90% se detectó IgG y un 60% presen-taban IgM. Algunos cortes con sustancia blanca aparentemente nor-mal (SBAN) también presentaban dichos depósitos. En las placas quemostraban anticuerpos se determinaron los siguientes patrones de reco-nocimiento: 1. Axonal. 2. Oligodendrocitos. 3. Mielina. Al analizar elfactor C3b del complemento se vieron los mismos patrones y median-te doble inmunofluorescencia se demostró que anticuerpos y comple-mento colocalizan. También se observó la presencia de macrófagos conanticuerpos fagocitados junto a los depósitos de anticuerpos.

Conclusiones. Anticuerpos, complemento y macrófagos intervie-nen en la desmielinización y en el daño axonal. Además, la presenciade anticuerpos en la SBAN indica que podrían ser el mecanismo efec-tor primario en la enfermedad.

INFLUENCIA DEL LOCUS IL23R EN LA SUSCEPTIBILIDAD AESCLEROSIS MÚLTIPLE Y ENFERMEDAD CELÍACA EN LAPOBLACIÓN ESPAÑOLA. Cénit MC1, Dema B1, Núñez C1, PolancoI2, Maluenda C3, de las Heras V4, Arroyo R4, de la Concha EG1, Urce-lay E1, Martínez A1. 1Servicio de Inmunología Clínica, Hospital Clínico SanCarlos (Madrid). 2Servicio de Gastroenterología Pediátrica, Hospital la Paz(Madrid). 3Servicio de Pediatría, Hospital Clínico San Carlos (Madrid). 4Uni-dad de Esclerosis Múltiple, Hospital Clínico San Carlos (Madrid).

Introducción y objetivos. El receptor de IL-23 está formado pordos cadenas, una de ellas compartida con el receptor de IL-12, deno-minada IL-12R‚1, y otra cadena específica denominada IL-23R. El genIL23R codifica dicha subunidad específica y está ubicado en la región1p31. IL-23 interviene en el desarrollo de los linfocitos Th17, implica-dos en procesos de autoinmunidad. Estudios recientes han mostradoasociación de algunos alelos de IL23R con enfermedad inflamatoriaintestinal (EII), psoriasis y espondilitis anquilosante. Nuestro objetivoes el estudio de la implicación del gen IL23R en enfermedad celiaca(EC) y esclerosis múltiple (EM).

Material y métodos. Realizamos un estudio caso-control incluyen-do 598 pacientes con EC, 414 pacientes con EM y 546 controles espa-ñoles blancos. Tras extraer el DNA de todos los individuos, todas lasmuestras fueron genotipadas para dos SNPs (single nucleotide poly-morphisms), rs7517847 (localizado en un intrón) y rs11209026(Arg381Gln) mediante sondas Taqman (Applied Biosystems, FosterCity, CA, USA). El análisis estadístico fue llevado a cabo mediante laprueba Chi-cuadrado o el test exacto de Fisher (si los valores observa-dos eran menores de 5) utilizando el programa EpiInfo.

Resultados. Observamos que la frecuencia del alelo minoritariodel SNP exónico está incrementada significativamente en EC y EM

con respecto a controles (8% en EC vs 6% en controles, p=0.02; 9% enEM, p=0.006). En EM se observó un efecto más fuerte en pacientescon la forma clínica primaria progresiva (PP) (16%, p=0.004). Ade-más, la frecuencia de heterocigotos para el SNP rs7517847 es signi-ficativamente mayor en este grupo de pacientes (81% PP vs 48% con-troles, p=0.0002).

Conclusión. El alelo minoritario del polimorfismo funcionalArg381Gln (rs11209026) aumenta la susceptibilidad a EC y EM, resul-tado opuesto al descrito anteriormente para EII. En EM se observaun efecto más fuerte en pacientes con la forma clínica primaria progre-siva.

ANÁLISIS DE RECEPTORES DE QUIMIOCINAS ASOCIADOSCON LA RESPUESTA CLÍNICA AL TRATAMIENTO CON IFNBEN LA ESCLEROSIS MÚLTIPLE. López García C1, Rio J1, Nos C1,Deishenhammer F2, Espejo C1, Montalban X1, Comabella M1. 1Institutde Recerca, Unitat de Neuroimmunologia, Hospital Universitari Vall d'He-bron. 2Clinical Department of Neurology. Innsbruck Medical University.

Introducción. El tratamiento con interferon-beta (IFNb) ha demos-trado tener un efecto beneficioso en pacientes con esclerosis múltipleremitente-recurrente (EMRR). Actualmente existe una ausencia de mar-cadores biológicos que correlacionen de forma fiable con la respuestaal tratamiento. Diversos estudios han implicado a los receptores dequimiocinas en la patogenia de la EM ya que intervienen en el paso deleucocitos a través de la barrera hematoencefálica.

Objetivo. Identificar receptores de quimiocinas asociados con larespuesta al tratamiento con IFNb.

Métodos. Se incluyeron 41 pacientes con EMRR en tratamientocon IFNb clasificados como respondedores (27) y no-respondedores(14) en base criterios clínicos. La expresión de receptores de quimioci-nas (CCR1-5, CXCR2-4, CXCR6) se analizó mediante citometría de flu-jo en células T y monocitos antes del tratamiento, y tras 3, 6, 12, y 24meses.

Resultados. El IFNb aumentó el porcentaje de células T y mono-citos que expresaban CCR4, CXCR2, y CXCR4, y disminuyó la expre-sión de CCR2 en monocitos. Los pacientes no-respondedores mos-traron mayor expresión de células T CD8+CXCR2+ que los pacientesrespondedores. Finalmente, se observó una tendencia hacia una mayorexpresión de CCR4 en células T de pacientes no-respondedores.

Conclusiones.El IFNb podría modular los niveles de expresión dereceptores de quimiocinas en células T y monocitos. Las diferencias deexpresión de CXCR2 y CCR4 en células T de pacientes respondedoresy no-respondedores podrían utilizarse como potenciales marcadoresde respuesta clínica.

VARIANTES GENÉTICAS DEL GEN TSHR QUE AFECTAN A SUEXPRESIÓN EN EL TIMO CONFIEREN SUSCEPTIBILIDAD A LAENFERMEDAD DE GRAVES-BASEDOW. Colobran Oriol R, Armen-gol Barnils MP, Ruiz Riol M, Martínez Cáceres E, Otero MJ, Pujol-Borrell R. Banc de Sang i Teixits (BST) / Universitat Autònoma de Barcelo-na (UAB).

La enfermedad de Graves como modelo de tiroiditis autoinmune,y causa de hipertiroidismo más común, está mediada por la produc-ción de anticuerpos contra el receptor de la hormona estimulante dela tiroides (TSHR). La hipótesis de este trabajo es que variaciones gené-

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ticas del gen TSHR que modifiquen su expresión pueden afectar a suproceso de tolerización central. Recientemente nuestro grupo ha des-crito un conjunto de SNPs y haplotipos de este gen que presentan unadistribución significativamente diferente entre los pacientes con enfer-medad de Graves y la población control, destacando algunos de ellospor su elevada significación (p<0,0008 y ORs de hasta 5,94). Para deter-minar el posible papel de estos polimorfismos en la expresión del TSHRen el timo, se ha optimizado un protocolo de cuantificación específicade alelo utilizando PCR a tiempo real. La cuantificación específica dealelo se aplica en muestras de individuos heterozigotos para la varian-te de estudio, asegurando que las diferencias sean debidas a varia-ciones del propio gen y no por variaciones del resto del genoma (comopuede suceder cuando se comparan grupos de individuos). Se ha rea-lizado la cuantificación específica de alelo del mRNA del TSHR pro-veniente de timo total de 44 individuos donantes heterozigotos parala variante de interés (SNP11 A/G), que es el marcador más signifi-cativamente asociado a la enfermedad y que, a su vez, representa losprincipales haplotipos asociados a la enfermedad. Los resultados indi-can que el alelo protector (G) produce claramente una mayor expre-sión de TSHR en el timo respecto el alelo de susceptibilidad (A). Laratio media de expresión del alelo G vs A en las 44 muestras es de 1,65.Este efecto es específico del timo ya que en los tiroides analizados nose observa este fenómeno. Estos resultados muestran que existen varia-ciones del gen TSHR que confieren susceptibilidad a la enfermedad deGraves posiblemente a través de un proceso deficiente de tolerizacióncentral.

PATRÓN DE EXPRESIÓN DEL GEN DEL RECEPTOR DE LA TSHEN EL TIMO HUMANO: IMPLICACIONES PARA LA PATOGE-NIA DE LA ENFERMEDAD DE GRAVES-BASEDOW. ArmengolBarnils MP, Ruíz Riol M, Colobran Oriol R, Martínez Cáceres EM,Pujol Borrell R. Hospital Universitari Germans Trias i Pujol (Badalona),Facultat de Medicina, Universitat Autonònoma de Barcelona.

Se acepta que el timo es el órgano en el que se imparte la toleran-cia a los linfocitos T y recientemente se considera que esta función inclu-ye la tolerancia a los antígenos expresados en tejidos muy diferencia-dos o periféricos. Se conoce la participación del gen AIRE como factorregulador de la expresión de algunos de ellos en el timo. El timo, aun-que de forma decreciente, contribuye a mantener hasta edad avanza-da el pool de células T circulantes y su diversidad, por tanto varia-ciones en el nivel de expresión de autoantígenos y en la cantidad y cali-dad de los linfocitos T exportados por el timo influyen en la aparicióny curso clínico de las enfermedades autoinmunes. La enfermedad deGraves-Basedow (GB), está mediada por la presencia de autoanticuer-pos contra el receptor de la tirotropina (TSHR). Para valorar la varia-bilidad interindividual de la expresión del TSHR se ha cuantificadomediante qRT-PCR con sondas Taqman los niveles de expresión tími-ca de las dos isoformas del TSHR y su correlación con los niveles deAIRE, GAPDH, Leptina, Keratina-14 en 200 timos humanos (4 días a82 años). Los resultados obtenidos muestran una variabilidad interin-dividual de los niveles de TSHR en el timo que se mantienen en todoslos rangos de edad. A pesar de que la abundancia en células epitelia-les medulares tímicas aumenta con la edad respecto al peso total de laglándula, la falta de correlación con los niveles del TSHR indicaría unamenor transcripción del gen por célula epitelial y una reducción enla eficiencia de las células medulares epiteliales tímicas en la selecciónnegativa a partir de una cierta edad.

PERFIL DE EXPRESIÓN GÉNICA DE GLÁNDULAS TIROIDEASDE PACIENTES DE CORTA Y LARGA EVOLUCIÓN CON GRA-VES-BASEDOW. IMPLICACIÓN DE LAS SEÑALES DE PELIGROY MECANISMOS PERPETUADORES. Ruíz Riol M1, Armengol Bar-nils MP1, Colobran Oriol R1, Martínez Cáceres E1, Lucas Martín AM2,Pujol Borrell R1. 1Hospital Universitari Germans Trias i Pujol (Badalo-na), Facultat de Medicina, Universitat Autonònoma de Barcelona. 2Servei d'Endocrinologia i Diabetes.

La enfermedad de Graves-Basedow (GB) es una de las patologíasautoinmunes órgano específicas más frecuentes. Se desconocen losmecanismos que desencadenan y cronifican esta enfermedad, perose postulan las señales de peligro como moléculas importantes en esteproceso. Para valorar la contribución de éstas en el inicio y en la per-petuación de la enfermedad, hemos estudiado el perfil de expresióngénica diferencial por microarrays en 6 tiroides agrupados según eltiempo de evolución de la enfermedad (corta < 9 meses y larga > 36meses) y en 2 controles sanos. Los genes diferencialmente expresa-dos relacionados con el sistema inmune fueron clasificados en: 1/ seña-les de peligro/receptores y daño celular, 2/ homing a HEV y zonas deinflamación, 3/ inflamación, 4/ inmunidad innata, 5/ inmunidad adap-tativa, y 6/ neogénesis de tejido linfoide. De los 297 genes diferencial-mente expresados entre controles vs corta evolución, aproximadamen-te el 20% de los del sistema inmune estaban en el grupo de señalesde peligro/receptores y respuesta a daño celular (ej: Hsp90, AGER,MT1G). Precisamente en la comparación corta vs larga evolución, 212genes se hallaron diferencialmente expresados, principalmente inclui-dos en las categorías de homing hacia HEV, IFN “signature” e inmu-nidad adaptativa. Entre controles vs larga evolución (n=540 genes), serepartían entre todos los grupos establecidos (quimiocinas y recepto-res, moléculas relacionadas con procesamiento y presentación de antí-geno, y reordenamiento de Igs). Para validar los resultados del primergrupo, los genes seleccionados (OAS2, NOD27, IRF8, HSP90, MT1G,AGER, CD36, CD163, SERPINA, AIF1, ISG15, IFN-alpha, -beta, -gam-ma) han sido estudiados por inmunofluorescencia y RT-qPCR. Losresultados obtenidos hasta el momento apuntan a la participación demacrófagos y células dendríticas en el inicio y en la evolución de lapatología.

LAS HORMONAS SEXUALES INFLUYEN EN EL EFECTO PRO-TECTOR DE LA AUTOINMUNIDAD MEDIADO POR LINFOCI-TOS T QUE SOBRE-EXPRESAN BCL-2. Iglesias M1, Santiuste I1,González J2, Postigo J2, Ferández-Rey M2, Merino J2, Merino R1. 1Ins-tituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria, CSIC-Universidad deCantabria-IDICAN. 2Departamento de Biología Molecular, Universidad deCantabria.

Recientemente nuestro grupo ha demostrado que la sobre-expre-sión de Bcl-2 humano en linfocitos T (hBcl-2-T) de ratones transgéni-cos (Tg), protege contra el desarrollo de autoinmunidad. Este efectoprotector esta mediado por linfocitos T reguladores CD4+ CD25+. Dadala asociación de algunas enfermedades autoinmunes con el sexo de lospacientes, estudiamos la influencia de las hormonas sexuales sobrela capacidad moduladora de Bcl-2 en el desarrollo de artritis inducidapor colágeno (AIC), tras inmunización con colágeno bovino de tipoII (articular). Para ello, se comparó en primer lugar el desarrollo deAIC entre ratones (DBA/1 x C57BL/6)F1-hBcl-2-T (F1.Tg) y (DBA/1x C57BL/6)F1 (F1.no-Tg) machos y hembras. Como se ha descrito ante-

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riormente, los machos F1.no-Tg desarrollan una AIC más acelerada eintensa que las hembras y las hembras F1.Tg están protegidos contrael desarrollo de la enfermedad. Sin embargo, los machos F1.Tg desa-rrollan una AIC similar a la observada en las hembras F1.no-Tg. Ensegundo lugar, se observó que la castración de los machos F1.Tg inhi-be el desarrollo de AIC y que la administración de 5alfa-dihidrotestos-terona a hembras F1.Tg bloquea el efecto protector observado en loscontroles no tratados. En conclusión, nuestros resultados muestran quelas hormonas sexuales condicionan la capacidad de Bcl-2 para modu-lar la actividad de los linfocitos CD4+CD25+ reguladores y el desarro-llo de AIC.

SOBREEXPRESION DE CITOCINAS TH17 EN LA FIBROSIS PUL-MONAR INDUCIDA POR ADMINISTRACIÓN ENDOTRA-QUEAL DE ADRIAMICINA. Fernandez Rey M1, Buelta L2, TamayoE1, Iglesias M3, Merino J1, Merino R3. 1Departamento de Biología Molecu-lar, Universidad de Cantabria. 2Departamento de Ciencias Médicas y Qui-rúrgicas Universidad de Cantabria. 3Instituto de Biomedicina y Biotecnolo-gía de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDICAN.

La bleomicina es un antibiótico genotóxico con actividad antitu-moral, que induce fibrosis pulmonar cuando se administra por víai.v., endotraqueal e incluso subcutánea. Por ello es el modelo experi-mental de esclerodermia más utilizado. La administración subcutá-nea de adriamicina o doxorrubicina, otro antibiótico empleado en eltratamiento de múltiples tumores, también provoca fibrosis cutáneaen el sitio de punción, pero no afecta al pulmón. No existiendo repor-tes previos, hemos puesto a punto un modelo de fibrosis pulmonarmediante inyección endotraqueal de adriamicina y hemos analizadolos mecanismos inmunológicos que intervienen en el desarrollo delas lesiones.

Los resultados de expresión (Q-PCR) de distintos tipos de coláge-nos, de citocinas y de factores de transcripción específicos de linaje dediferenciación de células T-CD4, muestran un marcado aumento en laexpresión de colágeno-I (fibrilar) y colágeno IV (membranas basales)en relación con el incremento en la expresión de citocinas asociadas acélulas TH17 y del factor de transcripción RORgT, específico de estelinaje. En las células obtenidas mediante lavado broncoalveolar en estosanimales hemos constatado un incremento en la frecuencia de linfoci-tos CD4+ activados productores de IL-17.

Estos resultados sugieren un papel destacado de los linfocitos TH17en la producción de fibrosis pulmonar por adriamicina.

EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE LA CUATRO ISOFORMAS DE LAPROTEÍNA DE UNIÓN A CALCIO S100A9 (CALGRANULINA B)EN CÉLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFÉRICA DEPACIENTES CON LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO RESPEC-TO A CONTROLES SANOS. Pavón Castillero EJ1, Callejas RubioJL2, Ortego Centeno N2, Zubiaur Marcos M1,3, Sancho López J1. 1Insti-tuto de Parasitología y Biomedicina. Consejo Superior de InvestigacionesCientíficas. 2Hospital Clínico Universitario San Cecilio, 3 Instituto de SaludCarlos III.

La S100A8 y la S100A9 pertenecen a la familia S100 de proteínasde unión a calcio. Normalmente forman un heterodímero(S100A8/S100A9) llamado Calprotectina. Se expresan preferentemen-te en células de origen mieloide. Se han descrito incrementos en la

expresión de S100A8 y S100A9 en procesos inflamatorios. Se analiza-ron 30 muestras de pacientes con lupus previamente diagnosticadossegún los criterios de reumatología americano, y 16 muestras de per-sonas sanas voluntarias que sirvieron como controles. Las PBMCs seobtuvieron por centrifugación en gradiente de densidad con Histopa-que 1077 (Sigma-Aldrich química S.A Spain) de sangre periférica a laque se le ha añadido el anticoagulante K2-EDTA (BD Vacutainer). Laseparación de las proteínas en geles 2-DE se realizó utilizando el sis-tema Protean IEF (Bio-Rad) en la primera dimensión y el sistema CRI-TERION (Bio-Rad) en la segunda. Los geles se tiñeron secuencialmen-te con Pro-Q-Diamond, Sypro-Rubi y Bio-Safe Coomassie. La identifi-cación de proteínas por MALDI-TOF MS o por secuenciación utilizan-do nano(n)ESI. IT MS/MS se realizó de forma idéntica a la de nuestrotrabajo previo. Hemos podido identificar por espectrometría de masasS100A9 wild-type (spot 7), S100A9 truncada en su extremo N-termi-nal (spot 6 inferior), S100A9 wt fosforilada en la Thr C-terminal (spot6 superior) y S100A9 truncada y fosforilada en la Thr C-terminal (spot19). La expresión de las variantes del spot 6 está aumentada en pacien-tes con lupus eritematoso sistémico respecto a controles sanos. La uti-lización de geles 2-D, tinción secuencial con Pro-Q-Diamond y Sypro-Ruby e identificación de las proteínas por MS y posterior secuencia-ción de péptidos específicos por MS/MS permite identificar modifica-ciones postraduccionales como fosforilación en treonina o truncacio-nes “naturales”, así como determinar cambios relativos de estas modi-ficaciones en situaciones patológicas (enfermedad autoinmune vs con-troles sanos).

TRATAMIENTO CON IL-4 INCREMENTA LA ACTIVACIÓN DESTAT6 POR IFNββ. Cortes JR, Perez-G M, Rivas MD, Zamorano J. Hos-pital San Pedro de Alcantara.

El interferón β es una citoquina con numerosas actividades bio-lógicas lo que explica sus aplicaciones clínicas. La respuesta celularestá mediada por la activación de la vía JAK/STAT, principalmenteSTAT1, 2 y 3. Recientes estudios indican que interferones tipo I tam-bién pueden activar STAT6. La regulación de STAT6 por IFNβ podríatener importantes consecuencias biológicas debido al papel propues-to de STAT6 en enfermedades autoinmunes donde IFNβ es empleado.Puesto que STAT6 está principalmente regulado por la IL-4, nuestroobjetivo fue investigar la interacción entre IL-4 e IFNβ en la activaciónde STAT6. Nuestros resultados confirman que el IFNβ puede inducirla activación de STAT6. Sin embargo, la fosforilación de STAT6 indu-cida por IFN‚ es muy inferior a STAT1 o a la inducida por IL-4, indi-cando que STAT6 no es un principal sustrato para IFNβ. Sin embargo,cuando las células fueron pre-tratadas con IL-4, la activación posteriorde STAT6 por IFN‚ fue considerablemente aumentada llegando a nive-les de fosforilación similares a los inducidos por IL-4. El empleo deinhibidores descarta un papel de fosfatasas o raft de lípidos en esteproceso. Los resultados obtenidos sugieren la regulación por la IL-4de una proteína adaptadora implicada en la activación de STAT6 porel IFNβ puesto que: 1) inhibidores de la síntesis de proteínas inhibenel efecto de la IL-4 sobre la activación de STAT6 por el IFNβ, 2) la uniónde STAT6 al receptor del IFN‚ está aumentada tras el tratamiento conIL-4, 3) IL-4 induce la síntesis de RACK1, una proteína adaptadora quefacilita el reclutamiento de STATs por el receptor de interferones. Lainteracción entre IL-4 e IFNβ en la activación de STAT6 podría ser rele-vante para enfermedades como la esclerosis múltiple donde tienen unpapel destacado.

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PREVENCIÓN DE LA DIABETES TIPO 1 EXPERIMENTALMEDIANTE ADMINISTRACIÓN DE CÉLULAS DENDRÍTICASY CUERPOS APOPTÓTICOS. Marín Gallén S1, Clemente X1, PlanasR1, Ampudia RM1, Carrillo J2, Carrascal J2, Pujol-Borrell R3, Verda-guer J2, Borrás FE1, Vives-Pi M1. 1Lirad-BST. Fundacio Institut d'Investi-gació en Ciències de la Salut Germans Trias i Pujol. Badalona. 2Unitat d'Im-munologia. Universitat de Lleida. 3Banc de SAng i Teixits. Badalona.

La diabetes tipo 1 (DT1) es una enfermedad autoinmune causa-da por la destrucción selectiva de las células beta pancreáticas. Dadasu etiología desconocida, hasta el momento no se ha desarrollado unaterapia preventiva o curativa para esta enfermedad. Nuestro objetivoes valorar la eficiencia de las células dendríticas singénicas pulsadascon cuerpos apoptóticos de células de islote pancreático, como trata-miento preventivo de la DT1.

El estudio se ha llevado a cabo en un modelo experimental de DT1,el ratón NOD (Non Obese Diabetic) que expresa la citocina IFN-betaen las células productoras de insulina. Este modelo desarrolla diabe-tes acelerada a partir de las tres semanas de edad con una incidenciadel 60%. Hemos generado células dendríticas (DCs) inmaduras a par-tir de médula ósea de ratón NOD mediante cultivo con GM-CSF. Laterapia ha consistido en administrar DCs pulsadas con cuerpos apop-tóticos de la línea celular beta pancreática murina NIT-1 (DCs-NITa-po) a ratones de 12-14 días por via intraperitoneal. Como controles, sehan transferido: 1) DCs; 2) Cuerpos apoptóticos de células insularesNIT-1; 3) ‘Sham’ o suero fisiológico. El seguimiento de los ratones seha llevado a cabo durante 30 semanas para determinar el efecto de lainmunoterapia en la incidencia de la DT1.

Los resultados indican una prevención de la diabetes con DCs-NITapo (incidencia 15%). El análisis de la insulitis muestra una dismi-nución de la intensidad de infiltración leucocitaria con esta terapia. Eltratamiento con DCs no pulsadas no varía la incidencia de la enferme-dad respecto a la colonia (60%). Por otro lado, la administración decuerpos apoptóticos de NIT-1 resulta en una disminución en la inci-dencia de DT1 (25%) aunque sin alcanzar los valores obtenidos conDCs-NITapo. La determinación de los mecanismos implicados en elestablecimiento de tolerancia mediante este tratamiento contribuiráa valorar su futura aplicación.

LA DEXAMETASONA INCREMENTA LA EXPRESIÓN DE FOXP3INDEPENDIENTEMENTE DE LA ACTIVIDAD SUPRESORA. Pra-do C1, Gómez J2, López P1, de Paz B1, Gutierrez C1,2, Suárez A1. 1Dpto.Biología Funcional. Universidad de Oviedo) 2Servicio de Inmunología. Hos-pital Universitario Central de Asturias.

Dado que los pacientes de LES tratados con corticoides presentanun mayor porcentaje de células Treg, nos planteamos si estos agenteseran capaces de generar células Treg in vitro. Para ello se trataron célu-las CD4+CD25- durante 24 h con dexametasona y se expandieron conanti-CD3/CD28 en presencia de IL-2 durante 14 días. En las célulasobtenidas se analizó el fenotipo, la expresión génica de FoxP3, GITR yCTLA-4 y la actividad funcional. Igualmente se analizó el efecto de ladexametasona sobre las células Treg generadas con TGF . Las célulasexpandidas tras el tratamiento con dexametasona presentaron un feno-tipo similar al de las células Treg (CD4lowCD25highCD127-GITR+iCTLA4+CD69lowFoxp3+), mientras que los linfocitos sin dexa-metasona poseían una expresión significativamente menor de FoxP3 yiCTLA-4 (mRNA y proteína) y mayor de CD69. Es de destacar que este

efecto de la dexametasona incrementado la expresión de Foxp3 fuemucho más pronunciado en el caso de las células Treg generadas conTGF . Todas las células generadas con el esteroide eran anérgicas, sinembargo, al estudiar la capacidad antiproliferativa, se observó que sóloaquéllas generadas con TGF? eran capaces de inhibir la proliferación,y que el incremento en la expresión de FoxP3 no suponía un aumentosignificativo del porcentaje de inhibición (25.2% vs 32.6%). Estos resul-tados están de acuerdo con los encontrados en el estudio de pacientesde LES, en los que la actividad supresora de los linfocitos T CD4+CD25+aislados de pacientes con tratamiento esteroideo fue similar a la delas células aisladas de pacientes sin este tratamiento. Estos resultadosindican que aunque los esteroides incrementan significativamente laexpresión de FoxP3, tanto in vivo como in vitro, no son capaces de gene-rar células con función reguladora y sugieren que FoxP3 no es un buenmarcador de células Treg en humanos, apoyando las diferencias des-critas entre humanos y ratones en la regulación de la actividadsupresora/reguladora de esta población celular.

EFICACIA TERAPEUTICA DE LA POLINEUROPATIA MIXTA SEN-SITIVO-MOTORA CON FATIGA INCAPACITANTE EN EL SIN-DROME DE SJÖGREN TRAS TRATAMIENTO CON RITUXIMAB.Velastegui Ordoñez A, Oliver D, Rodríguez-Mahou M, Gil J, Fernan-dez-Cruz E, Sanchez-Ramon S. Hospital Gregorio Marañon. Madrid.

Introducción. Las manifestaciones neurológicas en pacientes conSíndrome de Sjögren Primario (SSP) pueden aparecer hasta en el 20%de los casos, sin embargo su diagnóstico en muchas ocasiones puederesultar difícil.

Presentamos un caso clínico de SSP refractario al tratamiento con-vencional (corticoides, inmunosupresores, IGIV) cuyo síntoma princi-pal es la fatiga incapacitante en el contexto de Polineuropatía MixtaSensitivomotora y con sintomatología leve de síndrome seco tratadocon Rituximab en monoterapia.

Objetivos. Determinar la correlación entre evolución de síntomasy signos clínicos con niveles de anticuerpos asociados al SSP tras el tra-tamiento con Rituximab en monoterapia. Y evaluar la mejora en la cali-dad de vida del paciente.

Método. Administración de Rituximab (375 mg/m2 I.V. cada 4semanas) con seguimiento de parámetros de laboratorio, estudio iso-tópico de gandulas salivares, test de Schirmer, biopsia glandular, estu-dio neurofisiológico y TAC craneal. Se monitorizaron en tiempo basal,1º mes, 6º mes, 9º mes, 1 año.

Periódicamente se evaluó la respuesta subjetiva del paciente enrelación al grado de incapacidad para actividades cotidianas median-te los Test de calidad de vida SF-36 y WHOQOL-100 de la OMS.

Resultados. Se objetivó mejoría progresiva y mantenida principal-mente de los síntomas de fatiga incapacitante y debilidad en miem-bros inferiores, asociado con una mejoría leve de la conducción ner-viosa en los estudios neurofisiológicos. A pesar de la evolución favo-rable de los síntomas clínicos neurologicos y de la xerostomía/xero-talmía, comprobado por estudio isotópico de glándulas salivares y Testde Schirmer, no existió cambio en los títulos séricos de FR y Ac. Anti-RO/SSa. No se objetivaron efectos adversos en la terapia con Rituxi-mab, ni fue necesaria la administración concomitante de IGIV ni otrostratamientos. Con mejoría de la calidad de vida del paciente.

Conclusiones. En este paciente se comprobó la efectividad de ritu-ximab en monoterapia con control del cuadro tipico de SSP y de lascomplicaciones atribuibles a la Polineuropatía mixta sensitivo-motora.

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RESPUESTA CLINICA FAVORABLE DE UVEITIS REFRACTARIATRAS USO DE INFLIXIMAB. Carbone J, Sarmiento E, Fernández-Cruz E. Hospital Gregorio Marañon. Madrid.

La uveitis agrupa a una serie de enfermedades inflamatorias ocu-lares que afectan la capa media del ojo (iris, cuerpo ciliar y coroides)pudiendo causar pérdida visual grave. Un subgrupo de uveitis de cau-sa no infecciosa es de etiología autoinmune.

Objetivo. Evaluar la respuesta a infliximab (anticuerpo monoclo-nal anti-TNF alfa) en pacientes con uveitis refractaria.

Métodos. Revisión del curso clínico de 2 pacientes con pan uvei-tis bilateral refractaria a terapia convencional tratados con infliximaben la Unidad de Inmunología Clínica del HGUGM. Respuesta tera-péutica: incidencia de recurrencias de uveitis, evidencia oftalmológi-ca de disminución de la actividad inflamatoria ocular, agudeza visual,reducción de la dosis de glucocorticoides sistémicos y efectos adver-sos; a mes 0, 3, 6 y 12. Protocolo: 3 infusiones de infliximab las sema-nas 0, 2, y 6. Se evaluó respuesta clínica en semana 10. Si había respues-ta clínica se continuaba con una infusion en semana 14 y luego cada8 semanas hasta el año.

Resultados. Dos pacientes [1H (29a), 1M (46a)]. Ambos habíanutilizado distintas combinaciones de corticoides sistémicos, azatio-prina, ciclosporina y gammaglobulina intravenosa a alta dosis. Tiem-po de enfermedad: 60 m y 41 m. Tratamiento de base al comenzarinfliximab: prednisona 50 mg/d + azatioprina 100 mg/d y predniso-na 90 mg/d. Tiempo de seguimiento tras primera dosis de infliximab:24 m y 18 m. A sem 10 ninguno de los pacientes tenía actividad infla-matoria ocular y completaron el protocolo hasta el año. Al año nin-guno tenía actividad inflamatoria ocular. A 12 m y 6 m tras últimainfusion de infliximab ambos siguen libres de uveitis. No se registra-ron efectos adversos salvo un episodio de prurito transitorio en lapenúltima infusión en la paciente. El tratamiento inmunosupresor sepudo reducir en ambos pacientes: El paciente varon suspendió aza-tioprina y redujo prednisona hasta dosis actual de 5 mg de predni-sona cada semana; la paciente redujo la dosis de corticoides hastadosis actual de deflazacort 7.5 mg cada 48 horas. Durante el segui-miento tras uso de infliximab la paciente tuvo ANA positivo a títu-lo bajo.

Conclusiones. Infliximab fue bien tolerado y efectivo en 2 pacien-tes con uveitis refractaria de larga duración.

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SESIÓN 1: AUTOINMUNIDAD - I

Moderadores: Dra. Joana Ferrer (Palma de Mallorca), Dra. Júlia Sequí (Madrid)

1. ASOCIACIÓN INDEPENDIENTE DE LOS GENES IL23R EIL12B CON ENFERMEDAD INFLAMATORIA INTESTINAL:NO EVIDENCIA DE INTERACCIÓN. Márquez Ortiz AM1, Men-doza JL2, Taxonera C2, Díaz-Rubio M2, Gómez de la Concha E1,Urcelay E1, Martínez-Doncel A1. 1Servicio de Inmunología Clínica,Hospital Clínico San Carlos. 2Servicio de Gastroenterología, HospitalClÍnico San Carlos.

Estudio genómicos recientes han identificado a los genes IL23R eIL12B como loci de susceptibilidad a enfermedad inflamatoria intesti-nal (EII). Nuestro objetivo es dilucidar si estos genes también se aso-cian a la enfermedad en nuestra población así como analizar la posi-ble interacción genética entre polimorfismos localizados en los genesIL12B e IL23R, ligando y receptor r espectivamente.

En este estudio se incluyeron 707 pacientes con EII, 344 con enfer-medad de Crohn y 363 con colitis ulcerosa, y 547 controles sanos cau-cásicos. Se analizaron cuatro polimorfismos de un solo nucleótido(SNPs), dos de ellos localizados en el gen IL23R (rs7517847 y rs11209026)y otros dos en el gen IL12B (rs3212227 y rs6887695). Las frec uenciasgenéticas se analizaron mediante un test CHI-CUADRADO.

Nuestros datos muestran una asociación con EII de los dos SNPslocalizados en el gen IL23R, siendo estadísticamente más fuerte parael marcador rs7517847 (OR=0.79, frecuencias del alelo minoritario: 0.355in pacientes con EII vs. 0.410 en controles; p=0.005). Ambos polimor-fismos presentaban un efecto mayor en los pacientes de Crohn(OR=0.74) que en los enfermos de colitis (OR=0.84). Uno de los mar-cadores analizados en el gen IL12B (rs6887695) mostró una asociacióndébil con EII (OR=1.24, frecuencias del alelo minoritario: 0.375 in pacien-tes con EII vs. 0.326 en controles; p=0.012), con un efecto más fuerte encolitis ulcerosa (OR=1.31, p=0.007). La estratificación de los pacientesatendiendo a características clínicas no mostró diferencias significati-vas. No se observó interacción entre ninguno de los polimorfismosestudiados en los genes IL12B e IL23R.

Nuestro estudio confirma la asociación de los genes IL23R e IL12Bcon EII en población española, no encontrando evidencias de interacción entre los dos genes analizados.

2. COMPARACION DEL LOS POLIMORFISMOS DE GENES DEINTERLEUCINAS EL PACIENTES CON ARTRITIS REUMA-TOIDE Y UN GRUPO CONTROL. Leon Moya V1, Leon ArroyoA2, Montilla C3, Gomez S3. 1Serv Analisis Clinicos. Hospital Uni-versitario de Salamanca. 2Laboratorio Pediatria e Inmunologia. Uni-versidad de Valladolid. 3Serv. de Reumatologia, Hospital Universitariode Salamanca.

Hemos estudiado polimorfismos de IL en 22 pacientes diagnos-ticados de artritis reumatoide y 28 controles. Los polimorfismos fue-ron analizados empleando el kit Citokine genotiping Kit (Pel-freez).

No hemos encontrado diferencias significativas enter los gruposde pacientes de artritis reumatoide y el control.

Los polimorfismos hallados para el grupo control fueron:IL-1alpha/ - 889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 45

CT/15 TT), IL-1beta/ 396 (60 CC/35CT/5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (5CC/47.5 CT/47,5 TT), IL1R/psti 1970 (50 CC/40 CT/10 TT), IL-2/ - 330(15 GG/ 45 GT/40 TT), IL-2/ 166 (50 GG/40 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10GG/ 27.5 GT/ 62,5 TT), IL-4/ - 590 (72.5 CC/25 CT/ 2,5 TT), IL-4/ - 33(75 CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (60 AA/35 AG/5 GG), IL-6/ - 174(20 CC/ 40CG/40 GG), IL-6/ 565 (12.5 AA/52,5 AG/35 GG), IL-10/ - 592(5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (50 CC/40 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (25AA/50AG/25 GG), IL-12/ - 1188 (62.5 AA/32.5 AC/5CC), IFN gamma/utr5644 (32.5 AA/42,5 AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG),TNF alpha/ - 308 (10 AA/25 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (25 CC/50CT/25 TT), TGF beta1/codon 25 (0 CC/15 CG/85 GG)

Grupo Pacientes Artritis Reumatoide: IL-1alpha/ - 889 (57.5 CC/40CT/2.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 50 CT/10 TT), IL-1beta/ 3962 (50CC/32.5CT/7.5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (0CC/50 CT/50 TT), IL1R/psti1970 (45 CC/52.5 CT/7.5 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 50 GT/35 TT), IL-2/ 166 (55 GG/35 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 22 GT/ 70 TT), IL-4/ - 590 (75CC/25 CT/ 0 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5 TT), IL-4Ralpha/1902 (75 AA/15 AG/10 GG), IL-6/ - 174 (15CC/ 45CG/40 GG),IL-6/ nt 565 (10 AA/50 AG/40 GG), IL-10/ - 592 (5 AA/45 AC/50 CC),IL-10/ - 819 (55 CC/35 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (20 AA/50AG/30 GG),IL-12/ - 1188 (65 AA/35 AC/0 CC), IFN gamma/utr 5644 (35AA/40AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG), TNFalpha/ - 308 (5 AA/30 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (20 CC/50CT/30TT), TGFbeta1/codon 25 (0 CC/15CG85 GG).

3. ICAM-1 NO MUESTRA EVIDENCIAS DE ASOCIACIÓN AENFERMEDAD CELÍACA EN POBLACIÓN ESPAÑOLA. DemaJiménez B1, Martínez Doncel A1, Polanco I2, Malvenda C1, Figue-redo MA1, Fernández-Arquero M1, Gómez de la Concha E1, Urce-lay E1, Núñez Pardo de Vera C1. 1Hospital Clínico San Carlos. 2Hos-pital La Paz.

La enfermedad celíaca (EC) es una enfermedad inflamatoria crónica intestinal que se desarrolla en individuos genéticamente susceptiblestras exposición al gluten. El gen ICAM1, localizado en la región de liga-miento a EC 19p13, codifica la molécula de adhesión intercelular-1(ICAM-1). En celíacos se ha observado mayor expresión de ICAM-1 enel subepitelio intestinal y en suero. Además, la gliadina induce la expre-sión de ICAM-1 en cultivos de biopsias de pacientes. Recientemente,polimorfismos en ICAM1 se han asociado a EC en población franc esa.Nuestro objetivo es estudiar si polimorfismos en ICAM1 están asocia-dos a EC en la población española. Para ello se llevó a cabo un estudiocaso-control, con 608 pacientes y 535 individuos sanos, todos españolesblancos. La mayoría de los enfermos fueron pediátricos (debut anteriora 15 años). Estudiamos 4 polimorfismos de un único nucleótido (SNPs)de ICAM1: rs281432 (intrónico), rs1799969 (G241R), rs1801714 (P352L)y rs5030400 (R478W), con sondas Taqman. Los haplotipos se estima-ron con el algoritmo EM (“Expectation-Maximization”). La compara-ción de frecuencias genotípicas, alélicas o haplotípicas caso-control nomostró diferencias estadísticamente significativas. La subdivisión depacientes por edad de debut tampoco mostró diferencias significativasentre ambos grupos, ni la estratificación por el principal factor genéticode susceptibilidad a EC conocido, HLA-DQ2. Esto nos permite concluir

PostersInmunología

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que, en contra de lo descrito en población francesa, en la que el polimor-fismo G241R parecía conferir susceptibilidad a EC, con mayor efecto enpoblación adulta, nosotros no observamos que ninguno de los 4 poli-morfismos estudiados aumente el riesgo a padecer EC, a pesar de tenermás del 99% de potencia para detectar el efecto de G241R descrito enpacientes pediátricos. Nuestra escasa muestra de pacientes con debutde la enfermedad en edad adulta (posterior a 18 años) no permite des-cartar que ICAM1 afecte sólo a este subgrupo de enfermos.

4. EPÍTOPO COMPARTIDO Y ANTICUERPOS ANTI PÉPTIDOCITRULINADO: RELACIÓN CON EDAD DE COMIENZO YTIEMPO DE EVOLUCIÓN DE LA ARTRITIS REUMATOIDE.Varadé López J1, Loza-Santamaría E2, Perdigones N1, Fernández-Arquero M1, Figueredo MA1, Rodríguez L2, Gómez de la Concha E1,Fernández-Gutiérrez B2, Urcelay E1, Martinez-Doncel A1. 1Inmu-nología Clínica Hospital Clínico San Carlos. 2Reumatología Hospital ClÍ-nico San Carlos.

Introducción. La artritis reumatoide es una patología complejacon un fuerte componente autoinmune; el principal factor genético deriesgo conocido hasta ahora son ciertos alelos del complejo principalde histocompatibilidad (HLA). Los alelos de susceptibilidad en DRB1comparten una secuencia común; denominada epítopo compartido(SE). Los anticuerpos anti-péptido cíclico citrulinado (anti-CCP) sonuno de los mejores marcadores predictores del desarrollo de AR.

En este estudio queremos analizar la relación entre SE, anti-CCPy edad de inic io de los síntomas de AR, teniendo en cuenta el posi-ble efecto de la duración de la enfermedad.

Materiales y métodos. Analizamos, en un estudio transversal, 411pacientes de AR que fueron genotipados para HLA-DRB1 con el kitLifecodes HLA-SSO; los anticuer pos anti-CCP se determinaron porELISA con el ensayo Immunoscan Euro-Diagnostica. El análisis esta-dístico se realizó con el paquete estadístico STATA v9.0.

Resultados. Como esperábamos, SE y anticuerpos anti-CCP esta-ban fuertemente correlacionados (p<10-5). Observamos una modestacorrelación entre la edad de inicio de los síntomas y ambos marcado-res (SE: p=0.12; anti-CCP: p=0.07). Observamos que existe una corre-lación entre la edad de inicio de los síntomas y el tiempo de evoluciónde la enfermedad (p<10-7, r=-0.43). Al corregir este efecto medianteun análisis multivariado, se pone de manifiesto que los anticuerposanti-CCP están correlacionados con el tiempo de evolución de la enfer-medad (p=0.009) pero no con la edad de inicio de los síntomas (p=0.52).

Conclusión. Nuestros datos sugieren que los anticuerpos anti-CCPno sólo son detectables antes de que aparezcan los primeros síntomasde la enfermedad, como se describe en la literatura, sino que tambiénpueden aparecer durante el desarrollo de la misma como resultado delproceso inflamatorio en los pacientes genéticamente proclives.

5. RESPUESTA Th17 FRENTE A Th1 EN LA ENFERMEDAD DECROHN. Veny M1, Closa D1, Esteller M1, Pique JM2, Panés J2,Salas A1. 1Departament d'Isquèmia i Inflamació, IIBB-CSIC-CIBE-REHD, Barcelona. 2Departament de Gastroenterologia, Hospital Clínic,IDIBAPS-CIBEREHD, Barcelona.

Introducción. La enfermedad de Crohn es una enfermedad infla-matoria crónica del tracto digestivo caracterizada por un exceso de res-puesta linfocitaria Th1. Recientemente se ha descrito una nueva pobla-

ción linfocitaria efectora, las células Th17. Esta población y sus media-dores (IL-17, IL-22, así como también la citocina activadora de esta res-puesta, IL-23) se han identificado como determinantes en la patologíade diversas enfermedades inflamatorias así como en modelos experi-mentales de colitis.

Objetivo. Caracterizar la contribución de la respuesta Th17 fren-te a la Th1 en la enfermedad de Crohn.

Métodos. Aislamiento de linfocitos CD4+ de sangre de controlessanos y pacientes con enfermedad de Crohn activa o en remisión. Cul-tivo de estas células y determinación de la proporción de células pro-ductoras de citocinas por marcaje intracelular y citometría de flujo.

En algunos experimentos, activación de las células con a-CD3/a-CD28 y adición de IL-12, IL-23 o medio de cultivo.

Cuantificación por ELISA de la producción total de IFN-γ, IL-17e IL-22 en el sobrenadante de los cultivos.

Resultados. Los pacientes con enfermedad de Crohn activa pre-sentan un mayor porcentaje de células IL-17+ (p-valor<0.05) así comoun aumento en la secreción de IL-17 con respecto a los enfermos enremisión y a los controles. El porcentaje de células IL-22+, y tambiénla cantidad de esta citocina, en los enfermos activos es mayor que enlos inactivos. Por el contrario, tanto el porcentaje como la cantidadde IFN-γ no se correlacionan con la enfermedad ni con su actividad.Además, los enfermos que presentan su primer o segundo brote deactividad no se comportan como los activos con antecedentes sino quesus niveles de IL-17 son más bajos y comparables a los de los enfermosinactivos y los controles.

En respuesta a activación los linfocitos CD4+ producen más IFN-γy más IL-17. La adición al cultivo de IL-23 no afecta a la secreci ón deIFN-γ pero en cambio pone de manifiesto una mayor sensibilidad de losenfermos de Crohn a esta citocina ya que provoca un incremento en laproducción de IL-17 (p-valor<0.01) no observado en los controles.

Conclusiones. Nuestros experimentos muestran que la respuestalinfocitaria tipo Th17, y no la Th1, se correlaciona con la actividad dela enfermedad de Crohn. Además esta subpoblación Th17 apareceaumentada en los enfermos crónicos pero no en los primeros brotes dela enfermedad sugiriendo que este tipo de respuesta puede jugar unpapel importante en los estadios crónicos pero no en el debut de laenfermedad.

6. EL GRADO DE INFLAMACIÓN MODIFICA EL FENOTIPO DELAS CÉLULAS T REGULADORAS EN PACIENTES CONARTRITIS REUMATOIDE. Marín Alberca MG1, Pérez García V1,Peris Pertusa A1, Navarro Blasco FJ2, Sempere Ortells JM1. 1Univer-sidad de Alicante, Departamento de Biotecnología, División de Inmuno-logía. 2Hospital General Universitario de Elche, Unidad de Reumatología.

Introducción. Las células T reguladoras (Treg) participan en latolerancia periférica evitando la activación y correcto funcionamientode clones autorreactivos y, por tanto, la aparición de enfermedadesautoinmunes como la Artritis Reumatoide (AR). Objetivos: Caracte-rizar de manera más completa el fenotipo de membrana de Treg desangre periféric a de pacientes con AR, para buscar posibles cambiosdinámicos en estos parámetros según el grado de actividad de la enfer-medad (DAS28) y los periodos de actividad/remisión. Metodología:Se analizaron muestras de sangre periférica de 58 pacientes con AR y38 controles sanos. 22 pacientes estaban en remisión (DAS28?3.2), 21presentaban una actividad moderada (>3.2 DAS28?5.1) y 15 se encon-traban muy activos (DAS28>5.1). Se analizó la expresión de los mar-

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POSTERS VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

cadores de membrana CD28, CD45RA, CD45RO, CD45RBlow, CD38,CD62L, CD134, CD152 y CD154 en linfoci tos CD4, CD8 y CD19, cono sin baja, intermedia o alta expresión de CD25. El análisis se realizópor citometría de flujo. Resultados: Descenso del porcentaje deCD4+CD25+ en pacientes (p<0.0005), especialmente CD4+CD25highy CD4+CD25int. Pacientes más activos presentan menor porcentaje decélulas CD4+CD25high y CD4+CD25int (p=0.007). También descien-den CD4+CD38+ (p<0.0001), CD4+CD62L+ (p<0.005),CD8+CD25highCD45RA+ y CD8+CD25intCD45RA+ (p<0.01) enpacientes. Aumenta la expresión de diferentes antígenos como CD134(p<0.05), CD45RBlow (p<0.0001) o CD152 (p<0.000001) en célulasCD4+CD25+, y la proporción de otras Treg como las CD4+CD152+(p<0.05) o las CD8+CD28- en pacientes. Demostramos que la mayoríade estos cambios guardan relación con el grado de inflamación, alcan-zando sus menores o mayores niveles en pacientes moderados/acti-vos respecto a controles y, en algunos casos, frente a inactivos. Conclu-siones: Un balance apropiado de estas poblaciones de Treg, podríadeterminar el grado de inflamación y, por tanto, podría r elacionarsecon los periodos de actividad/remisión.

7. DETECCIÓN DE FOXP3 EN CÉLULAS T REGULADORAS DEPACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE A DIFERENTESGRADOS DE INFLAMACIÓN. Pérez García V1, Marín Alber-ca G1, Peris Pertusa A1, Navarro Blasco F2, Sempere Ortells JM1.1Universidad de Alicante. 2Hospital General Universitario de Elche.

Introducción. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad cró-nica inflamatoria de carácter autoinmune, en la cual los pacientes sufrenuna dinámica inflamatoria caracterizada por fases de remisión/acti-vación. Las células T reguladoras, fundamentales para el mantenimien-to de la autotolerancia y la prevención de enfermedades autoinmunes,expresan de manera constitutiva el factor de transcripción FoxP3.

Objetivos. Analizar la expresión de FoxP3 por citometría de flu-jo en diferentes poblaciones celulares de sangre periférica en pacien-tes AR (vs. controles sanos), y determinar si existen cambios en su detec-ción asociados al grado de inflamación según el DAS28 (Disease Acti-vity Score).

Métodos. Células mononucleares de sangre periférica de 23 pacien-tes AR (5 en remisión, 11 con actividad inflamatoria moderada, 7 muyactivos) y 10 controles sanos fueron analizadas. Las células fueron mar-cadas con anti-CD4-FITC, anti-CD8-FITC o anti-CD19-FITC en com-binación con anti-CD25-Pe-Cy5. Posteriormente, las células se proce-saron según el Kit FoxP3-PE Staining Set (clone PCH101, eBioscience).FoxP3 fue analizado por citometría de flujo teniendo en cuenta dife-rentes intensidades para el CD25.

Resultados. El porcentaje de células FoxP3+ aparece aumentadoen las células CD4+ (p<0.01) y subpoblaciones CD4+CD25low/int/high(p<0.05) de los pacientes, respecto a los controles. Existe una tenden-cia al aumento de células CD8+CD25+FoxP3+ en los pacientes respec-to a los controles sanos. El análisis según el DAS 28, muestra un aumen-to de células CD4+FOXP3+ y subpoblaciones CD4+CD25low/int/highFoxP3+ en paralelo al grado de inflamación, siendo sobretodo en lospacientes activos vs. controles (p<0.01) o vs. en remisión (p<0.05) don-de las diferencias son más significativas.

Conclusiones. El aumento de células FoxP3+ en la sangre perifé-rica de pacientes, especialmente marcado durante los brotes, podríatraducirse en un intento del sistema inmunológico por controlar laenfermedad.

8. EL ESTADO HETEROCIGOTO PARA LOS POLIMORFISMOSDEL GEN VDR ES PROTECTOR DE CELIAQUÍA. Manzana-res Martín B, Casado A, González Fernández R, Jimenez GómezJ, Sánchez Ruiz F, Rodriguez Reynoso F, Quesada Gómez M, PeñaMartínez J. Hospital Reina Sofia.

Introducción. La enfermedad celiaca (MIM 212750) es un desor-den crónico autoimmune causado por intolerancia al gluten en suje-tos genéticamente susceptibles. Los genes HLA sólo confieren un 40%del riesgo genético de padecer esta enfermedad. Los enfermos celia-cos (EC) presentan alteraciones en el metabolismo de la vitamina D,que además de su efecto en el metabolismo del calcio, tiene un efectoinmunomodulador. Recientemente se han demostrado diferentes aso-ciac iones entre los polimorfismos del gen del receptor de la vitami-na D (VDR) y enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, en el presen-te estudio nos planteamos determinar si los polimorfismos CDX-2,BSM-I, FOK-I deVDR son factores de r iesgo de EC. Se estudiaron 50familias con al menos un hijo con EC y algún hermano HLA idénticoal paciente. Se tiparon por PCR-SSO de Dynal (tipaje genérico) y PCR-SSO Innogenetics (AR) los loci DRB1, DRB3, DRB4, DRB5, DQB1 yDQA1 de los padres, el paciente y sus hermanos para confirmar la iden-tidad HLA. El paciente y su(s) hermano(s) HLA idéntico(s) fueron geno-tipados para el polimorfismo de VDR (CDX 2, Fok I, Bsm I) usandouna amplificac ión por PCR seguido por digestión por endonucleasasde restricción y electroforesi s en geles de agarosa.

Resultados. La comparación de los genotipos VDR de los pacientescon sus hermanos HLA idénticos demostró que la proporción de “hete-rocigotos” en CDX-2, Bsm-I y Fok-I para los tres polimorfismos estudia-dos era significativamente superior en el grupo de los hermanos sanos.Ningún EC resultó ser heterocigoto para los tres polimorfismos a la vez.En el grupo control también encontramos una mayor proporción esta-dísticamente significativa de sujetos heterocigotos respecto a los pacien-tes celiacos. Cuando se compararon los haplotipos resultantes de las com-binaciones de dos polimorfismos (CDX + Bsm I, CDX-2 + Fok I, Bsm I+ Fok I) el porcentaje de dobles heterocigotos fue mayor en los herma-nos sanos (28%, 28%, 28% respectivamente) con relación a EC (4.35%,8.7%, 17.39%). Los controles se comportaron como los hermanos sanos.

9. LA PRESENCIA DE DRB1*0405 EN PACIENTES CON ARTRITISREUMATOIDE SE ASOCIA A REFRACTARIEDAD A LOS TRA-TAMIENTOS CONVENCIONALES (MTX / SLZ / HCLQ). Manza-nares Martín B, Martínez Sánchez F, González Fernández R, Carras-co JA, Collantes Estevez E, Peña Martínez J. Hospital Reina Sofia.

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria arti-cular crónica mediada por alteraciones inmunológicas que afecta al0.5% de la población adulta española. La presencia de una secuenciacomún de aminoácidos en las posiciones 70-74 de la tercera regiónhipervariable de la cadena beta (DRBI-SE), se relacionan a un peor cur-so clínico sobre todo los alelos que contienen la secuencia de aminoá-cidos (motif) QRRAA. También es conocida la relación existente entrelos alelos DRB1-SE(+) , los ac antiPCC y el FR a las formas de mayorseveridad clínica. Por tanto nuestro objetivo ha sido determinar la pre-sencia de alelos DRB1-SE, Ac antiPCC y FR en pacientes con AR ini-ciales refractarios al tratamiento secuencial con los DMARDs clásicoshidroxichloroquine (HCQ), salazopiry ne (SLZ) y methotrexate(MTX).

Pacientes y métodos. Se incluyeron 153 pacientes con AR inicial(menor de 1 año), que cumplían criterios diagnósticos del ACR y de

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INMUNOLOGÍA POSTERS

ellos 42 cumplían criterios de refractariedad a los DMARDs clásicos.Todos disponían del tipaje de alta resolución de los alelos DRB1, nive-les de Ac antiPCC y FR, variables clínicas, tiempo de evolución hastasuspensión de MTX, número de DMARDs administrados; variablesdel DAS 28, HAQ y la progresión radiográfica según método Sharpmodificado por Van der Heijde.

Resultados. En los pacientes refractarios enc ontramos mayor fre-cuencia de DRB1*0405 (p=0.012; OR 6.31), de Ac antiPCC (p=0.03; OR3.79), predominancia del género femenino (p=0.006), mayor numerode DMARDs (p<0.000) y una prevalencia más alta del FR (p=0.002). Elalelo DRB1*0101 fue el más frecuente en ambos grupos: refractarios(17.6%) vs no refractarios (15.2%).

10. INFLUENCIA DE LOS GENOTIPOS DE IL-10 Y TNF-ALPHAEN LA ARTRITIS REUMATOIDE. de Paz B1, Alperi M2, LópezP1, Prado C1, Ballina J2, Gutiérrez C1, Suárez A1. 1Área de Inmuno-logía. Departamento de Biología Funcional. Universidad de Oviedo. 2Ser-vicio de Reumatología. Hospital Universitario Central de Asturias.

Los genotipos funcionales de la IL-10 y el TNF se han asociado conla susceptibilidad y la evolución clínic a de varias enfermedades autoin-munes, por lo que nos propusimos analizar su posible influencia en eldesarrollo de la AR. Para ello analizamos los alelos presentes en -1082IL-10 y -308 TNF de 343 controles sanos y 165 pacientes de AR en losque se recogieron los parámetros clínic os al diagnóstico, el tratamien-to en el momento de la toma de muestra y, en algunos pacientes, la res-puesta observada a los 6 meses. La distribución de genotipos de la IL-10 mostró diferencias significativas entre pacientes y controles, estan-do disminuidos los genotipos bajos productores de esta citocina (-1082AA) en pacientes (26% vs 39%), mientras que los portadores delalelo -1082G* presentaban un mayor ri esgo de padecer la enfermedad(OR=1,8, IC: 1,2-2,7, p=0.004). Además, el análisis de los parámetros clí-nicos indicó que la presencia de este alelo incrementaba la VSG, la PCR,el DAS y la edad al diagnóstico, pero no se asociaba con presencia deautoanticuerpos (antiCCP, FR). No se encontró una asociación signifi-cativa con los genotipos del TNF , aunque el genotipo combinado altoIL-10/bajo TNFγ era el que tenía un mayor riesgo de padecer la enfer-medad. Por otra parte, en otras patologías se ha sugerido que la respues-ta a los esteroides puede estar influida por el genotipo de la IL-10. Ennuestros pacientes de AR la prednisona se suministra habitualmente encombinación con otros tratamientos, frecuentemente con metrotrexato,por lo que analizamos la respuesta al tratamiento combinado con estos2 agentes midiendo la mejoría en el DAS a los 6 meses. Resultados pre-liminares (n=37) sugieren una mejor respuesta al tratamiento en lospacientes altos productores de IL-10. En resumen, estos resultados sugie-ren que los portadores del genotipo alto productor de IL-10 presentanuna mayor susceptibilidad a padecer AR pero tienen mayor pr obabili-dad de respuesta al tratamiento con prednisona y metrotrexato.

11. EFECTO DE UNA DIETA RICA EN ANTIOXIDANTES SOBREEL ESTRÉS OXIDATIVO DE LA ARTRITIS ADJUVANTE.Ramos-Romero S, Ramiro-Puig E, Ramírez-Santana C, Pérez-Cano FJ, Castellote C, Franch A, Castell M. Facultad de Farmacia,Universidad de Barcelona.

Durante un proceso inflamatorio se eleva la producción de espe-cies reactivas de oxígeno (ROS), moléculas capaces de oxidar macro-

moléculas como DNA, carbohidratos, proteínas y lípidos, y contribuirasí en la patogenia de diversas enfermedades. En este sentido, la inges-ta de dietas ricas en antioxidantes puede tener un efecto moduladoren determinados estados patológicos. El objetivo del presente estudiose centra en determinar el estado oxidante/antioxidante en un mode-lo de artritis experimental (artritis adyuvante, AA) y establecer lainfluencia sobre el desarrollo del proceso inflamatorio de una dieta ricaen antioxidantes como es el cacao, producto con un elevado conteni-do en flavonoides. El estudio se ha realizado en ratas Wistar, alimen-tadas con un 5 o un 10% de cacao, incorporado en el pienso. A las 4semanas de la inducción, se han obtenido macrófagos peritoneales ymuestras esplénicas. Se ha cuantificado la producc ión de ROS a par-tir de macrófagos mediante técnicas fluorimétricas y se han determi-nado las actividades catalasa y superóxido dismutasa (SOD) en tejidoesplénico mediante kits específic os (Calbiochem). A las 4 semanasde la inducción, la inflamación articular se encuentra ligeramente ate-nuada en los animales que han recibido las dietas ricas en cacao res-pecto a los animales artríticos de referencia. La producción de ROS fuesuperior en macrófagos procedentes de AA que en animales sanos(p<0,05). Este incremento fue inferior en los animales que recibieroncacao. Por otro lado, la AA causa, en bazo, disminución de la activi-dad catalasa (p<0,05) y aumento de la actividad SOD (p<0,05), alte-raciones que no son tan marcadas tras una dieta rica en cacao. En con-clusión, una dieta rica en flavonoides atenúa el estrés oxidativo delproceso artrítico.

12. INFLUENCIA DE UNA DIETA RICA EN FLAVONOIDESSOBRE LAS POBLACIONES LINFOCÍTICAS DURANTE UNPROCESO ARTRITICO EXPERIMENTAL. Ramos-Romero S,Pérez-Berezo T, Suàrez-Germà C, Castell M, Franch A, Pérez-CanoFJ. Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona.

Los flavonoides son compuestos de origen vegetal, con una reco-nocida capacidad antioxidante. Esta actividad parece ser la causantede sus efectos beneficiosos a nivel cardiovascular y también en proce-sos cancerosos. Sin embargo, hasta ahora, poco se sabe sobre el efec-to de los flavonoides sobre el sistema inmunitario. El objetivo de esteestudio se ha centrado en determinar el efecto de una dieta rica encacao, producto con un elevado contenido en flavonoides, sobre dife-rentes poblaciones linfocíticas y sobre la respuesta humoral durante laartritis adyuvante (AA).

Se ha dispuesto de ratas Wistar adultas que recibieron dietas ricasen cacao. La artritis se ha inducido mediante inyección i.d. en la basede la cola de Mycobacterium butyricum (Mb) inactivado.

A los 30 días de la inducción, se ha procedido al estudio delas diferentes poblaciones linfocíticas presentes en ganglios linfáti-cos inguinales y sangre por técnicas de citometría de flujo. Asimis-mo se han cuantificado los anticuerpos anti-Mb presentes en sue-ro.

Los ganglios linfáticos inguinales de los animales con AA presen-tan una menor proporción de linfocitos B y un mayor porcentaje decélulas NKT así como de linfocitos T activados. Los animales someti-dos a las dietas ricas en flavonoides no modifican estas alteraciones sibien disminuyen la proporción de linfocitos T CD4+ (Th) y aumentanla de linfocitos T CD8+ (Tc), tanto los correspondientes a células TCR+ como a células TCR +. A nivel periférico, el proceso artrítico provo-ca un aumento en la relación Th/Tc, que se restablece con las dietasricas en flavonoides.

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Por otra parte, la concentraci ón de anticuerpos anti-Mb disminu-ye un 60-75% en los animales artríticos que consumen las dietas ricasen cacao.

En resumen, las dietas ricas en flavonoides no revierten las altera-ciones en las proporciones de linfoci tos presentes en los animales conAA, si bien causan un aumento de los linfoci tos Tc y producen unadisminución de los anticuerpos específicos.

13. EFFECTS OF DISEASE MODIFYING DRUGS IN THE ABNORMAL DISTRIBUTION OF MYELOID AND PLASMACYTOIDDENDRITIC CELLS IN RHEUMATOID ARTHRITISPATIENTS. Chara L1, Díaz D1, Chevarría J1, Sánchez A2, Monse-rrat J1, Mur S1, Prieto A1, Albarrán F2, Cuende E2, Álvarez-MonM1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamentode Medicina, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid. 2Servi-cio de Enfermedades del Sistema Inmune y Reumatología, Hospital Uni-versitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, Madrid.

Background. Several lines of evidence point to a polarized Den-dritic Cells (DC) immune response in Rheumatoid Arthritis (RA). Atleast two peripheral blood DC subsets have been described: myeloidDCs (mDC-I: Lin-HLADR+CD123-CD11c+high and mDC-II: Lin-HLADR+CD123-CD11c+low) and Plasmacytoid DCs (pDC: Lin-HLA-DR+CD123+CD11c-). In this study we conducted a quantitative analy-sis of the peripheral blood DC subsets in treated and untreated RApatients compared with healthy controls.

Objectives. To compare the distribution of the different subsets ofDC in RA patients treated with disease modifying antirheumatic drugs(DMARDs) or Anti-TNF alfa with respect to untreated RA patients andhealthy controls and to relate this distribution with the disease activity.

Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 46 rheuma-toid arthritis patients and 15 healthy controls were purified and cha-racterized in a FACSCalibur cytometer using fluorochrome-labeledmonoclonal antibodies to label CD3, CD11c, CD14, CD19, CD56, HLA-DR, and CD123 antigens. DAS28 score was calculated in each patientin order to determine thedisease activity (non active disease < 3.2, acti-ve disease ¡? 3.2). Comparisons between patients and healthy controlswere carried out using the non parametric Mann-Whitney test and con-sidered significant when p<0.05.

Results. We found a significant increase in mDC subset and sig-nificant decrease in pDC subset in RA patients with respect to healthycontrols. In RA patients with non active disease, we did not find sig-nificant differences in plasmacytoid DC subset with regard to healthycontrols. However, we found significant differences in mDC of RApatients treated with DMARDS. In RA patients with active disease, wefound a significant decrease in pDC from untreated RA patients withregard to healthy controls. In the other hand, we found a marked decre-ase of pDC in RA patient treated with DMARDS and Anti-TNFalfawith respect to healthy controls. We also found a significant increasein the percentage of mDC-II subset in treated and untreated RA patientscompared with healthy controls.

Conclusions: RA is characterized by an increase in peripheral blo-od of mDC and a decrease of pDC subsets. The response to the treat-ment with DMARDS and anti-TNFalfa increases the percentage in peri-pheral blood of pDC and mDC-II subsets. This may explain that thetreatment effect is probably due to their traffic to the inflamed syno-vial membrane. The fact that RA patients with active disease presenthigher increases of these subsets agree with this idea.

14. DECREASE IN THE PERCENTAGE OF REGULATORY TCELLS FROM RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS INVER-SELY CORRELATES WITH DISEASE ACTIVITY. Chara L1, DíazD1, Chevarría J1, Sánchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, PérezA2, Turrión A2, Álvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcalá, Alca-lá de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmuney Reumatología, Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcaláde Henares, Madrid.

Background. The balance between T regulatory cells and pro-inflammatory effector cells has shown to be of great relevance for thedevelopment and persistence of autoimmune diseases, becoming thisregulatory cell population important to the development of a thera-peutic target of interest in autoimmune arthritic conditions suc h asrheumatoid arthritis.

Objectives. To determine the distribution of T regulatory cells ofperipheral blood of rheumatoid arthritis patients compared with healthycontrols, and to relate that distribution with the disease activity.

Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 15 rheuma-toid arthritis patients and 12 healthy controls were purified and characterized in a FACSCalibur analyzer using fluorochrome-labeled mono-clonal antibodies for CD3, CD4, CD25 membrane antigens combinedwith intracellular staining of FOXP3 molecule. Likewise, the DAS28score was calculated in each patient in order to determine the diseaseactivity. Comparisons between patients and healthy controls werecarried out using the non parametric Mann-Whitney test and conside-red significant when p<0.05.

Results: A significant decrease in the CD3+CD4+FOXP3+ cellpopulation was found in peripheral blood lymphocytes from rheuma-toid arthritis patients with respect to healthy controls, more over a sig-nificant decrease in the CD3+CD4+FOXP3+ cell population was foundin peripheral blood lymphocytes of patients with active disease (DAS28> 3.2), observing a negative correlation between the percentage ofCD3+CD4+FOXP3+ and DAS28 score value (r= -0.78; p< 0.05).

Conclusions. There is an important decrease of T regulatory cellsin rheumatoid arthritis patients that correlates inversely with the dise-ase activity, being this way an important therapeutic target and biolo-gical marker of this disease.

15. ABNORMAL DISTRIBUTION OF MONOCYTES AND DEN-DRITIC CELLS IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS.Chara L1, Chevarría J1, Díaz D1, Sánchez A2, Monserrat J1, Mur S1,Prieto A1, Albarrán F2, León MJ2, Álvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+Dasociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Uni-versidad de Alcalá, Alcalá de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermeda-des del Sistema Inmune y Reumatología, Hospital Universitario Prínci-pe de Asturias, Alcalá de Henares, Madrid.

Background. Since the rec ent evolution of the immunopatholo-gic thought proposes that reumatoid arthritis is an i nnate autoimmu-ne pathology, the knowledge of the distribution of the dif ferentmonocytic and dentritic cells (DC) subsets in these patients is impor-tant to understand the immunopathogenic process of this disease.

Objectives. To determine the distribution of the different monocy-tic and dendritic cells (DC) subsets from rheumatoid arthritis patientscompared with healthy controls, and to relate that subset distributionwith the disease activity.

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Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 15 rheuma-toid arthritis patients and 12 healthy controls were purified and characterized in a FACSCalibur c ytometer using fluorochrome-labeledmonoclonal antibodies for CD3, CD4, CD8, CD11c, CD14, CD16, CD19,CD56, HLA-DR, and CD123 antigens. The DAS28 score was calcula-ted in each patient in order to determine the disease activity. Compa-risons between patients and healthy controls were carried out usingthe non parametric Mann-Whitney test and considered significantwhen p<0.05.

Results. A significant decrease in the percentage of CD14+highCD16-monocyte subset was found in peripheral blood from rheumatoid arth-ritis patients with respect to healthy controls, no significant differen-ces were found in the CD14+lowCD16+ subset. On the other hand, asignificant decrease in the percentage of plasmacyotid DCs (Lin-HLADR+CD123+CD11c-) subset was found in peripheral bloodmonocytes from rheumatoid arthritis patients with respect to healthycontrols, as well as a significant inc rease in the myeloid DC subsets(Lin-HLA-DR+CD123-CD11c+high and Lin-HLADR+CD123-CD11c+low). There were no signific ant differences in the distribution of the-se subsets between the patient group with active disease (DAS28 > 3.2)and the group with controlled disease (DAS28<3.2).

Conclusions. There is an altered distribution of the differentmonocytic and dendritic c ells subsets in peripheral blood of rheuma-toid arthritis patients characterized by a decrease in the “c lassical”monocyte subset and a decrease in the plasmacytoid dendritic cell sub-set, probably due to their traffic to the inflamed synovial membrane.This phenomenon could be independent of the disease activity.

16. APOPTOSIS ANALYSIS OF T NAÏVE/EFFECTOR/MEMORYSUBSETS FROM RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS BYPOLYCHROMATIC FLOW CYTOMETRY. Chara L1, ChevarríaJ1, Díaz D1, Sánchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, CuendeE2, Pérez A2, Álvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcalá, Alca-lá de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmuney Reumatología, Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcaláde Henares, Madrid.

Background. Dysregulation of T lymphocyte apoptosis has beeninvolved in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA). We haveanalyzed the apoptosis in specifically defined naïve/effector/memoryT lymphocyte circulating subpopulations of RA patients. OBJECTIVE:To quantify spontaneous and induced apoptosis in lymphocytes of RApatients with regard to a control population of sex and age matchedhealthy individuals.

Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 7 RA patientsdiagnosed according to the Am C Rh criteria (4 with active untreatedRA and 3 with refractory di sease) and 5 healthy controls were purifiedand characterized using monoclonal antibodies and annexin V by eightcolor flow cytometry in a FACSAr ia sorter. The apoptotic index (AI) oflymphocyte subsets were determined after 24 hour culture under two con-ditions: spontaneous apoptosis and after phytohemagglutinin induction.

Results. A marked decrease in spontaneous ex vivo apoptosis wasfound in peripheral blood T lymphocytes from RA patients. This decre-ased apoptosis was found in effector (CD45RA+/-CD27-), naïve(CD45RA+CD27+) and memory (CD45RA-CD27+) subsets of bothCD4+ and CD8+ T lymphocyte subpopulations. Similar impressivedecreases in AI were found in mitogen-induced T cell apoptosis. Apop-

tosis of lymphocytes from refractory RA patients was always lowerthan that found in T lymphocytes from active RA patients.

Conclusions. Patients with active RA show an impressive decre-ase in spontaneous and mitogen-induced apoptosis within naïve/effec-tor/memory CD4+ and CD8+ T-cell subsets. This decrease in Tlymphocyte apoptosis was specially marked in refractory RA patients.

17. LA PRESENCIA DE AUTOANTICUERPOS CONTRA LA PRO-TEÍNA MICA COMO NUEVO MARCADOR DE ENFERMEDA-DES AUTOINMUNES ASOCIADAS EN PACIENTES CELIA-COS. López Vázquez A1, Alonso Árias R1, Suárez Álvarez B1, VidalCastiñeira JR1, Rodrigo L2, Fuentes D2, López Larrea C1. 1Unidadde Histocompatibilidad. Hospital Universitario Central de Asturias. 2Ser-vicio de Digestivo. Hospital Universitario Central de Asturias.

Estudios recientes han demostrado que la proteína MICA se expre-sa en exceso en enterocitos de pacientes con enfermedad celiaca (EC),en respuesta a un efecto tóxico directo del gluten. Esta activación pro-duce daño tisular y podría ser el fenómeno inicial que conduce a laatrofia vellositaria. Debido al daño experimentado por la mucosa intes-tinal y a la expresión excesiva de MICA, es posible que estos pacien-tes desarrollen anticuerpos anti-MICA, tal y como sucede en algunostumores y en el trasplante de órganos sólidos. Decidíamos investigarla presencia de anticuerpos anti-MICA en sueros obtenidos de 323pacientes con EC no tratada y en 100 controles sanos. Empleamos unatécnica de citometría de flujo en fase sólida (Luminex) utilizando loskits LABScreen Mixed y MICA Single Antigen de OneLambda Inc.Observamos que el 42% de los celíacos tenían anticuerpos anti-MICAmientras que estos anticuerpos se detectaron en el 3% de los controlessanos. En una 2ª muestra después de un año a dieta sin gluten encon-tramos que estos se mantenían en menos del 10% de los pacientes. 57pacientes tenían además una enfermedad autoinmune adicional, espe-cialmente Diabetes Mellitus Tipo I, fenómeno relacionado con el tiem-po excesivo de exposición al gluten por un retraso en el diagnostico dela EC. En este grupo de pacientes encontramos que el 73.6% eran posi-tivos para anticuerpos anti-MICA mientras que estos sólo estaban pre-sentes en el 34% de pacientes afectados solamente por EC. La apari-ción de estos anticuerpos era además independiente de la edad a laque se había realizado el diagnóstico de EC.

Estos resultados sugieren que el desarrollo de enfermedades autoin-munes en pacientes celiacos está asociado a la presencia anticuerposanti-MICA. En c onclusión, el diagnóstico temprano y el tratamientode la enfermedad celíaca son esenciales para prevenir el desarrollo deautoinmunidad, tanto para evitar la exposición al gluten como el posi-ble efecto patológico de los anticuerpos anti-MICA.

18. RELACIÓN ENTRE ANTICUERPOS ANTI-CCP Y POLIMOR-FISMOS DRB1 Y CD154 EN PACIENTES ESPAÑOLES CONARTRITIS REUMATOIDE. Oliver A1, Calleja S1, Gamoneda E1,Matías JA1, Romo E1, Mateo I2, Joven B2, Pérez-Aciego P3, Paz-Artal E1, Castro MJ1. 1Inmunología. Hospital 12 de Octubre. Madrid.2Reumatología. Hospital 12 de Octubre. Madrid. 3Fundación LAIR.Madrid.

Introdución. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad com-pleja, poligénica y de etiología desconocida, que afecta al 0.8-1% de lapoblación en proporc ión de 3 mujeres: 1 hombre.

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Sobre la AR actúan tanto factores genéticos como ambientales.La asociación HLA-DRB1*04 y AR se ha demostrado hace más de 25años. Los alelos DRB1 poseen una secuencia aminoacídica muy con-servada, posiciones 72-74, el epítopo compartido (SE). Las distintasvariantes del SE (S1, S2, S3P, S3D) se relacionan con esta asociacióny favorecerían en distinto grado, predisposición o protección, la uniónde péptidos citrulinados (CCP) y la producción de anticuerpos anti-CCP. Otro gen que se postula como asociado a AR es el ligando CD40(CD40L).

CD40/CD40L es importante en la respuesta inmune humoral Tdependiente. Participa en la producción y regulación de Ig, activaciónde señales inflamatorias, producción de citocinas, quimoquinas y molé-culas de adhesión. CD40L, o CD154, posee un microsatélite (CA)n quepodría modular la unión de factores reguladores y variar la produc-ción de proteína.

Objetivos. Comprobar si hay diferencias de asociación DRB1(SE)/Ac anti-CCP y si hay asociación entre AR/(CA)n/anticuerposanti-CCP.

Métodos. Se han estudiado los alelos DRB1 y los niveles de anti-cuerpos anti-CCP en 107 paci entes de AR, y en 92 se han determina-do los alelos (CA)n de CD154.

Resultados. Mayor frecuencia de DRB1*01 (p=0.004) y DRB1*04(p<0.0001) en pacientes que controles. DRB1*0101 (S3P), *0401 (S2),*0405 (S3P) asociados a pacientes de AR, anti-CCP+. DRB1*0402 (S1)asociado a AR anti-CCP-. Asociación de distintos alelos SE en pacien-tes AR, CCP+ y CCP-. También se establece el nivel de significaciónentre alelos (CA)n en pacientes AR, CCP+ y CCP-.

Conclusiones. Los alelos DRB1, portadores de distintos SE, con-dicionan la producción de anticuerpos anti-CCP. Encontramos distin-ta asociación entre alelos (CA)n del gen CD154 y pacientes AR anti-CCP+ y anti-CCP-.

19. EFECTIVIDAD DE PRESENTACIÓN DE EPÍTOPOS CELIA-COGÉNICOS POR LOS DÍMEROS trans HLA-DQA1*0505/DQB1*0202 E INEFECTIVIDAD DE LOS HETERODÍMEROSDQA1*03/DQB1*0302. Planelles D1, Donat E2, Capilla A3, Rodrí-guez M1, Gómez I1, Alba E1, Granell R1, Jarque D1, Ribes-KoninckxC2, Montoro J1. 1Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusiónde la Comunidad Valenciana. 2Unidad de Gastroenterología Pediátrica,Hospital la Fe de Valencia. 3Laboratorio de Genética, Instituto de Biome-dicina del CSIC, Valencia.

Gran parte de la predisposición genética a celiaquía se encuen-tra ligada a los alelos HLA DQA1*0501, DQB1*0201, habiéndose des-crito que los pacientes no portadores de estos dímeros DQ2 son DQ8positivos. Esto ha conducido a la hipótesis de que estas moléculasson importantes presentadoras de péptidos en esta enfermedad. ElOBJETIVO de este trabajo ha sido analizar la contribuci ón de los dife-rentes dímeros cis y tr ans DQab como determinantes de suscepti-bilidad a celiaquía en la población mediterránea. En una serie depacientes pediátricos se ha realizado un análisis comparativo del ries-go relativo (RR) de los haplotipos marcadores clásicos de celiaquía(DRB1*0301/DQA1*0501/DQB1*0201 y DRB1*04/DQA1*03/DQB1*0302) y no-clásicos (DRB1*07/DQA1*0201/DQB1*0202), tan-to en homocigosis como en heterocigosis, calculándose la fracciónetiológica o preventiva de cada combinación haplotípica. Por otraparte, se ha realizado un análisis de similaridad de secuencias entrelos distintos alelos implicados en la enfermedad.

Resultados. El RR de ser portador del dímero DQA1*0501/DQB1*0201 es 9,7. Éste incrementa a 11,2 en combinación conDQA1*0201/DQB1*0202 y disminuye a 2,9 con otros haplotipos no-DR7; en homocigosis es 5,8. El RR de ser portador del dímeroDQA1*03/DQB1*0302 es inferior a la unidad. Por otra parte, el RR glo-bal de DQA1*0201/DQB1*0202 es 2.9, disminuyendo a 0,4 en homo-cigosis. En combinación con DQA1*0505/DQB1*0301 incrementa a 6,9pero con otros haplotipos no-DR3, no-DR11, disminuye a 0,2. El aná-lisis de secuencias revela similaridad estructural en la región de unióna péptidos y de contacto con el TCR entre DQA1*0501 y *0505 y entreDQB1*0201 y *0202. En conclusión, parece que el dímero transDQA1*0505/DQB1*0202 es más efectivo presentando péptidos celia-cogénicos que el dímero ci s DQA1*0201/DQB1*0202, y podría pr esen-tar los mismos epítopos que DQA1*0501/DQB1*0201. El dímeroDQA1*03/DQB1*0302 no parece ser determinante de susceptibilidada celiaquía en nuestra población.

20. EVALUACION DE UN NUEVO TEST ELISA EN EL SCREE-NING DE LA ENFERMEDAD CELIACA EN POBLACIONPEDIATRICA. Prada Iñurrategui A, Riñon Martinez-Gallo M,Maruri Machado N, Luque I, Arrieta Gutierrez A. Hospital de Cru-ces.

Introducción. Los marcadores serológicos, anticuerpos antiglia-dina (AGA) y antitransglutaminasa (ATG), han demostrado su utili-dad como método de screening de la enfermedad celiaca (EC) en lapoblación pediátrica. Recientes estudios han revelado que la desami-dación de la gliadina por la enzima transglutaminasa favorece su unióna los AGA y consiguen una mayor exactitud en el screening de la ECque la determinación de los AGA que utilizan la molécula conven-cional.

Objetivo. Evaluar un ELISA (INOVA) que utiliza como sustratouna molécula de gliadina desamidada (AGA-D) en el screening de laEC en población pediátrica. Comparar sus resultados con los resulta-dos obtenidos por ELISAs que utilizan como sustrato una gliadina con-vencional (AGA-C) y la transglutaminasa humana recombinante(ATGhr).

Materiales y Métodos. Se analizaron 245 sueros de pacientes pediá-tricos (1-6 años. Media de edad 2.2años). En todas las muestras se deter-minaron los AGA desamidada (AGA-D), los AGA convencional (AGA-C) y ATG humana recombinate (ATGhr). Se cuantifico la IgA en lossueros. En los pacientes con resultado positivo para ATGhr se anali-zó el HLA –DR.

Resultados. De las 245 muestras analizadas 29 muestras fueronpositivos para la ATGhr (25 muestras fueron positivas para los tres testATGhr+, AGA-D+ y AGA-C+, 2 muestras fueron únicamente ATGhr+y 2 muestras fueron ATGhr+AGA-D+) y presentaban un tipaje HLA-DR relacionado con la EC. Una muestra fue sólo AGA-D+ y pertene-cí a a un paciente diagnosticado de Diabetes Mellitus tipo I. Los mues-tras de 5 pacientes fueron AGA-D+ AGA-C+ presentaban cuadros abdo-minales inespecificos y/o alergias alimentarias continuandose el estu-dio de estos pacientes. 42 muestras fueron AGA-C+ y 160 muestrasfueron negativas para los tres tests. El déficit de IgA se diagnostico enlas muestras de 8 pacientes. Los resultados de sensibilidad (S) y espe-cificidad (E) para cada test fueron:

ATGhr AGA-C AGA-D Sensibilidad 100% 86.3% 93% Especifici-dad 100% 78.8% 97%

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Los resultados del Test de Concordancia fueron: Concordancia glo-bal entre ATGhr y AGA-D: 96% Concordancia global entre ATGhr yAGA-C: 80% Concordancia global entre AGA-D y AGA-C: 81%

Conclusiones:1. Los anticuerpos AGA-D son útiles como método de screening de

la EC en población pediátrica.2. Los anticuerpos AGA-D presentan una sensibilidad y especifici-

dad superior a los anticuerpos AGA-C y parecida a los ATGhren el screening de la EC en población pediátrica.

SESIÓN 2: INMUNOGENÉTICA

Moderadores: Dra Estela Paz Artal (Madrid), Dr. Jordi Yagüe (Barcelona)

21. POLIMORFISMOS EN GENES IMPLICADOS EN INMUNI-DAD INNATA NO ESTÁN ASOCIADOS CON EL RIESGO DESUFRIR SEPSIS. Guzmán Fulgencio M1, Sirgo Rodríguez G2, Cas-tillo Rama M1, Bernardo Gonzalez I1, Mancebo Sierra E1, RomoPasamar E1, Pérez V1, Paz Artal E1, Morales Pérez P1. 1HospitalUniversitario12 de Octubre, Madrid. 2Departamento de Medicina Inten-siva, Hospital Universitario Joan XXIII, Tarragona.

La sepsis es una patología que se define como la respuesta infla-matoria sistémica a la infección. El objetivo de este estudio es eva-luar si polimorfismos de genes implicados en la primera línea de defen-sa de la inmunidad innata como aquellos localizados en los genes delos receptores de membrana TLR2 (Arg753Gln), TLR4 (Asp299Gly yThr399Ile) y el polimorfismo en la región promotora del gen del recep-tor de macrófagos y monocitos CD14 (-159C>T), incr ementan el ries-go de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con 100 pacientes sépti-cos que proceden de la unidad de cuidados intensivos de dos hospi-tales universitarios y 107 controles. Los distintos genotipos han sidodeterminados mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)a tiempo real y análisis con curvas de melting (TLR2 y TLR4) y median-te PCR y análisis de fragmentos de restricción (CD14), todos a partirde ADN extraído de sangre periférica. Los r esultados obtenidos fue-ron comparados por el test estadístico de Chi-cuadrado aplicando lacorrección de Yates. El análisis estadístico reveló la falta de diferenciassignificativas en las frecuencias genotípicas de los polimorfismos estu-diados comparados con controles tanto en los polimorfismos de losgenes TLRs (TLR2: p=0,32, TLR4: p=0,96 y p=0,8 en los polimorfismosAsp299Gly y Thr399Ile respectivamente), como en el polimorfismo delgen CD14 (p=0,42) Podemos concluir entonces que polimorfismos estu-diados no están asociados con el riesgo a sufrir sepsis.

22. DISTRIBUCION DE ALELOS HLA-C EN LA POBLACION DECASTILLA Y LEON. Leon Moya V1, Leon Arroyo A2, Alonso Sar-don M3. 1Serv. Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca.2Laboratorio de Pediatria e Inmunologia. Universidad de Valladolid.3Dept. Med. Preventiva. Universidad de Salamanca.

Introdución. Los estudios de alelos HLA en poblaciones localiza-das tienen un gran interes a fin de disponer de datos basales de pobla-ciones concretas, aplicable a una gran diversidad de estudios, desde

los simplemente poblacionales a servir de base comparativa en los estu-dios de ciertas enfermedades, sobre todo las que presentan un compo-nente autoinmune.

Material y Métodos. Hemos estudiado la distribución de polimor-fismos del gen HL-C en nuestra población ( n= 126)de Castilla y León.

Muestras de sangre, de 50 a 200 mcl, fueron depositadas en unpapel Whatman 3MM secadas a almacenadas a temperatura ambien-te hasta su utilización. El ADN fué extraido con el kit DNA

Direct II de Dynal, obteniendo de 1- 4 mcg de ADN. El locus HLA–C fué estudiado con el kit Dynal SSP HLA-Cw. Hemos cambiadolas condiciones generales de la PCR a fin de adaptarla a nuestras can-tidades de ADN, 2-4 ng y 0,1 U de Taq Polymerasa, por tubo (en vezde 100 ng de ADN y 0.4 U de Taq del protocolo original).

Las condiciones de la PCR fueron: 1) 94ºC, 2 min., 1 ciclo. 2) 94ºC10 sec., 65ºC 60 sec. 10 ciclos. 3) 94ºC 10 sec., 61ºC 50 sec., 72ºC 30 sec.30 ciclos. 4) 72ºC 3 min. Los productos PCR fueron visualizados porelectroforesis en agarosa al 2%.

Resultados. Las frecuencias de los alelos HLA-C halladas fueron:HLA Cw 01*, 3,6% ; Cw 02*, 4,4% ; Cw 03*, 8,2% ; Cw 04*, 10,8% ; Cw05*, 13,8% ; Cw 06*, 8,6% ; Cw 07*, 16,2% ; Cw 08*, 5,6% ; Cw 012*,10,8% ; Cw 014*, 2,4% ; Cw 015*, 3,4% ; Cw 0116*, 12,4% ; Cw 017*,3,2%.

No se hallaron diferencias signifi cativas con otros estudios efec-tuados en poblaciones españolas y portuguesas.

23. ALELOS DPB1*, HLA CLASE II, EN LA POBLACION DE CAS-TILLA Y LEON. Leon Moya V1, Leon Arroyo A2, Alonso SardonM3. 1Serv. Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Labo-ratorio de Pediatria e Inmunologia. Universidad de Valladolid. 3Dept. deMed. Preventiva. Universidad de Salamanca.

Introdución. Los estudios de alelos HLA en poblaciones localiza-das tienen un gran interes a fin de disponer de datos basales de pobla-ciones concretas, aplicable a una gran diversidad de estudios, desdelos simplemente poblacionales a servir de base comparativa en los estu-dios de ciertas enfermedades, sobre todo las que presentan un compo-nente autoinmune.

Material y Métodos. Hemos estudiado la distribución de polimor-fi smos del gen DPB1* en nuestra población (n= 128)de Castilla y León.

Muestras de sangre, de 50 a 200 mcl, fueron depositadas en unpapel Whatman 3MM secadas a almacenadas a temperatura ambien-te hasta su utilización. El ADN fué extraido con el kit DNA Direct IIde Dynal, obteniendo de 1- 4 mcg de ADN. El locus DPB1* fué estu-diado con el kit Dynal SSP allset DPB1*. Hemos cambiado las condi-ciones generales de la PCR a fin de adaptarla a nuestras cantidades deADN, 2-4 ng y 0,1 U de Taq Polymerasa, por tubo (en vez de 100 ng deADN y 0.4 U de Taq del protocolo original).

Las condiciones de la PCR fueron: 1) 94ºC, 2 min., 1 ciclo. 2) 94ºC10 sec., 65ºC 60 sec. 10 ciclos. 3) 94ºC 10 sec., 61ºC 50 sec., 72ºC 30 sec.30 ciclos. 4) 72ºC 3 min. Los productos PCR fueron visualizados porelectroforesis en agarosa al 2%.

Resultados. Las frecuencias de los alelos DPB1* halladas fueron:DPB1* 0101, 3,6%; DPB1* 0201, 13,6%; DPB1* 0202, 3,2%; DPB1* 0301,10,6%; DPB1* 0401, 34,4%; DPB1* 0402, 7,6%; DPB1* 0501, 1,8%; DPB1*0601, 2,4%; DPB1* 0901, 2,2%; DPB1* 1001, 2,4%; DPB1* 1101, 7,6%; DPB1*1301, 0,6%; DPB1* 1401, 1,2%; DPB1* 1501, 1,2%; DPB1* 1701, 2,8%.

No se hallaron diferencias signifi cativas con otros estudios efec-tuados en poblaciones españolas y portuguesas.

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24. POLIMORFISMOS EN GENES DE CITOKINAS EN PACIEN-TES DE ALZHEIMER. Leon Moya V1, Cacho J2, Hernandez Cer-ceño MI1. 1Serv. Análisis Clínicos. Hospital Universitario de Salaman-ca. 2Serv. de Neurología. Hospital Universitario de Salamanca.

Hemos estudiado 24 pacientes con Enfer medad de Azheimer ,EA,de acuerdo con los cr iterios de NINCDS-ADRDA, y 28 sujetos con-trol. Los polimorfismos fueron analizados empleando el kit Citokinegenotiping Kit (Pel-freez).

Los polimorfismos halladosen el grupo control fueron: IL-1alpha/- 889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 45 CT/15 TT),IL-1beta/ 396 (60 CC/35CT/5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (5 CC/47.5CT/47,5 TT), IL1R/psti 1970 (50 CC/40 CT/10 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/45 GT/40 TT), IL-2/ 166 (50 GG/40 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/27.5 GT/ 62,5 TT), IL-4/ - 590 (72.5 CC/25 CT/ 2,5 TT), IL-4/ - 33 (75CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (60 AA/35 AG/5 GG), IL-6/ - 174(20 CC/ 40CG/40 GG), IL-6/ 565 (12.5 AA/52,5 AG/35 GG), IL-10/- 592 (5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (50 CC/40 CT/10 TT) IL-10/- 1082 (25 AA/50AG/25 GG), IL-12/ - 1188 (62.5 AA/32.5 AC/5CC),IFN gamma/utr 5644 (32.5 AA/42,5 AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0AA/2O AG/80 GG), TNF alpha/ - 308 (10 AA/25 AG/65 GG), TGFbeta1/codon 10 (25 CC/50 CT/25 TT), TGF beta1/codon 25 (0 CC/15CG/85 GG)

Los polimorfismos para el grupo de pacientes EA: IL-1alpha/ -889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (35 CC/ 50 CT/15 TT), IL-1beta/ 3962 (55 CC/35CT/10 TT),IL-1RA/mspa 11100 (0CC/50 CT/50TT), IL1R/psti 1970 (45 CC/52.5 CT/7.5 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 50GT/35 TT), IL-2/ 166 (55 GG/35 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 22GT/ 70 TT), IL-4/ - 590 (75CC/25 CT/ 0 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5TT), IL-4R alpha/1902 (75 AA/15 AG/10 GG), IL-6/ - 174 (15CC/45CG/40 GG), IL-6/ nt 565 (10 AA/50 AG/40 GG), IL-10/ - 592 (5AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (55 CC/35 CT/10 TT) IL-10/ - 1082(20 AA/50AG/30 GG), IL-12/ - 1188 (60 AA/35 AC/5 CC), IFN gam-ma/utr 5644 (35 AA/40AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80GG), TNF alpha/ - 308 (5 AA/30 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (25CC/50 CT/25 TT), TGFbeta1/codon 25 (0 CC/10CG90 GG)

El test de Chi-Cuadrado no muestra diferencis signific ativasp<0.05, entre los polimorfismos del grupo

25. ORIGENES Y RELACIONES GENÉTICAS HLA DE LOS UROS:HABITANTES DE ISLAS-FLOTANTES EN EL LAGO TITIKA-KA (BOLIVIA/PERÚ). Arnaiz-Villena1, Serrano-Vela JI1, Barbo-lla L2, Reguera R1, Ferri A1, Abd-El-Fatah-Khalil S2, Ruiz-TovarM2, Millan P1, Moscoso J1. 1Dept. Inmunología, Universidad Complu-tense, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid. 2Dept. Hema-tología, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid.

Los Uros viven en islas flotantes (de juncos o “totora”) en el LagoTitikaka, que hace frontera entre Bolivia y Perú y se cree que fueronlos primeros habitantes del altiplano Andino en esa zona. En este tra-bajo, se han identific ado alelos de los genes HLA-A, -B, -C, -DRB1 y–DQB1 mediante tipaje de alta resolución de ADN. Se han estimadolos haplotipos extendidos y los resultados se han comparado con pobla-ciones de todo el mundo (unos 12.450 cromosomas) mediante dendro-gramas Neighbour-Joining y análisis de correspondencia. Los Uros songenéticamente más próximos a los Aymaras Sudamericanos, los Tara-humaras y los Indios Terena (de Bolivia, México y Brasil, respectiva-

mente) que a otras poblaciones Amerindias geográficamente más cer-canas. Se ha observado también que: a) todos los Amerindios repre-sentan un grupo separado del resto de las poblaciones del mundo(incluidos Na-Dene, Eskimos y Siberianos); b) se confirma que los gru-pos de Amerindios genéticamente relacionados pueden estar geo-gráficamente distantes; c) lenguas y genes no se correlacionan y estoes particularmente llamativo en los grupos étnicos en Amerindios.

26. GENES HLA EN LA POBLACIÓN DE LOS MAYOS DEL NOR-ESTE DE MÉXICO. Arnaiz-Villena1, Fernandez M2, Abd-El-Fatah-Khalil S2, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Millan P1, Ferri A1, Var-gas-Alarcon G3, Moscoso J1. 1 Dept. Inmunología, Universidad Com-plutense, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid. 2Dept.Hematología, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid. 3Dept.Inmunología, Instituto Salvador Zubiran, Ciudad de México.

Se han identificado los alelos de clase I y clase II de 60 indivi-duos no relacionados de un grupo de Mayos, que viven en el EstadoMexicano-Pacífico de Sinaloa. Se compararon los resultados HLA deMayos con los de otros Amerindios y poblaciones de todo el mundo.Para estas comparaciones se utilizaron un total de 14.896 cromosomas.Se calcularon distancias genéticas entre las poblaciones, dendrogra-mas Neighbour-Joining y se realizaron análisis de correspondenciapara determinar las relaciones genéticas entre las poblaciones analiza-das. Los nuevos haplotipos específicos encontrados fueron: HLA-A*02-B*35-DRB1*1406-DQB1*0301; HLA-A*02-B*48-DRB1*0404-DQB1*0302;HLA-A*24-B*51-DRB1*0407-DQB1*0302 y HLA-A*02-B*08-DRB1*0407-DQB1*0302. Sin embargo, el alelo típico Centro-Americano HLA-DRB1*0407 representa un 40% de todos los alelos DRB1. Al mismotiempo que se observan características HLA comunes con grupos étni-cos de Amerindios que se encuentran alejados, también se detectannuevos haplotipos HLA específicos de grupo (elevado DRB1*0407), loque sugiere un efecto fundador común. Probablemente, la apariciónde los nuevos haplotipos HLA seguramente se deba a una selecciónespecífica por patógenos. El leguaje de los Mayos es próximo al de losTarahumaras (otro grupo geográfic amente cercano), a pesar de queestos dos grupos no son genéticamente próximos según nuestros resul-tados, haciendo constar de nuevo la diferente evolución de genes y delenguas, que no se correlacionan. Sinaloa es uno de los Estados Mexi-canos en los que se encuentran más genes europeos. Sin embargo, nose observan genes HLA europeos en Mayos y nuestros resultados podrí-an utilizarse en programas de trasplante y para estudio de enferme-dades HLA.

27. CAMBIO DE AMINOACIDO EN EL DOMINIO ALFA-3 DE UNNUEVO ALELO HLA-G (HL A-G*0108). Moscoso J1, Serrano-Vela I1, Pérez-Saborido B2, Moreno E2, Barbolla L3, Algora M3,Reguera R1, Ferri A1, Arnaiz-Villena A1. 1Dept. Inmunología, Uni-versidad Complutense, Centro de Transfusión de la Comunidad de Madrid.2Dept. Cirugía Gastrointestinal y Hepática, Hospital 12 de Octubre,Madrid. 3Dept. Hematología, Centro de Transfusión de la Comunidad deMadrid.

El gen de histocompatibilidad de clase I no clásico HLA-G mues-tra un bajo polimorfismo. Codifica para moléculas HLA tolerogénicasque pueden ser importantes en el control de la autoinmunidad y elrechazo de trasplante (y también del feto semialogénico). Las molécu-

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las HLA-G dan señales negativas a las células NK (Natural Killer) ya los linfocitos T. En este trabajo, se describe un nuevo alelo, HLA-G*0108, que puede ser útil para una tolerización natural HLA y/o lainducida por fármacos en trasplantes y para el estudio de enfermeda-des ligadas a HLA. Es el segundo alelo encontrado hasta la fecha don-de el polimorfismo se encuentra en el dominio alfa-3 de la valva deHLA-G. Se discute la importancia de los cambios en el dominio de alfa-3 de la molécula HLA-G en relación con su función.

28. CAMBIO NO-CODIFICANTE DE BASE EN EL ADN DELEXON 2 DE UN NUEVO ALELO, HLA-G*010114. Arnaiz-Ville-na A1, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Barbolla L2, Algora M2, FerriA1, Pérez-Saborido B3, Moreno E3, Moscoso J1. 1Dept. Inmunología,Universidad Complutense, Centro de Transfusión de la Comunidad deMadrid. 2Dept. Hematología, Centro de Transfusión de la Comunidad deMadrid. 3Dept. Cirugía Gastrointestinal y Hepática, Hospital 12 de Octu-bre, Madrid.

El gen de histocompatibilidad de clase I no clásico, HLA-G, mues-tra un bajo polimorfismo proteico y una mayor variabilidad de su ADN(ocho proteínas y 28 alelos). Este polimorfismo del ADN en HLA-G sedebe mayoritariamente a cambios en la tercera base de los codones enlos exones que, generalmente, no producen cambio de aminoácido.Este alto polimorfismo en el ADN en comparación c on su polimorfis-mo proteico sugiere que existe una presión evolutiva que se opone ala variación de HLA-G. Esto puede estar relacionado con la funcióninmunotolerogénica que se postula para HLA-G y la selección parainvarianza, puede ser de purifi cación al no tener que presentar HLA-G gran variedad de péptidos microbianos, c omo lo hacen las molécu-las HLA de clase I clásicas. La descripción de nuevos alelos HLA pue-de servir en un futuro próximo para medir el grado de tolerancia oaceptación de determinados injertos y así proceder con la terapia ade-cuada.

29. VARIABILIDAD DE LOS GENES DE HISTOCOMPATIBILI-DAD EN UN MODELO DE AVES SALVAJES EUROPEAS YSUDAMERICANAS (JILGUEROS, GÉNERO CARDUELIS).Serrano-Vela JI, Reguera R, Ferri A, Millan P, Ferre S, Arnaiz-Ville-na A. Dept. Inmunología, Universidad Complutense, Centro de Trans-fusión de la Comunidad de Madrid.

Los genes que componen el sistema principal de histocompatibi-lidad humano (HLA) están bien caracterizados en cuanto a su locali-zación cromosómica, su variabilidad (genética y proteica) y su funcio-nalidad. Sin embargo, no está claro que esta organización sea paradig-mática ni que pueda utilizarse como modelo representativo de los sis-temas de histocompatibilidad de la generalidad de vertebrados. Dehecho, numerosos estudios realizados en otros grupos de mamíferosy en otros vertebrados (anfibios, peces, reptiles y aves) no siempremuestran el gran polimorfismo observado en humanos. En este traba-jo se plantea el estudio de genes de histocompatibilidad de clase I(MHC-I) en una especie de jilguero europeo (Carduelis c arduelis) yen varias especi es estrechamente emparentadas de jilgueros sudame-ricanos (otras especies del género Carduelis). El objetivo es determi-nar su variabilidad y evolución, analizando especialmente los pun-tos de variación en la proteína que puedan tener implicaciones en sufunción. El estudio se ha realizado a partir de ADN extraído de sangre

obtenida de pájaros salvajes en su hábitat natural. Las secuencias deADN analizadas incluyen exón 2- intrón 2 - exón 3 de moléculas declase I y se han obtenido mediante amplificación por PCR y posteriorsecuenci ación. Las ambigüedades debidas a los polimorfismos se hanresuelto mediante clonación. Se ha detectado la presencia de al menosdos genes de clase I en el jilguero europeo con una variabilidad gené-tica que en la mayoría de los casos se traduce en una variabilidad pro-teica. Sin embargo, en los jilgueros sudamericanos se ha detectadoun único gen de clase I con una variabilidad reducida, hasta el puntode que los mismos alelos están presentes en distintas especies (evo-lución transespecífica). Las posiciones variables de la región de uniónal péptido en las proteínas de Carduelis carduelis son diferentes a lasencontradas en los jilgueros sudamericanos. Se contrapone la granvariabilidad MHC en modelos no salvajes (humanos, ratones de labo-ratorio y pollos) y la escasa en salvajes (hamster sirio, rata, topo, gue-pardo). Se relaciona la gran variabilidad de especies no salvajes confenómenos de autoinmunidad.

30. EL ALELO HLA-B*8301 SE GENERA POR UN EVENTO DECONVERSIÓN GÉNICA QUE INCLUYE EL EXÓN 2 COMPLE-TO. Martinez Laso J1, Roman A1, 2, Cervera I1, Rodriguez M1, Gutie-rrez-Solar B1, Head J1, 2. 1Unidad de Inmunoterapia Celular. Institutode Salud Carlos III. Centro Nacional de Microbiología. Majadahonda.Madrid. 2Servicio de Microbiología. Hospital Clínico San Carlos.

Se han propuesto tres mecanismos diferentes de generación de poli-morfismo de alelos del MHC: mutación puntual, recombinación y con-versión génica. Se ha descrito previamente que varios alelos de HLA-A y de HLA-B se generaron por fenómenos de conversión génica y derecombinación que involucran regiones no codificantes. Varios estu-dios indican que la conversión génica es el fenómeno más importantecuando se analiza la secuencia de los intrones. El alelo HLA-B*8301 fueel primero en el que se describió un proceso de recombinación consis-tente en la inclusión del exón 2 del alelo B*5603 en la secuencia delB*4402. Los exones 1, 3 y 4 del alelo B*8301 eran idénticos a la mayo-ría de los alelos B*44 mientras que el exón 2 presentaba una diferenciade 23 nucleótidos con el alelo B*4402 y de sólo un nucleótido con el ale-lo B*5603 en el codón 24. Para confi rmar la implicación de los intronesen la generaci ón del alelo B*8301 se secuenciaron parci almente el exón1 y la totalidad del intrón 1, exón 2, intrón 2 y exón 3 de los alelos B*8301y B*5601. Teniendo en cuenta todos los resultados se puede plantear lahipótesis de que B*8301 se genera por un fenómeno de conversión géni-ca entre B*44020101 como receptor y B*5601 como donante del exón 2completo, el extremo 3’ del intrón 1 y el extremo 5’ del intrón 2. Estosdatos reflejan la importancia de los intrones para establecer el correc-to mecanismo de generación de polimorfismo del MHC.

31. LA INMUNOGLOBULINA M Y LA IMMUNOGLOBULINA DEN EL REPTIL GECKO LEOPARDO (Eublepharis macularius).Sánchez Espinel C1,3, Magadán Mompó S2,1, Gambón Deza F3. 1Áreade Inmunología. Facultad de Ciencias. Universidad de Vigo. 2InstitutoSuperior de Saude do Alto Ave (ISAVE). Portugal. 3Unidad de Inmuno-logía. Hospital do Meixoeiro. Complejo Hospitalario Universitario deVigo (CHUVI).

Introducción. La inmunoglobulina D (IgD) ha sido un misteriodesde que fue descubierta en los mamíferos hace 40 años. Comparte

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con la inmunoglobulina M (IgM) el papel de receptor antigénico en lamembrana de las células B maduras. La ausencia de esta inmunoglo-bulina en las aves y su descripción en peces óseos contribuyó a la con-fusión acerca de su origen evolutivo.

Objetivos. Estudios recientes han demostrado la presencia de IgDen el anfibio Xenopus tropicalis, la cual convierte en esencial su bús-queda y estudio en reptiles para poder comprender la evolución deesta inmunoglobulina en los vertebrados.

Metodología. Se realizó una extracción de DNA genómico y seobtuvo una primera secuencia, empleando primers degenerados, la cual se alargó por ambos extremos utilizando la técnica de “DNA wal-king” previa construcción de una librería de DNA (GenomeWalkerUniversal Kit Clontech de TAKARA BIO). Para las extracciones de RNAtotal se utilizó el kit QUIamp (QIAGEN) y para la realización de RT-PCRs el kit One Step QIAamp RNA (QIAGEN). La secuenciación sellevó a cabo empleando BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(Applied Biosystems) y el secuenciador ABI PRISM® 3130-Avant Gene-tic Analyzer (Applied Biosystems). Para los análisis fi logenéticos seempleó el software MEGA4 y a nivel estadístico el software SPSS.

Resultados y conclusiones. En el presente trabajo se describe laIgD e IgM en el reptil Eublepharis macularius. El gen de la IgM tienecaracterísticas similares a aquellas descritas en otras especies, mien-tras que la IgD tiene una estructura particular en esta especie. Está for-mada por 11 dominios de inmunoglobulina sin ningún tipo de eviden-cia de duplicaciones intragénicas de los exones, como ha sido descri-ta en la de los peces y anfibios. Es posible que esta inmunoglobulinaesté compuesta por dominios heredados de especies anteriores y queesta forma sea similar a la presente en animales que dejaron el marpara vivir en la tierra. También describimos una segunda inmunoglo-bulina D (IgD2), la cual debió aparecer recientemente por duplicaciónde una inmunoglobulina anterior y recombinación con la IgA-like des-crita para esta especie. La expresión de ambas inmunoglobulinas enlos tejidos del animal es similar a la de la IgM sugiriendo un papel fun-cional para la IgD de reptil.

32. LA PRESENCIA DE LOS HAPLOTIPOS HLA MÁS FRECUEN-TES EN NUESTRO MEDIO PROTEGE FRENTE A LA DEGE-NERACIÓN MACULAR ASOCIADA A LA EDAD. GonzálezFernández R, Villegas Becerril E, Manzanares Martín B, Gallar-do Galera JM, Peña Martínez J. Hospital Reina Sofia.

La degeneración macular asociada a la edad (DMAE) es la causamás común de ceguera en mayores de 60 años en países desarrollados.En su patogenia se involucra tanto la predisposición genética como laparticipación del sistema inmune. En este sentido, el sistema HLA seríaun buen candidato porque juega un papel crucial en la regulacióndel sistema inmune y presenta un amplio polimorfismo. Nuestro obje-tivo es establecer la relación existente entre la DMAE en concreto detipo exudativo y los alelos de HLA clase I (HLA-A y HLA-B) y c laseII (HLA DRB1). Pacientes y métodos: Se incluyeron en este estudio75 pacientes con NVC subfoveales/yuxtafoveales secundarias a DMAEdiagnosticadas mediante angiografía con fluoresceína, predominante-mente clásicas con agudeza visual comprendida entre 3/60 y 20/60y tamaño de la lesión inferior a 5400 μm de diámetro. Tambiénse incluyeron pacientes con NVC oculta, con visión inferior a 20/50, ocon membranas ocultas de tamaño menor de 4 áreas de disco con visiónmejor de 20/50 y con lesiones mínimamente clásicas con AV > 0.08 ytamaño menor de 6 áreas de disco. Se excluyeron del estudio las mem-

branas secundarias a otras patologías como las secundarias a miopíao corioretinopatía central serosa, entre otras. Se realizó el tipaje HLAA, B y DR por una técnica de PCR-SSO (Dynal y/o I nnogenetics) y a250 sujetos sanos mayores de 55 años sin patología oftalmológica cono-cida. Resultados: El análisis de los datos demostró la ausencia de los10 haplotipos más frecuentes en nuestro medio en la mayoría de nues-tros pacientes. Se presentarán las frecuencias de los haplotipos en lospacientes y nuestro grupo control. En el análisis de los alelos (HLA-A,B y DRB1) no se observaron diferencias signif icativas entre los pacien-tes y el grupo control excepto el alelo HLA-B*27 que era más frecuen-te en el grupo con DMAE exudativa (p 0.0113). No se encontró ningúnalelo protector para esta patología.

33. DETERMINACIÓN DEL GENOTIPO HLA-DQ2/DQ8 POR PCRA TIEMPO REAL. Faner Canet MR1, Ruiz E1, Campos E1, Pujol-Borrell R1,2, Juan M3, Palou E1. 1Laboratori d’Immunobiologia per a laRecerca i Aplicacions Diagnòstiques (LIRAD), Banc de Sang i Teixits(BST). 2Universitat Autònoma de Barcelona (UAB). 3Servei d’Immuno-logia. Centre de Diagnòstic Biomèdic, Hospital Clínic Barcelona.

La enfermedad celiaca (EC) es una enteropatía mediada por unarespuesta inmune que se desencadena por la ingestión de gluten. Enestos pacientes, se ha descrito que la molécula HLA-DQ es un factorde susceptibilidad genética muy importante: más del 90% de enfermosceliacos son HLA-DQ2 y los restantes son HLA-DQ8. Debido a estaalta asociación la tipificación HLA se usa como un marcador diagnos-tico, que es muy útil cuando las pruebas serológicas y las biopsias sonde resultado inconcluyente. Para la detección de DQA1*05, DQB1*02(codificando DQ2) y DQB1*0302 (codificando DQ8) se usan habitual-mente diversos métodos de PCR-SSP, pero ninguno es del todo satis-factorio ya que requieren la realización de muchas reacciones y tam-bién manipulaciones post-PCR. Por ello hemos desarrollado un méto-do de tipificación basado en la PCR a tiempo real con sondas FRETcapaz de determinar el genotipo DQA1*05, DQB1*02 y DQB1*0302 dela muestra mediante cuatro reacciones y sin necesidad de manipula-ción post-PCR. Para la validación de dicha aproximación se han ana-lizado 40 muestras que habían sido tipificadas mediante otros méto-dos obteniendo resultados equivalentes, demostrando la reproducibi-lidad y precisión de la técnica. En resumen, podemos decir que eluso de esta técnica en los laboratorios de tipificaci ón HLA puede ayu-da a incrementar el número de muestras procesables a la vez, minimi-zar el esfuerzo y reducir los riesgos de contaminación.

Financiado por ayuda Profit FIT 010000-2006-38.

34. UTILIZACIÓN DE UN MÉTODO DE HIBRIDACIÓN CONSONDAS ESPECÍFICAS DE SECUENCIA PARA LA DETER-MINACIÓN DE LA FRECUENCIA DE GENOTIPOS KIR ENLA POBLACIÓN DE DONANTES DE SANGRE DE CANTA-BRIA. Sánchez-Velasco P1, Lavín-Alconero L1, Arroyp JL2, AusínF1, Amunárriz C2, Leyva-Cobián F1, Gonzalo Ocejo-Vinyals J1.1Hospital Universitario Marqués de Valdecilla. 2Banco de Sangre y Teji-dos de Cantabria.

Introducción. El estudio con sondas específicas de secuencia hademostrado ser de gran utilidad en el estudio de polimorfismos en elMHC. Esta técnica se utiliza de forma rutinaria en el tipaje HLA, tan-to en el trasplante como en estudios de asociación HLA-enfermedad.

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El objetivo de este estudio es valorar su utilidad en el genotipado dereceptores de células NK, concretamente los genes KIR.

Materiales y Métodos. Se incluyeron en el estudio 144 donantesde sangre. Se utilizó una técnica de PCR-SSO que detecta 14 genes KIRy 2 pseudogenes. Las muestras hibridadas fueron analizadas median-te fluorimetría (Luminex® 100). La frecuencia de los individuos quetenían al menos una copia de cada gen KIR se determinó por recuen-to directo. Para analizar diferencias en la frecuencia de los diferentesgenes KIR respecto de otras poblaciones cercanas, se usó la prueba deChi 2 con corrección de Yates.

Resultados. Todos los individuos analizados, eran positivos paralos tres genes estructurales KIR2DL4, KIR3DL2 y KIR3DL3. Se obser-vó una variación, estadístic amente significativa respecto de la mayo-ría de las poblaciones estudiadas hasta la fecha, en la frecuencia deKIR2DL3. Una frecuencia tan baja, sólo ha sido descrita en poblacio-nes étnicamente muy alejadas de la población cántabra (vietnamitas,aborígenes australianos y etnias sudafricanas de xhosa y san).

Conclusión. La técnica de PCR-SSO es una técnica fácilmente auto-matizable que posibilita el análisis de un gran número de muestras enmenos tiempo que los tradicionales métodos de PCR-SSP. No obs-tante, la resolución de esta metodología es actualmente inferior. Estu-dios previos han demostrado una concordancia de casi un 100% entreambas técnicas. Sin embargo, debido a la baja frecuencia de KIR2DL3en nuestra población en comparación con la de poblaciones vecinas,convendría realizar más estudios con el objetivo de comprobar real-mente si la tecnología Luminex® permite detectar todos los alelos deKIR2DL3.

35. POLIMORFISMO DE CITOCINAS, RECEPTORES DE CITO-CINAS Y ANTAGONISTAS DE RECEPTORES DE CITOCINASEN PACIENTES CON OBESIDAD MÓRBIDA. Ausin Ortega F,Sánchez Castañon M, Leyva-Cobian F, Ocejo-Vinyals JG. Serviciode Inmunología. Hospital Universitario Marqués de Valdecilla.

Introducción. El término obesidad mórbida (OM) hace referenciaa pacientes que están desde un 50 a 100% ó 45 kg por encima de supeso corporal ideal. Por otro lado, un valor mayor a 39 en el índicede masa corporal se puede utilizar para diagnostic ar este tipo de obe-sidad. Hasta la fecha apenas hay estudios de asociación de esta pato-logía con polimorfismos en los genes de citocinas. El objetivo de esteestudio se ha centrado en comprobar si existe alguna asociación signi-ficativa entre OM y polimorfismos en los genes de algunas citocinas ysus receptores.

Materiales y Métodos. Se incluyeron en el estudio 191 pacientesdiagnosticados de OM. Como grupo control, se analizaron 94 indivi-duos sanos, no obesos, donantes de sangre. Para el estudio de los poli-morfismos se utilizó un ensayo comercial basado en la técnica de PCR-SSP, el cual detecta 22 posiciones polimórficas en 13 citocinas (IFNg,IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-1R, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-4R alfa, IL-6, IL-10, IL-12, TGF-beta, TNF-alfa): PROTRANS Cytokines 2. El análisis de la fre-cuencia de los diferentes polimorfismos en pacientes con OM y con-troles sanos se realizó mediante recuento directo. Para el análisis esta-dístico de la diferencia entre ambos grupos se recurrió al test exacto deFisher.

Resultados. Se encontraron diferencias estadísticamente signifi-cativas en los polimorfismos de los genes de las siguientes citocinas:IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TGF-beta y TNF-alfa.No hubo diferencias significativas en los polimorfismos de: IFN-gam-

ma, IL-1R, IL-4R alfa, IL-12. Al estar en un fuerte desequilibrio de liga-miento, los haplotipos generados por estos polimorfismos tambiénmostraban unas diferencias significativas entre pacientes con OM eindividuos sanos

Conclusión. Existen muy pocos datos sobre polimorfismos de cito-cinas en la OM. El presente estudio muestra que existen diferenciasestadísticamente significativas en las frecuencias de polimorfismos deciertas citocinas. Algunos de ellos no tienen efecto sobre la expresiónde estas; otros aumentan su expresión y finalmente, otros la dismi-nuyen. Estos hallazgos, junto con variaciones genéticas estructuraleso polimórficas en otros genes, podrían contribuir a una susceptibili-dad a padecer OM. Se necesitan estudios más amplios, con una selec-ción más estricta de los pacientes y quizá con diseños diferentes (v.g.cohortes) para tratar de esclarecer el papel que todos estos genes jue-gan en la predisposición y desarrollo de la OM.

SESIÓN 3: INMUNOLOGÍA Y TRASPLANTE

Moderadores: Dr. Joan Milá (Palma de Mallorca)Dr. Alfredo Minguela (Murcia)

36. DISTRIBUCIÓN ALELICA DRB1* EN EL BANCO DE COR-DON DE ANDALUCIA. de Paula Sanchez Gordo F, CarrascoHidalgo A, Jaen J, Marie Christensen E, Rodriguez Pena R, PratArrojo I. Centro de Transfusión y Banco de Tejidos.

Introducción. La sangre de placenta (SCU) ha demostrado ser unafuente de progenitores hematopoyéticos adecuada para su uso en elrescate post-acondicionamiento TMO. Dada la complejidad del tipajeHLA y la necesidad de compatibilidad DRB1 a nivel alélico, hemos rea-lizado un análisis de frecuenci a del locus HLA-DR.Material y méto-dos. El método utilizado en nuestro laboratorio es SSOP LuminexÒ,complementándolo con SSP con el fin de poder informar el tipaje deDRB1 a nivel alélico, o bien con nomenclatura NMDP de tal forma quesólo estuviera presente un alelo de alta frecuencia. Hemos analizado lafrecuencia DR (baja resolución)de 7.159 muestras (donantes y SCU) yde ellas, analizamos el tipaje a nivel alélico de 1000 ADNs procedentesde SCU consecutivas correspondientes a unidades criopreservadas enlos meses de abril a junio de 2007. En caso de no disponer del tipaje anivel alélico, hicimos una traducción de la nomenclatura NMDP al ale-lo mas frecuente (>99% probabilidades) considerando que dado el núme-ro de muestras no interferiría la posible existencia de un alelo raro.

Resultados y conclusiones. La frecuencia fenotípica del análisisde las 7.159 muestras fue por orden de frecuencia DR7 (30%), DR4(26%), DR13 (26%), DR3 (25%), y DR11 (25%). A nivel alélico los másfrecuentes son DRB1*0701 Y DRB1*0301 . La distribución para DR4,DR11 y DR13 son: DR4 (224 casos), frecuencia: *0404 (26,78%), *0405(20,10%), *0403 (14,73%), *0402 (13,85%), *0401 (12,95%), *0407 (4,91%),*0408 (4,01%), *0406 (2,23%), *0411 (0,44%). DR11: (216 casos), frecuen-cia: *1101 (39,82%), *1104 (39;35%), *1102 (12,96%), *1103 (6,49%), y*1106, *1114 y *1136 con un 0,46% cada uno. DR13: (266 casos), frecuen-cia: *1301 (50%), *1302 (33,46%), *1303 (13,91%), *1305 (1,50%), *1304(0,75%) y *1325 (0,38%). El tipaje de DR4 es el mas heterogéneo. Debi-do al importante porcentaje de nacimientos de inmigrantes y su mul-tiplicidad étnica, el interés principal del presente estudio se basa en laprobabilidad de encontrar una unidad de cordón DRB1 compatibledentro de nuestro banco de cordón.

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37. RELACIÓN DEL FENOTIPO ANTIGÉNICO ENTRE LASCÉLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS Y LASCÉLULAS MADRE MESENQUIMALES. De la Mata EspinosaCT, Ortiz-Ferrón G, Tirado I, Muñoz-Fernandez R, Blanco O, LenoE, Abadía-Molina AC, Olivares EG. Instituto de Biopatología y Medi-cina Regenerativa, Centro de Investigaciones Biomédicas, Universidadde Granada.

Introducción. La decidua es el tejido materno que se encuentra encontacto directo con el trofoblasto fetal. Durante el embarazo, los meca-nismos inmunológicos que llevan a un embarazo exitoso o al aborto,se encuentran en la decidua. Las células deciduales estromales (DSC)constituyen una proporción de alrededor del 50% del total de las célu-las de la decidua y se ha demostrado que tienen actividades inmuno-lógicas como producción de citoquinas (IL-6, IL-8, MCP-1α, RANTES)fagocitosis y activación de células T. Nuestro grupo ha aislado DSC deembarazo normal humano y las mantuvo en cultivo. Estas células expre-saron CD10, CD13, CD29, CD34, CD73, CD90, ICAM-1,VCAM-1, STRO-1, α-SM actin, y ALP, y falta de CD3, CD15, y CD45. Las DSC presen-tan morfología semejante a las MSC (células madre mesenquimales)de médula ósea, por lo que pensamos que están estrechamente rela-cionadas entre sí.

Objetivo. El objetivo general de este trabajo es estudiar las rela-ciones inmunofenotípicas entre las MSC de médula ósea y las DSC yla posible diferenciación de las DSC a linajes mesenquimales.

Métodos. Las MSC de médula ósea se aislaron aplicando la mis-ma metodología utilizada por nuestro grupo para la obtención de DSC.Se estudió el fenotipo antigénico de las dos poblaciones por medio decitometría de flujo y la diferenciación de las DSC por medios específi-cos de linaje mesenquimal.

Resultados. Los análisis revelaron que la expresión de los antíge-nos superficiales de las MSC cultivadas, tales como CD29, CD10, α-sm-actina, y STRO-1 eran fuertemente positivos; CD34, CD21, CD73,y 106 estaban positivos en baja intensidad y CD45 fue negativo. Unapoblación en células frescas de médula ósea también demostró tenerlos mismos antígenos de superficie de la célula. Las DSC se diferencia-ron a osteoblastos, adipocitos y condrocitos.

Conclusiones. Nuestros resultados confirman que las DSC estaestrechamente relacionadas con las MSC.

38. ANTICUERPOS ANTI-HLA PREFORMADOS FAVORECENEL RECHAZO Y DISMINUYEN LA SUPERVIVENCIA DELINJERTO HEPÁTICO. RESULTADOS DE UNA SERIE DE 896TRASPLANTES. Castillo-Rama M1, Castro MJ1, Bernardo I1,Calleja-Antolín S1, Morales P1, Romo E1, Meneu-Diaz JC2, Pérez-Saborido B2, Moreno Elola-Olaso A2, Paz-Artal E1. 1Inmunología.Hospital Doce de Octubre. 2Cirugía Digestiva y Trasplante de ÓrganosAbdominales. Hospital Doce de Octubre. Madrid.

896 trasplantes hepáticos realizados en nuestro centro entre 1986y 2006 se analizaron retrospec tivamente con el objetivo de investigarel impacto de los anticuerpos anti-HLA en el rechazo y la superviven-cia del injerto hepático. La prueba cruzada se realizó por citotoxicidaddependiente del complemento (CDC). Los anticuerpos anti-HLA cla-se I y II se detectaron por citometría multiparamétrica con microesferas (Luminex® xMAP).

La supervivencia actuarial se calculó con las tablas de vida y laacumulada con el método Kaplan-Meier. El test log rank se aplicó para

determinar si existían diferencias estadísticamente significativas entrelos grupos. Para estudiar la correlaci ón entre técnicas (CDC y Lumi-nex) y entre anticuerpos prefor mados y rechazo se utilizaron tablas2x2 y el test del Chi-cuadrado.

Resultados. Existe una fuerte correlación entre las dos técnicas ysu capacidad para detectar anticuerpos preformados (p<0.0001).

La presencia de anticuer pos preformados detectados por CDC yLuminex® xMAP esta asociada con una disminución en la superviven-cia del injerto hepático dentro del primer año post-trasplante (p=0.01y p= 0.016 respectivamente)

Una prueba cruzada positiva con linfocitos T tiene un impactonegativo en la supervivencia del injerto a 1 y 5 años (p =0.043 y p= 0.0019 respectivamente). Asimismo, los anticuerpos clase II detectadospor Luminex tienen un impacto negativo en la supervivencia del injer-to a 1 y 5 años (p=0.005 y p= 0.038 respectivamente). Se observó unaasociación entre los anticuerpos preformados clase II detectados porLuminex o anticuerpos clase I y II detectados por Luminex y el recha-zo del injerto hepático ( p=0.001 y p=0.042 respectivamente).

Conclusiones. El screening de anticuerpos HLA con técnicas deLuminex y CDC puede ser útil en la detección de pacientes de alto ries-go que podrían beneficiarse de una vigilancia post-trasplante más estre-cha y una terapia inmunosupresora más agresiva.

Financiación Fundación MMA 2004-008. In press Liver Transplanta-tion 2008.

39. SCREENING DE ANTICUERPOS ANTI-HLA. COMPARA-CIÓN ENTRE DOS TÉCNICAS: LUMINEX® VERSUS ELISA.Calleja Antolín S1, Castro Panete MJ1, Nevado Cestero J1, Bernar-do González I1, Castillo Rama M1, Serrano Hernández A1, Ramí-rez Bustillo E2, Morales Cerdán JM2, Mérida E2, Paz Artal E1. 1Ser-vicio de I nmunología. Hospital Universitario 12 de Octubre. 2Serviciode Nefrología. Hospital Universitario 12 de Octubre. Madrid.

Introducción y objetivos. Comparar la sensibilidad y la especifi-cidad entre dos técnicas de detección de anticuerpos anti-HLA en sue-ro: ELISA y citometría de flujo Luminex®.

Material y métodos. Se realizó screening de anticuerpos anti-HLApor ELISA (LAT® Mixed, One Lambda Inc., CA, EE. UU.) y Luminex®

(LABScreen® Mixed, One Lambda Inc., CA, EE. UU.) a 290 sueros selec-cionados aleatoriamente de entre 2.074 sueros de los receptores de lalista de espera de trasplante renal.

El análisis estadístico de los resultados obtenidos se realizó median-te tablas de contingencia 2 x 2 y curvas ROC, con el programa de aná-lisis estadístico SPSS.11.0.

Resultados. La tecnología Luminex® presenta una mayor sensibi-lidad como prueba de screening para la detección de anticuer pos anti-HLA en suero. Luminex® presenta una sensibilidad del 92%, frente al81% de la de ELISA.

Por otra parte, se observa una menor especifici dad en la detec-ción de estos anticuerpos por Luminex® respecto a ELISA (89% frentea 96%). Las c urvas ROC demuestran una relación más óptima de sen-sibilidad/especificidad en la tecnología Luminex® que en ELISA (varia-bles resultado de contraste: área Luminex® 0,910; área ELISA 0,887).

Conclusiones. Luminex® LABScreen® Mixed presenta una sensi-bilidad mayor para detectar anticuerpos anti-HLA y, aunque su espe-cificidad es menor que la de ELISA, su mejor relación entre sensibili-dad y especificidad la convierte en una prueba de screening más poten-te que ELISA.

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40. ACUTE HUMORAL REJECTION MEDIATED BY ANTIBODY,UNDETECTED BY CDC. Osório E1, Mendes C1, Sinde MonteiroM1, Teixeira J1, Castro Henriques A2, Alves H1. 1Centro de Histocom-patibilidade do Norte, Porto, Portugal. 2Hospital Geral de Sto.António-Serviço de Nefrologia, Porto, Portugal.

Introduction. Knowing that pregnancy is a risk factor in the for-mation of anti-HLA antibodies (Ab), we should detect them before therenal transplant.

Objective. Identify the causes that led to acute humoral rejection.Methods. Crossmatch (XM) was performed by Cytotoxicity (CDC)

and Flow Cytometry (FC) FACSCalibur (Becton Dickinson), with anti-IgG/FITC Dako and anti-CD2/PE BD.

HLA Ab screening was done by CDC, LAT-M (ELISA), LuminexLABScreen Mix and LABScreen PRA (OneLambda).

The patient was a 51 years-old female with no past transfusionsor infections, three pregnancies, with a cadaver kidney transplant after48 months of haemodialysis.

Donor HLA-A1,2;B8,51;DR3,8patient HLA-A1,11;B8,35;DR3,8Mismatch-A2,B51.HLA Ab screening by CDC was done every 3 months since 2002

and was negative at all times, whereas HLA Ab by ELISA or Luminexwas positive for class I and II.

The transplant CDCXM was negative for T and B cells, whereasFCXM was positive for T cells.

Induction therapy with CyA, MMF, Pred, ATG. The patient hadimmediate graft function. Serum creatinine dropped to 2,7mg/dL. Onthe 8th day the patient was anury. The biopsy showed acute rejectionBanff II b with diffuse positive C4d. The FCXM was positive on the 8thday.

The patient went through 10 Plasmapheresis with IVIg. Shecurrently (45 days after transplant) keeps class II Ab positive, beingnegative for class I (Luminex), 1,8mg/dL of creatinine with proteinu-ria, treated with MMF, Pred and Tacrolimus.

Taking as hypothesis that the patient's sensitivity was due to herpast pregnancies (last 27 years ago), we typed her husband: HLA-A2; B44; DR1,15.

The CDC XM with her husband's cells tested negative for T and B(XM's with serum before TX) and FCXM positive for T and B cells.

We detected anti-A2 in patient serum by Lum LS1PRA (the hus-band was HLA-A2).

Conclusion. In the case of women, sensitized because of their preg-nanc ies, XM by CDC might not be enough (low title antibody) andFCXM should be performed afterwards.

41. POSTTRANSPLANTECTOMY HLA DONOR SPECIFIC ANTI-BODIES: CASE REPORT. Mendes C1, Osório E1, Sinde Montei-ro M1, Teixeira J1, Castro Henriques A2, Alves H1. 1Centro de His-tocompatibilidade do Norte, Porto, Portugal. 2Hospital Geral de Sto.Antó-nio, Serviço de Nefrologia, Porto, Portugal.

Introduction. HLA Donor specific antibodies(DSA) may appearin patients submitted to a kidney transplant(KTx).This often ends inhumoral rejection(RJ) and organ loss. Several studies indicate that occa-sionally DSA only appear after transplantectomy

Case report. Patient with rejection and DSA, not detected in peri-pheral blood until transplantectomy

15/8/98 Male patient, 44 years, end-stage renal disease (familialnephropathy), pre-TX HLA antibodies (Ab) by Luminex (Lum) andCDC neg

5/7/2003 Kidney Tx (cadaver male donor, 53 years). Crossmatch(XM) by CDC and Flow Cytometry (FC) neg. Patient treated with Dacli-zumab+TAC+MMF+Pred

PosTX monitoring on the 1st, 3rd and 6th months: Ab by Luminexand CDC-neg; XM with donor frozen cells-neg.

13/12/04 biopsy-29 glomeruli, with vascular lesion, malignantnephrosclerosis, with acute RJ cri teria or polioma virus infection.

15/10/05 Rejection – The patient returns to dialysis withTAC+Pred.

10/2/06 and 30/3/2006 Ab by Lum and CDC neg; XM with donorfrozen cells-neg.

6/6/06 Transplantectomy, Patient refers abdominal pain, hae-maturia and severe hypertension, maintains Pred.

6/7/06 Ab by Lum class I–positivePRA (CDC) 78%XM with donor frozen cells–positive (T cells)Donor HLA-A1,2;B8,40;DR13,15Recipient HLA – A2;B44,57;DR13,15Mismatches A1, B8, B40Ab identification anti-A1 and anti-B40Methods. PRA was performed by CDC/45 cells panel. Anti-HLA

class I and II Ab screening and the specificities were performed by Lum(Labscreen mixed and PRA, One Lambda) and CDC. The XM was per-formed by CDC and FC (FACSCalibur).

Conclusion. The existence of pos-TX DSA may be hidden by the"sponge effect" of the transplanted organ. The circulating Ab are indu-ced by the removal of the organ itself and/or by the immunosuppres-sion stop. This may be relevant in the case of a retransplant patient.

42. CÉLULAS MESENQUIMALES PARA REGENERACION DECARTILAGO: ARTRITIS REUMATOIDE Y OSTEOCONDRI-TIS DISECANTE. Martinez Lorenzo MJ1,5, Desportes Bielsa P2,5,Alegre Aguarón E2,5, Royo Cañas M5, Castiella T3, García AlvarezF4,5, Larrad Mur L2,5. 1Banco de Sangre y Tejidos de Aragón. 2Serviciode Inmunología. Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa. 3Servi-cio de Anatomía Patológica-HCU. 4Servicio de Traumatología-HCU.5Instituto Aragonés Ciencias de la Salud.

Introducción. Las células mesenquimales (MSC) constituyen unmodelo muy útil en aplicaciones clínicas para un gran número de enfer-medades, tanto en terapia regenerativa como en terapia génica (Deanset al, 2000). Además de la médula ósea y el cordón umbilical, otra fuen-te alternativa de MSC es el tejido adiposo. El potencial diferenciadorde estas células ha sido confirmada por diversos grupos (Zuk et al2001). En este trabajo se aislaron y caracterizaron las MSC obtenidasde grasa de tres especies diferentes y se analizó su capacidad de dife-renciación y regeneración de cartílago.

Materiales y Métodos. Se obtuvieron muestras de tejido adi-poso de 5 ovejas, 5 conejos y 5 humanos. Las células procedentesdel tejido adiposo se obtuvieron mediante digestión mecánica yenzimática y fueron separadas por centrifugación. En el caso decélulas procedentes del líquido sinovial, éstas se obtuvieron porcentrifugación.

El cultivo de las células se realizó en un medio de expansión y semantuvo a 37ºC en atmósfera húmeda con 5% de CO2. Para el estu-

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dio fenotípico las células se incubaron con anticuerpos monoclona-les específicos. La diferenciación celular hacia condrocitos se realizóen un medio de diferenciación y las muestras se analizaron tras rea-lizar cortes del tejido embebido en parafina y tinción con eosina-hematoxilina.

Resultados. Las células obtenidas se adherían fácilmente al plás-tico y tenían una morfología fibroblástica Para comprobar que no habíacontaminación con adipositos se analizó el marcador CD36, el cula fuenegativo en más del 95% de la población analizada. Más del 90% delas células mesenquimales obtenidas fueron negativas para CD31 yCD45, marcadores de la línea hematopoyética y endotelial, respectiva-mente. Menos de un 5% de las células expresaron CD34.

El porcentaje de células que expresaban CD54 osciló entre un 30 yun 80%. La expresión de CD49d osciló entre un 10 y un 80%, siendomenor la expresión en las células obtenidas de la grasa de conejo. Laexpresión de CD105 fue baja (10-25%) para c onejo y oveja. Sin embar-go, dicha expresión supero el 90% en células obtenidas de grasa huma-na . Fueron positivas para CD13, CD44, CD59 y CD166.

Los resultados obtenidos en los estudios histopatológicos indica-ron que tanto las células mesenquimales obtenidas de tejido adiposode oveja como de conejo tenían capacidad para diferenciar hacia con-drocitos, mientras que el análisis realizado en células mesenquimalesobtenidas de grasa humana indicaron una peor diferenciación haciadicho linaje. Sin embargo, actualmente se están realizando estudioscon otros medios de diferenciación , que parecen dar mejores resulta-dos anatomo-patológicos en cuanto al grado de diferenciación celularhacia condrocitos.

43. ES LA HEPATITIS “AUTOINMUNE” DE NOVO UNA FORMADE RECHAZO HUMORAL EN EL TRASPLANTE HEPÁTICO?Aguilera I, Sousa JM, Wichmann I, Gavilán F, Bernardos A, Núñez-Roldán A. HH UU Vírgen del Rocio.

La hepatitis “autoinmune” de novo (HAIdn) es una complicacióndel Tx hepático que ha generado una cierta controversia desde quese describió en 1998. Si bien es cierto que las alteraciones morfológicasen biopsia hepática son similares a las de la HAI clásica, se trata de unarespuesta inmune frente al aloinjerto. Si a esto le sumamos la presen-cia de ab anti-GSTT1 debido a incompatibilidad genética en el gende la glutation S-transferasa T1 (GSTT1) entre donante+ y receptornulo, la hipótesis más directa es la del rechazo humoral.

Objetivo. Comprobar la presencia de depósitos C4d (considera-do marcador de rechazo humoral) en biopsias hepáticas de siete pacien-tes diagnosticados de HAIdn que presentaban anticuerpos anti-GSTT1específicos de donante.

Material y Métodos. Biopsias obtenidas entre los 12-85 mesespost-Tx con diagnóstico de HAIdn fueron utilizadas para detectardepósitos C4d con el ab policlonal anti-C4d (Biomédica, Viena). Elgrado de tinción C4d se valoró de forma semicuantitativa: 0, ningu-na; 1+, débil; 2+, moderada; 3+, fuerte (Troxell, 2006). Los ab anti-GSTT1 fueron estudiados por WB y ELISA con la proteína recombi-nante humana.

Resultados. Seis pacientes presentaron depósitos C4d+ en el estro-ma de la zona portal y uno fue C4d- con muestra de suero negativapara los ab anti-GSTT1 tras un año en tratamiento. En los pacientes 2y 5 que también estaban en tratamiento con esteroides antes de la biop-sia, también se observó disminución de los C4d+ aunque el titulo deab cercano a la biopsia no pudo ser comprobado.

Paciente Biopsia Nº muestras Ab anti-GSTT1 Tinción Diagnóstico(m post-Tx) previas con fecha biopsia (score) C4d histológico

ab anti-GSTT1

1 21 3 Neg 0 HAIdn2 85 5 nd 1+ HAIdn3 12 0 >320 3+ HAIdn4 58 1 >320 3+ HAIdn5 24 2 nd 1+ HAIdn6 21 1 1/160 3+ HAIdn7 32 0 1/320 4+ HAIdn

Conclusión. La presencia de depósitos C4d en pacientes con abanti-GSTT1 refuerza la hipótesis de que la HAIdn es una forma par-ticular de rechazo mediado por anticuerpos en pacientes con la incom-patibilidad genética GSTT1.

44. IMPORTANCIA RELATIVA DE LA COMPATIBILIDAD HLAA NIVEL ALELICO EN EL TRASPLANTE DE SANGRE DECORDON UMBILICAL EN ADULTOS. Planelles D1, CanteroS2, Solves P3, Moscardó F2, Rodríguez M1, Granell R1, Gómez I1,Alba E1, Jarque D1, Vila E1, Laguarda E1, Puig N1, Montoro J1, SanzG2. 1Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusión de la Comu-nidad Valenciana. 2Unidad de Trasplante de Médula, Hospital La Fe,Valencia. 3Banco de Cordon Umbilical, Centro de Transfusión de la Comu-nidad Valenciana.

El éxito del trasplante de progenitores hematopoyéticos parecedepender en gran medida de la compatibilidad HLA a nivel alélico enlos loci A, B, C y DRB1. En los últimos años, el trasplante de sangre decordón umbilical (TSCU) ha cobrado importancia debido a las venta-jas que ofrece sobre el trasplante de médula o sangre periféric a; entreéstas, la más baja incidencia de enfermedad injerto contra huésped(ICH), lo que permite realizar el trasplante con menor restricción decompatibilidad HLA. Sin embargo, se desconoce el impacto diferen-cial de las disparidades HLA entre donante y receptor (clase I vs II ó“single locus vs multiloci”) en la evolución de este tipo de trasplante,principalmente en adultos. El objetivo de este trabajo ha sido evaluarel impacto del número y clase de disparidades HLA, en uno o más loci,en la evolución de pacientes adultos sometidos a TSCU. La METODO-LOGIA seguida para el tipaje HLA fue por alta resolución (PCR-SSP,–SSO) para los loci A, B, C, DRB1, DQB1 y DPB1. Para el análisis delimpacto de disparidades “multiloci” se evaluaron las combinacionesde loci: A+B+DRB1, A+B+C+DRB1, A+B+C+DRB1+DQB1 yA+B+C+DRB1+DQB1+DPB1. Todos los análisis se realizaron conside-rando las disparidades a nivel alélico y genérico y tanto en direcciónICH como HCI (huésped contra injerto). RESULTADOS: El grado decompatibilidad HLA considerando HLA-A y –B a nivel genérico y–DRB1 a nivel alélico, fue 6/6 en el 5% de los casos, 5/6 en el 35% y4/6 en el 60%. El análisis multivariante indicó que sólo la presencia dedisparidad a nivel genérico en el locus HLA-A en dirección HCI se rela-cionó con el prendimiento mieloide. En conclusión, los resultados obte-nidos indican que el grado de compatibilidad HLA en el TSCU en adul-tos no parece ser tan decisivo como en niños. Por tanto, el tipaje HLAde alta resolución para los loci A, B, C, DRB1, DQB1 y DPB1 no pare-ce esencial en las búsquedas de unidades de cordón para pacientesadultos con enfermedades hematológicas malignas.

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45. SOPORTE INMUNOLÓGICO EN EL DIAGNÓSTICO DERECHAZO AGUDO EN TRASPLANTE CARDIACO. BlancoGarcía RM1, López Álvarez MR2, Pascual Figal DA3, Garrido Bra-vo I3, Botella C1, Salgado Cecilia MG1, Muro M2, García AlonsoAM2, Álvarez López MR2, Minguela A2. 1Servicio de Inmunología.2Servicio de Inmunología CIBERehd. 3Servicio de Cardiología. Hospi-tal Universitario Virgen de la Arrixaca.

Introducción. El diagnóstico de rechazo agudo (RA) en transplan-te cardiaco se basa en la sospecha clínica y/o en la presencia de infil-trados inflamatorios en la biopsia endomiocárdica. Sin embargo, ambasformas de diagnóstico presentan limitaciones y conllevan un aumen-to de la inmunosupresión no exento de complicaciones. En los últimosaños, nuestro grupo ha utilizado con éxito marcadores inmunológicos,como la expresión de CD28 ó HLA en células de sangre periférica (SP)para la monitorización del rechazo en el seguimiento de trasplantescardiacos.

Objetivos y métodos. Se pretende establecer si dichos marcado-res son útiles en pacientes que no puedan esperar al diagnóstico his-tológico. Se estudian 51 trasplantes cardiacos, c lasificados en: sin-RA (NRA), con RA-Biópsico/Clínico (RA-BC, n=15), con RA-Biópsi-co-solo (RA-BS, n=8), con RA-Clínico-solo (RA-CS, n=4). En estospacientes se estudió por citometría de flujo la expresión de CD28 enlinfocitos CD4+ y CD8+ y de HLA clase-I en linfocitos totales, en elpre-trasplante y 1, 2, 3, 4, 6 y 12 meses post-trasplante.

Resultados. La expresión de CD28 en linfocitos CD4+ y CD8+ yde HLA en linfocitos totales, fue superior (p<0.05) en pacientes conRA-BC y RA-BS que en NRA. Sin embargo, en los pacientes con RA-CS la expresión de dichas moléculas fue similar a la de los del grupoNRA. Al estudiar estos parámetros en los días en los que se realizaronlos diagnósticos de RA, se comprobó que la expresión de CD28 y HLAera superior, y se incrementaron más, respecto al pre-trasplante, enpacientes con RA (RA-BC y BS) que en los que sólo se basaron en cri-terios clínic os (RA-CS).

Conclusión. El estudio de la expresión de CD28 sobre linfocitosCD4+ y CD8+, y de HLA en linfocitos totales, podría ser de ayuda parala correcta aplicación del tratamiento antirrechazo, en pacientes en losque bajo sospecha clínica, no se disponga de los datos histológicos.

46. SOPORTE INMUNOLÓGICO EN EL DIAGNÓSTICO DECÉLULAS REGULADORAS NATURALES CD4+CD25highC-TLA-4cit+ EN TRASPLANTE HEPÁTICO. Salgado Cecilia MG1,López Alvárez MR2, Blanco García RM1, Legaz Pérez I2, BotellaC1, Lucas Aroca D1, Martinez Sánchez MV1, Miras M3, ÁlvárezLópez MR. 1Servicio de Inmunología. 2Centro de Investigación Biomé-dica en Red de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd). 3Ser-vicio de Medicina Digestiva. Centro de Investigación Biomédica en Redde Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd). Hospital U. Vir-gen de la Arrixaca.

Introducción. Las células reguladoras naturales CD4+CD25high(nTr) son decisivas en el mantenimiento de la homeostasis en las dife-rentes respuestas del sistema inmune, incluida la respuesta alogénica.Aunque no está claro el papel que juegan en trasplante hepático (TH).

Objetivo y Metodología. Evaluar el papel que juegan las nTr enla aceptación de injertos hepáticos. Se estudiaron las nTr en sangre peri-férica de 130 receptores de TH, en 780 muestras correspondientes a losdías 0 (pretrasplante), 7, 15, un mes, tres meses y un año post-trasplan-

te. Las cifr as absolutas (células/μl) de linfocitos CD4+, CD4+CD25high,CD4+CD25-/lowCTLA-4cit+ (no-nTr) y CD4+CD25highCTLA-4cit+y la expresión de CD62L y CD28 en dichas subpoblaciones, se han esti-mado mediante citometría de flujo. Los pacientes se clasificaron en dosgrupos: rechazo agudo (RA, n=23) y no rechazo agudo (NRA, n=107).

Resultados. Ambos grupos partieron de cifras pretrasplante simi-lares de linfocitos CD4+ y CD4+CD25high. Sin embargo, las célulasno-nTr y CD4+CD25highCTLA-4cit+ presentaron cifras pretrasplantesuperiores en el grupo RA. En el post-trasplante, ambos subtipos decélulas CTLA-4cit+ (nTr y no-nTr) decrecieron en el grupo RA. Por elcontrario, en el grupo NRA, que partían de cifras basales menores, lascélulas nTr se incrementaron en el post-trasplante, con cifras máximasal año de evolución. En estos pacientes, las células CD4+ no-nTr CTLA-4cit+ mantuvieron sus valores constantes. La expresión de CD62L enlos diferentes subtipos de células no mostró diferencias entre los pacien-tes, a excepción de los primeros 15 días post-trasplante, donde célulasT CD4+ de fenotipo activado (probablemente alorreactivas) CD25-/lowCTLA-4cit+CD62L- se incrementaron en RA.

Conclusiones. Los pacientes con mejor aceptaci ón temprana delinjerto hepático presentaron cifras de c élulas nTr CD4+CD25highC-TLA-4cit+ más elevadas al año de evolución, por lo que estas célulaspodrían estar favoreciendo su aceptación a largo plazo.

47. ESTUDIO DE LA DINÁMICA DE RECONSTITUCIÓN DE LIN-FOCITOS T CD4+CD25+ EN TRASPLANTADOS CARDÍACOSTRATADOS CON 2 DOSIS DE DACLIZUMAB. Lanio AmadorN, Sarmiento Marchese E, Gallego López A, Navarro J, Fernán-dez-Yañez J, Palomo J, Fernández-Cruz E, Carbone CampoverdeJ. Departamentos Inmunología y Cardiología. HGU Gregorio Marañón.Madrid.

Introducción. El daclizumab es un anticuerpo monoclonal huma-nizado, que bloquea específica y antagónicamente la subunidad alfa(CD25) del receptor de alta afinidad de la IL2. Su utilización como tra-tamiento inductor en el trasplante cardíaco se basa en su capacidadtransitoria de inhibir la expansión clonal de los linfocitos T activa-dos.

Objetivos: Evaluar el efecto del daclizumab sobre la subpoblaciónCD4/CD25+ en pacientes sometidos a trasplante cardíaco (TC). Deter-minar las posibles difer encias en la dinámica de reconstitución inmu-nológica y su relevancia clínica.

Métodos: Estudio prospectivo 27 pacientes TC (edad=56±11;21H/6M). Inducción: 2-dosis daclizumab, 1 mg/kg IV (día 0 y 14);mantenimiento: tacrolimus (n=26) o ciclosporina (n=1), mofetil mico-fenolato y prednisona. Determinaciones seriadas de subpoblaciones TCD4/CD25+, CD4/CD25high y CD4/CD38+DR+; Pre-TC, 7d, 30d,90d y 180d. Citometría de flujo en sangre periférica (FACSCalibur).

Resultados. Dos dosis de daclizumab son suficientes para man-tener los niveles de CD4/CD25+ prácticamente indetectables hastalos 90d, mientras que los niveles de CD4/CD38+DR+ permanecenestables. El patrón de reconstitución de CD25 es gradual y con dife-rencias entre pacientes. Al estratificar en base al % CD4/CD25+ a los90d (G1<11%<G2<43%<G3) se observa una tendencia de asociaciónentre G2 y ausencia de infección (Chi-cuadrado p=0,1). La compara-ción de medias indica que los pacientes con rechazo tenían meno-res porcentajes de CD4/CD25+ a los 30d (0,11% vs 0,60%, p=0,05),mientras que no se observan diferencias entre infectados y no infec-tados.

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Conclusiones. La expresión gradual de CD25 posterior al trata-miento con daclizumab, refleja un efecto inmunomodulador, ademásde bloqueador, que no afecta la expresión de marcadores de activaciónde los linfocitos T CD4. Así mismo, los distintos patrones de recons-titución sugieren diferenci as entre pacientes, lo que podría tener rele-vancia clínica en la detección anticipada de aquellos con mayor ries-go de sufrir eventos infecciosos o de rechazo.

48. AUSENCIA DE ASOCIACIÓN DE LOS POLIMORFISMOSGÉNICOS DE LAS CITOQUINAS CON EL SÍNDROME DE LABRONQUIOLITIS OBLITERANTE Y EL RECHAZO AGUDOEN TRANSPLANTE PULMONAR. Torío Ruiz A, Borro Mate JM,Sánchez Mozo MP, de la Torre Bravos M, Rey García C, AlonsoBlanco C. Complejo Hospitalario Juan Canalejo.

Introducción. La principal causa de pérdida del injerto pulmonares el desarrollo del síndrome de la bronquiolitis obliterante (BOS),un proceso al que se han asociado diversos factores de riesgo inmuno-lógicos como la incompatibilidad HLA, los anticuerpos anti-HLA, y lapresencia de c iertos polimorfismos genéticos de citoquinas.

Objetivo. Determinar si existe alguna correlación entre los polimor-fismos genéticos de una serie de citoquinas y la presencia de rechazo agu-do y/o el desarrollo de BOS en los pacientes transplantados de pulmón.

Pacientes y métodos. El estudio comprende 93 transplantes pul-monares realizados en el CHU Juan Canalejo de 1999 a 2004, con almenos un año de seguimiento. La presencia de episodios de rechazoagudo fue detectada en un 43% de los pacientes (AR+), mientras queun 39% de los pacientes habían desarrollado BOS en el momento delestudio. El genotipaje de las citoquinas se realizó utilizando el kit comer-cial (One-Lambda Inc., CA), que permite detectar polimorfismos decinco citoquinas (IL-10, IFN-g, TGF-b1, TNF-a y IL-6). El análisis esta-dístico se realizó mediante test de chi-cuadrado y Fisher, establecien-do el nivel de significación en p<0.05.

Resultados. Al comparar los distintos grupos de estudio, encon-tramos una serie de diferencias en las frecuencias genotípicas, alélicasy de los fenotipos secretores de la citoquinas. Así, el fenotipo alto secre-tor de la IL-10 está aumentado en los pacientes BOS+ respecto a lospacientes BOS- (33% vs. 19%), mientras que el fenotipo alto secretordel TNF- a se encontraba presente en el 34% de los pacientes AR+ yúnicamente en el 21% de los pacientes AR-. Sin embargo, ninguna deestas diferencias alcanzaba significación estadística (p>0.05).

Conclusión. Nuestros resultados muestran que la presencia de losdiferentes polimorfismos genéticos de las citoquinas estudiadas no tie-ne un efecto directo en la presencia de episodios de rechazo agudo oel desarrollo de BOS en nuestra población.

49. LA EVOLUCIÓN DEL NIVEL DE ANTICUERPOS ANTI-HLAPOR FLOW -PRA EN EL PRIMER AÑO POST-TRASPLANTECARDIACO Y SU SIGNIFICADO CLÍNICO. Domenech GarcíaN, Crespo Leiro M, Moscoso Galán I, Pani Agua Martin MJ, NayaLeira C, Grille Cancela Z, Estevez Cid F, Castro Beiras A. Comple-jo Hospitalario Juan Canalejo.

Introducción. La detección de anticuerpos (Ac) anti-HLA clase Iy clase II es variable en los pacientes con trasplante cardiaco (TC). Elsignificado de la intensidad de detección y momento de aparición dedichos anticuerpos no es bien conocido.

Objetivo. Evaluar la presencia de Ac anti-HLA clase I y clase IItras el TC y su patrón evolutivo. Material y métodos: Estudio longitu-dinal de 59 pacientes con TC (79,7% varones, edad media 49,7+/-11,1años). Se evaluó el suero pre y post-TC a 1, 3, 6 y 12 meses para los Acanti-HLA clase I y clase II mediante Flow-PRA. Se cuantificó para cadadeterminación la positividad en 1, 2, 3 y 4 según fuese < 10%, 10-25%,25-75% y 75-100%. Los datos clínicos evaluados fueron rechazo cardia-co, f unción ventricular y supervivencia.

Resultados. Se detectaron Ac anti-HLA I en algún momento post-TC en el 37,3% y HLA II en el 10,1%. El porcentaje de detección deAc anti-HLA I a 1, 3, 6 y 12 meses fue de 17,3%, 20,9%, 16,7% y 18,2%.El grado de positividad (de 1 a 4) fue de 55,6%, 22,2%, 11,1% y 11,1 para1 mes; 77,8% y 22,2% (grado 1 y 2) para 3 meses; 55,6%, 22,2% y 22,2%(grado 1, 2 y 3) para 6 meses; 75%, 12,5% y 12,5% (grado 1, 2 y 3) para12 meses. El porcentaje de detección de Ac anti-HLA II a 1, 3, 6 y 12meses fue de 5,8%, 4,5%, 5,8% y 2,3%. El grado de positividad (de 1 a3) fue de 33,3%, 33,3% y 33,3% para 1 mes; 100% (grado 3) para 3 meses;33,3% y 66,7% (grado 2 y 3) para 6 meses; 100% (grado 3) para 12 meses.No hubo correlación entre la detección/intensidad de Ac anti-HLAclase I y c lase II y rechazo cardiaco. La supervivencia a 12 meses fuedel 100% y todos los pacientes tuvieron una función ventricular nor-mal, con una media de FEVI del 66,9 ± 8,3%.

Conclusiones. Los Ac anti-HLA clase I y clase II están presentesen un 37,3% y 10,1% de los pacientes en el primer año tras el TC. En lamayoría de los casos, la detección es inferior a un 10% y el significadoclínico de la presencia es incierto. Se necesitan estudios con mayornúmero de pacientes y seguimiento para valorar la utilidad de estasdeterminaciones en el seguimiento a largo plazo post trasplante.

50. INFLUENCIA DE LA COMPATIBILIDAD HLA EN LA EVO-LUCIÓN DEL TRASPLANTE ALOGÉNICO DE PROGENITO-RES HEMATOPOYÉTICOS. Marin Rubio LA, Alcoceba M, Balan-zategui A, Sarasquete ME, Chillón MC, Santamaria C, Corral R,García-Sanz R, San Miguel J, Gonzalez M. Servicio de Hematología,Hospital Universitario de Salamanca.

Introducción. El transplante alogénico de progenitores hemato-poyéticos (TAPH) es un procedimiento terapéutico potencialmentecurativo para un amplio grupo de enfermedades hematológicas. El éxi-to del transplante está condicionado por el grado de compatibilidadHLA entre receptor y donante. Sin embargo, aproximadamente 1/3 delos pacientes tienen un familiar HLA compatible.

Objetivo. Investigar la influenci a del grado de identidad HLA yla evolución de pacientes que han recibido un transplante alogénicode progenitores hematopoyéticos. Pacientes: Se incluyeron en el estu-dio 270 pacientes adultos consecutivos diagnosticados de hematopa-tía maligna sometidos a un TAPH en un único centro. Las caracterís-ticas de la serie fueron: mediana de edad: 47 (15-70); Varón/Mujer:153/117; Disparidad de sexo: 48%. Diagnóstico: 68 Leucemia mielo-blástica aguda, 38 Linfoma no Hodgkin, 31 Leucemia linfoblástica agu-da, 31 Leucemia mieloide crónica, 31 Mieloma múltiple, 31 Síndromemielodisplásico, 19 Leucemia linfátic a crónic a (LLC), 11 Linfoma deHodgkin (LH), 6 Síndrome mieloproliferativo, 1 LLC+LH, 3 Otros;Régimen de acondicionamiento: 158 RIC/112 convencional; SP/MO:235/35. La mediana de seguimiento fue de 52 meses (2-162). Métodos:Tras la extraccin del ADN genómico se realizó el tipaje HLA según elestándar de la European Federation of Immunogenetics: tipaje de bajaresolución para HLA-A, -B y DRB1 mediante PCR-rSSO para aquellos

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transplantes con donante familiar, y tipaje de alta resolución de HLA-A, -B, -C y DRB1 para los donantes no emparentados. El análisis esta-dístico se realizó mediante lostest O2 y t de Student. Se aplicó el análi-sis del log-rank para comparar diferencias entre curvas de superviven-cia mediante SPSS 15.0 Software. De acuerdo al status del HLA, lostransplantes se clasificaron en tres grupos: i) TAPH con donante empa-rentado HLA idéntico (6/6 identidades); ii) TAPH con donante noemparentado HLA idéntico (8/8 identidades) y iii) TAPH con dispa-ridad en HLA (6-7/8 identidades).

Resultados. Comparando los dos grupos de pacientes que recibie-ron transplante de un donante HLA idéntico, se observó que la super-vivencia del grupo de trasplantes con donante emparentado era seme-jante a la de los del grupo de no emparentados (49% vs 45%, p>0.05).Sin embargo, aquellos pacientes que recibieron un transplante con almenos una disparidad HLA mostraron una peor supervivencia queaquellos que recibieron un transplante con identidad HLA completa(38% vs 49%, p=0.022).

Conclusión. El transplante de progenitores hematopoyéticos prove-niente de un donante no emparentado HLA idéntico tiene una evoluciónsimilar que en aquellos cuyo donante es emparentado HLA idéntico.

51. PREVALENCIA DE ANTICUERPOS ANTI-LINFOCITOS T NOANTI HLA DE CLASE I EN SUEROS DE PACIENTES EN LIS-TA DE ESPERA DE TRASPLANTE REANAL. de las Fuentes BD,Álvarez A, Caro Oleas JL, Núñez Roldán A, González EscribanoMF. Servicio de Inmunología. Hospital Universitario Virgen del Rocío.

Introducción. La prueba cruzada positiva frente a linfocitos T deun donante es una contraindicación absoluta para el trasplante renal.Esta prueba cruzada positiva constituye en la mayoría de los casos unreflejo de la presencia de anticuerpos dirigidos frente a moléculas HLAde clase I del donante en el suero del paciente. Sin embargo, en deter-minados casos los anticuerpos dirigidos frente a linfocitos T puedenreconocer otras moléculas que sean irrelevantes para el trasplante enla superficie de estas células.

Objetivo. Determinar el porcentaje de sueros con anticuerpos fren-te a linfocitos T no dirigidos frente a moléculas HLA de clase I en lalista de espera de trasplante renal.

Material y métodos. Se incluyeron 318 sueros rec ibidos en el labo-ratorio de forma consecutiva en el último trimestre de 2007 obtenidosde pacientes en lista de espera para trasplante renal. Estos sueros fue-ron estudiados en paralelo mediante citotoxicidad dependiente de com-plemento (CDC) frente a un panel de linfocitos T obtenidos de 40 donan-tes diferentes y citometría con microesferas recubiertas de moléculasHLA (Luminex).

Resultados. En el 97.5% de los casos (310 sueros) ambas técnicasfueron concordantes, en el resto de los sueros (n=8) se encontraron dis-cordancias. Entre las discordancias, en el 50% de los casos (4 de 8), elLuminex resultó positivo y la CDC negativa y en el 50% restante encon-tramos un resultado negativo para Luminex y positivo para CDC. Enestos 4 sueros se investigó la presencia de anticuerpos anti-HLA de cla-se IgM, resultando todos negativos. Por tanto, la frecuencia de sue-ros que presenta anticuerpos fr ente a linfocitos T no dirigidos frentea moléculas HLA de clase I es del 1.3% (4/318) en nuestra lista de espe-ra.

Conclusión. El porcentaje de sueros que presentan anticuerpos nodirigidos frente a moléculas HLA que pueden dar lugar a una prue-ba cruzada positiva frente a linfocitos T es bajo.

52. EMPLEO PROFILÁCTICO DE RITUXIMAB EN EL TRASPLAN-TE RENAL DE PACIENTES CON LES Y RIESGO INMUNO-LOGICO. Bernal MJ1, García T2, Martínez de Saavedra M1, Mazue-cos A2, Nieto A1, Brieva JA1, Rivero M2, Rodriguez C1. 1Servicio deInmunología. 2Servicio de Nefrología. Hospital Universitario Puerta delMar. Cádiz.

Objetivo. Rituximab se ha empleado en el tratamiento de enfer-medades autoinmunes y en la profilaxis del rechazo humoral en tras-plante (Tx). Se presenta la evolución de 3 pacientes con LES y alto ries-go inmunológico que recibieron un Tx renal y fueron pretratados conRituximab.

Pacientes. Tres mujeres de 36, 39 y 47 años. La nefropatía lúpica fuela causa de la insuficienci a renal crónica. Las pacientes presentaron mani-festaciones clínicas severas y brotes de actividad durante su estancia endiálisis, tenían títulos altos de autoAc, historia de PRA positivos polies-pecíficos y pruebas cruzadas donante-receptor positivas previas.

Métodos. Se realizaron pruebas cruzadas mediante citotoxicidadcelular con DTT, análisis de Ac HLA donante-específicos mediante tec-nología luminex y monitorización del tratamiento con Rituximab (cuan-tificación de inmunoglobulinas (Ig) séricas, autoAc (ANA, DNAds,ENA, fosfolípidos) y poblaciones linfocitarias B.

Resultados. Tras 23, 20 y 5 meses de seguimiento, la evolución dela función renal ha sido muy buena en las 3 pacientes. No han sufridoepisodios de rec hazo agudo ni manifestaciones sistémicas de LES.Rituximab fue bien tolerado. Rituximab indujo depleción total de lin-focitos B en las 3 pacientes, que se mantuvo durante 18 y 9 meses en 2pacientes. En la tercera paciente persiste la depleción de linfocitos Btras 5 meses de seguimiento. El nivel de autoAc descendió en las 3pacientes tras el tratamiento y, en las 2 pacientes que han inic iado lareconstitución de los linfocitos B, los autoAc han iniciado un ligeroascenso. La reconstitución se inic ió a expensas de linfocitos B naive(CD27-) y, posteriormente, de linfocitos B memoria (CD27+). El nivelde Ig séricas se ha mantenido dentro de la normalidad y no se handetectado Ac. HLA donante-específicos.

Conclusiones. Rituximab puede ser de utilidad como tratamien-to profiláctico en Tx renal de pacientes con LES activos y alto riesgoinmunológico humoral de pérdida del injerto.

SESIÓN 4: INMUNOLOGÍA TUMORAL - I

Moderadores: Dr. Francisco Ruiz-Cabello (Granada),Dr. Ignacio Melero (Navarra)

53. NUEVAS APROXIMACIONES EN INMUNOTERAPIA ANTI-TUMORAL: UNIÓN DE INTERFERON-GAMMA A NANOPAR-TÍCULAS MAGNÉTICAS. Mejías Laguna R1, Costo R2, G. RocaA2, Arias CF1, Veintemillas-Verdaguer S2, González Carreño T2, delPuerto Morales M2, Serna CJ2, Mañes S1, Barber DF1. 1Centro Nacio-nal de Biotecnología. 2Instituto de Ciencia de Materiales de Madrid.

La unión de citoquinas a nanopartículas magnéticas ha sido desa-rrollada como un método novedoso de liberación local de drogas anti-tumorales. Hemos estudiado la unión y liberación de Interferon-gam-ma (IFN-γ) murino en nanopartículas magnéticas sintetizadasmediante tres métodos distintos (coprecipitación, descomposición enmedio orgánico y laser-pirólisis) y modificadas en su superficie c on

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diferentes moléculas para alcanzar una carga superficial negativa a pH7 y permitir la interacc ión con el IFN-γ, sin perder estabilidad.Hemos incubado las dispersiones magnéticas con IFN-γ y hemosestudiados cuáles son las condiciones óptimas de interacción entre estacitoquina y las partículas, así como su capacidad de liberación a dis-tinto pH y en función del tiempo. Las partículas sintetizadas median-te descomposición en medio orgánico y modificadas con ácido dimer-captosuccínico presentaron la mayor capacidad de unión/liberación.La unión a estas nanopartículas de IFN-γ u otras biomoléculaspermitiría concentrar éstas en lugares específicos de acción para el tra-tamiento del cáncer u otras enfermedades.

54. EL INMUNOMODULADOR PSK POSEE ACTIVIDAD CITO-TÓXICA IN VITRO FRENTE A LÍNEAS CELULARES TUMO-RALES. Berruguilla Pérez E1, Romero García I1, Garrido C1, Lina-res I1, Collado A1, Algarra I2, Garrido F1, García-Lora AM1. 1Hos-pital Universitario Virgen de las Nieves. Granada. 2Departamento deCiencias de la Salud. Universidad de Jaén.

PSK (protein bound polisaccharide) deriva de la cepa CM.101 delhongo Coriolus versicolor y ha mostrado actividad antitumoral in vitroe in vivo en modelos tumorales humanos y modelos experimentales.Varios ensayos clínicos han mostrado que PSK posee un gran potencialen la terapia adyuvante contra el cáncer, pr esentando resultados posi-tivos frente a tumores de diferente tipo: gástrico, esofágico, colorrectal,mama y pulmón. Estas propiedades antitumorales de PSK se le hanatribuido a su efecto inmunomodulador, principalmente debido a laproliferación y activación de células NK. En este estudio hemos anali-zado el efecto citotóxico directo sobre líneas celulares tumorales.

Diferentes líneas celulares tumorales, derivadas de distintos tiposde tumores, fueron tratadas con PSK, midiéndose su tasa de prolifera-ción mediante la incorpor ación de BrdU y relizándose contaje celularcon azul trypan. El análisis del ciclo celular se realizó mediante la incor-poración de BrdU y marcaje con 7-AAD. Se evaluó la apoptosis median-te un ensayo de anexina V. La expresión de caspasa 3 activa se anali-zó mediante inmunofluorescencia y citometría de flujo.

Los resultados mostraron que PSK inhibió in vitro el crecimientode diferentes líneas tumorales, disminuyendo su tasa de proliferación.La inhibición de la proliferación varió desde un 22% a un 84%. El aná-lisis del ciclo celular mostró una acumulación de las células en la faseG0/G1 y un fuerte descenso del número de células en la fase S. Laexpresión de Anexina V en células tumorales tratadas con PSK mues-tra una inducción de la apoptosis. La expresión de caspasa 3 se incre-mentó en algunas de las líneas estudiadas.

Estos resultados indican que PSK tiene un efecto citotóxico direc-to in vitro sobre células tumorales, lo que puede sumarse a su accióninmunomoduladora sobre las células NK.

55. BALANCE ENTRE PROLIFERACIÓN Y APOPTOSIS EN CÉLU-LAS PLASMÁTICAS NORMALES Y TUMORALES EN ENFER-MOS CON GAMMAPATÍA MONOCLONAL DE SIGNIFICA-DO INCIERTO. Martínez Viñambres E, García Trujillo JA, Alca-lá Peña MI, Rodríguez Martín E, Coll Martí J, Roldán SantiagoE. Hospital Ramón y Cajal. Madrid.

Introducción. La gammapatía monoclonal de significado incierto(MGUS) es una neoplasia caracterizada por la expansión clonal de las

células plasmáticas (CP) presentes en la médula ósea (MO), coexistien-do en proporciones variables CP normales y CP tumorales. El MGUSes considerado como un estadio premaligno que progresa, en la mayo-ría de los casos, hasta la fase maligna de la enfermedad (mieloma múl-tiple).

Objetivos. Estudio de la proliferación de las CP tanto tumoralescomo normales presentes en pacientes con MGUS. Relación de la pro-liferación con los mecanismos de apoptosis de las CP.

Métodos. Aspirados de MO de individuos sanos y diagnostica-dos de MGUS. Cultivos de CP para ensayos de proliferación (incorpo-ración de BrdU). Detección de apoptosis espontánea e inducida poranticuerpos aCD95 mediante ensayos de anexina. Las poblacionesde CP así como el resto de antígenos estudiados se detectaron median-te citometría de flujo.

Resultados. Las CP normales de la MO de enfermos con MGUSmuestran una capacidad proliferativa superior a las CP tumorales conlas que coexisten (1.2% vs. 0.4%).

Sin embargo, tanto el porcentaje como la intensidad media de flo-rescencia (IMF) de la proteína Bcl-2 f ueron mayores en las CP tumo-rales de enfermos de MGUS; por el contrario, la expresión de la prote-ína CD95 fueron mayores en CP normales de estos mismos enfermos,tanto en términos porcentuales como de IMF.

En consonancia con estos hallazgos, las CP normales mostraronuna apoptosis espontánea superior a la observada en las CP clonalesy fueron discretamente sensibles a la muerte inducida por el anticuer-po aCD95 (c lon CH11), mientras que las CP tumorales no lo fueron.

Conclusiones. La proliferación disminuida de las CP tumoralesen el MGUS se ve compensada con una mayor supervivencia de lasmismas. Ambos mecanismos mantienen la población clonal controla-da y en coexistencia c on las CP normales en esta primera fase de laenfermedad.

56. POLIMORFISMOS DE IL-10 Y EVOLUCIÓN DESFAVORABLEDE PACIENTES CON HEPATOTOXICIDAD IDIOSINCRÁSI-CA A FARMACOS (DILI). Sáenz-López P1, Pachkoria K2, Luce-na MI2, Crespo E3, Borraz Y2, Ruiz-Cabello F1, Andrade RJ4 . 1Ser-vicio de Inmunología, H. Virgen de las Nieves, Granada. 2Servicio de Far-macología Clínica, 4Unidad de Hepatología, H. Universitario Virgen dela Victoria, Facultad de Medicina, Málaga. 3Departamento de Farma-cología, Universidad de Granada.

El balance entre citocinas inmunorreguladoras (IL-4, IL-10) y pro-inflamatorias (TNF-α) podría jugar un papel fundamental en la modu-lación de la respuesta del sistema inmune innato al efecto tóxico de losfármacos en el hígado siendo determinante en la aparición final delesión. Nuestro objetivo fue determinar la influencia de los polimor-fismos del gen promotor de IL-10, IL-4 y TNF-α en el desarrollo dehepatotoxicidad idiosincrásica y de sus características clínicas.

Métodos. Se determinó la frecuencia de tres polimorfismos loca-lizados en el gen promotor de la IL-10 (-1082 (G/A), -819 (C/T), -592(C/A), IL-4 (-590 C/T)) Y TNFα (308 (G/A)) en 140 pacientes de DILIy 268 controles mediante ensayo de discriminación alélica TaqMan 5´.

Resultados. Se analizaron 140 pacientes. La edad media fue de 51años (13-82 años) sin diferencias en la distribución por sexos. Las fre-cuencias alelicas, genotípicas para la IL-10, IL-4 y TNFα no mostrarondiferencias significativas entre los pacientes con DILI y los controles.Los pacientes con las variantes polimórficas para la IL-4, TNF-α y aque-llos con alelos salvajes no mostraron diferencias con respecto al tipo

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de daño, presentación clínica y evolución del daño hepático. El análi-sis del genotipo de la IL-10 (-1082) demostró la existencia de un desa-rrollo más temprano de la hepatotoxicidad en el caso de mujeres conel genotipo bajo productor de IL-10, (p<0.03). El haplotipo bajo pro-ductor de IL-10 fue mas prevalerte en los pacientes DILI con ausen-cia de eosinofilia [Pc=0.004, OR= 5.29, 95% CI 2.04-13.67] y se asoció aun recuento mas bajo de eosinofilos en sangre periférica (p<0.0002)comparado con el resto de haplotipos de IL-10. Los pacientes (10) quepresentaron una evolución mas desfavorable (fallo hepático fulminan-te, transplante hepático o muerte o daño grave con ictericia y activi-dad protrombina < 50%) exhibían un haplotipo bajo productor de IL-10 y ausencia de eosinofilia. De la revisión de los 591 casos de hepato-toxicidad incluidos en el Registro Español en 36 casos (6%) tuvieronuna evolución desfavorable y ninguno de ellos presentó eosinofilia.

Conclusiones. Los polimorfismos de la IL-10, IL-4 y TNFα no pare-cen estar asociados a la susceptibilidad de desarrollar hepatotoxicidaden pacientes españoles. La presencia del haplotipo bajo productor dela IL-10 podría favorecer una evolución grave del daño hepático noinmunoalergico y junto con la ausencia de eosinofilia periférica sermarcadores de evolución desfavorable.

57. MAPEO DE LAS ISOFORMAS CD33M Y CD33m CON UNPANEL COMERCIAL DE ANTICUERPOS MONOCLONALESANTI-CD33. POSIBLE U TILIDAD DIAGNÓSTICA Y TERA-PÉUTICA EN LEUCEMIAS. Hernández-Caselles T, Pérez-OlivaAB, Martínez-Esparza M, Corral-San Miguel R, García-Peñarru-bia P. Dpto. de Bioquímica y Biología Molecular (B) e Inmunología, Uni-versidad de Murcia.

CD33 (siglec-3) es un receptor de membrana que se expresa en nume-rosos tipos celulares de origen hematopoyético, de utilidad diagnósticay terapeútica en varios tipos de leucemia. A pesar de la importancia deri-vada de su aplicación clínica, hasta la fecha, este receptor permanecepoco estudiado en comparación con otros miembros de la familia comoson CD22 (siglec-2) o la sialoadhesina (siglec-1), de manera que se des-conocen muchas de sus características bioquímicas y funcionales. CD33ha sido identificado como un receptor potencialmente inhibidor al pose-er un dominio ITIM en su cola citoplásmica y reclutar las fosfatasas SHP-1 y 2 cuando dicho dominio se encuentra fosforilado. Nosotros hemosdescrito previamente que, en todas las poblaciones celulares que expre-san CD33, también se expresa otra isoforma, al menos a nivel de mRNA,que llamamos CD33m, generada por splicing alternativo, isoforma quese caracteriza por la ausencia del dominio Ig extracelular de tipo C2 deCD33. En el presente trabajo hemos explorado la capacidad de diversosanticuerpos comerciales anti-CD33 utilizando células 293T transfecta-das y diferentes líneas celulares para detectar la presencia de CD33mcomo proteína de membrana y su papel en las células hematopoyéticas.En el presente trabajo mostramos que:1) Los mAb comerciales WM53, WM54, 4D3, P67.6 y My9 reconocen

diferentes epítopos localizados en el dominio más externo (domi-nio V) de CD33.

2) El mAb HIM3-4 es el único que reconoce un epítopo localizado enel dominio C2. A su vez, este Ab es el único que no marca célulasT activadas CD33+ que sí se marcan con los demás mAb. HIM3-4 reconoce CD33 en aquellas células T activadas que han sido tra-tadas con sialidasa.

3) Los Ab H-110 detectan una isoforma de menor tamaño expresadaen membrana que probablemente es la isoforma menor CD33m.

4) La actividad inhibidora mediada por CD33 es más potente cuan-do se utiliza el mAb HIM3-4 que con WM53.Nuestros resultados indican que CD33m se expresa probablemen-

te en la membrana de las células CD33+ y que puede ser reconocidopor los anticuerpos HIM3-4 y H-110. El reconocimiento de CD33 porlos mAb HIM3-4 tras el tratamiento con sialidasa sugiere que esta molé-cula podría estar asoci ada en cis (enmascarada) en la membrana delinfocitos T activados. La utilidad de HIM3-4 podría ser la de discer-nir entre los estados de enmascaramiento o desenmascaramiento deCD33 en estas células y su mayor efecto inhibidor podría aportar unamejora en la inmunoterapia actual de la leucemia mieloide aguda.

58. DIFERENTES LÍNEAS CELULARES DE MELANOMA HUMA-NO PRESENTAN ALTERACIONES EN EL FENOTIPO HLATRAS SU CRECIMIENTO EN RATONES INMUNODEFICIEN-TES. Garrido C1, Berruguilla Pérez E1, Linares Dickler I1, RomeroGarcía I1, Casares C1, Stefanski J1, Algarra I2, Collado A1, GarridoTorres-Puchol F1, García Lora AM1. 1Hospital Universitario Virgen delas Nieves. 2Departamento de Ciencias de la Salud. Universidad.

Los ratones inmunodeficientes son normalmente utilizados para elcrecimiento de líneas de células tumorales humanas y para el análisis invivo de terapias antitumorales. Estudios previos de nuestro grupo mos-traron que el fenotipo HLA de la línea celular de melanoma Ando-2 cam-bio tras su crecimiento en ratones inmunodeficientes. La línea Ando-2expresa sólo un haplotipo HLA en la superficie celular, tras el crecimien-to en ratones nude se produce una pérdida total de expresión de molé-culas HLA de clase I. Los resultados son similares tras su crecimiento enratones SCID-Bei ge. En este estudio hemos analizado este fenómeno enotras líneas celulares humanas de melanoma. Se han analizado tres líne-as celulares de melanoma humano: FM93.2, E-179 y E-195. Los ratonesnude fueron inyectados con 5 x 106 células, y cuando los tumores alcan-zaron un diámetro de 10 mm, fueron extirpados y adaptados a cultivocelular. La expresión en superficie de moléculas HLA de clase I fue estu-diada mediante inmunofluorescencia indir ecta y ci tometría de flujo. Elfenotipo HLA de clase I de las líneas celulares de melanoma antes delcrecimiento en ratones fue: FM93.2 tenía una pérdida en la expresión delocus B, tanto E-195 como E-179 presentaban pérdida de un haplotipo.Tras el crecimiento en ratones nude: E-179 presenta una pérdida total deexpresión del locus B y disminuci ón en el locus A; E-195 presento unapérdida completa en la expresión en superficie de moléculas HLA declase I, siendo irrecuperable tras inducc ión con interfer ón. En el casode la línea de melanoma FM93.2 no se encontró ningún cambio. Estosresultados muestran que de las cuatro líneas celulares de melanomainyectadas en ratones nude, tres sufrieron cambios en la expresión deHLA de clase 1. Podemos así concluir que las alteraciones en la expre-sión de moléculas HLA de clase I en líneas de melanoma después delcrecimiento en ratones nude es un fenómeno frecuente y reproducible.

59. LA CITOTOXICIDAD CELULAR MEDIADA POR RITUXIMABCONTRA CELULAS B DE LLC ES POTENCIADA POR LA IL-15. Moga E1, Álvarez E1, Cantó E2, Vidal S2, Juarez C2, Sierra J1,Briones J1. 1Servicio de Hematología Clínica. 2Servicio de Inmunología.Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona.

Introducción. Las leucemias linfocíticas crónicas (LLCs) de célu-las B tratadas con rituximab muestran un porcentaje bajo de respues-

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tas, debido en parte a la baja expresión de CD20. La citotoxicidad depen-diente de anticuerpos (ADCC) es uno de los principales mecanismosde acción del rituximab. El receptor activador FcγRIIIa, ampliamenteexpresado en células NK, juega un papel importante en la ADCC quemedia el rituximab. La IL-15 actúa a diferentes niveles de la respues-ta inmune al activar y expandir las células NK. Hemos estudiado elefecto de la IL-15 potenciando la citotoxicidad celular contra células Bde LLCs que media el rituximab.

Material y métodos. La ADCC se analizó mediante estudios deliberación de 51Cr utilizando células mononucleares de sangre perifé-rica (PBMC) obtenidas a partir de un gradiente de centrifugación de“buffy coats” de 10 voluntarios sanos. Las células se cultivaron duran-te 24 horas en presencia de IL-15 (rhIL15; 10 ng/ml). Células mononu-cleares de 10 pacientes diagnosticados de LLC-B (> 90% células tumo-rales) fueron utilizadas como diana. Las células de LLC-B fueron incu-badas en presencia de rituximab (10 μg/ml) o IgG1 humana como con-trol (10 μg/ml) durante 45 minutos a temperatura ambiente. Las célu-las diana y efectoras se incubaron a diferentes ratios desde 40:3 a 10:3,durante 4 horas a 37ºC. El polimorfismo presente en el aminoácido 158del receptor activador FcγRIIIa fue analizado en las células efectorasde los donantes sanos mediante PCR alelo-específica y digestión enzi-mática. El IFN-γ se cuantificó en el sobrenadante de cultivos de célu-las efectoras activadas mediante ELISA (pg/ml).

Resultados. La citotoxicidad natural mostró un porcentaje de lisisbajo al mayor ratio (2.7% ± 1.7% lisis, media ± SEM de 10 experimen-tos independientes), alcanzando un porcentaje máximo del 10% en unexperimento. En presencia de rituximab, las PBMCs de los 10 donan-tes mostraron también bajos niveles de ADCC (13.4% ± 2.5% lisis,media ± SEM). Sin embargo, cuando las células efectoras se activabancon IL-15, el porcentaje de lisis de células B de LLCs observado aumen-tó significativamente (33.2% ± 4.9% vs. 13.4% ± 2.5%, IL15 + rituxi-mab vs. rituximab) (p<0.0001). No se observó ninguna relación entregenotipo del FcγRIIIa y porcentaje de lisis. La producción de IFN-γpor las células efectoras activadas con IL-15 fue mayor que el de célu-las no activadas (1228.4 ± 420.5 vs 217.5 ± 65.4 pg/ml, respectivamen-te; p=0.03).

Conclusión. Las PBMCs son células efectoras con baja capaci-dad de matar células B de LLCs en presencia de rituximab. Las PBMCsactivadas con IL-15 potencian la ADCC que media el rituximab con-tra estas células. Estos datos tienen implicaciones clínicas en el trata-miento de las LLC-B, ya que su utilización como adyuvante en com-binación con el rituximab podría aumentar su efecto terapéutico.

SESIÓN 5: INMUNODEFICIENCIAS: ALERGIA Y COMPLEMENTO

Moderadores: Dra . Núria Matamoros (Palma de Mallorca),Dra. Margarita López-Trascasa (Madrid)

60. TRATAMIENTO CON GAMMAGLOBULINA SUBCUTANEAEN PACIENTES PEDIATRICOS CON INMUNODEFICIENCIAVARIABLE COMÚN. Español Boren T1, Martin Nalda A2, Alva-rez A2, Figueras C2, Soler Palacin P2. 1Unidad de Inmunología. H.Vall d´Hebron. Barcelona. 2Unidad de Infecciosas e InmunodeficienciasPediátricas. H. Vall d´Hebron. Barcelona.

Antecedentes y objetivos. El tratamiento con gammaglobulinainespecífica constituye el tratamiento estándar para las inmunodefi-

ciencias primaras (IDP) con déficit de producción de anticuerpos. Des-de 1981 se utiliza la vía IV con la obtención de niveles permanentessuperiores a 600 mg/dl. La terapia por vía subcutánea (GGSC) supo-ne una eficacia similar, niveles más estables y evita valores de IgG ele-vados después de la administración y sus efectos adversos secunda-rios. La posibilidad de autoadministración domiciliaria mejora, ade-más, la calidad de vida de los pacientes y su dependencia del hospi-tal.

Métodos. Se recogen los datos demográficos, clínicos y analíti-cos de los pacientes que han recibido GGSC en nuestro centro desdenoviembre de 2006.

Resultados. Diez pacientes pediátricos (4M/6H) entre 6 y 18 años(mediana 14.5) afectos de IDCV que recibían tratamiento periódico conGGIV, con una mediana de peso de 55.5 Kg. Las dosis administradashan sido de 100-200 mg/Kg/semana. Se han mantenido cifras correc-tas de IgG plasmática (> 685 mg/dl) sin complicaciones infecciosasdurante este periodo. Los efectos secundarios locales han sido frec uen-tes pero leves y autolimitados. Ausencia de reac ciones adversas sisté-micas. La valoración por parte de los pacientes de esta nueva moda-lidad terapéutica ha sido favorable.

Conclusiones. La terapia con GGSC es una alternativa válida parapacientes pediátric os con IDP, suponiendo además una reducci ón decostes sanitarios a medio plazo. Los valores de IgG plasmática y la efi-cacia clínica son similares a la administración por vía IV.

61. INCREMENTO DE LOS NIVELES DE PGE2 EN LAS VÍASAÉREAS DE PACIENTES CON BRONQUITIS EOSINOFÍLI-CA. Sastre B1, Fernández-Nieto MM1, López E1, Gámez C1, del Ála-mo C1, Sastre J1, Quirce S2, del Pozo V1. 1Fundación Jiménez-DíazCapio y Ciberes. 2Hospital Universitario La Paz y Ciberes.

Introducción. La bronquitis eosinofílica (BE), cuyo síntoma prin-cipal es la tos crónica se caracteriza, al igual que el asma, por presen-tar eosinofilia en el esputo pero, a diferencia de los pacientes asmáti-cos, los pacientes con bronquitis eosinofílica no poseen obstrucciónvariable al flujo aéreo ni hiperreactividad de las vías aéreas, aunqueactualmente el tratamiento de ambas patologías es similar.

Objetivo. Evaluar si las características diferenciales en las víasaéreas de los pacientes de estas dos patologías podría ser causado porun disbalance en la producción de mediadores lipídicos broncocons-trictores (cisteinil-leucotrienos:LTC4) y broncoprotectores (prostaglan-dina E2:PGE2).

Métodos. Evaluamos los niveles de citocinas, mediadores proin-flamatorios y concentración de eicosanoides en muestras de esputo de13 sujetos con bronquitis eosinofílica, 13 sujetos con asma y 11 indi-viduos control. Los niveles de expresión de ARN-m de las citocinas semidieron por qRT-PCR; PGE2 Y LTC4 fueron evaluados mediante enzi-mo-inmunoensayo.

Resultados. A nivel celular, no existen diferencias estadísticamen-te significativas entre el porcentaje de eosinófilos de esputo entre lospacientes asmáticos (7,95%) y los pacientes con bronquitis eosinofíli-ca (15,29%). Los niveles de ARN-m de diversas citocinas (IL-5, 10, 13,4, 2, IFN-γ y TGF-β) fueron similares entre los pacientes de ambas pato-logías. Tampoco se encontraron diferencias en citocinas proinflamato-rias como IL-8, IL-1 y TNF-α. Sin embargo, encontramos diferenciasestadísticamente significativas entre ambas patologías al evaluar losniveles de mediadores lipídicos en el sobrenadante del esputo induci-do. Así, los niveles de PGE2 estaban incrementados en los pacientes

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con BE (838.3±612 pg/ml) con respecto a los asmáticos (7.54±2.14pg/ml) y los individuos sanos (4±1.3 pg/ml).

Conclusión. Estos datos sugieren que las diferencias funcionalesde las vías aéreas de los pacientes con BE y asma podrían deberse adiferencias en la producción de PGE2.

62. CONCENTRACIÓN DE APRIL (TNFSF13A) EN SUERO DEPACIENTES CON DÉFICIT DE IGA (DIGA). Fernández P1, Det-kova D1, Rodrigo MJ1, Español T1, Caragol I1, de Gracia J2, Alva-rez A2, Hernández González M1. 1Inmunología. 2Neumología. Hos-pital Universitari Vall d'Hebron. Barcelona.

Los individuos con DIgA (1/700), actualmente de etiología desco-nocida, son habitualmente asintomáticos pero algunos sufren un mayornúmero de infecciones y desarr ollan enfermedades autoinmunes yalérgicas. La proteína APRIL que se expresa en células presentadorasde antígeno pertenece a la familia del TNF y actúa como ligando deTACI y BCMA. Estudios en modelos murinos APRIL-/- han demos-trado un déficit de IgA. También se han descrito niveles elevados deAPRIL en enfermedad autoinmune.El objetivo de este estudio ha sidodeterminar la concentración de APRIL en pacientes con DIgA con elfin de observar si hay una posible asociación entre APRIL y la basemolecular del DIgA. Los niveles séricos de APRIL se determinaronmediante un ELISA comercial (BenderMedSystems) en tres grupos deindividuos: 65 donantes sanos (DS); 83 con IDVC y 54 con DIgA conedades medias de 43, 35 y 39 años, respectivamente. El análisis esta-dístico se realizó mediante los tests de K-S,UMann-W,Kruskal-W. Seobtuvo un límite de detección=0,78 ng/ml y una imprecisión intra einterensayo de 4,37% y 6,84%, respectivamente. Se obtuvieron diferen-cias signific ativas (P<0,05) en las medianas de concentraciones deAPRIL entre el grupo DS (2,67 ng/ml), pacientes DIgA (9,45 ng/ml) yIDVC (31,38 ng/ml). En el grupo de DIgA no se observó una asocia-ción (p>0,05) entre los fenotipos clínicos: sin infecciones (n=14; 2,7ng/ml), con infecciones leves (n=16; 8,8 ng/ml), moderadas (n=9:2,07ng/ml), graves (n=10; 3,09 ng/ml) y los niveles de APRIL. Tam-poco se observó ninguna asociación entre los niveles de APRIL en elgrupo de DIgA entre los paciente con patología autoinmune (AI) (n=16;3,9ng/ml) y sin AI (n=33; 2,8 ng/ml).En este estudio se demuestra quelos pacientes con DIgA,presentan unos valores séricos de APRIL sig-nificativamente más elevados que los hallados en la población sana ymenores a los hallados en la población con IDVC.Para conocer la etio-logía de este hallazgo es necesario realizar más estudios en este sen-tido.

63. ANÁLISIS LONGITUDINAL DE LA FUNCIÓN INMUNEDURANTE LOS TRES PRIMEROS AÑOS DE VIDA EN NEONATOS TIMECTOMIZADOS POR CARDIOPATÍAS CONGÉ-NITAS. Mancebo Sierra E1, Clemente J2, Sánchez JI3, Ruiz Contre-ras J2, de Pablos P1, Cortezón SA1, Paz Artal E1, Allende MartínezLM1. 1Servicio de Inmunología. 2Unidad De Inmunodeficiencias. 3Uni-dad de Cuidados Intensivos. Hospital Universitario 12 de Octubre.Madrid.

El propósito de este estudio es evaluar los efectos de la timecto-mía neonatal en el desarrollo del sistema inmune. Hemos selecciona-do un grupo de 23 individuos que han sido timectomizados en sus pri-meros días de vida (<30 días), durante una operación para corregir car-

diopatías congénitas. Se han evaluado varios parámetros inmunológi-cos durante los primeros tres años de vida de los pacientes: cuantifi-cación de las poblaciones y subpoblaciones linfocitarias, respuesta lin-foproliferativa por estimulación in vitro con mitógenos, cuantificaciónde inmunoglobulinas e IL-7 y determinación de TRECs (T-cell recep-tor excision circles). Tras este estudio observamos que la timectomíaneonatal produce linfopenia mantenida en el tiempo, afectando espe-cialmente a los linfocitos T CD4+. Adic ionalmente, los TRECs dismi-nuyen de forma muy signifi cativa y los niveles de IL-7 en plasmaaumentan. Además encontramos una correlación estadísticamente sig-nific ativa entre la disminución de los números absolutos de linfocitosT CD4+ y el aumento de la IL-7. En conclusión, durante el periodode estudio, los pacientes timectomizados no sufrieron mayor núme-ro de infecc iones que las padecidas por niños sanos. Sin embargo, seha podido constatar que la timectomía en neonatos provoca una dis-minución significativa de los niveles de linfocitos T y TRECs, que esconsistente con el cese de la timopoyesis. Esto podría provocar un com-promiso de la función inmune en los pacientes que necesiten un timoactivo en la edad adulta.

64. DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN UN NUEVO CASO DEENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRÓNICA LIGADA ALSEXO. Martínez-Martínez L1, González-Santesteban CA1, Benai-ges-Martínez C1, Badell I2, de la Calle-Martín O1. 1Hospital de laSanta Creu i Sant Pau. 2Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Pedia-tría).

La Enfermedad Granulomatosa Crónica (CGD) se caracteriza porinfecciones severas recurrentes debidas a un defecto en la cadena res-piratoria implicada en la destrucción de bacterias y hongos fagocita-dos por células mieloides (NADPH oxidasa). Este complejo enzimáti-co está formado por 5 subunidades, una de las cuales, denominadagp91phox, está codificada en el cromosoma X.

Presentamos el caso de un niño de 2 años, tercer hijo de padres noconsanguíneos. Existía el antecedente de un hermano muerto en el año2002 a los 15 meses de edad como consecuencia de una colitis ulcero-sa, que se complicó con una sepsis y que derivó en un síndrome hema-tofagocítico que resultó letal.

El paciente desarrolló durante el primer mes de vida una enfer-medad inflamatoria intestinal. A los 10 meses sufrió una osteomielitisaguda causada por Serratia y al año una endocarditis bacteriana. Ladeterminación de la capacidad oxidativa de los granulocitos demos-tró que los neutrófilos del paciente eran incapaces de realizar esta fun-ción, mientras que en su madre sólo un 80% lo hacían normalmente.Se estableció el diagnóstico de Enfermedad Granulomatosa Crónica.Ante la sospecha de una herencia ligada al X, se estudió la proteínagp91phox. El estudio mediante citometría de flujo mostraba una alte-ración en la expresión de dicha proteína en el paciente; mientras queen la madre había una población que la expresaba correctamente y otraque no, en un porcentaje similar al obtenido en la prueba funcional(80%/20%). El análisis de gp91phox mediante western blot corroboróla ausencia de la proteína en el paciente. En el estudio del cDNA delgen CYBB se encontró una mutación en el nucleótido 175 (C>T;Cys58Arg), que está reportado que se correlaci ona con una ausenciade la proteína. La madre era portadora de dicha alteración. El análi-sis de CYBB en el hermano fallecido a partir de una muestra de la autop-sia, reveló la presencia de la mutación Cys58Arg, estableciéndose eldiagnóstico de CGD.

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65. ANÁLISIS DE MUTACIONES EN TNFRSF13B EN PACIENTESCON INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMÚN. Gisel DelPozo Rodríguez N1, López R1, Cruz García M2, Núñez C1, Fernán-dez-Arquero M1, Ferreira A2, Gómez de la Concha E1, Fontán G2.1Servicio de Inmunología Clínica. Hospital Clínico San Carlos. 2Servi-cio de Inmunología Clínica. Hospital La Paz. Madrid.

La inmunodeficiencia variable común (IDVC) se caracteriza porhipogammaglobulinemia, infecciones bacterianas recurrentes, y algu-nos pacientes presentan enfermedades inflamatorias, autoinmunesy granulomatosas. Su etiopatogenia no está aún bien definida. Se handescrito recientemente mutaciones del gen TNFRSF13B, que codifi-ca TACI (transmembrane activator and CAML interactor), y que sepostula afectan al cambio de isotipo en linfocitos B. El objetivo denuestro estudio es analizar en pacientes españoles con IDVC la pre-sencia de tres mutaciones en TNFRSF13B y valorar su implicación enlas características clínicas de dichos pacientes. Para ello incluimos 61enfermos con IDVC (47,5% mujeres; edad media de inicio 15 años)que fueron genotipados con sondas TaqMan para las mutacionesR202H, A181E y C104R. Encontramos una prevalencia de mutacio-nes de 6,3% (4/61). Cuatro enfermos (6,3%) presentaron la mutaciónen C104R, frente al 2,5% observado en 568 controles sanos y al 2,1%observado en 282 enfermos con défici t de IgA. Un portador de dichamutación también presentó en heterozigosis la mutación en A181E.Para estos dos polimorfismos no encontramos ningún enfermo conmutación en homozigosis. No observamos individuos con mutacio-nes en R202H. Los cuatro enfermos portadores de mutaciones eranmujeres, con edad media de inic io de 25 años y edad media de diag-nóstico de 30 años. Todos presentaron patologías infecciosas (respi-ratorias y urinarias). Uno de ellos presentaba psoriasis y PTI, bron-quiectasias y VHC. Un paciente presentó linfoma tipo MALT, esple-nomegalia, hepatitis y cirrosis. El paciente portador de doble muta-ción presentaba esplenomegalia. Ninguno de los pacientes con muta-ciones tenía historia familiar de IDVC ni déficit de IgA. Dado el bajotamaño muestral proponemos la necesidad de realizar estudios mul-ticéntricos para pr ofundizar el estudio genotipo/fenotipo de estaenfermedad.

66. EVIDENCIAS DEL DETERIORO FUNCIONAL DE CÉLULAST CD8+ HIV ESPECÍFICAS EN ENFERMOS VIH-1 POSITIVOSTRATADOS CON TARGA Y DE LA EXISTENCIA DE UNAPOBLACIÓN REGULADORA CD8+HLA-G+. Lozano Reina JM,García Jurado G, Frías M, Luque Moruno J, González FernándezR, Ki Ndelán Jaquotot KM, Rivero A, Peña Martínez J. HospitalUniversitario Reina Sofía.

En la infección por VIH-1, una respuesta CD8 específica adecua-da ha sido correlacionada con un mejor control de la infección en enfer-mos lentos progresores (LTNP). Además, en modelos con simios, laretirada de las células CD8+ del torrente sanguíneo elevó de manerasignificativa la carga viral en plasma. Se han relatado defectos en cuan-to a la función citotóxica y secretora de las células CD8+ de enfermoscon peor evolución de la enfermedad. Paralelamente, varios autoresdemuestran que algunas proteínas víricas serían c apaces de reducirla expresión de moléculas HLA-I, fundamentales para el reconocimien-to de las células infectadas por los linfocitos CD8. A pesar de que lascausas por las cuales los linfocitos CD8 positivos permanecen daña-dos en la infección VIH-1 han sido extensamente estudiadas, la influen-

cia de los tratamientos TARGA sobre la distribución y función de lascélulas CD8 HIV-específi cas carec e de datos suficientes. Con el obje-tivo de evaluar las posibles influencias de los tratamientos antirretro-virales (TARGA) sobre los linfocitos T CD8 VIH-específicos, nuestrogrupo ha analizado la distribución de las subpoblaciones CD8+ VIH-específicos y su perfil funcional medido como capacidad de expresiónde INF-γ, TNF-α y perfor ina tanto en enfermos VIH-1+tratados como no tratados. Nuestros resultados muestran como, a pesarde existir igual distribución de células CD8+ VIH-específicas en cuan-to a la expresión de CCR7 y CD45RA, la capacidad secretora de IFN-γ y perforina en enfermos tratados fue significativamente menorque en los pacientes que nunca recibieron TARGA. Este hecho demues-tra un posible deterioro de la funcionalidad CD8 VIH-específic os enpacientes tratados, evidenciada por un perfil menos efector (CD45RA+)de las células secretoras. Además, nuestros estudios en la distribuciónde subtipos CD8 positivos, evidencian la expansión de una supobla-ción HLA-G+ reguladora en enfermos VIH-1 positivos y que fue másevidente en pacientes bajo TARGA. Esta nueva subpoblaciónCD8+HLA-G+ ha sido ya descrita por otros autores en procesos infla-matorios y podría tener una significación fundamental en la patoge-nia de la infección por el VIH-1.

67. ESTUDIO CUANTITATIVO DE LA EXPRESIÓN DE VARIAN-TES DE SPLICING DE C1 INHIBIDOR EN PACIENTES DEANGIOEDEMA HEREDITARIO. Mena de la Cruz MR, López-Lera A, Garrido S, Fontan G, López-Trascasa M. Hospital Univer-sitario La Paz. Madrid.

El C1 inhibidor es la esterasa que controla la activación de C1 enel inicio de la vía clásica del sistema del complemento y es un impor-tante regulador de los sistemas de contacto, la generación de cininas,la coagulación y la fibrinolisis. Las alteraciones moleculares en el gende C1 inhibidor (ID:X54486, C1-Inh) producen la enfermedad autosó-mica dominante denominada Angioedema Hereditario (AEH), c arac-terizada por ni veles cuantitativa o cualitativamente inferiores al 50%(AEH Tipo I o AEH Tipo II, respectivamente) de C1-Inh.

El objetivo del presente trabajo es comprender el patrón de expre-sión de mRNA de C1-Inh total en sangre periférica en pacientes deAEH. El estudio se realizó por RT-PCR a tiempo real en una serie de34 pacientes y 13 c ontroles sanos de la población española. El valormedio de expresión de mRNA de C1-Inh en los pacientes AEH tipo I(12.60%) y AEH Tipo II (20.22%) resultó significativamente inferior alde los controles. En estudios previos, hemos observado que el patrónde expresión de mRNA total de C1-Inh en sangre periférica presenta,de forma constitutiva, dos tránscritos diferentes: completo y sin exón3. Se realizó un estudio por RT-PCR a tiempo real que permitió cuan-tificar la expresión de los dos tránscritos y el ratio entre ambos en 31pacientes (23 AEH Tipo I y 8 AEH Tipo II) y 17 controles sanos. El aná-lisis de los ratios revela tres grupos diferenciados correspondientes apacientes AEH Tipo I (0.52), pacientes AEH Tipo II (1.90) y grupo con-trol (1.12).

Los resultados obtenidos en la expresión de mRNA total de C1-Inh en sangre periférica sugieren una transinhibición del alelo sanopor parte del alelo mutado. El estudio de la ratio de los tránscritos reve-la correlación entre este cociente y los niveles de proteína en cada gru-po de pacientes (AEH Tipo I y AEH Tipo II), lo que sugiere una regu-lación de la expresión a nivel de la traducción o la transcripción porparte de la proteína o el mRNA alterados.

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68. LINFOCITOS INTRAEPITELIALES (LIES) EN EL DIAGNÓS-TICO DE ALERGIAS ALIMENTARIAS FRENTE A ENFERME-DAD CELÍACA. De Andrés A, Mirete S, Marín N, Camarero C,Roy G. Hospital Ramón y Cajal de Madrid.

La enteropatía por Alergia alimentaria puede cursar con una clí-nica inespecífica, de difícil filiación que a veces dificulta un diagnós-tico diferencial; de hecho, no es infrecuente encontrar pacientes conalergias alimentarias en los que se realiza una biopsia duodenal con lasospecha de enteropatía celíaca.

Está descrito que la enteropatía celíaca (EC) tiene una distribuciónfenotípica específica de las sub-poblaciones linfoides del epitelio intes-tinal proximal (Linfograma LIEs)1.

Objetivo. Validar la especificidad del Linfograma LIEs para eldiagnóstico de la EC, en el grupo de los pacientes con alergias alimen-tarias.

Metodología. Se han analizado los LIEs por citometría de flujo, enun total de 43 biopsias de duodeno de pacientes con alergias alimen-tarias, demostradas clínica (mejoría con la supresión del alergeno) y/oanalíticamente (IgE específica positiva frente al alergeno/s). Los pacien-tes se dividieron en 2 grupos, tomando como referencia los hallazgosanatomopatológicos: 14 con lesiones histológicas sugerentes de ente-ropatía celíaca (A = atrofia) y 29 con biopsia sin alteraciones (NA =no atrofia).

Resultados:

Conclusiones. En la muestra analizada, todos los pacientes conatrofia de la mucosa intestinal han sido diagnosticados de EC, conun fenotipo de LIEs característico; en los pacientes sin atrofia, no semodifican las poblaciones que nos afectan para el diagnóstico fenotí-pico de la EC.

Atrofia (n = 14) No atrofia (n = 29)

LIEs TCRγδ i-NK LIEs TCRγδ i-NKMedia ± ES Media ± ES Media ± ES Media ± ES Media ± ES Media ± ES

21.7 ± 1.5 29.5 ± 4 2.3 ± 0.6 7.8 ± 0.8 10 ± 1.5 26.4 ± 3.2

1 Camarero et al. Intraepithelial lymphocytes and Celiac disease: permanentchanges in CD3-/CD7+ and T cell receptor gamma-delta subsets studied byflow cytometry. Acta Paediatr 2000; 89: 285-290.

69. DEGENERACIÓN NEOPLÁSICA EN UN PACIENTE CON SÍN-DROME DEL LINFOCITO DESNUDO TIPO I DEBIDO A UNANUEVA MUTACIÓN EN TAP-2. González C1, Martínez L1, Agus-tí M1, España A2, de la Calle O1. 1Servicio Inmunología, Hospital SantPau. 2Departamento de Dermatología e Inmunología, Universidad Clí-nica de Navarra.

Se describe el caso de una mujer de 40 años que padece ulceras enla pierna derecha desde la infancia. La lesión fue expandiéndose has-ta cubrir toda la superfici e de la pierna y el pie. La biopsia reveló unainflamación granulomatosa necrotizante con afectación de la dermisy la hipodermis (necrobiosis lipoidic a). Desde la adolescencia la pacien-te comenzó a tener episodios de infecciones bacterianas recurrentesdel tracto respiratorio, que finalmente evolucionaron a bronquiecta-sias. El cuadro respiratorio y las lesiones crónicas granulomatosas dela piel llevaron a la sospecha de BLS I. El estudio de la expresión de lasmoléculas HLA de clase I mostró una disminución muy marcada. Enel tipaje molecular se observó que la paciente era homocigota paratodos los loci HLA. El análisis de los genes TAP mostró que la secuen-cia del cDNA de TAP1 era correcta y coincidía con el alelo más frecuen-te (TAP 1A). La región codificante de TAP2 correspondía a la variante2A, excepto por el cambio de un nucleótido en el exón 3. Se confirmóla presencia de la mutación mediante la secuenciación del exón 3 deTAP2 a partir de DNA genómico de la paciente y sus familiares. Lapaciente tiene un cambio en homocigosis de C a T en el nucleótido 628,no descrito anteriormente, que introduce un codón stop prematuro.Su madre y sus hijas eran heterocigotas. La lesión ulcerada en la pier-na de la paciente evolucionó hacia un carcinoma epidermoide de ele-vada agresividad que produjo metástasis en hígado, pulmón y hue-sos, y finalmente a la muerte de la paciente.

70. CAMBIO DE FENOTIPO DE SCID A SÍNDROME DE OMENNTRAS UN TRASPLANTE HEMATOPOYÉTICO EN UNPACIENTE CON MUTACIONES EN RAG1. González C1, Mar-tínez L1, Benaiges C1, Badell I2, Nogués N3, de la Calle O1. 1Servi-cio Inmunología, Hospital Sant Pau. 2Servicio de Pediatría, Hospital SantPau. 3Banco de Sangre y Tejidos.

El síndrome de Omenn (OS) es una forma de inmunodeficienciasevera combinada (SCID) que se caracteriza por eritrodermia, hepato-esplenomegalia, linfoadenopatías, eosinofilia e hiper IgE, además delas infecciones graves propias del SCID. Se observa una ausencia delinfoci tos B y un número normal o incluso elevado de linfocitos T oli-goclonales, y en la mayoría de los casos se ha asociado a mutacioneshipomórficas en RAG. Se presenta el caso de un niño de origen marro-quí, hijo de padres consanguíneos, que debuta con eritrodermia e infec-ciones severas a partir de los dos meses de edad. Los resultados delaboratorio muestran una falta total de linfocitos B, y una función defectuosa de linfocitos T (anérgicos). El inmunofenotipo LT+/LB- es com-patible con OS, aunque algunas manifestaciones no aparecen en elpaciente (eosinofilia, hiper IgE). El análisis molecular de los genes Ragpermitió identificar una deleción en homocigosis de la timidina 631del gen Rag1 (del631T), que comporta la aparición de un codón stopprematuro por desplazamiento del patrón de lectura. El uso de uncodón alternativo de inicio de la traducción permitiría explicar unaactividad residual de las proteínas RAG y la presencia de linfocitosT. Los padres del paciente son portadores de la deleción, así como 3 delos 5 hermanos. Se realizó un trasplante de médula ósea (TMO) de uno

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Porcentaje con respecto al total de LIEs

Porcentaje conrespecto al totalde enterocitos

de sus hermanos (compatible en 9/10 antígenos HLA) con una evolu-ción inicial muy favorable (rápida recuperación de las cifras de leuco-citos y una implantación total de linfocitos del donante). Un año des-pués del TMO comenzaron a observarse una serie de cambios progre-sivos: reaparici ón de los linfocitos B del receptor, aumento en las cifrasde IgE, y disminución pr ogresiva del número absoluto de linfocitosB. El paciente presentó una sepsis (hemocultivo + para Bacillus sp) ycomenzó a padecer un cuadro de OS. Rápidamente el cuadro se com-plicó con fallo multiorgánico y el paciente finalmente falleció.

71. CANÁLISIS DE LOS RECEPTORES NK EN PACIENTES VIH-1+ CON INTERRUPCIÓN PROGRAMADA DEL TARGA. Loza-no Reina JM1, Frías Casas M1, García Jurado G1, Luque MorunoJ1, González Fernández R1, Soriano N2, Leal M2, Peña Martínez J1.1Hospital Universitario Reina Sofía. 2Hospital Universitario Virgen delRocío. Sevilla.

Desde hace ya más de una década, la única forma efectiva de con-trolar la replicación viral en la infección por el VIH-1, ha sido el tra-tamiento anti-retroviral de gran actividad (TARGA). Sin embargo, dichotratamiento presenta consabidas limitaciones, como la imposibilidadde controlar los reservorios del virus, la aparición de resistenci as amuchos de los fármacos que lo componen y la presentación de toxi-cidades cuando el tratamiento es mantenido durante largos periodos.Para reducir estos efectos clínicos se ha propuesto la interrupci ónestructurada del tratamiento (IET). Además, algunos autores han apun-tado a la posibilidad de que estas interrupciones puedan aumentarla respuesta celular inmune específica frente al virus. Sin embargo,existe controversia sobre la eficacia del IET en el manejo prolongadode pacientes en fase crónica y si el IET mejora la calidad de vida dedichos pacientes. Numerosos trabajos señalan que una interrupcióndel tratamiento conlleva un pago inmunológico, principalmente decélulas CD8+, que se ve compensado por la reducción de fenómenosde resistencia y toxicidad. La respuesta CD8 específica ha sido la másestudiada en las cohortes de interrupción, pero pocos o ningún datoexisten sobre la repercusión, de esta práctica clínica, sobre las célulasNK, a pesar de la importancia de estas células en controlar la replica-ción viral. Nuestro objetivo ha sido el estudio del perfil fenotípico yfuncional de las subpoblaciones NK en una cohorte de pacientes incor-porados en un programa de interrupción programada del TARGA. Loscriterios de inclusión de los pacientes (n=11) fueron los siguientes:CV<50c/mm3, CD4+>500c/mm3 al menos durante los últimos 12meses y un recuento nadir de CD4+>250c/mm3. El estudio se ha lle-vado a cabo mediante citometría de flujo, usando un FACScalibur (Bec-ton Dic kinson) y el análisis de las muestras se realizó mediante el soft-ware Cell Quest Pro (Becton Dickinson). También se medieron los nive-les de secreción de TGF-β y IFN-γ mediante ELISA. Nuestros resulta-dos indican un descenso de la frecuencia de NK en todos los enfermosque iniciaron la interrupción del tratamiento, descenso que se mantu-vo 6 meses después del reinicio del mismo. Interesantemente, este des-censo fue mas acentuado entre la población NK más citotóxica(CD56dim). En cuanto al perfil funcional, los niveles de ILT-2 y NKp46se vieron incrementados durante la fase de interrupción en todas lassubpoblaciones NK. No se observaron cambios reseñables con respec-to a los otros receptores reguladores de la citotoxicidad estudiados,KIR2DL1, KIR2DL4, KIR2DL2, KIR2DS4, NKG2A o NKG2C. Sin embar-go se observaron correlaciones positivas y negativas entre la carga viraly los niveles de expresión de algunos de estos NKRs. Por último obser-

vamos aumentos significativos de TGF-β después de la IET y que semantuvo elevado cuando el TARGA fue reintroducido un año después.Por el contrario, los niveles de IFN-γ estuvieron descendidos durantela fase de interrupción. En conclusión, la IET descendió los nivelesde NK, principalmente la subpoblación más citotóxica, y aunque se vemodificado ligeramente el perfil funcional de las células NK, la IET noparece que modifique signific ativamente el perfil funci onal de estascélulas. Aún es necesario un mayor número de estudios para conocerel verdadero impacto de la interrupción del tratamiento (IET) sobre larespuesta innata de los pacientes infectados por VIH-1 que ayude aentender si una suspensión de la terapia contra VIH por cortos perio-dos de tiempo mejora la capacidad del sistema inmunológico a con-trolar la infección.

72. INFLUENCIA DE HLA-DRB1 Y -DQB1 EN SUSCEPTIBILIDADA ASPERGILOSIS BRONCOPULMONAR EN PACIENTESCON FIBROSIS QUISTICA. Salgado G1, Sánchez-Solis M2, Cam-pillo JA1, Botella C1, Mondejar P2, López M1, Alemany JM1, Gar-cia-Alonso A1, Alvarez-López MR1, Muro M1. 1Servicio Inmunolo-gía. 2Servicio de Pediatría. Hospital Universitario Virgen Arrixaca.

La Aspergilosis Bronco-Pulmonar Alérgica (ABPA) es una hiper-sensibilidad pulmonar que afecta a pacientes con fibrosis quístic a (FQ)y pacientes asmáticos (AS). Algunos alelos HLA-DRB1 han sido asocia-dos con una cierta susceptibilidad a ABPA mientras que la asociacióncon alelos HLA-DQ1 no está claramente establecida. Nuestro propósi-to fue estudiar la asociación de HLA clase II con ABPA-FQ y determi-nar su papel en la susceptibilidad o protección frente a la enfermedad.En este estudio se incluyeron pacientes con ABPA-FQ, AS y controles.Los DNA fueron obtenidos automáticamente con el extractor de DNAMaxwell 16 (Promega, WI). Los genotipajes en HLA-DRB1 y DQ1 fue-ron realizados por Luminex mediante el método PCR-SSO (One Lam-ba CA). La alta resolución se realizó mediante PCR-SSP. El análisis esta-dístico se realizó con el programa SSPS. Los alelos HLA-DRB1*1501 y–DRB1*1104 mostraron una mayor frecuencia en pacientes con ABPA-FQ respecto al grupo control, corroborando los datos publicados porCauchan et al. Por otra parte, el análisis de los haplotipos revela quecasi todos los pacientes con ABPA-FQ que carecen de DRB1*1501 yDRB1*1104 llevan los alelos DRB1*04 y/o DRB1*0701. En la región DQB1,la frecuencia de los alelos HLA-DQB1*0602, -DQB1*0301, -DQB1*0202y -DQB1*0302 fue incrementanda estos pacientes ABPA-FQ, mientrasque la frecuencia de HLA-DQB1*0201 se encontró disminuida. En con-clusión, estos datos corroboran los estudios previos que demuestranque existe una correlación entre los alelos DRB1*1501, DRB1*1104,DRB1*04 y DRB1*0701 y la susceptibilidad a ABPA-FQ y el alelo HLA-DQB1*0201 podría ser un alelo de resistencia.

73. DEFICIENTE ACTIVACIÓN Y PROLIFERACIÓN DE LINFO-CITOS B EN INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUN(IVC) A TRAVÉS DE RECEPTORES “TOLL LIKE” (TLR). Esco-bar D, Pons J, Alorda J, Martínez N, Matamoros N, Ferrer J. 1Ser-vicio Inmunología. Hospital Son Dureta.

Introducción. La IVC es una inmunodeficiencia humoral caracte-rizada por infecciones sinopulmonares recurrentes causadas por bac-terias encapsuladas (S. pneumoniae y H. influenzae). Se han descrito algu-nas mutaciones genéticas en pacientes con IVC, pero en la mayoría

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sigue sin identific arse el defecto molecular subyacente que conduce aun bloqueo en la maduración de los linfocitos B a células plasmáticasy de memoria.

Los TLR desempeñan un papel clave activación y/o maduraciónde algunas células del sistema inmune. En humanos la expresión deTLR-9 está restringida a células B y células dendríticas

plasmocitoides. La activación de TLR-9 con ADN bacteriano inter-viene en la producción de anticuerpos por los linfocitos B.

Objetivos. Evaluar la respuesta de los linfocitos B de un grupo depacientes con IVC estimulándolos con ligandos de TLR9 y extractosbacterianos de S. pneumoniae y H. influenzae.

Material y métodos. En 14 pacientes con IVC y 14 controles sanosse estimularon linfocitos de sangre periférica con ODN (0,6 ug/ml),extractos de S. pneumoniae o H. influenzae en presencia o ausencia deanti-IgM (5 ug/ml). Se evaluaron mediante citometría de flujo, en lapoblación B, la expresión de CD86 en membrana y el índice de proli-feración previo marcaje con carboxifluoresceína a los 3 y 4 días, res-pectivamente.

Resultados. En los linfocitos B de los pacientes con IVC la expre-sión de CD86 fue significativamente inferior a la de los controles cuan-do las células se estimularon con ODN, extractos de S. pneumoniae yH. influenzae asociados a anti-IgM. La proliferación de los linfocitosB de los pacientes con IVC fue también inferior a la de los controlesal estimular con extractos de S. pneumoniae y H. influenzae asociadosa anti-IgM.

Conclusión. Los linfocitos B de los pacientes con IVC no respon-den óptimamente a la estimulación a través de TLR lo que podría expli-car la falta de maduración, generación de células B de memoria y pro-ducción de anticuerpos de los mismos.

74. LA FUNCIÓN DE RECEPTORES TOLL-LIKE (TLR) ESTÁ CON-SERVADA EN MONOCITOS DE PACIENTES CON INMUNO-DEFICIENCIA VARIABLE COMÚN (IVC). Escobar D, Pons J,Iglesias J, Matamoros N, Ferrer J. 1Servicio Inmunología. HospitalSon Dureta.

Introducción. La IVC se caracteriza por hipogammaglobulinemiae infecciones respiratorias de repetición, causadas fundamentalmentepor S. pneumoniae y H. influenzae. Se han descrito mutaciones en ICOS,TACI y CD19 en algunos pacientes pero el defecto molecular subya-cente es desconocido. Publicaciones recientes apuntan a deficienciasen la maduración y función de las células dendríticas obtenidas “invitro” a partir de monocitos de sangre periférica en los pacientes conIVC.

Objetivos. Evaluar la funcionalidad los TLR del sistema inmu-nitario innato en monocitos de sangre periférica de pacientes conIVC.

Metodología. En 14 pacientes con IVC y 14 controles, se estudió,mediante citometría de flujo, la expresión basal de TLR2 y TLR4 y lainducción de moléculas coestimuladoras (CD80, CD86, DR y CD40)en monocitos de sangre periférica, así como la producción de interleu-cinas (ILs) (TNFa, IL1b, IL6, IL8 e IL10) mediante CBA o ELISA. Parala estimulación se utilizaron ligandos de TLR (SLTA, Zymosan y LPS)y extractos de S. pneumoniae y H. influenzae.

Resultados. La expresión basal de TLR2, pero no de TLR4, fuemayor en monocitos de pacientes con IVC que en los controles. La esti-mulación con ligandos de TLR2 (SLTA) y TLR4 (LPS) indujo mayorproducción de TNFa en pacientes con IVC que en controles. No obser-

vamos diferencias en la expresión de CD80, CD86, DR, CD40 ni en laproducción de otras ILs estudiadas con ninguno de los estímulos uti-lizados.

Conclusión. La mayor producción de TNFa frente a SLTA podríaestar directamente relacionada con la mayor expresión de TLR2 en losmonocitos de los pacientes. La expresión de TLR4 es igual en pacien-tes y controles; alteraciones en CD14 y/o MD2 (coreceptores de TLR4)podrían explicar el aumento de producción de TNFa en respuesta aLPS. En respuesta a la estimulación bacteriana, los monocitos de pacien-tes y controles producen ILs y expresan moléculas coestimuladoras deforma equivalente.

75. ANÁLISIS DE MECANISMOS DIFERENCIALES DE SENSI-BILIZACIÓN Y TOLERANCIA EN LA RESPUESTA AL POLENDE OLIVO. Chacártegui M1, Florido F2, Quiralte J3, LLanes E1,Delgado J4, Miranda A5, del Álamo C1, Palomino P1, Lahoz C1, Cár-daba B1. 1Fundación Jiménez Díaz-CAPIO-CIBERES. 2Departamentode Alergia, Hospital Universitario San Cecilio, Granada. 3Unidad deAlergia, Complejo Hospitalario de Jaén, Jaén. 4Servicio de Alergia. Poli-clínico, Sevilla. 5Servicio de Alergia, Hospital Civil, Málaga.

Objetivos. Buscar mecanismos diferenciales (tanto a nivel celularcomo humoral) entre tolerancia natural e induci da frente al polen delolivo, analizando sujetos sensibilizados y no sensibilizados, en condiciones de baja y alta exposición ambiental.

Metodología. Población: 148 sujetos, 84 del periodo de poliniza-ción (máxima exposición) y 64 fuera del mismo (mínimos niveles depolen), distribuidos en 5 grupos: I. Tolerantes (No alérgicos, n=32),II. Asintomáticos ó subclínicos (n=17), III. Atópicos (no al olivo, n=35),IV. Alérgicos al olivo (n=37) y V. Alérgicos al olivo tratados (n=27). Trasexploración clínica, consentimiento informado y pruebas cutáneas, seextrajeron 3 alícuotas de sangre para suero, plasma y PBMCs (median-te gradiente de densidad). En el suero se determinaron los niveles deanticuerpos IgE total e IgE, IgG4 e IgA específicos al polen del olivo,por CAP (Phadia-Pharmacia) y con los PBMCs, la proliferación celu-lar frente al extracto de olivo, así cómo a péptidos de Ole e 1 (antíge-no mayoritario) mediante incorporación de TH3 (5 días de cultivo) ylos niveles de citocinas solubles (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF-a, IFN-g eIL-13, mediante citometría de flujo y TGF-b por ELISA) tras 24 horasde estimulación.

Resultados. 1. Respuesta humoral: El Grupo II (subclínicos) pre-senta los mayores niveles de IgE total pero muy bajos de IgE especí-fica, y el Grupo V (alérgicos tratados) los mayores niveles de IgG4 eIgA específic a. Los mayores niveles de IgE específica los presentarontanto el Grupo IV (alérgicos a olivo) como el Grupo V. Los niveles deIgE e IgG4 específica fueron mayores en el periodo de menor exposi-ción, excepto en los subclínicos. 2. Respuesta celular: Observamos lamayor respuesta proliferativa frente al extracto de olivo en el GrupoIV y el péptido inmunodominante de Ole e 1 (10+12+13) sólo indujoproliferación en este Grupo. La determinación de citocinas solubles noaportó un perfil discriminatorio entre grupos, aunque sí diferenciasreseñables.

Conclusiones. En general, se observa una mayor respuesta (humo-ral y celular) en el periodo de menor exposición antigénica (quizá porser sujetos de áreas con una dosis extremadamente alta de antígeno)y, aunque aún no tenemos un fenotipo diferencial entre respuesta-norespuesta, sí hay diferencias destacables que sugieren la implicaciónde mecanismos reguladores.

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76. LINFOADENOPATÍA NO-MALIGNA E INFECCIÓN PERSIS-TENTE POR EBV. Martín JL1, Diéguez MA1, Suárez Leiva P2,Melón S2, Oña M2, Miñones L3, Ramos E3, Soler P4, Español T5, Tri-cas L1. 1Inmunonología. Hospital Universitario Central de Asturias.2Microbiología. Hospital Universitario Central de Asturias. 3Pediatría.Hospital Universitario Central de Asturias. 4Pediatría. Hospital Valle deHebrón. Barcelona. 5Inmunología. Hospital Valle de Hebrón. Barcelona.

El paciente es un niño de 6 años. Su madre presenta un déficit selec-tivo de IgA. Tiene una hermana sana. No hay consanguinidad fami-liar ni otros antecedentes familiares de inmunodeficiencia. Desde los2 años de edad presenta adenopatías recurrentes cada 3- 6 meses late-rocervicales y submaxilares con fiebre, leucocitosis y neutrofi lia. A laedad de 4 años, se abscesifica la adenopatía cervical que espontánea-mente drena. En el scanner de cuerpo entero no había esplenomegaliani adenopatías internas. La función hepática es normal. A la edad de5 años las adenopatías se generalizan y extienden a región cervical,axilar,inguinal y poplítea. No presenta adenopatias internas, pero apa-rece esplenomegalia. La biopsia mostraba cambios reactivos y excluíaun proceso linfoproliferativo. El estudio virológico muestra anticuer-pos IgM e IgG anti-CMV y elevados títulos de IgM anti-EBV-VCA quehan permanecido durante toda la evolución del cuadro clínico, títulosmás bajos de IgG anti-EBV-VCA, anticuerpos anti- EBV-EA negati-vos y anticuerpos moderadamente positivos anti-EBV-EBNA. Intermi-tentes picos de viremias EBV-DNA y CMV-DNA en sangre periférica que también permanecen durante toda la evolución. El paciente noha presentado otras infecciones excepto la persistente activación delEBV y esporádicas infecc iones intercurr entes por CMV. El estudioinmunológico muestra: disgammaglobulinemia (IgG = 5.5 g/L , IgA <0.07 g/L e IgM = 3.97 g/L, que se ha incrementado hasta 10.5 g/L enlos 2 últimos años. Persistente disminución de linfocitos B = 3% y dela ratio CD4/CD8 c on incremento de linfocitos T CD8 que expresanHLA-DR, SAP y un marcado inc remento de la expresión de perfori-na. Los linfocitos NK están moderadamente incrementados en sangreperiférica y la actividad NK frente a células K-562 es normal. El estu-dio genético no encontró mutaciones en el gen SH2D1A ni en el genXIAP. Tampoco presenta características inmunológicas de ALPS, el por-centaje de linfocitos TCRab+CD3+CD4-CD8- y la expresión de CD95es normal y no tiene alteraciones autoinmunes. El paciente fue diag-nosticado de infecc ión persistente por EBV y síndrome XLP-like. Harecibido tratamiento con Gammaglobulina IV, antivirales y Rituximab.El tratamiento con Rituximab produjo una mejoría clínica y analíticacompleta. Desaparecieron las adenopatías y los parámetros inmuno-lógicos se normalizaron: Ig M= 0.78 g/L, Linfocitos T CD8 no expre-saban HLA-DR, el título de anticuerpos IgM anti –EBV-_VCA dismi-nuyó a valores muy bajos. Pero 9 meses después de recibir la últimadosis de Rituximab reaparece el cuadro clínico inicial y las mismas alte-raciones inmunoanalíticas.

77. DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTI-FACTOR H ENSINDROME HEMOLITICO UREMICO ATIPICO. Soto Cár-denas C1, Alonso MM1, Abarrategui C2, Rodríguez de CórdobaS3, Sánchez-Corral P2, López Trascasa M1. 1Unidad de Inmunología.2Unidad de Investigación. Hospital La Paz. 3Centro de InvestigacionesBiológicas. CSIC.

El factor H es una proteína plasmática que actúa como cofactorpara el factor I, una enzima inactivadora de C3b; también inhibe la for-

mación y acelera la disociación de la C3 convertasa de la vía alternati-va del complemento. Recientemente se ha descrito la existencia de anti-cuerpos anti-factor H en pacientes con diagnóstico de Síndrome Hemo-lítico Urémico atípico (SHUa).

Se diseñó un ELISA para valorar la presencia de anticuerposanti-factor H, para lo cual se sembró la placa con factor H purifica-do. Se añadieron diluciones decrecientes de muestras de suero depacientes y de controles, junto con una curva de calibración, deján-dose incubar toda la noche a 4º C. Como anticuerpo secundario seutilizó suero de cabra anti-IgG humana marcada con peroxidasa.La placa se reveló utilizando ABTS como sustrato de la peroxida-sa.

La presencia de anticuerpos anti-factor H se analizó en los sue-ros de 113 pacientes con diagnóstico de Síndrome Urémico Hemolí-tico atípico, de los cuales 62 eran adultos y 67 niños; se detectaronanticuerpos anti-factor H en 4 casos, todos niños. En uno de los casosse realizó seguimiento de los niveles de anticuerpos durante el tra-tamiento con plasmaféresis. En tres de los casos se encontró deficien-cia completa de las proteínas relacionadas con factor H CFHR1 yCFHR3.

La determinación y cuantificación de anticuerpos anti-factor Hpermite identificar un subgrupo de pacientes con SHUa de origenautoinmune. Este ensayo es una herramienta de screening que permi-te la pronta identificación de estos pacientes y el inicio rápido deltratamiento mediante plasmaféresis, así como valorar la evolución yla respuesta al tratamiento inmunosupresor en los enfermos.

78. ASOCIACIÓN DE PERFILES FENOTÍPICOS DE LINFOCITOST CON COMPLICACIONES CLÍNICAS EN PACIENTES CONINMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMÚN (IDVC). LanioAmador N, Sarmiento Marchese E, Gallego López A, Fernández-Cruz E, Carbone Campoverde J. HGU Gregorio Marañón. Madrid.

Introducción. En la IDVC se han descrito perfiles celulares anor-males de linfocitos B y T. Sin embargo, continúan sin esclarecerse lasbases moleculares de la patología y los defectos funcionales asociadosa un mayor riesgo de complicaciones clínicas. Su conocimiento permi-tiría una corr ecta clasificac ión y mejor manejo del síndrome.

Objetivo. Identificación de nuevos marcadores celulares asocia-dos a complicaciones frecuentes de la IDVC y su posible asociacióncon anteriores clasificaciones propuestas (Piqueras 2003[a]).

Métodos. Estudio transversal de 21 pacientes con IDVC(edad=47±17, 12M/9H) y 21 controles sanos (CS, edad=46±11,7M/14H). Se analizaron subpoblaciones celulares en sangre total porcitometría de flujo (FACSCalibur) usando varias combinaciones delos marcadores CD3, CD4, CD8, CD19, CD56, CD16, CD27, IgM, IgD,CD45RA, CCR7, CD38, HLA-DR y CD25. Estudio realizado antes deinfusión con GGIV y sin complicación infecciosa o autoinmune acti-va reciente.

Resultados. En comparación con CS se observó ↑%CD19/CD27-, CD4/RA-, CD8/CCR7-, CD4 o CD8/DR+CD38+;↓% CD19/CD27+IgM-IgD-, CD4/CD25+ y CD4/CD25high.

Grupos MB0-MB1-MB2 similar a otras series(a). Al estratificarlas variables según media±2SD de CS, se demostró asociación sig-nificativa entre enfermedad autoinmune y ↑%CD8/CD38+(Prueba Fisher, p=0,031), clínica infecciosa recurrente y ↑%CD8/DR+ (p=0,05), e hiperplasia linfoide y ↑ %CD4/RA-(p=0,026).

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Conclusiones. El perfil de maduración/activación de linfocitos Tpodría ser de utilidad para clasificar pacientes con IDVC. Su asocia-ción c on distintas complicaciones clínicas es similar a la descrita porotros grupos en base al perfil madurativo de linfocitos B, con la ven-taja técnica añadida de contar para el análisis con poblaciones celula-res cuantitativamente superiores (CD4 y CD8).

La combinación de ambos perfiles (con confirmación longitudi-nal) podría añadir precisión a los sistemas de clasificación propuestosen la actualidad.

79. CÉLULAS REGULADORAS CD4+CD25+ ESPECIFICAS DEALERGENO EN PACIENTES ALÉRGICOS A ARTEMISIAVULGARIS. Martínez Sánchez MV1, Salgado Cecilia MG1, LópezÁlvarez MR2, Muro Amador M2, Campillo Marquina JA2, GarcíaAlonso AM2, Álvarez López MR2, Pagán Alemán J3, MinguelaPuras A2. 1Hospital Universitario Virgen Arrixaca. Servicio de Inmu-nología. 2Hospital U. Virgen Arrixaca. Servicio de Inmunología. Centrode Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Hepáticas y Diges-tivas (CIBERehd). 3Hospital Universitario Virgen Arrixaca. Servicio deAlergia.

Introducción. Las células reguladoras naturales CD4+CD25+ (nTr)juegan un papel importante en el control de las diferentes facetas delsistema inmunitario, incluidas las respuestas de hipersensibilidad tipo-I. Numerosos trabajo han puesto de manifiesto que es posible detec-tar células nTr alergeno específicas en pacientes sensibilizados a dife-rentes sustancias. Por otro lado, nuestro grupo ha descrito que existeuna clara asociación del genotipo DRB1*01-DQB1*0501 con el asmaalérgico a Artemisia vulgaris.

Objetivo y métodos. El presente trabajo analiza si existen dife-rencias de cantidad, c alidad o funcionalidad de células nTr entrepacientes alérgicos y controles sanos, a la vez que estudia, si la pre-sencia del genotipo DRB1*01-DQB1*0501 puede afectar la función dedichas células. Para ello, se han fenotipado por citometría de multi-flourescencia las nTr en 6 pacientes alérgicos a Artemisia vulgaris y6 controles sanos. Con métodos inmunomagnéticos (Dynal y Milten-yi) se han purificado células nTr y células efectoras CD25-/low, yhemos ensayado su capacidad para suprimir respuestas alergenoespecíficas in vitro.

Resultados. Las cifras (en porcentajes y en nº de células/μl) de nTrCD4+CD25highCD127dim no muestran diferencias entre los pacien-tes alergicos y los controles sanos. Así mismo, atendiendo a la expre-sión de las moléculas CD29, CD49d, CD62L, CXCR3, CCR4, CCR5 yCRTh2 tampoco se han podido describir diferenc ias fenotípicas apreciables. Por otro lado, la capacidad para suprimir la respuesta prolife-rativa a extractos de Artemisia vulgaris de las células nTr es similar enlos pacientes y controles (55% de supresión a un ratio 1:1). Sin embar-go, este efecto es mucho mejor apreciable en pacientes y controlesDRB1*01-DQB1*0501, que son los que muestran las mayores respues-tas frente al alergeno, a diferencia de los que tienen otro genotipo HLAque apenas responden al extracto antigénico.

Conclusión. En principio no se detectan diferencias en el núme-ro, el fenotipo, o la capacidad de suprimir respuestas específicas de lascélulas nTr entre personas alérgicas a Artemisia vulgaris y los contro-les sanos. En la actualidad se está estudiando si, al menos, existen dife-rencias en la capacidad de las nTr para suprimir la secreción de fac-tores solubles por las células alergeno específicas (los datos se presen-tarán en el poster).

80. REMISION DE LARGA DURACION DE LINFOMA NOHODGKIN EN INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUNTRAS USO DE RITUXIMAB-CHOP. Carbone J1, Pérez-Fernán-dez R2, Sarmiento E1, Angus B3, Rodríguez-Molina J1, Lanio N1,Flores E2. 1Servicio de Inmunología. Hospital Gregorio Marañon. 2Ser-vicio de Oncología. Hospital Gregorio Marañón. Madrid. 3Newcastleupon Tyne NHS Foundation Trust, Newcastle.

La quimioterapia con R-CHOP (rituximab, ciclofosfamida, vin-cristina, adriamicina y prednisona) es un tratamiento aceptado parapacientes con linfoma B difuso de células grandes (LBDCG). Sin embar-go, pueden surgir dudas a la hora de indicar CHOP para tratar un lin-foma si el paciente tiene una deficiencia primaria de anticuerpos einfección recurrente. Presentamos un caso de IDVC complicada conLBDCG tratado con R-CHOP. Datos clínicos: Varón de 20 años. Dia-betes insulino-dependiente a los 13 años. Un episodio de sepsis porSAMS con amputación de miembro inferior. 3 neumonías entre los 17y 19 años. En el último episodio de neumonía se documentó pan-hipo-gammaglobulinemia (IgG 149, IgA 9, IgM <4 mg/dl); déficit de for-mación de anticuerpos; células B CD19+ 9% (252/mm3). Se establecióel diagnóstico de IDVC e inició GGIV a dosis sustitutiva. El curso clí-nico se complicó 1 año después con la aparición de un LBDCG, esta-dío III-B con afectación masiva ganglionar periférica, mediastínica yretroperitoneal. El diagnóstico se confirmó mediante IH de una ade-nopatía periférica (CD20+ CD79a+ BCL6+ CD10+ BCL2+; ciclina D1-CD23- CD5-; tasa de proliferación celular ki67: 80%; hibridación insitu para EBV–). El paciente fue sometido a 8 ciclos de tratamiento conrituximab (375 mg/m2 IV), ciclofosfamida (750 mg/m2 IV), adriami-cina (50 mg/m2 IV), vincristina (1.4 mg/m2 IV) y prednisona/metil-prednisolona. Antes de cada ciclo de tratamiento se administró GGIVa dosis de 400 mg/kg con la finalidad de mantener niveles de IgG porencima de 400 mg/dl. No se presentaron complicaciones infecciosas.Después del 6º ciclo de tratamiento se evidenció una disminución sig-nificativa de la hiperplasia linfoide. Tres años después de la últimadosis de R-CHOP no había evidencia de actividad del linfoma. Elinmunofenotipo de SP 3a post-rituximab es: CD19+/CD27+I gD-IgM-: 9.8%; CD4+/RA-: 74%; CD8+/CCR7-: 90.6%; CD4+/CD38+DR+:10,4%.

Conclusión. En el caso presentado de IDVC complicada con lin-foma, el tratamiento con R-CHOP fue eficaz y bien tolerado.

81. REGISTRO ESPAÑOL DE INMUNODEFICIENCIAS PRIMA-RIAS (REDIP) ONLINE 2005-2008. Escobar Oblitas D, Martínez-Pomar N, Milà J, Cambra A, Matamoros N. Servicio de Inmunolo-gía. Hospital Son Dureta.

Introducción. Con objeto de facilitar el acceso y análisis, el Regis-tro español de inmunodeficiencias primarias inicia, en el año 2005,su versión online (http://web.hsd.es/redip)

Objetivo. Presentar los datos epidemiológicos de las inmunode-ficiencias primarias (I DPs) registrados, dar a c onocer el REDIP onli-ne y fomentar la participación de los facultativos.

Metodología. La base de datos ha sido desarrollada con unacceso limitado a la información básica para el público y un acce-so exclusivo a la base de datos para los usuarios previamente regis-trados.

Resultados. El número de casos registrados hasta marzo de 2008es 721. El porcentaje de casos registrados por comunidades autónomas

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es: 46% Madrid, 24% Andalucía, 11% Islas Baleares, 7% Cataluña, 3%Extremadura, 3% Murcia, 3% Aragón y 2% Comunidad Valenciana. Ladistribución por grandes grupos de diagnóstico: deficiencias predo-minantemente de anticuerpos 73%, deficiencias del sistema del com-plemento 9%, síndromes de inmunodeficiencia bien definidos 9%,defectos congénitos del número o función del sistema fagocitario 3%,inmunodeficiencias combinadas 2%, enfermedades con disregulacióninmunológica 2% y otras inmunodeficienc ias primarias 2%. Las IDPscon mayor número de casos por diagnóstico son: deficienc ia selecti-va de IgA (300), inmunodeficiencia variable común (140) y la deficien-cia de C1 inhibidor (54).

Conclusiones. Con el REDIP online se ha conseguido mayor difu-sión del conocimiento de las IDPs en nuestro país, ofrec iendo unainformación básica para el público e información específica sobre demo-grafía, características clínicas y tratamientos de las IDPs. El REDIP onli-ne agiliza y favorece la participación de los facultativos lo que contri-buye a la consolidación del Registro Español de InmunodeficienciasPrimarias.

82. SÍNDROME HEMOFAGOCÍTICO FAMILIAR SECUNDARIOA MUTACIÓN EN EL GEN DE PERFORINA-1 (PRF-1). CARAC-TERÍSTICAS CLÍNICAS Y MOLECULARES. Martínez PomarN1, Ferreira A2, García MC2, Escobar D1, Romo N3, Pons J1, Igle-sias J1, Salinas JA4, López Botet M3, Fontan G2, Matamoros N1.1Servicio de Inmunología. Hospital Son Dureta. 2Servicio de Inmuno-logía. Hospital La Paz. 3Unitat d'Immunologia. Universitat PompeuFabra. 4Servicio de Pediatría. Hospital Son Dureta.

La LHH es un desorden raro, autosómico recesivo, caracterizadopor proliferación generalizada, no maligna, de histiocitos con marca-da actividad hemofagocítica. Las características clínicas incluyenfiebre, hepatomegalia, citopenias y, menos frecuentemente, alteracio-nes del SNC. Los primeros episodios transcurren mayoritariamentedurante la infancia con una evolución fatal si no se realiza tratamien-to. El 40% de los casos son debidos a mutaciones en el gen de la per-forina-1 (PRF1) localizado en la región 10q22 del cromosoma 1. La per-forina-1, de 70-75 kD, es la principal proteína citolítica localizada enlos gránulos de los linfocitos T citotóxicos y natural killer (NK). Sepresenta el caso de un varón de 2 meses de edad, nacido de padresconsanguíneos, que ingresó por fiebre de 1 semana de evolución ehipoactividad. No antecedentes familiares. La exploración física reve-la, esplenomegalia y hepatomegalia. En la analítica inicial destacabaplaquetopenia, anemia, alteraciones hepáticas (aumento de GPT, GGTy bilirrubina), alteraciones de la coagulación e incremento de los nive-les de LDH y triglicéridos. El aspirado de médula ósea (MO) pre-sentó hemofagocitosis. Tratamiento: corticoides, ciclosporina, G-CSF,profilaxis antibiótica, gammaglobulina endovenosa y medidas desoporte. Actualmente se encuentra en lista de espera par a TMO. Elestudio molecular del gen PRF1 muestra la presencia, en homocigo-sis, de la mutación p.G149S, previamente descrita. Esta mutación nose ha observado en 50 controles sanos. Mediante citometría de flujo,no se observa expresión de perforina en células NK y linfocitos TCD8+CD16+ del paciente y su madre, siendo la expresión normalen el padre. El análisis molecular de los padres revela que ambos sonheterocigotos para la mutación. Está en curso la determinación de laactividad citotóxica de las células NK del paciente y progenitores, asícomo, la detección de perforina, mediante técnica de western blot, encélulas de la madre y del paciente.

83. PSEUDO-BEHCET ASOCIADO A LINFOPENIA SEVERA,AUTOINMUNIDAD E INFECCIONES. Botella Martínez C1,Campillo JA1, Poza-Cisneros G2, Salgado-Cecilia G1, Muro M1,García-Calatayud MC1, Martínez-García P1, Minguela-Puras A1,Alvarez-López MR1, García-Alonso AM1. 1Servicio de Inmunología.2Servicio De Medicina Interna. Hospital Universitario Virgen de la Arri-xaca.

Paciente de 53 años HLA B-51 negativa, HIV negativa y sin ante-cedentes de ETS, que desde 2003 presenta aftosis urogenital recidivan-te. En 1992 se le diagnosticó epilepsia del lóbulo temporal relaciona-da con esclerosis mesial del lóbulo temporal. Actualmente sigue trata-miento anticomicial con buen control de sus crisis y sin objetivarsecambios leucocitarios. En 11/2005 presento en brazo izquierdo pares-tesias, fenómeno de Raynaud, edema y sudoración de mano izquier-da que desapareció al retirar reloj con aro de níquel. En 06/2005, trasuna tuberculosis miliar diagnosticada 3 meses antes, nos fue remiti-da para estudio inmunológico. Recibió tratamiento tuberculostático1 año con buena evolución clínica.

El estudio inmunológico reveló un déficit de IgG4 (1 mg/dl), ydéficit parc ial de IgG2 (98 mg/dl), IgA (56 mg/dl) e IgM (50 mg/dl),anticuerpos antinucleares 1/320 homogéneo, anti-nucleolares 1/80,anti-células parietales gástricas 1/640 con anti Factor intrínseco nega-tivo. Por otra parte, se observó una importante linfopenia 559linfocitos/uL con 70% de células T, 39,6 T CD4+, 31% T CD8+, 2.3 célu-las B, 18% células NK. Normal expresión de CD45RA, CD45RO, CD25o DR y algo aumentada la población T TCRalfa-beta+CD4-CD8-. Encultivos tras estimular linfocitos con ConA, anti-CD3 y anti-CD3+anti-CD28 la respuesta proliferativa fue normal pero estaba disminuida conPHA e IL-2 (30%)

Permanentemente se detectan en suero títulos altos de anticuer-pos citotóxicos frente a los antígenos HLA I de su pareja detectadospor FlowPra y por cultivos de microcitotoxicidad “in vitro”. Éstos noson citotóxicos los linfocitos propios y no han desaparecido tras trata-miento de IGIV a altas dosis. Ha tenido 3 embarazos, 1 aborto y no hareci bido transfusiones.

Dado que la linfopenia se va haciendo más severa (02/2008, 332linfocitos/uL) profundizaremos en el estudio de la patofisiología deestos procesos con el fin de poder tratarlos más adecuadamente paraevitar consecuencias indeseables.

84. UN CASO DE AGAMMAGLOBULINEMIA LIGADA A XCOMPLICADO CON UNA AMILOIDOIS SISTÉMICA TIPOAA DE EVOLUCION FATAL. Lucas Aroca D1, Campillo JA1, Gar-cía-Rodriguez MC2, García-Están J3, Rodrigo-Agudo JL4, Lopez-Solbes R5, Lopez-Hernández R1, Bernal-Ramos A1, Alvarez-LópezMR1, García-Alonso AM1. 1Servicio de I nmunología. Hospital Uni-versitario Virgen de la Arrixaca. 2Servicio de I nmunología. HospitalUniversitario La Paz, Madrid. 3Servicio de Medici na Interna. Hospi-tal Universitario Virgen de la Arrixaca. 4Servicio de Medicina Digesti-va Hospital Universitario Viregn de la Arrixaca. 5Servicio De Nefrolo-gía Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca.

Paciente nacido en 1980 que a los 2 años fue diagnosticado pornosotros de Agammaglobulinemia con una IgG 25 mg/dl, IgM 10mg/dl e IgA ausente y antecedentes clínicos de bronconeumonía bila-teral masiva, sepsis por Pseudomonas, infección urinaria E. Coli., oti-tis y bronquitis recurrentes. Diagnosticado en 2000 de Agammaglobu-

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linemia ligada al sexo (XLA) con una mutación nonsense en el exón 12del gen de la BTK (mutación c.1215C>A, cambio de aminoácidop.Y361X, dominio SH2). En 1997 intervenido de bocio amiloide des-cartándose amiloidosis sistémica. Hasta 2004 asistió periódicamenteInmunología del Hospital La Paz para control de tratamiento de IgGendovenosa, antibióticos y fisioterapia respiratoria. En el 2006 ingre-só en nuestro hospital por diarrea prolongada, dolor abdominal, malab-sorción y malnutrición protéico-calórica por amiloidosis tipo AA osecundaria que afectaba a riñón e intestino delgado observándose úlce-ras con depósitos amiloides, aislándose en heces Clostridium diffici-le y Giardi a lamblia. En 2007 entró en hemodiálisis. Nos fue enviadoen Noviembre de 2007 y observamos que había mantenido bajas tasasde IgG sérica (386 mg/dl 08/2006, 414 mg/dl 07/2005) y ajustamostratamiento. En ese momento presentó 483 mg/dl IgG sérica (no en elvalle), ligera leucocitosis neutrofílica. Las poblaciones de células T yNK eran normales y apenas había linfocitos B (< 0,7%). El cocienteCD4/CD8 era 1.39, la población T CD3+8+57+ estaba aumentada yparte de la población T estaba activada. La oxidación de los PMN esta-ba algo reducida. La Amiloidosis AA es una complicación rara en laXLA y no se conoce muy bien su patogénesis pero, sin descartar posi-bles factores genéticos que influyan en su desarrollo, es evidente quelas infecc iones recurr entes son el principal factor etiológico en la mayo-ría de los casos por lo que es necesario una sistemática evaluacióninmunológica y el control adecuado del tratamiento en los pacientesinmunodeficientes para prevenir infecciones.

85. ERRADICACION DE INFECCIONES FUNGICAS RESISTEN-TES EN INMUNOSUPRIMIDOS: TERAPIA COADYUVANTECON INMUNOGLOBULINAS INTRAVENOSAS. SarmientoE1, Acero A2, Balado P2, Pelaez T3, Fernández-Yañez J4, Fernández-Cruz E1, Carbone J1. 1Servicio de Inmunología. 2Servicio de Oftalmolo-gía. 3Servicio de Microbiología. 4Servicio de Cardiología. Hospital Gre-gorio Marañon. Madrid.

Presentamos dos casos de pacientes trasplantados que desarrollaninfecciones fúngicas severas.

Caso 1. Aspergilosis invasiva renal y prostática (suelen requerirresección quirúrgica). Varón de 61 años trasplantado cardíaco. Inmu-nosupresión: daclizumab, micofenolato mofetil, tacrolimus y predni-sona. Por discordancia CMV (D+/R-) recibió ganciclovir y GG hipe-rinmune anti-CMV (12 sem). Infecciones: 14d post-trasplante: bacte-riemia por pseudomona aeruginosa e infección respiratoria por HIB ySAMR. 6m: infección CMV. 9m: TAC: nódulos hipodensos en prósta-ta y riñones, PAF: aspergillus fumigatus confirmados en cultivo y biop-sia. Persiste sintomático pese a voriconazol. Por hipogammaglobuli-nemia y disminución de ac específicos se añade GGIV sustitutiva (300mg/Kg/21d). Ac específicos al mes post-tranplante y tras GGIV: IgG(454 y 800-1200 mg/dl); anti-HBs (16 y 212 mU/ml); anti-polisacáridode neumococo (2.5 y 48.8 mg/dl); anti-tétanos (0.2 y 4.9 mg/dl); anti-CMV (597 y 7996, respectivamente).

Resultado. Desaparición de todas las lesiones en TAC sin reque-rir cirugía.

Caso 2. Micosis corneal unilateral por fusarium solanii multirre-sistente. Mujer de 27 años. Tras 6m de tratamiento con distintos anti-microbianos acude c on perforaci ón corneal requiriendo queratoplas-tía. Por rechazo recibe ciclosporina, corticoides tópicos y orales ade-más de voriconazol, pero ocurre invasión fúngica agresiva del injerto.Se realiza 2º queratoplastía y recibe tratamiento tópico con distintos

antifúngicos sistémicos, anfotericina B y ciclosporina tópicos, sin cor-ticoides locales y sistémicos. Por persistencia de riesgo de disemina-ción, actividad de rechazo y detección de IgG3 baja (14.7 mg/dl) sedecide añadir GGIV a alta dosis (niveles de IgG: 1660-3100 mg/dldurante 3 meses).

Resultado. Se observa negativización de cultivo. 1 año tras la que-ratoplastía no hay reci diva infecciosa. Existe evidencia experimentaldel rol de la inmunidad humoral específica contra antígenos fúngi cos.

Conclusión. El tratamiento con GGIV actuaría c omo coadyuvan-te en la erradicación de infecc iones fúngicas invasivas y/o resistentesen pacientes inmunosuprimidos con déficits de anticuerpos.

86. ESTUDIO DE SÍNDROME AUTOINMUNE LINFOPROLIFE-RATIVO (SALP) POR CITOMETRIA DE FLUJO. Maruri N1,Luque I1, Bilbao A2, García JM2, Riñón M1, Prada A1, Arrieta A1.1Servicio de Pediatría. 2Unidad de Oncología infantil e Inmunoalergia.Hospital de Cruces. Vizcaya.

Objetivo. La presentación de un caso diagnosticado de S. Autoin-mune Linfoproliferativo (OMIM 601859). Inmunodeficiencia Primariaen la que existe una alteración en la regulación sistema inmune. La baseinmunológica de este trastorno es un defecto en la apoptosis de los lin-focitos que da lugar a una acumulación de los mismos en el sistemainmune. Existe riesgo evolutivo de desarrollo de enfermedades autoin-munes y linfomas. Los 3 criterios diagnósticos requeridos son: 1) Clíni-ca de linfadenopatia crónica no maligna ± esplenomegalia de más de 6meses de evolución; 2) Porcentaje de linfocitos T α/β + doble negati-vos (DN) superior al 1%; 3) Defecto en la apoptosis celular.

Pacientes y métodos. Paciente de 13 años en seguimiento por esple-nomegalia con antecedentes de hipertrofia de adenopatías cervicalese hipergammaglobulinemia. El padre y la hermana han sido diag-nosticados de esplenomegalia. Se determina el fenotipo linfocitario enel paciente, ambos padres y hermana. Se realiza estudio funcional deapoptosis en el paciente. Los linfocitos doble negativos (CD3+α/β+CD4-CD8-) se cuantifican con anticuerpos monoclonales por citometría deflujo (CF). Para el estudio funcional de la apoptosis se cultivan los lin-focitos en presencia de IL-2 y de fitohemaglutinina a dosis subóptimas,la apoptosis se induce con anti-CD95 y se realiza la cuantificación deanexina por CF. El defecto de apoptosis se analiza con el test de Kol-mogoroff-Smirmoff.

Resultados

Paciente Hermana Madre Padre

Esplenomegalia Ecografía Exploración Ausente ExploraciónLT CD4-CD8- (%) 16% 6% 1% 6%Apoptosis Defecto Pendiente Pendiente Pendiente

Conclusionesa) El niño cumple criterios de SALP. Es probable que estén afectos la

hermana y el padre.b) La presencia de esplenomegalia y/o adenopatías persistentes no

malignas justifica descartar esta entidad sobre todo si existen ante-cedentes familiares.

c) El diagnóstico facilita el seguimiento de los pacientes por existirun alto riesgo de desarrollar linfomas y enfermedades autoinmu-nes.

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87. FAMILIA CON MUTACIÓN C104R EN TACI, HIPOGAMMA-GLOBULINEMIA DE DIAGNÓSTICO TARDÍO Y AUTOIN-MUNIDAD. Bernal MJ, Martínez Pomar N, Martínez de Saave-dra M, Nieto A, Matamoros N, Brieva JA, Sampalo A. Servicio deInmunología. H. Puerta del Mar, Cádiz.

Recientemente se ha realizado el diagnóstico de Inmunodeficien-cia variable comun (CVID) en dos hermanas (H1 y H2) de 53 y 67 años.Ambas acudieron a consulta por neumonías (4 y 3 episodios, respec-tivamente) y otras infecciones recurrentes, no graves, de vías respira-torias superiores (aprox.10 años de evolución). Las dos debutaron aldiagnóstico con hipogammaglobulinemia moderada (IgG. 399 y 488mg/dl, respectivamente), número normal de linfocitos B, fenotipo MB2y fenómenos autoinmunes asociados. En el caso índice (H1) se detec-tó la mutación C104R en homocigosis en el gen que codifica la pro-teina TACI.

En el cribado familiar se detectó un sobrino de 30 años con hipo-gammaglobulinemia moderada y un sobrino-nieto (18 meses) con gas-troenteritis recurrentes y baja concentración de IgA. La incidenc iade fenómenos autoinmunes fue asimismo notable: eritema nodosorecurrente en H1, ANA+ y anticuerpos anticélulas parietales+ a títuloelevado en H2, madre y dos hermanos varones de las pacientes condiabetes tipo I de curso severo y una hija de H1 con anticuerpos anti-peroxidasa tiroidea. Se mostraran los resultados del estudio de la muta-ción en TACI de toda la familia.

Estos casos confirman la heterogeneidad de presentación clínicade los defectos de TACI, con cuadros clínicos prácticamente indiferen-ciables del cajón de sastre de hipogammaglobulinemias primarias deetiología no conocida que comunmente denominamos inmunodefi-ciencia variable comun. En esta familia llama la atención el fenotipoatenuado y tardío de inmunodeficiencia y la acumulación de eventosautoinmunes.

SESIÓN 6: CÉLULAS B Y NK

Moderadores: Dra. África González (Vigo),Dr. Miguel López-Botet (Barcelona)

88. EVOLUCIÓN DE LAS FRECUENCIAS DE LOS GENES KIRDE CÉLULAS “NATURAL KILLER” EN POBLACIONES MUN-DIALES. Middleton D1,2, Meenagh A1, Mosocoso J3, Arnaiz-Ville-na A3. 1Northern Ireland Regional Histocompatibility and Immunoge-netics Laboratory, City Hospital, Belfast, Northern Ireland. 2School ofBiological Sci ences, University of Ulster, Coleraine, Northern Ireland.3Dept. Inmunología, Universidad Complutense, Centro de Transfusiónde la Comunidad de Madrid, Madrid.

En los últimos años se han estudiado intensivamente los genes delas células NK (Natural Killer) KIR y su interacc ión con los ligandosHLA. Es un fenómeno sin explicación funcional la presencia o ausen-cia de algunos de estos genes y, en algunos casos, también la frecuen-cia de ellos y de sus alelos en distintas poblaciones. El objetivo de nues-tro trabajo es ver los factores que han influido en la evolución de lasfrecuencias de genes y alelos KIR en determinadas poblaciones, quepueden ayudar a comprender la función global y evolución del siste-ma de estos receptores NK KIR. En este estudio, se ha analizado la pre-sencia o ausencia y las frecuencias alélicas de genes KIR en individuos

de siete poblaciones representativas de cada continente del mundo:Cubanos,Brasileños, Omanís, Chinos de Hong Kong, Chinos de Sin-gapur, Xhosa de Sur África y San de Sur Áfr ica y se han comparadocon poblaciones Caucasoides, Negroides y Mongoloides del resto delmundo (total de 5.734 cromosomas). Muchos patrones de sondas deoligonucleótidos específicas de secuencia muestran alelos nuevos, cadauno propio de una población determinada, lo que pone de manifiestola divergencia de las frecuencias de estos genes y sus alelos en las dis-tintas poblaciones. Se obtuvieron las frecuencias de los genes KIR enlas siete poblaciones mencionadas y a partir de las distancias genéti-cas se construyeron dendrogramas Neighbour-Joining y se elaboraronanálisis de correspondencia. Así mismo, se comparó la presencia oausencia de 17 loci de KIR de este estudio con la presencia o ausenciade esos mismos loci en 56 poblaciones de todo el mundo. Tras los aná-lisis realizados, se observa cómo los individuos aparecen agrupadosde acuerdo con un gradiente geográfi co. Se discuten la relación de laevolución de frecuencias KIR con las frecuencias de los genes HLA ylos mecanismos y factores evolutivos que actúan sobre los genes KIR.

89. EFECTOS DEL TNF/LT Y CÉLULAS B EN EL PROCESO DEDIFERENCIACIÓN DE FDC. Muñoz Fernández R, Tirado Gon-zález I, Blanco Muñoz O, de la Mata C, Leno Durán E, Ortiz FerrónG, Abadía Molina AC, García Olivares E. Centro de InvestigaciónBiomédica.

Introducción. Las células foliculares dendríticas (follicular den-dritic cells, FDC) son un tipo celular que se localiza en los folículos lin-foides de los órganos linfoides secundarios. Se encuentran en íntimocontacto con las células B formando clusters. El desarrollo de las FDCdepende del correcto funcionamiento de los folículos, hecho que depen-de directamente de las interacciones célula B- FDC, así como de lasseñales mediadas por TNF/LT en las FDC.

Objetivos. Estudio de la expresión de antígenos relacionados conla diferenciación de FDC c omo consecuencia del tratamiento de FDCcon LT/TNF(10ng/ml), así como del co-c ultivo con células B (Raji) demanera individual durante 72h.

Metodología. FDC fueron obtenidas de amígdalas, y cultivadas.En su fase exponencial de crecimiento se trataron con LT/TNF o fue-ron cocultivadas con Raji. Mediante citometría de flujo se estudió laexpresión de los marcadores STRO-1 y CD34 (marcador de inmadu-rez) y CD14, ICAM-1 Y VCAM-1(marcadores de madurez).

Resultados y conclusión. Tanto en las células tratadas con LT/TNFcomo con las cocultivadas con Raji, se produjo un descenso de CD34y STRO-1(marcador estromal), así como un aumento ICAM-1, VCAM-1 y CD14. Estos resultados parecen indicar que la diferenciación de lasFDC y por tanto que puedan llevar a cabo de forma correcta su fun-ción, depende de la presencia de las células de las células B y de lascitoquinas LT/TNF presentes en los folículos linfoides.

90. ESTUDIO DE LA ESPECIFICIDAD FUNCIONAL DE AID.Pérez-Durán P, Ramiro AR. Centro de Nacional de InvestigacionesOncológicas.

La hipermutación somática (SHM, del inglés Somatic HyperMu-tation) y el cambio de isotipo (CSR, del inglés Class Switch Recombi-nation) son los mecanismos moleculares que dan lugar a la diversi-ficación secundaria de anticuerpos en centros germinales. La enzi-

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ma AID (del inglés Activation Induced Deaminase) inicia la SHM yel CSR a través de la deaminación de citosinas en el locus de inmuno-globulinas, que desencadena la fijación de una mutación (SHM) o lageneración de una rotura de DNA seguida de un proceso de recom-binación (CSR). Se ha demostrado que las lesiones iniciadas por AIDpueden generar translocaciones cromosómicas y que su actividad pue-de introducir mutaciones en diversos genes, además de los de inmu-noglobulinas. Aunque la regulación de AID parece por tanto esencialpara evitar la generación de lesiones linfomagénicas, los mecanismosque determinan su especificidad no están definidos. El único reque-rimiento imprescindible conocido hasta la fecha para que un gen seasusceptible de ser mutado por AID es que esté transcripcionalmenteactivo.

Para tratar de esclarecer la especificidad funcional de AID hemosestablecido un sistema experimental de “promoter traping”. Utiliza-mos una construcción con un casete reportero sin promotor con el quepodremos “cazar” genes transcripcionalmente activos y monitorizarlas mutaciones inducidas por AID. Esta aproximación nos permitirá1) relacionar la actividad transcripcional de un gen con su suscepti-bilidad de ser diana de AID, 2) determinar el sitio de inserción de laconstrucci ón dentro del genoma y 3) analizar las secuencias ci s regu-ladoras de los loci susceptibles.

91. DOCK10, NUEVA PROTEÍNA INDUCIBLE POR IL4. Yelo E1,Gimeno L1, Bernardo MV1, Alcaraz MJ1, Majado MJ2, Álvarez MR1,Parrado A1. 1Servicio de Inmunología. 2Servicio de Hematología. Hos-pital Universitario Virgen de la Arrixaca.

Introducción. La IL4 es una citoquina que interviene en el controlde la proliferación, expresión génica y apoptosis. Además, la IL4 pro-longa la supervivencia de células LLC-B cultivadas in vitro. Estudian-do el efecto en la expresión génica de la IL4 en muestras de pacientescon LLC-B, identificamos una nueva proteína inducible por esta cito-quina: Dock10. Dock10 pertenece a una nueva familia de proteínascaracterizadas por ser activadoras de las Rho-GTPasas. Dock10 pre-senta dos homólogos estructurales en humanos: Dock9 y Dock11.

Objetivos. Estudio de la expresión tisular y subcelular de Dock10y su inducción por I L4 en muestras sanguíneas normales y patológi-cas.

Metodología. La distribución tisular de Dock10 se estudió por RT-PCR y Norhern-Blotting. El análisis de la expresión subcelular de laproteína se determinó mediante Western-Blotting e inmunofluorescen-cia. Se construyeron plásmidos con expresión inducible de Dock10 yse obtuvieron clones estables de la línea celular K562. Para el análisisde la apoptosis en muestras celulares de pacientes en cultivo con y sinI L4, se empleó la citometría de flujo.

Resultados. Se encontró que Dock10 presentaba altos niveles deexpresión en linfocitos T y B. Dock11 presenta una distribución tisularsimilar, mientras que Dock9 no presenta una expresión significativaen linfocitos B. Dock10 se localizaba tanto en citoplasma como en elnúcleo.La expresión de Dock10 se ve inducida ante la presencia de IL4,sin embargo este efecto no ocurre en ninguno de sus homólogos. Lainducción de la expresión de Dock10 por IL4 se observa en linfocitosB normales y LLC-B, no produciéndose en los linfocitos T ni en otrostipos de leucemias. La adición de IL4 reduce el porcentaje de apopto-sis en LLC-B, sin embargo, esto no ocurre en LLA-B.

Conclusiones. DOCK10 es un nuevo factor con alta expresión enlinfocitos que se induce por IL-4 específicamente en células B. El estu-

dio de la función de DOCK10 podría ayudar a entender las activida-des biológicas de la IL4.

92. CARACTERIZACION INMUNOFENOTIPICA Y FUNCIONALDE LOS LINFOCITOS NK EN UN PACIENTE CON LINFOCI-TOSIS CRONICA DE CELULAS LGL/NK, PORTADOR DELPOLIMORFISMO C77G. Gil Herrera J1, Diaz Alderete A1, Modre-go Ruiz J1, Vazquez-Piñeiro T2, Polo Casado A3, Fernández-CruzE1. 1Servicio de Inmunología. 2Servicio de Estomatología. 3Servicio deMedicina Interna. Hospital General Universitario "Gregorio Marañón".Madrid.

Introducción. La linfocitosis crónica de células NK (LCCNK) secaracteriza por el aumento de las células NK circulantes durante másde 6 meses y curso clínico indolente. La sustitución de C por G en laposición 77 del exón 4 del gen CD45 (C77G) causa procesamiento anor-mal del ARNm y un patrón variante de coexpresión de las isoformasCD45RA y CD45RO sobre la superficie de las células T de memoriacirculantes. La prevalencia de C77G en nuestra población sana es deun 1,1%. La descripción de tres portadores de C77G entre pacientesdiagnosticados de linfohistiocitosis hemofagocítica (HLH), podría indi-car la contribución de este polimorfismo a la patogenia de los defec-tos de citotoxicidad.

Paciente y Métodos. Varón de 63 años, asintomático con anteceden-tes de diabetes no insulinodependiente, focos infecciosos dentarios y unepisodio de herpes zoster, estudiado en el Servicio de Inmunologíapor linfocitosis documentada de dos años de evolución. Bioquímica,serología viral y TAC toracoabdominal sin hallazgos. Niveles séricos deinmunoglobulinas, complemento y autoanticuerpos en rango normal.Análisis del inmunofenotipo linfocitario por citometría de flujo de cua-tro colores (Becton&Dickinson). Amplificación del DNA genómico yanálisis del exon 4 del gen CD45 mediante secuenciación automática.Ensayo de citotoxicidad NK por liberación de Cr51 de células K562.

Resultados. El paciente presentaba un aumento del número delinfocitos NK circulantes (6.7 x 103 células/ml) con un perfil inmu-nofenotípico homogéneo: CD2+CD7+CD8+/-CD16+/-CD122+ D158a+perforina+granzimaB+. El patrón de coexpresión variante de las iso-formas de CD45 se correspondía con el cambio C77G. Las células cir-culantes del paciente mostraron actividad citotóxica NK conservadarespecto a los controles sanos.

Conclusiones y Discusión. Se trata de una LCCNK que requiereseguimiento clínico e inmunológico. Se aportan por primera vez datossobre la actividad NK en un individuo portador del polimorfismoC77G. Aunque en este paciente las alteraciones del splicing inducidaspor C77G no alteran la actividad citotóxica de las células NK, la expre-sión anormal de las isoformas de CD45 puede haber influido sobreotros aspectos del funcionamiento del sistema inmune contribuyendoal desarrollo y/o mantenimiento de la linfocitosis c rónica LGL/NK.

93. ALTERACIONES FUNCIONALES EN LAS CELULAS iNKT ENEL NVEJECIMIENTO. Gayoso I1, Peralbo E1, Pita ML1, Tara-zona R2, Solana R1. 1Departamento de Inmunología. Hospital Univer-sitario Reina Sofía. Universidad de Córdoba. 2Departamento de Fisiolo-gía (Área Inmunología) Universidad de Extremadura. Cáceres.

Introducción. Está ampliamente descrito que la respuesta inmu-ne se encuentra afectada con la edad, proceso denominado inmunose-

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nescencia, que afecta a las diferentes componentes de la respuesta inmu-ne. Recientes estudios realizados en nuestro laboratorio han incluidoa las células “invariantes NKT” (iNKT) dentro de las poblaciones afec-tadas por el proceso de inmunosenescencia. Las células iNKT en huma-nos se caracterizan por la co-expresión del receptor NK CD161 y porla expresión de un receptor T (TCR) formado por una cadena Vα24JαQy una cadena Vβ11 que reconoce antígenos glucolopídicos presenta-dos por un MHC-I no clásico denominado CD1d. El gluolípido α-Galac-tosil Cerámida (α-GalCer) esta identificado como un potente inductorde la activación de las células iNKT vía TCR. De acuerdo con la expre-sión de los marcadores CD4 y CD8 las células iNKT se pueden dividiren tres subpoblaciones: iNKT-CD8+, iNKT-CD4+ e iNKT-Dobles Nega-tivas. Tras la activación de su TCR, las células iNKT proliferan liberan-do citoquinas tipo Th1 y Th2. Las células iNKT actúan durante la res-puesta innata del sistema inmune y está demostrada su implicaciónen la eliminación de tumores y en enfermedades autoinmunes en dife-rentes modelos experimentales.

Objetivos. Estudio ex vivo del fenotipo y función, secreción decitoquinas y proliferación, de células iNKT en sangre periférica proce-dente de donantes jóvenes y ancianos sanos.

Metodología. Se obtuvieron las PBMCs de donantes jóvenes (18-35 años) y ancianos (70-95 años) sanos. La identificación de las iNKTse analizó mediante fluorescencia multiparamétrica. Se utilizaron AcMoanti-Vα24, anti-Vβ11, CD8, CD4, y otros marcadores de diferenciación,así como anticuerpos anti-IFN-γ e IL-4. Para analizar la secreción decitoquinas las PBMCs se incubaron con PMA, Ionomicina y Brefeldi-na durante 6 horas La capacidad proliferativa se determinó median-te el marcaje con CFSE. Las células marcadas con CFSE se sembraronen medio de cultivo durante 5 días con IL-2 y α-GalCer.

Resultados y Conclusiones. Transcurridos 5 días de cultivo invitro de las células iNKT-CFSE observamos una mayor proliferaciónen donantes jóvenes con respecto a los ancianos. Cuando observamosla proliferación de las diferentes subpoblaciones de iNKT vimos comolas células CD4-NKT son las que principalmente proliferan en jóvenesaunque también hay proliferanción de las otras dos subpoblacionespero menor. Cuando obserbamos la proliferación en ancianos vemoscomo la subpoblación CD4-NKT es la única que presenta cierta pro-liferación aunque menor que en jóvenes.

Cuando analizamos la secreción de citoquinas por las células NKTitras estimularla con KRN vemos una disminución de la secreción deIFN-γ en células NKTi de ancianos mientras que la IL-4 no muestradiferencias significativas. Cuando estudiamos la secreción en cada unade las subpoblaciones de NKT encontramos un descenso significativode la secreción de IFN-γ en la subpoblación CD8-NKT y de IL4 en lasubpoblación DN-NKT. La subpoblación CD4-NKT no presenta cam-bios significativos en la secreción de ambas citoquinas.

El descenso de la capacidad proliferativa de las células iNKT deancianos y el descenso de producción de IFN-γ y IL-4 indican que lascélulas iNKT se encuentran entre las poblaciones linfocitarias afecta-das por la inmunosenescencia.

94. EXPRESION DE RECEPTORES ASOCIADOS A CITOTOXICI-DAD EN CELULAS NK DE ANCIANOS. Gayoso I1, Peralbo E1,Pita ML1, Sánchez B2, Tarazona R2, Solana Lara R1. 1Universidadde Córdoba. 2Universidad de Extremadura.

Las células NK son una población heterogénea de linfocitos defi-nidas por un fenotipo de membrana CD3-CD56+ que se caracteri-

zan por su capacidad para lisar gran variedad de tipos celulares trans-formados o infectados por virus. Las células NK son un componen-te muy importante de la respuesta innata, tanto por su función efec-tora como por su función reguladora, actuando como enlace con lainiciación de la respuesta inmune adaptativa. El envejecimiento afec-ta el numero y funci ón de células NK. Se han definido diferentes cam-bios en las células NK asociados a la edad como son el incremento enancianos del porcentaje de células NK con fenotipo maduro (CD56dim),el descenso de la respuesta a IL-2 y a otras citoquinas o la disminu-ción de la expresión de CD69. Las células NK poseen receptores demembrana encargados de la activación o inhibic ión de su funcióncitotóxica. El balance entre señales activadoras e inhibitorias determi-na la activación o no de la citotóxicidad de las células NK. En este tra-bajo hemos analizado la variación asociada a la edad de dichos recep-tores y su influencia sobre los cambios en la capacidad funcional delas células NK en ancianos. Para la realización de este estudio se toma-ron las PBMCs de donantes voluntarios jóvenes (18-35 años) y ancia-nos (70-95 años) sanos. Se identificaron las células NK por citometríade flujo y se analizó la expresión de los receptores NK activadores einhibidores en las diferentes subpoblaciones de NK en voluntariosjóvenes y ancianos sanos Los resultados demuestran que las célulasNK de ancianos poseen un descenso en la expresión del receptorNKp30 y un incremento en la expresión del receptor NKp44. El des-censo de la expresión de NKp30 puede contribuir no solo al descen-so en la capacidad ci totoxica natural de estas células asociada a laedad, sino que, dado el importante papel de este receptor en la inter-acción de células NK con células dendríticas, puede influir en las alte-raciones en la inic iación de la respuesta inmune adaptativa observa-das en ancianos.

95. ANÁLISIS DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS DEL LRC(LEUKOCYTE RECEPTOR COMPLEX) EN LA ESCLEROSISMÚLTIPLE. Ordóñez D1, Sánchez AJ2, Ramil E2, García-MerinoA2, Vilches C1. 1Inmunología. 2Laboratorio de Neuroinmunología. Hos-pital Universitario Puerta del Hierro.

La Esclerosis Múltiple es una enfermedad desmielinizante, infla-matoria y neurodegenerativa que presenta distintas formas evolu-tivas. Aunque no se conoce su causa, la enfermedad parece ser des-encadenada por factores tanto genéticos como ambientales. La pato-genia tiene un componente autoinmune que podría surgir tras unainfecc ión por virus de la familia Herpesviridae. En cuanto a su basegenética, existe una fuerte asociación con los genes HLA (6p21,DRB1*1501). También están descritas asociaciones con regiones deotros cr omosomas, incluyendo el cromosoma 19, donde se locali-za el LRC (Leukocyte Receptor Complex - 19q13.4). El LCR codificapara r eceptores que activan o inhiben diferentes subpoblacionesleucocitarias linfoides y mieloides. Estos receptores, al expresarseen células del Sistema Inmunológico que contri buyen a la defensafrente a Herpesvirus, podrían participar en el origen o el desarrollode la esclerosis múltiple. Entre ellos se incluyen los Leukocyte Immu-noglobulin-like Receptors (LILR, también conocidos como Ig-likeTranscripts - ILT), los Leukocyte-Associated Ig-like Receptors (LAIR)y los Killer-cell Immunoglobulin-like Receptors (KIR), que mues-tran una gran variabilidad genética individual. Presentaremos unanálisis de la posible asociación de la forma Recurrente-Remitentede Esclerosis Múltiple, con algunos polimorfismos genéticos locali-zados en el LRC.

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96. EXPRESION DE CD148 Y CD84 EN LEUCEMIA LINFATICACRONICA. Gaya A1, Bargay J2, Mascaro M2, Cladera A2, GarcíaM3, Arbos A1, Calvo J1. 1Banc de Teixits. F. Banc de Sang i Teixits deles Illes Balears. 2Servicio de Hematología. Hospital Son Llatzer. 3Ser-vicio Anatomía Patológica.

A pesar de tener varias caracteristicas de linfocitos B “naive”,las celulas de leucemia linfatica cronica (LLC) en ocasiones prersen-tan mutaciones en los genes de la region variable de las inmunoglo-bulinas (IgVH) que las definiria como linfoc itos B memoria. Espe-cialmente relñevante es que la presencia de mutaciones en IgVHse asocia a un mejor pronostico respecto a la evolución de la enfer-medad. Por otra parte, se ha descrito que los linfoci tos B "naive" ycon el gen IgVH no mutado carecen de la expresión de CD148 ymuestran una baja expresión de CD84, a diferencia de los linfoci-tos B memoria con IgVH mutado que si expresan CD148 y CD84high.Con el fin de analizar la posible correlación entre la expresión deCD148 y CD84 con la presencia/ausencia de mutaciones en IgVH,en el presente estudio hemos caracterizado un total de 20 LLC, 9 sinmutaciones en el gen IgVH (linfocito B "naive") y 11 con mutacionesen IgVH (linfoci to B memoria).Todas las LLC analizadas mostraronun patrón de expresión de CD148 homogeneo, sin diferenc ias apre-ci ables entre las que tenian mutaciones en VH frente a las que man-tenian la secuencia inalterada. Por otra parte, se ha comprobado quela intensidad de expresión de CD148 en las celulas leucémicasCD19+CD5+ es equivalente al de las células B normales de sangreperiferica. Tambien en las LLC se ha comprobado que la intensidadde expresión de CD148 es mayor en los linfocitos B que en los linfo-citos T, tal como habíamos descrito anteriormente para linfoci tosnormales de sangre periferica. Asimismo se ha estudiado la posibleperdida de heterozigosidad del gen CD148 en las LLC analizadas.Los ensayos de LOH se han llevado a cabo utilizando microsatéli-tes localizados a lo largo del segmento cromosómico 11p11-12:D11NKI02, D11S4183, D11NKI01, D11S1326, D11S1784, D11S4117 yD11S1350. Los r esultados obtenidos no muestran perdida de hete-rozigosidad del gen CD148 al comparar muestras de DNA normaly neoplásico. Este resultado concuerda con la expresión homogeneay de intensidad equivalente a la de celulas normales demostrada porlos estudios de citometria de flujo.

Respecto al CD84, el análisis del patrón de expresión no eviden-cia diferencias apreci ables entre las LLC que presentan mutacionesen IgVH frente a las que mantienen el gen IgVH inalterado, ni tam-poco entre las que expresan zap70 y aquellas que no lo hacen. Enresumen, la expresion de CD148 y CD84 es homogenea en los linfo-citos B de LLC no permitiendo distinguir el estatus naive o memoriade los mismos.

97. FORMACIÓN DE TEJIDO LINFOIDE ECTÓPICO EN LAPARED ARTERIAL DE LOS ANEURISMAS DE AORTA ABDO-MINAL. Ocaña E1, Pérez-Requena J2, Bohorquez JC3, Brieva JA1,Rodríguez C1. 1Servicio Inmunología. 2Servicio Anatomía Patológica.3Servicio Cirugía Vascular. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cádiz.

Introducción. Los aneurismas de aorta abdominal (AAA) son unapatología cardiovascular común cuya rotura tiene una mortalidad glo-bal superior al 50%. Hay evidencias de la etiología inflamatoria de losAAA y del papel patogénico de los infiltrados inflamatorios.

Objetivos. Estudiar las características de las estructuras linfoidespresentes en la pared arterial de los AAA.

Pacientes y métodos. Se estudiaron 25 pacientes sometidos acirugía reparadora electiva, de los que se obtuvieron muestras deaorta. También se estudiaron 3 muestras de aorta sana. Se realiza-ron estudios inmunohistoquímicos y de inmunofluorescencia sobrelas muestras de aorta y análisis mediante microscopia confocal. Seanalizó la expresión de diferentes moléculas (CD3, CD20, CD68,CD38, CD31, CD21, Ki 67, cadenas ligeras y pesadas de las inmuno-globulinas)

Resultados y conclusiones. Más del 90% de las muestras mostra-ron signos de inflamación crónica en. Los infiltrados inflamatorios selocalizaban fundamentalmente en la adventicia y en 1/3 de las mues-tras se extendían a la capa media. Los infiltrados inflamatorios forma-ban agregados heterogéneos compuestos fundamentalmente de célu-las CD3+ y/o CD20+. En algunas áreas, situadas generalmente en laadventicia, se identificaron estructuras linfoides complejas que reme-daban órganos linfoides secundarios: I). Los linfocitos T y B estabanlocalizados en áreas separadas. II) En un 20% de casos se encontra-ron centros germinales-like (CG), definidos por la presencia de célu-las B IgD- y Ki67+. III) Los CG contenían una red de células dendríti-cas foliculares (CD21+). IV) En la zona externa de las estructuras lin-foides se observaban abundantes células plasmáticas (CP) (CD38+).Las CP estaban adheridas a una red prominente de capilares. V) Seobservaban fenómenos de neovascularización en las capas media yadventicia.

Este estudio muestra la formación de tejido linfoide ectópicoen la pared arterial de los AAA y apoya la etiología inflamatoria delos AAA.

98. ANÁLISIS COMPARATIVO DE DIFERENTES SUBPOBLA-CIONES B DE MEMORIA CIRCULANTES EN INDIVIDUOSSANOS. Rodríguez Bayona B, Rodríguez C, Brieva JA. HospitalUniversitario Puerta del Mar. Cádiz.

Las células B de sangre periférica (SP) pueden dividirse en dosgrandes compartimentos atendiendo a la expresión del marcador CD27,cuya presencia se asocia a la existencia de mutaciones en los genesde las inmunoglobulinas. El compartimento CD27- comprende unasubpoblación näive mayoritaria (CD27- IgD+ ) y una subpoblaciónminoritaria (CD27- IgD-) r ecientemente asociada a una función dememoria efectora. Dentro de las células B CD27+ podemos diferenciardos subpoblaciones de memoria atendiendo a la expresión de IgD:memoria “switch” (CD27+ IgD-) y memoria “no switch” (CD27+ IgD+).El objetivo de este estudio consistió en la caracterización fenotípica yfuncional de las distintas poblaciones B de sangre periférica de indi-viduos sanos.

Para ello se purificaron células mononucleares de SP por centrifu-gación en gradiente de Ficoll y se procesaron para su análisis por cito-metría de flujo. Se analizó la expresión de diversas moléculas de adhe-sión, receptores de quemoquinas, moléculas de coestimulación, recep-tores de muerte celular y de supervivencia. Se encontró un gradientecreci ente de expresión de CXCR3, CD95 y TACI en la direcci ón nai-ve-no switch-switch. Asimismo hallamos diferencias de expresión dedistintas moléculas de adhesión y de coestimulación entre células nai-ve y memoria. La mayor expresión de CD95 en células de memoria nose traducía en una mayor susceptibi lidad a sufrir apoptosis espontá-nea ni inducida por antic uerpos anti-CD95. Estos datos sugieren la

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existencia de un gradiente madurativo entre las diferentes poblacio-nes de células B de memoria.

99. DIFERENCIAS EN LA HIPERMUTACIÓN SOMATICA DE LOSSEGMENTOS CDR1 Y CDR2 DE GENES IGVH DE CÉLULASPLASMÁTICAS HUMANAS. Jiménez Gómez G, Gómez PeralesJL, Ramos-Amaya AB, Medina F, Campos-Caro A, Segundo C,González-Garcia I, Brieva JA. Servicio de Inmunología y Unidad deInvestigación.

Las células plasmáticas (CP) , estadio final B, son las encargadasde secretar Ig. Tras la activación de los linfocitos B en los órganos lin-foides inductivos (p ej. la amígdala (A)), los genes IGVH sufren hiper-mutación somática (HS), dando lugar a Igs c on mayor afinidad. Recientemente, nuestro laboratorio ha establecido la existencia de un gra-diente mutacional en genes IGVH que se inicia en las CP tempranasde los órganos linfoides (A), progresa en la fase circulante en sangreperiférica (SP) y es máximo en CP presentes en órganos de depósitofinal, como la médula ósea (MO). En este trabajo se han obtenido CPhumanas de A, SP y MO altamente purifi cadas usando métodos inmu-no-magnéticos y "sor ting" de células CD38++. Se ha secuenc iado elADNc codifi cante de los genes IGVH6 e IGVH3 procedentes de lastres poblaciones de CP (n= 574 y 737, respectivamente). Estos genesaparecen más mutados y tienen más mutaciones reemplazantes (R)en los CDRs que en los FRs, de acuerdo con lo previsto. La frec uen-cia de mutaciones tanto totales como R es mayor en CDR1 que enCDR2 en las tres poblaciones estudiadas y en las dos familias de genes.Sin embargo, la relación R/S es inferior en CDR1, siendo en ambasregiones los valores observados de R/S infer iores a los esperados sidependiera exclusivamente del azar. Este fenómeno es especialmen-te acusado en CDR1, que tiene una mutabilidad inherente muchomayor. La diferencia entre R/S esperado y observado se hace menoren la dirección A?SP?MO sobretodo en CDR2. La frecuencia del cam-bio de aminoácidos (aa) también es claramente mayor en CDR1 queen CDR2 a lo largo del gradiente madurativo. Sin embargo, la frecuen-cia de cambio de aa no conser vativo deja de ser mayor en CDR1 queen CDR2 en MO, mostrándose un progreso selectivo de la HS qui-zás paralelo al aumento de la afinidad por el Ag. Estos datos reve-lan una presión selectiva diferencial sobre CDR1 y CDR2, sugiriendoque ambos segmentos juegan diferentes roles en el sitio de unión alAg.

100.ANÁLISIS COMPARATIVO DE CÉLULAS PLASMÁTICASCD19+ Y CD19- EN LAMINA PROPIA DE COLÓN HUMANO.Ocaña E, Campos-Caro A, Jiménez-Gómez G, Brieva JA. Unidadde Investigación y Servicio de Inmunología.

Introducción. Las células plasmáticas (CP) se consider an la fasefinal de diferenci ación de los linfocitos B y son las responsables de laproducción de anticuerpos. En humanos, los órganos de alojamientofinal de las CP son la médula ósea y la lamina propia ( LP) mucosa. LasCP de LP son las responsables de la respuesta inmune humoral muco-sa. OBJETIVOS: Aislar y analizar fenotípic a y genéticamente las dospoblaciones de CP presentes en la lámina propia de colon en humanos(CP LP CD19+ y CP LP CD19-).

Resultados y conclusiones. Las dos poblaciones de CP LP fueronaltamente purificadas mediante cell-sorting. El análisis fenotípico de

diferentes marcadores (DR, CD44, CD95 y CXCR4) mediante citome-tría de flujo no mostró diferencias significativas. En el estudio cuan-titativo de los factores de trascripción (FT) implicados en la diferenciación de las CP (Pax5, Blimp-1 y Xbp-1) se encontró una mayor expre-sión del FT Pax5 en las CP LP CD19+. En el análisis del numero demutaciones somáticas de los genes IgVH de las inmunoglobulinas, nose encontraron diferencias signific ativas en cuanto al numero de muta-ciones (reemplazantes y silentes) ni al cociente R/S. Sin embargo, si seencontraron diferenc ias signific ativas en la utilización de los segmen-tos D y J en el reordenamiento. También se analizó los cambios de ami-noácidos debido a mutaciones somáticas en ambas poblaciones median-te el programa Clustalw (http://www.ebi.ac .uk/clustalw. Los cam-bios de aminoácidos (Aa) se agr uparon según el tipo de variación encambios no conservativo (NC) y conservativos o semiconservativos(C). En primer lugar observamos un mayor número de cambios de Aasen los genes IgVH de las CPLP CD19- y además eran cambios no conservativos. Estos cambios de Aas tenían lugar fundamentalmenteen la zona FR y CDR1, no encontrándose diferencias en CDR2. El aná-lisis de las dos poblaciones de CP LP revela la existencia de diferen-cias en sus IgVH, quizás relacionadas con una diversa afinidad porel antígeno.

101.EXPRESIÓN DE I-100 EN LAS POBLACIONES LEUCOCITA-RIAS DE SANGRE PERIFÉRICA. Imbernón M1, Viñuela JE2, Cor-dero OJ1. 1Departamento de Bioquímica e Bioloxía Molecular. Univer-sidade de Santiago de Compostela. 2Departamento de Inmunoloxía. Hos-pital Clínico Universitario de Santiago de Compostela.

Las proteasas de prolina juegan un papel muy importante enla modificación postraduc cional de proteínas o péptidos que con-tengan X-Pro en su extremo N-terminal. Un ejemplo de ello es CD26(Dipeptidil peptidasa IV, DPPI V), una glicopr oteína integral demembrana de tipo II que ejerce en el sistema inmunitario un impor-tante papel regulador al menos sobre las quimiocinas. I-100 es otraglicoproteína de membrana que se incluye dentro de la familia delas N-acetilated alfa_Linked Acidic Dipeptidase debido a su simi-litud de secuencia con las proteínas de ésta familia, y por eso se ledenomina también NAALADAasa-Like. Pero su ac tividad prote-olítica la sitúa también dentro de las dipeptidil peptidase IV acti-vity and/or structure homologous (DASH). Se ha descrito la pre-senci a de transcritos de I-100 en diversos tejidos, y nosotros esta-mos estudiamos la presencia de la proteína I-100 en el sistema inmu-nitario. En este estudio utilizamos un anticuerpo policlonal diseña-do frente a una secuencia específica de 15 aminoácidos de I-100 yse analizó la distribución de ésta proteína en las diferentes pobla-ciones de leucocitos mediante un marcaje indirecto detectado porFACS. Las poblaciones de células T, B, NK, monocitos y polimorfo-nucleares se identific aron con marcadores monoclonales específi-cos combinándolo con el marcaje de I-100. El estudio se repitió enleucocitos fijados con paraformaldehído y linfocitos activados conPHA. La expresión de I-100 presenta una distribución carac terísti-ca y de diferente intensidad en las distintas poblaciones: sólo un 1-1.5% de linfocitos T CD4 es consistentemente marcado, mientras un35% de las células B y casi todas las NK (con valores variables den-tro de sus subpoblaciones) son positivas; un 77% en monocitos yun 33% ( menos consistente) en granulocitos. Esta ausencia de expre-sión uniforme en la superficie de las células sugiere que el estudiode I-100 nos puede revelar también nuevas rutas reguladoras enel sistema inmunitario.

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SESIÓN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL - II

Moderadores: Dr. Luis Álvarez Vallina (Madrid)Dr. Federico Garrido (Granada)

102.PUESTA A PUNTO DE UN MÉTODO SENSIBLE Y ESPECÍ-FICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL COMPONENTEMONOCLONAL EN MIELOMA. Vazquez Gonzalez AC, VillarGuimerans LM, Cardero Gonzalez E, Gonzalez Porqué P. Serviciode Inmunologia. Hospital Ramon y Cajal.

Antecedentes. La cuantificación del componente monoclonal esde suma importancia en el diagnóstico y seguimiento de los pacientescon gammapatía monoclonal, ya que en las clasificaciones actualeses lo que determina en que situación se encuentra el enfermo y por tan-to el tipo de tratamiento que debe seguir.

En el momento actual los métodos utilizados para la determina-ción de dic ha cuantific ación tienen ci ertas limitaciones ya que no per-miten averiguar con exactitud el porcentaje de la Inmunoglobulinatotal que corresponde al componente monoclonal presente. Además,en aquellos pacientes en los que se observan pequeñas bandas, ó enlos casos en que esta banda monoclonal se sitúa en la zona beta delespectro electroforético ( EEF ) la cuantificación se ve muy sesgada,si sólo se utiliza la densitometría directa del EEF.

Objetivos. Puesta a punto de un método que nos permita cuan-tificar de modo específico, objetivo y reproducible el porcentaje deInmunoglobulina monoclonal presente en suero y orina de pacientescon gammapatías monoclonales.

Método. A todas las muestras se les realizó un Espectro Electrofo-rético (EEF), cuantificación de Inmunoglobulinas por Nefelometría ycaracterización del pico monoclonal mediante Inmunofijación (IFJ).Además, se realizó, una densitometría de la IFJ para cuantific ar el picomonoclonal.

Resultados. Hemos comparado la cuantificación del pico mono-clonal a partir de la densitometría del EEF, y de la densitometría de laIFJ, usada en combinación con la cuantificación de las Inmunoglobu-linas por Nefelometría. Se ha comprobado que este último método esel que nos ofrece los resultados más precisos y reproducibles, sobre todocon los picos pequeños y c on aquellos picos que se localizan en beta.

Conclusiones. La Inmunofijación Cuantitativa es un método quepermite una determinación más precisa de la cantidad de Inmunoglo-bulina monoclonal que tienen estos pacientes al diagnóstico y duran-te el seguimiento, así como valoración de la eficacia del tratamiento. Elmétodo nos permite cuantificar picos pequeños que por otros métodosno serían cuantificables y proporciona información sobre el porcenta-je de la Inmunoglobulina que aún presenta aspecto monoclonal.

103.PURIFICACION DE LA LECTINA EXTRAIDA DE LAEUPHORBIA HANDIENSIS. Guzman-Bistoni C1, Evora N1, SeguiME1, Peraza S2, Garcia-Tamayo J3, Molina J3, Frias I4, Blasco-Olaetxea E1. 1Instituto Canario de Investigación del Cáncer ICIC. 2Cen-tro Cancer Gastrointestinal San Cristobal – Venezuela. 3Novapath - Mara-caibo- Venezuela, 6Novapath - Maracaibo- Venezuela. 4Universidad deLa Laguna.

La lectinas son proteinas extraidas de plantas que tienen la caracte-ristica de reconocer y unirse a estructuras carbohidrato Nuestro objeti-vo con el presente trabajo es comprobar la utilidad de la Lectina extrai-

da del Cardón de Jandia Euphorbia handiensis, un endemismo de la Islade Fuerteventura, en el estudio de tejido Humano normal y patológico.

Euphorbia handiensis es una especie incluida en el catálogo deespecies amenazadas de Canarias, por lo que fue necesaria la autori-zaci ón para su recolecci ón por el Gobierno de Canarias. Una vez reco-lectada en campo, el material vegetal se conserva en frío hasta su lle-gada al laboratorio, donde se congela para su posterior procesamien-to. 61 bloques de parafina con tejido gástrico del Centro de Control deCáncer Gastrointestinal en San Cristobal, fueron procesados en el Labo-ratorio del ICIC en Fuerteventura y Novapath de Maracaibo.

Aislamiento y purificación de lectinas: A partir de muestras conge-ladas de plantas seleccionadas se procede a su rotura en un mortero man-tenido con nitrógeno líquido a una baja temperatura <90 º C. Poste-riormente se homogeneiza el polvo resultante en PBS+ (PB, 200 mMNaCl, 1mM PMSF, 5mM βME, pH6,9) con ayuda de un politrón(5min x 5000 rpm, 0 º C). A continuación. El homogenado se centrifugaen volúmenes de 20 ml durante 20 minutos a 15 000 x g 4ºC. El sobrena-dante que se obtiene se cromatografía sobre un lecho de Sephadex LH-20 previamente desgasificado y silanizado a fin de evitar oxidacionese interacciones entre lectinas y residuos de la fase sólida. A continuaciónse precipita la fracción no-lectina con SO4 (NH4)2 durante 1 hora en agi-tación y a 40% de saturación. Tras 12-15 horas de sedimentación y equi-librado la muestra se centrifuga 10 minutos a 15 000 x g y se realiza unanueva precipitación salina de la fracción rica en lectina con SO4 (NH4)2al 65-80% de saturación -dependiendo del material vegetal- a4 º C. Porúltimo se centrifuga de nuevo en las mismas condiciones y el precipita-do se redisuelve en buffer PBS+ y se dializa en el mismo buffer (1 Litro,2 cambios, durante 12 horas) el dializado se clarifica por centrif ugacióny puede congelarse en este punto. Cromatografía de afinidad sobremanosa y Neu5Gc. Se realiza en microcolumnas (Pierc e C.O.) sobre doslechos en támdem de Sepharose CL6B con Manosa acoplada a través debrazo espaciador C8 (Sigma C.O.) y Sepharose acoplada a Neu5Gc a tra-vés de un brazo C8 siguiendo el protocolo del fabricante. La unión selleva a cabo a 20ºC, con 10 pases de la muestra por el gel, lavado y elu-ción con manosa en PBS+ 500mM NaCL, siguiéndose la absorbancia a280 para la unión y mediante el reactivo de Bradford para la elución.Muestras de cada paso se separan para análisis mediante SDS-PAGE yWestern blot. Se procede a la biotinización de las proteínas eluidas

Histoquímica de lectinas. Las biopsias incluidas en parafina se cor-tan a 3 micras de espesor y se montan sobre portaobjetos con Poly-L-Lysi-na. Se utilizó sistema Stepavidina-HRP (Dako) para la unión a la biotinapor 10 minutos. El revelado se realizó con Diaminobenzidina (DAB).

Resultados y conclusiones. La lectina extraida de la Euphorbiahandiensis reconoce una estructura carbohidrato presente en las célu-las de la mucosa gástrica superf icial normal, dando un patrón de expre-sión similar al de los antígenos relacionados con los grupos sanguíne-os. Es por ello que basandonos en nuestra experiencia con este tipo demarcadores pensamos que podría ser útil en el estudio de los proce-sos neoplásico del estómago.

104.LA PROTEÍNA VIRAL A238L INHIBE LA EXPRESIÓN DECOX-2 Y LA MIGRACIÓN EN CÉLULAS DE CARCINOMA DECOLON HUMANO. Sabina Villar P1, González Granja A2, Gar-cía Sánchez E1, Nogal París ML1, Revilla Novella Y1. 1Centro deBiología Molecular. 2Cancer Research UK London Research Institute.

La ciclooxigenasa 2 (COX-2), está aumentada en diversos cánce-res humanos afectando a la carcinogénesis. Anteriormente hemos

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demostrado que la proteína viral A238L inhibe la actividad de los fac-tores de transcripción NF-kappa B, NFAT y los coactivadores CBP/p300en distintos tipos celulares y por tanto los genes diana se encuentraninhibidos en células que expresan A238L. En el presente trabajo, usan-do líneas celulares de carcinoma de colon humano como Caco-2 y HT-29 que expresan establemente A238L, cotransfectadas con distintasconstrucciones reporteras de la actividad del promotor de COX-2,demostramos que la expresión del gen viral inhibe la trascripción deCOX-2 en sitios específicos de su promotor y consecuentemente la sín-tesis de PGE-2. Además, la expresión de una versión constitutivamen-te activa de calcineurina o NFAT revierte la inhibición mediada porA238L, implicando a esta ruta de señalización en el mecanismo fun-cional de la proteína viral. Además, utilizando ensayos de quimiotá-xis en placa, observamos que la presencia de A238L disminuye la migra-ción celular, un efec to que se revierte mediante sobreexpresión de cal-cineurina.

Puesto que COX-2 ha sido implicada en desarrollo de metástasistumoral, actualmente estamos analizando la expresión de marcadoresde adhesión celular tales como I-CAM y V-CAM, de angiogénesis comoVEGF y de invasión tumoral como MMP-9, en células HT-29 pcDNAy HT-29 pcDNA-A238L, así como el efecto de sus respectivos sobrena-dantes de cultivo sobre células HUVEC, para evaluar, mediante ensa-yos in vitro, la consecuencia de la disminución de la expresión de COX-2 mediada por A238L y su repercusión en la formación de metástasisin vivo.

105.ANALISIS DE NIVELES DE TRANSC RIPCION DE GENESHLA LOCUS B ESPECÍFICO EN LÍNEAS DE MELANOMAQUE PRESENTAN BAJA EXPRESIÓN DE LOCUS B EN SUPER-FICIE. García Ruano AB, Romero Noguera JM, del Campo Alon-so AB, Mendez Valdes R, Ruiz-Cabello Osuna F, Garrido Torres-Puchol F. Hospital Universitario Virgen de las Nieves.

Medimos los niveles transcripcionales específic os para locus Ben siete líneas celulares de melanoma (ESTDAB) que presentabanbaja expresión de HLA-B en superfic ie medida por citometría de flu-jo. Para determinar los niveles trasncripcionales realizamos PCR cuan-titativa en el analizador Light Cycler de Roche usando cebadoresespecíficos y SGRB-green. Como control estudiamos los niveles trans-cripcionales específicos para locus B en 50 muestras de linfocitos desangre periférica. Todos los resultados se refirieron a niveles trans-cripcionales de glucosa-6-fosfatodeshidrogenasa. Para comprobarque la amplificación era específica para el locus B chequeamos elamplificado por electroforesis en gel de agarosa y analizamos la cur-va meelting.

Todas las líneas estudiadas mostraban amplificación específicapara HLA-locus B. La media de los niveles de transcripción del locusB en las muestras de linfocitos de sangre periférica fue 31,40 copias demRNA de locus B/copias G6PDH (rango 9,82-109). En el caso de laslíneas celulares de melanoma los niveles medios de trasncripción fue-ron 5,11 copias de mRNA de locus B/copias G6PDH (rango 0,50-11,43).Los resultados para cada línea fueron los siguientes: FM28, 0.50 locusB/GPDH; E120, 0.56 locus B/GPDH; E135, 2.14 locus B/GPDH; FM3,6.93 locus B/GPDH; E100, 3.16 locus B/GPDH; E114, 11.43 locusB/GPDH; E125, 11.04 locus B/GPDH.

Analizando estos resultados podemos decir que FM28 y E120muestran niveles muy bajos de transcripción de locus B lo cual pue-de explicar su baja expresión en superfic ie. En las líneas celulares

E135, FM3 y E100 encontramos niveles transcripcionales reduc idosque podrían explicar parc ialmente la baja expresión. Sin embargo,en el resto de las líneas, los niveles transcripcionales fueron simila-res a los de los linfocitos por lo que en estos casos la baja expresiónde HLA-B en superficie no sería debida a un fallo en la transcrip-ción.

106.PRESENCIA DE CELULAS TRONCALES NEURALES NESTI-NA POSITIVAS EN EL GLIOBLASTOMA MULTIFORME. Her-nández-Cillero L1, Subiza Garrido-Lestache JL2, Martínez-Mar-tínez A3, Zimman-Mansfeld H1. 1Instituto de Neurociencias y Servi-cio de Neurocirugía. 2Servicio de Inmunología. 3Anatomía Patológica.Hospital Clínico San Carlos. Madrid.

Antecedentes. Las células troncales neurales son definidas comocélulas multipotentes del sistema nervioso central capaces de dividir-se indefinidamente y diferenciarse a distintos tipos de células especia-lizadas, morfológica y funcionalmente(1). Además pueden ser expan-didas en agregados celulares esféricos llamados “neurosferas” en mediolibre de suero conteniendo EFG y FGF.

Dentro de los tumores cerebrales de origen glial, el glioblastomamultiforme (GBM), es un tumor altamente maligno. Constituye el50-60% de los tumores gliales(3), con una supervivencia media de 14meses a pesar de los tratamientos convencionales de cirugía, r adio yquimioterapia.

Objetivo. Demostrar la presencia de células definidas como tron-cales nestina positiva en el GBM.

Materiales y métodos. Se estudiaron cinco tumores cerebraleshumanos diagnosticados como Glioblastoma Multiforme de acuerdoa la clasific ación de la Organización Mundial de la Salud, previo con-sentimiento de los pacientes y con protocolo aprobado por el comitéético del Hospital Clínico San Carlos.

Se recogieron los tumores en fresco, procediendo a digestión enzi-mática y disociación mecánica.

Se realizó cultivo primario de los tumores en medio DMEM-F12libre de suero suplementado con hormonas(4) y factores de crecimien-to epidérmico y fibroblástico.

Las tumoresferas, las cuales aparecen en la primera semana de cul-tivo, se disgregaron y se r ealizó el estudio de contenido de nestina porinmunofluorescencia y citometría de flujo.Resultados1. Se observó la formación de neurosferas o tumoresferas mediante

microscopio de contraste de fases. 2. Presencia de un pequeño número de células positivas para nesti-

na con patrón citoplasmático en los tumores estudiados. 3. El análisis citofluorométrico demostró hetereogeneidad morfoló-

gica además de un porcentaje (1-5%) de células teñidas con anti-nestina.

Conclusiones1. Se demostró la existencia en el GBM de un pequeño grupo de célu-

las carac terizadas por su positividad a la nestina. 2. Estas células similares a las células troncales neurales pueden ser

el origen o fuente de renovación del tejido tumoral. Bibliografía1. Weiss S, Reynolds BA. J Neurosci 1992 y Science, 1992.2. Vescovi AL. Neuron 1993.3. Rubinstein LJ. Tumors of the Central Nervous System. Atlas AFIP, 1972.4. Sato GH, Bottenstein J. et al. Methods in Enzymology 1979;58.

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107.CARACTERIZACIÓN INMUNOGENOTÍPICA DEL REORDE-NAMIENTO MONOCLONAL DE LA CADENA PESADA DELA INMUNOGLOBULINA (IGH) EN UNA SERIE DE 25PACIENTES CON LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA B (LLC-B). Modrego Ruiz J, Teijeiro Martorell R, Santamaría JaramilloB, Gil Herrera J, Rodriguez-Sainz C, Fernández-Cruz E. HospitalGeneral Universitario Gregorio Marañón. Madrid.

Introducción. En los síndromes linfoproliferativos la caracteriza-ción inmunogenotípica del reordenamiento monoclonal de IgH per-mite determinar el estado de hipermutación somática (HMS) y la regiónVH reordenada. Ambas determinaciones tienen valor pronóstico y par-ticular interés en la LLC-B ya que esta patología muestra gran hete-rogeneidad en su progresión clínica. El estado de la HMS no mutadofrente al mutado y el uso de la familia VH3-21 son marcadores inde-pendientes de peor pronóstico, siendo controvertida la influencia geo-gráfica en la frecuencia de estas características.

Objetivo. Efectuar la caracterizaci ón genética del reordenamien-to IgH en una serie de 25 pacientes con LLC-B atendidos en el Hospi-tal “Gregorio Marañón”.

Método. Estudiamos 25 pacientes con LLC-B cuyas muestras desangre periférica se recibier on consecutivamente en la sección de Inmu-nogenética Molecular del hospital. Después de extraer el DNA genó-mico, se amplificó el DNA de IgH reordenado y se secuenció con el kitBigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems). El análi-sis de las secuencias se hizo con el programa IMGT/V-QUEST. Resul-tados: De las 25 muestras procesadas conseguimos analizar 22. Lamayor parte de los reordenamientos muestran un estado mutado(72.7%) con una frecuencia de mutación media del 8.3% (rango 5.5-11%). Siete individuos (27.3%) presentaron un estado no mutado, 5 deellos con identidad total respecto a la secuencia consenso. Un sólo indi-viduo presentó reordenada la familia VH3-21(4.5%), siendo su estadono mutado. La región más frecuentemente reordenada es VH3(72.8%).

Conclusiones. En la mayoría de los pacientes con LLC-B hemospodido determinar el estado de HMS y la familia reordenada, lo queañade valor pronóstico a las estadificaciones c lásicas (RAI y BINET). Laampliación de la serie y el seguimiento de los pacientes estudiados per-mitirán confirmar el valor pronóstico de ambos marcadores y estudiarla frecuencia de las familias VH reordenadas en nuestra población.

108.ESTUDIO DEL PAPEL DE Eph Y EFN EN LA INTERACCIÓNT-B EN LA LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA. de GarcillanGoyoaga B1, Trinidad Álvarez EV1, Ballesteros Andres M2, Zapa-ta González A1, Alonso Colmenar LM1. 1Universidad Complutensede Madrid. 2Hospital General Universitario Gregorio Marañón. Madrid.

Distintas evidencias han puesto de manifiesto un papel críticode la interacción T-B en leucemia linfática crónica (LLC) , caracteriza-da por una acumulación progresiva de linfocitos B CD19+CD5+, y don-de la familia de receptores tirosinaquinasa Eph y sus ligandos, ephrin(EFN), i mplicada en procesos de adhesión/repulsión celular en otrossistemas, podría jugar un papel clave en dichas interacciones.

Hemos caracterizado la expresión de Eph/EFN en linfocitos T yB sanos y de pacientes LLC, mediante RT-PCR y citometría de flujo(FACS), así como mediante inmunofluorescencia en ganglios reactivossanos y de pacientes LLC. Además, hemos estudiado in vitro el efectode la adición de proteínas recombinantes Eph ó EFN a co-cultivos delinfocitos T y B sanos y de pacientes LLC estimulados via CD3 y CD28,

analizando la supervivencia de ambas poblaciones, su respuesta pro-liferativa y la modulación de distintos marcadores de activación.

Las poblaciones linfoides estudiadas expresan varios de los miem-bros Eph/EFN, tanto receptores como ligandos, destacando una expre-sión incrementada de EFNA4, incluyendo una isoforma soluble, en lascélulas B leucémicas, así como un incremento signific ativo en la pro-porción de linfocitos T que expresan EphA4 en los ganglios de pacien-tes LLC, por lo que EphA4 y EFNA4 podrían funcionar como “pare-ja” receptor-ligando en la interacción T-B. La adición de EphA4 óEFNA4 recombinantes solubles a co-cultivos T-B, lo cual debería inter-ferir en la interacción normal de EphA4/EFNA4, resultó en una mayorrespuesta proliferativa de los linfocitos T así como en una mayor super-vivencia de los linfocitos B leucémicos fr ente a la situación control, enausencia de proteínas recombinantes solubles.

Nuestros resultados sugieren que la interacción T-B en la LLC estámediada, en parte, por EphA4/EFNA4 modulando la respuesta pro-liferativa T y la supervivencia de las células B leucémicas.

109.INFLUENCIA DEL POLIMORFISMO –1082 A>G DE L-10 ENLA EVOLUCIÓN DEL CARCINOMA RENAL DE CÉLULASCLARAS. Sáenz-López Garrocha P, Romero JM, Carretero R,Cózar JM, Tallada M, Garrido F, Ruiz-Cabello F. Hospital Uni-versitario Virgen de las Nieves.

La IL-10 es una citoquina inmunosupresora que podría favore-cer el escape tumoral a la inmunovigilancia. Sin embargo existen evi-dencias de una interacción compleja de esta citoquina en el microam-biente tumoral de tal manera que podría desarrollar también efectosantitumorales. Por este motivo, los estudios de polimorfismos genéti-cos de IL10 en relación al cáncer están sujetos a controversia.

El polimorfismo IL10-1082A>G (rs1800896) se ha descrito como elmás importante en población española y se ha relacionado el alelo G aalta producción de IL-10. En el presente estudio se ha determinado estepolimorfismo en 127 pacientes y se ha analizado su influencia sobrevarios parámetros relacionados con la evolución: diámetro tumoral, gra-do nuclear, adenopatías, trombosis maligna, metástasis, estadío tumo-ral y riesgo UKLA. Nuestro estudio reveló en primer lugar, que no hubouna asociación directa de ninguno de los polimorfismos o haplotipos deIL10 estudiados en relación al riesgo de cáncer renal. Sin embargo hemosobservado que un mayor heterocigosidad AG en la posición -1082 delgen (que determinaría niveles intermedios de producción de la citoqui-na) se asocian a un diámetro tumoral mayor de 7 cm (OR=4,41; p=0,001),a la aparición de adenopatías (OR=1,79; p=0,006) y a un estadío tumo-ral avanzado (OR=14; p=0,002). Nuestros resultados pueden ser inter-pretados en el contexto de la compleja interacción de IL10 en el micro-ambiente tumoral, con efectos tanto sobre las células tumorales, sobreel infiltrado inflamatorio, y sobre la vascularización, y donde esta cito-quina puede desarrollar a la vez efectos pro- y antitumorales.

110. ESTUDIO DE POLIMORFISMOS DE LOS GENES RANTES,IL-1, MCP-1 Y TNF-α EN PACIENTES DE CANCER DE PRÓS-TATA. Saenz-López P1, Carretero R1, Romero JM1, Cantón J1, CózarJM2, Tallada M2, Garrido F1, Ruiz-Cabello F1. 1Servicio de AnálisisClínicos y de 2Urología. Hospital Virgen de las Nieves de Granada.

Introducción. La inflamación ha sido implicada como factor etio-lógico de varios canceres en humanos, incluido el cáncer de próstata. Las

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variantes alélicas de los genes involucrados en las vías de la inflamaciónson candidatos lógicos para la determinación genética del riesgo de pade-cer cáncer de próstata. El propósito de este estudio fue por tanto, anali-zar la asociación entre polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs) decitoquinas proinflamatorias en la predisposición al cáncer de prostata.

Material y métodos. Hemos realizado un análisis genético anali-zando los polimorfismos de las citoquinas: TNF-α-308 A/G (rs1800629),RANTES-403 G/A (rs 2107538), IL-1α-889 C/T (rs 1800587), y MCP-12518 G/A (rs1024611). El estudio se realizo con 296 pacientes españo-les con cáncer de próstata y 216 personas sanas españolas.

Resultados y conclusiones. Pacientes con cáncer de próstata se aso-cian significativamente al genotipo TNF-α GA+AA (OR, 1,697;95% CI,1.089-2,644) y al genotipo RANTES GA+AA (OR,1,610;95% CI, 1,088-2382). El alelo A de TNF-α y RANTES influye en la susceptibilidad de pade-cer cáncer de próstata. No se descubrió ningún efecto epistático entre com-binaciones de diferentes polimorfismos. Por ultimo no se observó una aso-ciación entre riesgo de desarrollo de cáncer de próstata y los polimorfis-mos de IL-1α y MCP-1. Nuestros resultados favorecen la hipótesis de quevariaciones en algunos genes que regulan la inflamación y la respuestainnata pueden ser importantes en el desarrollo del cáncer de próstata.

111. ANALISIS DE CADENAS LIGERAS LIBRES EN SUERO PARALA VALORACION DE LOS FILTROS DE GRANDES POROSEN EL PERIODO INICIAL DEL MIELOMA MULTIPLE CONDAÑO RENAL AGUDO. Muñoz Alcon H1, Jiménez Cobaleda MJ1,García de Burgos M1, Hernandez A1, Rodríguez R1, Hernández J2,Queizan JA2, Heras M3, Sánchez R3, Fernéndez-Reyes MJ3. 1Análi-sis Clínicos. 2Hematología. 3Nefrología. Hospital General de Segovia.

Se analizaron las cadenas ligeras libres CLL en el suero de un pacien-te, diagnosticado de mieloma múltiple IgG-K con eliminacion urinariade grandes cantidades de K libre e insuficiencia renal aguda, antes , duran-te y despues de una hemodiálisis con fi ltro GAMBRO HEO 1100. El ana-lizador utilizado es un Immage 800 y reactivos específicos para CLL dela casa the binding site. El paciente fué tratado farmacológic amente des-de su diagnóstico con dexametasona y con bortezomib y dexametasonaa partir del dia +7. Se observó que los niveles de K libre descesdieron apartir de la tercera hora y hasta el final de la hemodiálisis (6 horas). Lahemodialisis se realizó durante varios dias analizándose las CLL en sue-ro pre y post diálisis, observándose que los niveles previos eran muy ele-vados descendiendo en porcentajes de hasta el 80% tras el filtrado. A par-tir del dia 14 de tratamiento farmacológico, los niveles de K libre prediá-lisis comenzaron a mejorar, descendiendo tras la diálisis en la misma pro-porción que en dias anteriores. El dia 20 el paciente pidió el alta volun-taria; aún así se ha comprobado la eficacia del fi ltro para la disminucionde CLL y la necesidad de mantener este tipo de hemodiálisis hasta el con-trol de la masa tumoral del mieloma múltiple.

112. SECUENCIACIÓN DE LA REGIÓN VARIABLE DEL GEN DELAS CADENAS PESADAS DE INMUNOGLOBULINA ENPACIENTES CON LEUCEMIA LINFOIDE CRÓNICA. Calvo Beni-to FJ1, Arbós Magrinyá A1, Corbillo Colom C1, Vercher Agustí FJ2,Balanzat Muñoz J2, Gayà Puig A1. 1Fundació Banc de Sang i Teixits deles Illes Balears. 2Servei d’Hematologia. Hospital Can Misses. Eivissa.

La Leucemia Linfoide Crónica (LLC) de células B es la forma másfrecuente de leucemia en nuestro entorno. La principal dificultad diag-

nóstica de esta enfermedad radica en la necesidad de disponer de unagran cantidad de muestra patológica para realizar las pruebas necesa-ri as, ya sea por citometría de flujo o por diagnóstico molecular clási-co. En este trabajo describimos una técnica utilizada en nuestro labo-ratorio que no sólo permite la realización de un diagnóstico de segu-ridad con una cantidad limitada de células leucémicas sino que posi-bilita el seguimiento tras el tratamiento y la determinación de enfer-medad residual en un enfermo. Por otra parte, la heterogeneidad enel comportamiento clínico de pacientes con LLC dificulta a los clínicosidentificar con precisión los pacientes que se puedan beneficiar de estra-tegias terapéuticas tempranas y agresivas y además poder ofrecer a lospacientes información relevante del pronóstico de su enfermedad. Dadala eficacia potencial de las nuevas terapias y la voluntad de tratar pacien-tes en el momento óptimo, es cada vez más importante desarrollar téc-nicas lo suficientemente sensibles para identificar los pacientes conpeor pronóstico. Los estudios más recientes en esta enfermedad sugie-ren que realmente englobaría dos enfermedades diferentes con dife-rente curso clínico e implicaciones pronósticas que pueden distinguir-se fundamentalmente mediante la secuencia del reordenamiento mono-clonal VDJ. La técnica de secuenciación de reordenamientos VDJ delgen de cadenas pesadas de inmunoglobulinas es compleja y no está alalcance de muchos centros. En el presente trabajo describimos la pues-ta a punto y los resultados de la secuenciación de aquellas muestrascon reordenamientos monoclonales diagnosticados en nuestro labora-torio.

112. SECUENCIACIÓN DE LA REGIÓN VARIABLE DEL GEN DELAS CADENAS PESADAS DE INMUNOGLOBULINA ENPACIENTES CON LEUCEMIA LINFOIDE CRÓNICA. CalvoBenito FJ1, Arbós Magrinyá A1, Corbillo Colom C1, Vercher Agus-tí FJ2, Balanzat Muñoz J2, Gayà Puig A1. 1Fundació Banc de Sang iTeixits de les Illes Balears. 2Servei d’Hematologia. Hospital Can Misses.Eivissa.

La Leucemia Linfoide Crónica (LLC) de células B es la formamás frecuente de leucemia en nuestro entorno. La principal dificul-tad diagnóstica de esta enfermedad radica en la necesidad de dis-poner de una gran cantidad de muestra patológica para realizarlas pruebas necesari as, ya sea por citometría de flujo o por diagnós-tico molecular clásico. En este trabajo describimos una técnica utili-zada en nuestro laboratorio que no sólo permite la realización de undiagnóstico de seguridad con una cantidad limitada de células leu-cémicas sino que posibilita el seguimiento tras el tratamiento y ladeterminación de enfermedad residual en un enfermo. Por otra par-te, la heterogeneidad en el comportamiento clínico de pacientes conLLC dificulta a los clínicos identificar con precisión los pacientes quese puedan beneficiar de estrategias terapéuticas tempranas y agre-sivas y además poder ofrecer a los pacientes información relevantedel pronóstico de su enfermedad. Dada la eficacia potencial de lasnuevas terapias y la voluntad de tratar pacientes en el momento ópti-mo, es cada vez más importante desarrollar técnicas lo suficiente-mente sensibles para identificar los pacientes con peor pronóstico.Los estudios más recientes en esta enfermedad sugieren que real-mente englobaría dos enfermedades diferentes con diferente cursoclínico e implicaciones pronósticas que pueden distinguirse funda-mentalmente mediante la secuencia del reordenamiento monoclo-nal VDJ. La técnica de secuenciación de reordenamientos VDJ delgen de cadenas pesadas de inmunoglobulinas es compleja y no está

al alcance de muchos centros. En el presente trabajo describimos lapuesta a punto y los resultados de la secuenciación de aquellas mues-tras con reordenamientos monoclonales diagnosticados en nuestrolaboratorio.

113. IgM MONOCLONAL CON CAPACIDAD CITOFÍLICA ENLINFOMA LINFOPLASMOCÍTICO. Rodríguez-Martín E, Alca-lá I, González-Porqué P, Martínez-Viñambres E, Neil Hermene-gildo Y, Coll J, Roldán E. Servicio de Inmunología.

El linfoma linfoplasmocítico se caracteriza por la presencia decélulas clonales en diferentes estadios madurativos (linfocitos, info-plasmocitos y células plasmáticas) en proporciones muy variables,dependiendo del enfermo. La población tumoral presenta expresiónleucémica en la mayoría de los pacientes, detectándose en sangre periférica ( SP) y médula ósea (MO), llevando asociada una paraproteínaIgM circ ulante. Por otro lado, la citofilia es una propiedad de la regiónFc de las inmunoglobulinas (Igs) que consiste en la capacidad que pre-senta la Ig para unirse a las células a través de sus receptores para Fc.El caso clínico que se presenta es el de un varón de 75 años con sín-drome constitucional acompañado de vómitos, tos y expectoración.Se realizaron estudios de citometría de flujo en muestras de PAAF, SP,aspirado de MO y líquido pleural. En todas las muestras, excepto enel líquido pleural, se detectó la presencia de dos poblaciones tumora-les de células B, diferenciándose dos estadios madurativos: linfocitosB y linfoplasmocitos. Ambas poblaciones presentaron diferencias ensu fenotipo, siendo kappa de superficie +. La inmunofijaci ón en sue-ro y en líquido pleural detectó la presencia de un pico monoclonalIgM kappa. Asimismo, el estudio inmunofenotípico realizado en líqui-do pleural mostró la alta capacidad citofílica de la Ig clonal, detectán-dose su presencia unida a linfocitos T en ausencia de población tumo-ral linfoide B tras tratamiento. La preincubación de la muestra conEDTA, DTT y a 37ºC no fue capaz de revertir la unión de la Ig a lascélulas T. Además, la incubación de los linfocitos T de un individuosano con el plasma o el líquido pleural del paciente condujo a la uniónde la IgM kappa a la membrana de estas células. Estos datos conclu-yen que la Ig monoclonal de algunos enfermos puede tener una grancapacidad citofílica en su unión a diferentes tipos celulares y que talcapacidad puede llevar a errores en el cálculo del porcentaje de célu-las tumorales.

114.CORRELACION ENTRE EL COMPORTAMIENTO BIOLOGI-CO DE TUMORES DE PROSTATA Y LA EXPRESION DE UNEPITOPO DE CARBOHIDRATO EN MUC-1 RECONOCIDOPOR EL AcMo A10 Y SU RELACION CON ANTICUERPOSDE IgM. Moltó L, García-López Asenjo JA, Fuentes M, CilleroL, Hernández S, Moreno J, Campanario F, Arroyo M, Subiza JL.Departamentos de Análisis Clínicos, Medicina Preventiva, AnatomíaPatológica, Urología y Inmunología. Hospital Clínico San Carlos.Madrid.

Introducción. A10 es un anticuerpo monoclonal de tipo IgMque define un epitopo carbohidrato en MUC-1 y que esta presenteen adenocarcinomas epiteliales humanos. Estudios previos han des-crito la presencia de anticuer pos naturales frente a este epitopo decarbohidrato. Dependiendo de su arquitectura histológica y del per-fil molecular adquirido durante su desarrollo los adenocarcinomas

de próstata pueden comportarse como una enfermedad en progre-sión. Entre los indicadores de recurrencia y progresión están losniveles séricos de PSA y su tiempo de duplicación. El grado de expre-sión y pérdida de glicosilación de mucinas de membrana comoMUC-1 también repercute en la actividad biológica de los adeno-carcinomas. El objetivo de este estudio es valorar la expresión delepitopo de A10 en tumores de próstata y su relaci ón con la inmu-noreactividad de los anticuerpos I gM así como con los niveles séri-cos de PSA.

Resultados. Mediante citometria de flujo hemos observado quelos niveles de reactividad de IgM del suero de individuos sanos fren-te a las líneas de tumor de próstata humanas, DU145 y PC3, se rela-cionan con la expresión del epitopo A10 en carbohidrato de tumorde Ehrlich (ELISA) (p=.001). Por otra parte hemos observado unmayor grado de expresión de A10 en Hiperplasias Benignas de prós-tata en comparación con Adenocarc inomas de próstata (p=.01) asícomo también entre tumores de bajo grado histológico de Gleasonen comparación con tumores de alto grado (p=.001). Los valores séri-cos de PSA al momento del diagnostico histológico aparecen incre-mentados en Adenocarcinomas de próstata de alto grado histológi-co en comparación con los de bajo grado y con Hiperplasias Benig-nas de próstata, con y sin PIN (p=.001 y .003, respectivamente). Ade-más cuanto mayores son los niveles de PSA al diagnostico histoló-gico menores son los niveles de expresión de A10. Por otra parte losAdenocarcinomas de próstata que expresan altos niveles de A10 almomento del diagnóstico histológico responden mejor a los trata-mientos convencionales (Bloqueo Androgénico Completo, Prosta-tectomía Radical, Radioterapia) que los que son A10 negativos omuestran una débil expresión de A10 (p=.041) según niveles de reci-diva de PSA después del tratamiento. En conclusión el grado deexpresión del epitopo A10 se relaciona con el comportamiento bio-lógico de los tumores de próstata humanos y con la inmunoreacti-vidad de los anticuerpos de IgM.

115. CUANTIFICACIÓN DEL COMPONENTE MONOCLONAL ENMIELOMA MÚLTIPLE MEDIANTE ELUCIÓN DEL PRODUC-TO DE INMUNOSUSTRACCIÓN. Gómez-Rial J, Hermenegil-do IN, González-Porqué P, Villar Guimerans LM. Hospital Ramóny Cajal. Madrid.

Introducción. La cuantificación del componente monoclonal seha convertido en un objetivo importante para el seguimiento de lospacientes con Mieloma Múltiple. Las técnicas convencionales de elec-troforesis en geles de Agarosa (EGA) y cuantificación nefelometricapresentan problemas para la separación de la fracción policlonal dela monoclonal. Una técnica de Electroforesis Capilar, la Inmunosus-tracción, permite la caracterización de paraproteínas mediante incu-bación del suero con bolas de agarosa que llevan unidos anticuerposespecíficos frente a las cadenas pesadas y ligeras de las Inmunoglo-bulinas

Objetivo. Puesta a punto de un método para la cuantificación delcomponente monoclonal en el mieloma múltiple utilizando la tecno-logía de inmunosustracción (Beckman-Coulter).

Método. Tras la incubación del suero del paciente con las bolas deagarosa correspondientes, se sometió esta a varios lavados en suerosalino, y se eluyó la inmunoglobulina inmunosustraída mediante incu-bación en un tampón ácido ó básico según el tipo de cadena pesada, yposterior neutralización. La fracción eluída, se separó mediante elec-

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troforesis capilar y se analizó mediante el software de Beckman-Coul-ter. El resultado final se expresa como el porcentaje de inmunoglobu-lina que corresponde al componente monoclonal con respecto a la inmu-noglobulina total.

Resultado. Se han analizado mediante este método una serie depacientes con Mieloma Múltiple, a los cuales se ha realizado la cuan-tificación del pico monoclonal mediante nefelometría/AGE y median-te inmunosustracción. Los resultados obtenidos muestran una mayorsensibilidad y especificidad de este método cuando se le comparacon los que están actualmente en uso así como una alta reproducibi-lidad.

Conclusiones. Se ha puesto a punto un método sensible y repro-ducible para la cuantificación del componente monoclonal en mielo-ma múltiple mediante la elución y posterior separación de la inmu-noglobulina que se une a la matriz sólida durante la inmunosustrac-ción.

116. CORRELACIÓN INVERSA ENTRE LA EXPRESIÓN DE MOLÉ-CULAS MHC DE CLASE I Y EL CRECIMIENTO IN VIVO ENDOS SISTEMAS TUMORALES. Romero I, Berruguilla E, Garri-do C, Linares I, Casares C, Stefanski J, Algarra I, Collado A, Garri-do F, García-Lora AM. Servicio de Análisis Clínicos, Hospital Univer-sitario Virgen de las Nieves, Granada. Departamento de Ciencias de laSalud, Universidad de Jaén.

Se ha desarrollado un modelo tumoral murino, B9, compues-to por diferentes metástasis espontáneas derivadas de un mismoclon tumoral, que presentan diferentes fenotipos MHC de clase I:MN – con un fenotipo positivo; MPA – con un fenotipo MHC declase I negativo, recuperable con IFN-γ; y MPB – con fenotipo nega-tivo para MHC de clase I, e irrecuperable para la molécula L conIFN-γ. También, hemos desarrollado un sistema tumoral humano,Ando-2, compuesto por: una línea celular de melanoma humano,con perdida de un haplotipo HLA; otra línea celular obtenida des-pués del crecimiento en ratones nude, Ando-2nude, con perdidatotal de expresión de moléculas MHC de clase I; y una tercera, obte-nida por la transfección estable del gen HLA-A2 en la línea celu-lar Ando-2, Ando-2-A2.

Se ha comparado el crecimiento in vivo de estas líneas celularesen ratones inmunocompetentes en uno de los sistemas y en ratonesnude en los dos sistemas. Las células fueron inyectadas subcutánea-mente en la pata y el crecimiento local del tumor fue controlado tresveces en semana.

En el sistema B9, las tres líneas mostraron en ratones inmunocom-petentes una correlación inversa entre el crecimiento del tumor y laexpresión de H-2 de clase I: La línea MPB presentó un crecimiento másrápido comparado con la línea MPA, mientras que la línea MN quecomenzó creciendo, finalmente fue rechazada. En ratones nude las treslíneas presentaron crecimiento local, con el siguiente orden:MPB>MPA>MN. En el sistema tumoral Ando-2, en ratones nude, tam-bién se encontró una correlación inversa entre el crecimiento y la expre-sión de HLA de clase I: Ando-2nude presento un mayor crecimiento yes la mas oncogénica; la línea celular Ando-2 creció más lentamente; ypor último, la línea Ando-2-A2, consiguió crecer al principio pero final-mente el tumor fue rechazado.

En estos dos sistemas tumorales, se ha encontrado una correlacióninversa entre el crecimiento in vivo y la expresión de moléculas MHCde clase I en células tumorales.

117. LAS MOLÉCULAS HLA DE CLASE I PRESENTAN UN RITMOCIRCARDIANO DE EXPRESIÓN EN CELULAS TUMORALESY EN LINFOCITOS TRANSFORMADOS. Stefanski J, LinaresDickler I, Romero García I, Maleno I, Berruguilla Pérez E, Garri-do Torrres-Puchol F, García Lora AM. Hospital Universitario Virgende las Nieves.

Diferentes procesos fisiológicos presentan una regulación circadia-na, con ciclos que se repiten aproximadamente cada 24 horas. En mamí-feros este ritmo circadiano es controlado por el núcleo supraquiasmá-tico. Numerosos estudios han mostrado que las propias células perifé-ricas, células inmortalizadas y células en cultivo presentan un reloj cir-cardiano independiente. Estos ciclos circadianos están controlados prin-cipalmente por las familias de genes Clock, Period y Cry ptocrom. Den-tro de la célula, se han descrito muchos genes que presentan una expre-sión circadiana, regulada por los genes mencionados anteriormente. Eneste estudio hemos analizado si la expresión en superficie de moléculasHLA de clase I presentan una expresión circadiana en líneas célulastumorales y en linfocitos transformados con el virus de Epstein-Barr.

Las células en cultivo fueron sincronizadas mediante un shock desuero, y la expresión en superficie de moléculas HLA de clase I fuemedida cada 6 h, por inmunofluorescencia indirecta y lectura por cito-metría de flujo. Se han utilizado una línea celular de melanoma y unalínea de linfocitos transformados con EBV.

Una vez sincronizadas las células en cultivo, los resultados mos-traron que la expresión de moléculas HLA de clase I presenta un rit-mo circadiano tanto en células tumorales como en los linfocitos trans-formados.

La expresión disminuye durante las primeras 12 h después de lasincronización; a continuación, aumenta alcanzando un máximo alas 24 a 30 h, para finalmente decaer a las 36 h. Podemos decir que elciclo empieza a las 12 h y termina a las 36 h, teniendo un ritmo circa-di ano de aproximadamente 24 h..

Los resultados obtenidos muestran que la expresión de moléculasHLA de clase I en estos dos casos de líneas celulares en cultivo presen-ta un ritmo circadiano, abriendo la posibilidad de que en la expresiónde moléculas HLA de clase I desempeñe un papel importante los genesque regulan el ritmo circ adiano a nivel celular.

118. COMPARACIÓN DE 2 ENSAYOS PARA LA DETERMINA-CIÓN DE CADENAS LIGERAS LIBRES EN SUERO ENPACIENTES CON GAMMAPATÍA MONOCLONAL. Moran-deira F1, Soriano A1, Quandt E1, Castro P1, Ruiz E1, Oriol A2, PujolR1, Herrero MJ1. 1Servicio de Inmunologia (LIRAD-BST). 2Servicio deHematologia – ICO del Hospital Universitari Germans Trias i PujolUAB. Badalona.

Introducción. En las gammapatías monoclonales se ha descritouna sobreproducción de cadenas ligeras libres kappa (κ) o lambda (λ),que en muchos casos resulta en una alteración de la ratio κ/λ normalen suero. Estudios previos han demostrado que el valor de esta ratioes de utilidad en el diagnóstico, monitorización y evaluación del pro-nóstico (evolución a malignidad) de estas patologías.

Objetivo. Comparar la sensibilidad de dos sistemas de determi-nación de la ratio κ/λ en suero y su correlación con la clínica en pacien-tes con gammapatía monoclonal.

Pacientes y métodos. Se analizaron 47 muestras de suero pertene-cientes a pacientes con banda monoclonal detectada por inmunofija-

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ción. Se dosificaron las cadenas κ y λ libres mediante nefelómetroutilizando reactivos de 2 proveedores (P1 y P2): uno validado para usoen suero (P1) y otro para orina adaptado a medición en suero (P2), yse calculó la ratio κ/λ de cada suero.

Resultados. De los 47 sueros analizados, 16 (34%) dieron una ratioκ/λ alterada (intervalo de referencia: 0.26-1.65) con los reactivos delP1 y 9 (19%) con los del P2, todos ellos detectados también con los reac-tivos del P1. Los 7 (15%) sueros con resultado discrepante entre P1 yP2 correspondían a positivos reales (3 a mieloma múltiple (MM) deinmunoglobulina intacta, 2 a MM de cadena ligera y 2 a gammapatíamonoclonal de significado incierto).

Conclusiones. Los reactivos del P1 tienen más sensibilidad parala detección de ratios κ/λ alteradas que los del P2. Es importante uti-lizar la técnica más sensible de que se disponga para un mejor diag-nóstico y seguimiento de estos pacientes.

SESIÓN 8: INMUNIDAD E INFECCIÓN

Moderadores: Dr. Francisco Lozano (Barcelona),Dra. Margarita Bofill (Barcelona)

119. LOS NIVELES BASALES DE LINFOCITOS CD8+CD25+ PUE-DEN SER UN MARCADOR PREDICTIVO DE SINDROME DERECONSTITUCION INMUNE TRAS TARGA. García DelgadoR1, Cianchetta Sivori M1, Raso Torres S1, Gorgolas-Hernández deMora M2, Goyenechea A2, Fernández-Guerrero M2. 1Inmunología.2Infecciosas. Fundación Jiménez Díaz-CAPIO.

Objetivos. En los pacientes VIH+ que inician terapia antiretrovi-ral de alta eficacia se puede observar una disminución de la carga viraljunto con un aumento de los linfocitos CD4 y en algunos pacientes estareconstitución inmunológica lleva a una importante reacción inflama-toria o a un deterioro clínico producido por el incremento súbito de surespuesta inmune (Síndrome de Reconstitución Inmunológica). El obje-tivo de este trabajo es encontrar un parámetro inmunológico que pue-da predecir este comportamiento.

Pacientes y Métodos. Se han evaluado 55 pacientes VIH+ naivede tratamiento o sin tratamiento antiretroviral el año anterior al estu-dio, con linfocitos CD4 < de 100 cels/ul y una carga viral de VIH1 >4,5Log. En ellos se han estudiado por citometría de flujo los linfocitos nai-ve y de memoria y marc adores de activación basalmente y durantelos 6 meses siguientes al comienzo de terapia anti-retroviral.

Resultados. En los 5 pacientes que presentaron RSI del aumen-to de los linfocitos CD4 a los seis meses de tratamiento anti-retro-viral fue 8 veces superior al valor basal, mientas que en los que nopresentaron SRI fue de 4 veces su valor basal a 6 meses de trata-miento, siendo el descenso de la carga viral VIH-1 de un 90% conrespecto a su valor basal frente al 70% en los pacientes sin SRI. Laelevación de estos linfocitos CD4 en ambos tipos de pacientes essiempre debida al aumento de los linfocitos CD4CD45RO (memo-ria). Cuando se analizaron los marcadores de activación de los lin-focitos CD4 y CD8 (CD38, HLA-DR, CD25) se encontró una dife-rencia significativa entre los niveles basales de linfocitos CD8CD25entre los pacientes que presentan SRI y los que no (SRI 17 ± 32% vspacientes sin SRI 4 ± 6.8% p= 0.07) c on una disminución marcadaa lo largo del tratamiento de los linfocitos CD8CD25 en los pacien-tes que presentan SRI.

Conclusiones. El nivel basal de los linfocitos CD8CD25 y su evo-lución con el tratamiento antiretroviral podría ser un parámetro inmu-nológico útil para distinguir los pacientes que, con unos CD4 inferiores a 100 células /ml y una carga viral mayor de 4-5 Log, van a presen-tar un síndrome de reconstitución inmune con el inicio de la terapiaanti-retroviral.

120.POLIMORFISMOS EN GENES DE CITOQUINAS IMPLICA-DAS EN INFLAMACIÓN NO ESTÁN ASOCIADOS CON ELRIESGO DE SUFRIR SEPSIS. Guzmán Fulgencio M1, Sirgo Gon-zalez G2, Castillo Rama M1, Bernardo González I1, Mancebo Sie-rra E1, Romo Pasamar E1, Pérez V1, Paz Artal E1, Morales PérezP1. 1Hospital Universitario 12 de Octubre, Madrid. 2Departamento deCuidados Intensivos. Hospital Universitario Joan XXIII, Tarragona.

La sepsis es una patología que se define como la respuesta infla-matoria sistémica a la infecci ón. El objetivo de este estudio es valo-rar si los polimorfismos de genes implicados en inflamación como lossituados en las regiones promotoras de los genes de las citoquinas pro-inflamatoria TNF-a (-308G>A) y anti-inflamatoria IL-10 (-592C>A),incrementan el riesgo de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con107 pacientes sépticos que proceden de la unidad de cuidados inten-sivos Unidad de Cuidados Intensivos del Hospital 12 de Octubre(Madrid, España) y el Hospital Joan XXIII (Tarragona, España) y 107controles. Los distintos genotipos han sido determinados empleandola reacción en cadena de la polimerasa seguida del análisis por frag-mentos de restricción a partir de ADN extraído de sangre periférica.Los resultados obtenidos fueron comparados por el test estadístico deChi-cuadrado aplicando la corrección de Yates . El análisis estadísti-co reveló la falta de diferenci as signific ativas en las frecuencias géni-cas de los polimorfismos estudiados comparados con controles tantoen el polimorfismo del gen TNF-a (p= 0,99) , como en el polimorfismoen el gen IL-10 (p=0,47). Podemos concluir entonces que los polimor-fismos estudiados no estan asociados con el riesgo a sufrir sepsis.

121.EL POLIMORFISMO INSERCIÓN/DELECIÓN EN EL GEN DELA ENZIMA CONVERTIDORA DE ANGIOTENSINA (ACE)ESTÁ ASOCIADOS CON EL RIESGO DE SUFRIR SEPSIS. Guz-mán Fulgencio M1, Sirgo Gonzalez G2, Castillo Rama M1, Bernar-do Gonzalez I1, Mancebo Sierra E1, Romo Pasamar E1, Pérez Ara-das V1, Paz Artal E1, Morales Pérez P1. 1Servicio Inmunología. Hos-pital Universitario 12 Octubre. 2Unidad de Cuidados Intensivos. Hos-pital Universitario Joan XXIII, Tarragona.

La sepsis es una patología que se define como la respuesta infla-matoria sistémica a la infección. El objetivo de este estudio es eva-luar si el polimorfismo Inserci ón /Deleción en el intron 16 del gen dela Enzima Convertidora de Angiotensina (ACE) incrementa o no elriesgo de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con 100 pacientes sép-ticos que proceden de la unidad de cuidados intensivos de dos hospi-tales universitarios y 107 controles. Los distintos genotipos han sidodeterminados mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)y electroforesis en gel de acrilamida. Los resultados obtenidos fueroncomparados por el test estadístico de Chi-cuadrado aplicando la correc-ción de Yates. Los resultados mostraron el genotipo DD en 51 pacien-tes (51%), el genotipo ID en 31 (31%) y el genotipo II in 18 (18%). Lospacientes sépticos mostraban una mayor frecuencia del genotipo DD

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comparados con controles (51% vs 35,5% p =0,035) y del alelo D com-parado con el alelo I (66,5 vs 49,1% p =0,02). Podemos concluir, portanto, que el alelo D de este gen está asociado con el riesgo de sufrirsepsis.

122.SUPRESSION OF INFLAMMATORY RESPONSES BY LABDA-NE-TYPE DITERPENOIDS. Hortelano Blanco S1, de las HerasB2, López R1, Giron N2, Traves PG3, Rodriguez B4, Boscá L3. 1Cen-tro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid. 2Depar-tamento de Farmacología Facultad de Farmacia, Universidad Complu-tense, Madrid. 3Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto SolsCSIC-UAM), Madrid. 4Instituto de Química Orgánica (CSIC), Juan dela Cierva, Madrid.

Diterpenoids are natural products which have been reported topossess a variety of biological properties, including antimicrobial, anti-viral, inmunomodulating and anti-inflammatory activities. As part ofan intensive program of research into the biological activities of terpe-noids, a ser ies of 11 labdane-type diterpenoids (1-11) with various pat-terns of substitution were tested for potential anti-inflammatory acti-vity. Of these compounds, 4 and 11 were selected to evaluate theirinfluence on targets relevant to the regulation of the inflammatory res-ponse in order to investigate the mechanism of action of this class ofcompounds. These diterpenoids reduced the production of nitric oxi-de, prostaglandin E2, and tumor necrosis factor-alpha in LPS-activa-ted RAW 264.7 macrophages, with IC50 in the range 1-10 microM. Inhi-bition of these inflammatory mediators was related to inhibition of theexpression of nitric oxide synthase-2 (NOS-2) and cyclooxygenase-2(COX-2) at the transcriptional level, as determined by western-blot andRT-PCR. Examination of the effects of these diterpenoids on nuclearfactor kappaB (NF-kB) signaling showed that both compounds inhi-bit the phosphorylation of IkBalpha and IkBbeta, preventing theirdegradation and the nuclear translocation of the NF-kB p65 subunit.Inhibition of IKK ac tivity was also observed. These derivatives dis-played significant anti-inflammatory activity in vivo, suppressing mou-se ear edema induced by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)and inhibiting myeloperoxidase activity, an index of neutrophil infil-tration. The anti-inflammatory effects of these labdane diterpenoids,together with their low cell toxicity, suggest potential therapeutic appli-cations in the regulation of the inflammatory response.

123.EL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL HUMANO INFECTAE INDUCE MARCADORES DE ACTIVACIÓN EN LINFOCI-TOS B MURINOS. Rico MA1, Trento A2, Ramos M3, Johnstone C3,del Val M3, Melero JA3, López D1. 1Unidad de Proteomica. 2Unidad deBiología Viral. 3Unidad de Inmunología Viral. Centro Nacional de Micro-biología. ISCIII.

El virus Respiratorio Sincitial Humano (HRSV) es la causa másfrecuente de infecciones respiratorias severas en niños. Aunque lascélulas epiteliales de los conductos respiratorios son la principal dia-na de infección por parte de HRSV, se ha descrito que este virus pue-de también infectar células presentadoras profesionales como macró-fagos y células dendríticas. En dichas células la infecc ión conlleva laexpresión de marcadores de maduración. El presente estudio, demues-tra que linfocitos B (B220+) pr ovenientes de bazo de ratón son suscep-tibles a la infección in vitro por parte de HRSV, probablemente por un

mecanismo dependiente de unión a glicosaminoglicanos. Por el con-trario, HRSV es incapaz de infectar ni linfocitos CD4+ ni CD8+. En lin-focitos B, la infección por HRSV aumenta la expresión de moléculasde MHC de clase II pero no MHC de clase I induciendo además laexpresión del marcador de activación CD86.

124.INTERACCIÓN DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA (VFA)CON CÉLULAS DENDRÍTICAS (DCs): PAPEL DE LA INTER-LEUQUINA-10 (IL-10) EN LA INDUCCIÓN DE UN ESTADODE INMUNOSUPRESIÓN TEMPRANA DURANTE LA INFEC-CIÓN POR VFA EN EL CERDO. Rodríguez Calvo MT1, Díaz SanSegundo F2, Sevilla Hidalgo N1. 1Centro de Investigación en Sani-dad Animal (CISA-INIA). 2Plum Island Animal Disease Center.

Las células dendríticas (DCs) constituyen un elemento crítico enla activación de una respuesta inmune eficaz. En el caso del virus dela fiebre aftosa (VFA), causante de una de las enfermedades más impor-tantes en sanidad animal desde el punto de vista económico, la inter-acción virus-DC y su influencia en la inducción de una respuesta inmu-ne frente a virus es poco conocida. En nuestro laboratorio se ha des-crito que el virus de la fiebre aftosa (VFA) serotipo C es capaz de infec-tar linfocitos in vivo, originando la aparición de linfopenia y depleciónlinfoide. Asimismo, los linfocitos son incapaces de responder frente auna estimulación con mitógeno, lo que indica que los animales seencuentran inmunosuprimidos en el pico de viremia (J. Virol. (2006)80: 2369). En el presente trabajo hemos estudiado el papel de las DCsen esta inmunosupresión. Para ello, DCs fueron diferenciadas a partirde monocitos periféricos (PBMCs) obtenidos de cerdos infectados conVFA en presencia de GM-CSF e IL-4. Estas células pierden su capaci-dad de madurar y presentar antígenos a células T en un ensayo de alo-rreactividad. Asimismo, cuando DCs diferenciadas a partir de PBMCsde cerdos naïve fueron infectadas in vitro con VFA se observó que eranincapaces de activar una respuesta T específica de antígeno. Estos cul-tivos de DCs expuestas al virus producen interleuquina-10 ( IL-10) y, lo que es más interesante, los sobrenadantes de estos cultivos añadi-dos a DCs naïve inducen un estado de inactivación de células T en co-cultivos DCs-células T. Además, sueros procedentes de cerdos infec-tados con VFA muestran altos niveles de IL-10 a tiempos tempranospost-infección. Estos datos sugieren que la IL-10 estaría produciendola inhibición de una respuesta timo dependiente (TD) durante el picode viremia, lo que favorecería la activación de una respuesta timo inde-pendiente (TI) y la consiguiente producción de anticuerpos capaces deeliminar el virus. Actualmente se están realizando experimentos paraevaluar esta posibilidad.

125.NUEVOS VECTORES VACUNALES DE PSEUDO PARTICU-LAS VIRALES DE CALICIVIRUS. Crisci E1, Almanza H2, MenaI2, Gómez-Casado E3, Córdoba L1, Fraile L1, Bárcena J2, MontoyaM1. 1Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Cam-pus de la Universitat Autònoma de Barcelona. 2Centro de Investiga-ción en Sanidad Animal (CISA-INIA), Valdeolmos, Madrid. 3Dpto. Bio-tecnología, INIA, Madrid.

La proteína de la cápsida (VP60) del virus de la enfermedad hemo-rrágica del conejo (RHDV) es capaz de formar pseudo partículas vira-les (VLPs) cuando se expresa en baculovirus (Bárcena et el, 2004). LasVLPs representan un tipo particularmente efectivo de vacunas de subu-

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nidad, puesto que mimetizan la estructura general de las partículasvirales, no contienen material genético infeccioso y resultan muy inmu-nógenas incluso en ausencia de adyuvantes. Además trabajos recien-tes subrayan el potencial inmunomodulador que pueden jugar las VLPsen su interacción con las células dendríticas (CDs), y su capaci dadpara inducir una respuesta inmune frente a epítopos heterólogos. Elobjetivo del estudio ha sido evaluar las interacciones in vitro entre nue-vas VLPs quiméricas con las CDs murinas y su posible papel comovectores vacunales in vivo. Se han construido VLPs quiméricas deRHDV conteniendo el epítopo antigénico de OVA insertado en doslocalizaciones diferentes de la proteína VP60: en el extremo N-termi-nal (2GS-3OVA2) o en un bucle expuesto (306GS-3OVA2). Como con-trol negativo se emplearon VLPs de RHDV sin inserciones. Las dife-rentes VLPs se incubaron con CDs murinas derivadas de medula óseay se analizó la presentación antigénica a un hibridoma específic o quereconoce el péptido antigénico SIINFEKL presentado por MHC de cla-se I. De las diferentes VLPs la más inmunógena resultó ser la que inclu-ía el péptido antigénico en la posición amino terminal (VLP-2GS-3OVA2), con un reconocimiento dependiente de dosis. Se está estu-diando si esta presentación antigénica es dependiente de los interfe-rones de tipo I. La capacidad de inmunogénica de estas construccio-nes in vivo se ha estudiado en ratones hembras C57BL/6 inoculadoscon diferentes dosis de VLPs (8 y 40 μg) tras lo cual se desafió con elvirus vaccinia que expresa OVA. En resumen, la utilización de estosvectores vacunales recombinantes supone una nueva estrategia segu-ra para inducir inmunidad protectora.

126.INMUNOMODULACION EN CERDOS VACUNADOS CONVACUNA VIVA MODIFICADA DEL VIRUS DEL SINDROMEREPRODUCTOR Y RESPIRATORIO PORCINO (PRRSV). Cris-ci E, Fraile L, Gimeno M, Diaz I, Mateu E, Montoya M. Centre deRecerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Univer-sitat Autònoma de Barcelona, Barcelona.

El objetivo de este estudio es evaluar si la administración de uninmunomodulador, cuyo ingrediente principal es el beta-sitosterol,mejora la respuesta inmune en cerdos de engorde a los que se vacu-na con una vacuna viva modificada del virus del síndrome reproduc-tor y respir atorio porci no (MLV PRRS). Esta molécula y su glicósidotiene actividad inmunomoduladora en animales incrementando la acti-vidad Th1. Se utilizaron 24 cerdos distribuidos en 4 grupos experimen-tales (NP/NV, NP/V, P/NV y P/V). 12 animals recibieron immuno-modulador (P) con el alimento durante 8 semanas. A las 13 semanasde edad, 12 animales se vacunaron con MLV PRRS (V) o con suero fisio-lógico (NV). Se obtuvieron células mononucleares (PMBC), se deter-minaron las subpoblaciones celulares por citometría de flujo y se esti-mularon con PHA a diferentes concentraciones. No se observó ningu-na modificación en las subpoblaciones celulares de PBMC estudia-das salvo un incremento significativo en las células dendríticas plas-macitoides en el grupo experimental NP/V. Sin embargo, se observóuna disminución en la respuesta proliferativa por PHA en el grupoexperimental NP/V durante los dos primeros días post-vacunación.Este efecto se revertía si se utilizaba inmunomodulador en los ani-males. No se han observado diferencias significativas en la viremia dePRRS y en el título de anticuerpos neutralizantes entre los grupos expe-rimentales. Por otra parte los niveles de IL-6 es más bajo a los 33 díaspost-administración en el grupo P/V. Los datos obtenidos indican queel tratamiento mejora la respuesta innata y que el daño tisular (como

niveles de IL-6) era menor en el grupo tratado con el inmunomodu-lador. Sin embargo, no se han observado diferencias signifi cativasen la respuesta inmune adquirida. El desarrollo de una estrategia vacu-nal más eficaz frente a este virus es un gran reto científic o y, mien-tras no exista una vacuna eficaz, el uso de este inmunomodulador incre-menta la respuesta inmune contra PRRSV.

127.RESPUESTA ESPECÍFICA DE CÉLULAS T CD4+ Y CD8+ FREN-TE AL VHC EN PACIENTES CON HEPATITIS CRÓNICA CCON Y SIN INFECCIÓN POR VIH. Rallón NI, López M, Gar-cía-Samaniego J, Soriano V, Romero M, Moreno A, Labarga P, Gar-cía-Gascó P, Benito JM. Servicios de Hepatología y Enfermedades Infec-ciosas. Hospital Carlos III. CIBEREHD. Madrid.

Introducción. La respuesta celular frente a VHC es débil en lamayoría de pacientes con hepatitis crónica C (HCC). Esta respuestapuede ser aún menor en pacientes coinfectados por VIH. En este estu-dio se examina el perfil funcional de las células T específicas frente alVHC en pacientes con HCC con y sin infección por VIH.

Métodos. Se midió la respuesta específica de células T CD4+ yCD8+ en 30 pacientes con HCC sin tratamiento previo. 10 eran monoin-fectados por VHC y 20 coinfectados VIH/VHC. El perfil de produc-ción de citoquinas (IFN-γ, IL-2 y TNF-α) en respuesta a 324 péptidossolapantes de cinco proteínas del VHC (E2, p7, NS3, NS5a, NS5b) seanalizó mediante citometría de flujo de 5 colores.

Resultados. La mayoría de pacientes (>80%) en ambos grupos pre-sentó respuesta detectable CD4+ ó CD8+ frente a las proteínas del VHC.Los niveles de respuesta total CD4+ y CD8+ fueron también similaresen ambos grupos. El perfil de citoquinas producidas por células T CD4+y CD8+ específicas estuvo dominado por TNF-α en ambos grupos. Sinembargo, la contribución de las células TNF-α+ a la respuesta CD4+frente a NS3 y NS5a fue significativamente mayor en los pacientesVHC+/VIH+ que en los VHC+/VIH-, mientras que la contribuciónde las células IL2+ a la respuesta CD4+ fue más alta en los pacientesVHC+/VIH- que en los VHC+/VIH+ (p=ns). En pacientes con geno-tipo 1 se observó una asociación entre la contribución de las célulasque producen únicamente TNF-α a la respuesta CD4+ frente a la pro-teína NS5a y la carga viral del VHC (r=0.86, p=0.01).

Conclusiones. El perfil funcional de las células T frente al VHC selimita a una sola función dominada por TNF-α. La capacidad de lascélulas CD4+ para producir IL2 frente al VHC está disminuida enpacientes coi-nfectados por VIH. El nivel más elevado de contribuciónde las células que producen únicamente TNF-α a la respuesta CD4+en pacientes coinfectados, podría explicar el peor control de la repli-cación del VHC en estos pacientes.

128.ANÁLISIS DEL POLIMORFISMO DEL PTPN22 EN LA EVO-LUCIÓN DE LA INFECCIÓN POR VIRUS DE LA HEPATITISC. Montes Cano MA1, García-Lozano JR1, Caro-Oleas JL1, Rome-ro-Gómez M2, Martín J3, Aguilar-Reina J4, Núñez-Roldán A1, Gon-zález-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunología. HU Virgen del Rocío.Sevilla. 2Servicio de Digestivo de Hospital Universitario de Valme. Sevi-lla. 3Instituto de Parasitología y Biomedicina "López Neyra". Granada.4Sección de Hepatología del Hospital Universitario Virgen del Rocío.

Introducción. La evolución de la infección por virus de la hepa-titis C (HCV) presenta grandes diferencias entre los pacientes que podrí-

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an estar influenciadas por factores genéticos del huésped. El genPTPN22 codifica una proteína intracelular que interviene en la regu-lación de la activación de las células T, NK, y neutrófilos y que se harelacionado con la susceptibilidad a enfermedades autoinmunes e infec-ciosas.

Objetivos. Analizar la posible asociación del SNP C1858T delgen PTPN22 en el desarrollo de hepatitis crónica, en la evoluciónde la misma y en la respuesta al tratamiento en pacientes con infec-ción VHC. Pacientes y Métodos: Se incluyeron 353 pacientes de loscuales 69 eran aclaramientos virales espontáneos (AVE) y 284 pacien-tes con infección crónica (IC). Los pacientes con infección crónicase estratificaron según el índice de Scheuer de fibrosis en F0-F2 (n=202)y F3-F4 (n=82), y según su respuesta al tratamiento en individuos conrespuesta sostenida (SR, n=105) y sin respuesta sostenida (NSR,n=110). El genotipado del SNP C1858T rs2476601 se realizó utilizan-do sondas TaqMan. Los resultados se analizaron utilizando la chi cua-drado. Se consideraron significativos valores de p<0.05 y con tenden-cia valores de p entre 0.25 y 0.05.

Resultados. No se encontraron diferencias signific ativas en la dis-tribución de frecuencias del polimorfismo analizado entre el grupo depacientes con AVE (92.5% CC, 7.5% CT+TT) y el grupo de pacientescon IC (87.5% CC, 12.5% CT+TT, p=0.6). Tampoco se encontraron dife-rencias significativas entre los grupos de pacientes en estadio F0-F2 yF3-F4 (88.5% CC y 11.5% CT+TT vs. 85.2% CC y 14.8% CT+TT respec-tivamente, p=0.5). Por último no se encontraron diferencias entre elgrupo RS y el NRS (85.7 CC y 14.3% CT+TT vs. 88.2% y 11.8% res-pectivamente, p=0.6).

Conclusión. El polimorfismo C1858T del gen PTPN22 no parecejugar un papel ni en la susceptibilidad a la infección ni en la evoluciónde la enfermedad por este virus.

129.POLIMORFISMO DEL CODÓN 25 DEL GEN TGF-BETA-11 ENLA EVOLUCIÓN DE LA INFECCIÓN POR VIRUS DE LAHEPATITIS C. Montes-Cano MA1, García-Lozano JR1, Dávila B1,Romero M2, Aguilar-Reina J3, Núñez-Roldán A1, González-Escri-bano MF1. 1Servicio de Inmunología. HU Virgen del Rocío. Sevilla. 2Ser-vicio de Digestivo de Hospital Universitario. Sevilla. 3Sección de Hepa-tología. HU Virgen del Rocío. Sevilla.

Introducción. La evolución de la infección por virus de la hepa-titis C (HCV) presenta grandes diferencias entre los pacientes que podrí-an estar influenciadas por factores genéticos del huésped. El polimor-fismo Arg25Pro en el gen TGF-beta-1 podría relacionarse con diferen-cias en los niveles de la citocina, de manera que los individuos Arg/Argpresentarían niveles mas elevados de la misma que podrían relacio-narse con una peor r espuesta antiviral.

Objetivos. Analizar la posible asociación del polimorfismoArg25Pro del gen TGF-beta-1 en el desarrollo de hepatitis crónica, enla evolución de la misma y en la respuesta al tratamiento en pacientescon infección por VHC.

Pacientes y Métodos. Se incluyeron 353 pacientes de los cuales 69eran aclaramientos virales espontáneos (AVE) y 284 pacientes con infec-ción crónica (IC). Los pacientes con infección crónica se estratificaronsegún el índice de Scheuer de fibrosis en F0-F2 (n=202) y F3-F4 (n=82),y según su respuesta a la terapia antiviral en individuos con respues-ta sostenida (SR, n=135) y sin respuesta sostenida (NSR, n=113). Elgenotipado se realizó mediante PCR-RFLP con el enzima de restric-ción FseI. El análisis se realizó utilizando la chi cuadrado. Se consi-

deraron significativos valores de p<0.05 y con tendencia valores de pentre 0.25 y 0.05.

Resultados. No se encontraron diferencias significativas en la dis-tribución de frecuencias del polimorfismo analizado entre los pacien-tes con AVE (87.7% CC, 12.3% CG+GG) y los pacientes con IC (84.1%CC, 15.8% CG+GG, p=0.5) ni entre los grupos F0-F2 y F3-F4 (82.7% CCy 17.3% CG+GG vs. 87.8% CC y 12.2% CG+GG respectivamente, p=0.3).Al comparar el grupo RS y el NRS se encontró una tendencia hacia unamayor frecuencia de individuos Arg/Arg en el grupo NRS (79.2 CCy 20.8% CG+GG en el grupo RS vs. 86.7% y 13.3% en el grupo NRS,p=0.12).

Conclusión. No se puede descartar cierta influencia del polimor-fismo Arg25Pro del gen TGF-beta1 en la respuesta al tratamiento anti-viral en la infección por HCV.

130.LA PROTEINA LISOSOMAL LIMP-2 PERTENECE A LOSCOMPONENTES DEL SISTEMA INMUNE INNATO LIGADOA RAB5A FRENTE A LISTERIA MONOCYTOGENES. Fernán-dez Prieto L, Madrazo Toca F, Gómez López MT, del Cerro Vadi-llo E, Carrasco Marin E, Alvarez Dominguez C. Hospital Universi-tario Marqués de Valdecilla-IFIMA

La inmunidad innata frente a Listeria monocytogenes dependede la degradación bacteriana dentro de los fagosomas. Describimosel papel de la proteína de membrana lisosomal, Limp-2/lgp85/CD36-like, como componente de los mecanismos bactericidas no oxidati-vos de las células hospedadoras de este patógeno. La acción de Limp-2 está ligada a la activación de Rab5a y se restringe al ambiente fago-somal. Limp-2 ejerce su acción listericida controlando las interacio-nes con los endosomas tardíos-lisosomas que transforman el lumeny la membrana fagosomal que contienen a este patógeno. Sin embar-go, la acción de Limp-2 no se restringe solo a células permisivas parael crecimiento de este patógeno, sino también a los macrofagos y a larespuesta innata global, lo cuál se observa por un incremento 10 vecesmás alto en la tasa bacteriana de los bazos de ratones defic ientesgeneticamente en Limp-2. Estos resultados forman parte de la estra-tegia intracellular de este patógeno para evitar la degradación liso-somal.

131.AFRICAN SWINE FEVER VIRUS A238L PROTEIN BLOCKSTHE HOST CELL ANTIVIRAL INFLAMMATORY RESPONSETHROUGH A DIRECT INHIBITION ON PKC-THETA-MEDIA-TED P300 TRANSACTIVATION. González Granja A2, GarcíaSánchez E1, Sabina Villar P1, López Carrascosa A1, Fresno Escu-dero M1, Revilla Novella Y1. 1Centro de Biología Molecular. 2CáncerResearch UK London Research Institute.

During a viral infection, reprogramming of the host cell geneexpression pattern is required, to establish an adequate antiviralresponse. The transcriptional coactivators p300 and CBP play a cen-tral role in this regulation by promoting the assembly of transcrip-tion enhancer complexes to specific promoters of immune and pro-inflammatory genes. Here we show that the protein A238L enco-ded by African swine fever virus counteracts the host cell inflam-matory response through the control of p300 transactivation. Byusing DNA-protein pull-down assays with biotinilated DNA spe-cific probes, we demonstrate that A238L inhibits the expression of

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the enzyme COX-2 and the cytokines TNF-alpha and IL-2 by pre-venting the recruitment of p300 to the enhanceosome formed ontheir promoters. Furthermore, we report that A238L inhibits theactivity mediated by a GAL4-p300 reporter construction of the ami-no terminal TAD of p300 during the viral infec tion, and that theamino terminal CH1 regulatory region of p300 is essential in theA238L-mediated inhibition of the inflammatory response. Impor-tantly, through specific mutagenesis analysis, we found that theresidue serine 384 of p300 is required for the viral protein to accom-plish its inhibitory function and that PKC-theta completely rever-ted this inhibition, thus showing that this signaling pathway is inter-fered by A238L during the viral infection. These findings shed newlight on how viruses alter the host cell antiviral gene expressionpattern through the blockade of the p300 activity, which representsa new and sophisticated viral mechanism to evade the inflamma-tory and immune defensive responses.

132.RESPUESTA VACUNAL A S. PNEUMONIAE EN PACIENTESCON DIFERENTE GRADO DE TRAUMATISMO ESPLENICO.Troya-Diaz J1, Oller-Sales B1, Martínez-Arconada MJ2, Pacha MA1,Rodrigo MJ3, Roca J4, Rodríguez N1, Fernández-Llamazares J1,Pujol-Borrell R2, Martínez-Caceres E2. 1Servicio de Cirugía Gene-ral y Digestiva. Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. UAB.Badalona. 2Servicio de Inmunologia (LIRAD-BST). Hospital Universi-tario Germans Trias i Pujol. UAB. Badalona. 3Sección Inmunología. Hos-pital General Vall d’ Hebrón. UAB: Barcelona. 4Servicio de Epidemio-logia. Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. UAB. Badalona.

Desde que en 1952 se estableció la relación clínica entre esplenec-tomía y riesgo de sepsis, se ha introducido una actitud terapéuticamás conservadora ante el traumatismo esplénico (TE), incluso enbazos con desvascularización y destrucción tisular importante. Sedesconoce el grado de afectación de su función inmunológica. Obje-tivo: Cuantific ar la función esplénica en un grupo de pacientes condiferente grado de TE y en relación al tratamiento recibido: conser-vador no quirúrgico, exéretico total o autotrasplante Metodología: 1)Anamnesis (infecciones); 2) Hematológico: pits y corpúsculos Howell-Joly; 3) Estudio isotópico dinámico; 4) Inmunológico: poblaciones lin-focitarias y respuesta vacunal a S. pneumoniae (IgG e IgM) y Hinfluenzae (IgG). Análisis estadístico test no paramétricos KruskalWallis y Willcoxon (SAS9.1.3). SE si P<0,05 Resultados: se han ana-lizado 41 pacientes con TE distribuidos según la presencia de tejidoesplénico en: A) trat. conservador (n=26); B) autotrasplante (n=5); C)esplenectomía±esplenosis (n=10). No se han encontrado diferenciasdentro del grupo A independientemente del grado de lesión (leve: I-III, severo: IV-V) . Comparando el grupo A con pacientes interveni-dos (grupos B, C), se ha detectado incremento del % de “pits”(P<.0001) y corpúsculos (P=0.0002), y descenso en % CD3+ (P= 0.0005),CD4+ (P=0.0006), % y MFI de CD19+CD54+ (P= 0.0019 y P= 0.0166)),así como del % de células CD19+IgMhighIgDlow implicada en la res-puesta T-independiente (TI) (P=0.0036) en los grupos intervenidos.Estas diferencias se mantienen cuando se comparan los tres grupospor separado, si bien el grupo B (autotrasplante) es más similar algrupo A. Todos los pacientes han respondido a H. Influenzae y hanpresentado respuestas IgG valorables a S. pneumoniae, aunque conincremento menor en los pacientes intervenidos (B,C). La respuestaanti-S. pneumoniae IgM se ve mermada en los pacientes del grupoC. Así mismo, en el grupo A los traumatismos graves (IV-V) pre-

sentan menor incremento en comparación con los leves, lo que obli-ga a cuestionar su funcionalismo en cuanto a la respuesta rápida aAg TI-2.

133.VACUNA COMBINADA DNA/MVA FRENTE AL VIRUS DELA LENGUA AZUL: EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA INMU-NE PROTECTORA EN UN MODELO DE RATÓN. Calvo Pini-lla E, Sevilla N, Ortego J. CISA-INIA.

El virus de la lengua azul (BTV) causa una enfermedad infec cio-sa, transmitida por mosquitos Culicoides, que afecta a rumiantes y estáampliamente distribuida por todo el mundo. Las vacunas atenuadase inactivadas empleadas hasta el momento no son del todo eficaces niseguras. Las vacunas DNA y los vectores vacunales basados en pox-virus son una buena estrategia para inducir protección frente a otrasenfermedades. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de una vacu-na marcadora recombinante basada en DNA y virus vaccinia recom-binante cepa Ankara (MVA) que sea segura y efectiva, permitiendodiferenciar entre animales vacunados e infectados. Los segmentos genó-micos 2 y 6 del virus BTV-4/Menorca, que codifican las proteínas dela cápsida exterior VP2 y VP5 respectivamente, se amplific aron median-te RT-PCR y fueron clonados en el vector de expresión pcDNA3, bajoel control del promotor de citomegalovirus humano (CMV), y en elplásmido de transferencia del virus vaccinia pSC11. Se generaron virusMVA recombinantes mediante recombinación homóloga en el locus dela timidina quinasa y se purif icaron mediante selección por el gen mar-cador LacZ. En ambos vectores se observó un alto nivel de expresiónde las proteínas VP2 y VP5 mediante inmunoprecipitación y se detec-tó mRNA mediante RT-PCR. El análisis de la respuesta inmune des-pués de la vacunación con DNAs desnudos y rMVAs expresando estasproteínas se evaluó en ratones C57BL/6. Los ratones fueron inocula-dos con una primera dosis de pcDNA3-VP2/VP5 y una segunda dosisde rMVAs-VP2/VP5 detectándose altos títulos de anticuerpos neutra-lizantes frente a BTV-4 (log VNT=2). Estos títulos se mantuvieron almenos 100 días después de la inmunización. La inducc ión de la res-puesta T producida en estos ratones vacunados está siendo analizada.Estos datos indican que la vacunación combinada DNA-MVA puedeser muy útil para inducir inmunidad protectora frente al virus BTV,evitando los problemas inherentes a las vacunas vivas atenuadas.

134.NUEVOS VECTORES VACUNALES CONTRA LA INFLUEN-ZA BASADOS EN EL VIRUS DE LA PSEUDORRABIA POR-CINA. Gómez-Casado E1, Mena I2, Crisci E3, Fraile L3, CórdobaL3, Bárcena J2, Montoya M3. CISA-INI.

La enfermedad de Aujeszky (EA) o pseudorrabia (PR) está causa-da por un alfaherpesvirus porcino tipo 1 (PRV). El PRV se usa con éxi-to como vacuna contra la propia EA y frente a otros patógenos vira-les porcinos. Utilizando el modelo murino, se ha estudiado el compor-tamiento de nuevos vectores PRV con células dendríticas (CDs) in vitro,y su papel como vectores vacunales in vivo contra el virus de la influen-za murina. Se han generado dos virus recombinantes (PRVr) defecti-vos (gE-/gI-/TK-) expresando uno de ellos la proteína M2 del virusde la gripe murina en fusión a la proteína GFP (PRV-M2-GFP), y el otrovirus con la fusión de la proteína modelo OVA a EGFP (PRV-OVA-GFP). Los PRVr se incubaron in vitro con CDs murinas derivadas demedula ósea y se analizó la presentación antigénica mediante un hibri-

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doma específico que reconoc e el péptido antigénico de OVA (SIIN-FEKL) presentado por MHC de clase I. Las CDs infectadas a una mul-tiplicidad de infección de 1,5 con el PRV-OVA-GFP eran capaces depresentar el péptido antigénico en superficie. La capacidad inmuno-génica de estas construcciones se ha estudiado in vivo en ratonesBALB/C que se infectaron con diferentes dosis (10exp4 y 10exp5pfu/ratón), tras la cuales se desafió con el virus PR8 de la influenza.Mediante Elispot, se evaluó la producción de células productoras deIFNγ estimuladas con PR8 y PRV, y se utilizaron pentámerosespecíficos MHCI-HYLSTQSAL (péptido GFP) para la detección decélulas CD8+ específicas. La respuesta más potente se detectó con lainmunización de PRV a una dosis de 10exp4 pfu/ratón con 2 inmuni-zaciones. El análisis de las células CD8+ y pentámeros+ por citometríade flujo ha confirmado la capacidad de estos vectores para inducir célu-las CD8+ específicas contra el antígeno exógeno. En resumen, la uti-lización de estos vectores vacunales recombinantes supone una nue-va estrategia para intentar inducir una inmunidad protectora frente alvirus de la influenza.

135.VARIANTES EN EL GEN DE LA LECTINA DE UNIÓN AMANOSA (MBL) Y SU ASOCIACIÓN CON TUBERCULOSISEN CANTABRIA. Lavín-Alconero L, Sánchez-Velasco P, VillegasN, Ausín F, Leyva-Cobián F, Gonzalo Ocejo-Vinyals J. HospitalUniversitario Marqués de Valdecilla.

Introducción. La lectina de unión a manosa (mannose binding lec-tin, MBL) es una proteína sérica que funciona principalmente comoopsonina, uniéndose a patógenos y activando el complemento a tra-vés de la vía de las lectinas. Se han descrito tres variantes estructura-les en el exón 1 que resultan en una funcionalidad disminuida de laMBL y tres polimorfismos en el promotor de la región 5’ no traducidadel gen, que afectan a la expresión de la proteína. Se han identificado 7 haplotipos diferentes, derivados de estas variantes, los cualesdan lugar a 28 diplotipos diferentes. Se han comunicado resultadoscontradictorios sobre la asociación de ciertos diplotipos y susceptibi-lidad o resistencia a tuberculosis en diferentes poblaciones. El objeti-vo de este trabajo ha sido comprobar si en nuestra población, existealguna asociaci ón entre las variantes genéticas de MBL y tuberculosispulmonar activa

Materiales y Métodos. Se analizaron las diferentes variacionesestructurales y polimorfismos del gen MBL2 mediante la técnica dePCR e hibridación r eversa en tira (INNO-LiPA MBL2, Innogenetics)en 107 pacientes con tuberculosis pulmonar activa (VIH negativos) yen 294 donantes de sangre sanos.

Resultados. No hubo diferencias en la frecuencia de los diferen-tes alelos ni haplotipos del gen MBL entre controles sanos y pacien-tes con tuberculosis. salvo en el caso del alelo D y del haplotipo HYPD(2,34% en tuberculosos vs 6,97% en controles, p < 0.01). Respecto a losdiplotipos, sólo HYPD/HYPA resultó ser más frecuente en controlesque en tuberculosos (4.1% vs 0%).

Conclusión. Se han publicado resultados contradictorios sobre laasociación entre las diferentes variantes genéticas de MBL y la tuber-culosis. Los resultados obtenidos en este estudio no aportan eviden-cias convincentes de asociación entre las difer entes variantes genéti-cas de MBL y la tuberculosis pulmonar activa a pesar de las diferen-cias encontradas. Probablemente la conjunción con otros factores gené-ticos sea lo que determine la susceptibilidad o resistencia a la infeccióntuberculosa.

136.ASOCIACIÓN ENTRE LOS POLIMORFISMOS FUNCIONA-LES -403 G/A Y -28 C/G DE RANTES (CCL5) Y TUBERCULO-SIS EN CANTABRIA. Sánchez-Castañón M, Baquero Mejía I,Sánchez-Velasco P, Ausín Ortega F, Leyva-Cobián F, Gonzalo Oce-jo-Vinyals J. Hospital Universitario Marqués de Valdecilla.

Introducción. Las quimiocinas juegan un papel fundamental enel reclutamiento de leucocitos durante la formación de los granulomasen la infección tuberculosa. Apenas existen estudios que relacionenpolimorfismos funcionales de quimiocinas con susceptibilidad o resis-tencia a la infección por Mycobaterium tuberculosis. El objetivo de esteestudio ha consistido en analizar si dos polimorfismos del promotorde RANTES (-403 G/A y -28 C/G) se asocian a la infec ción tubercu-losa en Cantabria.

Materiales y Métodos. Para el estudio del polimorfismo RANTES-403 G/A se estudiaron 69 pacientes con tuberculosis pulmonar acti-va (VIH negativos) y 70 donantes de sangre sanos. El estudio del poli-morfismo RANTES -28 G/A se realizó en 77 pacientes con tuberculo-sis pulmonar activa (VIH negativos) y en 56 donantes de sangre sanos.Se utilizó la técnica de PCR-RFLP. Los productos de PCR fueron dige-ridos con Mae III para el polimorfismo -403 G/A y Mnl I para el -28G/C. El análisis de los fragmentos se realizó mediante electroforesisen gel de agarosa.

Resultados. Nueve pacientes con tuberculosis eran homocigotospara el polimorfismo -403 G/A frente a ninguno en el grupo control(p = 0.0014), 19 eran heteroci gotos frente a 7 controles (p = 0.0093) y41 presentaban un genotipo salvaje frente a 63 en el grupo control (p< 0.0001). En el caso del polimorfismo -28 G/C, 6 pacientes eran homo-cigotos (ninguno entre los controles, p = 0.039), 14 pacientes eran hete-rozigotos (1 en el grupo control, p = 0.004). En el grupo control, 55 pre-sentaban un genotipo salvaje frente a 57 pacientes con tuberculosis(p = 0.0001).

Conclusión. La diferenc ia estadísticamente significativa en laprevalencia de ambos polimorfismos sugiere la existencia de una aso-ciación entre estos y susceptibilidad a la tuberculosis. Son necesariosestudios más amplios para confirmar esta asociación entre variacio-nes funcionales en el promotor de RANTES y tuberculosis pulmonaractiva.

137.VACUNAS DNA CONTRA EL VIRUS DE LA FIEBRE DELVALLE DEL RIFT: ESTUDIOS DE PROTECCIÓN EN RATO-NES TRANSGÉNICOS IFNAR -/-. Martin Folgar R, LorenzoG, Hevia E, Brun A. Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA-INIA).

El virus de la Fiebre del Valle del Rift (RVFV) es un bunyavirusque afecta a animales y al hombre, pudiendo ocasionar en este hospe-dador los síntomas clásicos de una fiebre hemorrágica. En la actuali-dad existen diferentes tipos de vacunas para esta enfermedad, tantovacunas inactivadas como atenuadas, sin embargo debido a los pro-blemas que éstas generan, ya sea por su carácter teratogénico o bienpor la necesidad de varias dosis debido a su baja inmumogenicidad,sería necesario generar nuevas vacunas más efectivas y mejor tolera-das como las vacunas basadas en inmunización con DNA. Objetivos.El objetivo de nuestro trabajo se ha basado en el estudio de la capaci-dad de protección de construcciones DNA que incluyen secuencias delas glicoproteínas G2/G1 y la Nucleoproteína del virus, mediante lainmunización de ratones IFNAR -/- susceptibles a la infección con la

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cepa atenuada MP12, así como su relación con la respuesta humoralgenerada tras la inmunización. Inmunización y desafío: Los ratonesrecibieron 2 dosis con 100μg de DNA vía im. Se analizó la presencia deanticuerpos neutralizantes en los sueros pre y post desafío y se reco-gier on muestras de diferentes órganos con el objeto de detectar vire-mia. Resultados: Hemos obtenido protección total con las construccio-nes pCMV-G2/G1 y protección parcial con pCMV-N y la combinaciónpCMV-G2/G1 + pCMV-N. Mientras que en los animales inmunizadoscon pCMV-G2/G1 se pudo establecer una correlación entre proteccióny presencia de anticuerpos neutralizantes específicos de las glicopro-teínas virales, en el resto de animales dicha correlación no se pudo esta-blecer sugiriendo que otros mecanismos inmunológicos podrían estarimplicados en protección. Conclusiones: Los resultados obtenidosdemuestran la capacidad inmunogénica de las construcciones DNAgeneradas y su capacidad para conferir protección en el modelo deratón utilizado.

138.ANALYSIS OF THE NK CELL-MEDIATED RESPONSE TOHUMAN CYTOMEGALOVIRUS-INFECTED MYELOID DEN-DRITIC CELLS. Magri G1, Saez A1, Romo N1, Angulo A2, Lopez-Botet M1. 1AUniversitat pompeu Fabra (DCEXS). 2Institut d'Investi-gacions Biomèdiques August Pi I Sunyer.

Human cytomegalovirus (HCMV) is a prototypic betaherpesvirusthat infects cell types including fibroblasts, epithelial, smooth muscle,endothelial and hematopoietic cells. In healthy immunocompetentindividuals HCMV persists as a subclinical, lifelong latent infectionand myeloid dendritic cell (DC) progenitors are considered to be amain HCMV reservoir. In the present study we have set up an experi-mental system to analyse the NK cell response against HCMV-infec-ted myeloid dendritic cells (mDC) derived from monocytes. To thisend, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and purif ied NK cellpopulations obtained from HCMV-seronegative donors were co-cul-tured with autologous mDC infected with the TB40/E HCMV strain;the NK cell phenotype and function were subsequently analysed.Expression of HLA class I antigens was downregulated in infectedmDC that were detected by immunofluorescence staining with an antiIE1 mAb. NK cells specifically reacted to HCMV-infected mDC asshown by IFN gamma secretion and upregulation of the surface espres-sion of CD69 and CD25 and NKp30 molecules. No response was detec-ted when NK cells were co-c ultured with mock-infected mDC or cellstreated with UV-inactivated virus. Studies using a panel of blockingmAbs are in progress to assess the participation of triggering NK cellreceptors in this process.

139.BIOSENSOR ELECTROQUÍMICO PARA LA INMUNODETEC-CIÓN DE ANTICUERPOS ESPECÍFICOS FRENTE AL ANTÍ-GENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE HEPATITIS B(HBSAG). Díaz B1, Sánchez-Espinel C1, Ambrosi A2, de la Esco-sura A2, Merkoçi A2, Faro J1,3, González-Fernández A1. 1Grupo deInmunología. Edificio Ciencias Experimentales. Universidad de Vigo.2Grupo de Nanobioelectrónica y Biosensores. Institut Català de Nano-tecnologia. Campus UAB. Bellaterra. Barcelona. 3Instituto Gulbenkiande Ciência, Oeiras, Portugal.

Introducción. El campo de la nanotecnología y el desarrollo debiosensores basados en métodos de detección electroquímicos amplía

el abanico de los diferentes métodos de inmunodetección utilizadosactualmente en la práctica clínica, c omo el MEIA (Inmunoensayo pormicropartícula) y el CMIA (Inmunoensayo Magnético Quimio-lumi-niscente), y supone la posibilidad de diseñar nuevas técnicas más rápi-das, sensibles, con menor cantidad de muestra y a un menor coste quelas técnicas tradicionales.

Objetivo. Desarrollo de una nueva técnica electroquímica de detec-ción del antígeno de superficie de hepatitis B (HBsAg), basada en eluso de anticuerpos conjugados con nanopartículas de oro (AuNPs),que actúan como marca electroactiva, y de micropartíc ulas paramag-néticas (MPs) que actúan como soporte de las reacciones inmunológi-cas. La detección electroquímic a de las AuNPs se lleva a cabo de mane-ra direc ta, sin necesidad de oxidación pr evia mediante agentes quí-micos.

Metodología. La proteína recombinante de antígeno HBsAg fueunida covalentemente a la superfic ie de las MPs (tosylactivated). EstasMPs fueron incubadas con diferentes concentraciones de anticuerpomonoclonal (AcMo) de ratón (IgG) anti-HBsAg. A continuac ión, seincubaron las MPs con anticuerpos policlonales de cabra anti-IgG deratón, previamente conjugados a AuNPs de 15 nm de diámetro. Des-pués de cada incubación, el exceso de reactivos fue separado de lasMPs usando un electroimán. Las AuNPs fueron detectadas electroquí-micamente, siendo proporcional la señal electroquímica a la cantidadde IgG anti-HBsAg presente en la muestra.

Resultados. Los resultados muestran que este método per-mite la detección de anticuerpos específicos de hepatitis B en mues-tras. El nivel de detección fue de 1,6 ng/ml de AcMo de ratón anti-HBsAg, inferi or al obtenido por la técnica de ELISA ( 4 ng/ml).Actualmente estamos probando muestras de sueros de ratonesinmunizados con HBsAg y de donantes vacunados, y los resulta-dos preliminares indican la validez del método con muestras rea-les.

Conclusión. Los biosensores electroquímicos basados en el uso deAuNPs como marca pueden ser aplicados con éxito para la determi-nación de anticuerpos específicos del antígeno HBsAg. Este ensayopodría ser automatizado y extendido a otros Ags en el futuro, y opti-mizado para la medición de Ags en pequeñas cantidades de mues-tra.

140.POLIMORFISMO DE LOS GENES TGF-μ1 E IL-6 EN PACIEN-TES DE BRUCELOSIS. Bravo MJ1, Lavado Valenzuela R1, de DiosColmenero J2, Alonso A1, Caballero A1. 1Servicio de Inmunología y2Servicio de Enfermedades Infecciosas, Hospital Universitario CarlosHaya, Málaga.

Introducción. Los polimorfismos genéticos que afectan a los nive-les de producción de determinadas citoquinas son determinantes deriesgo, severidad y/o protección para algunas enfermedades infec-ciosas. Se han identificado dos polimorfismos en el gen del factor decrecimiento (TGF)-β1, en la posiciones +869 y +915, que producenvariaciones en los codones 10 (Leu por Pro) y 25 (Arg por Pro). Éstosse asocian a diferentes niveles de producción de TGF-β1. Por otra par-te, se ha descrito un polimorfismo en el promotor del gen de la IL-6en la posición -174 (G/C), que se ha asociado con diversas enferme-dades.

Objetivo. Evaluar la asociación entre los polimorfismos del T+869Cy G+915C en el exón 1 del gen del TGF-β1 y del promotor -174 (G/C)del gen de la IL-6 y la susceptibilidad a la brucelosis.

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Métodos. Hemos tipado 82 pacientes de brucelosis y 102 contro-les sanos de la misma área geográfica para los polimorfimos en loscodones 10 y 25 del gen del TGF-β1, y el del promotor de la IL-6 en laposición -174 por métodos basados en PCR-SSP.

Resultados. El genotipo T/T G/G del gen del TGF-β1 se encon-tró aumentado en pacientes cuando fue comparado con controles(49% vs. 32%) P=0.02; OR = 1.99 (1.05-3.80), y la frecuencia del geno-tipo T/C G/G fue menos frecuente en los pacientes que en el grupocontrol (32% vs. 49%) P=0.01; OR=0.48 (0.25-0.92). El genotipo CC delcodón 10 se encontraba aumentado en pacientes que presentaban for-mas focales de la enfermedad comparados con los que no desarrolla-ban formas focales (19% vs. 4%), P=0.03; OR=0.19 (0.02-1.10). No seencontraron diferencias de las variantes de la IL-6 entre pacientes ycontroles.

Conclusiones. Estos resultados sugieren que el polimorfismo delgen del TGF-β1 podría estar involucrado en la susceptibilidad frentea la brucelosis y en el desarrollo de formas focales en un grupo depacientes del sur de España, aunque serían necesarios estudios poste-riores para confirmar este hallazgo.

141.ACTIVACIÓN DE LAS MAP KINASAS EN HEPATOCITOSMURINOS TIB-73 POR OLIGONUCLEÓTIDOS SINTÉTICOS.Martín-Orozco E, Chicano A, Ruíz-Alcaraz AJ, Lizana A, Martí-nez-Esparza M, Hernández-Caselles T, García-Penarrubia P. Uni-versidad de Murcia.

Objetivos. En este trabajo nos planteamos realizar un estudio pros-pectivo de la expresión de TLR9 y TLR4 en una línea de hepatocitosmurinos denominada TIB-73 y compararlo con otra línea de célulasmacrofágicas conocida como J774, mediante las técnicas de micros-copía confocal y Western blot. Adicionalmente nos planteamos estu-diar el papel que podrían desempeñar las MAP kinasas ERK 1/2 y p38en la señalización intracelular inducida por la estimulación con oligo-nucleótidos con secuencias CpG y no-CpG y estructura de tipo fosfo-diester o fosforotioato.

Resultados. Los hepatocitos TIB-73 expresan las proteínas TLR9y TLR4. La estimulación con oligos CpG y no-CpG activa las vías deseñalización mediadas por ERK 1/2 tanto en los hepatocitos TIB-73, como en los macrófagos J774. Como era de esperar, los oligos aná-logos de tipo fosforotioato con secuencias CpG y no-CpG inducenniveles mayores de fosforilación de ERK1/2 en células TIB-73, supe-riores incluso a las inducidas en células J774 bajo las mismas condi-ciones, y también un nivel menor de activación de p38. La fosforila-ción de ERK 1/2 inducida por oligonucleótidos sintéticos es depen-diente de la dosis, y alcanza un nivel máximo a 100 mg/ml. El pre-tratamiento de los hepatocitos con un inhibidor de ERK 1/2 incre-mentó la fosforilación de p38.

Discusión y Conclusiones. Los hepatocitos TIB-73 expresan demodo constitutivo TLR9 y TLR4 y responden a la estimulación con oli-gos sintéticos mediante una intensa fosforilación de ERK1/2 y unamoderada fosforilación de p38, de una manera independiente de laexistencia de motivos CpG. Cuando se bloquea ERK 1/2 por medio deun inhibidor específico, utilizan como vía alternativa la mediada porp38. Nuestros resultados demuestran que la respuesta de los hepato-citos TIB-73 a la estimulación con oligonucleótidos (generación de peró-xidos intracelulares, nitritos y actividad antibacteriana) desc rita pre-viamente por nuestro grupo, está mediada por las MAPKs ERK1/2 yp38. Por lo tanto, estos resultados indican que los hepatocitos son capa-

ces no sólo de detectar la presencia de oligos sintéticos, sino tambiénde responder a los mismos. Esto apoya el posible papel de los hepato-citos como células que participan en la respuesta del sistema inmuni-tario natural o innato.

Financiado con proyectos de: ISCIII (PI060006) y Fundación Séneca(CARM) (03112/PI/05).

142.IMPACTO DE LA TERAPIA ANTIRRETROVIRAL (ART)SOBRE LOS RESERVORIOS DE CARGA PROVIRAL DNAHIV-1 EN CÉLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERI-FÉRICA (PBMCS)DE PACIENTES HIV-1+ Y SU ASOCIACIÓNCON LA CARGA VIRAL RNA HIV-1 . Rodríguez-Sáinz C, ValorL, Modrego J, Fernández-Cruz E. Hospital General Universitario Gre-gorio Marañón. Madrid.

Objetivos. Estudiar los cambios que experimenta la carga provi-ral DNA HIV-1 (CpV) de pacientes VIH-1+ durante la ART y explorarel valor adicional de este marcador virológico.

Método. Se analizaron 75 pacientes HIV-1+, asintomáticos, naivepara ART, enrolados en el estudio STIR-2102, doble ciego aleatoriza-do, diseñado para evaluar la reconstitución inmunológica. Se evaluóla carga viral RNA HIV-1 (CV) trimestralmente durante los 36 meses(M36) del ensayo o hasta el momento en que se produce una CV>5.000copias/mL (fracaso virológico, FV). Hemos realizado un estudio retros-pectivo de cuantificación de la CpV en PBMCs mediante PCR a tiem-po real y de las correlaciones entre CpV y CV, en los pacientes quealcanzaron M36 (Grupo A) y en los que tuvieron un FV (Grupo B; segui-miento medio 14.8 meses ± 9.1), antes del inicio de ART (pre-ART), seissemanas después de iniciar ART (post-ART) y al final del estudio (M36o el tiempo del FV).

Resultados. La Tabla incluye las CpV [ media (SD) copias/106PBMCs] y las CV [media (SD) copias/mL]. Se muestra la significac iónestadística para la comparación de medias de datos pareados (respec-to a la basal pre-ART). Los resultados de correlación muestran el coe-ficiente r de Pearson.

Pre-ART Post-ART Fin de EstudioGrupo A Grupo B(N=35) (N=40)

CpV 1960 (3789) 1519 (2727) 324 (204) 1314(3034) p=0.115 p=0.013* p=0.067

CV 37518(53270) 817 2236) 553 (987) 18021(23360)p=0.000** p=0.000** p=0.001**

Corre. r=0.391 r=0.244 r=0.250 r=0.213 CpV-CV p=0.001** p=0.035* p=0.208 p=0.242

Conclusiones. 1. La ART impacta significativamente sobre losreservorios de CpV en los individuos que controlan la viremiadurante los 36 meses (Grupo A). 2. Existe una correlación positivasignificativa entre CpV y CV pre-ART y seis semanas post-ART.Estas correlaciones no se mantienen tras un periodo largo en ART.3. La CpV podría ser útil como un marcador viral complementa-rio que evoluciona independientemente de la CV en pacientes VIH-1+.

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SESIÓN 9: CÉLULAS DENDRÍTICAS

Moderadores: Dr. Ángel Corbí (Madrid),Dr. Francisco Borrás (Barcelona)

143.LOS TRANSCRITOS DE LAS ISOFORMAS HLA-G1, G2, G5,G6 Y G7 SE EXPRESAN EN CÉLULAS DENDRÍTICAS DESANGRE DE CORDÓN UMBILICAL. Martínez Laso J1, RomanA1,3, Herraiz MA2, Rodriguez M1, Head J1,3, Gutierrez-Solar B1,Vidart J2. 1Unidad de Inmunoterapia Celular. Centro Nacional de Micro-biología. Instituto de Salud Carlos III. 2Servicio de Ginecología y Obste-tricia. Hospital Clínico de San Carlos. 3Servicio de Microbiología. Hos-pital Clínico San Carlos.

En trabajos previos de nuestro grupo se encontró expresión de HLA-G de superficie e intracelular en células dendríticas procedentes de cor-dón umbilical. En el presente trabajo, se han aislado las células dendrí-ticas mieloides (MDC) y plasmocitoides (PDC) para detectar los dife-rentes transcri tos de HLA-G. Se encontraron los transcritos de G1 y G5en siete de las diez MDC estudiadas mientras que en las otras tres sólose encontró G1. Sin embargo, se encontraron G1 y G5 en tres de las nue-ve muestras de PDC analizadas. Las otras seis mostraban únicamenteel subtipo G1. Estos resultados señalan las diferencias entre las sub-poblaciones de células dendríticas y pueden reflejar distinta funcio-nalidad de HLA-G en los dos tipos de DC. Es posible que la isoformasoluble HLA-G5 desempeñe un papel más importante en MDC que enPDC. HLA-G1 y HLA-G5 parecen ser las dos isoformas principalesen las poblaciones celulares estudiadas. Además, se encontraron HLA-G2 y G6 en tres de las nueve PDC y un G7 en una de las diez MDC estu-diadas. La detección de varias isoformas de HLA-G, especialmentede las solubles, podría ser fundamental en el transplante disminuyen-do la probabilidad del rechazo del injerto. Las isoformas cortas de HLA-G (HLA-G2, G6 y G7) producidas intracelularmente podrían ser secues-tradas en el retículo endoplasmático, no alcanzando la superficie. Estasisoformas podrían tener una única función de apoyo a la expresiónde HLA-E y a la modulación de su interacción con el receptorCD94/NKG2. Los datos obtenidos difieren de los encontrados en susequivalentes en sangre periférica de adulto, donde sólo se encontraronestas isoformas en células dendríticas derivadas de CD34+. La expre-sión de HLA-G en células dendríticas de cordón umbilical puede teneruna función inmunoreguladora con respecto a las células NK y T e inmu-nosupresora con respecto a la relación inmune entre el feto y la madre.

144.INCORPORACION DE PARTICULAS POR CELULAS DEN-DRITICAS. Marcos Campos I1, Asin Pardo L2, Saez Gutiérrez B1,Godino J1, Goya G2, Ibarra R2, Tres A1. 1Servicio de Oncología. Hos-pital Clinico Lozano Blesa. 2Instituto de Nanociencia de Aragón.

Introducción. Las células dendríticas son las células presentado-ras de antígenos más importantes del sistema inmunológico, desem-peñando un papel clave en el inicio de la respuesta inmune adaptati-va. Una de las principales características de estas células es la capaci-dad para incorporar diversos tipos de antígenos. Estudios recienteshan demostrado el potencial de estas células para incorporar dife-rentes tipos de partículas. La incorporac ión de estas partículas por lascélulas dendríticas permitirí a utilizar estas células para vehicular posi-bles fármacos que y ser visualizadas mediante técnicas como resonan-cia magnética o técnicas de imagen.

Objetivos: a) Valorar la tasa de incorporación de dextrano-FITC y latex beads

por parte de las células dendríticas realizando la incubación a dife-rentes tiempos.

b) Valorar la influencia que ejercen el tamaño y la concentración delas partículas sobre la tasa de incorporación de las células dendrí-ticas.Materiales y métodos. Los experimentos se realizaron con célu-

las dendríticas obtenidas a partir de monocitos CD14+ aislados desangre periférica. Para ello, los monocitos fueron cultivados duran-te 7 días en presencia de GM-CSF e IL-4. En el primer experimentoestas células fueron cocultivadas con varias concentraciones de dex-trano y latex beads durante diferentes tiempos de incubación (2, 6 y24 horas). La tasa de incorporación de partículas fue medida por fluo-rescencia con citometría de flujo. Posteriormente, las células dendrí-ticas se incubaron con nanopartículas aminadas (130 nm y 250 nm)y carboxiladas (130 nm y 250 nm) en la membrana. La incorporaciónde partículas fue también observada por medio de microscopía elec-trónica.

Resultados. Se observó mediante citometría de flujo que la tasade incorporación de partíc ulas por las células dendríticas varió en fun-ción de la conc entración de éstas en el cultivo y del tiempo de incuba-ción, siendo la tasa de incorporación hasta tres veces mayor en un perío-do de incubación de 24 horas respecto al de 2 horas. Los datos de incor-poración obtenidos fueron ratificados mediante microscopía electró-nica y microscopía confocal.

145.EL TRATAMIENTO DE MONOCITOS CON IFNα GENERACÉLULAS PRESENTADORAS DE ANTÍGENO INSENSIBLESA LA INHIBICIÓN DE LA EXPRESIÓN DE MHC-II PORATORVASTATINA. López P1, Prado C1, de Paz B1, Gutiérrez C1,2,Suárez A1. 1Área de Inmunología, Departamento de Biología Funcional,Universidad de Oviedo. 2Servicio de Inmunología, Hospital Universita-rio Central de Asturias.

El IFNα es una citocina inmunoestimuladora implicada en el desa-rrollo de autoinmunidad y en la patogénesis del lupus eritematoso sis-témico. Por otra parte, se ha sugerido la utilización de estatinas en eltratamiento de estas enfermedades ya que, además de regular la sín-tesis de colesterol, poseen efectos inmunosupresores, que incluyen lainhibición de la expresión de MHC-II inducida por IFNγ. En este tra-bajo nos propusimos evaluar el papel del IFNα en la generación decélulas presentadoras de Ag funcionales y determinar el posible efec-to de la presencia de atorvastatina durante este proceso. Para ello com-paramos las características morfológicas y fenotípicas de las célulasobtenidas tras el tratamiento de monocitos con IFNα con las célulasdendríticas generadas de forma clásica (IL-4+GM-CSF). La actividadfuncional se evaluó mediante análisis de la captación de Ag e induc-ción de respuestas proliferativas en linfocitos T. Encontramos que tras3 días de cultivo con IFNα los monocitos se diferenciaban a células conmorfología y fenotipo similar al de células dendríticas maduras(CD86high, CD1alow, MHC-IIhigh y CD14low). Además estas células erancapaces de captar antígenos e inducir respuestas en linfocitos T autó-logos de forma similar a las células dendríticas clásicas. Cuando estascélulas fueron generadas en presencia de atorvastatina, sorprendente-mente, no encontramos una disminución de la expresión de HLA-DR,aunque sí se reducía significativamente su habilidad para inducir res-puestas en linfocitos T. De hecho la atorvastatina, incluso en eleva-

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das concentraciones, no era capaz de disminuir la expresión de HLA-DR inducida por IFNα, al contrario de lo que ocurre con el IFNγ. Estosresultados confirman en efecto inmunoestimulador del IFNα, promo-viendo la generación de células presentadoras de Ag y apoyan la apli-cación clínica de las estatinas como moduladores de las respuestasautoinmunes en pacientes con altos niveles patológicos o farmacoló-gicos de IFNα.

146.POLIMERIZACIÓN DE LA ACTINA EN CÉLULAS FOLICU-LARES DENTRÍTICAS TRATADAS CON CITOQUINAS.Muñoz Fernández R, Leno Durán E, de la Mata C, Blanco MuñozO, Tirado González I, Ortiz Ferrón G, Abadía Molina AC, GarcíaOlivares E. Centro de Investigación Biomédica.

Introducción. Las células foliculares dendríticas (follicular den-dritic cells, FDC) son un tipo celular que se localizan en los folículoslinfoides de los órganos linfoides secundarios. Almacenan durante lar-gos periodos de tiempo, antígenos con estructura nativa en su super-ficie celular, y proporcionan una fuente continua de estimulación paralas células B específicas, c ontribuyendo a la diferenciaci ón y mante-nimiento las células B memoria.

Las FDC están relacionadas con el precursor de células madremesenquimales (MSC). Por otro lado, también están relacionadas conlos miofibroblastos debido a la expresión de alfa-SM-actina (marcadorde miofibroblastos), hecho que le confiere la capacidad contráctil aestas células.

Objetivos. Estudio de la polimerización de la actina (formaciónde fibras de estrés) en FDC tratadas con diferentes citoquinas.

Metodología. Cultivo de FDC en gel de colágeno y tratamiento de24 horas con diferentes citoquinas (IL-2, IL10, IFN gamma, TNF alfa yLT), posteriormente a través de inmunofluorescencia, se observó lalocalización de la actina. La polimerización se determinó por inmuno-fluorescencia y citometría de flujo.

Resultados y conclusiones. Se observó por inmunofluorescencialas fibras de actina y mediante citometría de flujo se vio una mayorpolimerización de actina. Lo que indica un estimulo de las FDC fren-te a la presencia de citoquinas.

147.FENOTIPO ANTIGÉNICO DE LAS CÉLULAS DENDRÍTICASDE DECIDUA HUMANA A TÉRMINO. Tirado González I, LenoE, Muñoz-Fernández R, de Lamata Espinosa C, Blanco O, Ortiz-Ferrón G, Abadía-Molina AC, Olivares EG. Centro de InvestigaciónBiomédica.

Introducción. La decidua a término es considerada como un lugarde privilegio inmunológico en la que tiene lugar la protección del fetosemi-alogénico del sistema inmune materno durante 9 meses, median-te mecanismos de tolerancia e inmuno-actiación. Una de las APC (anti-gen presenting cells) más importantes son las células dendríticas (DC),consideradas como centinelas del sistema inmune. Estas DC han sidodescritas como células de origen mieloide CD11c+. Sus característicasfuncionales dependen de su estado de diferenciación, siendo las DCinmaduras (iDC) las que capturan el antígeno en los tejidos comenzan-do con el proceso de migración, y las DC maduras (mDC) las que enlos órganos linfoides dan lugar a la presentación antigénica.

Objetivo. El objetivo del presente trabajo es determinar el feno-tipo antigénico de las DC de decidua a término.

Materiales y métodos. Las muestras de decidua a término fueronpr ocesadas y tratadas mediante gradiente de Ficoll-Histopaque. Lascélulas dendríticas fueron estudiadas mediante citometría de flujo enbase a la expresión de DC-SIGN (marcador c aracterístico de las DCinmaduras, iDC). Mediante doble marcaje se pudo observar la expre-sión de los antígenos CD11c, CD14, CD25, CD40, CD45, CD68, HLA-DR, CD56, CD123.

Resultados. Hemos podido observar la existencia de una pobla-ción DC-SIGN+ (marcador de iDC), indicando una población princi-pal de iDC, confirmada por la baja expresión del marcador CD83 (mar-cador de mDC). El doble marcaje mostró que las células DC-SIGN+expresaban CD11c, CD14, CD25, CD40, CD56, CD68, CD123 y CD45.Estos datos indicaban que estás iDC eran células de origen mieloide(CD11c+) y plamocitoides (CD123+) que podrían coexistir en la deci-dua a término, en distintas etapas de diferenciación (CD14/DC-SIGN),activadas y en distintos estados de maduración debido a la baja co-expresión de HLA-DR, datos que fueron confirmados por la co-expre-sión de CD25 y CD40. El marcaje CD56 nos indicarí a la existencia decomplejos NK-DC.

Conclusiones. Las DC de decidua a término se encuentran enun estado inmaduro, en distintas etapas de diferenciación/madura-ción, activadas y formando complejos con las células NK deciduales.

148.COORDINACIÓN ENTRE LAS CÉLULAS DENDRÍTICASCONVENCIONALES Y PLASMACITOIDES EN LA GENERA-CIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE. Pérez-Cabezas B1, Naran-jo-Gómez M1, Fernández MA2, Sánchez-Pla A3, Núñez F4, Pujol-Borrell R1, Borràs Serres FE1. 1Laboratorio de Inmunobiologia para laInvestigación y las Aplicaciones Diagnósticas (LIRAD). Banco de San-gre y Tejidos (BST). Instituto de Investigación Germans Trias i Pujol,Universitat Autònoma de Barcelona (UAB), Badalona (Barcelona). 2Uni-dad de Citometría, Instituto de Investigación Germans Trias i Pujol,Badalona (Barcelona). 3Departamento de Estadística, Universidad de Bar-celona. 4Unidad Cientificotécnica de Soporte (UCTS), Instituto de Inves-tigación Hospital Vall d'Hebron, Barcelona.

Las células dendríticas (DC) son las responsables del inicio de larespuesta inmune. Las DC se dividen en dos subtipos mayoritarios,DC convencionales (cDC) y DC plasmacitoides (pDC). Cada subtipolleva a cabo determinadas funciones, como son la captura y presen-tación de antígenos y la secreción de interf erones tipo I respectiva-mente. Sin embargo, diversas evidencias obtenidas en nuestro (Naran-jo-Gómez, 2005) y otros laboratorios (Lou, 2007) apuntan a la posibili-dad de un sinergismo entre ambas subpoblaciones en la inducciónde una potente respuesta inmunitaria. En este sentido, nuestros resul-tados muestran que las cDC maduras inducen a su vez la maduraciónde las pDC, capacitándolas para estimular la proliferación de linfoci-tos T naive.

Nuestro estudio intenta determinar los perfiles de expresión géni-ca (Af fymetrix) de las pDC capacitadas por las cDC y establecer si exis-te alguna diferencia en función del estímulo madurativo recibido porla cDC. Para ello se obtienen, mediante separación celular por citome-tría de flujo, las subpoblaciones de DC. Tras la estimulación de las cDCpor los diferentes estímulos seleccionados (LPS, R-848, células apop-tóticas, células necróticas, CD40L), se procede al co-cultivo pDC/cDC.Los dos subtipos celulares se separan nuevamente tras el co-cultivo,obteniéndose una población pDC pura para el análisis del perfil deexpresión génica específico. En algunos experimentos, la capacitación

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se pone de manifiesto por la inducción de moléculas de coestimula-ción en las pDC capacitadas por cDC activadas.

Los resultados de los análisis de microarrays permitirán definir elperfil de las pDC capacitadas por las cDC, y contribuirán a enunciarposibles hipótesis en cuanto al papel y/o la implicación de cada sup-tipo de DC en el desarrollo de la respuesta inmune.

1. Naranjo-Gómez M. Am J Transplant. 2005;5(12): 2838-48.2. Lou Y. J Immunol. 2007, 178:1534-1541.

149.ORGANIZACION PODOSOMAL Y MOTILIDAD DE CELU-LAS DENDRITICAS Y OSTEOCLASTOS. Anton Gutiérrez IM1,Bañón-Rodríguez I1, Chou H-C2, Jones GE2, Calle Y2. 1Centro Nacio-nal de Biotecnología, Madrid. 2Randall Division of Cell and MolecularBiophysics.

La homeostasis del sistema inmune depende en gran medida deltráfico leucocitario r egulado. Las células de origen mieloide como lascélulas dendríticas (CDs) y los osteoclastos (OCs) forman unas estruc-turas de adhesion y migración caracterí sticas denominadas podoso-mas que están constituídas por dos regiones: el centro y el anillo peri-féri co. La región central esté enriquecida en actina y en proteínas impli-cadas en la regulación de la polimerización de los microfilamentoscomo la GTPasa Cdc42, WASP (Wiskott-Aldrich Syndrome Protein)y el complejo nucleador de actina Arp 2/3. El anillo periférico con-tiene proteínas relacionadas con adhesion como integrinas, vinculinay paxilina. Nosotros hemos descrito la presencia de WIP (WASP Inter-acting Protein) en la region central de los podosomas de las CDs y delos OCs y hemos analizado mediante técnicas bioquímicas y de ima-gen la participación de WIP en la organización y función de los podo-somas. Utilizando células mieloides derivadas de ratones deficientesen WIP hemos observado que la ausencia de WIP reduce drásticamen-te la capacidad de las CDs y de los OCs para formar podosomas, queen CDs WIP-/- son reemplazados por contactos focales donde se reclu-ta la integrina β1. El reciclaje de estas estructuras de adhesion esmás lento que el de los podosomas lo que confieren una enorme esta-bilidad a las adhesiones celulares y disminuye la motilidad celular.Además, WIP modula la polarización celular y es insustituible comotransportador de WASP a las regiones de membrana donde se iniciala polimerización de actina para generar los podosomas. Utilizandovectores lentivirales que permiten la expresión de WIP-eGFP en CDsWIP-/- hemos recuperado la formación de podosomas y estamos estu-diando la contribución a este proceso de los diferentes dominios deWIP.

150.ANÁLISIS INMUNOFENOTÍPICO PRELIMINAR DE LAPOBLACIÓN CELULAR MIELOIDE DEL LÍQUIDO ASCÍTI-CO DE PACIENTES CON CIRROSIS Y ASCITIS. Guarinos RF1,2,Hernández-Caselles T3, Martín-Orozco E3, Martínez-Esparza M3,Zapater P1,2, Ruiz-Alcaraz AJ3, Dongo MN1, Pérez-Mateo M1, Gar-cía-Peñarrubia P3, Such J1,2. 1Unidad Hepática, Hospital General Uni-versitario, Alicante. 2CIBERehd, Instituto de Salud Carlos III, Madrid.3 epartamento de Bioquímica, Biología Molecular e Inmunología B, Uni-versidad de Murcia.

Introducción. La población monocito/macrófago del líquido ascí-tico de pacientes con ci rrosis y asc itis juega un papel fundamental en

la respuesta inmunitaria frente a distintos productos bacterianos. Lacar acterizaci ón fenotípica de esta población ha revelado la importan-cia de CD16 como marcador del destino y función de estas células den-tro del complejo sistema de diferenciación mieloide. Sin embargo, sudistribución no se encuentra caracterizada en estos pacientes.

Objetivo. Caracterizar fenotípicamente la población celular mie-loide responsable de la respuesta innata en pacientes con cirrosis y asci-tis.

Pacientes y Métodos. Muestras de cuatro pacientes con cirrosisy ascitis no neutrocítica con cultivo negativo fueron incluidos en esteestudio piloto. Ninguno de los pacientes incluidos estaba en tratamien-to con norfloxacino. Se obtuvo una muestra de LA y su población celu-lar fue caracterizada mediante un panel de anticuerpos monoclonalesde superficie marcados con fluorescencia (BD Biosciences, San José,CA) y analizada por citometría de flujo en un Epics Xl (Beckman-Coul-ter, Fullerton, CA).

Resultados. Esta población monocito/macrófago podemos dife-renci arla en células CD16low y CD16high mostrando los siguientesporcentajes de expresión para CD16low: CD14 (86.74±7.56), CD33(85.88±13.72), CD64 (93.30±9.72), CD11b (77.78±8.00), CD11c(77.84±11.84), CD80 (79.17±20.81), CD86 (92.91±10.77), CD40(84.99±13.27), DR (93.41±10.60), CD119 (93.33±10.38); y para CD16high:CD14 (13.26±7.56), CD33 (14.06±13.78), CD64 (6.71±9.71), CD11b(21.36±9.08), CD11c (22.16±11.88), CD80 (20.83±20.81), CD86 (7.09±10.77),CD40 (15.01±13.27), DR (6.59±10.60), CD119 (6.67±10.38). La poblaciónCD16high aumenta significativamente para todos los marcadores estu-diados, excepto CD11b y CD11c, cuando las muestras son diferencia-das de acuerdo con la presencia de DNA bacteriano.

Conclusión. La expresión elevada de CD16 identifica una subpo-blación minoritaria de monocitos en el líquido ascítico de pacientescon cirr osis y ascitis. La presencia de ADN bacteriano induce unaumento de esta población, posiblemente, como consecuencia de unmayor requerimiento de transición a células dendríticas.

151.UPTAKE OF SOLUBLE ANTIGEN IS REDUCED BY NUCLEICACIDS IN THE ABSENCE OF DENDRITIC CELL ACTIVA-TION. Tirapu Fernández de la Cuesta I, Diebold S. 1Guy's Hospi-tal - King's college London.

Dendritic cells (DC) are key players in the initiation and modu-lation of adaptive immune responses due to their ability to acquire andpresent antigen and stimulate T cells. For the induction of effector T-cell functions, antigen must be presented by activated dendritic cells.Upon activation dc transiently increase their endocytic activity andsubsequently cease to take up antigen. In this study, we have compa-red uptake of antigen by DC in the presence of different TLR ligands,which are potent inducers of DC activation. Surprisingly, we havefound no reduction on antigen uptake when DC were stimulated withLPS and only a marginal reduction when CPG was used. By contrast,the viral DSRNA analogue polyi:c, a tlr3 ligand, led to a reduction inuptake of soluble antigen by DC. This effect was seen both for in vitrogenerated bone marrow-derived dc and for splenic DC. The reductionin antigen uptake was dose dependent and also took place in the absen-ce of DC activation. The same phenomenon was observed for polyri-bonucleotides, such as polyg or polyi, which inhibit the uptake of solu-ble antigen by blocking scavenger-receptor mediated endocytosis. Thus,polyi:c reduces endocytosis of soluble antigens independent of dc acti-vation by blocking scavenger receptor mediated uptake, while it does

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not affect pinocytosis. These results should be taken into considera-tion when loading DC wi th antigen in the presence of polyi:c.

SESIÓN 10: CÉLULAS T

Moderadores: Dr. Manel Juan (Barcelona),Dra. Mª Luisa Toribio (Madrid)

152.POTENCIACIÓN POR AGENTES INHIBIDORES DE HISTO-NA DEACETILASAS DE LA APOPTOSIS MEDIADA PORTRAIL EN CÉLULAS T LEUCÉMICAS. Morales Camino JC, RuizMagaña MJ, Carranza Domínguez D, Ruiz Ruiz MC. Instituto deBiopatología y Medicina Regenerativa.

TRAIL (TNF-related apoptosis inducing ligand) es un ligando demuerte con actividad selectiva sobre células transformadas. Se han pro-puesto diversas estrategias combinadas capaces de vencer la resisten-cia que presentan algunos tumores a la apoptosis mediada por TRAIL,entre ellas los inhibidores de histona deacetilasas (HDACi), enzimasimplicadas en la reorganización de la estructura del ADN en las dis-tintas fases del ciclo celular.

En este trabajo se ha estudiado el efecto de diferentes HDACi, per-tenecientes a distintas familias estructurales, en la inducci ón de apop-tosis por TRAIL en líneas de células T leucémicas y en células T nor-males, mediante tinción del ADN con yoduro de propidio y determi-nación de activación de caspasas. Además, se ha analizado la regula-ción por HDACi de los factores implicados en la ruta de señalizaciónde TRAIL en ambos tipos celulares mediante RT-PCR y Western Blot.

Observamos que todos los HDACi utilizados potencian la apop-tosis mediada por TRAIL en células T leucémicas, pero no en T nor-males, aumentando todas las señales intracelulares de la ruta de induc-ción de apoptosis por TRAIL, desde la activación de la caspasa-8 api-cal. Dic ha potenciación puede explicarse por el descenso en la expre-sión de la proteína anti-apoptótica FLIP y el incremento en los nivelesdel receptor pro-apoptótico TRAIL-R2 que tiene lugar en las células Tleucémicas en respuesta al tratamiento con HDACi. Por el contrario,la regulación de dichas proteínas no se observa en células T normales.

154.REGULACIÓN DE NFAT POR LA ACTIVIDAD POLI-ADP-RIBOSA POLIMERASA EN LOS LINFOCITOS T. Valdor Alon-so R1, Schreiber V2, Saenz L1, Aguado E4, García-Cozar F4, Ramí-rez P1, Parrilla P1, Yélamos J4. 1Hospital Universitario Vir gen de laArrixaca, Murcia. 2CNRS. Estrasburgo. Francia. 3Hospital Universi-tario Virgen de la Arrixaca, Murcia. 4Hospital Puerto Real, Cadiz. 5IMIM-Hospital del Mar, Barcelona.

NFAT representa una familia de factores de transcripc ión quejuegan un papel central en la funcionalidad de los linfocitos T. Has-ta el momento, se ha descrito que los procesos de activación deNFAT que tienen lugar tras la estimulación de los linfocitos T, talescomo su translocación desde el citoplasma al núcleo, su capaci-dad de unión a las regiones consenso del ADN y su actividad trans-cripcional, están mediados en gran parte por su estado de fosfori-lac ión. En este trabajo, aportamos la primera evidencia de un nue-vo mecanismo de modificación post-transduccional que regula aNFAT, la poli-ADP-ribosilación. Nuestros datos han puesto de mani-fiesto que tanto NFATc1 como NFATc2 son poli-ADP-ribosiladospor PARP-1.

De igual forma hemos demostrado una interacc ión física dePARP-1, a través de sus dominios A y D, con NFATc1 y con NFATc2.En este trabajo también hemos puesto de manifiesto que la estimu-lación de los linfocitos T con PMA más ionomicina induce la activa-ción de PARP en ausencia aparente de daño en el ADN, monitori-zado por la ausencia de fosforilación de la histona H2AX en los lin-focitos T en respuesta a dicha estimulación.

La formación de poli-ADP-ribosa en los linfocitos T durante suestimulación modula la activación de NFAT, puesto que la inhibi-ción de PARP utilizando diferentes inhibidor es farmacológicos pro-duce un incremento de la actividad transcripcional dependiente deNFAT y un retraso en el exporte nuclear de este factor de transcrip-ción.

En conjunto nuestros datos indican que PARP-1 y las reacci onesde poli-ADP-ri bosilación repr esentan un nuevo mecanismo de regu-lación de NFAT a nivel nuclear, sugiriendo un uso potencial de laactividad PARP como una nueva diana terapéutica en la modulaciónde NFAT y, por consiguiente, en la modulación de la respuesta inmu-ne.

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155.CÉLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS PROTE-GEN DE LA MUERTE A LOS LINFOCITOS. Leno Durán E, dela Mata Espinosa C, Ortiz Ferron G, Tirado González I, MuñozFernández R, Blanco O, Abadia Molina AC, García Olivares E.Centro de Investigaciones Biomédicas.

Introducción. Las células deciduales estromales (DSC), puedensecretar numerosos factores incluyendo prolactina, insulin-like growthfactor binding protein 1, tissue factor, VEGF, IL-11 e IL-15, que puedenfavorecer la supervivencia de los linfocitos. Se ha observado que DSCforman complejos con linfocitos y los podrían proteger de la muerte.

Objetivos. Determinar la protección que ejercen las DSC frente ala muerte celular de linfocitos y los mecanismos implicados.

Metodología. Las DSC se obtuvieron de decidua normal delprimer trimestre de embarazo, los linfocitos de sangre periférica (PBL) se obtuvieron de voluntarios sanos. Los linfoci tos se pusie-ron en gradiente de ficoll-histopaque y se cultivaron a diferentesproporci ones en diferentes condiciones, DSC en placa de 6 poci llos,en cámara Traswell, y con sobrenadante procedente del cultivo delas DSC. Se tuvieron en cocultivo 24 ó 48 horas. La muerte celularfue medida por citometría de flujo por marcaje del ADN con iodu-ro de propidio.

Resultados y conclusiones. Se ha podido observar que al coculti-var DSC con linfocitos, disminuye la muerte celular de los linfocitoscocultivados con DSC con respecto al cultivo de linfocitos solos.

El mismo resultado lo hemos obtenido al cultivar los linfocitos conDSC, separando los dos tipos celulares en cámara Transwell, con el finde que no haya contacto entre dichas células, o con sobrenadante pro-cedente de cultivos de DSC. En los tres tipos de condiciones de culti-vos observamos una disminución de muerte celular, por lo tanto pen-samos que las DSC liberan al medio determinados factores protegende la muerte celular a los linfocitos.

156.ESTUDIO DE SUSCEPTIBILIDAD PARA LA APOPTOSIS ENLAS POBLACIONES DE LINFOCITOS T CD4+CCR5+/- YCD4+CXCR3+/- EN LA ESCLEROSIS MÚLTIPLE. Julià Artea-ga E, Téllez Lara N, Tur Gómez C, Montalban Gairín X, Comabe-lla López M. Institut de Recerca- Hospital Vall d'Hebron. Barcelona.

Introducción. Los receptores de quimiocinas CCR5/CXCR3 inter-vienen en la migración leucocitaria a través de la barrera hematoence-fálica. Uno de los mecanismos implicados en el mantenimiento de latolerancia i nmunológica es la muerte celular apoptósica de linfoci-tos T (LT) activados auto-reactivos. Un defecto en la eliminación decélulas potencialmente patogénicas, como los LT CCR5+ y CXCR3+,conduci ría a una persistencia anormal de estas células en sangre peri-férica.

Objetivo. Estudiar la resistencia/susceptibilidad para la apopto-sis en LT CCR5+ y CXCR3+ de pacientes con esclerosis múltiple (EM).

Métodos. En el estudio se incluyeron 15 controles sanos (CS) y 41pacientes con EM [17 con EM primariamente progresiva (EMPP), 12con EM remitente-recurrente (EMRR) sin tratamiento, y 12 con EMRRtratados con interferón-beta (IFNb)]. La susceptibilidad para la apop-tosis en LT CD4+ CCR5+/- y CXCR3+/- activados, se determinó porcitometría de flujo mediante Annexina V a las 6 y 24 horas y DiOC6(3-3’ -dihexyloxacarboyanine iodide) a las 24 horas de la inducción dela apoptosis mediante anticuerpos anti-Fas o TNFa (factor de necrosistumoral-alfa).

Resultados. En la población de LT CD4+CCR5+ de pacientes conEM se observó una menor susceptibilidad para la apoptosis que en CS(p<0.05) a las 24 horas de la induc ción de la apoptosis mediante anti-cuerpos anti-Fas.

La población de LT CD4+CCR5+ tiene mayor susceptibilidad parala apoptosis mediada por Fas comparado con el resto de subpoblacio-nes de LT estudiadas.

Conclusiones. Los resultados de este estudio sugieren un carácter diferenc ial del proceso de muerte celular inducida por activaciónen la subpoblación de LT CD4+CCR5+ de pacientes con EM.

157.VALORACIÓN Y OPTIMIZACIÓN DE UN MODELO DEARTRITIS EN CONEJO INDUCIDA POR OVOALBÚMINA(OVA). Alegre Aguarón E2,5, García-Alvarez F3,5, Desportes BielsaP2,5, Martinez Lostao L4, Anel Bernal A4, Larrad Mur L2,5, Martí-nez Lorenzo MJ1,5. 1Banco de Sangre y Tejidos de Aragón. 2Servicio deInmunología. Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa. 3Serviciode Traumatología-Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa. 4Depar-tamento Bioquímica y Biología Molecular y Celular Univ. Zaragoza. 5Ins-tituto Aragonés Ciencias de la Salud.

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad crónica inflamato-ria carac terizada por una intensa activación inmune y una gran varie-dad de manifestaciones sistémicas. El proceso inflamatorio guía a ladestrucción del cartí lago y hueso. Aunque el proceso inflamatorio nose conoce muy bien, el gran número de células T infiltradas en la mem-brana sinovial y la producción local de citoquinas deri vadas de célu-las T sugiere que las células T tienen un papel importante en la res-puesta autoinmune de pacientes con artritis reumatoide. Además, sehan descrito defectos en la apoptosis de los linfocitos T infiltrantesen la sinovia que podrían generar una hiperplasia c on la consiguien-te invasión de la articulación. Recientemente nuestro grupo describióque los linfocitos infiltrados en la sinovia de pacientes con ar tritis reu-matoide eran sensibles a APO2Lrecombinante. Con el fin de avanzaren esta posible terapia, nos propusimos optimizar un modelo experi-mental de artritis induci da por antígeno, utilizando conejos de razaneozelandés e inyección de ovoalbúmina (OVA). Para ello, se realizóuna inyec ción a día 0 con ovoalbúmina utilizando como adyuvanteFreund completo. La segunda inyección subcutánea se realizó a día 14(protocolo A y B) ó a día 21 (Protocolo C). Una vez sensibilizados serealizó, a día 19 (Protocolo B), 21 (Protocolo A) y 26-31 (protocolo C)una inyección intraarticular en la extremidad trasera derecha. La extre-midad trasera izquierda de cada animal sirvió como control internodel experimento, inyectando intraarticularmente solución salina. Duran-te los 7 días posteriores se cuantificaron diferentes parámetros paraanalizar el grado de la patología inducida. Tras la inyección intraarti-cular se evaluó diariamente el diámetro de cada articulación y el pesocorporal. Tras el sacrifi cio, se extrajo tejido de la articulación para rea-lizar estudios anatomopatológicos mediante tinciones de cortes para-finados. Además, se realizaron determinaciones en suero de factor reu-matoide, proteína C reactiva e inmunoglobulinas A, G y M.

De los tres protocolos utilizados, el que dío mejores resultados encuanto a inflamación, aumento de factor reumatoide y estudios de ana-tomía patológica fue el protocolo C. Actualmente, estamos utilizan-do este modelo para continuar con nuestros estudios sobre el efecto deAPO2L recombinante como posible tratamiento en la artritis reuma-toide.

Financiación: PI061217.

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158.BMPs Y PROTEÍNAS HEDGEHOG PARTICIPAN EN EL MAN-TENIMIENTO DE LOS PROGENITORES INTRATÍMICOSCD34+. Hidalgo Lumbreras L1, Martínez VG1, Valencia J1, Váz-quez M1, Zapata AG2, Sacedón R1, Hernández-López C1, Varas A1,Vicente A1. 1Facultad Medicina. 2Facultad Biología. Universidad Com-plutense. Madrid.

Introducción. Las Proteínas Morfogenéticas Óseas (BMPs) y lasProteínas Hedgehog (Hh) son dos familias de proteínas de secre-ción muy conservadas que participan en la determinación del patróngeneral de desarrollo del embrión y en organogénesis, y tambiéncontrolan procesos de supervivencia, prolif eración y diferenci acióncelular. En el timo de ratón se ha descrito la implicación de estasdos familias de proteínas en diversos puntos de la diferenc iaciónT.

Objetivos. Analizar el papel de estas proteínas en el timo huma-no.

Metodología. Las muestras de timo humano se obtuvieron deniños (3 meses-5 años) sometidos a cirugía car diaca correctora. Laexpresión de los componentes de la vía BMP se analizó por citometríade flujo, inmunofluorescenci a y RT-PCR. Los estudios funcionales serealizaron con cultivos en suspensión y con cultivos orgánicos de lóbu-los tímicos fetales de ratones SCID reconstituidos con precursores tími-cos humanos CD34+ purificados.

Resultados. En el timo humano las células epiteliales producenBMPs y los precursores linfo-hematopoyéticos CD34+ expresan losreceptores para estos morfógenos y toda la maquinaria implicada enla transducción de la señal. La estimulación de la vía BMP en proge-nitores intratímicos CD34+ inhibe su diferenciación hacia timocitosCD4+CD8+, reduce su expansión inducida por IL-7 y promueve susupervivencia. Estos efec tos son similares a los inducidos por lavía de señalización Hh. El estudio de los efectos de la adición con-junta de Noggin, antagonista de BMPs, y de Sonic Hh, así como dela modulación de los receptores para estos factores, demuestra queBMP media al menos parte de los efectos de Hh en los precursoresCD34+.

Conclusiones. BMP y Hh participan conjuntamente en el mante-nimiento de la población de precursor es intratímicos CD34+.

159.DIVERSIDAD DE ISOFORMAS DE CD3e EN CÉLULAS THUMANAS: PAPEL DE LA SECUENCIA N-TERMINAL. RojoJM1, Feito MJ1,2, Bello R1, Ojeda G3, Portolés P3. 1Centro de Inves-tigaciones Biológicas, C.S.I .C. 2Departamento de Bioquímica y BiologíaMolecular I, Facultad de Ciencias Químicas, U.C.M, 3Centro Nacionalde Microbiología, I.S. CARLOS III.

Las cadenas CD3e carac terizan el linaje de linfocitos T, siendonecesari as para el ensamblaje y la expresión en la membrana citoplas-mática del complejo TCR/CD3, así como para la transmisión de lasseñales producidas por la unión de ligandos al receptor TCR/CD3.Durante la ontogenia de los linfocitos T se producen procesos selecti-vos positivos y negativos en los que intervienen péptidos antigéni-cos propios. Par a evitar procesos autoinmunes, las señales del recep-tor para antígeno han de modularse en funci ón de estos distintos esta-díos, para lo que se han propuesto diversos mecanismos de cambiocuantitativo o cualitativo tanto en los ligandos, como en la estructurade los complejos TCR/CD3, o en las casc adas señalizadoras activadaspor los ligandos.

Hemos mostrado previamente que en CD3e de ratón se produceun procesamiento proteolítico de la corta secuencia ac ídica N-termi-nal de la cadena, generándose especies moleculares que pueden serdiscriminadas mediante electroforesis bidi mensional (IEF-SDS PAGE)e inmunoblot. Se conoce la secuencia de CD3e de 22 especies distintas,en las que la región N-terminal es altamente variable en longitud ysecuencia, pero conserva siempre una alta proporción de residuosáci dos. La mayoría de las cadenas de CD3e, incluyendo las cadenasde CD3e humanas, carecen de motivos de glicosilación, por lo que supI se corresponde con el de su secuencia de aminóacidos. El análisisbidimensional de precipi tados de CD3 de células Jurkat y de linfoblas-tos T normales confirma la generación de isoformas de CD3e con pIc oincidente con una pérdida de aminoácidos N-terminales cargadosnegativamente. Lo mismo ocurre en c adenas de CD3e de ratón expre-sadas en células T humanas, lo que sugiere que es un proceso gene-ralizado.

Por tanto, y como ocur re en el ratón, la abundancia relativa de iso-formas CD3e en células T humanas podría modular la interacci ónde CD3 con el TCR y el umbral de activación de los linfoci tos, regu-lando la funcionalidad del complejo.

160.INTERACCIONES MOLECULARES DE ICOS (INDUCIBLECOSTIMULATOR, CD278): ESTUDIO PROTEÓ MICO Y FUN-CIONAL. Saez de Guinoa J1, Zafra MP1, Seren Bernardone I1, Por-tolés P2, Rojo JM1. 1Centro de Investigaciones Biológicas, C.S.I.C. 2Cen-tro Nacional de Microbiología, I.S. Carlos III.

ICOS es una molécula coestimuladora de linfocitos T que intervie-ne en el desarrollo de respuestas inmunitarias eficaces y también en eldesarrollo de inmunopatologías. Presenta homología de secuencia yfuncional con CD28, pero solamente es expresada en niveles altos encélulas T activadas. Por ello, cabe preguntarse hasta qué punto las dife-rencias en el efecto de ICOS y CD28 en la respuesta de los linfocitosT son debidas a su distinto patrón de expresión, o bien son determi-nantes las diferentes moléculas capaces de asociarse a su región cito-plásmica.

Empleando como modelo una línea de linfocitos T CD4+ de ratónque expresa altos niveles de ICOS, hemos abordado varios aspectosfuncionales de ICOS: En primer lugar, se ha r ealizado un estudio delas moléculas que pueden asociarse a la región citoplasmica de ICOSen función de la fosforilación o no del residuo de Tyr que forma par-te del motivo YMxM presente tanto en ICOS como en CD28. Se haempleando un sistema de “pull down” con péptidos sintéticos deICOS, fosfori lados o no, unidos a una mariz sólida que se incubancon lisados celulares. El análisis proteómico de los polipéptidos pre-cipitados muestra que la secuencia fosfor ilada de ICOS asocia selec-tivamente subunidades reguladoras y catalíticas de fosfatidil inositol3-quinasa (PI3-K). El estudio proteómico ha permitido comprobar ade-más que, en contra de análisis anteriores empleando ensayos de tri-ple híbrido, ICOS une diversos tipos de subunidades reguladorasde PI3-K (p85a, p85b, p53a). Sin embargo, solamente se ha identifica-do un tipo de subunidad catalítica (p110a) asociado a estas subunida-des, y no otras subunidades catalíticas, como p110b y p110d, tambiénexpresadas en células T y susceptibles de unirse a las subunidadesreguladoras detectadas. Con esta base, se ha estudiado el papel deligandos de ICOS en el citoesqueleto de actina y en la redistribuciónde balsas lipídicas, así como el efecto de inhibidores específicos dePI3-K en estos fenómenos.

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161. LAS CÉLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS PRO-TEGEN DE LA CITOTOXICIDAD A LOS LINFOCITOS T Y SONRESITENTE A LA APOPTOSIS MEDIADA POR RECEPTORESDE MUERTE. Leno E, Morales J, Blanco O, de la Mata EspinosaC, Ortiz-Ferron G, Tirado I, Muñoz-Fernandez R, Garcia OlivaresE, Maricarmen Ruiz-Ruiz M. Centro de Investigación Biomédica.

Introducción. El embarazo y el aborto espontáneo son procesosfisiológicos que están asociados a diversos mecanismos inmunológi-cos. En estas actividades inmunológicas participa la decidua que es eltejido materno que está en contacto intimo con el trofoblasto. En ladecidua se encuentran las células deciduales estromales (DSC), queparticipan en la inmunorregulación materno-fetal. La apoptosis juegaun papel fundamental en el embarazo, la expresión de FasL por par-te del trofoblasto induce apoptosis a los leucocitos deciduales Fas+,regulando por tanto su supervivencia y favoreciendo el embarazo

Objetivo. Investigar la capacidad de las DSC de inducir apopto-sis a los linfocitos T.

Metodología empleada. Las DSC fueron obtenidas de decidua deaborto voluntario y cultivadas en Optimen. Las células Jurkat fueronmantenidas en RPMI 10% FBS. Las DSC colocadas en cámara Trans-well fueron cocultivadas con Jurkat, El porc entaje de células en apop-tosis se determinó por ci tometría de flujo mediante el ciclo celular(Sub-G1). También observamos la apoptosis de las Jurkat por micros-copia de fluorescencia a través de DAPI.

Resultados y conclusiones. Las células deciduales estromales(DSC) expresan FasL, aunque no solo no indujeron apoptosis a los lin-focitos T Jurkat, sino por el contrario protegieron a estas células de lamuerte mediada por el anti-Fas. También se observó estos efectos pro-tectores cuando las Jurkat fueron tratadas con TRAIL. Por otro lado alcolocar las DSC y J urkat en cámara Transwell observamos que es estaprotección seguía manteniéndose, lo que demostraba que el efecto pro-tector estaba mediado por factores solubles. Por otra parte, aunque lasDSC expresan Fas y receptores de TRAIL, fueron resi stente a la induc-ción de apoptosis por anti-Fas y TRAIL. Estos resultados confirman laparticipaci ón de las DSC en los fenómenos de apoptosis; fenómenosclaves en el desarrollo normal o patológico del embarazo.

162.ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE LA QUIMIOQUINA PORCINACCL21 FUSIONADA A GFP. Moreno Rivera S, Álvarez Vega B,Revilla Calvo C, Domínguez Juncal J, Ezquerra Martínez A, Alon-so Moreno F. INIA (Instituto Nacional de Investigación y TecnologíaAgraria y Alimentaria).

Las quimioquinas juegan un papel fundamental en el desarrollode la respuesta inmune, regulando la migración de las diferentes sub-poblaciones de leucocitos a sus órganos diana. En el caso de las célulasdendríticas, no solo dirigen la migración de las mismas a los lugares deentrada de antígeno sino que además pueden regular su maduración.

En humano, rata y ratón se han descrito múltiples patrones deexpresión de receptores de quimioquinas en distintas poblaciones celu-lares del sistema inmune, los cuales presentan diferenc ias fenotípicasy funcionales. En el modelo porcino, debido a la falta de reactivos espe-cíficos, no existen datos de la expresión de receptores de quimioqui-nas en las subpoblaciones de leucocitos. Es por tanto necesario gene-rar los reacti vos que nos permitan analizar el patrón de expresión dedichos receptores en las diferentes poblaciones celulares del sistemainmune porcino y tratar de establecer su funcionalidad.

En este trabajo evaluamos la actividad de la quimioquina CCL21,expresada como proteína de fusión con la proteína verde fluorescenteGFP (CCL21-GFP), y su actividad quimiotáctic a sobre diferentes sub-poblaciones de células T. Para ello hemos clonado la quimioquina enel plásmido “CT-GFP Topo” y generado transfectantes estables en célu-las CHO. En ensayos de migración realizados sobre diferentes pobla-ciones de células mononucleares sanguíneas, la quimioquina recom-binante CCL21-GFP, obtenida de los sobrenadantes de las células trans-fectadas, presenta actividad quimiotáctic a, sobre todo para la pobla-ción celular CD4+2E3+, que contiene las células T naïve, que expresanel mRNA que codifi ca para el rec eptor CCR7.

Estos resultados abren un camino para el análisis de la expresióndifer encial de receptores de quimioquinas en las diferentes subpobla-ciones de células del sistema inmune porcino.

163.CONTRIBUCIÓN DE CD3GAMMA A LA SEÑALIZACIÓNVÍA TCR/CD3. Busto EM1, Reiné J1, Regueiro JR1, Rossi NE1,Domínguez O2, Lombardía L2, Recio MJ1. 1Inmunología. Facultad deMedicina. Universidad Complutense, Madrid. 2CNIO. Centro Nacionalde Investigaciones Oncológicas, Madrid.

El receptor del linfocito T es un complejo multimérico integradopor diferentes cadenas, en las cuales las cadenas variables TCR (TCRαy TCRβ) son las encargadas del reconocimiento antigénico, mientrasque las cadenas invariantes CD3 (CD3ε, CD3γ, CD3δ y CD3ζ) son res-ponsables del ensamblaje y expresión del complejo TCR/CD3, así comode las señalización intracelular. La participación de cada una de lascadenas en el proceso de señalización sigue siendo tema de discusión,así como las baterías de genes inducidos en cada caso.

Con objeto de acotar la contribución y conexiones de CD3γ en laseñalización del TCR/CD3 nos hemos propuesto estudiar en célulasdeficientes de CD3γ transformadas con Herpesvirus saimiri, eventos deseñalización tempranos (fosforilación de los intermediarios de señali-zación) y tardíos (inducción de genes mediante microarrays).

Los resultados preliminares sugieren que los linfocitos T de losindividuos deficientes de CD3γ (γ-/-) estimulados a distintos interva-los de tiempo con anticuerpos anti-CD3 (UCHT1) no presentan dife-rencias en la fosforilación de la proteína ZAP70 mediante citometríade flujo ni en la cinética de activación de proteínas de la ruta de seña-lización de las MAP Kinasas (ERK, p38 y JNK) mediante western bloten comparación con individuos control (γ+/+). Sin embargo, los resul-tados de inducción de genes sugieren un perfil de expresión distintoen linfocitos γ+/+ frente a γ–/–. En base a estos resultados, podemos con-cluir que los linfocitos sin CD3γ emiten con normalidad señales tem-pranas a través de las rutas analizadas, pero deben existir diferenciasen otras rutas que expliquen las disparidades distales.

164.PAPEL DE CD38 EN LA RESPUESTA ANTÍGENO-ESPECÍFI-CA DE LOS LINFOCITOS T. Muñoz Fernández P1, MittelbrunnM2, de la Fuente H3, Pérez Martínez M3, García Pérez A1, ZubiaurMarcos M1,4, Sánchez Madrid F2,3, Sancho López J1. 1Instituto deParasitología y Biomedicina. Consejo Superior de Investigaciones Cien-tíficas. 2Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares. 3Hospitalde la Princesa. 4Instituto de Salud Carlos III.

CD38 es una glicoproteína transmembrana de tipo II altamenteexpresada en células T activadas. Aunque se conocen funciones como

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señalización intracelular, adhesión, prolif eración, apoptosis, produc-ci ón de citocinas y f osforilación de proteínas, aún no está claro el papelde CD38 en la señalización mediada por el complejo TCR/CD3. Paratratar de dilucidarlo se han realizado experimentos de sobre-expresiónde CD38 mediante la transfección del cDNA que codifi ca CD38 fusio-nado al de la proteína de fluorescencia verde (GFP) en células T Jur-kat o bien inhibiendo su expresión mediante la transfección de RNAde interferencia específico para CD38 (siRNA CD38). Para medir cam-bios en la concentración de calcio intracelular [Ca2+]i, las células Jur-kat transfectadas fueron pre-incubadas con el indic ador Fura-2, lava-das y estimuladas con células Raji previamente pre-pulsadas o no conel superantígeno SEE, que actúan como células presentadoras de antí-geno (APC). La producción de citocinas se midió por ELISAs especí-ficos para IL-2 o IFN-gamma (Diaclone) o simultáneamente para 10citocinas (IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, I L-12 (p70), I L-13,IFN-gamma and TNF-alpha) por un sistema multiplex (Bio-Plex, Bio-Rad). La fosforilación de LAT, Erk y PKC-theta fue determinada porWestern-blot con anticuerpos fosfoespecíf icos (Cell Signaling Techno-logy). La sobre-expresión de CD38 en linfocitos T incrementaba losniveles de [Ca2+]i y la producc ión de IL-2 mediados por el TCR, mien-tras que la inhibición de la expresión de CD38 inducía el efecto con-trario. Efec tos similares a los producidos por siRNA CD38 fueron obte-nidos mediante el bloqueo de CD38 con los anticuerpos monoclona-les anti-CD38 HB136 o IB6, considerados como no agonistas. Estosresultados indican que CD38 tiene un papel inmunomodulador en larespuesta funcional del linfocito T antígeno-específica.

165.INFLUENCIA DE LA SEÑALIZACIÓN POR NOTCH1 SOBREEL POTENCIAL DE RECONSTITUCIÓN HEMATOLINFOIDEIN VIVO DE PROGENITORES INTRATÍMICOS HUMANOS.García-Peydró M, Toribio ML. Centro de Biología Molecular “Seve-ro Ochoa”.

El abordaje de los mecanismos que regulan la colonización de lamédula ósea (BM) por células troncales hematopoyéticas y la migra-ción de progenitores y células maduras a órganos periféricos, inclui-do el timo, requier e el empleo de modelos in vivo. Dado el papel esen-cial de la señalización por Notch en la especificaci ón del linaje T, hemosabordado la contribución de la señalización por Notch1 al procesode colonización intratímica, así como el impacto de la señalizaciónde Notch1 sobre la dinámica de rec onstitución hematopoyética in vivode progenitores hematolinfoides humanos.

Para ello se han realizado transferencias in vivo de progenitoreshematolinfoides de timo humano modificados genéticamente por trans-ducción r etroviral en ratones deficientes para la recombinasa RAG-2y la cadena gamma común de receptores de citoquinas (RAG-2-/-c-/-). Los resultados obtenidos demuestran que los progeni-tores intratímicos humanos son capaces de colonizar el timo de rato-nes RAG-2-/- c-/- y r econstituir eficientemente (>90%) elcompartimento de linfocitos T humanos, recapitulando los diferen-tes estadios madurativos T. Dic ha reconstituci ón es transitoria y se restringe exclusivamente al timo.

La sobre-expresión de una forma constitutivamente activa deNotch1: i) no afec ta a la reconstitución tímica, aunque impide la tran-sición al estadio SP; induce: ii) la repoblación efi ciente (>95%), perotransitoria, de la médula ósea, y iii) la dif erenciac ión extratímica enla BM de células DP, aunque no altera la capacidad intrínseca de migra-ción a la BM de los progenitores humanos.

El potencial de reconstitución in vivo de progenitores hematolin-foides humanos es absolutamente dependiente de la interacción dela molécula de adhesión CD44 con su ligando.

La señalización por Notch1 mantiene la expresión de CD44 a nive-les altos, permitiendo la retención específica de los progenitores hema-tolinfoides humanos en la BM.

166.FLOW CYTOMETRY CHARACTERIZATION OF EALT (EYE-ASSOCIATED LYMPHOID TISSUE) CELLS OBTAINED BYBRUSH CYTOLOGY. Martínez Osorio H1, López-García A1,Quintana R1, Gutiérrez San José E2, Fernández-Martínez I1, Calon-ge M1, Diebold Y1, Corell A1,2. 1,2Ocular surface group - I OBA, Uni-versity of Valladolid. 2,1Immunology section, University of Valladolid,Valladolid.

Purpose. To characterize by f low cytometry human conjunctival(epithelial and intra-epithelial lymphoid) cells recovered by brush cyto-logy (BC).

Methods. BC was performed in conjunctivas of 20 healthy donors.Cells were detached by shaking the brush in supplemented DMEM/F-12 medium. To characterize recovered cells, 4 flow cytometry assayswere done in each sample in order to: 1) establish their lineage (Ananti-c ytokeratin7-FITC MoAb was used as epithelial marker and ananti-CD45-PC7 MoAb for lymphoid cells); 2) analyze the cell-cyc le(IP); 3) assess the apoptotic stage (Annexin V vs PI); and 4) study thelymphocyte subsets by their cor responding CD markers. Two-tailedStudent’s t test was performed for statistical analysis.

Results. 14 x 104 ± 0.9 cells were recovered. CK-7+ c ells represen-ted the 67.8 ± 1.6% in tarsal BCs and the 65.7 ± 2.5% of bulbar BCs. Bul-bar cells showed higher density of CK7 than tarsal epithelium. CD45+cells were the 3.8 ± 0.4% of the tarsal cells and the 2.8 ± 0.3% of the bul-bar cells. Regarding the DNA content, tarsal epithelial cells had hig-her proliferative index (S phase) than bulbar conjunctival cells (3.5 ±0.3% vs. 2 ± 0.2%). Although the % of viable, apoptotic and dead cellsshowed no signific ant differenc es between tarsal and bulbar BCs, weobserved two different populations: 22.8% (± 1.6) of c ells were sma-ller, less complex and had good viability (77.9 ± 3.4%) ; 76.4% (± 1. 6)of cells were larger, more complex and showed poor viability (21.3 ±2.2% ). The Lymphocyte subsets showed a predominant T cell popu-lation but were difficult to assess due to the low numbers of obtai-ned cells.

Conclusions. In healthy subjects, conjunctival cell populationsrecovered by BC are not purely epithelial, as there are a few CD45+cells (mainly T cells), not previously described. Besides, the differen-ces observed in cell size, viability and proliferative capacity of rec ove-red epithelial cells may help in long-term cultures for regenerative pur-poses.

167.DIFERENTES EFECTOS DE LA INHIBICIÓN DE FOSFODIES-TERASA 4 Y FOSFODIESTERASA 7. González García C, Bra-vo B, Gómez S, Hernández J, Ballester S. Instituto de Salud CarlosIII.

Los niveles de AMPc en la célula están regulados por la adenila-to ciclasa a nivel de síntesis, y por las fosfodiesterasas, a nivel de degra-dación. Variaciones en los niveles de este nucleótido cíclico pueden

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estar implicados en procesos de inflamación. Este segundo mensajerose une a PKA (proteína kinasa A), que fosfori la el factor de transcrip-ci ón CREB (cyclic AMP response binding proteins). Los inhibidoresde PDE4, una de las PDE mayoritarias de linfoc itos T, son los másampliamente caracterizados hasta el momento; sin embargo, presen-tan efectos secundarios que han llevado a la búsqueda de otros inhi-bidores de PDE que minimicen estos efectos negativos. Otra de las PDEexpresadas por linfocitos es la PDE7, por lo que se piensa en ella comouna posible alternativa para el control de procesos inflamatorios.

Nosotros hemos querido analizar comparativamente los efectosde la inhibici ón de cada una de estas PDE, para lo que hemos usadoRolipram y BRL 50481, como inhibidores especí ficos de PDE4 y PDE7,respectivamente; o una combinación de ambos. En linfocitos T, la pro-liferac ión se ve afectada de manera similar por la inhibición de cadauna de estas fosfodiesterasas; aunque la inhibici ón de PDE7 presen-ta un mayor efecto pro-apoptótico. Los niveles de AMPc intracelularson más sensibles a la inhibición de PDE4, indic ando una mayor impli-cación de ésta en el control de dichos niveles en linfocitos T. Estos datostambién corr elacionan con los obtenidos para los ensayos de activi-dad transcripci onal del factor CREB, los cuales muestran mayor activación de este factor mediada por Rolipram. Además, la utilizaciónsimultánea de Rolipram y BRL 50481 no produce ningún efecto sinér-gi co en cuanto a la activación de CREB. Sin embargo, los ensayos trans-cripc ionales realizados en astrocitos, de importante implicación enalgunos procesos inflamatorios en sistema nervioso central, muestranque en este tipo celular ambos inhibidores cooperan en la actividad deCREB.

168.INMUNODETECCIÓN ELECTROQUÍMICA DE INTERFERÓNGAMMA HUMANO MEDIANTE EL USO DE NANOPARTÍ-CULAS DE ORO Y MICROPARTÍCULAS MAGNÉTICAS. Sán-chez-Espinel C1, Ambrosi A2, de la Escosura A2, Díaz B1, GaretME1, Merkoçi A2, Faro J1,3, González-Fernández A1. 1Grupo de Inmu-nología. Edificio Ciencias Experimentales. Universidad de Vigo. 2Grupode Nanobioelectrónica y Biosensores. Institut Català de Nanotecnologia.Campus UAB. Bellaterra. Barcelona. 3Instituto Gulbenkian de Ciencia,Oeiras, Portugal.

Introducción. El uso de nanopartículas, principalmente nanopar-tículas de oro (AuNPs), conjugadas con proteínas, permite pensar enel diseño de técnicas más rápidas y sensibles, que requieran menorcantidad de muestra y que supongan un menor coste que las técni-cas de inmunodetección tradicionales. Así, métodos como el ELISA yla citometría de flujo, pueden ser sustituidos por biosensores electro-químicos basados en AuNPs como marca.

Objetivo. Nuestro grupo ha comparado la técnica de ELISA parala determinación de interf erón gamma humano (INF-gamma), con unnuevo método electroquímico basado en el uso de AuNPs conjugadascon anticuerpos, como marca electroactiva, y mic ropartículas para-magnéticas (MPs) como soporte de las reacciones inmunológicas. Ladetección electroquímic a de las AuNPs se lleva a cabo de manera direc-ta, sin necesidad de oxidación previa mediante agentes químicos.

Metodología. Se unió un anticuerpo monoclonal anti-INF-gam-ma a MPs recubiertas con estreptavidina y, posterior mente, éstas fue-ron incubadas con distintas concentraci ones de INF-gamma humano.A continuación, se incubó con la disoluci ón de anticuerpo monoclo-nal anti-INF-gamma que previamente había sido conjugado con AuNPsde 15 nm de diámetro Después de cada incubac ión, el exce-

so de reactivos fue separado de las MPs usando un electroimán. LasAuNPs fueron detectadas electroquímicamente, siendo proporcionalla señal electroquímica a la cantidad del analito problema en la mues-tra. Los niveles de INF-gamma fueron analizados comparando con untest de ELISA sándwich convencional (kit BD optiEIA).

Resultados. Los resultados muestran que este método permitela detección de interferón gamma en muestras, dando resultados com-parables al ELISA, con un nivel de detección de 6 pg/ml. Sin embar-go, consideramos que esta técnica podría ser optimizada tanto en eluso de menor volumen de muestra como en el límite de sensibilidad(v.g., usando métodos catalíticos).

Conclusión. Los biosensores electroquímicos basados en el uso deAuNPs como marca pueden ser aplicados con éxito para la determi-nación de citocinas como el INF-gamma humano.

169.PAPEL DE LA PROSTAGLANDINA F2 ALPHA EN LA REGU-LACIÓN DE GENES IMPLICADOS EN LA ACTIVACIÓN DELLINFOCITO T. Cacheiro C, Iñiguez MA. Centro de Biología Mole-cular “Severo Ochoa” (UAM).

Introducción. Las prostaglandinas (PGs) son productos del meta-bolismo del ácido araquidónico originados por la acción de diversosenzimas tales como las ciclooxigenasas (COX-1 y COX-2) y las prosta-glandin sintasas. Las PGs ejercen su acción a través de receptores desiete dominios transmembrana acoplados a proteínas G (GPCRs) espe-cíficos para cada una de ellas. En el caso de la PGF2α, su interaccióncon el receptor FP (acoplado a una proteína Gαq) produce un incre-mento en los niveles de calcio intracelular, requisito indispensable parala activación óptima del factor de transcripción NFAT (esencial en laactivación del linfocito T).

En este sentido, nuestros resultados sugieren la implicación de laseñalización a través de receptores acoplados a proteínas Gαq, talescomo el FP, en la activación de NFAT y en la inducción de la expresiónde genes dependientes de dicho factor de transcripción (COX-2, IL-2,TNF-α, etc).

Objetivos. Estudio del posible papel que desempeña la PGF2α enla regulación de genes implicados en la activación del linfocito T. Parala consecución de este objetivo, se han realizado estudios en célulasT Jurkat, analizando las vías de señalización implicadas en la induc-ción transcripcional de estos genes por estímulos como el TPA, diver-sos prostanoides, etc. Con el fin de determinar la implicación de deter-minadas vías de señalización intracelular en respuesta a los diversosestímulos, se han usado inhibidores farmacológicos. Las variacionesde la expresión y de la actividad de COX-2 y de prostaglandin sinta-sas en células T se han medido mediante RT-PCR, Western, ELISA, etc.

Resultados. Los resultados indican que esta prostaglandina, a tra-vés de la unión a su receptor FP, induce la traslocación de NFAT alnúcleo incrementando de esta manera la transcripción de genes media-da por NFAT en células T.

170.CAPACIDAD PROLIFERATIVA DE LINFOCITOS CD4 NAÏ-VE CD31+ Y CD31- DE SANGRE PERIFERICA EN HUMANOS.Ruiz Hernandez R1, de Haro J2, Clotet B1, Bofill M1. 1Fundación irsi-CaixaHospital Germans Trias i Pujol. 2Hospital Municipal de Badalona.

Introducción. La homeostasis de los linfocitos T CD4+ CD45RA+depende en parte de la entrada a la circulación peri féric a de los lin-

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focitos procedentes del timo (linfocitos emigrantes tímicos recientes,ETR) y del mantenimiento del número de éstos por proliferacioneshomeostáticas (independiente de antígeno). Estas dos poblacionesde células CD4 pueden identificarse respectivamente por la presenciao ausencia de CD31.

Objetivos. Evaluar el impacto de las citocinas homeostáticas IL-2, IL-17 e IL-15 sobre la capacidad proliferativa de las poblacionesCD4/CD45RA+ CD31+ y CD4/CD45RA+ CD31-procedentes de san-gre periférica.

Métodos. Las poblaciones de linfocitos CD4 CD45RA+ de san-gre periférica humana se aislaron por selección negativa con el uso deesferas magnéticas (StemCell Technologies, Barcelona, Spain). Las sub-poblaciones CD31+ y CD31- se aislaron mediante un cell sorter. Lascélulas se cultivaron en presencia de medio, de las interleuquinas home-ostáticas IL-2, IL-7 e IL-15, PHA, ó ambas durante 3 ó 5 días. La capa-cidad proliferativa de estas poblaciones se evaluó mediante incorpo-ración de timidina tritiada; Los niveles de activación CD25, y los mar-cadores de Naïve y de memoria, CD45RA y CD45RO, se midieronmediante citometria de flujo.

Resultados. Ninguna de las dos subpoblaciones de células CD4naive proliferó en presencia de medio o de citocinas. Si n embargo lapoblación CD31+ proliferó en presencia de PHA, mientras que la pobla-ción CD31- no responde a dicho estímulo a menos que se hallaran pre-sentes en los cultivos IL-2, IL-7 o IL-15 en cuyo c aso la capacidad pro-lifer ativa de ésta población fue parec ida a la de la población CD31positiva.

Conclusiones. Las interleuquinas homeostáticas podrían jugar unpapel el mantenimiento del nivel de linfocitos CD4 Naïve en huma-nos.

171.PAPEL DE LA CADENA CD3 GAMMA DEL COMPLEJO TCREN LA SELECCIÓN TÍMICA: ¿UN CASO CERRADO? Fernán-dez-Malavé E, Reiné J, Regueiro JR.Universidad Complutense Madrid.

Los procesos de selección positiva y negativa de las células T dellinaje alfa/beta en el timo dependen de señales mediadas por el com-plejo TCR/CD3. Sin embargo, la contribución específica de las cade-nas CD3 en estos procesos, en particular de CD3gamma y CD3deltaque derivan de un gen ancestral común, sigue siendo materia de deba-te.

Con el objetivo de identificar funciones específicas de CD3gam-ma en la selección tímica, hemos generado y analizado una línea deratones carentes de CD3gamma que expresa el TCR transgénico HY.Este TCR reconoce un péptido específico de machos en el contextode MHC de clase I H-2Db. La expresión del TCR HY resulta en la selec-ción positiva de células CD8+ en las hembras y la selección negativade estas mismas células en los machos, permitiendo así el análisis simul-táneo de la selección positiva y negativa in vivo.

Los resultados obtenidos indican que el TCR HY carente deCD3gamma es capaz de seleccionar tanto positiva como negativa-mente a las células CD8+ TCR HY+, pero con una eficiencia baja. Porotro lado, la falta de CD3gamma resulta en una alteración en la “deci-sión de linaje”, reflejada en la aparición de células CD4+ TCR HY+en los ratones CD3gamma-deficientes. Además, estas alteraciones seasocian con una reduc ción generalizada en la intensidad de la seña-lización vía TCR.

En conclusión, nuestro estudio sugiere que CD3gamma está impli-cada de una forma específica en la regulación fina de la eficiencia y

fidelidad de la selección tímica, a través del control de la intensi-dad de las señales generadas por el TCR. Sin embargo, este caso con-tinua en abierto a la espera del análisis de más modelos de TCR trans-génicos que permitan la elucidación de los mecanismos molecularessubyacentes a este papel de CD3gamma durante la selección tími-ca.

172.EFECTO DIFERENCIAL DE LA FALTA PRE-TÍMICA Y POST-TÍMICA DE CD3 GAMMA. Reiné J, Recio MJ, Busto E, Fernández-Malavé E, Regueiro JR. Universidad Complutense Madrid.

Introducción. Los linfocitos naturales deficientes de CD3 gamma,a diferencia de los mutantes de Jurkat, expresan mucho TCR/CD3.Pensamos que esto es debido a que los mutantes de Jurkat fueron selec-ci onados para no expresar TCR/CD3 y tienen, de hec ho, mutacionesadicionales, ya que se cr eía que la falta de cualquier cadena CD3 impe-día la expresión del resto del complejo.

Sin embargo, es posible que los linfocitos naturales deficientes deCD3gamma, que carecen de CD3gamma antes de la maduración, alcan-cen la periferi a muy seleccionados y por tanto sean poco representa-tivos bioquímicamente.

Objetivos. En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto quetiene la ausencia de CD3gamma en linfocitos post-tímic os. Para ellosilenciamos la expresión de CD3gamma empleando un pool de oligossiRNA específic os (Dharmacon).

Metodología. Los linfocitos T Jurkat fueron electroporados c onun pool de oligos siRNA específi cos. La expresión del complejoTCR/CD3 se monitorizó por ci tometría de flujo al cabo de 24 horaspost-tratamiento, con diferentes anticuerpos monoclonales (SK7;BMA031).Para evaluar el grado de interferencia a nivel de la proteí-na CD3gamma se realizaron tinciones intracelulares con el antisueroanti-CD3gamma (TG5).

Resultados. Las células tratadas con siRNA para CD3gamma mues-tran un grado de inhibición del 70% (a nivel intracelular c on TG5) quese corresponde con una bajada de expresión del complejo TCR/CD3con BMA031 (70%) pero no con SK7 (11%).

Conclusiones. Nuestros datos indican que existen difer encias deexpresión entre la pérdida de CD3gamma antes y después de pasarpor el timo. Por lo tanto, la baja expresión del TCR/CD3 en linfocitosnaturales defici entes de CD3gamma se debe más a un proceso de selec-ción tímica que a un efecto bioquímico.

173.LA CARGA DE ANTÍGENOS DE CD1 DEPENDE DE UNIO-NES ENTRE LOS DOMINIOS REGULADAS POR EL PH.Relloso M1, 4, Cheng T-Y1, Roura-Mir C1, Porcelli SA2, Wilson IA3,Moody DB1. 1Division of Rheumatology, Immunology and Allergy,Brigham and Women's Hospital and Harvard Medical School, Boston,MA, USA. 2Department of Microbiology and Immunology, Albert Eins-tein College of Medicine, Bronx, NY, USA. 3Skaggs Institute for Che-mical Biology, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA. 4Dpt.Microbiología, Facultad De Farmacia, Universidad ComplutenseMadrid.

La familia CD1 está constituida por moléculas presentadoras deantígeno no polimórfic as que presentan lípidos y glicolípidos a célu-las T. Las moléculas CD1 se clasifican por su secuencia en dos grupos:

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el grupo 1 incluye las moléculas de CD1a, CD1b, CD1c y el grupo 2CD1d.

Actualmente tenemos información sobre la localización intracelu-lar, estruc tura, y antígenos que presentan algunas de las moléculas deCD1, pero no se conoce como los lípidos son capaces de atravesar laestrecha entrada que da acceso al sitio de unión de antígeno y comoson capaces de colocarse dentro de ella para que puedan ser reconoci-dos por células T a través de los TCR.

Esta cuestión es incluso más importante en el caso de CD1b quetiene una entrada a la hendidura muy estrecha (15 Å) comparada conla de MHC I (25 Å). Además CD1b es capaz de alojar lípidos de cade-na de hasta 80 carbonos que requieren, para su carga, encontrar lasmoléculas de CD1b en los endosomas tardíos donde el pH es ácido.Por eso hipotetizamos que el pH ácido podría cambiar la conf orma-ción de algunas partes de la molécula de CD1b que favoreciera la car-ga de los antígenos.

Para identificar áreas de la molécula de CD1b que pudieran serelásticas elaboramos modelos de dinámica molecular. Después, muta-mos los aminoácidos ác idos de esas áreas. Escogimos estos aminoáci-dos por que a pH neutro tienen carga negativa y producen interac cio-nes salinas con aminoácidos básicos y a pH ácido las cargas se neutra-lizan y las interacciones salinas desaparecen.

De esta manera nuestros mutantes deberían mimetizar los cam-bios conformacionales produci dos por el pH en los lisosomas. Delresultado del análisis de estas mutaciones identific amos que losmutantes en D60 y E62 mejoran la activación de las células T porantígenos largos y la unión de los antígenos a las moléculas deCD1b. Por otro lado, también demostramos que las mutacionestambién afectan a la capacidad de las moléculas de CD1b de rete-ner a los antígenos.

Por lo tanto, concluimos que los aminoácidos D60 y E62 que hacen interacciones con K55 y R168 respectivamente en CD1bcontrolan la carga y retención de los antígenos lipídicos de CD1b.

SESIÓN 11: AUTOINMUNIDAD - II

Moderadores: Dra. Mª Rosa Julià (Palma de Mallorca)Dra. Carmen Gelpí (Barcelona)

174.ASOCIACIÓN DE POLIMORFISMOS DE LOS GENESCAPSL E IL7R CON DIABETES TIPO 1 EN POBLACIÓNESPAÑOLA. Santiago JL1, Martinez A1, Espino L1, de la CalleH2, Fernandez-Arquero M1, Figueredo MA1, de la Concha EG1,Urcelay E1. 1Hospital Clínico San Carlos. 2Hospital Ramón y Cajal.Madrid.

La predisposición genética a la diabetes tipo 1 (T1D) es debida fun-damentalmente al Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC).Sin embargo, se han descrito una serie de genes asociados a la T1Dlocalizados fuera de esta región. En la región cromosómica 5p13 se haencontrado asociado un bloque que incluye los genes CAPSL (calcy-phosine-like) situado e IL7R (receptor de la IL-7 o CD127) que seencuentra en el mismo bloque de ligamiento que CAPSL. Nuestro obje-tivo fue replicar la asociación descrita con anterioridad en otras pobla-ciones caucásicas.

Realizamos un estudio caso-c ontrol con 301 enfermos y 646 con-troles sanos, de la Comunidad de Madrid. En ambas cohortes se ana-lizaron 2 SNPs en el gen CAPSL (rs1445898 y rs1010601) y 3 en el genIL7R (rs6891932, rs987106 y rs3194051). El genotipado se realizó porsondas TaqMan mediante Fast Real-Time PCR System (Applied Bios-ystems, Foster City, USA). Las diferencias en frecuencias alélicas ygenotípicas fueron comparados mediante el estadístico Chi-cuadradoy las asociaciones fueron medidas con la odds ratio (OR) (Epi Info v.6.02, CDC, USA).

En el análisis de nuestra cohorte encontramos que el genotipohomocigoto mutante del polimorfismo CAPSL-rs1445898 estaba sig-nificativamente disminuido en enfermos frente a controles (OR=0.65;p=0.023). El efecto protector fue más significativo en el grupo de pacien-tes con debut temprano de la enfermedad frente a los de debut tar-dío (OR=0.33; p=0.004) y frente a controles (OR=0.31; p=0.0004). Eneste mismo grupo de enfermos el genotipo homocigoto mutante delpolimorfismo IL7R-rs6891932 presentó también un efecto protectorfrente a pacientes con debut tardío (OR=0.21, p=0.03) y frente a con-troles (OR=0.24, p=0.03).

Replicamos la protección por los polimorfismos de CAPSL-rs1445898 y de IL7R-rs6891932 encontrada en otras poblaciones cau-cásicas. Describimos por primera vez que este efecto protector seencuentra específicamente en pacientes de T1D con debut tempranode la enfermedad.

175.CONTRIBUCIÓN DE UN POLIMORFISMO EN EL GEN STAT4A LA SUSCEPTIBILIDAD A LA DIABETES TIPO 1. SantiagoJL1, Espino L1, Martinez A1, de la Calle H2, Fernandez-Arquero M1,Figueredo MA1, de la Concha EG1, Urcelay E1. 1Hospital Clínico SanCarlos. 2Hospital Ramón y Cajal.

El gen STAT4 (signal transducer and activator of transciption 4)codifica un factor de transcripción involucrado en las rutas de seña-lización de diversas citocinas (IL-12, IL-15, IL-23) y en la diferencia-ción de células Th1 y Th17. Recientemente se ha publicado la asocia-ción con artritis reumatoide (AR) y con lupus eritematoso sistémico(LES) de un polimorfismo de un solo nucleótido (SNP) localizado eneste gen. Nuestro objetivo fue analizar el papel de este SNP (rs7574865)en otra enfermedad autoinmune como es la T1D en población espa-ñola.

Realizamos un estudio caso-control con 311 enfermos y 716 con-troles sanos, de la Comunidad de Madrid. La edad de debut variaentre 1 y 55 años (media: 17.3 ± 10.0 y mediana: 15 años) siendo todosellos insulinodependientes en el momento del estudio. El SNP delgen STAT4 (rs7574865) se genotipó mediante sondas TaqMan quese analizaron en ABI 7900HT Fast Real-Time PCR System (AppliedBiosystems, Foster City, CA, USA). Las diferenc ias en frecuenciasalélicas y genotípicas fueron c omparadas por el estadístico Chi-cua-drado y las asociaciones fueron medidas con la odds ratio (OR) conun intervalo de confianza del 95% (Epi Info v. 6.02, CDC, Atlanta,USA).

El polimorfismo del gen STAT4 analizado (rs7574865) cumple lascondiciones del equilibrio de Hardy-Weinberg en nuestra poblacióncontrol. La frecuencia de alelo minoritario (alelo T) fue signific ativa-mente mayor en enfermos que en controles [OR=1.36 (1.07-1.71);p=0.008]. Cuando estratific amos nuestro grupo de pacientes por edadde debut de la enfermedad y por sexo, no encontramos diferencias sig-nificativas en ninguno de los grupos.

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Describimos por primera vez la asociación del polimorfismo delgen STAT4 previamente asociado a AR y LES con un incremento en lasusceptibilidad a sufrir T1D con independencia de la edad de debutde la enfermedad y del sexo. Nuestros datos sugieren que el gen STAT4interviene en el desarrollo de múltiples enfermedades autoinmunespoligénicas.

176.MODULATION OF INFLAMMATORY RESPONSES BYDITERPENE ACIDS FROM HELIANTHUS ANNUUS L. Hor-telano S1, Girón N2, de las Heras B2, Diaz-Viciedo R2, Massó JM2,Rodriguez B3, Villar A2. 1Centro Nacional de Investigaciones Cardio-vasculares, CNIC; Madrid. 2Departamento de Farmacología Facultad deFarmacia, Universidad Complutense Madrid. 3Instituto de QuímicaOrgánica (CSIC), Juan de la Cierva, Madrid.

Fractionation of a petroleum ether extract of Helianthus annuusL. (sunflower) led to the isolation of three diterpene acids: grandiflo-rolic, kaurenoic and trachylobanoic acids. These compounds were stu-died for potential anti-inflammatory activity on the generation of inflam-matory mediators in lipopolysaccharide (LPS)-activated RAW 264.7macrophages. At non-toxic concentrations, these compounds reduced,in a concentration-dependent manner, nitric oxide (NO), prostaglan-din E2 (PGE2) and tumor necrosis factor (TNF-alfa) production, as wellas expression of inducible nitric oxide synthase (NOS-2) and cyclooxy-genase-2 (COX-2).

All diterpenoids displayed significant in vivo anti-inflammatoryactivity and suppressed the 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)-mouse ear edema. In addition, inhibition of myeloperoxidase(MPO) activity, an index of cellular infiltration, was observed. In sum-mary, our results demonstrate that these diterpenoids have anti-inflam-matory activity in macrophages, as indicated by inhibition of NOS-2and COX-2 expression and activity and impaired cytokine release. Thelow cytoxicity of these compounds in cell culture and their effective-ness in an in vivo animal model of inflammation indicate that thesesubstances may contribute to the anti-inflammatory activity attribu-ted to the sunflower.

177.AUTO-ANTICUERPOS CIRCULANTES EN PACIENTES CONENFERMEDAD PULMONAR OBSTRUCTIVA CRÓNICA.Núñez B1,3, Sauleda J1,2,3, Julià MR4, García-Aymerich J5, Antó JM5,Gea J3,6, Monsó E3,7, Gómez F3,8, Roca J3,8, Farrero E9, Agust A1,2,3.1Servei de Neumologia, Hospital Son Dureta, Illes Balears. 2FundacióCaubet CIMERA, Bunyola, Illes Balears. 3CIBER en Enfermedades Res-piratorias. 4Servei Inmunologia, Hospital Son Dureta. 5Centro de Recer-ca en Epidemiologia Ambiental, IMIM, Barcelona. 6Servei de Neumo-logia, Hospital del Mar, Barcelona. 7Servei de Pneumologia, HospitalGermans Trias i Pujol, Badalona. 8Servei de Pneumologia, Hospital Clí-nic-IDIBAPS, Brcelona. 9Servei Pneumologia, Hospital De Bellvitge,Hospitalet del Llobregat. Barcelona.

Introducción. La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC)se caracteriza por alteraciones en la respuesta inmune innata y adqui-rida, habiéndose descrito fenómenos de autoinmunidad en forma deanticuerpos antielastina y anti epitelio pulmonar.

Hipótesis: Los anticuerpos circulantes antinucleares (ANA), anti-tejido (AT) y anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) están aumentadosen la EPOC.

Objetivos. Evaluar la prevalencia de títulos positivos de estosautoanticuerpos (≥ 1/160 de ANA y AT, y ≥ 1/10 ANCA) en pacien-tes con EPOC estable de la cohorte PAC-EPOC (68 ± 9 a, FEV1 52± 16% ref, FEV1/FVC 54 ± 12%, BMI 28 ± 5 kg/m2, PCR, 8.2 ± 2mg/L, X±SD).

Método: Se estudiaron los autoanticuerpos por inmunofluores-cencia indirecta y se analizaron sus relaciones con características feno-típicas relevantes de la enfermedad como obstrucción al flujo aéreo,grado de enfisema, tabaquismo, inflamación sistémica y tratamientocon corticoides inhalados.

Resultados: Se hallaron títulos patológicos de ANA en el 34%,de AT en el 25.4%, de ANCA en el 12.5%. Los AT y ANCA presentaronuna asociación significativa con el grado de obstrucción pulmonar yel grado de enfisema (p<0.05) pero no c on los cuartiles de la PCR. LosAT estaban aumentados en exfumadores (p<0.05). El tratamiento concorticoides inhalados no influyó en la frecuencia de distribución de losautoanticuerpos estudiados.

Conclusión: La prevalencia de autoanticuerpos circulantes posi-tivos está aumentada en la EPOC. Estos resultados aportan nuevasevidencias a la hipótesis de la patogenia autoinmune de la enfer-medad.

Subencionado parcialmente por FIS PI020541, FIS PI052082, SEPAR-2003, FUCAP-2003, Marató TV3-2004 y CIBERES.

178.LOCALIZACIÓN DE LAS REGIONES ANTIGÉNICAS DELAUTOANTIGENO CB (macroH2A). Ferrer Villahoz B, Delgadode la Poza JF, Rodríguez-Sánchez J-L, Juárez Rubio C. Hospitalde la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona.

En nuestro laboratorio se describió la presencia de anticuer posfrente al antígeno CB en el suero de pacientes con distintas enferme-dades autoinmunes. CB fue caracterizado como una proteína de 40kDa unida a DNA, cuya expresión varía en distintos tejidos, espe-cialmente en la diferenciación de células linfoides. Estudios realizadosposteriormente han permitido identificar al antígeno como macroH2A,una proteína unida a DNA con una región N-terminal con un 65% dehomología con la Histona H2A, y una región C terminal, el dominiomacro, altamente conservado en la evolución y que presenta caracte-rísticas muy similares a los dominios macro descritos en otras proteí-nas.

Dado que el autoantígeno CB presenta en su estructura dos regio-nes c laramente diferentes se decidió abordar la localizac ión de losepítopos antigénicos de la molécula con el propósito de conocer siexistía una localización preferente de dichos epítopos en alguna delas dos regiones. Se diseñaron una serie de digestiones de la proteí-na con reactivos químicos o enzimas que la cortaran en un númeropequeño de fragmentos y para el posterior seguimiento de la antige-nicidad se usaron protocolos de inmunoblot. Se escogieron el ácidoiodosobenzóico y la trombina para la digestión, dado que en condi-ciones controladas rompen por un único sitio, obteniendo sólo dosfragmentos de macroH2A . Así, al digerir con el ácido iodosobenzoi-co se obtenía el dominio H2A-like entero mientras que con la trom-bina se obtenía el dominio macro completo. Sólo cuando se mante-nía integro el dominio macro se observaba reactividad con los auto-anticuerpos.

En conclusión, el dominio macro de macroH2A presenta deter-minantes antígenicos reconocidos por los autoanticuerpos anti-CB.

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179.ANÁLISIS DE LOS POLIMORFISMOS L469F Y R334W, R334QDEL GEN CARD15 EN UVEÍTIS IDIOPÁTICA. Rodríguez PérezN1, Aguinaga Barrilero A1, Gorroño Echebarría MB2, Pérez BlasM1, Martín Villa JM1. 1Inmunología, Facultad de Medicina, Universi-dad Complutense, Madrid. 2Servicio de Oftalmología, Hospital Uni-versitario "Príncipe de Asturias”.

Introducción. Varios factores genéticos se han implicado en la sus-ceptibilidad a padecer uveítis. Recientemente, mutaciones en el genCARD15 se han considerado factores de riesgo en determinadas pato-logías inflamatorias. En concreto, los polimorfismos R334W, R334Q yL469F, se han implicado en la susceptibilidad a padecer síndrome deBlau, patología inflamatoria que cursa con uveítis. No hay datos, sinembargo, sobre el polimorfismo de esta región en uveítis idiopáticas,otra patología inflamatoria.

Pacientes y métodos. Se obtuvo muestra de ADN de 110 pacien-tes con uveítis idiopática y 104 individuos sanos. El polimorfismo L469Fde este gen se analizó mediante ensayo de genotipado. Los polimor-fismos R334W y R334Q se estudiaron mediante secuenciación direc-ta en 42 pacientes con uveítis y 38 controles. Se amplificó la región deinterés mediante PCR con los cebadores, y condiciones previamentepublicadas y se secuenció en el servicio de Genómica del C.I.B.

Resultados. Ninguno de los pacientes o controles presentaron lospolimorfismos anteriormente mencionados.

Conclusión. Los polimorfismos del gen CARD15 asociados a sus-ceptibilidad a padecer síndrome de Blau, no parecen, por el momen-to, serlo en el caso de las uveítis idiopáticas.

180.UTILIDAD CLÍNICA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-MPOPARA EL DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE INSUFICIEN-CIA RENAL AGUDA EN PACIENTES CON ESCLERODER-MIA. Franco Maside A1, Cobo Caso MA2, Romera Ruiz MI1,Barrios del Pino Y1. 1Sección Inmunología Hospital Universitario deCanarias. 2Servicio Nefrología Hospital Universitario de Canarias.

La esclerodermia es una enfermedad autoinmune multisistémi-ca. Debido a que la lesión patológica subyac ente en esta enfermedades de origen vascular, la implicación renal suele manifestarse de for-ma insidiosa con proteinuria, alteraciones del sedimento y posibleimpacto en la tensión arterial de estos pacientes. Sin embargo, se hadescrito más raramente un fenómeno agudo de insuficiencia renal enpacientes con afectación sistémica que constituye una urgencia vital.Esta presentación de crisis renal aguda constituía, hasta el descubri-miento de los IECA, la principal causa de muerte de estos pacientes.Por otra parte, en los últimos años se ha enfatizado el papel primor-dial que tiene la determinación precoz de autoanticuerpos asocia-dos al síndrome agudo riñón-pulmón (Ac. anti-membrana basal glo-merular (MBG), mieloperoxidasa (MPO), y proteinasa3 (Pr3)) para elpronóstico de los pacientes. Presentamos el caso de una paciente de53 años de edad, diagnosticada de Esclerodermia Sistémica desde haceseis años, que acude al Servicio de Urgencias con deteri oro brusco dela función renal y tensión arteri al sistólica de 157 mmHg (previamen-te normotensa). Ingresa con el diagnóstico de crisis r enal esclerodér-mica. Sin embargo, la determinación de Autoanticuerpos MPO, PR3y MBG resulta positiva para Ac. antiMPO, siendo el estudio de IFI enneutrófilos humanos positivo para P-Anca. Este hallazgo resulta cru-cial para la indicación de realización de Biopsia Renal cuyo resultadomuestra GMN extracapilar tipo II I (Pauci -Inmune). Se instaura tra-

tamiento con bolos de metilprednisolona y ciclofosfamida. En la pre-sentación se discute el caso y las alternativas diagnósticas así como laevolución de la enfermedad en la paciente y en el título de autoanti-cuerpos.

181.REACTIVIDAD FRENTE A UN GRUPO SELECCIONADO DEPÉPTIDOS DE LA MIELINA EN PACIENTES CON ESCLERO-SIS MÚLTIPLE REMITENTE –RECURRENTE. Grau-López L1,2,Naranjo M1, Ramo C2, Raich D1, Pérez-Cabezas B1, Martin R3,Pujol-Borrell R1, Martínez-Caceres E1, Borras FE1. 1Servicio I nmu-nología (LIRAD-BST). Hospital Universitario German Trias i Pujol,Badalona. 2Servicio Neurología. Hospital Universitario German Trias iPujol, UAB, Badalona. 3Institute for Neuroi mmunology and ClinicalMS Research. University Medical Center Eppendorf, Hamburg.

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad autoinmune delSNC caracterizada por la presencia de infiltrados inflamatorios, des-mielinización y pérdida axonal. Estudios previos(1) utilizando dosismuy bajas de antígeno han permitido seleccionar un grupo de epíto-pos inmunodominantes de la mielina altamente discriminatorios entrepacientes con EM y controles. Como paso previo a un protocolo detolerancia inmunológica antígeno-específica, en este estudio se pre-tende valorar la reactividad celular in vitro de un grupo de pacien-tes con EM, frente a la mezcla definida de 7 péptidos inmunodomi-nantes de la mielina, así como la evolución de esta reactividad en eltiempo.

Material y métodos. Treinte pacientes con EM remitente recurrente (RR) sin tratamiento inmunomodulador ni corticoideo en los 3meses previos a la extracción de la muestra y 10 controles. Ensayos deproliferación con PBMC de los individuos frente a la mezcla de los pép-tidos de la mielina: MBP 13-32, MBP 111-129, MBP 146-170, MBP 83-99, MOG 1-20, MOG 35-55, PLP 139-154 a concentraciones de 2 y 10μM de cada péptido. La proliferación de los linfocitos se determinómediante incorporación de timidina tritiada. Se consideraron positi-vas las réplicas ≥ 3SD del control negativo. Se consideraron posi-tivos aquellos individuos con >50% de las réplicas por encima de estevalor. En 16 pacientes, se realizó una segunda proliferación a los 3 mesesde la inicial.

Resultados. Se detectó una reacc ión positiva en 21 de 30 pacien-tes (75%) fr ente a la mezcla de péptidos, mientras que sólo 2 de 10(20%) donantes sanos tuvo una reacción similar. La reactividad celu-lar observada fue dosis-dependiente (39% a 2 μM frente 75% a 10 μM).Aquellos pacientes con reactividad positiva (n=22) presentaban unamayor discapacidad (EDSS 2.5 vs 1.0), frecuencia de brotes (8±2 vs 4±1)y un menor tiempo de evolución desde el último brote (9±0.6 vs 14±1meses). A los 3 meses se mantuvo la reactividad a la mezcla de pépti-dos en 13 pacientes de los 16 analizados. Un paciente positivizó trassufrir un brote de la enfermedad y dos pacientes negativizaron trasiniciar tratamiento con interferón β. Por tanto: a) Los pacientescon EM-RR proliferan significativamente frente a la mezcla descrita depéptidos inmunodominantes de la mielina; b) La reactividad se man-tiene en el tiempo pero parece verse modificada tanto por los brotescomo por el tratamiento inmunomodulador. Estos resultados sugierenque la mezcla definida de péptidos de la mielina es potencialmenteutilizable en protocolos de inducción de tolerancia antígeno-específi-ca. Bibliografía1. Bielekova et al. J Immunol 2004

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182.INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE (iNOS) EXPRESSIONIN AUTOIMMUNE THYROID DISORDERS (AITD). Guada-lupe Figueroa Vega N1, Majano P1, Larrañaga E1, Bravo JM1, Rodrí-guez Ramos R2, González Amaro R1, Marazuela Azpiroz M1. 1Hos-pital Universitario de la Princesa. 2Universidad San Pablo CEU.

Introduction. Nitric oxide (NO) is synthesized by different celltypes through the action of the enzyme nitric oxide synthase (NOS).There are four isoforms of this enzyme, the neuronal, the endothe-lial, the mitochondrial, and the inducible (iNOS) forms. Although NOmay have a relevant role in inflammation and tissue damage, its pos-sible role in autoimmune thyroidits has not been properly explored.

Aim. To study the expression of iNOS at protein and mRNA levelsin human autoimmune thyroid disorders ( AITD).

Methods. We evaluated the expression of iNOS in thyroid gland spe-cimens from 10 patients with Graves´ disease (GD), 5 with Hashimoto´sthyroiditis (HT) and 10 controls by immunohistochemical and RT-PCR.

Results. We found an up-regulated expression of iNOS expressionin both GD and HT thyroid glands at protein and mRNA levels. iNOSexpression was higher in GD compared to HT. In contrast, no iNOSexpression was detected in normal thyroid tissue. iNOS was detec-ted on thyrocytes, mainly in those localized in areas in close proximityto the inflammatory cell infiltrate. In addition, an up-regulated expres-sion of iNOS was observed in endothelial cells and thyroid-infiltratingmononuclear cells in both GD and HT.

Conclusions. The enhanced expression of iNOS in autoimmunethyroiditis suggests that the synthesis of NO may have a relevant rolein the inflammatory phenomenon and tissue damage observed in thiscondition.

183.EL FACTOR DE CRECIMIENTO VEGF COMO MARCADORDEL TRATAMIENTO CON BEVACIZUMAB EN PACIENTESCON RETINOPATÍA DIABÉTICA Y DMAE. Lucena Soto JM1,Sagrario Fustero T2, Ruiz Lapuente C2, Wichmann Schlipf I1, NúñezRoldán A1. 1Servicio de Inmunología del Hospital Universitario Virgendel Rocío. Sevilla. 2Servicio de Oftalmología del Hospital UniversitarioVirgen del Rocío. Sevilla.

La retinopatía diabética (RT) y la degeneración macular asociada a laedad (DMAE) son enfermedades oculares que se caracterizan por el desa-rrollo patológico de neovasos en la retina. VEGF es un factor proangiogé-nico cuya sobreexpresión en la retina se asocia al desarrollo de ambas pato-logías. Actualmente, se han desarrollado diversos tratamientos anti-VEGF.Uno de ellos, bevacizumad, administrado en el vítreo, está siendo utiliza-do como tratamiento off-label. A pesar de que numerosos estudios handemostrado su eficacia, no hay un consenso con respecto a la posología.

Con el objetivo de utilizar la concentración intraocular de VEGFcomo marcador de la eficacia del tratamiento, hemos realizado un estu-dio prospectivo en 15 pacientes con RT y 31 con DMAE de la evolu-ción de la agudeza visual (AV) y la concentración en el humor acuo-so de VEGF a los 0, 15 y 60 días del tratamiento.

Los resultados fueron los siguientes:

AV (logMAR) VEGF (pg/ml)0 días 15 días 60 días 0 días 15 días 60 días

RD 15,03 18,73 23,07 337 52 163DMAE 4,25 7,18 7,26 101 11 58

A los 60 días, el porcentaje de pacientes que mantenían la concen-tración de VEGF por debajo de los valores iniciales era del 77 y 71%para RD y DMAE, respectivamente. Por otro lado, un 73% de pacien-tes con RD había mejorado la AV tras 60 días post-tratamiento, mien-tras que en pacientes con DMAE la mejoría abarcaba al 65%.

Estos resultados demuestran que el tratamiento con bevacizumabmejora significativamente la agudeza visual de los pacientes (p<0,001),aunque en DMAE, el efecto positivo se ejerce en los primeros 15 días.Respecto a la posología, la re-inyección de bevacizumab, en aquellospacientes donde las concentraciones de VEGF se mantengan bajas, ten-dría un efecto muy limitado.

184.EXPRESIÓN DE METALOTIONEINAS EN CELULAS FOLICU-LARES TIROIDEAS EN AUTOINMUNIDAD Y NEOPLASIASPRIMARIAS DE TIROIDES: ¿UN MARCADOR DE STRESSTISULAR? Martínez-Arconada MJ1, Alonso N2, Armengol MP1,Soldevila B2, Sanmartí A2, Pujol-Borrell R1, Martínez-Caceres E1.1Servicio Inmunología (LIRAD-BST). 2Servicio Endocrinología y Nutri-ción. Hospital Germans Trias i Pujol. Badalona.

La enfermedad autoinmunitaria tiroidea (AITD) es una enferme-dad crónica resultado de una respuesta immune mantenida frente aantígenos del tiroides. Se ha postulado que en la AITD la respuestaautoimmunitaria se inicia con la generac ión “in situ” de señales mole-culares de peligro que a su vez podrían ser responsables de la perpe-tuación de la respuesta, dando lugar a enfermedad clínica. OBJETIVO:Analizar la expresión de un grupo de moléculas (TLR-2, TLR-4, HMGB-1, metalotioneínas I-II (MTs)) que pudieran actuar como señales mole-culares de peligro en glándulas de pacientes con AITD. MATERIAL YMETODOS: Se analizó un total de 14 glándulas de pacientes con enfer-medad de Graves’ Basedow (GB), bocio multinodular (n=12), tiroidi-tis de Hashimoto (n=2), carcinoma primario tiroides (n=3) y tiroidescontrol (n=5) por IFI con acMo anti-TLR-2, TLR-4, HMGB1, MT, HLA-II, TPO, CD3, CD45, CD20. RESULTADOS: Se ha observado positivi-dad anti MT en 9/14 glándulas de pacientes con GB y 2/3 carcinomasprimarios (negativa en el resto de patologías y en los controles). Laintensidad de expresión de MT en las glándulas de GB fue variable enlas células foliculares tiroideas (TFCs), pero cabe destacar que aque-llas TFCs que expresaban MT no expresaban HLA-II y viceversa. Enningún caso se observó expresión de MT y HLA-II en la misma célu-la. El patrón de expresión de MT en la enfermedad de GB sugiere queestas moléculas podrían estar implicadas en la resolución del proce-so inflamatorio y protección del tejido tiroideo en la AITD.

185.IMPLICATION OF LIVER X RECEPTORS (LXRs) IN THERESOLUTION OF INFLAMMATION AND AUTOIMMUNITY.Alonso González N1, Beceiro Casas S1, Déniz Fleitas JM1, Rami-rez CM1, Gallardo Campos G1, López Blanco F1, Ruiz de Galarre-ta CM1, Andujar M2, Castrillo Viguera A1. 1Universidad de Las Pal-mas de Gran Canaria. 2Hospital Materno-Insular. Las Palmas de GranCanaria.

The Liver X Receptors (LXRs) are members of the nuclear recep-tor superfamily of transcription factors that play central roles in thetranscriptional control of lipid metabolism and inflammation. Activa-tion of LXRs promotes the expression of genes involved in cholesterolhomeostasis and inhibits the expression of inflamatory genes. LXR sig-

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nalling is important for the innate immune response against intrace-llular bacteria. Thus, the study of LXR function in macrophages is unra-veling previously unrecognized links between innate immunity andlipid metabolism. Chronic inflammation and disregulation of the immu-ne mechanisms are currently underlying many human diseases. While essential to combat pathogens, macrophage-derived cytokines arealso injurious to normal cells and tissues. If unchecked at the resolu-tion of immune responses, production of cytokines leads to chronicinflammation and autoimmunity. For example, systemic lupus erythe-matosus (SLE) is a chronic inflammatory disease with unknown etio-logy in which the immune system turns its defenses upon self-elementssuch as chromatin. SLE is characterized by lymphocyte expansions,hypergammaglobulinemia and renal damage. Nephritis is caused bydeposition of DNA-specific autoantibody complexes, activation of thecomplement cascade and subsequent infiltration of T cells and macro-phages that amplify the local inflammatory response that results ineventual renal failure. Here we describe that mice lacking LXRs mani-fest an age-dependent breakdown in self-tolerance and develop auto-antibodies and autoimmune glomerulonephritis. W e will also discussthe potential implications of LXR-dependent pathways in the protec-tion against autoimmune disease and the potential mechanisms invol-ved. Our results demonstrate that LXRs are important players in theprotection against autoimmune disease and suggest that pharmacolo-gical activation of LXR could be a therapeutic alternative to ameliora-te inflammatory disregulation in autoimmune disease.

186.STUDY OF INTERACTIONS BETWEEN REGULATORY TLYMPHOCYTES AND TH17 CELLS IN AUTOIMMUNETHYROID DISORDERS (AITD). Figueroa Vega NG, BenedictoI, Sánchez Madrid F, González Amaro R, Marazuela M. HospitalUniversitario de la Princesa.

Introduction. Natural regulatory T lymphocytes (nTreg) are cellsspecialized in modulating immune responses a key event in limitingpathological autoimmunity. Several cytokines play a key role on bothTreg differentiation and function. On the contrary, T-helper Th17 cellsare a novel T-cell subset that produce interleukin 17, have a highlyinflammatory role recruiting immune cells to peripheraltissues, andare probably related to some autoimmune diseases. The cytokine trans-forming growth factor (TGF)-fÒ has a critical role in the differentiationof both Treg and Th17 populations. We have recently reported adysfunction in Treg cells in patients with autoimmune thyroid disor-ders ( AITD).

Aim. To study the role of different pro-inflammatory cytokines(IL-6, IL-15, IL-17, IL-21 and IL-22) on both the regulatory T cell dysfunc-tion and the Th17 differentiation in AITD.

Design. Case-comparative study ex vivo and in vitro of biologi-cal specimens from patients with AITD and controls.

Results: We found increased serum levels of proinflammatorycytokines IL-15 and IL-6 in patients with AITD when were comparedwith healthy subjects. Furthermore, we detected an increase in Th17population in vitro differentiation when stimulated with phorbol myris-tate acid plus ionomicine, mainly in TH patients. In addition, we obser-ved expression of IL-17 and IL-22 in thyroid biopsiesfrom AITD patients.Moreover, we detected by PCR, increased RNAm levels of IL-17, IL-22, and RORfxt transcription factor in HT and GD patients when com-pared with healthy subjects. Finally, these Th17 cells were able synthe-size pro-inflammatory cytokines (IL-17 and IL-22).

Conclusions. To our knowledge this is the first report where Th17lymphocytes have been studied in AITD. These cells could have a rolein the chronic inflammatory context and the regulatory T cell dysfunc-tion of AITD.

187.VALORACIÓN DE LA TÉCNICA “ANA AtheNA Multi-Lyte”PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEA-RES. Vlagea F, Alvarez Doforno R, Marcos Gutierrez MJ, MarcoCastro E, Lozano Doncel M, Fontan G. Servicio de Inmunología. Hos-pital La Paz. Madrid.

Introducción. La detección de anticuerpos antinucleares (ANA)es fundamental para el diagnostico y/ó clasificación de las enferme-dades autoinmunes sistémicas.

Objetivo. 1) Valorar una técnica multiparamétrica “ANA Multi-Lyte AtheNA” para detectar los anticuerpos antinucleares y compa-rarla con técnicas convencionales. 2) Optimizar su utilización comotécnica de cr ibaje en el laboratorio de autoinmunidad.

Materiales y métodos. Para la detección de ANA se empleó la IFIsobre portas de triple tejido de rata y células HEp-2 (Euroimmun,Lübeck). Para determinar la especifi cidad de los anticuerpos se empleócomo técnica múltiparamétrica IMD (INNO-LIA ANA Update, Inno-genetics) y para la cuantificación de Ac anti dsDNA el sistema Uni-CAP (Pharmacia). La tecnología AtheNA detecta ANA e identifica a lavez nueve autoanticuerpos (SS/A, SS/B, Sm, RNP, Jo-1, Scl-70, dsDNA,Centrómero, e Histonas). Se ensayaron 600 sueros de pacientes condiversas patologías y 53 controles.

Resultados. 1) El cribaje de ANA por el Sistema AtheNA revelauna muy alta concordancia con el ensayo IMD en las muestras depacientes con patología autoinmune sistémica. Cuando se comparacon la IFI disminuye un poco y a que ésta es menos sensible y a veces,es difícil interpretar los patrones, sobre todo en los casos de Ac antiRo/SSA y Ac anti Jo-1. 2) Resultados discrepantes negativos por Athe-na aparecen en patologías autoinmunes sistémicas con anticuerpos aotras especificidades distintas de las nueve ensayadas. 3) Resultadosdiscrepantes positivos por Athena se observan en algún positivo débil,en muestras con concentraciones elevadas de IgG y alguna con pato-logía infecciosa. 4) Para la utilización del sistema Athena como técni-ca de cribaje se deben usar unos protocolos de trabajo específi cos.

Conclusión. El sistema Athena es una técnica muy útil para detec-tar los ANA y los 9 anticuerpos más comunes presentes en las enfer-medades autoinmunes sistémicas, puede ser usada como cribaje en unlaboratorio de autoinmunidad siempre y cuando se utilice con unosprotocolos adecuados.

188.SIGNIFICADO DE Ac ANTI SLA Y Ac ANTI Ro52 EN PACIEN-TES CON PATOLOGÍA AUTOINMUNE. Alvarez Doforno R,Alba Domínguez M, Lozano Doncel M, Salcedo Moreno C, Fon-tan G. Servicio de Inmunología. Hospital La Paz. Madrid.

Introducción. Los autoanticuerpos dirigidos al antígeno Ro52 seencuentran en una variedad de enfermedades autoinmunes sistémi-cas, aunque su significado clínico no se conoce. Los Ac anti SLA sonaltamente específicos para la hepatitis autoinmune aunque sólo sedetectan en un 10-30% de los pacientes con esa enfermedad. Reciente-mente se ha descrito una asociación entre Ac anti Ro 52 y Ac anti SLAcon la actividad de la hepatitis autoinmune.

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Objetivo. Comprobar la asociación de Ac anti Ro52 y Ac anti SLAen hepatitis autoinmune. Estudiar la asociación de Ac anti Ro52 conotros anticuerpos en patologías autoinmunes sistémicas.

Materiales y métodos. Se analizaron la presencia de Ac anti Ro52y Ac anti SLA en 45 sueros de pacientes con hepatitis autoinmune y600 pacientes con enfer medades autoinmunes sistémicas. Para la detec-ción de Ac anti Ro52 se utilizó el inmunodot (INNO-LIA ANA Upda-te, Innogenetics) y para Ac anti SLA se empleó el inmunodot perfilhepático (Liver dot de ALPHADIA). Se recogieron los diagnósticos yparámetros bioquímicos de los pacientes que presentaban los dos anti-cuerpos.

Resultados. Hay 11pacientes con hepatitis autoinmune que pre-sentan Ac anti SLA (+) de ellos 7 fueron Ac anti Ro52 (+). De los 600pacientes con patología autoinmune 77 presentan Ac anti Ro52 (+) yen 65 se encuentran combinados con otros autoanticuerpos: SLA (4),Sm (3), RNP (9), Jo-1 (6), Scl70 (3), Ro60 (10), SSB (20), CEN B (16), rRNP(2), F-Actina (4), M2 (10). Los 4 pacientes que presentan Ac anti Ro 52y Ac anti SLA presentan disfunción hepática.

Conclusión. Hay una fuerte asociación entre Ac anti Ro52 y los Acanti SLA en las hepatopatías autoinmunes. Los Ac anti Ro52 en pato-logías autoinmunes sistemas se encuentran asociados a otros anticuer-pos, en los casos con alteración de transaminasas es conveniente estu-diar la presencia de Ac anti SLA descartando patología hepática autoin-mune.

189.ESTUDIO PROSPECTIVO DE MARCADORES SEROLÓGI-COS DE ACTIVIDAD CLÍNICA EN UNA COHORTE AMPLIADE PACIENTES CON LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO.Villegas Zambrano N, Novo MJ, Martínez-Taboada V, Bolívar A,López-Hoyos M. Servicios de Inmunología y Reumatología. HospitalUniversitario Marques de Valdecilla. Santander.

Introducción. El LES es una enfermedad de curso y pronósticovariable que puede presentar exacerbaciones y remisiones que preci-sa de un control clínico estricto, por lo que es importante conocer elgrado de actividad clínica. Para ello, una de las herramientas más uti-lizadas es la cuantificación de diversos parámetros serológicos comolos anticuerpos anti-DNA nativo (DNAn) y los niveles de C3 y C4.

Objetivo. Determinar la relación entre el índice de actividad clí-nica (SLEDAI) y los títulos de Acs anti-DNAn junto a los niveles séri-cos de C3 y C4, de forma prospectiva.

Métodos. El estudio se realizó en 194 pacientes. Para el análisis,se seleccionaron 98 pacientes con LES (seguidos en la consulta de reu-matología) por contarse con los datos clínicos suficientes y un segui-miento mínimo de 5 años. Se recogieron los siguientes parámetros:SLEDAI (descontando el dato de Acs anti-DNAn y complemento), lostítulos de Acs anti-DNAn, medidos mediante EliATM dsDNA (Pha-dia), e inmunofluorescencia indirecta sobre C. Luciliae (CLIFT), y nive-les séricos de C3 y C4 medidos mediante nefelometría.

Resultados. De los 98 pacientes analizados, solo 30 (30,6%) pre-sentaron alguna correlaci ón positiva significativa con el SLEDAI, sien-do el EliATM dsDNA en 7 (7,2%; p< 0.05), con CLI FT en 9 (9.18%).Respecto al complemento, se encontró correlación negativa en 11 (11.2%)con C3 y 12 (12,3%) con C4, sin haber relación de estos datos con eltiempo de evolución del LES. Por otraparte cabe destacar que la mayo-ria de los pacientes presentan disminución de los Acs anti-DNAn antesdel brote de actividad, reflejado por el aumento del SLEDAI, aunqueno es estadísticamentesignificativo.

Conclusión. Los datos reflejan la experiencia de único centro duran-te más de 8 años de recogida de los datos clínicos y serológicos de for-ma prospectiva. Según ello, ninguno de los marcadores serológicos,clásicamente asignados como marcadores de actividad clínica, se lespuede conferir una relevancia clínica por sí mismos. Por consiguien-te, su utilidad vendrá dada por la situación individual de cada pacien-te.

190.PORCENTAJES ELEVADOS DE CELULAS CD8+DR+ SE ASO-CIAN A COMPLICACIÓN CLINICA EN MUJERES CON SIN-DROME ANTIFOSFOLIPIDO (SAAF) OBSTETRICO. CarboneJ1, Gallego A1, Lanio N1, Sarmiento E1, Aguaron A2, Orera M3, Fer-nandez-Cruz E1. 1Servicio de Inmunología. 2Servicio de Obstetricia.3Unidad de Genética. Hospital Gregorio Marañón. Madrid.

Introducción. Las pacientes con SAAF obstétrico pueden sufrirdistintas complicaciones clínicas además de la morbilidad obstétrica,sin que dispongamos en la actualidad de marcadores que indentifi-quen el riesgo de desarrollarlas. Su conocimiento permitiría progra-mar más finamente medidas profilácticas y terapéuticas.

Objetivo. Establecer si existe asociación entre alteraciones de sub-poblaciones linfocitari as T, B o NK, que se observan en el SAAF obs-tétrico, y la presencia de complicaci ones clínicas (isquemia/trombo-sis, crisis convulsivas, preclampsia/abruptio placentae).

Métodos. Estudio transversal: 36 mujeres con SAAF obstétrico, 36con aborto rec urrente sin AAF, 36 sanas con hijos y sin abortos y 36sanas sin antecedente de gestación. Edad similar en todos los gru-pos. Subpoblaciones linfocitarias estudiadas en sangre total, median-te citometría de flujo de tres colores. Distintas combinaciones de ac.monoclonales anti: CD3, CD4, CD8, CD25, CD45RA, CCR7, CD38,HLA-DR, CD19, CD27, IgD, CD5, CD40, CD16 y CD56. Estudio rea-lizado sin actividad reciente de las complicaciones. 13 pacientes tuvie-ron algunas de las complicaciones.

Resultados. En relación con distintos grupos control, las mujerescon SAAF tenían: >% de células T activadas (CD4+DR+, CD8+DR+);>% de células B-naive (CD19+CD27-IgD+) y <% de células NK (CD3-CD56+CD16+). Se demostró asociación significativa entre porcentajes>40% de células CD8+DR+ y el antecedente de trombosis (Prueba deFisher, p=0.014); y con la presencia de cualquiera de las complicacio-nes descr itas (p=0.016). Niveles elevados de células CD8+DR+ se aso-ciaron a ri esgo de trombosis (RH 10.2, IC95% 1.16-90.91; p= 0.03) i nde-pendientemente de la presencia de títulos más altos de ACA.

Conclusiones. El estudio de marcadores de activación de celúlasT CD8+ podría ser útil para identific ar el riesgo de complicaciones enmujeres con SAAF obstétrico. Se ha iniciado un estudio prospectivode las pacientes para establecer el impacto de las alteraciones inmu-nofenotípicas en el curso clínico del SAAF.

191.ESTUDIO DEL PERFIL CELULAR PRESENTE EN LÍQUIDOCEFALORRAQUÍDEO DE LOS DISTINTOS SUBTIPOS DEESCLEROSIS MÚLTIPLE. Espiño Martínez M, Álvarez Cerme-ño JC, González Porqué P, Sádaba Argaiz MC, Gómez Rial J, Rol-dán Santiago E, Villar Guimerans LM. Hospital Ramón y Cajal.Madrid.

Introducción. La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad des-mielinizante del sistema nervioso central. Se ha demostrado recien-

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temente que los linfocitos B y los anticuerpos juegan un papel impor-tante en la patogenia de esta enfermedad. El 96% de los pacientescon EM presenta síntesis intratecal de IgG (SIG) y el 40% además sín-tesis intratecal de IgM (SIM). La presencia de esta última constituyeun marcador de mal pronóstico en los pacientes con esclerosis múlti-ple remitente recidivante (EM-RR).

Objetivo. Estudiar los perfiles linfocitarios presentes en el líqui-do cefalorraquídeo de una serie de 187 pacientes con esclerosis múlti-ple divididos según la presencia o no de SIM y según la forma evolu-tiva de la enfermedad.

Metodología. Muestras: Las muestras de LCR de pacientes conEM se centrifugaron a 1800 rpm durante 15 minutos inmediatamentedespués de ser extraídas. El sobrenadante (LCR) se utilizó para la detec-ción de bandas oligoclonales de IgG (BOCG) e IgM (BOCM) median-te isoelectroenfoque e inmunoblotting. El pellet celular se utilizó parael análisis de las poblaciones celulares. Se marcó con anticuerpos fren-te a los siguientes marcadores: CD45, CD4, CD8, CD38, CD19, CD5. Elanálisis de las células se hizo mediante citometría de flujo en un citó-metro FACSCanto (Becton Dickinson).

Resultados. Los pacientes con EM-RR con BOCM tienen un aumen-to significativo de linfocitos B CD5+ y linfocitos B activados CD38+ asícomo de linfocitos T CD4+ con respecto a los pacientes con EM-RR queno presentan BOCM y los pacientes con EM primaria progresiva (EM-PP). Los pacientes con EMRR presentan un aumento significativo delinfocitos B CD5- con respecto a los PP. Los pacientes con EM-PP pre-sentan un aumento significativo de linfocitos CD8+ con respecto a lospacientes con EM-RR.

Conclusiones. El estudio de LCR puede contribuir a conocer losmecanismos fisiopatológicos predominantes en los distintos tipos deEM y ayudar a la identificación de los mismos.

192.CINÉTICA DE LAS CÉLULAS DENDRÍTICAS Y NIVELESSÉRICOS DE HORMONAS SEXUALES DURANTE LA GES-TACIÓN Y POSTPARTO EN EMBARAZADAS SANAS Y CONESCLEROSIS MÚLTIPLE. Teijeiro Martorell R, de Andres C, Sán-chez-Ramon S, Aristimuño C, Rodríguez-Mahou M, López-Naza-reno N, Fernández-Cruz E, Martínez-Gines ML. HGU GregorioMarañón. Madrid.

Introducción. Los mecanismos celulares inmunológicos por losque disminuye la actividad de la esclerosis múltiple (EM) durante lagestación son poco conocidos. Las células dendríticas (CDs) desempe-ñan un papel central en la inducción y regulación de las respuestasinmunológicas. Es conoc ido que las hormonas sexuales son inmuno-moduladores.

Objetivos. Analizar durante los 3 trimestres del embarazo(T1,T2,T3) y en el posparto (PP) la proporción de las subpoblacionesde CDs en 20 embarazadas sanas (ES) y en 30 con EM.

Métodos. Se analizaron mediante citometría de flujo las CDs mie-loides (mCDs, BDCA1+CD19- y Lin-CD11+) y plasmacitoides (pDCs,BDCA2 y Lin-CD11-) y los niveles séricos de hormonas sexuales (estra-diol, progesterona y testosterona).

Resultados. En ES observamos un aumento de mCDs CD11+ (de0,77±0,31 en T1 a 1,43±0,61 en T2 p=0,04), disminuyendo a 0,72±0,17en PP. Las pDCs BDCA2 disminuyeron (0,39±0,24 in T1a 0,20±0,17 enT3, p=0,005) y persisten bajas en PP (0,20±0,04). En EM, ambas mCDsaumentaron durante el embarazo, más las BDCA-1 (0,27±0,15 en T1a 0,45±0,67 en T3) y se mantuvieron elevadas en PP (0.44±0.42.). LaspCDs CD11c- disminuyeron (0, 47±0,15 en T1 a 0,36±0,13 en T3, p=0,05)y suben no significativamente en PP (0,43±0,23). En el PP, las ES tienenlas pCDs más bajas que las EM (p=0,007). En ambas, las hormonasaumentaron significativamente durante el embarazo y descendieronen el PP.

Conclusión. La gestación es un modelo único de tolerancia inmu-nológica fisiológica, que afecta beneficiosamente a la EM. La distintassubpoblaciones de CDs presentan patrones diferenciales en el emba-razo normal y en el contexto de embarazo en la EM, que sugieren efec-tos inmunorreguladores específicos.

193.AUTOANTICUERPOS ANTI-PCNUA? UN NUEVO PATRÓNDE FLUORESCENCIA EN HEP-2 RELACIONADO CON ELCICLO CELULAR. Ontañón Rodríguez J1, Rada Martínez R1, SáezMéndez L2. 1Servicio de Análisis Clínicos. 2Servicio de Medicina Inter-na. Complejo Hospitalario de Albacete.

El objetivo de esta comunicación es hacer público el hallazgo deun patrón de fluorescencia del que no hemos encontrado ninguna refe-rencia bibliográfica para su discusión entre los asistentes al congreso.

Metodología. Técnica de cribado de ANAs mediante inmunofluo-rescencia i ndirecta sobre portas con células HEp-2. Título inicial 1/40.Diluci ones seriadas a 1/2 hasta 1/640, en la fotografía adjunta 1/320.

Descripción. El patrón de fluorescencia encontrado consiste en latinción irregular de las células, afectando aparentemente a un antíge-no de expresión variable en función del ciclo celular (no se tiñen el 20-30% de las células) y cuya localización es también variable dando lugara imágenes de células que, en la interfase, muestran patrones interme-dios entre el centromérico, el moteado y el nucleolar sin tinción denucleoplasma. Las células en metafase no se tiñen a diferencia de loque sucede en los centroméricos. Asociación con enfermedad: la mues-tra analizada corresponde a un paciente varón, de 71 años de edad,que acude a consulta externa por “pérdida de memoria”. Historia deartralgias y artrosis.

Vida activa, normal. MMSE 30 puntos Hipótesis. Podía tratarse de un antígeno de expresión variable

implicado en la asociación centrómero-nucleolo que se da durante elciclo celular.

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AAbad C, 17Abadía Molina AC, 45, 67, 85, 105, 108Abarrategui C, 81Abd-El-Fatah-Khalil S, 19, 63, 64Abos Gracia B, 43Acero A, 25 , 84Acevedo Calado MJ, 23, 25Aguado E, 107Aguaron A, 119Aguilar Reina J, 41, 98, 99Aguilera García I, 23, 25, 69Aguinaga Barrilero A, 116Agust A, 115Agustí M, 78Alamillo C, 23Alba Domínguez M, 118Alba E, 61, 69Albarrán F, 59Alcalá Peña MI, 28, 73Alcaraz MJ, 86Alcoceba M, 71Alegre Aguarón E, 108Alegre Aguarón E, 68Alemany JM, 20Alemany JM, 79Alés Díaz I, 39Alfaro Sánchez D, 48Alfonso Pérez M, 34Algarra I, 73 , 74Algarra I, 95Algora M, 64Allende L, 33Allende Martínez LM, 30, 76Almanza H, 97Almeida Parra J, 45, 47Alonso A, 102Alonso Árias R, 60Alonso Blanco C, 71Alonso C, 36Alonso Chamorro L, 35Alonso Colmenar LM, 92Alonso González N, 117Alonso MM, 81Alonso Moreno F, 40, 110Alonso N, 117Alonso Ortiz A, 39Alonso Sardon M, 62Alonso-Árias R, 20 Alorda J, 79Alperi M, 58Alvarez A, 32, 72, 75, 76Álvarez Cermeño JC, 119Alvarez Doforno R, 24, 33, 118Alvarez Domínguez C, 40, 99Álvarez E, 74Alvarez L, 24Álvarez López MR, 70, 82Álvarez Márquez A, 23, 25, 41Álvarez MR, 86Álvarez Vega B, 40, 110Álvarez-Cermeño JC, 48Álvarez-López MR, 20, 79, 83Álvarez-Mon M, 18, 59, 60Álvarez-Vallina L, 27, 38

Alves H, 68Ambrosi A, 102, 112Ampudia RM, 52Amunárriz C, 42, 65Andrade RJ, 73Andres Martin A, 24Andujar M, 117Anel Bernal A, 108Angulo A, 102Angus B, 82Antó JM, 115Anton Gutiérrez IM, 106Antón M, 107Aramburu J, 40Arbos A, 88Arbós Magrinyá A, 93Arias CF, 72Arias M, 23Arina A, 25, 26Aristimuño C, 120Armengol Barnils MP, 49, 50Armengol MP, 117Arnaiz-Villena A, 19, 63, 64, 85Arostegui JI, 32Arrieta A, 84Arrieta Gutierrez A, 61Arroyo JL, 42, 65Arroyo M, 94Arroyo R, 49Asin Pardo L, 104Ausín F, 42, 65, 101Ausin Ortega F, 66, 101Auxiliadora Bajo M, 44Azpilicueta A, 26

BBadell I, 31, 76, 78Baeza A, 25Balado P, 25, 84Balanzat Muñoz J, 93Balanzategui A, 47, 71Balas Pérez A, 19, 21, 28Balderramo D, 23Ballester S, 111Ballesteros Andres M, 92Ballina J, 58Balsa Criado A, 17Bañón-Rodríguez I, 106Baquero Mejía I, 101Barber DF, 72Barbolla L, 63, 64Bárcena J, 97, 100Bárcena P, 47Bargay J, 88Barrenechea C, 34Barrios del Pino Y, 116Beceiro Casas S, 117Bello R, 46, 109Bellón Heredia T, 36, 44Belver Miguel L, 35Benaiges-Martínez C, 76, 78Benavides Orgaz M, 39Benedicto I, 118Benito A, 23Benito Almazan MJ, 23, 98

Berga Bolaños R, 48Berga R, 40Bernal MJ, 34, 72, 85Bernal-Ramos A, 83Bernardo González I, 62, 67, 96Bernardo I, 67Bernardo MV, 86Bernardos A, N69Berruguilla Pérez E, 39, 73, 74, 95Bertranpetit J, 30Bilbao A, 84Blanco FJ, 18Blanco García RM, 70Blanco Gelaz MA, 21Blanco Muñoz O, 85Blanco O, 45, 67, 105, 108, 110Blasco-Olaetxea E, 90Bofill M, 112Bohorquez JC, 88Bolívar A, 119Bonet Roselló L,107Borrás FE, 52, 116Borràs Serres FE, 105Borraz Y, 73Borrega P, 37Borro Mate JM, 71Bosch L, 22, 97Botella Martínez C, 20, 70, 79, 83Bravo B, 111Bravo JM, 117Bravo Romero MJ, 39, 102Bravo-Mendoza C, 21Brckalo T, 43Brieva JA, 16, 34, 72, 85, 88, 89Bruijns S CM, 44Brun A, 101Buelta L, 38, 51Bustamante L, 19, 21, 28Busto E, 33, 110, 113Buxadé M, 40

CCaballero González A, 39, 102Cabello V, 25Cabezón Sánchez A, 17Cabrera T, 26Cacheiro C, 112Cacho Gutierrez J, 19Cacho J, 63Calle Y, 106Calleja Antolín S, 30, 60, 67Callejas Rubio JL, 51Calonge M, 111Calvo Benito FJ, 93Calvo J, 88Calvo Pinilla E, 100Camacho F, 26Camarero C, 15, 78Cambra A, 82Campanario F, 94Campillo Marquina JA, 20, 79, 82, 83Campos E, 65Campos-Caro A, 37, 89Cantero S, 69Cantó E, 74

Indice de autores

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INDICE DE AUTORES VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

Cantón J, 92Cañete JD, 18Capilla A, 61Caragol I, 29, 32, 76Carbone Campoverde J, 70, 81Carbone J, 25, 53, 82, 84, 119Cárdaba B, 29, 80Cardero Gonzalez E, 90Carillo J, 47Caro Oleas JL, 23, 25, 72, 98Carranza Domínguez D, 33, 107Carrascal J, 52Carrasco Hidalgo A, 66Carrasco JA, 57Carrasco Marin E, 40, 99Carretero R, 26, 92Carrillo J, 52Casado A, 57Casado JF, 26Casado JG, 36Casanova J-L, 32Casares C, 74, 95Cassatela MA, 43Castañer Alabau JL, 24Castaño J, 36Castell M, 58Castellote C, 58Castiella T, 68Castillo Rama M, 62, 67, 96Castrillo Viguera A, 117Castro Beiras A, 71Castro Henriques A, 68Castro MJ, 44, 60, 67Castro P, 95Castro Panete MJ, 67Cedenilla Horcajuelo M, 43Cejalvo Goyanes T, 48Cénit MC, 49Cervera C, 23Cervera I, 64Chacártegui M, 29, 80Chamorro Pérez S, 40, 44Chapgier A, 32Chara L, 18, 59, 60Cheng T-Y, 113Chevarría J, 18, 59, 60Chicano A, 103Chillón MC, 71Chong Espino Y, 19Chou H-C, 106Chow I-T, 37Cianchetta Sivori M, 96Cillero L, 94Cladera A, 88Clemente J, 76Clemente X, 52Closa D, 56Clotet B, 112Cobo Caso MA, 116Cobo Ibáñez T, 17Cobo MCobos Dols M, 33, 39Coll Martí J, 28, 73, 94Collado A, 73, 74, 95Collantes Estevez E, 57

Colobran Oriol R, 49, 50Colombetti S, 26Comabella M, 49, 108Compte Grau, 27Corbillo Colom C, 93Cordero OJ, 89Córdoba L, 97, 100Corell A, 111Corral R, 71Corral-San Miguel R, 74Correro F, 16Cortes JR, 37, 51Cortezón SA, 76Costa C, 22Costo R, 72Coto E, 30Cózar JM, 39, 92Crawford M, 19Crespo A, 33Crespo E, 73Crespo Leiro M, 71Crisci E, 42, 97, 98, 100Cruz García M, 77Cuende E, 59, 60Cuesta Martínez A, 27Cuesta Mateos C, 34

DDai Z, 37Dávila B, 99de Andrés A, 15, 78de Andres C, 120de Dios Colmenero J, 102de Garcillan Goyoaga B, 92de Gracia J, 32, 76de Haro J, 112de la Calle H, 114de la Calle Martín O, 30, 31, 76, 78de la Concha EG, 49, 114de la Escosura A, 102, 112de la Fuente H, 110de la Mata C, 67, 85, 108, 110de la Rosa O, 36de la Torre Bravos M, 71de Lamata Espinosa C, 45, 105de las Fuentes BD, 72de las Heras B, 97, 115de las Heras V, 49de Pablos P, 76de Paula Sanchez Gordo F, 66de Paz B, 52, 58Deishenhammer F, 49del Álamo C, 29, 75, 80del Campo Alonso AB, 91del Cerro Vadillo E, 40, 99del Giudice G, 41del Peso G, 44del Pozo N, 30del Pozo V, 29, 30, 75del Puerto Morales M, 72del Val M, 43, 97Delgado Cerviño E, 33Delgado de la Poza JF, 115Delgado J, 80Delgado-Pérez L, 37

Dema B, 49Dema Jiménez B, 55Déniz Fleitas JM, 117Desportes Bielsa P, 68, 108Detkova D, 32, 76Diaz Alderete A, 86Díaz B, 102, 112Díaz D, 18, 59, 60Diaz I, 98Diaz MC, 24Díaz Peña R, 21Díaz San Segundo F, 97Díaz-Freitas B, 44Díaz-Peña R, 20Díaz-Rubio M, 16, 55Diaz-Viciedo R, 115Diebold S 106Diebold Y, 111Diéguez MA, 81Domenech García N, 71Domínguez A, 32Domínguez J, 40, 42, 110Domínguez MA, 31Domínguez O, 110Donat E, 61Dongo MN, 106Dubrot J, 25

EEscalera A, 17Escobar D, 32, 33, 79, 80, 82, 83Esiri M, 48España A, 78Español Boren T, 28, 75Español T, 32, 34, 76, 81Espejo C, 49Espino L, 114Espiño Martínez M, 48, 119Esteller M, 56Estevez Cid F, 71Evora N, 90Ezquerra Martínez A, 40, 110

FFaner Canet MR, 47, 65Faro J, 44, 102, 112Farrero E, 115Feito MJ, 109Fenutría Aumesquet R, 107Ferández-Rey M, 50Fernandes R, 44Fernándes-Arquero M, 17Fernández Fresnedo G, 23Fernández Gutiérrez B, 17Fernández J, 25Fernandez M, 63Fernández MA, 105Fernández O, 17Fernández P, 76Fernández Prieto L, 40, 99Fernández Rey M, 51Fernández S, 47Fernández-Arquero M, 16, 30, 55, 56, 77, 114Fernández-Cruz E, 52, 53, 70, 81, 84, 86, 92, 103, 119,

120

Fernández-Guerrero M, 96Fernández-Gutiérrez B, 17, 56Fernández-Llamazares J, 100Fernández-Malavé E, 113Fernández-Martínez I, 111Fernández-Nieto MM, 75Fernández-Rey M, 41Fernandez-Valle C, 34Fernández-Yañez J, 70, 84Fernéndez-Reyes M, 93Ferrando AA, 46Ferre S, 64Ferreira A, 30, 77, 83Ferrer J, 32, 79, 80Ferrer Villahoz B, 115Ferri A, 19, 63, 64Fieschi C, 32Figueras C, 75Figueredo MA, 55, 56, 114Figueroa Vega NG, 118Flores E, 82Florido F, 80Florido Y, 32Fogal V, 38Fontán Casariego G, 31, 33Fontan G, 24, 30, 31, 77, 83, 118Fraile L, 97, 98, 100Franch A, 58Franco Maside A, 116Fresno Escudero M, 99Frías Casas M, 79Frias I, 90Frías M, 77Fuentes D, 60Fuentes M, 94Fuster F, 23

GGallardo Campos G, 117Gallardo Galera JM, 65Gallego A, 119Gallego López A, 70, 81Gambón-Deza F, 20, 64Gámez Gámez C, 29, 30, 75Gamoneda E, 60Garces P, 29García Alonso AM, 70, 82García Alvarez F, 68García de Burgos M, 93García Delgado R, 96García JM, 84García Jurado G, 77, 79García Laorden MI, 32García Lora AM, 39, 74, 95García Lozano JR, 41García M, 88García MC, 83García Montero AC, 47García Olivares E, 85, 108, 110García Pérez AGarcía Pérez A, 35, 110García Peydró M, 46García Ruano AB, 91García Sánchez E, 90, 99García T, 72

García Trujillo JA, 73García Veguillas A, 35Garcia-Alonso A, 79, 83García-Alvarez F, 108García-Aymerich J, 115García-Calatayud MC, 83García-Ceca J, 48García-Cozar F, 107García-Están J, 83García-Gascó P, 98García-Laorden I, 32García-López Asenjo JA, 94García-Lora AM, 73, 95García-Lozano JR, 17, 98, 99García-Merino A, 87García-Penarrubia P, 74, 103, 106García-Peydró M, 111García-Rodríguez MC, 30, 83García-Samaniego J, 42, 98García-Sánchez F, 19, 21, 28García-Sanz R, 71Garcia-Tamayo J, 90García-Vallejo JJ, 44Garet ME, 112Garrido Bravo I, 70Garrido C, 39, 73, 74, 95Garrido F, 26, 73, 92, 95Garrido P, 47Garrido S, 31, 77Garrido Torres-Puchol F, 39, 74, 91, 95Gavilán F, 69Gayà Puig A, 88, 93Gayoso I, 36, 86, 87Gea J, 115Gentil MA, 25Gil Herrera J, 86, 92Gil J, 52Gimeno L, 86Gimeno M, 98Giron JA, 34Giron N, 97, 115Gisel del Pozo Rodríguez N, 77Godino J, 104Gómez de la Concha E, 16, 17, 30, 55, 56, 77Gómez del Moral M, 43Gómez F, 115Gómez I, 61, 69Gómez J, 52Gomez Lopez MT, 40, 99Gómez Perales JL, 89Gómez Rial J, 119Gomez S, 55 , 111Gómez-Casado E, 97, 100Gómez-Lozano N, 36Gómez-Rial J, 94Góngora Fernández R, 35González Amaro R, 117, 118González C, 78González Carreño T, 72González Escribano MF, 25, 41, 72González Fernández R, 57, 65, 77, 79González García C, 111González García S, 46González Granja A, 90, 99González J, 50

Gonzalez M, 71Gonzalez Porqué P, 90, 119González Rodríguez S, 37González-Escribano MF, 17, 98, 99González-Fernández A, 44, 102, 112González-Garcia I, 89González-Porqué P, 48, 94Gonzalez-Quevedo N, 32González-Santesteban C, 31, 76Gonzalo Ocejo-Vinyals J, 15, 42, 65, 101Gorgolas-Hernández de Mora M, 96Gorroño Echebarría MB, 116Goya G, 104Goyenechea A, 96Gozalbo López B, 43Granell R, 61 69Grau-López L, 116Graus F, 38Grille Cancela Z, 71Grimbacher B, 29Groh V, 37Guadalupe Figueroa Vega N, 117Guarinos RF, 106Gure AO, 38Gutierrez C, 52, 58, 104Gutierrez EI, 15Gutiérrez San José E, 111Gutierrez-Solar B, 64, 104Guzmán Fulgencio M, 62, 96Guzman-Bistoni C, 90

HHarris C, 31Head J, 64, 104Heras M, 93Hermenegildo IN, 94Hernandez A, 93Hernández Campo PM, 45Hernandez Cerceño MI, 63Hernández González M, 76Hernández J, 93, 111Hernández M, 29, 32Hernández MV, 18Hernández S, 94Hernández-Caselles T, 74, 103, 106Hernández-Cillero L, 91Hernández-López C, 109Hernández-López J, 32Herraiz MA, 104Herrero MJ, 95Hervás-Stubbs S, 25, 26Hevia E, 101Hidalgo Lumbreras L, 109Hortelano Blanco S, 97Hortelano S, 115Houston L, 47

IIbarra R, 104Ibón Rallón N, 42Iglesias J, 80, 83Iglesias M, 3, 50, 51Imbernón M, 89Infantes S, 43Iñiguez MA, 112

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INMUNOLOGÍA INDICE DE AUTORES

JJaen J, 66James E, 47Janda J, 26Jara P, 24Jarque D, 61, 69Jiménez Cobaleda MJ, 93Jiménez Gómez G, 89Jimenez Gómez J, 57Jiménez M, 43Jiménez P, 39Jiménez Pérez E, 48Jiménez-Gómez G, 89Juan M, 47Johnstone C, 97Jones GE, 106Joven B, 60Jover JA, 17Juan M, 47, 65Juarez C, 74Juárez Rubio C, 115Juliá A, 34Julià Arteaga E, 108Julià MR, 33, 115

KKaiser BK, 37Kalaydjieva L, 30Ki Ndelán Jaquotot KM, 77Kwok WW, 47

LLaban S, 44Labarga P, 42, 98Lage Gallé E, 23Laguarda E, 69Lahoz C, 29, 30, 80Lamana Domínguez A, 46Lamas R, 33Lanio Amador N, 70, 81Lanio N, 82, 119Larrad Mur L, 68, 108Larrañaga E, 117Larrauri J, 24Lavado Valenzuela R, 39 , 102Lavín-Alconero L, 65, 101Leal M, 79Lécrevisse Q, 45Lefranc G, 33Legaz Pérez I, 70Leno E, 45, 67, 85, 105, 108, 110Leon Arroyo A, 55, 62León MJ, 18, 59Leon Moya V, 19, 55, 62, 63Lévy F, 26Leyva-Cobián F, 15, 42, 65, 66, 101Linares Dickler I, 39, 73, 74, 95Líz Marzán L, 44Lizana A, 103LLanes E, 80Lombardía L, 110López Alvárez MR, 70, 82López Blanco F, 117López Botet M, 83López Carrascosa A, 99

López Cernada ME, 29López D, 43, 97López E, 30, 75López García C, 49López Giral S, 34López Hoyos M, 23López Larrea C, 21, 60López Lera A, 31López M, 20, 42, 79, 98López Mejías R, 30López P, 52, 58, 104López R, 77, 97López Trascasa M, 31López Vázquez A, 21, 60López-Botet M, 43, 102López-García A, 111López-Hernández R, 20, 83López-Hoyos M, 15, 119López-Larrea C, 20, 21López-Lera A, 77López-Nazareno N, 120López-Nevot MA, 17López-Rodríguez C, 40Lopez-Solbes R, 83López-Trascasa M, 77López-Vázquez A, 20Lorente E, 43Lorenzo G, 101Loza-Santamaría E, 56Lozano Doncel M, 118Lozano F, 18, 23Lozano Reina JM, 77, 79Lozano Soto, 107Lucas Aroca D, 70, 83Lucas D, 20Lucas Martín AM, 50Lucena MI, 73Lucena Soto JM, 117Lucendo B, 44Luengo O, 30Luque I, 61, 84Luque Moruno J, 77, 79Lutz H, 31

MMadrazo Toca F, 40, 99Magadán Mompó S, 20, 64Magadán S, 44Magri G, 102Majado MJ, 86Majano P, 117Maleno I, 26, 95Maluenda C, 49, 55Mancebo Sierra E, 30, 62, 76, 96Mann HH, 37Manzanares Martín B, 57, 65Mañes S, 72Máñez R, 22Marazuela Azpiroz M, 117, 118Marco Castro E, 118Marcos Campos I, 104Marcos Gutierrez MJ, 118Maricarmen Ruiz-Ruiz M, 110Marie Christensen E, 66Marín Alberca MG, 56, 57

Marin Crespo N, 24Marín Gallén S, 52Marín N, 15, 78Marin Rubio LA, 71Márquez Ortiz AM, 16, 55Martín F, 33Martin Folgar R, 101Martin Gayo E, 45, 46Martín Ibáñez J, 17Martín J, 17, 98Martín JL, 81Martín Martín L, 45Martín Martín N, 35Martin Nalda A, 75Martin R, 116Martín Villa JM, 116Martín-Cófreces NB, 46Martín-Orozco E, 103, 106Martinez A, 114Martínez A, 17, 49Martínez Ara J, 31Martínez Cabeza V, 44Martínez Cáceres E, 49, 50Martínez de la Riva S, 40Martínez de Saavedra M, 72, 85Martínez Doncel A, 16, 55Martínez L, 78Martinez Laso J, 64, 104Martínez Lorenzo MJ, 68 , 108Martinez Lostao L, 108Martínez N, 79Martínez Naves E, 43Martínez Osorio H, 111Martínez Pomar N, 83, 85Martínez Sánchez F, 57Martinez Sánchez MV, 70, 82Martínez VG, 109Martínez Viñambres E, 28, 73Martínez-Arconada MJ, 100, 117Martínez-Caceres E, 100, 116, 117Martínez-Doncel A, 17, 55, 56Martínez-Esparza M, 74, 103, 106Martínez-García P, 83Martínez-Gines ML, 120Martínez-Martínez A, 91Martínez-Martínez L, 31, 76Martínez-Pomar N, 32, 33, 82Martínez-Taboada V, 119Martínez-Viñambres E, 94Maruri Machado N, 61Maruri N, 84Mascaro M, 88Massó JM, 115Matamoros N, 32, 33 34, 79, 80, 82, 83, 85Mateo I, 60Mateu E, 98Matías JA, 60Mazuecos A, 72Medina F, 89Meenagh A, 36, 85Mejías Laguna R, 72Melero I, 25, 26Melero JA, 97Melgosa M, 33Melón S, 81

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Mena de la Cruz R, 31, 77Mena I, 97, 100Mendes C, 68Méndez J, 44Mendez Valdes R, 91Mendoza JL, 16, 55Meneu-Diaz JC, 67Mérida E, 67Merino J, 38 , 41, 50, 51Merino R, 38, 41, 50, 51Merkoçi A, 102, 112Middleton D, 36 85Milà J, 82Millan P, 19, 63, 63, 64Minguela A, 20, 70Minguela Puras A, 82, 83Minguillón J, 40Miñones L, 81Miranda A, 80Miras M, 70Mirete Bachiller S, 24Mirete S, 15 78Mittelbrunn M, 110Modrego J, 103Modrego Ruiz J, 86, 92Moga E, 74Molina IJ, 33, 34Molina J, 90Mollá R, 30Moltó L, 94Mondejar P, 79Monserrat J, 18, 59, 60Monsó E, 115Montalban X, 49, 108Montes Cano MA, 98, 99Montilla C, 55Montoro J, 61, 69Montoya M, 42, 97, 98, 100Moody DB, 113Morales J, 110Morales Camino JC, 26, 107Morales Cerdán JM, 67Morales P, 67Morales Pérez P, 62, 96Morandeira F, 95Morel Bárcena E, 36Moreno A, 23, 98Moreno E, 64Moreno Elola-Olaso A, 67Moreno J, 94Moreno Pelayo MA, 30, 33Moreno Rivera S, 110Moscardó F, 69Moscoso Galán I, 71Moscoso J, 19, 63, 64, 85Muños-Criado S, 47Muñoz Alcon H, 93Muñoz Calleja C, 34Muñoz Fernández P, 35, 85, 108, 110Muñoz Oliveira JJ, 48Muñoz-Fernández R, 45, 67, 105, 110Mur S, 18, 59, 60Murillo O, 25, 26Muro M, 20, 70, 79, 82, 83

NNaranjo-Gómez M, 105, 116Navarro Blasco FJ, 56, 57Navarro J, 70Navasa M, 23Naya Leira C, 71Neil Hermenegildo Y, 94Nevado Cestero J,67Nieto A, 16, 34, 72, 85Nogal París ML, 90Nogués N, 78Nos C, 49Novo MJ, 119Núñez B, 115Núñez C, 17, 30, 49, 77Núñez F, 105Núñez Pardo de Vera C, 55Nuñez Roldan A, 17, 23, 25, 41, 69, 72, 98, 99, 117

OOcaña E, 88, 89Ocejo-Vinyals JG, 66Ojeda G, 46, 109Olivares G, 45Olivares EG, 67, 105Oliver A, 60Oliver D, 52Oller-Sales B, 100Ontañón Rodríguez J, 120Oña M, 81Ordóñez D, 87Ordóñez del Valle D, 36Orera M, 119Orfao A, 45, 47Oriol A, 95Orozco G, 17, 47Ortego Centeno N, 51Ortego J, 100Ortiz-Ferrón G, 45, 67, 85, 105, 108, 110Osório E, 68Otero MJ, 49

PPacha MA, 100Pachkoria K, 73Pagán Alemán J, 82Palka M, 25Palomino P, 29, 80Palomo J, 70Palou E, 65Panés J, 56Pani Agua Martin MJ, 71Parrado A, 86Parrilla P, 107Pascal M, 23Pascual Figal DA, 70Pascual-Salcedo Pascual D, 17Pastoriza I, 44Pavón Castillero EJ, 35, 51Paz Artal E, 30, 60, 62, 67, 76, 96Pelaez T, 84Peña Martínez J, 57, 65, 77, 79Peralbo E, 36, 86, 87Peraza S, 90Perdigones Borderías MN, 16

Perdigones N, 17, 56Pérez A, 59, 60Pérez Aradas V, 96Pérez Blas M, 116Pérez García V, 56, 57Pérez Martínez M, 110Pérez R, 20Pérez V, 33, 62, 96Pérez-Aciego P, 60Pérez-Berezo T, 58Pérez-Cabezas B, 105, 116Pérez-Cano FJ, 58Pérez-Durán P, 85Pérez-Fernández R, 82Perez-G M, 37, 51Pérez-Gracia JL, 26Pérez-Mateo M, 106Pérez-Oliva AB, 74Pérez-Requena J, 88Pérez-Saborido B, 64, 67Peris Pertusa A, 56, 57Pini E, 46Pinto JA, 18Piñero A, 16Pique JM, 56Pita ML, 36, 86, 87Planas R, 52Planelles D, 61 69Poderoso García T, 40Polanco I, 49, 55Polo Casado A, 86Pons J, 79, 80, 83Porcelli SA, 113Portolés P, 46, 109Postigo J, 41, 50Poza-Cisneros G, 83Prada Iñurrategui A, 61, 84Prado C, 52 , 58, 104Prat Arrojo I, 66Prieto A, 18, 59, 60Prieto J, 23Pruneda L, 20Puig N, 69Pujol Borrell R, 47, 49, 50, 52, 65, 95, 100, 105, 116, 117

QQuandt E, 95Queizan JA, 93Quesada Gómez M, 57Quintana R, 111Quiralte J, 80Quirce S, 75

RRada Martínez R, 120Raich D, 116Rallón NI, 98Ramil E, 87Ramírez Bustillo E, 67Ramirez CM, 117Ramírez P, 107Ramírez-Santana C, 58Ramiro AR, 85Ramiro Latienda S, 17Ramiro-Puig E, 58

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Ramo C, 116Ramos E, 81Ramos JM, 31Ramos M, 97Ramos-Amaya AB, 89Ramos-Romero S, 58Raso Torres S, 96Real LM, 26Recio Hoyas MJ, 33Recio MJ, 110, 113Rego I, 18Regueiro JR, 33, 110, 113Reguera R, 19, 63, 64Reiné J, 33, 110, 113Relloso M, 113Revilla Calvo C, 40, 110Revilla Novella Y, 90, 99Rey García C, 71Ribes S, 31Ribes-Koninckx C, 61Riccardi C, 41Rico MA, 97Rieva JA, 89Riñón M, 84Riñon Martinez-Gallo M, 61Rio J, 49Ríos RM, 46Rivas MD, 37, 51Rivero A, 77Rivero M, 72Robles Valero J, 46Roca A, 72Roca J, 100, 115Rodrigo L, 20, 60Rodrigo MJ, 76, 100Rodrigo-Agudo JL, 83Rodriguez AB, 26Rodríguez AI, 39Rodriguez B, 97, 115Rodríguez Bayona B, 16, 88Rodríguez C, 16, 72, 88Rodríguez Caballero MA, 47Rodríguez Calvo MT, 97Rodríguez de Córdoba S, 31, 81Rodriguez F, 26, 47Rodríguez Folgueras A, 37Rodríguez Gallego JC, 32Rodríguez Gutiérrez JF, 16Rodríguez L, 56Rodríguez M, 61, 64, 69, 104Rodríguez Martín E, 28, 73Rodríguez N, 100Rodriguez Pena R, 66Rodríguez Pérez N, 116Rodríguez R, 93Rodríguez Ramiro A, 35Rodríguez Ramos R, 117Rodriguez Reynoso F, 57Rodríguez-Gallego C, 32Rodriguez-Gutierrez JF, 34Rodríguez-Mahou M, 52 , 120Rodríguez-Martín E, Alcalá I, 94Rodríguez-Molina J, 82Rodriguez-Sainz C, 92, 103Rodríguez-Sánchez J-L, 115

Roep BO, 44Rojo JM, 46, 109Roldán E, 28, 94Roldán Santiago E, 73, 119Roman A, 64, 104Romera Ruiz MI, 116Romero García I, 39, 73, 74, 95Romero Gómez M, 98Romero I, 95Romero JM, 26, 92Romero M, 42, 98, 99Romero Noguera JM, 91Romero Z, 33Romo E, 60 , 67Romo N, 102Romo N, 83Romo Pasamar E, 62, 96Roque Cuellar MC, 41Rosell A, 33Rossi NE, 110Roura-Mir C, 113Roy G, 15, 78Royo Cañas M, 68Ruiz Contreras J, 30, 76Ruiz de Galarreta CM, 117Ruiz E, 65, 95Ruiz Hernandez R, 112Ruiz JC, 23Ruiz Lapuente C, 117Ruiz Magaña MJ, 26, 107Ruiz Riol M, 49, 50, 55Ruiz Ruiz MC, 26, 107Ruíz-Alcaraz AJ, 103, 106Ruiz-Cabello F, 26, 47, 73, 91, 92Ruiz-Tovar M, 63, 64Ruoslahti E, 38

SSabater L, 38Sabina Villar P, 90, 99Sacedón R, 109Sádaba Argaiz MC, 48, 119Saenz L, 107Sáenz-López Garrocha P, 39, 73, 92Saez A, 102Saez de Guinoa J, 109Saez Gutiérrez B, 104Sáez Méndez L, 120Sagrario Fustero T, 117Saiz A, 38, 56Salcedo Moreno C, 118Salgado Cecilia MG, 70, 82Salgado G, 20, 79Salgado-Cecilia G, 83Salinas JA, 83Samino Y, 43Sampalo A, 34, 85San José Valiente B, 17San Miguel J, 71San Segundo D, 23Sánchez A, 18, 59, 60Sánchez AJ, 87Sánchez B, 87Sánchez Castañon M, 66Sánchez E, 17

Sánchez Espinel C, 20, 64Sánchez F, 47Sánchez García ML, 45Sánchez JI, 76Sánchez López M, 27Sánchez M, 15, 38Sánchez Madrid F, 110, 118Sánchez Mozo MP, 71Sánchez R, 93Sánchez Ruiz F, 57Sánchez Sánchez B, 41Sánchez-Castañón M, 101Sánchez-Corral P, 81Sánchez-Espinel C, 44, 102, 112Sánchez-García F, 19Sánchez-Madrid F, 46Sánchez-Martín D, 38Sánchez-Pla A, 105Sanchez-Ramon S, 52, 120Sánchez-Solis M, 79Sánchez-Velasco P, 65, 101Sanchís MJ, 20Sancho López J, 35, 51, 110Sanmartí A, 117Sanmartí R, 18Santamaria C, 71Santamaría Jaramillo B, 92Santamaria Ossorio M, 47Santiago E, 32Santiago JL, 114Santiuste I, 38, 41, 50Santos-Valle P, 27Sanz Alcober L, 27Sanz G, 69Sanz L, 27Sarasquete ME, 71Sarmiento E, 25, 53, 82, 84, 119Sarmiento Marchese E, 70, 81Sarrias MR,107Sastre B, 29, 30, 75Sastre J, 75Sauleda J, 115Schreiber V, 107Segalés J, 42Segui ME, 90Segundo C, 89Selgas R, 44Sempere Ortells JM, 56, 57Seren Bernardone I, 109Serna CJ, 72Serra A, 32Serrano A, 27Serrano Hernández A, 67Serrano-Vela JI, 19, 63, 64Seto E, López Soto A, 37Sevilla Hidalgo N, 97Sevilla N, 100Sierra J1, Briones J, 74Sinde Monteiro M, 68Sirgo Gonzalez G, 96Sirgo Rodríguez G, 62Sloan C, 48Solana Lara R, 87Solana R, 36, 86Soldevila B, 117

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Soler P, 29, 32, 81Soler Palacin P, 75Sologuren I, 32Solves P, 69Sommaggio R, 22Soriano A, 95Soriano N, 79Soriano V, 42, 98Soto Cárdenas C, 81Sousa JM, 69Spies T, 37Srivastava GK, 34Stefanski J, 39, 74, 95Strong R, 37Suárez A, 52, 58, 104Suárez Álvarez B, 21, 60López Rodríguez C, 48Suárez B, 18, 23Suárez Casasús B, 107Suárez Leiva P, 81Suarez-Alvarez B, 21Suàrez-Germà C, 58Subiza Garrido-Lestache JL, 91Subiza JL, 94Such J, 106

TTabernero MD, 47Tallada M, 39, 92, 92Tamayo E, 38, 41, 51Tarazona R, 36, 86, 87Taxonera C, 16, 55Teijeiro Martorell R, 92, 120Teixeira J, 68Téllez Lara N, 108T´Hart BA, 44Tirado González I, 45, 67, 85, 105, 108, 110Tirapu Fernández de la Cuesta I, 106Titulaer M, 38Toca M, 15Toribio ML, 45, 46, 111Torío Ruiz A, 71

Torres B, 17Torres S, 34Traves PG, 97Trento A, 97Tres A, 104Tricas L, 81Trinidad Álvarez EV, 92Troya-Diaz J, 100Tur Gómez C, 108Turrión A, 18, 59Tzartos J, 48UUnciti JD, 33Unger W, 44Urcelay E, 16, 17, 49, 55, 56, 114Uribe-Herranz M, 22

VValdor Alonso R, 107Valencia J, 109Valor L, 103Van Kooyk Y, 44Van Montfrans J, 33Varadé López J, 17, 56Varadñe J, 16Varas A, 109Vargas-Alarcon G, 63Vazquez F, 39Vazquez Gonzalez AC, 90Vázquez M, 109Vazquez-Piñeiro T, 86Veintemillas-Verdaguer S, 72Velastegui Ordoñez A, 52Vendrell M, 32Veny M, 56Vera Fernández J, 107Vercher Agustí FJ, 93Verdaguer J, 52Verschuuren J, 38Vicario JL, 19, 25, 27, 28Vicente A, 109Vidal C, 34

Vidal Castiñeira JR, 21, 60Vidal S, 74Vidal Sernández I, 35Vidal-Castiñeira JR, 20Vidaller A, 32Vidart J, 104Vila E, 69Vilches C, 36, 87Villar A, 115Villar Guimerans LM, 48, 90, 94, 119Villegas Becerril E, 65Villegas N, 42, 101Villegas Zambrano N, 119Viñuela JE, 89Vives-Pi M, 52Vlagea A, 31Vlagea F, 118

WWichmann Schlipf I, 23, 25, 69, 117Wilson IA, 113Woellner C, 29

YYagüe J, 32Yang J, 47Yañez F, 24Yélamos J, 107Yelo E, 86Yim D, 37

ZZafra MP, 109Zaldivar G, 34Zamorano J, 37, 51Zapata AG, 109Zapata González A, 48, 92Zapater P, 106Zimman-Mansfeld H, 91Zubiaur Marcos M, 35, 51, 110Zumaquero Martínez EC, 35

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SESIÓN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL II

Moderadores: Dr. Federico Garrido (Granada), Dr. Luis Álvarez Vallina (Madrid)

ALTERACIONES EN LA EXPRESIÓN DE RECEPTORES ACTIVA-DORES DE LA CITOTOXICIDAD DE LAS CÉLULAS NK ENPACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA (AML). Sán-chez Correa B1, Morgado S1, Bergua J2, García Casado J1, Gayoso I3,Solana R3, Durán E1, Tarazona Lafarga R1. 1Facultad de Veterinaria. 2Hos-pital San Pedro de Alcantara (Cáceres). 3Facultad de Medicina (Córdoba).

Las células Natural Killer (NK) constituyen una subpoblación lin-foide esencial en la respuesta inmune innata ya que reconocen y lisancélulas infectadas por virus y células neoplásicas sin necesidad de unasensibilización previa al antígeno. La activación de las células NK esresultado de un complejo balance entre las señales de activación e inhi-bición enviadas a través de receptores expresados en su superficie.

Las señales inhibidoras son aportadas por interacciones de losreceptores inhibidores con moléculas de histocompatibilidad clase I(HLA-I), garantizándose así la tolerancia de las células NK frente a lascélulas autólogas sanas.

En ausencia de interacciones inhibidoras eficientes, las células dia-na son susceptibles a ser lisadas por las células NK gracias a la parti-cipación de los receptores activadores. Este grupo de receptores inclu-ye CD16, NKG2D, los NCRs (Natural Cytotoxicity Receptors):NKp46,NKp30 y NKp44; DNAM-1, 2B4 (CD244), NTB-A, CRACC (CS1) yNKp80.

En el presente estudio se analiza por citometría de flujo el fenoti-po de las células NK en pacientes con leucemias mieloide aguda (AML)en el momento del diagnóstico.

Los resultados muestran que existen variaciones significativas enla expresión en superficie de los receptores activadores más importan-tes implicados en la eliminación de las células leucémicas. Así podemosobservar un notable descenso en la expresión de NKp46, NKp30 yDNAM-1, mientras que NKp44, receptor inducible tras la activación dela célula NK, incrementaba notablemente su expresión en superficie.

Por ello podemos concluir que las células leucémicas son capa-ces alterar la expresión en superficie de los principales receptores acti-vadores. Esta alteración podría considerarse un mecanismo de escapetumoral, que podría emplearse como nuevo marcador pronóstico dela supervivencia en pacientes con AML.

ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN Y LIBERACIÓN DE LIGANDOSPARA EL RECEPTOR ACTIVADOR DE LA CITOTOXICIDADNKG2D EN LÍNEAS CELULARES DE MELANOMA. MorgadoGarcía S1, Sánchez Correa B1, García Casado J1, Gordillo GonzálezJJ1, Durán Flórez E2, Tarazona Lafarga R1. 1Área de Inmunología. Dpto.Fisiología. Facultad de Veterinaria. UEX. 2Área de Anatomía y AnatomíaPatológica Comparada. Dpto. Medicina Animal. Facultad de Veterinaria.UEX.

Las células Natural Killer (NK) son un componente del sistemainmune innato que contribuyen a la respuesta inmune frente a tumo-res, puesto que son capaces de matar células cancerosas sin una inmu-nización previa. Su activación depende de un balance de señales acti-vadoras e inhibidoras transmitidas mediante receptores que se encuen-tran en la superficie de las NK. Uno de estos receptores activadores esel NKG2D, cuyos ligandos son MICA/B y la familia de ULBP, y el cualtambién aparece en otras células del sistema inmunitario.

En trabajos anteriores, estudiando el papel de NKG2D en la cito-toxicidad mediada por las células NK hemos puesto de manifiesto quela mayoría de las líneas celulares de melanoma procedentes del pro-yecto OISTER y ESTDAB presentan en su superficie ligandos paraNKG2D, demostrando que la interacción NKG2D-NKG2DL es un meca-nismo de gran importancia en el reconocimiento y posterior elimina-ción de las células de melanoma.

En el presente trabajo hemos puesto de manifiesto, mediante elanálisis por ELISA, la presencia de ligandos solubles para el receptorNKG2D en los sobrenadantes de los cultivos celulares de algunas líne-as de melanoma, lo cual sugiere una posible vía de inmunoescape deestas líneas de melanoma, a través de la interacción de estas formassolubles de los ligandos con el receptor NKG2D.

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Comunicaciones OralesInmunología

Vol. 27 / Supl. 1/ Mayo 2008

maneljuan

Texto escrito a máquina

Estas comunicaciones se añaden a este documento de forma posterior a la edición impresa. Por este motivo no se mantiene la paginación anterior ni existen referencias en el índice de autores.

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Inmunología · 17.00 -19.00 SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (2ª PARTE) (Sala Magna) Società Italiana Immunologia, Immunologia clinica e Allergologia y Sociedad