Internalización y liberación del colesterol en el endosoma: Papel de los dominios extracelulares del receptor de LDL

Juan Martínez OlivánDirector: Javier Sancho

Estructura y ciclo del rLDL

Mecanismo clásico propuesto de internalización del colesterol

Mecanismo competitivo

Basado en la estructura de Rayos X del rLDL

a pH endosomal y alta [Ca2+]

Estudio del dominio de unión: el módulo quinto (LR5)

El módulo fundamental del dominio de unión

Une tanto lipoproteínas como al β-Propeller

Posee 3 puentes disulfuro y un centro de coordinación de Ca2+

Consta de 40 aminoácidos

Propuesta de nuevo mecanismo de internalización y liberación

de colesterol

Propiedades de LR5

Une Ca2+ y Mg2+

Inestable a bajo pH y baja [Ca2+]

Cinética rápida liberación Ca2+ y asociación Mg2+

LR5-Ca2+

pH 7LR5-Mg2+

pH 7LR5-Ca2+

pH 5.5LR5-Mg2+

pH 5.5

Kd (µM) 0.78 45 30 1700

Ph 7, ↑↑ [Ca2+]

Ph 7, ↓↓ [Ca2+]

pH 5.5, ↓↓ [Ca2+]

Tm (ºC) 72.3 41.9 36.9

LR5-Ca2+

pH 7LR5-Mg2+

pH 7LR5-Ca2+

pH 5.5LR5-Mg2+

pH 5.5

Asociación (M-1 s-1 )

1.1*106 6700 8.0*104 6200

Disociación ( s-1 )

1.2 10.4 5.15 19.7

Mecanismo de internalización y liberación del colesterol propuesto

Bajo pHBaja [Ca2+]

Alta [Mg2+]

Ampliación del estudio del dominio de unión: LR4, LR4-5 y LR1-7

LR4

LR4-5

Estudio del dominio hómologo a EGF: El β-propeller

Expresión en células CHO

Análisis de estabilidad e interacciones

Caracterización de mutantes causantes de enfermedad

Búsqueda de Farmacochaperonas

LR4, LR5, LR4-5, LR1-7, PCSK9

CHOK1CHOlec

Han participado en este proyecto

Javier Sancho, IP del Proyecto, BIFI-UZXabier Arias, Socio Fundador, BIFI-UZ

Jose Alberto Carrodeguas

Ramón HurtadoErandi Lira

Adrián Velázquez

Óscar Millet , Structural Biology Unit, CIC bioGUNE Salvador Ventura, Institut de Biotecnología i Biomedicina, Universitat Autónoma de Barcelona

Colaboradores externos: Colaboradores BIFI-UZ: