Laporan BakteriologiUJI MPN PADA AIR DAN BAHAN PANGAN
OlehKelompok 1Ni Wayan Windy Ferina(P07134012 001)A. A. I. N.
Gayatri A.(P07134012 011)Kadek Ayu Lestariani(P07134012 021)Ni
Komang Mira Yanti(P07134012 031)Luh De Trisna Dewi(P07134012
041)
Kementerian Kesehatan RIPoliteknik Kesehatan DenpasarJurusan
Analis Kesehatan2013BAB IPENDAHULUAN1.1. Latar BelakangMikroba
banyak terdapat di tempat dimana manusia hidup. Terdapat pada udara
yang kita hirup, pada makanan yang kita makan, juga terdapat pada
permukaan kulit, pada jari tangan, pada rambut, dalam rongga mulut,
usus dalam saluran pernapasan dan pada seluruh permukaan tubuh yang
terbuka dan dianggap sebagai flora normal. Akan tetapi, untunglah
hanya sebagian kecil dari mikroba itu yang dapat menimbulkan
penyakit (pathogen). Pada setiap cm2kulit terdapat sekitar 10.000
sampai 100.000 bakteri.Berbagai mikroba patogen seringkali
ditularkan melalui air yang tercemar sehingga menimbulkan penyakit
bawaan manusia maupun hewan. Oleh karena itu perlu dilakukan
penelitian mengenai adanya mikroba dalam suatu makanan dan minuman
agar dapat dikonsumsi manusia dengan layak sehingga tidak
menimbulkan penyakit akibat kontaminasi mikroba dalam makanan dan
minuman dan dapat memenuhi kebutuhan tubuh secara optimal.Bahan
makanan dan air yang berasal dari tempat yang berbeda-beda yang
digunakan kemungkinan mengandung bakteri patogen maka sebelum
digunakan harus diperiksa terlebih dahulu, sebab makanan dan
minuman harus bebas dari bakteri-bakteri patogen tersebut. Untuk
pemeriksaan tersebut diperlukan pengujian bakteriologis pada bahan
makanan dan air di laboratorium. Pengujian ini dapat menentukan
bahan makanan dan air yang diperiksa tersebut mengandung bakteri
patogen atau tidak. Dalam prakteknya pengujian makanan dan air
secara bakteriologis untuk menentukan ada tidaknya bakteri bentuk
coli. Uji kualitas makanan dan minuman ke dalam parameter
mikrobiologis hanya dicantumkan Colitinja dan total Coliforms.a.
Coli tinja, makanan dan minuman yang mengandung coli tinja berarti
makanantersebut tercemar tinja. Tinja dari penderita sangat
potensial menularkan penyakityang berhubungan dengan air.b. Total
Coliforms, bila makanan dan minuman yang tercemar coliformdapat
mengakibatkan penyakit-penyakit saluran pernafasan.Terdapatnya
bakteri coliform dalam makanan dan minuman dapat menjadi indikasi
kemungkinan besar adanya organisme patogen lainnya. Bakteri
coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu faecal coliform dan
non-faecal coliform. E. coli adalah bagian dari faecal coliform.
Keberadaan E. coli dalam makanan dapat menjadi indikator adanya
pencemaran air oleh tinja. Oleh karena itu, untuk mendapat gambaran
yang jelas mengenai kualitas makanan dan minuman khususnya
kandungan bakteri total coli dan Escherichia coli (fecal coli)
dalam makanan dan minuman yang telah tersedia, maka dilakukan uji
MPN (Most Probable Number) pada telur ayam dan air sumur.
1.2. Rumusan Masalah1.2.1. Apa yang dimaksud dengan metode MPN
(Most Probable Number)?1.2.2. Bagaimana teknik penanaman dan
pemeriksaan sampel air sumur dan telur ayam dengan metode
MPN?1.2.3. Apakah sampel air sumur dan telur ayam yang diperiksa
memenuhi standar nilai MPN untuk air dan bahan makanan pada tabel
511?
1.3. Tujuan1.3.1. Mahasiswa mengetahui tentang pemeriksaan MPN
pada makanan dan minuman.1.3.2. Mahasiswa mengetahui prosedur
pemeriksaan coliform dengan metode MPN pada sampel air sumur dan
telur ayam 1.3.3. Mahasiswa mengetahui kualitas sampel air sumur
dan telur ayam yang diperiksa apakah sudah memenuhi standar
kelayakan atau tidak.
1.4. Manfaat1.4.1. Manfaat TeoritisHasil penulisan laporan ini
dapat menambah wawasan dan pengetahuan penulis dalam bidang
bakteriologi serta laporan penulis dapat dijadikan pembelajaran
untukmenulis karya tulis ilmiah dengan baik yang dapat penulis
jadikan pedoman untuk penyusunan karya tulis selanjutnya.1.4.2.
Manfaat Praktis Mahasiswa mengetahui teknik pemeriksaan coliform
dengan metode MPN pada sampel air sumur dan telur ayam. Mahasiswa
mengetahui hasil pemeriksaan coliform dengan metode MPN sampel air
sumur dan telur ayam yang diperiksa. Dapat digunakan sebagai salah
satu referensi bagi kepentingan keilmuan di bidang
mikrobiologi.
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2.1.Tinjauan Air dan MakananAir merupakan materi esensial bagi
kehidupan makhluk hidup, karena makhluk hidup memerlukan air untuk
mempertahankan kelangsungan hidupnya. Secara umum fungsi air dalam
tubuh setiap mikroorganisme adalah untuk melarutkan senyawa
organik, menstabilkan suhu tubuh dan melangsungkan berbagai reaksi
kimia tingkat seluler (Campbell dkk., 2002). Pemeriksaan air secara
mikrobiologi sangat penting dilakukan karena air merupakan
substansi yang sangat penting dalam menunjang kehidupan
mikroorganisme yang meliputi pemeriksaan secara mikrobiologi baik
secara kualitatif maupun kuantitatif dapat dipakai sebagai
pengukuran derajat pencemaran (Ramona dkk., 2007).Pemeriksaan
derajat pencemaran air secara mikrobiologi umumnya ditunjukkan
dengan kehadiran bakteri indikator seperti coliform dan fecal coli
(Ramona dkk., 2007). Ciri-ciri coliform yaitu bentuk batang,
merupakan bakteri gram negatif, tidak membentuk spora, aerobik atau
anaerobik fakultatif yang memfermentasikan laktosa dengan
menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam dan suhu 350 C
(Pelczar dan Chan., 2006). Adanya bakteri coliform didalam makanan
atau minuman menunjukkan adanya mikroba yang bersifat
enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan (Dwijoseputro.,
2005).Bakteri coliform dapat dibedakan atas dua kelompok yaitu
coliform fecal misalnya Escherichia coli dan coliform nonfecal
misalnya Enterobacter aerogenes. E. Coli merupakan bakteri yang
berasal dari kotoran hewan atau manusia, sedangkan E. aerogenes
ditemukan pada hewan atau tumbuhan yang telah mati. Adanya E.coli
pada air minum menandakan air tersebut telah terkontaminasi feses
manusia dan mungkin juga mengandung patogen usus (Dwijoseputro.,
2005). Uji kualitatif coliform secara lengkap terdiri dari tiga
tahap yaitu uji dugaan (Presumtive test), uji penetapan (confirmed
test), dan uji pelengkap (completed test) (Ramona dkk., 2007.Bahan
makanan adalah salah satu kebutuhan pokok mahluk hidup karena
mengandung zat-zat yang dibutuhkan untuk tubuh. Bahan makanan dapat
disebut makanan bila makanan tersebut telah memenuhi syarat
kesehatan, sanitasi, dan nutrisi. Mikroorganisme dikenal sebagai
penyebab utama terjadinya proses pembusukan, pelendiran, dan
peracunan pada bahan makanan. Pada analisa bahan makanan segar
dibutuhkan pemeriksaan total mikroorganisme bakteri Escherechia
coli, Fecal coli dan salmonella shigela sedangkan untuk bahan
kaleng dilakukan pemeriksaan yang sama dengan pemeriksaan bahan
makanan segar ditambah dengan pemeriksaan stophylococus,
clostridium dan antibiotic.Kebanyakan bakteri suka tumbuh pada
dasar makanan tetapi bakteri pathogen memerluka zat makanan
tambanhan berupa serum atau darah yang tidak mengandung fibrinogen.
Mikroorganisme adalah jasad hidup kecil, biasanya mikroskopik,
misalnya bakteri, virus, dan cendawan.Bahan makanan, selain
merupakan sumber gizi bagi manusia, juga merupakan sumber makanan
bagi mikroorganisme. Pertumbuhan mikroorganisme dalam bahan pangan
dapat menyebabkan perubahan yang menguntungkan seperti perbaikan
bahan pangan secara gizi, daya cerna ataupun daya simpannya. Selain
itu pertumbuham mikroorganisme dalam bahan pangan juga dapat
mengakibatkan perubahan fisik atau kimia yang tidak diinginkan,
sehingga bahan pangan tersebut tidak layak dikomsumsi. Kejadian ini
biasanya terjadi pada pembusukan bahan pangan.Bahan pangan dapat
bertindak sebagai perantara atau substrat untuk pertumbuhan
mikroorganisme patogenik dan organisme lain penyebab penyakit.
Penyakit menular yang cukup berbahaya seperti tifus, kolera,
disentri, atau tbc, mudah tersebar melalui bahan makanan.
Gangguan-gangguan kesehatan, khususnya gagguan perut akibat makanan
disebabkan, antara lain oleh kebanyakan makan, alergi, kekurangan
zat gizi, keracunan langsung oleh bahan-bahan kimia, tanaman atau
hewan beracun; toksintoksin yang dihasilkan bakteri; mengkomsumsi
pangan yan mengandung parasit-parasit hewan dan mikroorganisme.
Gangguan-gangguan ini sering dikelompokkan menjadi satu karena
memiliki gejala yang hampir sama atau sering tertukar dalam
penentuan penyebabnya.Secara umum, istilahkeracuan makananyang
sering digunakan untuk menyebut gangguan yang disebabkan oleh
mikroorganisme, mencakup gangguan-gangguan yang diakibatkan
termakannya toksin yang dihasilkan organisme-organisme tertentu dan
gangguan-gangguan akibat terinfeksi organisme penghasil toksin.
Toksin-toksin dapat ditemukan secara alami pada beberapa tumbuhan
dan hewan atau suatu produk metabolit toksik yang dihasilkan suatu
metabolisme.Dengan demikian,intoksikasi panganadalah gangguan
akibat mengkonsumsi toksin dari bakteri yang telah terbentuk dalam
makanan, sedangkaninfeksi pangandisebabkan masuknya bakteri ke
dalam tubuh melalui makanan yang telah terkontaminasi dan sebagai
akibat reaksi tubuh terhadap bakteri atau hasil-hasil
metabolismenya.
2.2.Metode MPNPerhitungan jumlah mikroba dapat dilakukan dengan
perhitungan langsung maupun tidak langsung. Perhitungan secara
langsung dapat mengetahuibeberapa jumlah mikroorganisme pada suatu
bahan pada suatu saat tertentu tanpa memberikan perlakuan terlebih
dahulu, sedangkan jumlah organisme yang diketahui dari cara tidak
langsung terlebih dahulu harus memberikan perlakuan tertentu
sebelum dilakukan perhitungan. Perhitungan secara langsung, dapat
dilakukan dengan beberapa cara antara lain adalah dengan membuat
preparat dari suatu bahan (preparat sederhana diwarnai atau tidak
diwarnai) dan penggunaan ruang hitung (counting chamber). Sedangkan
perhitungan cara tidak langsung hanya untuk mengetahui jumlah
mikroorganisme pada suatu bahan yang masih hidup saja (viabel
count). Dalam pelaksanaannya, ada beberapa cara yaitu :perhitungan
pada cawan petri (total plate count/TPC), perhitungan
melaluipengenceran, perhitungan jumlah terkecil atau terdekat (MPN
methode), dan kalorimeter (cara kekeruhan atau turbidimetri)
(Dwidjoseputro, 1994).Metode perhitungan MPN memiliki prinsip kerja
dengan menggunakan larutan sebagai media pertumbuhan atau disebut
sebagai media cair (broth) yang ditempatkan dalam tabung reaksi.
Hasil perhitungannya dilakukan dengan melihat jumlah tabung yang
positif gas. Umumnya setiap pengenceran digunakan 3-5 buah tabung.
Lebih banyak tabung yang digunakan menunjukan ketelitian yang lebih
tinggi. Standar analisa air untuk mengetahui adanya bakteri
coliform ada 3 melalui tahapan uji yaitu sebagai berikut.1. Uji
Duga (Presumtive Test)Bertujuan untuk menduga adanya bakteri coli
yang mempunyai sifat mampu memfermentasikan laktosa dengan
menghasilkan gas. Bakteri coli yang diduga meliputi semua bakteri
gram negatif tdak membentuk spora, selnya membentuk sel pendek,
bersifat fakultatif anaerob, membentuk gas dalam waktu 24 jam dari
laktosa pada temperatur 37 derajat Celsius. Apabila terbentuk gas
dalam waktu 24 jam kedua (48 jam) uji dinyatakan meragukan.
Sedangkan apabila gas tidak terbentuk dalam waktu 48 jam uji
dinyatakan negatif. Apabila hasil uji duga negatif, maka uji-uji
berikutnya tidak perlu dilakukan karena dalam hal ini berarti pula
tidak ada bakteri coli dalam contoh.Untuk analisis air, dalam uji
penduga di gunakan lactose broth, sedangkan untuk contoh lainya
yang banyak mengandung bakteri asam laktat, misalnya susu, di
gunakan brilliant green lactose bile broth (BGLBB). Bakteri asam
laktat dapat memfermentasi laktosa dan membentuk gas, hingga dapat
mengakibatkan pembacaan uji positif yang salah. BGLBB merupakan
medium selektif yang mengandung asam bile sehingga dapat menghambat
bakteri gram positif termasuk Coliform. Inkubasi di lakukan pada
suhu 35oC selama 24-48 jam dan tabung di nyatakan positif bila
terebentuk gas sebanyak 10 % atau lebih dari volume di dalam tabung
Durham.tabuung yang tidak menunjukan terbentuknya gas di perpanjang
lagi inkubasinya hingga 48 jam. Jika tetap tidak terbentuk gas, di
hitung sebagai tabuung negatif. Jumlah tabuung yang positif di
hitung pad masing-masing seri. MPN penduga dapat di hitung dengan
melihat table MPN 7 tabung.2. Uji Penetapan (Comfirmed
Test)Bertujuan untuk menegaskan hasil positif dari test perkiraan
media yang secara umum digunakan adalah Brilliant Green Laktosa
Bile Bronth (BGLBB 2%) atau bisa juga menggunakan media selektif
dan diferensial untuk bakteri coli sperti misal Endo Agar (EA).
Pembacaan dilakukan dengan melihat 24-48 jam dengan melihat
tabung-tabung yang positif. Test ini merupakan test yang minimal
harus dikerjakan untuk pemeriksaan bakteriologis air. Terbentuknya
gas dalam lactose broth atau dalam BGLBB tidak selalu menunjukan
bakteri coli karena mikroba lainya mugkin juga ada yang dapat
memfermentasikan laktosa dengan membentuk gas, misalnya bakteri
asam laktat dan beberapa kahmir tertentu. Oleh karena itu perlu di
lakukan uji penguat pada agar EMB.Dengan Menggunakan jaarum ose,
contoh dari tabung MPN yang menunjukan uji penduga positif
(terbentuk gas) masing-masing di inokulasikan pada agar cawan EMB
dengan cara goresan kuadran. Semua tabung di inkubasikan pada suhu
35oC selam 24 jam. Jumlah cawan EMB pada masing-masing pengenceran
yang menunjukan adanya pertumbhan Coliform, baik fekal maupun non
fekal, dihitung, dan MPN penguat dapat di hitung dari table MPN
7.3. Uji Lengkap (Completed Test)Dari pertumbuhan koloni pada agar
cawan EMB, di pilih masing-masing satu koloni yang mewakili
Coliform fekal dan satu koloni yang mewakili Coliform non fekal.
Uji lengkap di lakukan untuk melihat apakah isolat yang di ambil
benar merupakan bakteri Coliform. Dari masing-masing koloni
tersebut di buat perwarnaan gram, dan sisanya masing-masing di
larutkan ke dalam 3 ml larutan pngencer steril. Dari suspensi
bakteri tersebut masing di inokulasikan menggunakan jarum ose ke
dalam tabung berisi lakose broth dan tabung Durham, dan di goreskan
pada agar miring nutrien agar. Tabung di inkubasikan pada suhu 35oC
selam 24 jam, dan di amati pertumbuhan dan pembentukan gas di dalam
lactose broth. Koloni yang menunjukan reaksi pewarnaan gram negatif
berbentuk batang, dan membentuk gas di dalam lactose broth
mereupakan uji lengkap adanya koloni ColiformBertujuan untuk
mendapatkan hasil yang betul-betul lengkap dan memperkuat hasil uji
sebelumnya. Biasanya dengan membuat isolasi/ piaraan murni dengan
coloni yang tumbuh pada test penetapan. Uji ulang juga dimaksudkan
untuk uji ulang apakah jasad renik yang diduga Coliform pada uji
duga memang benar. Dalam uji lengkap dapat diamati morfologi dan
fisiologi dari bakteri yang diduga coiform. Apabila semua kriteria
dipenuhi dapat ditarik kesimpulan bahwa contoh air mengandung
bakteri coliform.Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN
adalah perkiraan jumlah unit tumbuh (growth unit) atau unit
pembentuk koloni (colony forming unit) dalam sampel. Namun, pada
umumnya nilai MPN juda diartikan sebagai perkiraan jumlah individu
bakteri. Satuan yang digunakan, umumnya per 100 ml atau per gram.
Metode MPN memiliki limit kepercayaan 95 persen sehingga pada
setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN terendah dan nilai
MPN tertinggi (Lim, 1998).Menurut Plummer (1987), ada beberapa cara
yang dapat digunakan untuk menghitung atau mengukur jumlah jasad
renik di dalam suatu suspensi atau bahan, yang dapat dibedakan atas
beberapa kelompok yaitu:a. Perhitungan jumlah sel1.Hitungan
mikroskopik2. Hitungan cawan3. MPN (Most Probable Number)b.
Perhitungan massa sel secara langsung1. Volumetrik2. Gravimetrik3.
Kekeruhan (turbidimetri)
c. Perhitungan massa sel secara tidak langsung1. Analisis
komponen sel2. Analisis produk katabolisme3. Analisis konsumsi
nutrientMetode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah
mikroba di dalam contoh yang berbentuk cair, meskipun dapat pula
digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih dahulu
membuat suspensi 1:10 dari contoh tersebut. Metode MPN digunakan
medium cair di dalam tabung reaksi, dimana perhitungannya dilakukan
berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu yang ditumbuhi oleh
jasad renik setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu.
Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat dengan mengamati
timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung kecil
(tabung Durham) yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk
jasad renik pembentuk gas (Fardiaz, 1993).Ada 3 ragam yang biasanya
dipakai pada pemeriksaan MPN yaitu :1. Ragam 5 1 1-5 tabung yang
berisi LB double x 10 ml-1 tabung yang berisi LB single x 1 ml-1
tabung yang berisi LB single x 0,1 ml2.Ragam 5 5 5- 5 tabung yang
berisi LB double x 10 ml- 5 tabung yang berisi LB single x 1 ml- 5
tabung yang berisi LB single x 0,1 ml3.Tabung 3 3 3- 3 tabung yang
berisi LB double x 10 ml- 3 tabung yang berisi LB single x 1 ml- 3
tabung yang berisi LB single x 0,1 mlUntuk air sumur tergolong
dalam permengkes No 416/ Menkes/Per/IX/1990 dapat di golongan
dengan air bersih yang memiliki standar Mikro biologik Total
koliform (MPN) dalam Jumlah per 100 ml adalah 50 MPN untuk bukan
air perpipaan, dan Jumlah per 100 ml adalah 10 untuk air
perpipaan.
2.3.Coliform dan ColitinjaBakteri coliform merupakan golongan
mikroorganisme yang lazim digunakan sebagai indikator, di mana
bakteri ini dapat menjadi sinyal untuk menentukan suatu sumber air
telah terkontaminasi oleh patogen atau tidak. Berdasarkan
penelitian, bakteri Coliform ini menghasilkan zat etionin yang
dapat menyebabkan kanker. Selain itu, bakteri pembusuk ini juga
memproduksi bermacam-macam racun seperti indol dan skatol yang
dapat menimbulkan penyakit bila jumlahnya berlebih di dalam tubuh
(Pracoyo, 2006).Beberapa patogen yang telah dikenal sejak beberapa
dekade lalu adalah giardia lamblia (giardiasis), cryptosporidium
(cryptosporidiosis), hepatitis A (penyakit terkait hati), dan
helminthes (cacing parasit). Bakteri Coliform dapat digunakan
sebagai indikator karena densitasnya berbanding lurus dengan
tingkat pencemaran air. Bakteri ini dapat mendeteksi patogen pada
air seperti virus, protozoa, dan parasit. Selain itu, bakteri ini
juga memiliki daya tahan yang lebih tinggi daripada patogen serta
lebih mudah diisolasi dan ditumbuhkan (Doyle, 2006).Ciri-ciri
bakteri coliform antara lain bersifat aerob atau anaerob
fakultatif, termasuk ke dalam bakteri gram negatif, tidak membentuk
spora, dan dapat memfermentasi laktosa untuk menghasilkan asam dan
gas pada suhu 35C-37C. Contoh bakteri coliform antara lain
Escherichia coli, Salmonella spp., Citrobacter, Enterobacter,
Klebsiella, dan lain-lain (Hajna, 1943).Adanya bakteri coliform di
dalam makanan atau minuman menunjukan kemungkinan adanya
mikroorganisme yang bersifat enteropatogenik dan atau toksigenik
yang berbahaya bagi kesehatan. Bakteri coliform dapat di bedakan
menjadi dua golongan yaitu:1. Bakteri coliform golongan fekal
misalnya Escherichia coli;1. Bakteri coliform golongan non
fekal.misalnya Enterobakter aerogenes.E. coli merupakan bakteri
yang berasal dari kotoran hewan maupun manusia sedangkan E.
aerogenes Biasanya di temukan pada hewan atau tanaman-tanaman yang
telah mati (Nengsih, 2010). Coliform fekal (kadang-kadang coliform
feses atau fecl coliform) adalah bakteri fakultatif-anaerob
berbentuk batang, gram negatif, dan non-sporulasi. Coliform fekal
mampu tumbuh dan menghasilkan asam dan gas dari laktosa dalam waktu
48 jam di 44 0,5 C. Fekal Coliform, seperti bakteri lainnya,
biasanya dapat dihambat pertumbuhannya dengan air mendidih atau
dengan memperlakukan dengan klorin. Mencuci bersih dengan sabun
setelah kontak dengan air yang tercemar juga dapat membantu
mencegah infeksi. Sarung tangan harus selalu dipakai ketika
melakukan tes coliform fecal. Rekomendasi EPA dan untuk suplai air
rumah tangga, untuk pengobatan, jumlah Coliform fekal kurang dari
2000 colonies/100 ml, dan untuk Standar air minum kurang dari 1
koloni / 100 ml (Anonim1, 2010).Bakteri coliform dalam air minum
dikategorikan menjadi tiga golongan, yaitu coliform total, fecal
coliform, dan E. coli. Masing-masing memiliki tingkat risiko yang
berbeda. Coliform total kemungkinan bersumber dari lingkungan dan
tidak mungkin berasal dari pencemaran tinja. Sementara itu, fecal
coliform dan E. coli terindikasi kuat diakibatkan oleh pencemaran
tinja, keduanya memiliki risiko lebih besar menjadi patogen di
dalam air. Bakteri fecal coliform atau E. coli yang mencemari air
memiliki risiko yang langsung dapat dirasakan oleh manusia yang
mengonsumsinya. Kondisi seperti ini mengharuskan pemerintah
bertindak melalui penyuluhan kesehatan, investigasi, dan memberikan
solusi untuk mencegah penyebaran penyakit yang ditularkan melalui
air (Anonim2, 2010).Bakteri Colitinja merupakan air yang mengandung
colitinja berarti air tersebut tercemar tinja. Tinja dari penderita
sangat potensial menularkan penyakit yang berhubungan dengan
air.
BAB IIIMETODOLOGI PERCOBAAN
3.1.Waktu dan Tempat3.1.1.WaktuPratikum dilaksankan dalam empat
tahap, yaitu sebagai berikut. Tahap IProses pembuatan media Lactose
Brotth (Single Strength (SS) dan Double Strength (DS)) dan media
BGLB (Brilliant Green Lactose Broth) dilaksanakan pada Selasa, 12
November 2013. Tahap IIPreparasi sampel air dan bahan makanan
(daging ayam) yang akan diperiksa, dan inkubasi uji pedahuluan
(presumptive test) dilaksanakan pada Selasa, 19 November 2013.
Tahap IIIPemeriksaan uji pendahuluan (presumptive test) dilanjutkan
dengan penanaman biakan positif pada media BGLB untuk uji penegasan
(confirmative test) dilaksanakan pada Rabu, 20 November 2013. Tahap
IVPemeriksaan uji penegasan (confirmative test) dilanjutkan dengan
penyocokan hasil uji dengan tabel MPN, dilaksanakan pada Kamis, 21
November 2013.3.1.2. TempatPelaksanaan praktikum bakteriologi ini,
dilaksanakan di Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan
Politekik Kesehatan Denpasar.
3.2.MetodeMetode yang digunakan dalam pemeriksaan air dan bahan
pangan ini adalah Metode Most Probable Number (MPN).
3.3.Alat dan Bahan3.3.1.Bahan/Spesimen1.Sampel Air Sumur2.Sampel
Telur Ayam
3.3.2.Media/Reagensia1.Aquades steril2.Lactose Broth Single dan
Doble Strength (LBSS dan LBDS)3.Brilliant Green Lactose Bile Broth
(BGLB)
3.3.3.Alat-Alat1. Tabung reaksi & raknya2. Inkubator 3.
Botol steril4. Botol semprot5. Api Bunsen 6. Ose7. Pipet ukur 8.
Ball pipet9. Beaker gelas10. Erlenmeyer 11. Kapas berlemak12.
Kompor listrik13. Tabung durham14. Batang pengaduk15. Spatula16.
Neraca analitik17. Gelas ukur
3.4.Cara Kerja3.4.1.Uji Penduga (Presumtive Test)1. Diaseptiskan
tangan, alat, dan tempat kerja.2. Untuk sampel telur ayam yaitu
telur ayam dikocok dan dimasukkan ke dalam air pengencer (90 ml
aquadest steril). Untuk sampel air sumur tidak perlu diencerkan
lagi.3. Disiapkan lima buah tabung yang masing-masng berisi Lactose
Broth Double Strength sebanyak 10 ml (tabung 1a s/d 5a) juga
disiapkan 2 tabung yang masing-masing berisi 10 ml lactose broth
single strength (tabung 1b s/d 2b ).
4. Dengan pipet steril diinokulasi masing-masing: 10 ml sampel
kedalam tabung 1a s/d 5a. 1 ml sampel kedalam tabung 1b 0,1 ml
sampel kedalam tabung 2b5. Tabung-tabung digoyangkan perlahan agar
sampel air menyebar keseluruh bagian media kemudian diinkubasikan
pada suhu 35-37oC selama 24-48 jam.6. Setelah diinkubasi diamati
masing-masing tabung untuk melihat ada tidaknya gas dalam tabung
durham. Adanya gas menunjukkan presumtive positif.
3.4.2.Uji Penegasan (Confirmative Test)1. Uji penegasan adalah
uji lanjut terhadap tabung-tabung positif yang diduga mengadung
bakteri coliform.2. Dari tiap-tiap tabung yang presumptive
dipindahkan 1-2 ose kedalam tabung konfirmative yang berisi 10 ml
BGLB (dalam 2 seri).3. Satu seri tabung BGLB diinkubasi pada suhu
37oC untuk memastikan coliform.4. Satu seri tabung lain diinkubasi
pada suhu 44oC untuk memastikan adanya coli tinja.5. Pembacaan
(dicocokan dengan tabel MPN 511) dilakukan setelah 24-48 jam dengan
melihat jumlah tabung BGLB yang menunjukkan positif gas.
BAB IVPEMBAHASAN
4.1.Hasil Pengamatan4.1.1.Hasil Praktikuma.Uji Penduga
(Presumtive Test)Dilakukan pada suhu 37oC selamat 24
jam.NONamasampelTabungHasil
1a2a3a4a5a1b2b
1Telur Ayam -------000
2Air Sumur+++++++511
b.Uji Penegasan (Confirmative Test)1.Dilakukan pada suhu 37oC
selama 48 jam.NONamasampelTabungHasil
1a2a3a4a5a1b2b
1Air Sumur++++---400
2.Dilakukan pada suku 44 oC selamat 48
jam.NONamasampelTabungHasil
1a2a3a4a5a1b2b
1Air Sumur-------000
4.1.2.Gambar-Gambara.Pengambilan Sampel Air SumurTempat: Sumur
samping ruang IKM Analis KesehatanTanggal: 19 November 2013Waktu:
10.30 witaPetugas: Kelompok 1
GambarKeterangan
Botol sampel steril diikat bagian lehernya dengan menggunakan
tali. Kemudian dimasukkan ke dalam sumur hingga mencapai dasar.
Botol sampel difiksasi dengan api spriritus sebelum dan setelah
pengambilan sampel air.
LabelBotol sampel yang telah ditutup dan diikat serta diberi
label. Label berisi tempat pengambilan sampel, tanggal, jam
pengambilan, dan petugas pengambil.
b.Proses Pengujian Sampel Air Sumur dan Telur
AyamGambarKeterangan
(a)
(b)a) Sampel telur yang telah di tanam pada media LBDS, dan
LBSS
b) Sampel air sumur yang telah di tanam pada media LBDS, dan
LBSS
gelembungUji PendugaHasil inkubasi pada Suhu 37oC pada media
LBDS dan LBSS, selama 24 jam.
Hasil a) Air sumur : 511b) Telur ayam : 000
gelembungUji PenegasanHasil inkubasi pada Suhu 37oC dan 44 oC
pada media BGLB selama 48 jam.Suhu 37 0C Air sumur : 111 Telur Ayam
: -Suhu 44 oCAir sumur : 000Telur Ayam : -
4.2.Pembahasan4.2.1.Media LB dan BGLBMedia lactose broth
merupakan media yang diigunakan untuk mengetahui ada tidaknya
kehadiran bakteri gram negatif (koliform) berdasarkan terbentuknya
asam dan gas yang disebabkan karena fermentasi laktosa oleh bakteri
golongan coli. Terbentuknya asam dilihat dari kekeruhan pada media
laktosa broth dan gas yang dihasilkan dalam tabung durham.
Berdasakan komposisi zat penyusunnya media ini termasuk media
sintesis yaitu media yang komposisis zat penyusunnya telah
diketahui dengan pasti. Media ini diproduksi dan dibuat oleh
pabrik. Adapun komposisi media Lactosa Broth Oxoid CM 0137 adalah:
Lab lemco powder3 g/l Peptone5 g/l Lactose5 g/lMedia Lactosa Broth
berdasarkan konsistensinya termasuk media cair, yiutu media yang
berbentuk cair karena tidak terdapat kandungan agar pada media ini.
Berdasarkan fungsi media, media ini termasuk media penyubur yaitu
media yang menguntungkan mikroorganisme tertentu karena mengandung
bahan tambahan, media ini juga bertujuan untuk meningkatkan jumlah
mikroorganisme yang diduga terlalu sedikit dalam bahan sampel
sehingga akan lebih mudah utuk dihitung atau dianalisa lebih
lanjut. Pada pembuatannya LB ada yang single strength dan double
strength, yang membedakan antara single strength dan double
strength pada konsentrasi dari media LB tersebut. LBDS dibuat
dengan takaran 13 g/l sedangkan LBDS dibuat dengan konsentrasi 26
g/l. karena hal itu warna larutan pada media LBSS berwarna lebih
mua dari pada LBDS. LBSS berwarna kuning pias sedangkan LBDS
berwarna kuning pekat. Media BGLB merupakan media yang digunakan
untuk mendeteksi bakteri coliform (gram negative di dalam air,
makanan dan produk lainnya). Media BGLB secara visual berwarna
hijau tua dan memiliki konsistensi yang cair / liquid. Adapun
kandungan yang terdapat pada media BGLB ini adalah: Peptone 10 g/l
Lactose 10 g/l Ox-bile 20 g/l Brilliant green0,0133 g/lPada media
ini terdapat lactose yang akan mendukung pertumbuhan organism gram
negative seperti coliform dan pseudomonas. Lactosa Juga berfungsi
sebagai sumber karbon yang digunakan oleh semua koliform dan garam
empedu yang memiliki bakteri gram positi. Dengan pengecualian ,
coliform adalah satu-satunya organism yang akan tumbuh pada media
inidan juga akan memproduksi gelembung dari fermentasi laktosa pada
suhu 35-37oC. dan digunakan dalam tes konfirmasi untuk jumlah
koliform.
4.2.2.Pembahasan PraktikumMikroorganisme apabila tumbuh pada
bahan pangan, dapat menyebabkan berbagai perubahan pada penampakan
maupun komposisi kimia dan cita rasa bahan pangan tersebut.
Perubahan yang dapat terlihat dari luar misalnya perubahan warna,
pembentukan film atau lapisan pada permukaan seperti pada minuman
atau makanan cair atau padat, pembetukan lendir, pembentukan
endapan, bau alkohol, bau busuk dan berbagai perubahan lainnya
(Fardiaz, 1992). Begitu pula bila terdapat pada air, mikroorganisme
akan membuat air tidak dapat di konsumsi dan dapat menyebabkan
penyait. Pada praktikum kali ini dilakukan uji MPN (Most Probable
Number) dengan metode 511. Uji MPN ini merupakan salah satu cara
untuk menguji kualitas makanan dan minuman, dengan cara
memerhatikan pertumbuhan bakteri pada sampel yang diencerkan dan
diinokulasikan pada suatu media penguji. Dikatakan metode 511
karena, pada pengujian ini digunakan 5 tabung yang berisi 10 ml
media LBDS dengan penambahan 10 ml sampel, 1 tabung yang berisi 10
ml media LBSS dengan penambahan 1 ml sampel, dan 1 tabung yang
berisi 10 ml media LBSS dengan penambahan 0,1 ml sampel.Lactose
broth merupakan salah satu media yang digunakan untuk menguji
adanya coloiform pada air, makanan, dan produk susu. Media ini
adalah media tabung yang memiliki konsistensi cair dimana pada
tabung ditambahkan juga tabung durham, yang berfungsi sebagai
tempat indicator gas. media ini bersifat media pengaya karena media
ini kaya dengan adanya nutrisi tertentu seperti lactose, pepton,
dan ekstrak daging sapi. Pada praktikum kali ini terdapat 2 jenis
sampel yang diuji: sampel cair yaitu air sumur yang diproleh dari
kampus jurusan analis kesehatan dan kesehatan lingkungan poltekkes
denpasar dan sampel padat yaitu telur ayam yang di beli secara
acak. Dalam uji ini dilakukan dua tahap yaitu pertama, uji penduga
(Presumptive Test), dan yang kedua adalah uji penegasan
(Confirmative Test). Pada praktikum ini disiapkan tiga macam media
yaitu media LBSS, LBDS, dan BGLB. Selain media tersebut, terdapat
aquadest steril yang digunakan sebagai pengencer sampel.
Digunakannya aquades steril ini bertujuan untuk mencegah adanya
positif palsu yang diakibatkan oleh kontaminasi dari pengencer.
Selain aquades, alat-alat yang digunakan juga disterilisasi
terlebih dahulu dengan alasan yang sama dengan penggunaan aquades
steril.Sebelum melakukan uji penduga, sampel diencerkan terlebih
dahulu dengan aquades steril. Untuk sampel cair (air sumur), tidak
dilakukan pengenceran, sedangkan untuk sampel padat (telur ayam),
dilakukan pengenceran dengan cara sampel telur ayam di homogenkan
diambil 10 ml telur ayam lalu dilarutkan dengan 90 ml aquadest
steril. 1. Uji Penduga (Presumtive Test)Uji kualitas air dan bahan
makanan ini menggunakan sampel air sumur dan telur ayam.
Masing-masing sampel ini disiapkan sebanyak 100 ml untuk kemudian
dibuat 3 seri larutan perlakuan. Untuk larutan seri pertama, sampel
dipipet sebanyak 10 ml dan dimasukkan ke dalam 5 tabung reaksi
berisi medium LBDS 10 ml yang telah berisi tabung durham. Sedangkan
larutan seri kedua berupa 1 ml sampel yang dimasukkan ke dalam
tabung reaksi berisi medium LBSS 10 ml yang didalamnya juga
mengandung tabung durham. Larutan yang terakhir adalah larutan seri
ketiga yang dibuat dengan mencampur 0,1 ml sampel dalam 10 ml LBSS
di dalam tabung reaksi berisi tabung durham. Tabung durham
berfungsi sebagai indikator positif atau tidaknya sampel berisi
bakteri. Positif atau tidaknya dilihat dari ada atau tidaknya
gelembung pada tabung durham atau cairan media menjadi keruh atau
tidak. Ketiga seri larutan uji ini kemudian diinkubasi pada suhu
35-37oC selama 24 jam, karena suhu dan waktu tersebut meruakan suhu
dan waktu optimum bagi pertumbuhan bakteri. Setelah masa inkubasi
selesai, diamati tabung yang membentuk gelembung gas. Adanya
gelembung ini menunjukkan hasil reaksi positif sehingga dapat
diperlakukan untuk uji selanjutnya. Tabung yang belum menunjukkan
reaksi positif diinkubasi lagi selama 24 jam pada suhu 35oC selama
24 jam. Jika setelah masa inkubasi kedua ini ditemukan adanya gas,
maka dilakukan uji yang selanjutnya. Namun apabila tetap tidak
terbentuk gas, maka hasilnya dianggap negatif dan tidak perlu
dilakukan uji lanjutan. Uji postif juga ditunjukan dengan
terjadinya perubahan warna medium menjadi keruh. Bila ada sedikit
gelembung pada tabung durham bisa dikatakan bahwa hasilnya tidak
akurat dan dinyatakan negative. Sedangkan bila timbul gas/gelembung
memenuhi bagian tabung, maka dikatakan positif.2. Uji Penegasan
(Confirmative Test)Uji konfirmasi ini dilakukan untuk mengetahui
adanya bakteri dalam air sampel. Satu mililiter dari masing-masing
kultur yang menunjukkan hasil positif diinokulasikan ke dalam 2
media baru, yaitu BGLB (Brilliant Green Lactose Broth). Media ini
mempunyai kemampuan untuk membatasi pertumbuhan mikroba yang tidak
diharapkan yang dapat mengganggu pengamatan. Sebelum dilakukan
inokulasi biakan atau kultur, semua tabung yang berisi BGLB
kemudian diberi tabung durham untuk mengetahui adanya gas yang
dihasilkan oleh bakteri yang ada dalam sampel air. Kemudian media
yang telah diinokulasi dengan biakan dari media sebelumnya dibagi
kembali menjadi dua perlakuan, yaitu diinkubasi selama 24 jam pada
suhu yang berbeda (44oC dan 37oC). Hal ini dilakukan untuk
menggolongkan jenis bakteri koliform yang ada dalam air sampel
termasuk dalam golongan coli fekal atau tidak. Jika biakan dalam
inkubasi 44oC tersebut menghasilkan gas, maka dapat diartikan bahwa
bakteri koliform yang ada dalam media adalah coli fekal. Sedangkan
jika terbentuk gas pada kultur yang diinkubasi pada 37oC, maka
bakteri yang ada di dalamnya bukan termasuk golongan coli fekal.
Uji penegasan dilakukan dengan menginokulasikan satu ose biakan
dari tabung yang memberikan hasil uji positif ke media BGLB
(Brilliant Green Lactose Broth). kemudian diamati perubahan warna
yang terjadi dan gas yang terbentuk.Dari praktikkum yang dilakukan,
diperoleh hasil sebagai berikut. Pada uji penduga didapatkan hasil
yaitu untuk air sumur terbentuk gelembung gas pada semua media
(LBDS dan LBSS), pada lima tabung LBDS yang berisi 10 ml sampel
terbentuk gelembung gas, dan pada dua tabung LBSS yang berisi 1ml
dan 0,1 ml sampel juga terbentuk gelembung gas, yang dapat
dikatakan gelembung udaranya lumayan besar, sehingga dapat
disimpulkan hasil untuk susu kedelai uji penduga adalah 511.
Sedangkan untuk sampel telur ayam tidak terbentuk gelembung gas
baik pada media LBDS dan LBSS. Sehingga hasil yang diperoleh untuk
telur ayam adalah negative (000). Kemudian hasil dari uji penegasan
(Confirmative Test), untuk sampel telur ayam tidak dilakukan karena
dari hasil uji penduga didapatkan hasil yang negatif. Sedangkan
untuk air sumur yang didapatkan dari uji penduga yang sebelumnya
511 setelah uji penegasan didapatkan 111 untuk suhu 370 C,
sedamgkan pada suhu 44 0 C uji menghasilkan nilai negatif. Setelah
dicocokkan dengan tabel MPN diperoleh index MPN/100ml sebagai
berikut: Telur Ayam:negatif Air Sumur (suhu 37oC, 4 0 0):6,7
MPN/100 ml Air Sumur (suhu44oC):negatifUntuk air sumur tergolong
dalam Permenkes No 416/ Menkes/Per/IX/1990 dapat di golongan dengan
air bersih yang memiliki standar Mikro Biologik Total Koliform
(MPN) dalam Jumlah per 100 ml adalah 50 MPN untuk bukan air
perpipaan, dan Jumlah per 100 ml adalah 10 MPN untuk air perpipaan.
Dan air sumur ini dapat dikatakan dari golongan bukan air
perpipaan, dengan hasil uji yang diperoleh, dapat dikatakan air
sumur masih memenuhi standar yang ada.
BAB VPENUTUP
5.1.Kesimpulan1.Metode MPN merupakan suatu uji kualitas
mikrobiologi yang dapat digunakan untuk mengetahui apakah suatu
bahan (air maupun makanan) tergolong bersih/tidak melalui
pengamatan terhadap ada/tidaknya bakteri Coliform (indikator
pencemar).2.Metode MPN yang dilakukan pada pemeriksaan kali ini
melalui 2 tahapan, yaitu Uji Penduga (Presumtive Test) dengan
menggunakan media pertumbuhan LB dan Uji Penegasan (Confirmative
Test) dengan menggunakan media pertumbuhan BGLB. Dimana pada uji
penduga, diketahui ada/tidaknya bakteri Coliform pada sampel dan
apabila ada, dikonfirmasi/dipastikan keberadaannya pada uji
penegasan.3.Dari hasil pemeriksaan yang dilakukan, didapat hasil
sebagai berikut. Telur Ayam:negatif Air Sumur (suhu 37oC):6,7
MPN/100 ml Air Sumur (suhu44oC):negatifDari hasil yang didapatkan,
dapat disimpulkan bahwa air sumur tergolong bukan air perpipaan dan
sampel air sumur tersebut masih memenuhi standar yang telah
ditetapkan pada Permenkes No 416/ Menkes/Per/IX/1990.5.2.SaranPada
pemeriksaan MPN, sebaiknya diperhatikan kesterilan alat yang
digunakan agar tidak didapatkan hasil positif palsu maupun
kesulitan dalam mengamati karena adanya kontaminasi dari alat-alat
yang tidak steril. Selain itu, penggunaan APD (Alat Pelindung Diri)
juga harus diperhatikan mengingat pemeriksaan ini berhubungan
dengan bakteri yang dapat menyebabkan penyakit.
DAFTAR PUSTAKA
Black, J.G. 1999. Microbiology Principles and Exploration 4th
Edition. Prentice-Hall Inc, New Jersey.Campbell, N.A., J.B. Reece,
L.G. Mitchell. 2002. Biologi Jilid 2 Edisi Kelima. Erlangga,
Jakarta.Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi Cetakan
ke-13. Percetakan Imagraph, Jakarta.Fardiaz, S. 1993. Mikrobiologi
Pangan 1. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.Fardiaz, S., 1996,
Analisis Mikrobiologi Pangan, PT. Radja Grafindo Persada,
Jakarta.Lim, D. 1998. Microbiology 2nd Edition. McGraw Hill, United
States of America.Pelczar, M.J. dan E.C.S. Chan. 2006. Dasar-Dasar
Mikrobiologi. UI Press, Jakarta.Permenkes No 416/
Menkes/Per/IX/1990.Ramona, Y., R. Kawuri, I.B.G. Darmayasa. 2007.
Penuntun Praktikum Mikrobiologi Umum untuk Program Studi Farmasi
FMIPA UNUD. Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Biologi Fakultas MIPA
Universitas Udayana, Bukit Jimbaran.
LEMBAR PENGESAHAN
Denpasar, 26 November 2013Praktikan,
a.n. Kelompok 1A.A.I.N. Gayatri A.
Mengetahui,
Pembimbing IPembimbing II
Nyoman Mastra, S.KM., S.Pd., M.Si.I Nyoman Jirna, S.KM.,
M.Si.
Pembimbing IIIPembimbing IV
Luh Ade Wilan Krisna, S.Si., M.Ked.Kadek Aryadi H., A.Md.,
AK.
