INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOLOGIA CELULARxa.yimg.com/kq/groups/21872556/2043988913/name/Introdução+ao... · radioautografia permite a localização de substâncias radioativas

CENTRO UNIVERSITÁRIO DE DESENVOLVIMENTO DO CENTRO-OESTE – UNIDESCCURSOS DE MEDICINA VETERINÁRIA & CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

Disciplina de Biologia Celular

INTRODUÇÃO AO INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA ESTUDO DA

BIOLOGIA CELULARBIOLOGIA CELULAR

Prof MSc Cristiano Rosa de MouraProf. MSc. Cristiano Rosa de MouraMédico Veterinário

“Há pessoas que lutam um dia e são boas. Há outras que lutam um ano e são melhores. Mas há as que lutam toda a vida e são imprescindíveis.” Bertold Brecht

Prof. MSc. Cristiano Rosa de Moura

1- CONSIDERAÇÕES INICIAIS

Biologia Celular- do grego “bio” = vida- do grego bio = vida- do grego “logia” = ciência, estudo

do latim “cellula” = célula- do latim cellula = célula

Biologia Celulargé o ramo da ciência que estuda a vida da célula



Citologia – do grego- “kytos” = célula- kytos = célula- “logia” = ciência, estudo

Citologiaé o ramo da morfologia que estuda a forma, g q ,estrutura, composição, funções e desenvolvimentodas células e seus componentes



- unidade básica da vida no corpo

id d f ló i f i l d- unidade morfológica e funcional do corpo

- teoria celular:. todos os organismos vivos são compostospor células e produtos celulares (DE ROBERTIS,por células e produtos celulares (DE ROBERTIS,

HIB, PONZIO, 2003)



- teoria celular moderna (DE ROBERTIS, HIB, PONZIO, 2003):

él l ã id d f ló i fi i ló i. células são unidades morfológicas e fisiológicas

de todos os organismos vivos. propriedades de organismo depende da célula. originam-se de outra célula graças ao material. originam se de outra célula graças ao materialgenéticomenor unidade da vida. menor unidade da vida



- compartimentos celularescitoplasma. citoplasma

. núcleo

. separados pelo envoltório nuclear- citoplasma é separado do meio externo pelamembrana plasmática



- citoplasma

membrana plasmática organelas e citossol. membrana plasmática, organelas e citossol

- núcleo. envoltório nuclear, cromatina, nucléolo, matriz nuclear e nucleoplasmap



Célula Animal

Fonte: http//: www.escolavesper.com.br/citologia/citologia.htm


Fonte: DE ROBERTIS; HIB; PONZIO (2003)


2- Organização das Células Procariontes e Eucariontes

Classificação dos Organismo e Tipo de Célula




Célula ProcarionteProcarionte

Fonte: AMABIS & MARTHO (2004)



Célula Eucarionte

Fonte: http//: www.escolavesper.com.br/citologia/citologia.htm

Prof. MSc. Cristiano Rosa de Moura3- MÉTODOS DE ESTUDO

3.1 Microscopia

DE ESTUDO

Óptica

Fonte: GARTNER & HIATT (2003)


3 1 1 P ã d Lâ i Hi t ló i

3- MÉTODOS DE ESTUDO3.1.1 Preparação de Lâminas Histológicas

a) Fixaçãoa) Fixação

b) Desidratação

c) Diafanização

Fonte: http://www.cnb.uam.es/~histocnb/ Aparelho Histotécnico




d) Inclusãod) Inclusão

Aparelho InclusorAparelho Inclusor

Fonte: http://www.cnb.uam.es/~histocnb/




e) Cortese) Cortes

Aparelho MicrotómoFonte: http://www.cnb.uam.es/~histocnb/




f) Montagemf) Montagem

Fonte: http://www.multipolo.com.br/histologia/

Aparelho de Banha-Maria


3- MÉTODOS DE ESTUDO3 1 1 P ã d Lâ i Hi t ló i3.1.1 Preparação de Lâminas Histológicas

g) Coloraçãog) Coloração a maioria dos corantes são solúveisem água, portanto a parafina deve serremovida antes da coloração para a remoção da parafinainicialmente coloca-se a lâmina com oinicialmente coloca se a lâmina com otecido pescado numa estufa a 56ºC por30 minutos para que o excesso deparafina na lâmina escorra

Fonte: http://www.dencril.com.br/afabrica.html Estufa



g) Coloraçãog) Coloração diafanização é realizada colocado-se alâmina em 2 banhos de xilol rehidratação é realizada passando alâmina em 2 banhos de álcool a 96% e1 banho em álcool a 70%1 banho em álcool a 70% após estes banhos lava-se a lâminaem água por 5 minutos

Fonte: http://www.dencril.com.br/afabrica.html Capela



g) Coloraçãog) Coloração coloca-se agora a lâmina num recipientecontendo hematoxilina por 10 minutos edepois lava-se em água por 15 minutos coloca-se a lâmina num recipiente comeosina por 5 minutoseosina por 5 minutos em seguida realiza-se a desidrataçãonovamente em 2 banhos de álcool a 96%,2 banhos em álcool absoluto e1 banho em xilol espera-se escorrer o excesso de líquido

Fonte: http://www.dencril.com.br/afabrica.html

Capelap q

e agora pode terminar a montagem (colocação da lamínula)


3- MÉTODOS DE ESTUDO

3.1.1 Preparação de Lâminas Histológicas

g) Coloração – princípios básicosg) Coloração – princípios básicos

- corantes ácidos. coram componentes celulares básicos (acidófilos):

citoplasma e produtos extracelulares. exemplos: eosina, orange G, fuccina ácida etc.. eosina – coloração rosa ou vermelha



3.1.1 Preparação de Lâminas Histológicas

g) Coloração princípios básicosg) Coloração – princípios básicos

- corantes básicos. coram componentes celulares ácidos (basófilos):

núcleo (cromatina), retículo granular, ribossomos. exemplos: hematoxilina, azul-de-toluidina, azul-de-

metilenohematoxilina – coloração púrpura-azulada. hematoxilina coloração púrpura azulada



3.1.2 Limite e Poder de Resolução

- poder de resolução- poder de resolução. capacidade do instrumento dar imagens individuais

de pontos situados muito próximos um do outrode pontos situados muito próximos um do outro

- limite de resoluçãodi tâ i í i d i ti t d i t. distância mínima que deve existir entre dois pontospara que possam ser discriminados como tal



3.1.2 Limite e Poder de Resolução

exemplos de limites de resolução- exemplos de limites de resolução. olho humano: 100 m

microscópio óptico: 0 2 m. microscópio óptico: 0,2 m. Microscópio eletrônico: 0,0004 m


3 1 2 Li it P d d R l ã

3- MÉTODOS DE ESTUDO3.1.2 Limite e Poder de Resolução



3.1.2 Limite e Poder

DE ESTUDO

de Resolução



3 1 3 I t t ã d C t Hi t ló i

3- MÉTODOS DE ESTUDO3.1.3 Interpretação de Cortes Histológicos



3.2 Microscopia Eletrônica de Transmissão

DE ESTUDO

feixe de elétrons emitido pelo catodo

é t íd l d d é atraído por uma placa redonda com um furo central denominada de anodo

gera um diferencial de potencial e em conseqüência há aceleração dos elétrons.

feixe de elétrons são defletidos por um conjunto de eletroímãs (lentes eletromagnéticas)




DE ESTUDO

o feixe é focalizado sobre o tecido por intermédio da lente condensadora

lente objetiva forma a imagem do objeto

a imagem é projetada sobre uma tela fluorescente ou sobre um filme fotográfico por intermédio de

l t j tuma lente projetora.




DE ESTUDO

fixadores (como por exemplo: glutaraldeído, paraformaldeído, tetróxido de ósmio, permanganato , p gde potássio etc.)

fixadores também funcionam como corantes elétrondensoscomo corantes elétrondensos.

a inclusão é realizada principamente em resinas a base d ó i ( t lt fide epóxi (cortes ultra-finos por meio do ultramicrótomo - diminuir os desvios dos feixes de elétrons quando os mesmos atravessam oquando os mesmos atravessam o tecido)Fonte: GARTNER & HIATT (2003)



DE ESTUDO

na microscopia eletrônica os elétrons são desviados por porções do objeto que contenham p ç j qátomos de elevado peso atômico

as estruturas que desviam os elétrons aparecem escuras na telaelétrons aparecem escuras na tela e são chamadas de elétrondensas

nas preparações em realiza-se i ã d t d t ida impregnação do cortes de tecido

por metais pesados (ósmio, chumbo, urânio etc.) - aumentar o constrasteconstraste


Prof. MSc. Cristiano Rosa de Moura3- MÉTODOS DE ESTUDODE ESTUDO

3.3 Microscopia Eletrônica de Varredura entre a lente condensadora e o objeto é interposto uma bobina de varredura.

a bobina provoca um desvio do feixe de elétrons (incide sobre o objeto ponto a ponto numa seqüênciaobjeto ponto a ponto numa seqüência determinada)

feixe de elétrons não atravessa o bj t ( b tobjeto (espesso e coberto por um

metal pesado)


Prof. MSc. Cristiano Rosa de Moura3- MÉTODOS DE ESTUDODE ESTUDO

3.3 Microscopia Eletrônica de Varredura feixe de elétrons sofre reflexões originando o feixe secundário, o qual é captado por detectores especiais p p pgerando um sinal elétrico que transferido a um monitor de vídeo.



3- MÉTODOS DE ESTUDO3.4 Outros Métodos de Estudo

microscopia de constraste de fase microscopia de constraste de fasea velocidade da luz que atravessa um corpo depende da quantidade de

matéria (densidade) presenteos diversos componentes celulares possuem índices de refração

diferentes (diferentes fases entre as ondas luminosas emergentes)

microscopia confocaltecido (tratado com compostos fluorescentes) é iluminado por um

d l d f i d i ldelgado feixe de raios laserluz emitida sob excitação do feixe de raios laser é captada e tratada num

computador (gera sinais para um monitor de vídeo)



microscopia de fluorescência microscopia de fluorescênciasubstâncias fluorescentes são substâncias que quando excitadas por

certos comprimentos de onda, absorvem energia e emitem luztecidos são corados com corantes fluorescentestecidos são corados com corantes fluorescentessubstâncias fluorescentes aparecem como estruturas brilhantes contra

um fundo escuro

radioautografia radioautografiapermite a localização de substâncias radioativas nos tecidos (efeito das

radiações sobre emulsões fotográficas)

cultivo celularcélulas vivas recentemente retiradas do corpo podem ser colocadas em

líquido (meio de cultura) apropriado e examinadas por algum tempolíquido (meio de cultura) apropriado e examinadas por algum tempo



centrifugação fracionada centrifugação fracionadaprocesso físico no qual aplica-se força centrífuga para separar organelas

celulares de acordo com o coeficiente de sedimentação de cada uma delas

histoquímica e citoquímicabaseia em reações químicas específicas ou interação macromolecular de

alta afinidade (compostos insolúveis, corados ou eletrodensos) - localização ( p , ) çde substâncias específicas nos cortes histológicos

imunocitoquímicab i f d d lé l h d i dbaseia no fato de que quando uma macromolécula estranha denominada

antígeno é introduzida no organismo - reage produzindo uma proteína denominada anticorpo, que combina-se especificamente com o antígeno



criofratura criofraturatécnica os tecidos são tratados com criopreservativos e congelados

rapidamente – fraturado por intermédio de uma lâmina supercongelada ( i li ã d b ti d ME d d(visualização de membranas a partir do ME de varredura

citometria de fluxoutilizada para separar células inteiras ou partes dela de um determinadoutilizada para separar células inteiras ou partes dela de um determinado

tipo a partir de uma amostra heterogênea – a partir de uma câmara de sedimentação especial (citômetro) que funcionam com baixa gravidade onde as células são separadas pelo seu tamanho e densidadep p

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