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Lab. 3 Bacteriología
BIOL 3052
Instructora Suheidy Valentín
Bacterias
Células procariotas Son muy
pequeñas, miden desde 0.2 a 10 μm.
Reproducción asexual Fisión binaria Conjucación
Bacterial Cell Components
Árbol filogenético de los Dominios
The Phylogenetic Tree of Life based on Comparative ssrRNA Sequencing.The rooted Tree lands the prokaryotes in two Domains, Archaea and Bacteria. At a taxonomic level, organisms at the tips of the Archaeal branches represent Orders; the tips of the bacterial branches are Phyla. The most important, best known, and diverse groups branching off of the Bacterial limb are the Cyanobacteria, Proteobacteria and Gram positives.
¿Cómo se clasifican?
Forma y arreglo de las células Morfología de la colonia Tipo de locomoción Pigmentos de la colonia Tinciones Requisitos nutricionales Secuencias moleculares de DNA y
RNA
Forma de las células
Pared celular Esta hecha de
Peptidoglucano Es porosa Provee protección Dá forma Puede tener una
segunda membrana sobre la pared celular
• (provee toxicidad)
Formas y arreglos celulares
Formas Bacilos Cocos Espirilos Vibrio (forma de coma)
Cuadrados Estrellas
Arreglos Solas Pares Tétadras Octadas Cadenas Paquetes
Chromatium vinosum, Thiospirillum jenense, Thiopedia rosea
Rhodospirillum rubrum, Rhodobacter sphaeroides, Rhodomicrobium vannielii
Chlorobium limicola, Prosthecochloris aestuarii, Pelodictyon clathratiforme
Morfología de la colonia Forma
Puntiforme Circular y ovalada Filamentosa Irregular Rizoide fusiforme
Elevación Plana Elevada Convexa Pulvinada Umbonada Montañosa crateriforme
Márgen Entero Ondulado Lobulado Erosionado Filamentoso rizado
Left: Escherichia coli cells. Right: E. coli colonies on EMB Agar.
Tipo de locomoción
Estructuras proteicas: Pili
• Estructuras de anclaje
Flagelos• Uni-,bi-, o multi-
flagelado• Dispersión por el
hábitat• Migran hacia
nutrientes• Los alejan de
ambientes adversos
Tipos de movimiento
TaxisMovimiento que responde a diversos
estímulos
• Quimiotaxis• Fototaxis• Magnetotaxis
Pigmentos de la colonia Depende de las especies Depende del medio de cultivo Depende de nutrientes Muy variado
Blancas Cremas Amarillas claras y brillantes Anaranjadas Rosas claras y brillantes etc.
Fijación y tinción de células
Fijación Fijación con calor
• Fija estructuras externas de la célula.
Fijación con químicos
• Fija estructuras internas de la célula.
Tinción Aumenta
visibilidad Aumenta
características morfológicas
Conserva para estudios futuros
Varios tipos
Cont.
Tipos de tinciones: Simple
• un solo colorante• determina
tamaño, forma y arreglo
Diferencial• clasifíca bacterias
en grupos (ej. Gram +, -)
Negativa• detecta cápsula o
membrana externa
De esporas• detecta presencia
de estructuras de supervivencia
De flagelos• Aumenta grosor
del flagelo(s)
Requisitos nutricionales Nutrientes
Macroelementos• Carbono• Oxígeno• Hidrógeno• Nitrógeno• Azufre• Fósforo• Potasio• Calcio• Magnesio• Hierro
Oligoelementos• Manganeso• Cinc• Cobalto• Molibdeno• Níquel• Cobre
Medios de cultivo
Consistencia• Medios sólidos (agar)• Medios semi-sólidos• Medios líquidos
(caldos nutritivos)
Tipos• Medios selectivos
• Favorece crecimiento de una bacteria particular
• Medios diferenciales• Distingue entre
grupos• Se observan
reacciones
Secuencias moleculares
Phylogenetic tree of Bacteria
Estirilización y técnicas de asepcia
Estirilización Proceso por el cual
se elimina todo tipo de vida de medios o material.
Técnicas de asepcia Evitar contaminación Posibles patógenos
(riesgo humano) Descartar
apropiadamente
A. Investigar las carac. de las bacterias
Objetivos:Observar y describir la morfología de las colonias y de las bacterias individuales.A. Morfología de las coloniasTeoría:
Colonia crece de una bacteria Cada colonia tiene carac. Específicas Ver fig.13.1 de la separata para describir
las carac. de las colonias.
Ocasionalmente colonias de hongos pueden contaminar los platos de bacterias
Procedimiento:
1. Limpiar el área de trabajo con desinfectante
2. Se utilizara el microscopio
3. Utilizar los medios que se le van a proveer, mantenerlos CERRADOS!
4. Examinar las colonias individuales anotar la inf. en la tabla 13.1
5. Utilizando los términos de la fig.13.1 seleccionar cuales describen las colonias.
A. Investigar las carac. de las bacterias
B. Morfología de las Cél. Individuales
Objetivo:
Examinar las laminillas de bacterias que ilustran las 3 formas básicas de las bacterias en adición se examinaran y describiran las bacterias de la boca.
Teoría: Las bacterias se pueden clasificar en 3
formas básicas: bacilos, coco, espirilos Placa de los dientes
Procedimiento:
1. Utilizar el microscopio para observar las formas de las bacterias y luego dibujarlas
2. Para conocer las formas de las bacterias encontradas en los dientes, se va ha preparar una laminilla de la placa:a. Laminilla limpia
b. Coloque una gota de agua en la laminilla, dejela secar al aire
c. Utilizando un palillo de dientes raspe sus dientes cerca de las encías, luego se mezcla con la gota de agua
B. Morfología de las Cél. Individuales
d. Mezclar y tratar de esparcirlo en la laminilla dejar que sequee. cuando este seca la laminilla, aguantarla con el pinche de ropa y pasarlo por encima del mechero sin pegarlo a la flama f. colocar la laminilla en una bandeja y aplicar de 2a3 gotas de cristal violeta g. Dejarlo por un min.h.lavar con agua de las botellitas en la bandeja
Secar con papel especial no raspar.3.Observar la forma de la bacteria en el
microscopio.
C. Identificar bacterias del Ambiente
Procedimiento1.Escoger el ambiente para realizar muestreo. Puede ser
del aire, agua, superficie etc. No se debe hacer del cuerpo
a. Hacer una hipótesis del crec. De las bact. En ese ambiente
2.Utilizar platos de agar para su muestra
3.Se descartan los hisopos, identificar en el plato el ambiente seleccionado
4. Sellarlos con parafina y luego encubarlos por 24h a25°C
5. Observar los resultados
D. Control de Crecimiento BacterianoProcedimiento
1. Identificar el plato de agar con el núm. De sección, la bacteria y el agente a utilizarse.
2. Preparar el plato con la bacteria:3. Añadir el desinfectante, antiseptico al plato con
discos empapados del agente, un cuadrante es el control.
4.La siguiente semana observar la sensitividad del antibiótico y los otros agentes. Medir el diámetro de la zona de inhibición.
5. Sellarlos con parafina y luego encubarlos a 37°C 6. Anotar los resultados en una tabla.
Ejemplo
1. Control
2. Lysol
3. Alcohol
4. Clorox1 2
3 4Observar resultados (zona de inhibición)