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Interacción Antígeno - AnticuerpoAg-Ac
Características Relación bimolecular
No covalente → Reversible
Específica
Reacciones de aglutinación Las reacciones de aglutinación
consisten en el agrupamiento de una suspensión de partículas que se debe a la reacción entre un Ag presente en las partículas y un anticuerpo específico de él
Cuando el Antígeno (Ag) se halla unido de forma natural a un corpúsculo, como las células sanguíneas o las bacterias; las
reacciones Ag-Ac producen aglutinación.
En las reacciones con Ag soluble la aglutinación puede conseguirse uniendo
el Ag de forma COVALENTE a corpúsculos inertes, como las partículas
de látex o los hematíes tratados con ácido tánico. (Las reacciones de
aglutinación son más sensibles que las de precipitación)
Factores que influyen en las reacciones de aglutinación
Carga de las partículas• La carga impide la aglutinación, para
producirse se han de eliminar previamente las cargas.
• Los hematíes, las bacterias y las partículas
de latex poseen una carga superficial negativa, y un tratamiento previo x ejemplo de los hematíes con papaína los hace fácilmente aglutinables.
Tipo de Anticuerpo
• IgG: anticuerpos incompletos
• IgM: anticuerpos completos(más eficaces)
Concentración de Ag y Ac Cuando se agregan
concentraciones crecientes de Ag a una cantidad fija de suero conteniendo Ac específicos a medida que la cantidad de Ag aumenta, la cantidad de Aglutinado aumenta hasta alcanzar un máximo, luego declina.
Entre estas 2 zonas se encuentra la Zona de Equivalencia, en donde la relación Ag – Ac permite la formación de grandes redes de CI.
En los antisueros con títulos muy
altos de Aglutinación se puede producir un fenómeno de PRO ZONA(exceso de ac.)
El fenómeno de Pro zona, produce reacciones falsas negativas de
aglutinación a concentraciones elevadas de Ac como resultante de la mala
formación de estructuras de enrejado molecular y por el bloqueo estérico por
el exceso de Ac; el uso de diluciones seriadas estándar elimina esta
dificultad.
Número de determinantes antigénicosPara la Aglutinación son necesarios antígenos con
múltiples determinantes antigénicos, de forma que pueda producirse el entrecruzamiento
Así mismo, la disposición de los determinantes
antigénicos es importante
Los determinantes que se encuentran muy repartidos por toda la molécula producen peores
aglutinaciones que los que se encuentran densamente distribuidos.
Temperatura Existe una temperatura óptima para la
Aglutinación Algunos se unen mejor al Ac a 37°C y
otros a 4°C (crioaglutininas)
IgM se une mejor a 27 – 30 °CIgG se une mejor a 37°C
El tiempo de incubación es también importante, existiendo tiempos óptimos para cada tipo de reacción.
Tipos de reacción de aglutinación
Reacciones de Aglutinación Directa (o
activa)
Reacciones de Aglutinación Indirecta (o
Pasiva)
Reacciones de Aglutinación pasiva
reversa o Inhibición de la Aglutinación
Reacciones de aglutinación directaActiva Son aquellas en las que el Antígeno se
encuentra en las superficies de corpúsculos naturales, como los hematíes y microorganismos(bacterias)
Se utiliza para la detección de los Ac del suero frente a los Ag que se adicionan.
Se puede realizar en tubo o en placa. En estas últimas, se mezcla sobre una placa una suspensión de la bacteria con diversas diluciones del suero.
Se agita suave la placa unos minutos y se observa el resultado. El resultado se expresa como la inversa de la mayor dilución que aglutina.
Aglutinación directa
Reacciones de aglutinación indirectaPasiva Se basan en el empleo de una partícula
aglutinante inerte a la cual se le ha unido un Ag (soluble).
Los soportes particulados pueden ser Glóbulos rojos (hemaglutinación) o partículas de látex
Partícula(células, latex..) Ag Partícula sensibilizada
con el Ag
Proceso de sensibilización
PartículasSensibilizadas Ac Aglutinación
Ensayo de Aglutinación
Reacciones de Aglutinación pasiva reversa o Inhibición de la Aglutinación • Se basan en la inmovilización del anticuerpo, en la
superficie de la partícula inerte, siendo este tipo de reacciones particularmente útiles para la detección del Ag en distintos líquidos biológicos, o bien inmovilizar el Ag.
• Puede inhibirse la aglutinación de hematíes o partículas de látex. Cuando se incuba el Ac con la solución que contiene el Ag, este se liga a los lugares de unión del Ac.
• A continuación se añaden las partículas recubiertas con Ag. Si no hay aglutinación es porque los lugares de combinación del Ac estaban saturados y no es posible la unión de los Ag particulados y la aglutinación. En este caso la aglutinación indica un resultado negativo y la no aglutinación un resultado positivo.
Inhibición de la aglutinación
Ag-Ac Ag particulado INHIBICIÓN DE AGLUTINACIÓN
Ventajas de las reacciones de aglutinación• Son sencillas de realizar• No requieren ningún equipamiento para su
lectura• Son rápidas y fáciles de implementar• Presentan una mayor sensibilidad que las
reacciones de precipitación por lo que las han sustituido en muchos casos.
• Pero las reacciones de Aglutinación son menos sensibles que las reacciones de ELISA e IFI
Formas de realizar una prueba de aglutinación• Las reacciones de aglutinación pueden llevarse a
cabo sobre portaobjetos de cristal, en la superficie de tarjetas visualizadoras, en placas de microtitulación y en el interior de tubos de ensayo.
• Las tarjetas visualizadoras suelen ser de material plástico y en ellas hay impresos unos círculos coloreados. El color de estos círculos está directamente relacionado con el de la partícula empleada. Así pues, si la partícula es blanca, el color de los círculos es negro, y si l partícula es de color oscuro, los círculos son blancos.
Las placas de microtitulación también son de plástico y consta de una serie de pocillo cuyo fondo es cónico(en V) o redondeado (en U)
Valoración de la aglutinación• Las reacciones de aglutinación presentan
las ventajas de su alto grado de sensibilidad y de la gran cantidad de antígenos que se pueden detectar mediante estas pruebas, pero tienen el inconveniente de que, con ellas, es difícil cuantificar, es decir, determinar la concentración de la sustancia investigada en la muestra problema.
•
La mayoría de las veces las pruebas de aglutinación son meramente cualitativas, es decir, solo establecen la presencia o la ausencia de la sustancia buscada en la muestra problema
• Una forma de establecer la concentración aproximada de la sustancia buscada en la muestra problema(semi-cuantificar) consiste en preparar diluciones seriadas de la muestra problema, de forma que se disponga de una bateria de diluciones en la que la sustancia investigada esté en concentraciones decrecientes.
• El paso siguiente consiste en practicar el ensayo de aglutinación con cada una de las diluciones preparadas. De esta forma, aunque con las primeras diluciones la prueba nos de positiva(haya una aglutinación distinguible), llegará un momento en el que la concentración de la sustancia problema en una dilución sea lo suficientemente pequeña como para que la prueba se torne negativa(no aparezca aglutinación)
Pruebas a realizar en el laboratorio
ASTO o Antiestreptolisina “O”
Factor Reumatoideo (Artritest)
Proteína C Reactiva (PCR)
Pruebas de AglutinaciónCon partículas de LATEX
Pruebas a realizar en el laboratorio
ASTO o Antiestreptolisina “O”
Factor Reumatoideo (Artritest)
Proteina C. Reactiva
Todas Pruebas de Aglutinación con Partículas de Látex
Proteína C. Reactiva La proteína C. reactiva es una proteína de
fase aguda que aumenta rápidamente en respuesta a la inflamación y a la agresión de los tejidos. Es particularmente útil en detección de infecciones ocultas, particularmente en pacientes post operados, también en artritis reumatoidea se eleva la PCR.
Es sintetizada en el hígado .Esta proteína formaba un precipitado con el polisacárido C de ciertos neumococos y de ahí procede su nombre.
Tiene la particularidad de provocar el recubrimiento de los gérmenes en un proceso denominado OPSONIZACION y así prepara a los microorganismos para la fagocitosis. Activa el complemento.
No es especifica para ninguna enfermedad, solo indica un proceso inflamatorio.
No solo indica la intensidad de la enfermedad sino también la respuesta del paciente al tratamiento.
Fundamento del MétodoLa reacción se basa en la
aglutinación entre la PCR (Ag) y su correspondiente Ac fijado en la superficie de partículas de látex, visible macroscópicamente.
Sustancias Interferentes Sueros lipémicos y contaminados dan
falsos positivos Sueros con alta concentración de
factor reumatoide elevan falsamente los títulos de PCR
Suero con concentraciones superiores a 200mg/l pueden dar fenómenos de prozona. El suero debe diluirse para ser utilizado
Tiempo de reacción mayor al indicado a la técnica dan falsos positivos
Factor Reumatoideo Son inmunoglobulinas dirigidos contra la
fracción Fc de las IgG. Son del Tipo IgM anti IgG. Se producen en los lugares donde existe
inflamación La determinación de FR es útil en el
diagnóstico de artritis reumatoide pero necesariemente debe ir acompañado de la clínica.
La prueba también puede ser positiva en otras enfermedades, como el lupus eritematoso sistémico.
Las pruebas de FR están diseñadas para detectar anticuerpos IgM. Aproximadamente el 80% de los pacientes con artritis reumatoide presentan FR positivo.
Aunque lo normal es que no haya factor reumatoide identificable a titulos bajos, un pequeño numero de personas sanas muestran FR a un título muy bajo.
Fundamento del método
El FR de tipo IgM se detecta en presencia de gamma globulina(IgG) absorbida sobre un soporte inerte de látex
Este Ag se une a los FR produciendo aglutinación de las partículas de látex, visible macroscópicamente
Interferencias Sueros hemolizados Pacientes con enfermedades como
hepatitis, sífilis, mononucleosis entre otras
Pacientes de edad avanzada
Se pone en contacto el suero del paciente con el reactivo de trabajo, se mezclan bien yse espera 2 minutos y se observa el resultado
ASTO o ASO La titulación del ASO o ASTO es un procedimiento
serológico que demuestra la reacción del cuerpo frente a la infección producida por estreptococos del grupo A.
Los estreptococos producen una enzima denominada estreptolisina O, que tiene la capacidad de destruir(lisar) los hematíes. Dado que la estreptolisina O es antigénica, el cuerpo reacciona produciendo ASO, un anticuerpo neutralizante.
La cuantificación de los Aso se utiliza para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como fiebre reumáticas, glomerulonefritis aguda, y otras infecciones estreptocócicas.
Fundamento del métodoEl Aso-látex es una técnica de aglutinación
en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O son aglutinadas por los ASO presentes en la muestra del paciente.
