LA BIOTECHNOLOGIE SNC4U

AMPLIFICATION DE L’ADN

Production d’un grand échantillon d’une séquence d’ADN cible à partir d’un seul fragment d’ADN.

RÉACTION EN CHAINE DE LA POLYMÉRASE (PCR)

Amplification automatisée de l’ADN.

PCR

1. On place l’ADN à répliquer dans une solution qui contient des amorces et des nucléotides et de la polymérase thermorésistante.

2. On chauffe pour diviser le double brin d’ADN.3. Des amorces d’environ 20 nucléotides se fixent

à l’extrémité 3’ des brins d’ADN à répliquer (de chaque côté de la séquence cible).

4. La polymérase fait la réplication.5. La réplication terminée, le cycle recommence.

Durée : une minute.

Voir fig 9.13 pour prendre en note les étapes...

Pourquoi utiliser de la polymérase thermorésistante?

On ne veut pas qu’elle soit dénaturée à l’étape ou l’on chauffe ADN.

Si elle n’était pas thermorésistante, il faudrait ajouter de l’enzyme à chaque cycle.

PCR

ÉLECTROPHORÈSE EN GEL (1/3)

Sépare les molécules d’ADN en fonction de leur masse et de leur charge électrique.

ÉLECTROPHORÈSE EN GEL (2/3)

ÉLECTROPHORÈSE EN GEL (3/3)1. Mettre la solution d’ADN dans les puits à

l’extrémité du gel2. Soumettre le gel à un courant électrique

pour faire migrer l’ADN vers le pôle positif. (ADN = acide = négatif)

3. Les fragments d’ADN se séparent en bandes pour former une empreinte génétique.

EMPREINTE GÉNÉTIQUE

ANALYSE DE L’ADN

On peut amplifier un échantillon d’ADN retrouvé sur une scène de crime à l’aide du PCR

ANALYSE DE L’ADN

L’ADN amplifié est étalé sur un gel d’électrophorèse pour comparer le motif des bandes avec l’empreinte génétique des personnes suspectes.

LIEN DE PARENTÉ

La moitié de l’ADN d’un enfant provient de son père et l’autre moitié de son père.

À l’aide des empreintes génétiques, on peut déterminer les liens de filiation

SÉQUENÇAGE DE L’ADN

Déterminer la séquence des base azoté dans le brin d’ADN

SÉQUENÇAGE DE L’ADN

Didésoxynucléotides : nucléotide auquel il maque un oxygène = arrêt de l’élongation

Il existe un didésoxynucléotide pour chaque base azoté (A, T, C et G)

On ajoute des dd-A à la préparation du séquençage, cela va nous indiquer tous les endroits où il y a des ADÉNINE dans la séquence.

On fait la même chose pour dd-T, dd-C et dd-GVoir p. 298 pour schéma détaillé.

Exercice 8 p. 302

Pourquoi il y a des brins de différentes longueurs dans quand on a mis seulement une sorte de nucléotide?

Amorce TTGT Brin 3’ AACAGCTAGAGTCACTAGT5’

HENRIETTA LACKS

http://www.lefigaro.fr/sciences/2011/01/08/01008-20110108ARTFIG00001-hela-l-incroyable-destin-d-une-immortelle.php