BAB IPENDAHULUAN
Flavonoid adalah kelompok senyawa polifenol yang dapat ditemukan
dalam berbagai sumber buah-buahan, sayuran dan tanaman. Flavonoid
terdiri dari 12 subclass termasuk flavon, flavanon dan flavanol.
Secara farmakologi flavonoid dapat digunakan sebagai obat
inflamasi, alergi, virus, kanker dan penyakit lainnya.Nyctanthes
arbor-tristis L. adalah golongan semak dari family Oleaceae. Daun
tanaman ini dapat digunakan untuk pengobatan radang, dispepsia,
cacingan, pruritus, dermatopathy, demam. Beberapa penelitian telah
dilakukan untuk menyelidiki bioaktivitas tanaman ini. Secara
tradisional, ekstraksi senyawa bioaktif dari tumbuhan yang telah
dilakukan dengan destilasi uap dan ekstraksi pelarut organik
menggunakan teknik perkolasi, maserasi dan Soxhlet. Namun, ada
kelemahan yang terkait dengan teknik ekstraksi ini seperti
membutuhkan pelarut dalam jumlah yang besar, memakan waktu dan
banyak limbah produk. Ekstraksi fluida superkritis (SFE) bisa
menjadi alternatif yang menguntungkan lingkungan untuk ekstraksi
senyawa ini. Selain itu, proses SFE yang cepat, selektif dan produk
yang bebas dari sisa pelarut.SFE adalah metode yang berkembang
pesat untuk memproduksi senyawa bioaktif. Karakteristik unik dari
sistem ini adalah penggunaan gas di atas titik kritis untuk
mengekstrak komponen bahan baku secara selektif. Karbon dioksida
(CO2) adalah pelarut yang paling banyak digunakan dalam SFE, karena
secara fisiologis tidak berbahaya, lingkungan aman, non-ledakan.
Beberapa peneliti mempelajari ekstraksi senyawa alami dari matriks
tanaman dengan menggunakan karbon dioksida superkritis (SC-CO2).
Tanaman yang dikenal sebagai potensi sumber antioksidan alami.
Sampai saat ini, belum ada publikasi yang ditemukan ekstraksi
flavonoid dari N. arbor-tristis dengan ekstraksi fluida
superkritis. Dalam penelitian ini karbon dioksida superkritis
digunakan untuk mengekstrak senyawa bioaktif flavonoid dari
N.arbor-tristis. Dengan demikian tujuan penelitian ini adalah untuk
menentukan efek dari tekanan, temperatur, laju alir CO2 dan
persentase Co-pelarut terhadap hasil ekstraksi. Pada jurnal lain
yang kami dapat juga telah dilakukan penelitian menggunkan bunga
dari tanaman ini, meliputi : isolasi dengan cara ekstraksi,
pemisahaa dengan kromatografi kolom dan lapis tipis, identifikasi
dengan spektrofotometri ultraviolet. Sangat jarang suatu tumbuhan
mengandung turunan senyawa kimia ( flavonoida ) tunggal, tetapi
hampir selalu merupakan campuran dalam proporsi yang berbeda.
Berdasarkan hal tersebut dapat dugaan senyawa flavonoida yang
terdapat dalam bunga Nyctanthes arbor-tristis L.
BAB IIPEMBAHASAN
Preparasi Simplisia
Daun dipisahkan dari tangkai, dicuci dengan air keran dan
dibilas dengan air suling
Dikeringkan menggunakan oven pada suhu 40C untuk mendapatkan
berat konstan
Sampel kering digiling/ dihaluskan dengan blender
Diayak dengan mesh 850 M untuk mempertahankan partikel secara
konstan
Dimasukkan ke dalam refrigerator atau inkubator, sampai akan
digunakan
Proses Ekstraksi Sampel dengan Ekstraksi fluida superkritis
(SFE)
CO2 superkritis dengan kemurnian tinggi,digunakan sebagai
pelarut dalam proses ekstraksi ini
+ co-solvent etanol
Ekstraktor ini menggunakan karbon dioksida sebagai pelarut
Karbondioksida cair dari tangki penyimpanan (CO2 cylinder),
melewati bak pendingin/chiller (sekitar 263 K), lalu dipompaoleh
dua pompa plug
Karbon dioksida dipanaskan dengan heat exchangertubular hingga
mencapai temperatur proses ekstraksi, tekanan diatur dengan
regulator tekanan
Ekstraktor (extraction vessel) yang berisi bahan baku, secara
thermostatik dikontrol dengan tape pemanas elektrik, temperatur di
dalam ekstraktor dikontrol dengan kontroler digital
Tekanan keluar ekstraktor lalu diukur. Setelah meninggalkan
ekstraktor, aliran CO2 yang mengandung ekstrak mengalir melalui
percabangan katup (valve) jarum
Kemudian ekstrak flavonoid terkumpul di dalam kolektor/sample
collection
CO2 dilepaskan berupa uap (proses menguap)
Ekstrak etanolik SFE dari sample collection untuk setiap
parameter disimpan dalam lemari es suhu (4C) sampai analisis
UV-VIS
Percobaan dilakukan dengan beberpa variabel bebas yaitu tekanan
(7.84MPa untuk 29.41MPa), Suhu (35 C sampai 70 C), laju alir CO2
(1.8mL/min ke 3.5mL/min) dan persentase Co-pelarut (6,97% menjadi
13,04%)
Pengukuran Jumlah Total FlavonoidPengukuran jumlah total
flavonoid dari ekstrak etanol ditentukan dengan metode Aluminium
Chloride Colorimetric (CCA). Prinsip dari metode ini adalah
aluminium klorida membentuk kompleks stabil dengan gugus keto
asam-4 C, dan gugus C-3 atau C-5 gugus hidroksil flavon dan
flavonol. Quercetin digunakan sebagai standar untuk membuat kurva
kalibrasi. 10 mg quercetin dilarutkan dalam etanol 80% dan kemudian
diencerkan sampai 25-1200 mg mL. Larutan baku encer (0,5 mL) secara
terpisah dicampur dengan 1,5 mL etanol 95%; 0,1 ml 10% aluminium
klorida; 0,1 ml kalium asetat 1M dan 2,8 mL air suling. Setelah
inkubasi pada suhu kamar selama 30 menit, absorbansi campuran
reaksi diukur pada 415 nm dengan JASCO V-550 spektrofotometer
UV-Visible. Jumlah 10% aluminium klorida digantikan dengan jumlah
air suling yang sama. Demikian pula, 0,5 mL ekstrak tanaman etanol
direaksikan dengan aluminium klorida untuk penentuan kadar
flavonoid seperti dijelaskan di atas.
Penentuan hasil ekstraksi Ekstrak etanol, dalam kondisi SFE
dioptimalkan, dikumpulkan dan residu dari co-pelarut dari ekstrak
dihilangkan menggunakan rotary evaporator, kondisi vakum pada 40 C.
Ekstrak itu kemudian ditempatkan dalam oven pada suhu 40 C dan
berat konstan akhir tercatat. Radikal bebas dievaluasi dengan
1,1-Diphenyl-2-pikrilhidrazil. Aktivitas radikal bebas dari ekstrak
dievaluasi dengan1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) sesuai metode
yang dilaporkan sebelumnya dengan sedikit modifikasi. Secara
singkat, larutan 90M DPPH dalam 0,8 ml metanol dan larutan tersebut
ditambahkan ke 0,2 ml larutan ekstrak metanol pada konsentrasi yang
berbeda (10 ug / ml - 80 mg / ml). Campuran itu dikocok dengan kuat
dan didiamkan pada suhu kamar selama 1 jam. Kemudian serapannya
diukur pada 517 nm menggunakan JASCO V-550 spektrofotometer
UV-Visible. Asam askorbat digunakan sebagaibaku/pembanding. Nilai
absorbansi rendah dari campuran reaksi menunjukkan aktivitas
radikal bebas lebih tinggi.
HasilPenentuan hasil ekstraksi akhir dibawah kondisi SFE
dioptimalkan. Kondisi terbaik diperoleh untuk ekstraksi flavonoid
dari ekstrak daun N.arbor-tristis adalah tekanan pada 24.51MPa,
suhu pada 40C, laju alir CO2 di 2 mL/min dan Co-pelarut pada 8,25%.
Ekstrak yang diperoleh pada kondisi optimum SFE dikeringkan untuk
memperoleh hasil ekstraksi akhir. Hasil ekstraksi akhir yang
diperoleh dalam kondisi SFE dioptimalkan adalah 69,85%. Ekstrak SFE
dari Nyctanthes punjung-tristis ditemukan efektif
inhibitor/menghambat radikal bebas, serta antioksidan utama yang
bereaksi dengan radikal bebas, yang dapat membatasi radikal bebas.
Hasilnya digambarkan pada Tabel 1. Aktivitas radikal bebas
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi ekstrak dalam kisaran
(30-250) mg/ ml. sehingga harus ditentukan konsentrasi yang tepat.
Berdasarkan hasil penelitian ini, jelaslah bahwa ekstrak tanaman
uji memiliki kemampuan kuat secara in vitro menangkap radikal bebas
terhadap model DPPH dimana tergantung konsentrasi.
Aktivitas AntioksidanPada jurnal lain dengan menggunakan bunga
C. anguistifolia kemampuan DPPH sebagai aktivitas antioksidan pada
bunga C. angustifolia atau ekstrak daun dapat diukur dari larutan
tak berwarna menjadi larutan metanol DPPH berwarna ungu. Uji ini
dilakukan dengan mencampur 3 ml DPPH 0,1 mM dalam metanol dan 1 ml
larutan sampel dalam etanol 70%. Absorbansi diukur pada Specord 200
analticjena UV-vis spektrofotometer (Jerman) pada 517 nm. Penurunan
sinyal amplitudo pada panjang gelombang yang dipilih karena
aktivitas pencarian radikal yang tinggi. Penghambatan radikal DPPH
oleh sampel dihitung sebagai berikut: DPPH inhibisi (%) = [(A - B)
/ A] 100, dimana A adalah absorbansi tanpa ekstrak dan B adalah
absorbansi dengan ekstrak. Nilai IC dihitung dengan
mempertimbangkan 50% penghambatan radikal bebas DPPH dalam 5 menit
dengan bunga atau daun sampel pada konsentrasi minimum dan
membandingkan dengan respon yang sama ditunjukkan oleh BHA.
Gambar 2 diatas menunjukkan pengaruh suhu terhadap ekstraksi
flavonoid dari daun Nyctanthes punjung-tristis SC-CO2 pada tingkat
suhu yang berbeda pada tekanan konstan. Kepadatan CO2 pada tekanan
konstan menurun dengan kenaikan temperatur dan karenanya mengurangi
daya pelarut untuk SC-CO2. Di sisi lain kenaikan suhu dapat
meningkatkan tekanan uap analit. Oleh karena itu kecenderungan
senyawa yang akan diekstraksi melewati meningkat fluida
superkritis. Kenaikan moderat dalam suhu dapat menyebabkan
penurunan besar dalam densitas fluida, dengan penurunan konsekuen
dalam zat terlarut kelarutan. Dalam studi ini, hasil penelitian
menunjukkan bahwa hasil ekstraksi meningkat karena suhu meningkat
dari 35 C hingga 40 C. Hal ini dapat dijelaskan dengan fakta bahwa
peningkatan temperatur mempengaruhi peningkatan tekanan uap analit
yang lebih besar dari pengurangan kepadatan CO2. Namun, kenaikan
suhu 40-70C menyebabkan penurunan hasil ekstraksi yang mungkin
adalah karena pengurangan kepadatan CO2
Gambar 3 pengaruh tekanan ekstraksi flavonoid. Menurut hasil,
karena tekanan meningkat dari 7.84MPa ke 24.51MPa, isi flavonoid
meningkat. Pada suhu konstan, peningkatan tekanan akan meningkatkan
densitas SC-CO2. Kekuatan pelarut meningkat SC-CO2 dengan kepadatan
CO2. Dengan meningkatnya kepadatan, jarak antara molekul menurun,
sehingga interaksi antara analit dan peningkatan CO2, menyebabkan
kelarutan yang lebih besar dari analit di CO2. Oleh karena itu
peningkatan tekanan juga mempercepat analit perpindahan massa dan
pelarut dalam sistem pembuluh extractor superkritis dan
meningkatkan hasil ekstraksi. Hal ini menunjukkan bahwa kelarutan
flavonoid dalam SC-CO2 sebanding dengan kepadatan SC-CO2. Dalam
studi ini, hasil flavonoid meningkat dengan meningkatnya tekanan ke
nilai tertentu. Selama ini berbagai tekanan, meningkatkan densitas
fluida diduga mekanisme utama yang mengarah ke hasil yang lebih
tinggi flavonoid. Di atas ini berbagai tekanan, yield flavonoid
menurun dengan meningkatnya tekanan diamati. Volatilitas dan
polaritas analit diekstraksi mungkin bertanggung jawab atas
hasil.
Gambar 4 menunjukkan pengaruh aliran CO2 terhadap ekstrak
flavonoid.Bahwa kondisi laju alir pelarut yang optimal tergantung
pada sifat dari pelarut dan sistem zat terlarut, geometri dari
ekstraktor, suhu dan tekanan. [26] Pengaruh Co-pelarut (etanol)
mempengaruhi persentase ekstraksi flavonoid.
Hasil konsentrasi etanol pada ekstraksi flavonoid ditunjukkan
pada Gambar 5 diatas. Hasil flavonoid dilakukan penelitian
menggunakan konsentrasi etanol yang berbeda (80% dan 95%) dengan
persentase yang berbeda. Etanol, ditambahkan ke superkritis CO2,
meningkatkan polaritas cairan. Co-pelarut pada dasarnya
diberikannya efeknya terutama dalam dua cara: dengan berinteraksi
dengan kompleks analit untuk mempromosikan desorpsi cepat ke fluida
superkritis dan dengan meningkatkan sifat kelarutan CO2 superkriti.
Berbagai persentase etanol digunakan ditunjukkan efek yang berbeda
dalam mengubah polaritas cairan dan dengan demikian menghasilkan
efek beragam pada peningkatan kelarutan flavonoid. Hasil ekstraksi
yang optimal dapat dipenuhi ketika polaritas cairan dan flavonoid
yang bertepatan. Dalam penelitian ini, hasil penelitian menunjukkan
bahwa 95% optimal etanol konsentrasi untuk ekstraksi flavonoid
Nyctanthes punjung-tristis adalah 8,25%.
BAB IIIKESIMPULAN
Hasil yang diperoleh pada jurnal ini menunjukkan bahwa : 1.
Ekstraksi fluida superkritis (SFE) layak untuk ekstraksi flavonoid
kemudian dari hasil ekstrak flavonoid diuji untuk mempertegas
adanya senyawa flavonoid dengan spektrofotomtri UV-Vis JASCO V-550
dan mendapatkan hasil kompleks stabil dengan gugus keto asam-4 C,
dan gugus C-3 atau C-5 gugus hidroksil flavon dan flavonol dari
daun Nyctanthes arbor-tristis L. sehingga dilaporkan memiliki
aktivitas biologis ganda. 2. Hasil menunjukkan bahwa SFE mungkin
menjadi teknik alternatif yang bagus untuk ekstraksi flavonoid dari
N. arbor-tristis L.3. Setelah dilakukan optimasi didapat kondisi
optimum SC-CO2 untuk ekstraksi senyawa flavonoid pada daun N.
arbor-tristis adalah tekanan pada 24.51MPa, suhu pada 40C, laju
alir CO2 di 2mL/min dan co-pelarut pada 8,25%. 4. Penelitian ini
juga menunjukkan bahwa ekstrak tanaman diuji memiliki moderat untuk
aktivitas antioksidan yang kuat dan nilai IC50 ditemukan menjadi
62.42 0.69g/mL. Dengan demikian, penyelidikan lebih lanjut luas
diperlukan untuk mengetahui prinsip-prinsip antioksidan aktif yanga
ada dalam tanaman ini.5. Dari jurnal lain sebagai acuan didapatkan
hasil penentuan flavonoid dan kandungan antioksidan dari C.
angustifolia dengan metode ekstraksi yang berbeda untuk mengekstrak
flavonoid dan untuk mengetahui hasil yang terbaik dengan
membandingkan efisiensi dan ketahanan. Di antara semua metode ini
ektraksi microwave merupakan metode terbaik untuk ekstraksi
flavonoid. Semua ekstrak menunjukkan aktifitas antioksidan.
BAB IVDAFTAR PUSTAKA
Merken HM, Beecher GR. Measurement of food flavonoids by high
pressure liquid chromatography: A review. J. Agric. Food.Chem.
2000; 48: 577.
Piett PG. Flavonoids as antioxidants. J. Nat. Prod. 2000;
63:1035.
Harborne JB, Williams CA. Advances in flavonoid research since
1992. Phytochemistry 2000; 55: 481.
Warrier R., Nambiar VP, and Ramankutty C. Indian Medicinal
Plants: a compendium of 500 species: Orient Longman Ltd,Madras;
1995.
Saxena R., Gupta B., Saxena K., Singh R. and Prasad D. Study of
anti-inflammatory activity in the leaves of Nyctanthes
arbortristisLinn. An Indian medicinal plant. J.
Ethnopharmacol.1984; 11: 319-330.
Saxena R., Gupta B., Saxena K., Singh R. and Prasad D.
Analgesic,antipyretic and ulcerogenic activity of Nyctanthes
arbor-tristis leaf extract. J. Ethnopharmacol. 1987; 19: 200.
10
