LABORATORY OF CELLULAR THERAPY G. LANZANI Scientific ... factories and... · LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI” Scientific Director: ... vials at p1 (~2x106cells/vial)

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LABORATORY OF CELLULAR THERAPY “G. LANZANI”Scientific Director: Dr. M Introna

USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti BergamoDirector: Prof. A Rambaldi

DL 24/4/2006 n° 219 “Codice comunitario”(attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE)

Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceuticidalla produzione alla commercializzazione.

Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (celluleper terapia somatica e/o terapia genica).

Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliereVedi legge 07/07/2009 n° 88, G.U. 161 del 14/07/2009

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AIFA

Area produzione e controllo

Ufficio autorizzazioni officine

Il Laboratorio di Terapia Cellulare “G.Lanzani” è autorizzato a produrre prodotti per terapia cellulare sottoforma di

preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenterale preparate in asepsi.

Roma, 27.07.2007

N° aM-144/2007

Autorizzazione preliminare della Cell Factory da AIFA

2° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 155/2010

LUGLIO 07

FEBBRAIO 08

NOVEMBRE 08

Ispezione di follow up delle azioni correttive APRILE 07

NOVEMBRE 09 Ispezione di follow up

1° ispezione generale AIFA DECEMBRE 2005

Time

GENNAIO 2004 Laboratorio Lanzani ready to go

2° ispezione generale AIFA

Idoneità del dott. Introna come Direttore Tecnico LUGLIO 2005

1° Autorizzazione della Cell Factory n° aM 189/2008

OTTOBRE 10

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Divisione di EmatologiaOspedali Riuniti di Bergamo

Data inizio lavori: luglio 2002Data prevista fine lavori: 31 luglio 2003Inaugurazione del Centro: settembre 2003

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Costi di realizzazione del CentroLavori di ristrutturazione immobili 1.211.000 €

Allestimento Clean rooms 231.000 €

Attrezzature scientifiche e sala criobiologia

684.000 €

Arredi per laboratori e uffici 114.000 €

Professionisti 138.000 €

Hardware e software per controllo qualità

120.000 €

TOTALE 2.498.000 €

Finanziamento del CentroOfferta Uova di Pasqua 780.000 €

Offerta Stelle di Natale 540.000 €

Offerta Mele della Solidarietà 90.000 €

Altre manifestazioni 360.000 €

Offerte varie 340.000 €

Contributo CREDITO BERGAMASCO

388.000 €

TOTALE 2.498.000 €

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TC4 TC3

Sterile storeroom

Cell Therapy 1

Cor

ridor

4

Corridor 3

Lab Quality Control

Changing room E

Changing room D

Filter E

Filter D

Cha

ngin

g ro

omIN

Cha

ngin

g ro

omO

UT

Corridor 2

Corridor 1 Cell Therapy 2

Lab standard

Lab CQII

Stoccaggio prodotti

Area di produzione dei prodotti per terapia cellulare in GMP Stoccaggio

materie prime

Area di congelamento e

stoccaggio prodotti cellulari

Laboratori per i Controlli di Qualità sui prodotti di Terapia Cellulare

Stoccaggio materiali

Locali adeguati

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Code Origin of material

hMSC Frozen (x 106)

Frozen bags (mean:80x106cells/bag)

Number of frozen vials at p1

(~2x106cells/vial)

BG-MSC2 washout 95.0 1 3




Code n° vials used Frozen bags(mean 1x107cells/bags)

BG-MSC2 1 3

BG-MSC7 5 10

BG-MSC11 20 32

BG-MSC12 1 1

hMSC EXPANSIONS

…from “fresh material”

…from “frozen vials bank”

Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009Capelli C. et al, Cytotherapy, 2011

24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS

24/04/2009 Authorization by ISS

16/07/2009 Authorization by E.C. Monza

NOVEMBER 08

APRIL 09

JULY 09

Time scale of approval of Phase I clinical study with MSC in aGVHD

NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo

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MSC for the treatment of severe aGVHD

• Dossier n° Eudra CT: 2008/007869/23

• Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV aGVHD

• Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca.

• Clinical PI: Dott. E. Biagi

Authorization by ISS on 24/04/2009Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009

Pts GVHD Grading at MSC Infusion

No. of MSC

Infusion

Infused MSC (Dose/kg)

Response After MSC Infusion Follow-up

1A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade III)

1 1 x 106/kg Partial response temporary Skin and mucosae grade I

Alive with chronic skin and mucosae GVHD grade II

2A Chronic overlap syndrome (skin and mucosae grade II)

1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive with skin chronic GVHD grade I

2B Chronic mucosae and liver grade III

1 1.4 x 106/kg Partial response temporary Chronic mucosae and liver grade II

3A Acute skin grade I 1 1 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

4A Acute skin grade I 1 0.7 x 106/kg No response Skin GVHD grade I

Alive, no GVHD

4B Chronic skin and liver grade III 4 2.8 x 106/kg

Partial response temporary Skin and liver grade II

5A Acute skin grade II 1 1.2 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

5B Chronic skin GVHD grade I 1 1.2 x 106/kg No response Skin GVHD grade I

6A Chronic overlap (skin and mucosae grade III)

1 1.2 x 106/kg Complete response definitive

Alive, no GVHD

7A Acute skin grade I 2 2.4 x 106/kg Complete response definitive No GVHD

Alive, no GVHD

8A Acute (skin II and gut grade IV) 2 3.2 x 106/kg Partial response temporary Skin and gut grade II

Death for progressive gut GVHD And pulmonary aspergillosis

9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 106/kg No response Skin and gut grade IV

Death for sepsis

10A Acute gut grade IV 2 2.4 x 106/kg Partial response temporary Grade III

Alive, no GVHD

11A Acute gut grade IV 1 3.7 x 106/kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia

Lucchini G. et al, BBMC, 2010 Dander E. et al, Leukemia, 2012, Lucchini G. et al, Stem Cell Int, 2012

MSC infusions in pediatric patients

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P = 0.0021 Log RankOS at 1 year 0,54 with pentostatin and 0,00 without pentostatin

OS adult patients treated by MSC produced at Bergamo Cell Factory

0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

0 200 400 600analysis time

pentostatina = 0 pentostatina = 1

Kaplan-Meier survival estimates, by pentostatina

N = 13

N = 12

Tumor cell

Target cell

Non MHC-restricted

killing

Restricted killing +TCR

MHC I

+?

CIK cell

Biological Background of Citokine Induced Killer (CIK) cells

Introna et al, BMT, 2006; Marin et al, Exp. Hematol, 2006; Franceschetti et al, Exp Hematol, 2009; Introna et al, BBMT, 2010; Pievani et al, Blood, 2011; Pievani et al, Blood, 2011.

CIK cells show non-specific anti-tumoral activity and home to tumors without significant GVHD in several animal models.

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• Dossier n° 64499-PRE.21-848

• Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I

• Approvazione in data 30/05/2005

• Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca.

Cellule CIK da donatore per le ricadute leucemiche

Results

Clinical responseNone 6Stable Disease 1Hematologic Improvement 1Complete response 3

Alive/dead 4/7

Days of Median Follow upfrom transplant 782 (188-1327)

Introna et al, 2007

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AIFA

•Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca, con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano.

•PI clinico: Prof. A Rambaldi

Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfociti killer indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali

Protocollo CIK 2

Numero EudraCT: 2008-003185-26

Fase II autorizzata da AIFA il 14.04.09, Prot.n° AIFAII/37533/P

Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009

Toxicity

Number of patients Gradea GVHD 1 III (skin+gut)c GVHD 1 III

Hemolitic anemia 1 (maybe not correlated)

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Summary of results I

Clinical response (100 days from the last CIK administration)

Number %Total evaluable patients 21 100CR 10 48PR 4 19NR 3 14Early death 4 19

2 have not reached yet 100 days to clinical response evaluation (TE)

Dose excalation Phase

MTD not reached even at the highest dose used: 5+5+10x106/kg

So far 12/23 patients have been treated at the highest dose level

14 (67%)

0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

Cum

ulat

ive

surv

ival

0 200 400 600 800 1000days

.

CIK-2: Overall survival, n=23 (0.55)

Overall Survival

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1° stadio di vestizione (spogliatoio D)

2° stadio di vestizione (ingresso nell’area

controllata, classe C)

3° stadio di vestizione (Laboratorio di

produzione, classe B)

Tuta sterile integrale a basso rilascio di

particelle

Tuta pulita, guanti, maschera e copricapo

Camice e sovrascarpe

Vestizione degli operatori di produzione

Piastre contatto Piastre sediment.LottoPTC

Dataprelievo Operat. Punto Testato Batt Funghi

Tot. CFU/piastra Medie Batt. funghi

Tot. CFU/piastra Medie

PTC1 11.09.07 CC Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0 0 0

Sotto cappa (A) 0 0 0 0 0 0

Banco monitor (B) 1 0 1 1 0 0 0 0

Guanto dx (A) 0 0 0 0

Guanto sx(A) 0 0 0



Banco monitor (B) 0 0 0 0 0 0 0 0


Gunato sx (A) 0 0 0



Banco monitor (B) 0 0 0 0 0 0 0 0


Gunato sx (A) 0 0 0

Example of monitoring during work shifts

Limiti di CFU totali/ piastra da sedim.,contatto e per i guanti: Classe A: <1Classe B: 5

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Ambiente testato

N° totale di shifts di lavoro

analizzati

N° totale di piastre usate

N° tests risultati fuori specifica piastre FS

TC1 218 2165 6 0,28%

TC2 91 910 4 0,44%

Controlli microbiologici eseguiti durante i shift di lavoro nel 2009

• Microbiologiocal monitoring of environment and operator at each workshift (10 plates)

• Monthly microbiological monitoring of the whole production area (16 plates)

•Regular microbiological monitoring of cleaning procedures (eg floor pre- and post-cleaning) and of cleaning personel

• At least yearly reconvalidation of all rooms in controlled area

> 3500 microbiological plates used/ year

Microbiological monitoring

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Dal 2007: 165 CIK batches and 97 MSC batches : tutti sono risultati sterili vitali e con livelli di endotossina adeguati

Bergamo, 26/6/2012

• Numero e vitalità delle cellule• Caratteristiche biologiche delle cellule (marcatori di superficie,

attività biologica in vitro)• Sterilità per batteri e muffe (USC Microbiologia) • Assenza di micoplasma (ditta esterna)• Limite di endotossina

Controlli sul prodotto finale

Laboratorio di Terapia Cellulare “G. Lanzani”Responsabile: M. Introna

1. Processazione di cellule staminali

emopoieticheResponsabile: M.

Introna

Referente Qualità del Laboratorio (RQL):

J. Golay

OperatoriE. Gotti

C.CapelliO.Pedrini

2. Produzione di prodotti di Terapia Cellulare in GMPQualified person: M. Introna

Assicurazione di QualitàResponsabile: J. Golay

Operatori:C. CapelliO.PedriniA.D’amico

E.Gotti

3. Ricerca e SviluppoGroup leaders

M. IntronaJ. Golay

Personale AmministrativoE. Traini

Programma di Trapianto delle Cellule Staminali EmopoieticheDirettore: Alessandro Rambaldi

USC Ematologia

OrganigrammaCentro di Raccolta

SIMTResponsabile: Dott.essa A.

Falanga

Unità Clinica

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TC4 TC3

Sterile storeroom

Cell Therapy 1

Corridor 3

Lab Quality Control

Changing room E

Changing room D

Filter E

Filter D

Cha

ngin

g ro

omIN

Cha

ngin

g ro

omO

UT

Corridor 2

Corridor 1 Cell Therapy 2

Lab standard

Lab CQII

Stoccaggio sacche

Area di manipolazione delle cellule staminaliStoccaggio materie prime

Area di congelamento e

stoccaggio prodotti cellulari

Laboratori per i Controlli di Qualità

Stoccaggio materiali

Locali

Tutto il personale• Competenza (requisiti iniziali)

• Addestramento specifico• Formazione continua

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Formazione personale dal 2005

• Gestione degli impianti e della qualità: 4 persone • Manipolazione: 5 persone

• Corsi interni di qualità eseguiti dal 2005: 14

La formazione viene eseguita secondo piani annuali e documentata da check list / questionari ecc.

MONITORAGGIO CONTINUO DEGLI AMBIENTI E DELLE APPARECCHIATURE

Incubatori, frigoriferi, congelatori, cappe a flusso

Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di:TemperaturaCO2Efficienza di flusso

Anti-incendio

UNITA’ TRATTAMENTO ARIA

Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di:TemperaturaPressioneUmidita’Parametri meccanici UTA

SISTEMA METASYS ®JOHNSON CONTROLS

SERVER

Remotizzazione allarmi

Centralina presidiata 24h/24

Report dati

controllo accessi

Impianti e strumentazione

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Strumentazione di laboratorio:Istallazione,

Manutenzione ordinaria e

straordinaria, manuali, contratti

ecc

Qualità dell’aria

Documenti dell’impianto meccanico

Documentazione della struttura e degli impianti

1. Particellare• Eseguiti da una ditta esterna certificata • Convalida ambientale iniziale:Verifica estesa del numero di particelle in tutti i locali della zona protetta (spogliatoi, corridoi, magazzino, locali filtro, locali di manipolazione), analisi dei punti più critici

• Riconvalida semestrale dei locali

Controllo della qualità dell’aria nel locali di produzione

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Qualità dell’aria nei laboratori di produzione:Analisi delle particelle/m3

Limiti di accettabilità per le particelle(EU GMP Annex 1, rev. 2008)

Grado A: Sotto cappa dove il prodotto viene in contatto con l’ambiente (apertura fiasche) Grado C: Il laboratorio di processazione

Monitoraggio Microbiologico

•Convalida iniziale dei locali di processazione•Riconvalide mensili/ annuali•Convalida delle procedura di pulizia

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Procedure per il Programma Trapianto

1 Manuale della Qualità

1 Procedura specifica per la manipolazione delle cellule staminali

17 SOPs per la gestione della

struttura e della strumentazione

22 SOPs per la gestione dei processi

(manipolazione, congelamento e

controlli di qualità sul prodotto)

10 SOPs per la gestione della

Qualità (gestione procedure,

formazione, non conformità ecc)

+ SOP aziendali

SOPs Convalide Controlli ambientali Formazione del

personale

Autoispezioni

Eventi Avversi PulizieReclamiFogli di lavoro

Tutti gli aspetti del sistema di qualità sono documentati

Non conformità

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Attività

N° di processazioni 2007 2008 2009 2010 2011

CSE da pazienti autologhi 104 118 123 135 123

CSE allogeniche da donatore familiare 14 14 18 21 22

CSE allogeniche da donatore non familiare da sangue

periferico (MUD)18 25 16 30 17

Espianti midollo osseo 2 5 2 1 5

CSE allogeniche da cordone ombelic. 1 3 8 7 6

Linfocitoaferesi da donatore sano 7 48 47 12 7

Totali 146 213 214 206 180

Anno N°aferesi

N°positivi

% contaminazione

2007 74 1 1.4 %

2008 183 9 4.9 %

2009 169 3 1.8 %

2010 156 2 1.3 %

2011 190 2 1.1%

Totale 772 17 2.2 %

Test di sterilità eseguito su tutti i prodotti al termine della manipolazione

Bactalert eseguito dalla USC Microbiologia e Virologia

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3. Utilizzo di etichette secondo ISBT 128

Laboratorio di Terapia Cellulare“G.Lanzani”

USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo

Associazione Italiana Contro le Leucemie

Linfomi e Mielomi – ONLUSsezione PAOLO BELLI

Alessandro Rambaldi Direttore USC EmatologiaMartino Introna Qualified Person DT e RRPJosée Golay Quality Control e RRCQGianmaria Borleri Operator Production Chiara Capelli Operator Production Alice Pievani Operator ProductionElisa Gotti Operator ProductionLuca Bologna Operator Quality ControlAriel Amaru PhD, Ricerca e sviluppoElisabetta Traini Operatore di supporto gestionale

Microbiologia OORRBG Ufficio Tecnico OORRBGUfficio Qualità OORRBG

Uffici Amministrativi OORRBGUfficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie

Ricerca donatori: E. OldaniGestione software: F. Delaini

Gestione GCP: ML Ferrari

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The Cell Therapy “G. Lanzani”J. Golay RAQG. BorleriC. CapelliA. PievaniE. GottiL. BolognaA. AmaruE. TrainiM. Introna QP and Scientific Director

Hematology-BMT unitA. GrassiA. AlgarottiC. MicòE. TodiscoPI: Prof A. Rambaldi

The nurses

The clinical trial unitE. OldaniF. DelainiM. L. FerrariM. MagriA. Carobbio

Hematology BolzanoProf S. CortelazzoI. CavattoniS. Deola

Hematology MonzaProf A. BiondiE. BiagiA. BalduzziG. Gaipa

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