Kinolon - klimud.org SUNUMLAR/11-Kası… · Öznur Gürpınar1, Ahmet İlbay2, Gökhan Metan3, Pınar Zarakolu3, Özgen Köseoğlu Eser1 1Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi

Kinolon Dirençli ve Duyarlı İnvaziv Escherichia coli Kan İzolatlarında

ST131/H30 klon/altklonunun Virülans ile İlişkisi

Öznur Gürpınar1, Ahmet İlbay2, Gökhan Metan3, Pınar Zarakolu3,

Özgen Köseoğlu Eser1

1Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara 2Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi İç Hastalıkları Anabilim Dalı, Ankara

3Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,

Ankara

Öznur Gürpınar

HÜTF Tıbbi Mikrobiyoloji AD

Yüksek Lisans Öğrencisi

Tübitak 1002 Hızlı Destek Projesi (Proje No: 116S009)

Hacettepe BAP

Escherichia coli ST131,

üriner sistem ve kan

dolaşımı enfeksiyonlarında

ortaya çıkan çok ilaca

dirençli bir klondur.

•O25b:H4 serotipi

•O16:H5 serotipi Japonya, Danimarka, Avustralya, İspanya, Pakistan

ve Fransa'da tespit edilmiştir.

•Serotiplendirilemeyen E.coli ST131 izolatları bulunmaktadır.

ST131 KLONU

E.coli ST131 suşunun 2008 yılında ilk tanımlanmasının ardından üç kıtadan

çeşitli ülkelerden çok sayıda bildirim yapılmıştır.

•Kuzey Amerika Kanada

•Avrupa Fransa, Portekiz, İspanya, İsviçre

•Asya Hindistan, Güney Kore, Kuveyt, Lübnan

ST131 EPİDEMİYOLOJİSİ

• İdrar yolu enfeksiyonu

• Bakteriyemi

• Karın içi ve yumuşak doku enfeksiyonları

• Menenjit

• Osteoartiküler enfeksiyonlar

• Miyozit

• Septik şok

ENFEKSİYON DAĞILIMI

Hacettepe Üniversitesi Erişkin Hastanelerinde kan yolu enfeksiyonu nedeniyle yatarak takip edilen erişkin hastaların kan kültürlerinden izole edilen kan E.coli izolatlarının

•Doğru tanımlanması

•Antimikrobiyal duyarlılıklarının belirlenmesi

•Antimikrobiyal direnç genlerinin ve virülans faktörlerinin belirlenmesi

•E.coli kan izolatlarının ST131 klon ve H30-alt klonlarının sıklığının belirlenmesi

E.coli izolatları

• Hacettepe Üniversitesi Erişkin Hastanesi yoğun bakım ve servis/acil hastalarında

üreyen tüm E. coli kan izolatları.

• 2015 (1 Ocak-31 Aralık) yılına ait toplam 157 klinik izolat

• MALDİ-TOF/Phoenix (BD, ABD), konvansiyonel yöntemler

Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

Hastaların Klinik Özellikleri

Demografik bilgiler

• Yaş

• Cinsiyet

• Yatış süresi

Altta yatan hastalıklar

• Malignite

• Koroner arter hastalığı

• Diabetes mellitus

• Kronik böbrek yetmezliği

• Obezite

• Kronik akciğer hastalığı

• Kronik karaciğer hastalığı

İnvaziv İşlemler

•Üriner kateterizasyon

•Cerrahi

•Santral venöz kateter

•Mekanik ventilasyon

•Nazogastik sonda

•Arteriyel kateter

•Gastronomi

Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi

Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

Antibiyotik Duyarlılık Testleri

•Ampisilin

•Ampisilin/sulbaktam

•Seftriakson

•Gentamisin

•Trimetoprim-Sulfametokzasol (Bioanalyse, Ankara, Türkiye)

•Siprofloksasin

•İmipenem (Bioanalyse, Ankara, Türkiye)

Disk

Difüzyon

Testi

Antibiyotik

Gradiyent testi

• 2ml Mueller Hinton Buyyon

• 0.5 McFarland

• Mueller Hinton Agar besiyeri

GSBL varlığı

•Sefotaksim

•Sefotaksim/klavulonik asit

•Seftazidim

•Seftazidim/klavulonik asit

Karbapenemaz varlığı

•Ertapenem

•Ertapenem/boronik asit

Fenotipik Yöntemler

Kombine disk difüzyon testi

Antibiyotik Direnç Genlerinin Belirlenmesi

Karbapenem direnç genlerinin PCR ile belirlenmesi

• blaNDM F- 5′- GGT TTG GCG ATC TGG TTT TC- 3′

R-5′- CGG AAT GGC TCA TCA CGA TC- 3′

(621 bp)

• blaKPC F- 5′- CGT CTA GTT CTG CTG TCT TG- 3′

R-5′- CTT GTC ATC CTT GTT AGG CG- 3′

(798 bp)

• blaOXA-48 F- 5′- GCG TGG TTA AGG ATG AAC AC- 3′

R-5′- CAT CAA GTT CAA CCC AAC CG- 3′

(438 bp)

• blaVIM F- 5′- GAT GGT GTT TGG TCG CAT A- 3′

R- 5′- CGA ATG CGC AGC ACC AG - 3′

(390 bp)

• blaIMP F- 5′- GGA ATA GAG TGG CTT AAY TC- 3′

R- 5′- TCG GTT TAA YAA AAC AAC CAC C- 3′

(232 bp)

ThermalCycler (Global Genomics

Partner, MyGenie96)

10 dakika 94 °C

30 saniye 94 °C

40 saniye 55 °C

50 saniye 72 °C

Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72

°C’de 5 dakika bekletilmesinin ardından

reaksiyon sonlandırıldı.

X 36 döngü

Loirel Poirel 2011 Diag Microbiol Infect Dis

GSBL Direnç Genlerinin Belirlenmesi

blaCTX-M F-5- ATAAAACCGGCAGCGGTGG- 3

blaCTX-M R-5- GAATTTTGACGATCGGGG- 3

(909 bp)

ThermalCycler (Global Genomics Partner,

MyGenie96)

5 dakika 94 °C

20 saniye 95 °C

30 saniye 51 °C

30 saniye 72 °C

Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72 °C’de

3 dakika bekletilmesinin ardından reaksiyon

sonlandırıldı.

blaCTX-M-15 F-5- ATAAAACCGGCAGCGGTGG- 3

universal

reverse primer

5- GAATTTTGACGATCGGGG- 3

(483 bp) Colpan A, CID 2013

ST131 klonunun belirlenmesi

• O25pabBspe.F 5-TCCAGCAGGTGCTGGATCGT-3

• O25pabBspe.R 5-GCGAAATTTTTCGCCGTACTGT-3

(347 bp)

• trpA2.F 5-GCTACGAATCTCTGTTTGCC-3

• trpA2.R 5-GCAACGCGGCCTGGCGGAAG-3

(427 bp)


Partner, MyGenie96)

4 dakika 94 °C

5 saniye 94 °C X 30

döngü

10 saniye 65 °C

Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72

°C’de 5 dakika bekletilmesinin ardından


Colpan A, CID 2013

H30/H30-Rx alt klonlarının belirlenmesi

• fimH30 F-5-CCGCCAATGGTACCGCTATT-3

• fimH30 R-5-(CAGCTTTAATCGCCACCCCA-3

(354 bp)

• fimH30Rx F-5-GGTTGCGGTCTGGGCA-3

• fimH30Rx R-5-CAATATCCAGCACGTTCCAGGTG-3

(194 bp)


Partner, MyGenie96)

5 dakika 94 °C

20 saniye 95 °C X 30

döngü

30 saniye 51 °C

Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72 °C’de

30 saniye bekletilmesinin ardından


usp (üropatojen-spesifik protein)

• F-ACATTCACGGCAAGCCTCAG

• R-AGCGAGTTCCTGGTGAAAGC

(440 bp)

papA (adezin)

• F-ATGGCAGTGGTGTCTTTTGGTG

• R-CGTCCCACCATACGTGCTCTTC

(717 bp)

ompT (dış zar reseptörü)

• F-ATCTAGCCGAAGAAGGAGGC

• R-CCCGGGTCATAGTGTTCATC

(559 bp)

iutA (aerobaktin reseptörü)

• F-GGCTGGACATCATGGGAACTGG

• R-CGTCGGGAACGGGTAGAATCG

(302 bp)

Virülans Genlerinin Belirlenmesi

Hasta sayısı; 152

Hastaların yaş ortalaması; 60.3±18.6

Hastanede yatış süresi; ortalama 25.9±35.1

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

KADIN ERKEK

%[VALUE] s: 86 %[VALUE]

s: 66

Cinsiyet dağılımı

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100[CATEGORY

NAME];

%[VALUE] s: 81

[CATEGORY NAME];

%[VALUE] s: 75

64

Hasta

Ex

Mortalite

%42

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Malignite

Koroner Arter Hastalığı

Diabetes Mellitus

Kronik Böbrek Yetmezliği

Obezite

Kronik Akciğer Hastalığı

Kronik Karaciğer Hastalığı

%[VALUE]; s=91

%[VALUE]; s=68

%[VALUE]; s=39

%[VALUE]; s=28

%[VALUE]; s=22

%[VALUE]; s=11

%[VALUE]; s=3

ALTTA YATAN HASTALIKLAR MALİGNİTE %59.9 s: 91

Lösemi %13.2; s: 12

Lenfoma

%12.1; s:11

Solid Tümör

%73.6; s:67

İmmünsupresyon Steroid kullanımı: %17.8

s=27 Transplantasyon

Kemik İliği TÜ: %3.9 s=6 Solid Organ TÜ:%3.3 s=5 Diğer: %2.6 s=4

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Üriner Kateterizasyon

Cerrahi

Santral Venöz Kateter

Mekanik Ventilasyon

Nazogastik Sonda

Arteriyel Kateter

Gastronomi

%[VALUE]; s=56

%[VALUE]; s=40

%[VALUE]; s=31

%[VALUE]; s=18

%[VALUE]; s=13

%[VALUE]; s=8

%[VALUE],0; s=6

İNVAZİV İŞLEMLER

CERRAHİ %26.3 s=40

Acil %17.5; s=11

Elektif

%70.0; s=28

Bilinmeyen

% 2.5; s= 1

0102030405060708090

100

%[VALUE], s=37

%[VALUE], s=22 %[VALUE], s=20 %[VALUE], s=13 %[VALUE], s=10 %[VALUE], s=8

%[VALUE], s=4

Bakteriyemi öncesi antibiyotik kullanımı %46.1 s=70 Acil servis s=63 (%40.4)

Yoğun bakım ünitesi s=29 (%18.1)

Onkoloji s=25 (%16.0)

Cerrahi servisler s=20 (%13.0)

Dahiliye servisleri s=15 (%10.0)

Kemik iliği TÜ s= 3 (% 1.9)

Enfeksiyon hastalıkları servisi

s= 1 (% 0.6)

İzolatların ürediği hastaların servisleri

Antimikrobiyal Direnç

ANTİMİKROBİYAL

İLAÇ (Disk Difüzyon Testi)

DİRENÇ

ORANI

%

Ampisilin

65

Ampisilin/sulbaktam 23

Seftriakson 23.5

Gentamisin 32

Trimetoprim-

Sulfametokzasol

37

Siprofloksasin (Antibiyotik gradiyent testi)

0.05

≥32

0.02 - ≥32

53.5

İmipenem (Antibiyotik gradiyent testi)

0.20 0.25 0.125-0.281 0

ANTİMİKROBİYAL

İLAÇ

MİK50

(µg/ml)

MİK90

(µg/ml)

MİK

ARALIĞI

(µg/ml)

DİRENÇ

ORANI

%


Fenotipik olarak GSBL yapımı %53.5


CAZ/CAZ-CLA

CTX/CTX-CLA

Antibiyotik diskleri

Seftazidim diski (30 µg)

Sefotaksim (30 µg)

Klavulonik asit (10µg)


Fenotipik olarak karbapenemaz yapımı 0


ERT/ERT-BA

Antibiyotik diskleri ve boronik asit

Ertapenem diski (10 µg)

Boronik asit (400 µg)

[CATEGORY NAME] %21; 33

[CATEGORY NAME] %3.2; 5

[CATEGORY NAME] %1.3; 2

KARBAPENEM DİRENÇ GENLERİ

blaOXA-48 blaVIM blaNDM blaKPC blaIMP

KPC, 798bp

VIM, 390bp

IMP, 232bp OXA-48, 438bp

NDM, 621bp

% 49,7 (s=78) % 45,2 (s=71)

GSBL Direnç Genleri

[CATEG

ORY

NAME]

%70.7;

[VALUE

]

[CATEG

ORY

NAME];

%29.3,

[VALUE

]

H30 VARLıĞı

[CATEG

ORY

NAME]

%99.4;

[VALUE]

[CATEG

ORY

NAME];

%0.6,

[VALUE]

ST131 VARLıĞı

H30, 354bp

trpA, 427bp

ST131, 347bp

H30-Rx

klonu

%97; 69

H30RX VARLıĞı

[CATEGORY

NAME];

[VALUE]

[CATEGORY

NAME];

[VALUE]

[CATEGORY

NAME];

[VALUE]

[CATEGORY

NAME];

[VALUE]

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

papA usp iutA ompT

Virülans genleri

Virülans Genleri

Virülans Genleri

• Bu çalışmada ST131 ile enfekte hastaların sıklıkla bakteriyemi öncesi antibiyotik kullanım

öyküsü olan, invaziv girişim uygulanan, hastanede yatış süresi uzun olan immünsupresif

hastalar olduğu görülmektedir.

• ST131 klonuna sahip kan izolatlarında, karbapenemazlar arasında yer alan blaOXA-48 en sık

görülen enzim, ompT ve iutA ise en sık görülen virülans genleri olarak belirlenmiştir. ST131

pozitif kan izolatlarında H30-Rx ve CTX-M-15 pozitifliğinin yüksek, ayrıca H30-Rx

izolatlarının hepsinin CIP dirençli olduğu saptanmıştır.

• Bu çalışma, hastanemiz kan izolatlarında E.coli ST131 klonuyla beraber H30Rx altklonunun

hakimiyetini, ayrıca bu alt klon ile direnç ve virülansın başarılı birlikteliğinin var olduğunu

işaret etmektedir.

TEŞEKKÜRLER

Documents

Kinolon - klimud.org SUNUMLAR/11-Kası… · Öznur Gürpınar1, Ahmet İlbay2, Gökhan Metan3, Pınar Zarakolu3, Özgen Köseoğlu Eser1 1Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi