8/18/2019 Inserto Serodia Hiv 1 y 2
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Para diagnóstico in vitro
SERODIA® - HIV-1/2(Prueba por aglutinación pasiva de partículas
para detectar anticuerpos anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2)
PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTOSERODIA HIV-1/2 se produce mediante
el uso de un soporte de partículas de gelatina sensibilizadas con
antígenos HIV-1 y HIV-2 inactivados, en forma separada. La prueba
se basa en el pr incipioque las partículas sensibilizadas se
aglutinan por la presencia de los anticuerpos anti-HIV-1 y
anti-HIV-2 en plasma/suero humano.
USOEste equipo se utiliza para detectar anticuerpos anti-HIV-1 y
anti-HIV-2 en muestras de plasma y suero. Este equipo está diseñado
para detectar anticuerpos anti-HIV y no detecta el antígeno viralen
forma directa. Como con cualquier ensayo de detección de
anticuerpos, SERODIA-HIV-1/2puede no tener la ca pacidad de
detectar cantidades muy pequeñas de anticuerpos asociadas
coninfección temprana o el periodo muy temprano de
seroconversión.
CARACTERÍSTICASEquipo SERODIA HIV-1/2 ofrece las siguientes
características:
1. Prueba de procedimiento simple: La prueba no requiere
equipamiento especial y el procedimiento utiliza microplacas
estándar en forma de “U”.2. Corto tiempo de reacción: El
procedimiento permite la interpretación visual a las dos horas de
incubación.3. Altamente específico: El equipo utiliza partículas
artificiales como soporte, desarrolladas en forma específica por
Fujirebio. Estas partículas no presentan la aglutinación no
específica que seobserva en general con otros soportes.
COMPONENTES DEL EQUIPO El equipo SERODIA- HIV-1/2 consiste
de los siguientes reactivos y accesorios.
Reactivo
Máximo de pruebas
Soluciónreconstituyente
(Líquido)A
Diluyente del suero(Líquido)
B
Partículassensibilizadas HIV-1
C-1(Liofilizado)
Partículassensibilizadas HIV-2
C-2(Liofilizado)
Partículas nosensibilizadas
(Liofilizado)D
Control positivo(Líquido)
E
5 x 20 15 ml1 vial
20 ml1 vial
0,6 ml**5 viales
0,6 ml**5 viales
1,0 ml**5 viales
0,5 ml1 vial
4 x 55 24 ml1 vial
40 ml1 vial
1,5 ml**4 viales
1,5 ml**4 viales
2,0 ml**4 viales
0,5 ml1 vial
**Después de la reconstituciónAccesorios: Goteros 25 ul
A: Solución reconstituyente (Líquido)Usada para reconstitución
de partículas sensibilizadas y partículas no sensibili
zadas.B: Diluyente de suero (Líquido) Usada para dilución
de muestras.C.1: Partículas sensibilizadas HIV-1 (Liofilizado)
Preparación liofilizada de partículas de gelatina recubiertas
con antígeno HIV-1 inactivado. Se reconstituye agregando la
solución reconstituyente. La solución reconstituida de
partículassensibilizadas contiene partículas de gelatina al 1%
sensibilizadas con antígeno HIV-1 inactivado.C.2: Partículas
sensibilizadas HIV-2 (Liofilizado)Preparación liofilizada de
partículas de gelatina recubiertas con antígeno HIV-2 inactivado.
Se reconstituye agregando la solución reconstituyente. La solución
reconstituida de partículassensibilizadas contiene partículas de
gelatina al 1% sensibilizadas con antígeno HIV-2 inactivado.D:
Partículas no sensibilizadas (Liofilizado)Preparación liofilizada
de partículas de gelatina coloreada. Se reconstituye agregando la
solución reconstituyente.E: Control positivo (Líquido)Preparación
líquida de suero de conejo in munizado contra antígenos HIV-1 y
HIV-2 inactivados. El reactivo suministra un título de anticuerpos
de 1:128 (en la dil ución final) para partículassensibilizadas de
HIV-1, y 1:256 (en la dilución final) para partículas
sensibilizadas con HIV-2, cuando probadas por el Procedimiento de
Prueba de Control Positivo (ver Tabla 2).
MATERIAL REQUERIDO PERO QUE NO SE SUMINISTRAPrepare el siguiente
equipamiento de laboratorio a ntes de realizar la prueba:1.
Microplaca en forma de “U”2. Dilutor 25 ul3. Goteros calibrados 25
ul4. Pipetas Micropipetas y pipetas volumétricas5. Goteros6.
Agitador vibrador7. Visor de placas
PREPARACIÓN1. Preparación de las muestras:Se deben remover los
eritrocitos o cualquier otro componente visible presente en las
muestras de suero o plasma mediante centrifugación antes de la
prueba, para evitar interferencias en losresultados.2.
Reconstitución de las partículas liofilizadas:Reconstitución de las
partículas sensibilizadas y de las partículas no sens ibilizadas
con 0,6 ml y 1,0 ml de solución reconstituyente, a temperatura
ambiente (15-30ºC), 30 minutos antes de iniciar laprueba.
PROCEDIMIENTOEl procedimiento de la prueba es el siguiente:1.
Prueba cualitativa (ver Tabla 1)
1) Coloque 3 gotas (75 ul) de diluyente de suero en el pocillo
1, y 1 gota (25 ul) en los pocillos 2, 3 y 4 con un gotero
calibrado.2) Con una micropipeta, agregue 25 ul de la muestra en el
pocillo #1. Mezcle los contenidos del pocillo #1 llenado y
descargando la micropipeta 6 ó 7 veces. Después, transfiera 25 ul
de lasolución diluida del pocillo #1 al pocillo #2 con la
micropipeta. Repita la operación de transferencia-mezcla para los
pocillos #2, #3 y #4 para obtener una serie de soluciones en
duplicado.Finalmente, mezcle los contenidos del pocillo #4 y desec
he 25 ul de la solución remanente en la pipeta.3) Coloque 1 gota
(25 ul) de partículas no sensibili zadas en el pocillo #2, 1 gota
(25 ul) de partículas sensibilizadas HIV-1 en el pocillo #3 y 1 go
ta (25 ul) de partículas sensibilizadas HIV-2 en elpocillo #4 con
el gotero suministrado con el equipo4) Mezcle bien los contenidos
de los pocillos con un agitador vibrador (en un rango de velocidad
de 4 a 6 cuando utiliza el MEZCLADOR DE UNA PLACA de Fujirebio). Si
no tiene un agitadorvibrador disponible, el procedimiento puede
realizarse manualmente, golpeteando los 4 bordes de la microplaca
varias veces para mezclar bien. Luego, cubra la placa y déjela en
reposo atemperatura ambiente durante 2 horas antes de la
lectura.
Tabla 1. Procedimiento de la prueba cualitativa (resumen)
Pocillo No. 1 2 3 4
Diluyente de suero (ul)Muestra (ul)
75
25)
25
25)
25
25)
25
25)
Dilución del suero 1:4 1:8 1:16 1:32Partículas no sensibilizadas
(ul) 25
Partículas sensibilizadas HIV-1 (ul) 25
Partículas sensibilizadas HIV-2 (ul) 25
Dilución Final 1:16 1:32 1:64
Mezclar empleando un agitador vibrador, cubrir la placa e
incubar durante 2 horas.
Interpretación
2. Prueba de control positivo1) Confirme que la reacción de cada
muestra con las partículas no sensibilizadas sea negativa.2)
Confirme que la reacción del diluyente de suero con las partículas
sensibilizadas y las no sensibilizadas sea negativa en todos los
ensayos (control reactivo).3) Confirme que el título del control
positivo sea 1:128 ± 1 duplicando la dilución (en la dilución
final) para las partículas sensibilizadas HIV-1, y 1:256 ± 1
duplicando la dilución (en la diluciónfinal) para las partículas
sensibilizadas HIV-2 en cada equipo de ensayo (ver Tabla 2).
descarte
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Tabla 2. Procedimiento del test de control positivo
(resumen)
Pocillo No. 1 2 3 4 5 6 7 8
Diluyente de suero (ul)Control positivo (ul)
75
25)
25
25)
25
25)
25
25)
25
25)
25
25)
25
25)
25
25)
Dilución del suero 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
Partículas no sensibilizadas (ul) 25
Partículas sensibilizadas HIV-1 (ul) 25 25 25 25 25 25
Partículas sensibilizadas HIV-2 (ul) 25 25 25 25 25
Dilución Final 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024
Mezclar empleando un agitador vibrador, cubrir la placa e
incubar durante 2 horas.
Interpretación
Observación: Haga una dilución en serie de las 3 muestras
ensayadas en dos filas
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSColoque la placa suavemente
sobre el visor de placas (con luz indirecta), compare los patrones
de aglutinación c on aquellos del control reactivo e interprete de
acuerdo con los criterios presentadosen la Tabla 3.
Tabla 3. Interpretación de los resultados
Patrón establecido de las partículas Lectura Interpretación
Partículas concentradas en forma de botón, en elcentro del
pocillo, con una borda circular externasuave
- Negativo
Partículas concentradas en forma de un anillocompacto con una
borda circular externa suave
±* No concluyente
Anillo grande definido, con una borda externa rugosamultiforme y
aglutinación periférica
+
Partículas aglutinadas que se despliegan cubriendo elfondo del
pocillo de uniformemente
++
Positivo
* Muestras que presentan un resultado no concluyente (±) deben
ser ensayadas nuevamente, siguiendo la Tabla 1 y los resultados del
ensayo deben interpretarse de acuerdo con los criterios de laTabla
3. Una muestra (±) que se repite debe confirmarse por otros métodos
para una interpretación exacta.
CRITERIOS PARA INTERPRETACIÓNEn el ensayo cualitativo, una
muestra que tiene reacción ne gativa con las partículas no
sensibilizadas, pero presenta aglutinación con partículas
sensibilizadas (dilución final 1:32 para HIV-1, 1:64para HIV-2) se
considera positiva.
Tabla 4. Criterios para interpretación
Tipo de partículas sensibilizadas Interpretación
Partículas sensibilizadas HIV-1Partículas sensibilizadas
HIV-2
NegativoNegativo
Anticuerpo anti-HIV-1 negativoAnticuerpo anti-HIV-2 negativo
Partículas sensibilizadas HIV-1Partículas sensibilizadas
HIV-2
PositivoNegativo
Anticuerpo anti-HIV-1 positivo
Partículas sensibilizadas HIV-1Partículas sensibilizadas
HIV-2
NegativoPositivo
Anticuerpo anti-HIV-2 positivo
Partículas sensibilizadas HIV-1Partículas sensibilizadas
HIV-2
PositivoPositivo
anticuerpo anti-HIV-1 positivo**anticuerpo anti-HIV-2
positivo**
** Para discriminar aún más entre anticuerpos anti-HIV-1 y
ani-HIV-2, se debe utilizar otro método distinto a la aglutinación
de partículas
PROCEDIMIENTO DE ABSORCIÓNSi una muestra presenta aglutinación
tanto con partículas sensibilizadas como con l as no
sensibilizadas, se debe reanalizar después del sig uiente
procedimiento de absorción:1. Colocar 0,35 ml de partículas no
sensibilizadas reconstituidas en un pequeño tubo de ensayo.2.
Agregar 50 ul de muestra de suero en el tubo y mezclar bien. Luego,
incubar a temperatura ambiente (15-30ºC) durante 20 minutos o
más.3. Centrifugar durante 5 minutos a 2000 rpm. Tomar el
sobrenadante cuidadosamente (dilución del suero absorbido 1:8).
Luego, colocar 50ul en el pocillo 2 de la microplaca.4. Colocar 1
gota (25 ul) de diluyente de suero en los pocillos 3 y 4. Empleando
el dilutor o micropipeta, preparar la serie de diluciones en
duplicado, del pocillo 2 al 4.5. Siga el mismo procedimiento
descripto en la Tabla 1 y lea el resultado.
CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DE PERFORMANCE1. EspecificidadCuando
nuestras propias muestras de referencia (reactivos conocidos) se
ensayan de acuerdo con el procedimiento de la prueba, las muestras
de referencia positivas presentan un título deanticuerpos de 1:32 o
más con partículas sensibilizadas HIV-1 y 1:64 o más con partículas
sensibilizadas HIV-2. Las muestras de referencia negativas
presentan reacción negativa.2. SensibilidadCuando el control
positivo se ensaya de acuerdo c on el procedimiento de la prueba,
los títulos indicados están e n una dilución duplicada del título
tomado como parámetro de 1:128 para partículassensibilizadas HIV-1
y 1:258 para partículas sensibilizadas HIV-2.3.
Reproducibilidad
Cuando una muestra de suero se ensayó 5 veces cons ecutivas, de
acuerdo con los procedimientos de la prueba, se determinó que to
dos los resultados se encontraban dentro de la variación de
unpocillo (una dilución duplicada).
CORRELACIÓN DE LOS RESULTADOSSe ensayaron 44 muestras negativas
y 71 muestras positivas (50 para anticuerpo anti-HIV-1 y 21 para
anticuerpo anti-HIV-2) con SERODIA HIV ½ y un equipo de referencia
HIV ½ EIA. Todospresentaron los mismos resultados, como se describe
en la siguiente tabla:
Tabla 5. Correlación
Equipo de referencia
SERODIA HIV-1/2
POSITIVO NEGATIVO TOTAL
Solo anticuerpo anti-HIV-1 + 38,0% (27) 0% (0) 27
Solo anticuerpo anti-HIV-2 + 19,7% (14) 0% (0) 14
Anticuerpos anti-HIV-1 y anti-HIV-2 +
42,3% (30) 0% (0) 30
- 0% (0) 100% (44) 44
Total 71 44 115
PRECAUCIONES1. Precauciones al manipular
1) Cuando una muestra se presenta positiva o no concluyente en
el ensayo cualitativo, la muestra debe ser reanalizada con el mismo
procedimiento. Un suero que nuevamente presentaresultado positivo o
no concluyente debe confirmarse por otros métodos.2) Este equipo
está diseñado con el único propósito de detectar anticuerpos
relacionados con HIV en muestras de suero/plasma. Sin embargo, no
detecta HIV directamente. Los resultadosde la prueba no deben utili
zarse de forma aislada, pero en conjunto con los síntomas clínicos
del p aciente, la historia clínica del paciente y cualquier otro
dato d isponible para obtenerse un
diagnóstico clínico global.3) Este equipo está preparado para
detectar anticuerpos anti-HIV-1 y anti-HIV-2, y no detecta el
antígeno viral directamente. Como con cualquier ensayo de detección
de anticuerpos,SERODIA HIV-1/2 puede no tener la capacidad de
detectar cantidades muy pequeñas de anticuerpo asociadas con
infección temprana o el p eriodo muy temprano de seroconversión.
Para lasmuestras negativas con este equipo, se necesita una
evaluación integral junto con otros resultados de pruebas.4) A
pesar de que el antígeno viral sensibilizado con las partículas no
es infeccioso, se debe tratar cuidadosamente, como el virus HB.5)
Este equipo contiene azida sódica como antiséptico para los
reactivos. Los residuos desechados en el drenaje deben lavarse con
una gran cantidad de agua, como medida de seguridad.
2. Precauciones del procedimiento1) No mezcle las partículas
sensibilizadas HIV-1 con las partículas sensibilizadas HIV-2.2)
Después de agregar las partículas sensibilizadas y las partículas
no sensibilizadas a los pocillos de la microplaca, mezcle los
contenidos de los pocillos rápidamente.3) Durante la incubación,
cubra la microplaca y manténgala sin vibración.4) Cada lote de
producción se somete a garantía de calidad. No utilice los
reactivos combinados con los de equipos de otros lotes de
producción.5) Las muestras están potencialmente infectadas por HBV,
HIV u otros microorganismos peligrosos y deben manipularse con
mucho cuidado. Todos los equipamientos y accesorios utilizados(por
ejemplo, pipetas y tubos), soluciones residuales, tips, etc., deben
descontaminarse con solución d e hipoclorito de sodio (1000 ppm
(0,1%) de cloro dispo nible en remojo durante, al menos,1 hora),
autoclavado (a 121ºC durante más de 1 ho ra) o incineración.6) Los
reactivos liofilizados del equipo deben utilizarse en el día de la
reconstitución. Sin embargo, almacenándolos a 2-10ºC, permanecerán
estables durante 7 días tras la reconstitución.
ALMACENAMIENTO: Almacenar entre 2 y 10º. No congelar
VIDA ÚTIL: Doce meses después de la fabricación. La vida útil se
indica por la fecha de expiración impresa en el envase o en las
etiquetas de los reactivos.
UNIDAD DE ENVASADO: equipo de ensayo SERODIA-HIV-1/2 contiene
reactivos para 100 ó 220 ensayos cualitativos.
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