-
KARYOTYPING
-
KROMOSOM
Heterochromatin DNA is tightly wound and composed of many
repetitive sequences. It makes up the telomeres, centromeres &
helps maintain chromosomes structural integrity.
Euchromatin DNA is more loosely wound & is composed of many
unique sequences. It encodes proteins.
To remain stable, a chromosome requires 3 basic parts:
telomerescentromeresorigins of replication (sites where DNA
replication begins)
-
Anatomi Kromosom
Kategori kromosom didasarkan pada lokasi sentromernya
-
SITOGENETIKA
Adalah studi tentang kromosom, struktur dan pewarisannya.Pentingnya
sitogenetika kromosom dalam dunia kedokteran:Diagnosis KlinikEx,
Turner syndromePemetaan GenEx, cystic fibrosisSitogenetika
kankerEx, retinoblastomaPrenatal diagnosisEx, Down syndrome
-
Kelainan Kromosom Pada Abortus Spontan
-
Kelainan Kromosom Pada Bayi Baru Lahir
-
Indikasi Analisa Kromosom
Riwayat keluarga yang membutuhkan Diagnosa PrenatalKelainan
kromosom dari first-degree relativeAnak sebelumnya memiliki
kelainan kromosomResiko berulang ~1-2%Usia ibu hamil: >35
yearsIbu menderita X-linked disorderAnak laki-laki yang beresiko
terhadap kelainan genetik tertentu
-
Indikasi Analisa Kromosom Lain :
Masalah Kesuburan : infertilitas, abortus berulangKelainan kromosom
terjadi pada 3-6% orang tua (salah satu atau keduanya) (Translokasi
atau inversi)Bayi Lahir Mati~10% kelainan kromosomKaryotyping
penting untuk penelusuran riwayat keluargaProblem kesehatan pada
anakPerkembangan lambat, malformasi multiple, ambiguous genitalia,
mental retardationNeoplasia: Karyotype dapat memberikan informasi
diagnosa atau prognosa
-
Sel yang digunakan untuk karyotyping:
Sel Darah Tepi: T-lymphocytes dari darah tepi mudah diambilDikultur
menggunakan mitogen (phytohemagglutinin)Hasil kultur memiliki masa
hidup pendekSel KulitKultur fibroblast tanpa menggunakan
mitogenHasil kultur memiliki masa hidup yang lama, can be
immortalizedSel TumorDidapat dari hasil biopsiSel dari
AmniocentesisCairan amnion diambil setelah kehamilan ~16 mingguSel
PlasentaDidapat dari CVS (chorionic villous sampling)Sel plasenta
membelah, karyotype dapat dilihat setelah bbrp jam
-
Sel (dari darah, cairan amnion, atau chorionic villus)
dikultur.
Colcemid menghentikan sel pada saat metafase.
Cairan hipotonik merupturkan sel2 darah merah dan limfosit.
Sel difiksasi dengan campuran methanol dan alkohol
Kromosom diteteskan pada obyek glass
Pemberian tripsin dan pewarnaan Giemsa sistim G Banding.
Analisa kromosom di bawah mikroskop
Karyotype dibuat dari sediaan sel pada saat metafase:
-
Di bawah mikroskop
Setelah penyusunan kromosom
( karyotyping )
- G-banding: Pewarnaan yang dapat membagi setiap lengan kromosom
menjadi beberapa region
-
Ideogram dari sistem G- banding dengan 450-band
-
Penggunaan PROBE pada Kromosom / DNA
FISH: fluorescent in situ hybridizationProbe untuk gen spesifik
pada regio kromosomKelainan jumlah dan struktur kromosomChromosome
paintingCampuran dari probe yang di label dan di fluoresense untuk
memetakan seluruh panjang gen sehingga seluruh bentukan komosom
dapat terlihat.Aneuploidi, translokasiSKY: spectral
karyotypingSemua kromosom diwarnai sekali dan tiap kromosom
memberikan warna yang berbeda
-
FISH : Probe untuk gen spesifik
Metafase parsial yang memperlihatkan mikrodelesi pada gen elastin
(ELN) (tanda panah) yg disebut William SyndromeSel fase interfase
yg memunjukkan mikroduplikasi gen periferal myelin protein 22
(PMP22) yg disebut Charcot Marie Tooth Syndrome
-
SKY: Probe untuk kromosom spesifik
Normal karyotype Cancer cell karyotype
Lihat :translokasi, polisomy, monosomy
- Analisa kromosom.0,2 ml sampel darah tepi dimasukkan dalam 5 ml
media tanam Diinkubasi selama 72 jam suhu 37C 5% CO2 Penambahan
amethopterin sebanyak 50 k ( dihitung setengah hari sebelum
penambahan thymidin misal jam 4 sore berarti jam 8 pagi ditambah
thymidin) pada hari ke-3 sentrifus kecepatan 1000rpm selama 10 mnt.
Pengambilan supernatannya dan ganti dengan 5ml media yang baru,
Tambahkan thymidin 50 k Tambahkan Colcemid 25 k
-
Inkubasi selama 30 menit, kemudian Sentrifus 1000rpm selama 10
menit.
Ambil supernatannya.kmdn tambahkan KCl darah tetes demi tetes
pelan2 sampai dengan 6 ml
masukkan dlm waterbath 37.5C selama 30 menit
setelah 30 menit, tambahkan 8 tetes lart fixatif
kemudian kocok supaya homogen dan terlihat cincin hitam
sentrifus 1000rpm selama 10 mnt
Ambil supernatannya, ganti dng lart fixatif pelan2 dan campur
sesekali sampai dng 5 ml
sentrifus 1000rpm selama 10 mnt
-
Ambil supernatannya, ganti dng lart fixatif pelan2 dan campur
sesekali sampai dng 5 ml, lakukan cara diatas 2 kali lagi.
Teteskan cairan diatas slide (yg telah di bilas dng H2O)
sebanyak 3 tetes di tempat yg berbeda dalam posisi horisontal
miring 30. Siram pelan2 dng lart fixatif.Keringkan dalam
mikrowave.
Pre-stain
Dicat Wright tiap 2 menit kemudian
Dievaluasi, bila kualitas baik, dilanjutkan
-
Stainning/Pengecatan
Dicat Wright tiap 2 menit dan dievaluasi
Analisa kromosom
Hitung jumlah kromosom tiap-tiap sel
-
Terima Kasih
