Produkty peroxidace lipidů v erytrocytech jako biochemické markery pro včasnou diagnózu

Alzheimerovy choroby

J. Illner1, Z. Chmátalová1, M. Vyhnálek2, J. Laczó2 , J. Hort2, A. Skoumalová1

1Ústav lékařské chemie a klinické biochemie, 2.LF UK a FN Motol2Neurologická klinika, 2.LF UK a FN Motol

Alzheimerova choroba

neurodegenerativní onemocnění mozku

diagnóza: klinická kritéria (neuropsychologická

vyšetření, laboratorní testy, zobrazovací metody)

diagnostika časných stádií: problém (symptomy společné pro další

neurodegenerativní choroby)

Oxidační stres

patologické změny v mozku

oxidační stres

Pracovní hypotéza

Prodromální fáze ACH (mírná kognitivní porucha)

difúze přes hematoencefalickou bariéru

vazba na erytrocyty

identifikace fluorescenčními analýzami

vznik meziproduktů peroxidace lipidů

Analýza fluorescenčních produktů v erytrocytech v prodromální fázi ACH a porovnání těchto produktů se stádiem demence.

Cíl

Experimentální metody subjekty (n=56): kontroly (n=13)

ACH-D (n=18)

MCI (n=25)

metody: extrakce erytrocytů (chloroform:isopropanol, 3:2)

fluorescenční analýzy (excitační spektra)

• 3D spektra

• synchronní spektra

• matematické derivace

HPLC separace

3D spektrum pacienta s MCI

nalezena 2 fluorescenční maxima: 350/440 a 290/340 nm

Kvantitativní množství LFP z 3D spekter

290/340 350/4400

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

ACHMCIKontroly

***

******

Rela

tivní

fluo

resc

enčn

í jed

notk

y

Fluorescenční maximum

Synchronní spektra

nalezená emisní maxima: 340, 360, 400 a 440 nm

Kvantitativní množství LFP z synchronních spekter

310/360 330/380 350/400 390/440 335/360 355/380 395/4200.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

4.50

5.00

MCIACHKo

Rela

tivní

fluo

resc

enčn

í jed

notk

y

**

*

Fluorescenční maximum

335/360 355/380 395/4200.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

naMCIaMCIKontroly

310/360 330/380 350/400 390/4400.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

naMCIaMCIKontroly

Kvantitativní srovnání množství LFP u pacientů s MCI a kontrol

*

* *

*

*

* *

Druhé derivace synchronních spekter

nalezeny specifické fluorofory 395/420 a 390/440 u aMCI

HPLC separace LFP

rozdílné složení LFP u MCI a ACH-D u fluoroforu 310/360

Shrnutí

množství LFP v erytrocytech bylo vyšší u pacientů s MCI v

porovnání s ACH-D a kontrolami

vysoká variabilita v množství LFP ve skupině pacientů s MCI

složení LFP se v různých stádiích ACH liší

Poděkování

Tato práce vznikla za finanční podpory grantu GA UK číslo 604912.

Děkuji za pozornost.