Kuttarikos kyklos

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

1. MG -3 Κύτταρα

Η κυτταρική σειρά MG-3 οστεοβλαστικού φαινοτύπου παρουσιάζει πολλά κοινά

χαρακτηριστικά με τους οστεοβλάστες παρόλο που προέρχονται από οστεοσάρκωμα,

για το λόγο αυτό χρησιμοποιείται πολύ συχνά ως μοντέλο προκειμένου να μελετηθεί

η οστεοβλαστική συμπεριφορά.

Συνθέτει κολλαγόνο τύπου Ι, οστεοκαλσίνη και εμφανίζει αυξημένα επίπεδα

αλκαλικής φωσφατάσης μετά τη χορήγηση 1,25-(ΟΗ)2D3

2 . Κυτταροκαλλιέργειες

Τα κύτταρα MG-63 καλλιεργήθηκαν σε τριβλία κυτταροκαλλιεργειών επιφάνειας 75

cm2. Διατηρήθηκαν σε RPMI, εμπλουτισμένα με γλουταμίνη 2 mM, , πενικιλλίνη

(100 U/mL), στρεπτομυκίνη (100 μg/mL) καθώς και με εμβρυϊκό βόειο ορό 10%

(FBS, Gibco #310108-165), σε κλίβανο κυτταροκαλλιέργειας στους 37ºC και σε 5%

CO2.

Μόλις οι καλλιέργειες κάλυψαν το 80% της επιφάνειας των τριβλιών, τα κύτταρα

επωάστηκαν με χρόνο-εξαρτηνόμενη διαδικασία με

3 . Δοκιμασίες κυτταρικού πολλαπλασιασμούΜέτρηση

3.α. Μέτρηση κυττάρων με τη μέθοδο MTT-Δοκιμασίες πολλαπλασιασμού

Η χρωματομετρική δοκιμή χρησιμοποιείται είτε για πολλαπλασιασμό ή για

δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας διάμεσου μεσολαβητή.

MTT [3 - (4,5-dimethylthiazol-2-υλο) -2,5-διφαινυλο βρωμιούχο tetrazolium] είναι

μια ουσία που διασπάται από τα ενεργό μιτοχόνδρια των κυττάρων για να παραγάγει

ένα σκούρο μπλε προϊόν formazan του οποίου η ένταση είναι ανάλογη με τον αριθμό

των ζωντανών κυττάρων παρόντες στην καλλιέργεια.

Τα κύτταρα MG-63 καλλιεργήθηκαν σε θρεπτικό RPMI με 10% FBS σε πλάκα

μικροτιτλοποίησης 6 πηγαδιών. Υποβλήθηκαν για 48 ώρες σε δοσοεξαρτώμενη

επίδραση με εκχύλισμα από σταφίδα Κορίνθου, Βόστιτσα, Μεσσηνία, Νεμέα καθώς και με

εκχυλίσματα από Σάλβια και Πιστάτσια (Φιστίκι). Με τη χρήση MTT [3-(4,5-

dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide], μετρήθηκαν τα ποσοστά

των μεταβολικά ενεργών κυττάρων στην καλλιέργεια ώστε να ποσοτικοποιηθεί η

κυτταροτοξικότητα των επιδράσεων.

3.β. Μέτρηση κυττάρων με τη μέθοδο Trypan Blue

Τα κύτταρα MG-63 καλλιεργήθηκαν με θρεπτικό RPMI με 10% FBS σε πυκνότητα 2x10

κύτταρα σε πλάκα τιτλοποίησης 6 πηγαδιών. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επίδραση 48 ωρών

με εκχυύλίισματα από σταφίδα Κορίνθου, Βόστιτσας, Μεσσηνίας και, Νεμέας σε

συγκεντρώσεις 500 και 1000 μg/ml, καθώς και με εκχυλίσματα από Σάλβια και Πιστάτσια

(Φιστίκι) σε συγκεντρώσεις 50 και 100 μg/ml, με δόσο-εξαρτηνόμενο τρόπο. Με την χρήση

της χρωστικής Trypan Blue, μετρήθηκε ο αριθμός των ζωντανών κυττάρων.

4. Κυτταρικός κύκλος

Η χρονική περίοδος μεταξύ του τέλους μιας κυτταρικής διαίρεσης μέχρι το τέλος της

επόμενης, καλείται κυτταρικός κύκλος. Ο κυτταρικός κύκλος αποτελεί το βασικό μηχανισμό

με τον οποίο αναπαράγονται όλα τα έμβια όντα και στα ευκαρυωτικά κύτταρα, περιλαμβάνει

τη διαίρεση του πυρήνα (μίτωση) και τη διαίρεση του κυτταροπλάσματος (κυτταροκίνηση).

Ο κυτταρικός κύκλος περιλαμβάνει την μεσόφαση, κατά την οποία γίνεται η σύνθεση του

DNA , του RNA και πρωτεϊνών και τη μίτωση, στην οποία γίνεται ο ακριβής διαχωρισμός

των χρωμοσωμάτων στα νέα θυγατρικά κύτταρα. Η μεσόφαση διακρίνεται στις φάσεις G1

(προσυνθετική), S (συνθετική), G2 (μετασυνθετική ή προμιτωτική) και M (μιτωτική). Ο

κύκλος ζωής σε κύτταρα θηλαστικών με ταχεία διαίρεση διαρκεί περίπου 24 ώρες. Τη

χρονική περίοδο σύνθεσης του ονόμασαν φάση S. Κατά το τέλος της φάσης S , τα κύτταρα

έχουν αντιγράψει όλο το γενετικό υλικό και έτσι έχουν διπλάσιο ποσό σε σχέση με το αρχικό

διπλοειδές κύτταρο και φυσικά δύο διπλοειδείς σειρές γενετικής πληροφορίας. Η φάση

χρησιμεύει σαν σημάδι για τον καθορισμό των άλλων φάσεων της μεσόφασης. Συνήθως, από

τη στιγμή που θα γεννηθεί το κύτταρο μέχρι να αρχίσει η αντιγραφή του περνά ένα ορισμένο

χρονικό διάστημα. Το μεσοδιάστημα αυτό ονομάζεται φάση G1. Από τη στιγμή που θα γίνει

η αντιγραφή του DNA μέχρι να αρχίσει η διαίρεση του κυττάρου περνά ένα χρονικό

διάστημα που καλείται φάση G2. Με το τέλος της G2 φάσης αρχίζει η περίοδος της

κυτταρικής διαίρεσης, γνωστή ως φάση Μ (μίτωση). Βιβλιογραφική Αναφορά ?

Η μίτωση θεωρείται το επιστέγασμα όλων των διαδικασιών που γίνονται κατά τη μεσόφαση.

Σκοπός της μίτωσης είναι ο ακριβοδίκαιος διαχωρισμός των χρωμοσωμάτων και ο

σχηματισμός των θυγατρικών κυττάρων. Το σημαντικότερο αποτέλεσμα που προκύπτει από

τη μίτωση είναι ότι τα θυγατρικά κύτταρα διατηρούν το ίδιο γενετικό υλικό με το γονικό

κύτταρο. Διακρίνεται σε πέντε φάσεις, που αναφέρονται ως πρόφαση, προμετάφαση,

μετάφαση, ανάφαση και τελόφαση Βιβλιογραφική αναφορά ?.

Ανάλυση Κυτταρικού Κύκλου

Η ανάλυση των αποτελεσμάτων του κυτταρικού κύκλου, έγινε μετά από επώαση των

κυττάρων με συγκέντρωση........εκχυλίσματα από σταφίδα Κορίνθου, Βόστιτσα, Μεσσηνίας,

Νεμέας καθώς και από εκχύλισμα συγκέντρωση........Σάλβιας και Πιστάτσια σε θρεπτικό

RPMI με 10% FBS για 24, 48 και 72 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με PBS,

fixed inμονιμοποιήθηκαν σε 50% αιθανόλη και χρωματίστηκαν με ένα διάλυμα ιωδιούχου

προπιδίου (RNAse περιεκτικότητας PI) διάλυμα. Το περιεχόμενο σε DNA περιεχόμενο

αναλύθηκε σε κυτταρομετρητή ροήςέναν (FACS Calibur) κυτταρομετρητή ροής,

χρησιμοποιώντας το λογισμικό ModFit (Verity Software House, Topshan, ME).

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΜΕΤΡΗΣΗΣ ΚΥΤΤΑΡΙΚΟΥ ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟΥ

4 Αποτελέσματα μελέτης

1) Σταφιδα – Ποικιλία NEMEA γράψε και τα υπόλοιπα έτσι μ g / mL

α)

0

50

100

150

0 50 100 150 200 250Concentration μg/mL

% C

on

tro

l

εικ 5.1.α

κανένα στατιστικά σημαντικό (*) στο διάγραμμα με ΜΤΤ ?

Με τη χρήση δοκιμαμέθοδοσιών πολλαπλασιασμού ΜΤΤ προσδιορίστηκε η αναστολή του

πολλαπλασιασμούέγινε μέτρηση των κυττάρων MG-63 έπειτα από επίδραση

εκχυλίισματοςάτων σταφίδας Νεμέας στις συγκεντρώσεις της τάξης των 7.8, 15.6, 31.3,

62.5, 125 και 250 μg/ml. Είχαμε Παρατηρήθηκε μείωση του πολλαπλασιασμού των

κυττάρων σε όλες τις συγκεντρώσεις κατά 1.5%, 9.6%, 19.4%, 18.9%, 20.7%, 32.2%,

αντίστοιχα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Όπως φαίνεται και στο διάγραμμα (εικ 5.1) η

μείωση ήταν μεγαλύτερη σε μεγαλύτερες συγκεντρώσεις του εκχυλίσματος όπως στις τάξεις

των 250 και 125 μg/ml από ότι στις μικρότερες συγκεντρώσεις των 7.8 ή 15.6 μg/ml.

β)

0

50

100

150

Control 500 1000

Concentration μg/ml

% C

on

tro

l

εικ 5.1.β

Πραγματοποιήθηκε επίσηςΈγινε ποσοτικοποίηση των κυττάρων MG-63 με την χρήση της

χρωστικής Trypan Blue, έπειτα από επίδραση εκχυλίσματος σταφίδας Νεμέας σε

συγκεντρώσεις της τάξης των 500 και 1000 μg/ml. Οι δύο επιδράσεις παρουσίασαν

προκάλεσαν μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων MG-63., Σσυγκεκριμένα είχαμε

παρατηρήθηκε μείωση ελάττωση των ζωντανών κυττάρων κατά 25% και 28% αντίστοιχα,

του κυτταρικού πληθυσμού σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς (control) (εικ 5.1.β). Τα

αποτελέσματα επιβεβαίωσαν τα αντίστοιχα από την προηγούμενη ομάδα πειραμάτων με τη

χρήση ΜΤΤ.

Μην χρησιμοποιείς πρώτο πρόσωπο δηλαδή είδαμε, μετρήσαμε κτλ αλλα τρίτο

δηλαδή βρέθηκε, παρατηρήθηκε, κτλ, οκ ?

2) KORINTHOS μ g / mL

α)

0

50

100

150

0 50 100 150 200 250Concentration μg/m

% C

on

tro

l


Διορθωσε τις μονάδες σου στο διάγραμμα και ασε πιο πολύ κενό για το concentration από

τον άξονα και πιο μικρό μέγεθος στα γράμματα να είναι ομοιόμορφο με της Νεμεας και όλα

μεταξύ τους

εικ 5.2.α

Έπειτα από επίδραση εκχυλισμάτων σταφίδας Κορίνθου σε MG-63 κύτταρα στις

συγκεντρώσεις της τάξης των 7.8, 15.6, 31.3, 62.5, 125 και 250 μg/ml έγινε η μέτρηση του

πολλαπλασιασμού τους σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς με τη χρήση της μεθόδου ΜΤΤ.

Παρατηρήθηκε δοσοεξαρτώμενη αύξηση του πολλαπλασιασμού των MG-63 κυττάρων της

τάξης 14.5%, 11,7%, 11.4%, 115.6%, 127.3%, 44.8% δεν είναι αύξηση κατά τέτοιο ποσοστό

δηλαδή στα 125 δεν αυξάνεται κατά 127.3 % αλλά κατά 27.3 % σε σχέση με κύτταρα

αναφοράς, αυτές είναι οι απόλυτες τιμές....γράψτο όπως στα προηγούμενα αποτελέσματα

αντίστοιχα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς (εικ 5.2.α).

β)

*

0

50

100

150

Control 500 1000


% C

on

tro

l

εικ 5.2.β

Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Trypan Blue μετά από χορήγηση εκχυλίσματος σταφίδας

Κορίνθου σε συγκεντρώσεις 500 και 1000 μονάδες και 48ώρη επώαση των MG-63

κυττάρων έγινε πραγματοποιηήθηκεη μέτρηση και σύγκριση του κυτταρικού

πολλαπλασιασμού τους. σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Παρατηρήθηκε δοσοεξαρτώμενη

αύξηση του πολλαπλασιασμού των MG-63 κυττάρων της τάξης των 17.8% και 35.8%

αντίστοιχα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς (εικ 5.2.1). Στο αντίστοιχο πείραμα με χρήση

τη μέθοδο ΜΤΤ δοκιμασίας όπου χορηγήθηκαν οι αυξανόμενες συγκεντρώσεις των 7.8, 15.6,

31.3, 62.5, 125, 250 μg/ml εκχυλίσματος σταφίδας Κορίνθου παρουσίασεβρέθηκαν παρόμοια

αποτελέσματα.

3) BOSTITSA μ g / mL

α)

πάλι γράψτα όπως σου έχω διορθώσει τα παραπάνω

Με τη χρήση δοκιμασιών πολλαπλασιασμού ΜΤΤ έγινε μέτρηση του πολλαπλασιασμού των

κυττάρων MG-63 και σύγκριση σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς control έπειτα από

επίδραση εκχυλίσματος σταφίδας Βόστιτσα. Στις συγκεντρώσεις της τάξης των 15.6, 31.3,

62.5, 125 και 250 μg/ml είχαμε αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε όλες τις

συγκεντρώσεις κατά 10.7, 14.4, 9.2, 12.1, 11.7 μg/ml, αντίστοιχα, σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς., ενώ στην συγκέντρωση των 7.8 μg/ml είχαμε μείωση κατά 7.3% των MG-63

κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

0

50

100

150

0 50 100 150 200 250

Concentration μg/mL

% C

on

tro

l

εικ 5.3.α


πιο μικρά γράμματα οι άξονες...ομοιόμορφα τα διαγράμματαβ)

0

50

100

150

Control 500 1000


% C

on

tro

l

εικ 5.3.β

Έγινε ποσοτικοποίηση των κυττάρων MG-63 έπειτα από επίδραση εκχυλίσματος σταφίδας

Βόστιτσα σε συγκεντρώσεις 500 και 1000 μg/ml μετά από 48ώρη επώασή τους

παρουσιάστηκε αύξηση του πολλαπλασιασμού της τάξης 26% και 19% αντίστοιχα σε σχέση

με τα κύτταρα αναφοράς (εικ 5.3.1). Τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν τα αντίστοιχα από

προηγούμενη ομάδα πειραμάτων με τη μέθοδο με ΜΤΤ., όπου είχε χορηγηθεί εκχύλισμα

σταφίδας Βόστιτσα στις συγκεντρώσεις των 7.8, 15.6, 31.3, 62.5, 125, 250 μg/ml, όπου

παρατηρήθηκε επίσης αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων MG-63.

4) MESSHNIA μ g / mL

α)

0

50

100

150

0 50 100 150 200 250

Concentration μg/mL

% C

on

tro

l


Έγινε Πραγματοποιήθηκε ποσοτικοποίηση με χρήση ΜΤΤ των κυττάρων MG-63 έπειτα από

επίδραση εκχυλίσματος σταφίδας Βόστιτσα σε συγκεντρώσεις 7.8, 15.6, 31.3, 62.5, 125 και

250 μg/ml μετά από 48ώρη επώασή τους παρουσιάστηκε μείωση του κυτταρικού

πολλαπλασιασμού κατά 10.6 %, 19.2 %, 21.6 %, 31.4 %, 35.5 %, 30.7%, αντίστοιχα σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

β)

* *

0

50

100

150

Control 500 1000


% C

on

tro

l


Μεσσηνίας σε συγκεντρώσεις 500 και 1000 μg/ml και 48ώρη επώαση των MG-63

κυττάρων έγινε η μέτρηση και σύγκριση του πολλαπλασιασμού τους σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς. Παρατηρήθηκε αύξηση του πολλαπλασιασμού των MG-63 κυττάρων της τάξης

των 22.3 %, και 24.7 % αντίστοιχα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

5) ΣΑΛΒΙΑ

α)

0

50

100

150

0 25 50 75 100 125 150Concentration μg/mL

% C

on

tro

l


το διάγραμμα να τελειώνει στο 125, οχι στο 150

Πιο μικρα γράμματα άξονες, ασε αέρα μεταξύ τίτλου άξονα και άξονα

Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ΜΤΤ μετά από χορήγηση εκχυλίσματος Σάλβια (Salvia Sclarea)

σε συγκεντρώσεις 3.9, 7.8, 15.6, 31.3, 62.5, 125 μg/ml και 48ώρη επώαση των MG-63

κυττάρων έγινε η μέτρηση και σύγκριση του πολλαπλασιασμού τους σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς (control) διόρθωσε όπως πιο πάνω. Παρατηρήθηκε μείωση του πολλαπλασιασμού

των κυττάρων κατά 5.8%, 14.3%, 23%, 38.3%, 73.1%, 92%, αντίστοιχα, σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς control.

β)

Έγινε ποσοτικοποίηση των κυττάρων MG-63 με χρήση Trypan Blue έπειτα από επίδραση

εκχυλίσματος Σάλβια (Salvia Sclarea) σε συγκεντρώσεις 50 και 100 μg/ml και μετά από

48ώρη επώαση τους. Παρατηρήθηκε μείωση του πολλαπλασιασμού των MG-63 κυττάρων

της τάξης τωνκατά 24 %, και 29,86 % αντίστοιχα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

*

0

50

100

150

Control 50 100


% C

on

tro

l

6) PISTACIA

Το διάγραμμα ΜΤΤ για πιστάσια ????


Κορίνθου σε συγκεντρώσεις 50 και 100 μg/ml και 48ώρη επώαση των MG-63 κυττάρων

έγινε η μέτρηση και σύγκριση του πολλαπλασιασμού τους σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς....άλλαξέ το όπως πιο πάνω. Παρατηρήθηκε δοσοεξαρτώμενη μείωση του

πολλαπλασιασμού των MG-63 κυττάρων της τάξης τωνκατά 9.4% και 22% αντίστοιχα σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς

*

*

0

50

100

150

Control 50 100


Co

ntr

ol

%

Αποτελέσματα Μέτρησης Κυτταρικού κύκλου

1) στα ελληνικά αυτά που παρουσιάζουμε, απόπτωση, Βοστίτσα, δείγμα, κτλ

2) τίτλοι πανω απο κάθε πινακάκι...τι μελετάς

3) σχόλια κάτω απο κάθε πινακάκι, τι βρήκες αρχικά για κάθε ουσία χωριστά σε

σχέση με κύτταρα αναφοράς για κάθε φάση του κύκλου και μετά ενα σχόλιο

συγκριτικό για τις διαφορετικές ποικιλίες

4) βγάλε τη στήλη με τη συγκέντρωση της ουσίας (με σωστές τις μονάδες σε σαλβια

και πιστασια) από τα πινακάκια, θα την γράφεις από κάτω στο κειμενό σου στη

λεζάντα του πίνακα.

24 Hours

Κυτταρικός Κύκλο στις 24 ώρες

Concentration Sample G0/G1 S G2/M Apoptosis

MG-63 CELLS CTRL 59,84 31,9 8,3 0,5

500 μg/mL BOSTITSA 49,33 38,4 12,3 0,8

500 μg/mL NEMEA 60,1 29,5 10,4 1,5

500 μg/mL KORINTHOS 50,6 36,1 13,4 1,5

500 μg/mL MESSINIA 54 34 12 1,5

Μετά τη μέτρηση της 24ώρης επίδρασης 500 μg/mL εκχυλίσματος σταφίδας

Βόστιτσα στον κυτταρικό κύκλο, παρατηρήθηκε μια μικρή μείωση του ποσοστού των

κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση G0/G1 του κύκλου, όσο και στην φάση S, σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Αντιθέτως παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού

στην φάση G2/M και ταυτόχρονα μία μικρή αύξηση στην φάση της απόπτωσης σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς (control).

Η 24ώρη επίδραση στον κυτταρικό κύκλο εκχυλίσματος από σταφίδα Νεμέας δεν

έδειξε να επηρεάζει σημαντικά τις φάσεις G0/G1 και S του κυτταρικού κύκλου,

παρατηρήθηκε μία ελάχιστη αύξηση στην G0/G1 και μείωση στην S φάσεις του

ποσοστού των κυττάρων που περιείχαν εκχύλισμα Νεμέας σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς. Ενώ στην φάση G2/M και φάση της απόπτωσης παρατηρήθηκε αύξηση

του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

Μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση G0/G1 του

κυτταρικού κύκλου παρατηρήθηκε μετά την 24ώρη επίδραση εκχυλίσματος

Κορίνθου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, ενώ στις φάσεις G2/M, S, καθώς και

στην φάση της απόπτωσης παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων.

Τέλος η μελέτη της 24ώρης επίδρασης εκχυλίσματος σταφίδας Μεσσηνίας στον

κυτταρικό κύκλο έδειξε μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην

φάση G0/G1του κυτταρικού κύκλου, αντιθέτως παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού

τους στις φάσεις G2/M και S καθώς και στην φάση της απόπτωσης σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς.


MG-63 CELLS CTRL 59,8 31,9 8,3 0,5

100 μg/m SALVIA 47,5 34,8 17,6 0,6

100 μg/m PISTASCIA 57,3 29,2 13,5 2,6

Μετά τη μέτρηση της 24ώρης επίδρασης εκχυλίσματος Σάλβιας στον κυτταρικό

κύκλο, παρατηρήθηκε μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην

φάση G0/G1 του κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Αντιθέτως

παρατηρήθηκε μία μικρή αύξηση του ποσοστού των κυττάρων στην φάση S και

μεγαλύτερη αύξηση στην φάση G2/M, ενώ δεν φάνηκε διαφορά στην φάση της

απόπτωσης καθώς η αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς ήταν ελάχιστη στην φάση της απόπτωσης.

Μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση G0/G1 και φάση S

του κυτταρικού κύκλου παρατηρήθηκε μετά την 24ώρη επίδραση εκχυλίσματος

Πιστάτσιας σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, ενώ στην φάση G2/M, καθώς και

στην φάση της απόπτωσης παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση του ποσοστού των

κυττάρων που βρίσκονταν σε αυτές τις φάσεις του κύκλους σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς.

Συγκριτικά το ποσοστό των κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση G0/G1 του

κυτταρικού κύκλου ήταν μειωμένο σε όλα τα εκχυλίσματα, με την μεγαλύτερη

μείωση στην Βόστιτσα από τις σταφίδες και στην Σάλβια σε σχέση με όλα τα

εκχυλίσματα που αναλύθηκαν, ενώ η Νεμέα είναι το μόνο εκχύλισμα στο οποίο

παρατηρήθηκε μία ελάχιστη αύξηση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονται

στην φάση G0/G1 σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Αντίθετα στην S φάση του

κυτταρικού κύκλου παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε όλα τα

εκχυλίσματα που μελετήθηκαν πλην της Πιστάτσιας και της Νεμέας όπου

παρατηρήθηκε μείωση του ποσοστού σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς και κυρίως

για την Πιστάτσια η μείωση ήταν μεγαλύτερη. Στην φάση G2/M του κυτταρικού

κύκλου καθώς και στην φάση της απόπτωσης είχαμε αύξηση του πολλαπλασιασμού

των κυττάρων σε όλα τα εκχυλίσματα με το μεγαλύτερο ποσοστό αύξησης

παρατηρήθηκε στην Σάλβια για την φάση G2/M και στην Πιστάτσια για την

περίπτωση της απόπτωσης. Επίσης αυτό που παρατηρήθηκε είναι ότι για τα

εκχυλίσματα

48 Hours


MG-63 CELLS CTRL 63,4 28,6 8,0 0,8

500 μg/mL BOSTITSA 62,5 27,9 9,5 0,6

500 μg/mL NEMEA 61,2 28,4 10,4 0,8

500 μg/mL KORINTHOS 50,2 34,5 15,3 1,9

500 μg/mL MESSINIA 61,8 28,3 10,0 1,4

Μετά τη μέτρηση της 48ώρης επίδρασης 500 μg/mL εκχυλίσματος σταφίδας

Βόστιτσα στον κυτταρικό κύκλο, παρατηρήθηκε μια μικρή μείωση του ποσοστού των

κυττάρων στην φάση G0/G1 και στην φάση S του κύκλου και ταυτόχρονα μία μικρή

μείωση στην φάση της απόπτωσης, σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Αντιθέτως

παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού στην φάση G2/M σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς (control). Η 48ώρη επίδραση του εκχυλίσματος στα κύτταρα δεν φάνηκε

να επηρεάζει σημαντικά τον κυτταρικό κύκλο σε όλες τις φάσεις του, εφόσον

παρατηρήθηκε πολύ μικρή αύξηση και μείωση του ποσοστού των κυττάρων που

επωάστηκαν με το εκχύλισμα σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, αντιθέτως στη

24ώρη επίδραση όπως είδαμε και παραπάνω είχαμε μεγαλύτερη αύξηση του

ποσοστού σε όλες τις φάσεις του κύκλου. Στη φάση της απόπτωσης μετά την 24ώρη

επίδραση του εκχυλίσματος το ποσοστό των κυττάρων ήταν ελάχιστα αυξημένο ενώ

μετά την μέτρηση της 42ώρης επίδρασης το ποσοστό ήταν ελάχιστα ελαττωμένο σε

σχέση με το ποσοστό των κυττάρων αναφοράς.

Η 48ώρη επίδραση στον κυτταρικό κύκλο εκχυλίσματος από σταφίδα Νεμέας δεν

έδειξε να επηρεάζει σημαντικά τις φάσεις G0/G1 και S του κυτταρικού κύκλου,

παρατηρήθηκε μία ελάχιστη μείωση στην G0/G1 φάση του ποσοστού των κυττάρων

που περιείχαν εκχύλισμα Νεμέας σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς ενώ στην φάση S

το ποσοστό ήταν σχεδόν αμετάβλητο σε σχέση με το ποσοστό των κυττάρων

αναφοράς. Στη φάση G2/M παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς ενώ στην απόπτωση το ποσοστό παρέμεινε

αμετάβλητο και ίσο σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, πράγμα που δεν

παρατηρήθηκε στην 24ώρη επίδραση του εκχυλίσματος Νεμέας όπου στην φάση της

απόπτωσης είχαμε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων.



Κορίνθου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, ενώ στις φάσεις G2/M, S, καθώς και

στην φάση της απόπτωσης παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων. Τα

αποτελέσματα της 48ώρης επίδρασης του εκχυλίσματος συμφωνούν σε όλες τις

φάσεις του κυτταρικού κύκλου με τα αποτελέσματα της 24ώρης επίδρασης του

εκχυλίσματος σταφίδας Κορίνθου.

Τέλος η μελέτη της 48ώρης επίδρασης εκχυλίσματος σταφίδας Μεσσηνίας στον

κυτταρικό κύκλο έδειξε μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην

φάση G0/G1του κυτταρικού κύκλου, αντιθέτως παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού

στη φάση G2/M καθώς και στην φάση της απόπτωσης σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς. Τα κύτταρα που περιείχαν εκχύλισμα Μεσσηνίας καταλάμβαναν το ίδιο

σχεδόν ποσοστό, μία ελάχιστη μείωση τους παρατηρήθηκε, σε σχέση με το ποσοστό

των κυττάρων αναφοράς στη φάση S του κυτταρικού κύκλου, ενώ στην 24ώρη

επίδραση του εκχυλίσματος παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε

σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.


MG-63 CELLS CTRL 63,4 28,6 8,0 0,8

100 μg/m SALVIA 61,2 29,0 9,8 0,6

100 μg/m PISTASCIA 52,7 34,4 12,9 1,9

Μετά τη μέτρηση της 48ώρης επίδρασης εκχυλίσματος Σάλβιας στον κυτταρικό

κύκλο, παρατηρήθηκε μία ελαχίστη μείωση του ποσοστού των κυττάρων που

βρίσκονταν στην φάση G0/G1 του κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

Αντιθέτως παρατηρήθηκε μία μικρή αύξηση του ποσοστού των κυττάρων στην φάση

S και στην φάση G2/M. Μείωση του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς παρατηρήθηκε στην φάση της απόπτωσης. Στης 48 ώρες

επίδρασης της Σάλβιας δεν φάνηκε να επηρεάστηκε σημαντικά ο κυτταρικός κύκλος

σε σχέση με τα αποτελέσματα της 24ώρης επίδρασης της Σάλβιας.



Πιστάτσιας σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς. Στην φάση S του κυτταρικού κύκλου

σε αντίθεση με τα αποτελέσματα της 24ώρης επίδραση, στις 48 ώρες επώασης του

εκχυλίσματος παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς. Στη φάση G2/M, καθώς και στην φάση της απόπτωσης μετά την

48ώρη επίδραση εκχυλίσματος Πιστάτσιας, παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση του

ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν σε αυτές τις φάσεις του κύκλου σε σχέση με

τα κύτταρα αναφοράς. το οποίο συμφωνεί και με τα αποτελέσματα της 24ωρης

επίδρασης του εκχυλίσματος.

72 Hours


MG-63 CELLS CTRL 63,2 27,7 9,1 0,8

500 μg/mL BOSTITSA 63,4 27,1 9,5 1,0

500 μg/mL NEMEA 66,4 23,7 9,9 1,5

500 μg/mL KORINTHOS 65,1 25,4 9,6 1,8

500 μg/mL MESSINIA 63,7 27,8 8,4 1,4

Η επίδραση εκχυλίσματος Βόστιτσας μετά από 72 ώρες επώασης δεν έδειξε να

επηρεάζει σημαντικά το κυτταρικό κύκλο σε όλες τις φάσεις του. Τα κύτταρα που

περιείχαν εκχύλισμα Βόστιτσας κατέλαβαν με μηδαμινή σχεδόν διαφορά τα ίδια

ποσοστά με τα κύτταρα αναφοράς σε όλες τις φάσεις του κυτταρικού κύκλου.

Συγκεκριμένα στις φάσεις G0/G1, G2/M, καθώς και στην φάση της απόπτωσης

είχαμε μια ελάχιστη αύξηση του ποσοστού, ενώ μία ελάχιστη μείωση είχαμε στην

φάση S του κυτταρικού κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

Μετά από 72 ώρες επίδρασης εκχυλίσματος σταφίδας Νεμέας, παρατηρήθηκε στην

G0/G1 φάση του κυτταρικού κύκλου μια μικρή αύξηση του ποσοστού των κυττάρων

σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, το οποίο έρχεται σε αντίθεση με τα αποτελέσματα

μετά την24ώρη και 48ώεη επίδραση εκχυλίσματος Νεμέας στον κυτταρικό κύκλου,

στα οποία παρατηρήθηκε μία μικρή αύξηση του ποσοστού. Μικρή αύξηση

παρατηρήθηκε επίσης στην G2/M φάση του κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς, αύξηση του ποσοστού όπως είδαμε παραπάνω είχαμε και μετά την 24ώρη

και την 48ώρη επίδραση εκχυλίσματος Νεμέας, με την διαφορά ότι το ποσοστό της

αύξηση για αυτές τις δύο χρονικές περιόδους επώασης των κυττάρων ήταν

μεγαλύτερη. Αύξηση του ποσοστού των κυττάρων είχαμε και στην φάση της

επώασης του κυτταρικού κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, αύξηση είχαμε

του ποσοστού στην φάση της απόπτωσης και μετά την 24ώρη επίδραση του

εκχυλίσματος Νεμέας , ενώ μετά την 48ώρη επίδραση το ποσοστό των κυττάρων

παρέμεινε αμετάβλητο σε σχέση με το ποσοστό των κυττάρων αναφοράς. Τέλος

μείωση παρατηρήθηκε του ποσοστού των κυττάρων στην S φάση του κύκλου, το

οποίο συμφωνεί με τα αποτελέσματα που είχαμε μετά την 24ώρη και 48ώρη

επίδραση του εκχυλίσματος.

Μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση S του κυτταρικού

κύκλου παρατηρήθηκε μετά της 72ώρης επίδρασης εκχυλίσματος Κορίνθου σε σχέση

με τα κύτταρα αναφοράς, ενώ στις φάσεις G0/G1, G2/M, καθώς και στην φάση της

απόπτωσης παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού των κυττάρων. Συγκρίνοντας τα

αποτελέσματα στις τρεις διαφορετικές χρονικές περιόδους επώασης παρατηρούμε,

στην 24ώρη καθώς και 48ώρη επίδραση του εκχυλίσματος είχαμε και σε αυτές

αύξηση του ποσοστού στην G2/M και στην φάση της απόπτωσης, με πιο έντονη

διαφορά του ποσοστού στην G2/M φάση του κύκλου σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς, καθώς αύξηση παρατηρήσαμε και στην S φάση σε αντίθεση μετά της 72

ώρες επίδρασης όπου παρατηρήθηκε μείωση του ποσοστού. Τέλος ενώ μετά της 72

ώρες επώασης των κυττάρων με εκχύλισμα σταφίδας Κορίνθου παρατηρήθηκε μικρή

αύξηση του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, στην 24ώρη

καθώς και 48ώρη επίδραση του εκχυλίσματος παρατηρήθηκε μεγάλη μείωση του

ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

Η 72ώρες επίδραση στον κυτταρικό κύκλο εκχυλίσματος από σταφίδα Μεσσηνίας

δεν έδειξε να επηρεάζει σημαντικά τις φάσεις G0/G1 και S του κυτταρικού κύκλου,

παρατηρήθηκε μία ελάχιστη αύξηση στην G0/G1 φάση του ποσοστού των κυττάρων

που περιείχαν εκχύλισμα Νεμέας σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς ενώ στην φάση S

το ποσοστό ήταν σχεδόν αμετάβλητο σε σχέση με το ποσοστό των κυττάρων

αναφοράς. Μείωση παρατηρήθηκε του ποσοστού των κυττάρων στην G2/M φάση

του κύκλου, ενώ αύξηση του ποσοστού παρατηρήθηκε στην φάση της απόπτωσης.

Όσο αφορά την σύγκριση των αποτελεσμάτων των ποσοστών των κυττάρων μεταξύ

της 24ώρης, 48ώρης και στης 72 ώρες επίδρασης, φαίνεται να συμφωνούνε κυρίως

στην φάση της απόπτωσης όπου και στις τρεις επιδράσεις παρατηρήθηκε αύξηση του

ποσοστού και διαφέρουν κυρίως στην G2/M φάση του κύκλου, όπου μετά της 72

ώρες επίδραση του εκχυλίσματος παρατηρήθηκε μείωση του ποσοστού των

κυττάρων, ενώ μετά την 24ώρη και 48ώρη επίδραση παρατηρήθηκε αύξηση του

ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.


MG-63 CELLS CTRL 63,2 27,7 9,1 0,8

100 μg/m SALVIA 62,5 26,0 11,5 0,8

100 μg/m PISTASCIA 59,1 25,3 15,6 5,9

Η μελέτη της επίδρασης εκχυλίσματος Σάλβιας στον κυτταρικό κύκλο μετά από της

72 ώρες επώασης των κυττάρων, έδειξε μείωση του ποσοστού των κυττάρων που

βρίσκονταν στην φάση G0/G1 και S του κυτταρικού κύκλου, αντιθέτως

παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού στη φάση G2/M, ενώ στην φάση της

απόπτωσης το ποσοστό ήταν σχεδόν αμετάβλητο σε σχέση με το ποσοστό των

κυττάρων αναφοράς. Όσο αφορά την σύγκριση των αποτελεσμάτων των ποσοστών

των κυττάρων μεταξύ της 24ώρης, 48ώρης και στης 72 ώρες επίδρασης, φαίνεται να

διαφωνούνε στην φάση S του κύκλου που ενώ στης 72 ώρες παρατηρήθηκε μείωση

του ποσοστού στις 24 και 48 ώρες επίδραση παρατηρήθηκε αύξηση του ποσοστού,

ενώ συμφωνούνε κυρίως στην G0/G1 και G2/M φάση του κύκλου, με πιο έντονη την

διαφορά του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς να

παρατηρείτε κυρίως μετά την 24ώρη επίδραση εκχυλίσματος Σάλβιας, ενώ η φάση

της απόπτωσης του κυτταρικού κύκλου δεν φάνηκε να επηρεάζεται σε καμία από τις

τρεις χρονικές περιόδους επώασης των κυττάρων με εκχύλισμα Σάλβιας όπως φάνηκε

μετά από την μέτρηση του ποσοστού των κυττάρων με Σάλβια σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς.

Μείωση του ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονταν στην φάση G0/G1 και φάση S

του κυτταρικού κύκλου παρατηρήθηκε μετά της 72 ώρες επίδρασης εκχυλίσματος

Πιστάτσιας σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς, ενώ στην φάση G2/M, καθώς και

στην φάση της απόπτωσης παρατηρήθηκε σημαντική αύξηση του ποσοστού των

κυττάρων που βρίσκονταν σε αυτές τις φάσεις του κύκλους σε σχέση με τα κύτταρα

αναφοράς. Όσο αφορά την σύγκριση των αποτελεσμάτων των ποσοστών των

κυττάρων μεταξύ της 24ώρης, 48ώρης και στης 72 ώρες επίδρασης, φαίνεται να

συμφωνούνε στην φάση G0/G1, με πιο έντονη την διαφορά του ποσοστού των

κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς μετά την 48ώρη επίδραση του

εκχυλίσματος, στην G2/M φάση του κύκλου με έντονη την διαφορά του ποσοστού

των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς και στις τρεις χρονικές περιόδους

επώασης των κυττάρων και στην φάση της απόπτωσης, με πιο έντονη την διαφορά

του ποσοστού των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς να είναι πιο έντονη

στης 72 ώρες επίδρασης του εκχυλίσματος. Τα αποτελέσματα της μέτρησης του

ποσοστού των κυττάρων που βρίσκονται στην φάση S του κύκλου σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς φαίνεται να συμφωνούνε στις 72 και 24 ώρες επώασης των

κυττάρων με εκχύλισμα Πιστάτσιας, ενώ διαφέρει μετά την 48ώρη επίδραση του

εκχυλίσματος.

Συγκρίνοντας τα αποτελέσματα και στις τρεις χρονικές περιόδους επώασης των

κυττάρων με τα διάφορα εκχυλίσματα, παρατηρήθηκε πιο έντονη διαφορά του

ποσοστού των κυττάρων που επωάστηκαν 24 ώρες με τα εκχυλίσματα σε σχέση με τα

κύτταρα αναφοράς, παρά στης 48 και 72 ώρες και κυρίως παρατηρήθηκε αύξηση του

ποσοστού των κυττάρων στις S, G2/M φάσεις και στην φάση της απόπτωσης και

μείωση στην G0/G1 φάση του κυτταρικού κύκλου Φαίνεται τα εκχυλίσματα να

καθυστερούν τα κύτταρα να μπούνε στον κυτταρικό κύκλο.

Η Σάλβια δεν φάνηκε να επηρεάζει τον κύκλο στην φάση της απόπτωσης, και πιο

έντονη επίδραση υπάρχει στις 24 ώρες παρά στις 48 και 72 ώρες επώασης των

κυττάρων.

Όσο αφορά τα εκχυλίσματα σταφίδας παρατηρήθηκε πιο έντονη διαφορά στης 24

ώρες επώασης, με εξαίρεση το εκχύλισμα Κορίνθου όπου παρατηρήθηκε στης 24

αλλά και στης 48 ώρες επώασης των κυττάρων σε σχέση με τα κύτταρα αναφοράς.

Η Πιστάτσια επηρεάζει σημαντικά τον κυτταρικό κύκλο σε όλες τις φάσεις και στις

τρεις χρονικές περιόδους κυρίως μετά της 72 ώρες επώασης των κυττάρων με το

εκχύλισμα.

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Πολλές μελέτες έχουν αξιολογήσει τις προοπτικές των φυτών ως προστατευτικοί

παράγοντες των οστών.

Documents

Kuttarikos kyklos