FERMENTASI ETANOL SECARA KONTINYU DARI BUAH NANAS MENGGUNAKAN
SEL IMMOBIL DALAM BIOREAKTOR UNGGUN DIAM
Continuous Ethanol Fermentation from Pineapple using Immobilized
Cells in Packed Bed Bioreactor
Laporan ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat
menyelesaikan pendidikan DIPLOMA III PROGRAM STUDI TEKNIK
KIMIAJURUSAN TEKNIK KIMIA
OlehAbdul Rozak Kodarif 121411001Opik Taufik Rahayu
121411022
POLITEKNIK NEGERI BANDUNG2015
26
LEMBAR PENGESAHAN
FERMENTASI ETANOL SECARA KONTINYU DARI BUAH NANAS MENGGUNAKAN
SEL IMMOBIL DALAM BIOREAKTOR UNGGUN DIAM
Penulis :1. Abdul Rozak Kodarif 1214110012. Opik Taufik Rahayu
121411022
Penguji :1. Ketua:2. Anggota:3. Anggota:Tugas Akhir ini telah
disidangkan pada tanggal ..dan disahkan sesuai ketentuan yang
berlaku
Ketua Jurusan Teknik Kimia
Iwan Ridwan., ST., MTNIP. 19770714 200604 1 001Pembimbing
Ir. Unung Leoanggraini., MTNIP. 19671215 199403 2 002
PERNYATAAN TERTULIS
Kami yang bertandatangan di bawah ini menyatakan bahwa laporan
tugas akhir ini adalah murni hasil pekerjaan sendiri. Tidak ada
pekerjaan orang lain yang digunakan tanpa menyebutkan
sumbernya.
Materi dalam Laporan Tugas Akhir ini tidak/belum pernah
disajikan/digunakan sebagai bahan untuk makalah/Tugas Akhir
lain.
Kami memahami bahwa Laporan Tugas Akhir yang dikumpulkan ini
dapat diperbanyak dan atau dikomunikasikan untuk tujuan mendeteksi
adanya plagiatisme.
Judul Tugas Akhir:Fermentasi Etanol Secara Kontinyu Dari Buah
Nanas Menggunakan Sel Immobil Dalam Bioreaktor Unggun Diam
Bandung, Juni 2015
Yang menyatakan,
Abdul Rozak KodarifOpik Taufik Rahayu
NIM: 121411001NIM: 121411022
Mengetahui,
Pembimbing
Ir. Unung Leoanggraini., MT
NIP. 19671215 199403 2 002
MOTTO
ABSTRAKSI
Pengembangan bahan bakar alternatif yang murah dan ramah
lingkungan merupakan solusi terbaik untuk menghemat bahan bakar
fosil, salah satunya adalah etanol atau bioetanol. Penelitian ini
bertujuan untuk menentukan pengaruh rasio campuran filtrat nanas
terhadap sukrosa dan waktu tingggal optimum dari proses fermentasi
kontinyu terhadap bioethanol yang dihasilkan. Pada proses produksi
bioetanol ini menggunakan bahan baku yang berasal dari filtrat
nanas serta mikroorganisme yang digunakan adalah saccharomyces
cerevisae. Untuk mendapatkan yield bioethanol yang tinggi akan
dilakukan percobaan secara fermentasi kontinyu dalam bioreaktor
packed-bed. Metode penelitian dilakukan dengan memvariasikan rasio
campuran filtrat nanas terhadap sukrosa dan waktu tinggal. Variasi
rasio campuran filtrat nanas terhadap sukrosa memiliki perbandingan
antara volume filtrat nanas dan gula masing masing adalah 0 ml :
500 ml untuk substrat 1 (S1); 500 ml : 0 ml untuk substrat 2 (S2);
250 ml : 250 ml untuk substrat 3 (S3). Untuk variasi waktu tinggal
yang digunakan adalah 20, 25, dan 28 jam. Parameter uji yang
digunakan pada penelitian ini adalah kadar gula tereduksi dan
bioethanol. Dalam penelitian ini hasil percobaan pada S2 dan waktu
tinggal 20 jam merupakan kondisi yang optimum dimana menghasilkan
yield dan kadar yang maksimal masing masing sebesar 94,61 % dan 7%
(v/v).
Kata kunci : bioethanol, buah nanas, substrat, waktu tinggal,
kadar etanol, kadar gula reduksi, kondisi optimum
ABSTRACT
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas
rahmat serta karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan laporan Tugas Akhir dengan judul Fermentasi Etanol
Secara Kontinyu Dari Buah Nanas Menggunakan Sel Immobil Dalam
Bioreaktor Unggun Diam dengan tepat waktu. Pada Kesempatan ini
penulis menyampaikan rasa terima kasih atas segala petunjuk,
bimbingan serta dukungannya kepada :1. Ir. Unung Leoanggraini, MT.,
selaku pembimbing yang telah memberikan waktunya untuk membimbing
penulis selama melakukan kerja praktik hingga penyelesaian
laporan.2. Iwan Ridwan, ST., MT., selaku Ketua Jurusan Teknik Kimia
Politeknik Negeri Bandung.3. Rispiandi, ST.MT, selaku Ketua Program
Studi D-III Teknik Kimia Politeknik Negeri Bandung.4. Ir. Rintis
Manfaati, MT., selaku koordinator Tugas Akhir.5. Kedua orang tua
penulis yang telah memberikan dorongan moril serta materi.6. Semua
pihak yang telah membantu dalam pelaksanaan dan penyusunan laporan
Tugas Akhir ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per
satu.Penulis menyadari bahwa penyusunan laporan ini masih banyak
kekurangan, oleh karena itu penulis mengharapkan saran demi
perkembangan positif bagi penulis. Semoga laporan kerja praktik ini
dapat bermanfaat.
Bandung, Juli 2015
Penulis
DAFTAR ISI
LEMBAR PENGESAHANiPERNYATAAN
TERTULISiiMOTTOiiiABSTRAKSIivABSTRACTvKATA PENGANTARviDAFTAR
ISIviiDAFTAR TABEL38DAFTAR GAMBAR39DAFTAR LAMPIRAN40DAFTAR SIMBOL
DAN SINGKATAN41BAB I PENDAHULUAN421.1Latar Belakang421.2Rumusan
Masalah431.3Tujuan Penelitian431.4Ruang Lingkup dan Batasan
Masalah441.5Sistematika Penulisan44BAB II TINJAUAN
PUSTAKA462.1Bioetanol462.2Nanas472.3Mikroorganisme Fermentasi
Etanol482.3.1Saccharomyces cerevisiae (S.
cerevisiae)482.3.2Kinetika pertumbuhan mikroba502.4Fermentasi
Etanol522.4.1Immobilisasi Sel532.4.2Media Fermentasi552.4.3Faktor
Fisik562.4.4Moda Operasi Fermentasi Etanol572.5Pembentukan Produk
Fermentasi58BAB III METODA DAN PROSES PENYELESAIAN603.1Alat dan
Bahan603.2Tahapan Pelaksanaan Penelitian633.2.1Tahap Persiapan
Bahan dan Alat643.2.2Tahap Percobaan Awal683.2.3Tahap Fermentasi
Kontinyu693.2.4Tahap Analisis Hasil703.2.5Tahap Pengolahan
Data70BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN724.1Proses Fermentasi
Batch724.2Proses Fermentasi Kontinyu724.2.1Pengaruh Variasi Rasio
Campuran Substrat Terhadap Bioethanol Yang
Dihasilkan734.2.2Pengaruh Variasi Waktu Tinggal Terhadap Bioethanol
Yang Dihasilkan74BAB V KESIMPULAN DAN
SARAN755.1Kesimpulan755.2Saran75DAFTAR PUSTAKA76LAMPIRAN79
DAFTAR TABEL
DAFTAR GAMBAR
DAFTAR LAMPIRAN
DAFTAR SIMBOL DAN SINGKATAN
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar BelakangKonsumsi Bahan Bakar Minyak (BBM) di Indonesia
pada tahun 2012 sebesar 44,78 juta kiloliter dan mengalami kenaikan
sebesar 1,56 juta kiloliter pada 2013 (Gideon A, 2014). Seiring
dengan peningkatan konsumsi BBM dan berkurangnya cadangan miyak
bumi di Indonesia maka perlu dikembangkan sumber energi alternatif.
Hal ini sejalan dengan Peraturan Presiden No. 5 tahun 2006 tentang
kebijakan energi nasional untuk mengembangkan sumber energi
alternatif sebagai bahan bakar pengganti minyak dan INPRES No. 1
Tahun 2006 tentang penyediaan dan pemanfaatan bahan bakar nabati
(biofuel) sebagai bahan bakar lain. (ESDM, 2006) Bioetanol
merupakan bahan bakar nabati yang potensial untuk dikembangkan
melalui proses fermentasi.Proses fermentasi etanol pada dasarnya
mengubah glukosa menjadi etanol dengan memanfaatkan
mikoroorganisme. Bahan baku yang dapat digunakan untuk fermentasi
etanol berasal dari bahan yang mengandung pati, gula dan serat
selulosa. Ketersediaan bahan baku untuk fermetasi etanol di
Indonesia sangat melimpah. Salah satu bahan yang potensial untuk
dikembangkan mejadi etanol adalah buah nanas, buah tersebut
memiliki kandungan gula sebesar 10 %. (Dalimartha & Adrian,
2013). Nanas merupakan komoditas unggulan di Jawa Barat dengan
produksi mencapai 117.363 ton pada tahun 2013. (BPS, 2013)Proses
fermentasi etanol secara konvensional dilakukan melalui proses
batch. Proses fermentasi batch memiliki kemudahan dalam
pengendalian proses fermentasi dan kontaminasi mikroorganisme.
Kelemahan proses ini adalah nilai konsentrasi etanol yang
dihasilkan rendah hal ini diakibatkan karena adanya akumulasi
produk yang dihasilkan dapat meracuni mikroorganisme. Akumulasi
produk tersebut dapat menurunkan secara perlahan lahan dan bahkan
menghentikan pertumbuhan serta aktivitas metabolisme
mikroorganisme. (Darmawan & Widjaja, 2008). Upaya untuk
mengatasi hal ini adalah dengan melakukan fermentasi etanol secara
kontinyu, sehingga tidak terjadi akumulasi produk selama proses
berlangsung.Penelitian terdahulu yang telah dilakukan oleh Darmawan
dan Widjaja (2008), pada proses fermentasi etanol secara kontinyu
menggunakan substrat molase dengan sel immobilisasi zymomonas
mobilis dalam bioreaktor packed-bed menghasilkan konsentrasi, yield
serta produktivitas etanol berturut turut adalah 52,074 g/L, 50,14
%, 12,876 g/L.jam, sedangkan pada proses batch dengan menggunakan
substrat dan sel yang sama menghasilkan konsentrasi, yield serta
produktivitas etanol berturut turut adalah 7.39 g/l, 23%, 0.205
g/L.jam. Penelitian terkait pengaruh konsentrasi substrat dan
Ca-Alginat untuk immobilisasi sel dilakukan oleh AS, Widjaja, dan
Altway (2009) mendapatkan hasil terbaik pada konsentrasi substrat
molase sebesar 18 % dan konsentrasi Ca- alginat sebesar 2 % dengan
konsentrasi bioethanol yang diperoleh sebesar 8,54 % v/v.
Penelitian yang dilakukan oleh Escobar dkk (2012) menggunakan sel
immobil Sacharomyces Cerevisae menghasilkan produktivitas etanol
optimum dari batang bagas dan tongkol jagung sebesar 13,00 g/L.jam
dan 10,66 g/L.jam
1.2 Rumusan MasalahPenelitaian tentang proses fermentasi etanol
secara kontinyu telah dilakukan oleh para peneliti sebelumnya.
Proses fermentasi etanol secara kontinyu menghasilkan yield yang
lebih tinggi dibandingkan proses batch. Pemakaian sel ammobil dalam
bioreactor packed-bed akan lebih memudahkan perlakuan proses hilir
dalam pemisahan produk dan pemakaian biomassa sel sebagai katalis
biologik.Dalam penelitian ini akan dikaji pemanfaatan buah nanas
sebagai substrat untuk proses fermentasi etanol, pengaruh rasio
filtrat nanas terhadap larutan sukrosa optimum untuk menghasilkan
konsentrasi etanol dan yield yang paling tinggi. Salain itu dikaji
pula pengaruh waktu tinggal dalam proses fermentasi kontinyu dalam
bioreactor packed-bed terhadap konsentrasi dan yield bioethanol
yang dihasilkan.
1.3 Tujuan PenelitianTujuan penelitian ini adalah :a. Menentukan
waktu reaksi optimum fermentasi etanol pada proses batch.b.
Menentukan pengaruh rasio campuran filtrat nanas dan sukrosa pada
proses fermentasi kontinyu terhadap bioethanol yang dihasilkan. c.
Menentukan waktu tinggal optimum proses fermentasi kontinyu
terhadap bioethanol yang dihasilkan.
1.4 Ruang Lingkup dan Batasan MasalahRuang lingkup dan batasan
masalah dalam peneltian ini meliputi :a. Pelaksanaan proses
fermentasi dilakukan secara batch dan kontinyu dalam skala
laboratorium. Mikroorganisme yang digunakan Saccharomyces Cervisae
yang diperoleh dari laboratorium Bioproses Politeknik Negeri
Bandung. Proses immobilisasi menggunakan larutan Ca-Alginat 2%.b.
Substrat yang digunakan pada proses fermentasi batch adalah sukrosa
sedangkan untuk proses fermentasi kontinyu menggunakan campuran
filtrat nanas dan sukrosa. Konsentrasi sukrosa yang digunakan
sebesar 10 %.c. Nanas yang digunakan didapat dari pedagang nanas
Cibaduyut, Bandung.d. Variabel yang divariasikan adalah rasio
campuran subsrat dan waktu tinggal. e. Waktu tinggal yang digunakan
pada variasi rasio campuran substrat merupakan waktu reaksi optimum
pada proses fermentasi batch. Nilai rasio substrat optimum ini
selanjutnya digunakan untuk percobaan variasi waktu tinggal.f.
Metode analisa yang digunakan ialah analisa gula tereduksi
dilakukan dengan metode spektrofotometri menggunakan reagen DNS dan
analisa kadar etanol dilakukan dengan metode refraktometri
1.5 Sistematika PenulisanSistematika penulisan laporan tugas
akhir ini adalah sebagai berikut :BAB I PENDAHULUANBab ini meliputi
latar belakang, rumusan masalah, tujuan penelitian, ruang lingkup
dan batasan serta sistematika penelitian.BAB II TINJAUAN PUSTAKABab
ini mengkaji tinjauan pustaka yang berkaitan dengan teori yang
berhubungan dengan penelitian ini serta menjadi acuan dalam
pelaksanaan penelitianBAB III METODA DAN PENYELESAIAN MASALAHBab
ini menguraikan metode yang digunakan untuk memperoleh, mengolah,
dan menganalisis data penelitian.BAB IV HASIL DAN PEMBAHASANBab ini
meliputi hasil penelitian serta pembahasan dari data yang diperoleh
selama penelitian berlangsung.BAB V KESIMPULAN DAN SARANBab ini
berisi mengenai pengambilan kesimpulan yang didasarkan pada hasil
dan pembahasan yang telah dilakukan serta saran saran yang dapat
diberikan untuk perbaikan pada penelitian ini.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 BioetanolBioetanol merupakan etanol yang dihasilkan dari
proses fermentasi. Bioetanol menjadi salah satu energi alternatif
yang sudah banyak berkembang. Pemanfaatan bioethanol sebagai bahan
bakar harus memenuhi standar kemurniansebesar 99,5 % (BSN, 2008)
Sifat sifat fisik dan kimia etanol ditunjukankan pada Tabel
II.1
Tabel II.1 Sifat Fisik dan Kimia EtanolParamaterNilai
Bentuk fisikWarnaVapor PressureVapor DensityViscosityBoiling
PointMelting PointSolubilitySpecific GravityMolecular
WeightMolecular FormulaLiquidBening (tak berwarna)59,3 mm Hg @
20oC1,591.200 cP @ 20oC78oC-114oCTerlarut0,79 @
20oC46,0414C2H5OH
(sumber : Vee Gee Scientific, Inc, 2004)
Produksi bioetanol pertama kali (First Generation Biofuels)
dibuat dari tanaman yang menghasilkan pati seperti jagung dan
gandum, selain itu juga berasal dari tanaman yang menghasilkan gula
seperti tebu. (Restmac, 2006) Perkembangan produksi bioetanol
ditunjukan dengan munculnya Second Generation of Biofuels. Pada era
ini bahan baku yang digunakan dapat berupa lignoselulosa seperti
semua biomassa yang mengandung kayu serta limbah residu dari
kehutanan.Bioethanol merupakan bahan bakar yang bersih dan ramah
lingkungan karena emisi gas karbon monoksida yang dihasilkan lebih
rendah 19-25 % dibanding BBM. Selain itu angka oktan etanol
mencapai 129, nilai oktan tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan
bilangan oktan bbm pertamax yaitu 92. Sehingga, proses pembakaran
etanol menghasilkan emisi gas buang yang lebih stabil. (Kementrian
Riset dan Teknologi Republik Indonesia, 2012)
2.2 NanasBuah nanas atau Ananas comosus merupakan buah berduri
yang dapat tumbuh didaerah tropik dan subtropik. Tanaman nanas
merupakan famili dari bromiliaceae dan ordo farinosae. Berdasarkan
habitus tanaman, dikenal 4 jenis golongan nanas, 4 golongan
tersebut ditunjukkan oleh Tabel II.5.
Tabel II.5 Golongan NanasNamaBentuk DaunBentuk DuriBentuk
Buah
CayeneHalusTidak berduriBesar
QueenPendekTajamLonjong mirip kerucut
SpanishPanjang dan kecilHalus dan kasarBulat dan mata datar
AbacaxiPanjangKasarPiramida
(sumber : BPPIPT, 2000)Negara Indonesia merupakan salah satu
negara penghasil buah nanas. buah nanas yang dibudidayakan di
Indonesia merupakan golongan Cayene dan Queen. Pembudidayaan nanas
di Indonesia berpusat di daerah Sumatra Utara, Riau, Sumatra
Selatan, Jawa Barat dan Jawa Timur. Nanas Jawa Barat merupakan
salah satu produk unggulan yang memiliki produktivitas mencapai
117.363 ton pada tahun 2013. (BPS, 2013) Tanaman nanas memiliki
berbagai macam manfaat. Bagian utama yang bernilai pada tanaman
nanas adalah buahnya. Buah nanas selain dikonsumsi segar juga
diolah menjadi selai dan sirup. Selain itu, buah nanas diketahui
banyak mengandung gula, sehingga bisa digunakan sebagai bahan baku
dalam pembuatan bioetanol. Kandungan buah nanas dapat dilihat pada
Tabel2.5
TabelII.5 Kandungan Buah NanasKandunganJumlah (%)
KarbohidratSeratKalsiumManganKaliumMagnesiumFosforVitamin
AVitamin CVitamin B6ThiaminGulaKadar
air12,81,30,010,0010.10,020,010,0030,020,00010,00011087
(Sumber: Dalimartha & Adrian, 2013)
2.3 Mikroorganisme Fermentasi EtanolMikroorganisme penghasil
etanol dapat dibedakan menjadi dua jenis, yaitu bakteri dan ragi.
Mikroorganisme tersebut mengandung enzim zymase dan invertase
sehingga dapat mengurai glukosa menjadi etanol. Laju pertumbuhan
ragi lebih rendah dibandingkan dengan bakteri sehingga proses
fermentasi akan berlangsung lambat, namun ragi dapat menghasilkan
yield etanol yang lebih tinggi karena sifatnya yang lebih toleran
terhadap lingkungan (Juwita, 2012)Bakteri tergolong kedalam
struktur sel prokariota yang tidak memiliki selaput inti.
Berdasarkan bentuknya, bakteri dibagi menjadi tiga yaitu berbentuk
bulat (Coccus), silinder (Bacillus), lengkung (Spirilum). Bakteri
berkembang biak dengan cara membelah diri. Dalam suhu 22 35 oC,
bakteri dapat membelah diri dari satu menjadi 8 juta dalam waktu 20
menit. Jenis bakteri penghasil etanol diantaranya zymomonas mobilis
dan zymobacter palmae (Ipak & dkk, 2012). Zymomonas mobilis
merupakan jenis bakteri yang sering digunakan. Zymomonas mobilis
dapat mengkonversi etanol dari gula seperti glukosa, fruktosa dan
sukrosa. Selain gula sebagai sumber karbon, dibutuhkan juga sumber
nitrogen sebagai nutrisi. Sumber nitrogen yang sering digunakan
untuk zymomonas mobilis adalah (NH4)2SO4 dan CH4N2O (kampen,
2000).Ragi tergolong kedalam struktur sel eukariota yang memiliki
selaput inti yang berfungsi untuk membungkus materi genetiknya.
Ragi berkembang biak dengan suatu proses yang dikenal dengan
istilah pertunasan. Mula mula sel ragi yang telah matang membentuk
tonjolan pada dinding tubuhnya, disertai dengan proses mitosis yang
akan membentuk dua buah inti sel. Pada saat tunas telah terbentuk,
satu buah inti sel sebagai hasil pembelahan mitosis bergerak
memasuki tunas tersebut dan kemudian akan memisahkan diri dari
induknya hingga terbentuk individu baru. Jenis ragi penghasil
etanol diantaranya saccharomyces cerevisiae, saccharomyces
anamnesis, dan schizosaccharomyces pombe (Ipak & dkk, 2012).
Saccharomyces cerevisiae merupakan jenis ragi yang sering digunakan
untuk fermentasi etanol karena lebih tahan terhadap suhu 30 40oC
dan pH 4 5. Saccharomyces cerevisiae dapat mengkonversi etanol dari
gula seperti glukosa, fruktosa, galaktosa, manosa, sukrosa dan
maltose. Sumber nitrogen yang sering digunakan untuk Saccharomyces
cerevisiae adalah yeast extract, peptone, dan (NH4)2SO4 (kampen,
2000).2.3.1 Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae)Saccharomyces
cerevisiae merupakan jenis ragi yang secara morfologi berbentuk
blastospora berbentuk bulat lonjong, silindris, oval atau bulat
telur. Dilihat dari tampilan makroskopis saccharomyces cerevisiae
memiliki koloni berwarna kuning muda, permukaan berkilau, licin dan
bertekstur lunak seperti yang ditampilkan pada Gambar II.1.
Gambar II.1 Saccharomyces cerevisiae (Zainuddin, 2005)
Saccharomyces cerevisiae banyak digunakan dalam industri
makanan, misalnya dalam pembuatan roti dan minuman beralkohol.
Selain industri makanan, saccharomyces cerevisae berpotensi
digunakan untuk memproduksi etanol sebagai bahan bakar alternatif
yang merupakan hasil konversi dari sumber karbon seperti
glukosa.Saccharomyces cerevisiae dapat dibedakan berdasarkan kode
jenisnya yaitu R-28, R-58, R-60, R-61 dan R-62 masing masing
memiliki toleransi berbeda terhadap lingkungannya. Dalam penelitian
yang telah dilakukan dengan konsentrasi substrat glukosa 10 %, pH
4.5 dan suhu 30oC, jenis saccharomyces cerevisiae yang paling baik
digunakan adalah R-60 karena memiliki toleransi terhadap lingkungan
lebih baik sehingga R-60 dapat mengkonversi etanol 20 - 46,7 %
lebih tinggi dari jenis lainnya (Dewi, 2006).pH berpengaruh
terhadap kinerja saccharomyces cerevisiae dalam memproduksi etanol.
Saccharomyces cerevisiae tidak toleran terhadap kondisi yang
terlalu asam ataupun terlalu basa. Pada penelitian yang telah
dilakukan dengan menggunakan konsentrasi substrat 8 % mengatakan
bahwa pH optimum pada fermentasi etanol menggunakan saccharomyces
cerevisiae adalah 4,5 yang dapat menghasilkan yield sebesar 40,9%
(Asga, 2006). Dalam proses fermentasi etanol, konsentrasi substrat
yang digunakan mempengaruhi pertumbuhan pada saccharomyces
cerevisiae. Konsentrasi substrat yang berlebihan akan mengakibatkan
inhibisi substrat yang akan meracuni sel. Dalam penelitian yang
dilakukan Asga, 2006 mengatakan bahwa konsentrasi paling optimum
pada substrat glukosa dengan menggunakan saccharomyces cerevisiae
adalah 18,6 %. Konsentrasi tersebut menghasilkan jumlah sel 50 %
lebih banyak dari konsentrasi glukosa 5 %. Waktu fermentasi
berpengaruh terhadap aktivitas pertumbuhan saccharomyces
cerevisiae. Aktivitas pertumbuhan saccharomyces cerevisiae
mempengaruhi produksi etanol, meningkatnya aktivitas sell
menyebabkan peningkatan produksi etanol. Sehingga semakin lama
waktu fermentasi maka etanol yang dihasilkan semakin bertambah dan
terakumulasi. Akumulasi etanol yang berlebih akan menjadi senyawa
toksik yang akan menghentikan aktivitas pertumbuhan mikroorganisme.
Pada penelitian yang telah dilakukan mengatakan bahwa produktivitas
etanol dengan menggunakan saccharomyces cerevisiae akan terus
meningkat hingga jam ke-35 dan akan cendenrung konstan hingga jam
ke-40. Rentang antara jam ke 35-40 ini merupakan fase dimana
produktivitas etanol mencapai titik maksimum. Diatas 40 jam maka
produktivitas etanol akan menurun dikarenakan akumulasi etanol yang
berlebih (Asga, 2006).2.3.2 Kinetika pertumbuhan mikrobaPertumbuhan
merupakan proses bertambahnya ukuran atau substansi atau masa zat
suatu organisme. Pada organisme bersel satu pertumbuhan lebih
diartikan sebagai pertumbuhan koloni, yaitu pertambahan jumlah
koloni, ukuran koloni yang semakin besar atau subtansi atau massa
mikroba dalam koloni tersebut semakin banyak, pertumbuhan pada
mikroba diartikan sebagai pertambahan jumlah sel mikroba itu
sendiri.Pertumbuhan didefinisikan sebagai sebagai pertambahan
kuantitas konstituen seluler dan struktur organisme yang dapat
dinyatakan dengan ukuran, diikuti pertambahan jumlah, pertambahan
ukuran sel, pertambahan berat atau massa dan parameter lain.
Sebagai hasil dari pertumbuhan ukuran dan pembelahan sel atau
penambahan jumlah sel maka terjadi pertumbuhan populasi mikroba
(Iqball, 2008 dalam Hidayat, 2009)Pertumbuhan dapat diamati dari
meningkatnya jumlah sel atau massa sel (berat kering sel). Pada
umumnya bakteri dapa memperbanyak diri dengan pembelahan biner,
yaitu dari satu sel membelah menjadi dua sel. Waktu yang dibuthkan
untuk membelah dari satu sel menjadi dua sel sempurna disebut waktu
generasi. Waktu yang diperlukan oleh sejumlah sel atau massa sel
menjadi dua kali jumlah/massa sel semula disebut doubling time atau
waktu penggandaan.Pertumbuhan kultur mikroba umumnya dapat
digambarkan dalam suatu kurva pertumbuhan. Pertumbuhan mikroba
dapat terbagi dalam beberapa tahap yaitu:a. Fase adaptasi atau fase
lagPada fase ini mikroba menyesuaikan diri dengan lingkungan dan
medium baru, mikroba berusaha merombak materi-materi dalam medium
agar dapat digunakan sebagai nutrisi untuk pertumbuhannya.b. Fase
log atau fase pertumbuhanFase log atau pertumbuhan dipercepat
adalah fase pertumbuhan dan perkembanganbiakan mikroba dimana
jumlahnya meningkat dengan cepat. Pada fase ini mikroba sudah bisa
menggunakan nutrisi dalam medium fermentasic. Fase stasionerFase
stasioner adalah fase dimana laju pertumbuhan tetap yaitu pada laju
pertumbuhan maksimum, namun jumlah mikroba yang mati juga
bertambah. Kenaikan ini diakibatkan oleh berkurangnya nutrien dan
akumulasi senyawa toksik.d. Fase kematian atau fase menurunFase
kematian adalah fase terhentinya pertumbuhan disertai meningkat
jumlah mikroba yang mati.
Gambar II.2 Fasa pertumbuhan mikroba (Shuler & Kargi,
1992)
Saccharomyces cerevisiae merupakan jenis mikroba yang memiliki
kemampuan beradaptasi pada fase log yang singkat. Berdasarakan
penelitian yang dilakukan oleh Asga, 2006 yang menggunakan sebstrat
glukosa 10 %, fase lag pada saccharomyces cerevisiae berada
diantara 0 5 jam yang dimana belum terjadi pertumbuhan yang
signifikan. Pada 5 30 jam merupakan fase eksponensial dimana jumlah
sel bertambah dengan cepat. Fase stasioner mulai terlihat pada jam
ke-30, namun masih ada sedikit kenaikan hingga jam ke-40. Jumlah
sel benar benar konstan pada 40 50 jam. Pernyataan tersebut dapat
dijelaskan pada gambar.
Gambar II Kurva Pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae (Asga,
2006)
2.4 Fermentasi EtanolFermentasi etanol merupakan suatu reaksi
pengubahan sumber karbon menjadi etanol dan karbon dioksida. Pada
proses fermentasi etanol respirasi yang terjadi merupakan anaerob
karena pada kondisi aerob, sumber karbon akan terkonversi menjadi
H2O dan CO2 melalui 3 tahap yaitu glikolisis, siklus krebs, dan
transport elektron seperti yang terlihat pada Gambar..Pada proses
fermentasi etanol, pertama-tama glukosa akan dipecah manjadi asam
piruvat dengan bantuan energi dalam bentuk NAD+, melalu lintasan
glikolisis. Kemudian asam piruvat yang dihasilkan dari proses
glikolisis akan diubah menjadi asetaldehid dan CO2. Selanjutnya,
asetaldehid diubah menjadi alkohol. (Puspitasari, 2009) Jalur
metabolisme fermentasi etanol dapat dilihat pada Gambar II.3.Reaksi
yang terjadi selama proses fermentasi adalah :Reaksi Glikolisis
(Pembentukan Asam Piruvat)Glukosa + 2ADP + 2Pi + NAD+ 2Asam Piruvat
+ 2ATP + 2NADH + 2H2O + 2H+(1)C6H12O6+ 2 ADP + 2 Pi+ 2 NAD+ 2
CH3COCOO+ 2 ATP + 2 NADH + 2 H2O + 2H+(2)Reaksi Pembentukan
Asetaldehid2Asam Piruvat 2Asetaldehid + 2CO2(3)2CH3COCOO 2 CH3CHO +
2 CO2(4)Reaksi Pembentukan Etanol2Asetaldehid + 2NADH + 2H+ 2Etanol
+ NAD+(5)2 CH3CHO + 2NADH + 2H+ 2 C2H5OH(6)Reaksi keseluruhan pada
fermentasi ditunjukan pada reaksi dibawah ini :C6H12O6 2C2H5OH +
2CO2+ 2 ATP ( H : -118kJ/mol)(7)
Gambar II.3 Jalur Metabolisme Fermentasi Etanol. (Shuler &
Kargi, 1992)
2.4.1 Immobilisasi Selamobilisasi sel secara bahasa diartikan
sebagai sel yang dibuat tidak berpindah. Sedangkan menurut istilah
amobilisasi sel merupakan metoda untuk menjerat atau mengikat sel
secara fisik pada suatu ruang tertentu dimana sel masih memiliki
aktivitas katalitik serta dapat dipergunakan secara kontinu dan
berulang kali (Brodelius, 1985). Berdasarkan media pengikatnya, ada
dua jenis sel immobilisasi yaitu immobilisasi aktif dan
immobilisasi aktif.Immobilisasi aktif dilakukan dengan dua metoda
yaitu metoda penjeratan dan metoda pengikatan. Metoda penjeratan
atau entrapping dilakukan secara fisik dalam matriks pendukung.
Matriks pendukung yang bisa digunakan yaitu polimer porous (agar,
alginate, carragenan, polyacrylamide, chitosan, gelatin, collagen),
porous metal screen, polyurethane, silicagel, polystyrene, dan
selulosa triacetate. Metoda pengikatan dibagi menjadi dua yaitu
carrier binding dan cross linking yang dilakukan dengan cara
mengikatkan sel pada permukaan suatu matriks ataupun dengan cara
pembentukan ikatan intermolekular antar sel. a. Carrier Binding
Gambar II.4 Carrier Binding (Institute, n.y)enzim diikatkan pada
suatu matriks yang bersifat tidak larut dalam air. Sebagai matriks
dapat digunakan bahan organik maupun anorganik. Bila menggunakan
metode ini, hal yang perlu diperhatikan adalah pemilihan matriks
dan pengikatan enzim pada matriks tersebut. Teknik pengikatan enzim
pada matriks dapat dilakukan berdasarkan adsorpsi fisik, gaya
elektrostatik atau ikatan kovalen (Chibata, 1978).b. Cross
Linking
Gambar II.5 Cross Linking (Institute, n.y)Metode cross linking
didasarkan pada pembentukan ikatan intermolekuler antara
molekul-molekul enzim. Gugus fungsional dalam molekul enzim yang
biasa digunakan untuk pembentukan ikatan intermolekmuler adalah
gugus amino pada asam amino terminal, gugus amino dari lisin, gugus
fenolik dari tirosin, gugus sulhidril dari sistein dan gugus
imidazole dari histidin. (Chibata, 1978).c. Entrapping
Gambar II.6 Entrapping (Institute, n.y)Pada metode entrapping,
imobilisasi, enzim/sel didasarkan pada penempatan enzim di dalam
kisi dari suatu polimer atau di dalam membran yang bersifat semi
permiabel. Bila enzim ditempatkan dalam kisi, maka metode yang
digolongkan adalah jenis kisi, sedang bila ditempatkan dalam
membran yang bersifat semipermiabel, maka metodenya digolongkan ke
dalam jenis mikrokapsul (Chibata, 1978).Immobilisasi pasif
berbentuk biological films berupa lapisan-lapisan koloni sel yang
tumbuh dan melekat pada permukaan pendukung yang padat. Material
pendukung dapat bersifat inert atau aktif secara biologis.
Biological films digunakan pada pengolahan limbah atau fermentasi
mikroba dengan jamur.2.4.2 Media FermentasiMedia fermentasi
merupakan faktor penting dalam proses berlangsungnya proses
fermentasi. Pada media fermentasi terdapat beberapa syarat agar
mikroba yang digunakan dapat tumbuh dan berkembang dengan baik,
syarat tersebut adalah :a. Dalam media harus terkandung semua unsur
hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan
mikroba.b. Media harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan
permukaan, dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikrobac. Media
harus dalam keadaan steril sehingga tidak ditumbuhi mikroba
lain.Pada proses fermentasi, media fermentasi membutuhkan nutrien
sebagai faktor penunjang pertumbuhan serta metabolism sel. Jenis
nutrient yang dibutuhkan mikroorganisme terdiri dari dua jenis
yaitu mikronutrien dan makronutrienMikronutrien berupa logam dan
vitamin. Senyawa ini dibutuhkan bagi pertumbuhan mikroorganisme
dalam jumlah yang sedikit. Mikronutrien ini meliputi besi (Fe2+ dan
Fe 3+), zinc (Zn+), mangan (Mn2+), molybdenum (Mo2+), cobalt
(Co2+), tembaga (Cu2+) dan kalsium (Ca2+). Fungsi penambahan unsur
tersebut adalah untuk mempercepat reaksi, sintesis vitamin dan
transportasi pada dinding sel. (Adejumo, 2011)Makronutrien terdiri
dari sumber C, H, N, S, P, Mg. Senyawa ini merupakan unsur penting
yang dibutuhkan dalam jumlah banyak oleh mikroorganisme untuk
metabolism dan untuk menghasilkan produk. Makronutrien ini dapat
berasal dari air, gula, lemak, asam amino, garam, dan mineral.a.
Sumber KarbonKarbon merupakan unsur yang sangat diperlukan untuk
pertumbuhan mikroorganisme, karena biomassa mengandung sekitar 50%
karbon pada basis berat kering. Unsur karbon ini ditambahkan
sebagai sumber energi. Karbohidrat merupakan sumber karbon, oksigen
dan hydrogen yang baik bagi pertumbuhan mikroorganisme.Karbohidrat
tersusun dari monomer yang disebut sebagai monosakarida.
Berdasarkan jumlah monomernya, karbohidrat dapat dibedakan menjadi
tiga jenis yaitu monosakarida, disakarida dan polisakarida dan
oligosakariga (Hysocc, 2013)Monosakarida merupakan tipe karbihidrat
yang paling sederhana, terdiri atas atom karbon, hydrogen, dan
oksigen. Contoh monosakarida adalah glukosa dan deoksiribosa
(Hysocc, 2013)Disakarida tersusun atas dua monosakarida yang
bergabung menjadi satu melalui sintesis dehidrasi dengan melepaskan
satu atom hydrogen dan satu grup hidroksil (OH-). Atom hydrogen dan
hidroksil akan bergabung dan membentuk molekul air (H-OH atau H2O.
jenis disakarida yang paling dikenal adalah sukrosa atau yang biasa
dikenal dengan gula tebu (Hysocc, 2013)Oligosakaida dan
polisakarida merupakan gabungan dari beberapa monosakarida (sekitar
3-6 membentuk satu molekul. Monoskarida dapat bergabung membentuk
satu rantai panjang atau bercabang-cabang (Hysocc, 2013)b. Sumber
NitrogenSetelah karbon, unsur yang paling banyak terdapat dalam
media fermentasi adalah nitrogen. Menurut Zhang et.al, (2003)
ammonium nitrat dan ammonium sulfat merupakan sumber nitrogen yang
paling baik, diikuti oleh yeast extract, pepton, dan kemudian
urea.Sumber nitrogen pada media fermentasi dapat dibedakan menjadi
2 jenis sumber organik dan sumber anorganik. Sumber organik yaitu
asam amino, protein, dan urea, corn steep liquor, yeast extract,
peptone, dan soya bean sedangkan sumber anorganik yang digunakan
yaitu ammonia dan garam ammonia (kampen, 2000)
2.4.3 Faktor FisikFermentasi dipengaruhi oleh beberapa faktor
fisik yang dapat mempengaruhi hasil produksi, faktor fisik tersebut
adalah suhu, pH dan kebutuhan oksigen. a. pHpH media fermentasi
menentukan pertumbuhan mikroorganisme serta system metabolismenya.
pH optimum pada proses fermentasi etanol adalah sekitar 4-4,5 hal
ini dikarenakan mikroorganisme dapat hidup dan tumbuh dengan baik
pada kondisi pH tersebut. (Frazier dan Weshoft, 1978)b. SuhuSuhu
merupakan faktor kunci yang mempengaruhi proses fermentasi
(Boontawan, 2010). Hal ini dikarenakan suhu yang digunakan akan
mempengaruhi kinerja mikroorganisme yang berperan dalam proses
produksi etanol. Suhu optimum pada proses fermentasi etanol adalah
30oC (Frazier dan Weshoft, 1978)c. OksigenBerdasarkan kebutuhan
kebutuhan akan oksigen mikroba dapat dibedakan yaitu mikroba yang
bersifat aerobik, anaerobik dan anaerobik fakultatif. Kapang dan
Khamir pada umumnya bersifat aerobik, sedangkan bakteri dapat
bersifat aerobic dan anaerobic.Fermentasi etanol terjadi pada
kondisi Anaerob sehingga oksigen tidak dibutuhkan. Namun jika
terdapat oksigen bebas dalam prosesnya maka akan mempengaruhi
kinerja mikroorganisme. Etanol yang dihasilkan akan sedikit atau
bahkan tidak akan menghasilkan etanol. Bakteri yang bersifat
aerobik mempunyai enzim-enzim yaitu superoksida dismutase yang
memecah radikal bebas tersebut, dan enzim katalase yang memecah
H2O2 sehingga menghasilkan senyawa akhir yang tidak beracun.
Bakteri yang bersifat anaerobic fakultatif juga mempunyai enzim
superoksida dismutase, tetapi tidak mempunyai enzim katalase,
melainkan mempunyai enzim peroksidae yang mengkatalis reaksi antara
H2O2 dengan senyawa organik, menghasilkan senyawa yang tidak
beracun. Bakteri yang bersifat anaerobic tidak mempunyai enzim
superoksida dismutase maupun katalase.
2.4.4 Moda Operasi Fermentasi EtanolBerdasarkan proses
pengumpanan substrat dan pengambilan produk proses fermentasi
dibedakan menjadi 3 moda operasi, yaitu batch, fed-batch dan
kontinyu. a. Fermentasi batchProses Fermentasi Batch merupakan
proses fermentasi dengen sistem tertutup. Fermentasi dalam proses
batch dilakukan dengan cara memasukan media dan inokulum secara
bersamaan ke dalam bioreactor dan pengambilan produk dilakukan pada
akhir fermentasi. (Rusmana, 2013) Selama proses fermentasi substrat
akan dikonversi menjadi produk sehingga konsentrasi substrat akan
semakin menurun. Kinetika pada proses fermentasi batch
diperlihatkan oleh Gambar.
Gambar.Bioreaktor tipe batchmemiliki keuntungan yaitu dapat
memudahkan dalam pengendaliannya. Disamping kelebihan tersebut,
kekurangan dari tipe batch yaitu produktivitas etanol yang rendah.
Rendahnya produktivitas etanol karena pada kondisi tertentu etanol
yang dihasilkan akan menjadiinhibitor yang akan meracuni
mikroorganisme sehingga mengurangi kinerja dan aktivitasnya.
Seperti yang dikatakan dalam penelitian yang dilakukan oleh Minier
dan Goma (1982) dalam Hakim (2010), bahwa fermentasi cara ini
mempunyai kendala konsentrasi etanol yang dihasilkan rendah karena
terjadi inhbisi produk atau berlebihnya produksi etanol yang
terakumulasi dan meracuni mikroorganisme pada proses fermentasi.
Adanya inhibisi produk dapat menurunkan bahkan menghentikan
pertumbuhan serta produksi dari mikroorganisme. b. Fermentasi
Fed-BatchSistemfed-batchadalah suatu sistem yang rnenambahkan
substrat secara teratur pada kultur tertutup, tanpa mengeluarkan
cairan kultur yang ada di dalamfermentorsehingga volume kultur
makin lama makin bertambah (Darmawan & Widjaja, 2008).
Fermentasifed-batch merupakan pengembangan dari sistem batch,
adanya penambahan substrat baru yang ditambahkan dan tidak ada
kultur yang keluar akan menyebabkan yield lebih tinggi dari
fermentasi batch dan menghindari terjadinya akumulasi produk
berlebih yang akan mengakibatkan inhibisi produk (Bambang, 2010).
Kinetika pada proses fed-batch diperlihatkan pada Gambar II
Gambarc. Fermentasi Kontinyu Pada sistem Kontinyu, pengaliran
subtrat dan pengambilan produk dilakukan secara terus menerus
(sinambung) setiap saat setelah diperoleh konsentrasi produk
maksimal atau mencapai konsentrasi yang hampir tetap. (Rusmana,
2013) Dalam hal ini subtrat dan inokulum dapat ditambahkan bersama
secara terus menerus sehingga fase eksponensialdapat diperpanjang.
Kinetika pada proses kontinyu diperlihatkan pada Gambar II
Gambar..Terdapat dua tipe sistem dalam fermentasi kontinyu yaitu
Homogenously mixed bioreactor dan plug flow reaktor. Homogenously
mixed bioreactor adalah bioreaktor berpengaduk dimana terjadi
agitasi/ pengadukan dalam reaktor sehingga konsentrasi produk
setiap titik dalam reaktor sama dengan aliran keluarnya.
Berdasarkan skema prosesnya, homogenously mixed bioreactor dibagi
menjadi dua jenis yaitu Chemostat dan Turbidostat. Chemostat
merupakan bioreaktor tanpa adanya pendaur ulangan, sehingga laju
pertumbuhan sel dalam reaktor dapat dipertahankan pada kondisi
stasioner. Sedangkan Turbidostat merupakan bioreaktor dengan
pendaur ulangan dimana laju pertumbuhan sel sulit untuk dikontrol
karena adanya akumulasi biomassa yang terbawa oleh aliran daur
ulang kedalam bioreaktor. Homogenously mixed bioreactor ditunjukkan
pada gambar.
Gambar.. Homogenously mixed bioreactor ; (a) Chemostat (b)
Turbidostat
Plug flow bioreactor adalah reaktor berbentuk pipa tabung dimana
proses fermentasi terjadi pada saat substrat mengalir dalam aliran
pipa tabung tersebut sehingga konsentrasi produk pada setiap titik
dalam reaktor dan keluaran akan berbeda. Pada jenis reaktor ini,
sel dibuat tetap berada reaktor sehingga biomassa tidak terbawa
dalam aliran keluaran. Plug flow bioreactor ditunjukkan pada
gambar..
Gambar.. Plug flow bioreactor ..Sumber rusmana
Pada fermentasi secarakontinyu untuk fermentasi etanol memiliki
kelebihan yaitu produktivitas etanol yang stabil karena pada
kondisi ini tidak akan terjadi inhibisi produk sehingga konsentrasi
keluaran produk akan seragam. Lama proses pada fermentasi kontinyu
ini sulit untuk ditambah ataupun dikurangi karena akan mempengaruhi
variabel lainnya. Misalnya laju alir umpan yang harus diperkecil
untuk menambah waktu tinggal substrat dalam kolom. Selain itu juga
fermentasi kontinyu memiliki kekurangan lain yaitu biaya
instalasinya yang cukup tinggi sehingga masih jarang digunakan.2.5
Pembentukan Produk FermentasiPembentukan produk mikrobial pada
proses fermentasi dapat diklasifikasikan kedalam tiga pola (Shuler
& Kargi, 1992), diantaranya :a. Pola pembentukan produk
berasosiasi dengan pertumbuhan sel. Pada pola ini, laju pertumbuhan
sel berbanding proporsional dengan laju pembentukan produk.b. Pola
pembentukan produk tidak berasosiasi dengan pertumbuhan sel. Pola
ini, pembentukan produk berlangsung selama fase stasioner (akhir
fase eksponensial) dari mikroorganisme ketika laju pertumbuhan nol
sehingga tidak akan ada lagi sel yang tumbuh. Laju pembentukan
produk pada pola ini adalah konstan, berbanding proporsional dengan
konsentasi sel.c. Pola campuran, yaitu pola pembentukan produk
berasosiasi dan tidak berasosiasi dengan pertumbuhan sel. Pada pola
ini, laju pembentukan produk berbanding proporsional dengan
konsentrasi sel ataupun dengan laju pertumbuhan.Pola pembentukan
produk ditunjukan pada Gambar II.7
Gambar II.7 Pola Pembentukan Produk (a) Pola Pertumbuhan
Berasosiasi dengan Pembentukan Produk, (b) Pola Campuran, (c) Pola
Pertumbuhan Tidak Berasosiasi dengan Pembentukan Produk (Shuler
& Kargi, 1992)
Fermentasi etanol termasuk kedalam pola pembentukan produk tidak
berasosiasi dengan pertumbuhan sel. Pembentukan produk berlangsung
pada fase stasioner, sebagai sumber karbon, substrat pada
fermentasi etanol digunakan juga untuk pembentukan produk dan
biomassa sel, energi untuk pertumbuhan serta energi untuk proses
maintenance/ perawatan sel.Selama proses berlangung perolehan
produk terhadap susbstrat pada fermentasi etanol dapat ditunjukan
dengan persamaan :Keterangan :Yp/s: Perolehan produk terhadap
substratSo: konsentrasi substrat saat t0Pt: konsentrasi produk saat
t hasil penelitianSt : konsentrasi substrat saat tPo : konsentrasi
produk saat t0
Yp/s = (1)Yp/s = (2)Yp/s = (3)
BAB III METODA DAN PROSES PENYELESAIAN
3.1 Alat dan BahanPeralatan yang digunakan pada penelitian ini
meliputi peralatan untuk proses fermentasi batch dan kontinyu serta
peralatan untuk analisis. Proses fermentasi batch menggunakan
Erlenmeyer 250 ml dengan volume media total (substrat + beads) 250
ml yang disimpan dalam inkubator shaker pada suhu ruang 30oC dan
putaran 110 rpm. Rangkaian peralatan untuk proses fermentasi batch
ditunjukan pada Gambar III.1.
Gambar III.1 Rangkaian Fermentasi Batch
Proses fermentasi kontinyu menggunakan Packer Bed Bioreactor
dengan volume substrat pada umpan 500 ml dan beads dalam reaktor
350 ml. Proses ini dilakukan pada suhu ruang 30oC. Rangkaian
peralatan untuk proses fermentasi kontinyu ditunjukan pada Gambar
III.2.Keterangan :1. Tangki Umpan2. Tangki Produk3. Pompa4. Tangki
CO25. Packed Bed Bioreactor6. Recycle
Gambar III.2 Rangkaian Fermentasi Kontinyu
Peralatan untuk analisa yang digunakan pada penelitian ini
terdiri dari refraktometer dan spektrofotometer. Refraktometer
digunakan untuk mendapatkan nilai konsentrasi produk melalui
analisa indeks bia, sedangkan spektrofometer digunakan untuk
mendapatkan nilai konsentrasi gula terduksi melalui analisa panjang
gelombang dengan reagen DNS.Bahan yang digunakan pada penelitian
meliputi : Mikroorganisme Saccharomyces Cerevisiae Media padat GYEA
untuk penyimpanan kultur induk dan kultur kerja Media aktivasi GYE
sebagai media untuk inokulasi Media produksi larutan sukrosa 10%
Media produksi filtrat nanas Reagen DNS untuk analisis gula
reduksiDaftar kebutuhan alat dan bahan secara rinci ditunjukan
dalam Lampiran .3.2 Tahapan Pelaksanaan PenelitianTahapan
pelaksanaan penelitian ini meliputi tahap persiapan bahan dan alat,
percobaan awal (fermentasi batch), fermentasi kontinyu, analisis
produk, dan pengolahan data. Diagram alit tahap pelaksanaan
penelitian dapat dilihat pada Gambar III.3Persiapan Bahan dan
AlatPercobaan awal : Proses Fermentasi Batch
ProsesFermentasi Kontinyu
MulaiSelesai Filtrat nanas Sel immobilisasi Sterilisasi alat
Perangkain raktorAnalisis produk
Waktu reaksi optimum Variasi rasio filtrat nanas terhadap
sukrosa. Variasi waktu tinggal ()Pengolahan data
Kadar gula reduksi Konnsentrasi bioetanol
Perhitungan Yieldbioethanol Rasio saubstratoptimum Waktu tinggal
()optimum
Gambar III.3 Diagram alir penelitian
3.2.1 Tahap Persiapan Bahan dan AlatTahap persiapan bahan
meliputi pengolahan buah nanas untuk menghasilkan filtrat nanas
yang akan digunakan pada proses fermentasi kontinyu serta proses
immobilisasi Saccharomyces Cerevisae menggunakan Ca-Alginat.
Persiapan alat meliputi penyiapan alat yang akan digunakan untuk
proses fermentasi, sterilisasi alat dan perangkaian reaktor untuk
fermentasi kontinyu.
3.2.1.1 Pembuatan Filtrat NanasTahapan Pembuatan filtrat nanas
diawali dengan mengupas buah nanas sebanyak 30 buah. Buah nanas
tersebut kemudian dihaluskan dengan menggunakan blender lalu
dipisahkan antara filtrate dengan ampasnya menggunakan kain kasa,
setelah itu maka dihasilkanlah filtrate sebanyak 10.5 Liter.
Filtrat yang diperoleh selanjutnya disterilkan pada suhu 121oC
selama 15 menit. Sterilisasi bertujuan untuk menghilangkan mikroba
lain yang dapat mengganggu pada proses fermentasi. Diagram alir
pembuatan filtrat nanas ditunjukan pada Gambar III.4
Gambar III.4 Pembuatan Filtrat Nanas
3.2.1.2 Pembuatan Sel AmmobilPembuatan sel ammobil meliputi
beberapa tahapan yaitu tahap aktivasi mikroorganisme, pembuatan
inokulum, dan pembuatan beads.a. Aktivasi MikroorganismeProses
aktivasi mikroorganisme dimulai dengan membuat larutan GYEA yang
terdiri atas 0.8 gr pepton, 0.4 gr yeast extract, 1.6 gr glukosa
dan 1.44 gr agar dalam 80 ml aquades, kemudian dipanaskan sampai
mendidih supaya semua agar melarut. Larutan tersebut kemudian
dimasukkan ke tabung reaksi masing masing 5 ml. Selanjutnya, mulut
tabung reaksi ditutup dengan kapas dan disterilisasi dalam
autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit. Setelah disterilisasi,
tabung reaksi didinginkan dalam posisi miring hingga agar mengeras.
Setelah agar mengeras, kultur induk diambil dari incase dengan
kawat ose steril. Kemudian kawat ose tersebut digoreskan pada
permukaan media agar miring secara perlahan lalu tabung ditutup
dengan kapas. Setelah itu kultur kerja di inkubasi pada suhu 30oC
selama 3 hari. Tahapan aktivasi mikroorganisme dapat dijelaskan
pada Gambar III.5
Gambar III.5 Aktivasi Mikroorganisme
b. Pembuatan InokulumPembuatan inokulum dimulai dengan membuat
larutan GYE yang terdiri atas 0.5 gr pepton, 0.25 gr yeast extraxt
dan 1 gr glukosa dalam 50 ml aquadest. Selanjutnya larutan GYE
disterilisasi pada suhu 121oC selama 15 menit. Larutan GYE yang
telah steril kemudian ditanami kultur kerja, penanaman kultur kerja
dilakukan secara aseptis dan didalam Erlenmeyer 100 ml. Setelah
ditanami, larutan GYE atau inokulum di inkubasi dalam incubator
shaker dengan kondisi suhu 30oC, putaran 110 rpm dan waktu 48 jam.
Penggunaan waktu inkubasi 48 jam didasari oleh penelitian dari yang
telah dibahas di tinjauan pustaka. Proses pembuatan inokulum
dilakukan secara aseptis. Tahapan aktivasi mikroorganisme dapat
dijelaskan pada Gambar III.6
Gambar III.6 Pembuatan Inokulum
c. Pembuatan BeadsPembuatan beads diawali dengan membuat 50 ml
larutan alginat 4% dengan komposisi 2 gr Na-Alginat dalam 50 ml
aquadest lalu dipanaskan dengan penangas air pada suhu 80oC selama
15 menit. Selanjutnya larutan alginate didinginkan hingga mencapai
suhu 40oC, setelah itu larutan dicampurkan dengan 50 ml inokulum.
Campuran tersebut dicetak menjadi beads dengan cara dimasukan
kedalam larutan CaCl2 2% melalui syringe sehingga berbentuk bulatan
bulatan kecil. Tahapan pembuatan beads dijelaskan pada Gambar
III.7.
Gambar III.7 Pembuatan Beads
3.2.2 Tahap Percobaan AwalTahap percobaan awal merupakan
fermentasi etanol secara batch, tujuan dari percobaan awal untuk
mendapatkan waktu reaksi optimum yang akan digunakan pada proses
fermentasi secara kontinyu. Fermentasi etanol secara batch
dilakukan dalam inkubator shaker pada suhu 36oC, putaran 110 rpm
dan pH 4,5 selama 56 jam. Tahap fermentasi batch dimulai dengan
membuat larutan sukrosa 10% sebagai media fermentasi. Larutan
sukrosa 10% dibuat dengan komposisi terdiri atas 20 gr Sukrosa, 0.4
gr KH2PO4, 0.8 (NH4)SO4, dan MgSO4.7H2O dalam 400 ml aquadest,
pembuatan larutan sukrosa dilakukan pada Erlenmeyer 250 ml.
Selanjutnya larutan tersebut disterilisasi pada suhu 121oC selama
15 menit. Setelah media fermentasi siap, kemudian dimasukkan sel
ammobil kedalamnya. Setelah itu dilakukan pengaturan pH hingga
mencapai 4.5 dengan cara menambahkan larutan H2SO4 5%. Selanjutnya
media yang telah siap dimasukkan ke dalam inkubator shaker dengan
kondisi operasi adalah suhu 30oC, putaran 110 rpm dan waktu 56 jam.
Sebelum dimasukkan ke dalam inkubator shaker dilakukan purging pada
reaktor dengan tujuan untuk mengihilangkan oksigen. Pengambilan
sampel pada proses batch dilakukan setiap 4 jam/sample, dimulai
dari t0 sampai dengan t56. Tahapan fermentasi batch dijelaskan pada
Gambar III.8
Gambar III.8 Fermentasi Batch
3.2.3 Tahap Fermentasi KontinyuProses fermentasi kontinyu
menggunakan sel ammobil dilakukan dalam bioreaktor packed-bed.
Variasi yang digunakan terdiri atas rasio filtrat nanas terhadap
sukrosa dan waktu tinggal . Tahapan dalam fermentasi kontinyu
terdiri atas penentuan porositas reaktor, kalibrasi laju alir,
penentuan siklus dan proses fermentasi kontinyu.a. Penentuan
Porositas ReaktorPenentuan porositas reaktor dilakukan untuk
mendapatkan jumlah volume substrat yang dapat mengisi kekosongan
ruang diantara beads dalam reaktor. Volume tersebut dibutuhkan
untuk mengetahui jumlah substrat yang digunakan dalam setiap kalo
percobaan. Penghitungan porositas dapat dijelaskan melaui persamaan
: = Vtotal Vbeads dalam reaktor(1)Tahapan penentuan porositas
dimulai dengan mengisi reaktor dengan larutan CaCl2 2% hingga
memenuhi 45 cm tinggi reaktor. Setelah reaktor terisi dimasukan 350
ml beads hingga cairan mencapai 73 cm ketinggian reaktor. Untuk
mendapatkan nilai porositas maka larutan yang berada didalam
reaktor dikeluarkan melalui valve bagian bawah lalu ditampung oleh
gelas kimia. Selanjutnya larutan yang ditampung diukur oleh gelas
ukur agar lebih presisi. Larutan yang diukur tersebut merupakan
nilai volume substrat yang dibutuhkan dalam percobaan.b. Kalibrasi
Laju AlirKalibrasi laju alir dilakukan untuk menentukan laju pompa
yang digunakan untuk fermentasi kontinyu. Kalibrasi laju alir
dimulai dengan mengalirkan caairan kedalam reaktor dan menampung
keluarannya. Ukur volume cairan yang keluar selama 1 menit hingga
didapatkan nilai dengan satuan milliliter per menit (ml/menit).
Lakukan kalibrasi tersebut pada setiap laju alir pompa hingga
didapatkan laju alir yang diinginkan.c. Penentuan Siklus
FermentasiPenentuan siklus fermentasi dilakukan untuk mendapatkan
jumlah siklus yang dilakukan pada saat fermentasi kontinyu. Siklus
tersebut dibutuhkan untuk mencapai waktu tinggal yang dibutuhkan
dengan laju alir yang telah ditentukan. Penentuan siklus dimulai
dari menentukan lama cairan umpan yang dapat mengalir melewati
porositas reaktor. Selanjutnya dapat dijelaskan dalam persamaan
:
Jumlah Siklus = (4)
Jumlah siklus yang didapatkan digunakan untuk menentukan waktu
operasi pada fermentasi kontinyu untuk mencapai waktu tinggal yang
diinginkan dengan cara mengetahui seberapa lama volume umpan
sebanyak 500 ml dapat habis mengalir melewati reaktor. Waktu
operasi fermentasi dapat ditentukan dengan persamaan berikut :
Waktu Operasi = d. Proses Fermentasi KontinyuPurging, cara
mengalirkan substrat ( masukkin dulu cacl terus keluarkan), 3.2.4
Tahap Analisis Hasil Metode yang digunakan dalam analisa . Kadar
sisa gula tereduksi dianalisis dengan spektrofotometer menggunakan
reagen DNS, sedangkan konsentrasi etanol yang dihasilkan dianalisis
dengan menggunakan refraktometer.3.2.5 Tahap Pengolahan DataData
data yang diperoleh selama percobaan disajikan dalam bentuk kurva
dan tabel sehingga dapat diketahui nilai rasio filtrat terhadap
sukrosa optimum dan waktu tinggal optimum pada proses fermentasi
kontinyu. Selain itu dilakukan perhitungan yield dari bioethanol
yang dihasilkan.Pelaksanaan Penelitian menjelaskan mengenai tahapan
penelitian yang meliputi tahap pembuatan filtrat nanas, pembuatan
sel immobilisasi, fermentasi batch, serta fermentasi kontinyu.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Proses Fermentasi BatchProses fermentasi batch dilakukan
untuk mengetahui waktu reaksi optimum yang akan digunakan sebagai
waktu tinggal pada proses fermentasi kontinyu. Hasil dari proses
fermentasi batch dapat dilihat pada Gambar IV.1.
Gambar. IV.1 Kadar Etanol (%) Terhadap Waktu Fermentasi (Jam)
Pada Konsentrasi Sukrosa 10 %
Selama proses fermentasi etanol berlangsung, konsentrasi etanol
meningkat secara berkala dari jam ke- 0 sampai 24. Peningkatan
konsentrasi etanol disebabkan karena adanya peningkatan aktivitas
metabolit dari sel Saccharomyces Cerevisiae. Peningkatan
konsentrasi etanol mulai terhenti saat jam ke- 24 hingga
selanjutnya mengalami kondisi yang steady state sampai jam ke- 28.
Setelah jam ke- 28 terjadi penunrunan konsentrasi etanol, hal
tersebut disebabkan karena terjadinya akumulasi produk/inhibisi
produk. Akumulasi produk menyebabkan menurunnya secara perlahan
lahan aktivitas metabolisme dari Saccharomyces Cerevisiae,
penurunan aktivitas metabolisme tersebut berdampak pada menurunnya
produksi etanol. Guna menanggulangi masalah tersebut digunakan
proses fermentasi kontinyu dengan menggunakan waktu tinggal yang
berdasarkan pada waktu reaksi optimum proses batch.4.2 Proses
Fermentasi KontinyuPada proses fermentasi kontinyu terdapat dua
variabel yang divariasikan yaitu variasi substrat dan waktu
tinggal.4.2.1 Pengaruh Variasi Rasio Campuran Substrat Terhadap
Bioethanol Yang DihasilkanVariasi rasio campuran volume substrat
dimaksudkan untuk mengetahui pengaruh perbedaan perbandingan volume
yang digunakan terhadap bioethanol yang dihasilkan. Hasil dari
variasi tersebut dapat dilihat pada Gambar IV.2.
Gambar IV.2 Diagram Konsentrasi Etanol pada Variasi Rasio
Substrat
Dari hasil percobaan diketahui bahwa konsentrasi etanol dari
susbstrat yang memiliki rasio antara nanas dan gula, 500 : 0
memiliki hasil yang lebih besar dibandingkan dengan rasio campuran
substrat lainnya, yaitu mencapai 7%. Hal tersebut disebabkan karena
pada substrat dengan rasio 500 : 0 (nanas murni), sumber karbon
yang terkonversi menjadi bioetanol bukan hanya berasal dari
glukosa. Adanya senyawa seperti serat dan karbohidrat menyebabkan
hasil konsentrasi etanol yang dihasilkan lebih besar. Selain hal
tersebut, adanya senyawa seperti vitamin A, C, magnesium, dan
fosfor dapat menyebabkan peningkatan hasil produksi dikarenakan
senyawa senyawa tersebut dapat meningkatkan aktivitas metabolisme
dari sel. Grafik perubahan konsentrasi etanol pada masing - masing
rasio dapat dilihat pada Gambar IV.3
Gambar IV.3 Grafik Perubahan Konsentrasi Etanol (%) Terhadap
Waktu Tinggal (jam)
Grafik perubahan konsentrasi etanol terhadap waktu menunjukkan
bahwa selama proses fermentasi etanol berlangsung, konsentrasi
etanol mengalami peningkatan secara berkala pada masing masing
rasio. Pada waktu waktu ke- 8,95 jam sampai ke- 11,02 jam terjadi
kenaikan cukup tinggi yang disebabkan peningkatan akitivitas
metabolit sel Saccharomyces Cerevisiae. Peningkatan konsentrasi
etanol terus berlangsung hingga waktu tinggal yang ditentukan.
Setelah mencapai waktu tinggal konsentrasi etanol cenderung
konstan, hal tersebut disebabkan oleh berkurangnya jumlah substrat
untuk dikonversi. Hubungan antara perubahan konsentrasi produk dan
substrat ditunjukkan oleh gambar IV.4.(a)(b)(c)
Gambar IV.4 Grafik Hubungan Antara Perubahan Konsentrasi
Substrat dan Produk (a) rasio substrat 1, (b) rasio substrat 2, (c)
rasio substrat 3 Hubungan antara konsentrasi substrat dengan produk
dapat ditunjukkan melalui yield yang dihasilkan. Susbstrat yang
memiliki rasio antara nanas dan gula, 500 : 0 memiliki yield yang
lebih besar dibandingkan dengan rasio campuran substrat lainnya,
yaitu mencapai 94,64 %. Hal ini disebabkan karena pada rasio
tersebut konversi substrat lebih besar. Konversi tersebut
disebabkan oleh adanya senyawa pendukung dalam aktivitas metabolit
sel seperti magnesium dan fosfor. 4.2.2 Pengaruh Variasi Waktu
Tinggal Terhadap Bioethanol Yang DihasilkanVariasi waktu tinggal
dilakukan untuk mendapatkan waktu tinggal optimum dalam aktivitas
metabolism sel Saccharomyces Cerevisiae untuk memproduksi
bioetanol. Hasil dari variasi waktu tinggal dapat dilihat pada
Gambar IV.5
Gambar IV.5 Diagram Konsentrasi Etanol pada Variasi Waktu
Tinggal
Gambar IV.6 Konsentrasi Etanol (jam) Terhadap Waktu (jam)
(a)(b)(c)
Gambar IV.7 Grafik Hubungan Antara Perubahan Konsentrasi
Substrat dan Produk (a) Waktu Tinggal 20 Jam, (b) Waktu Tinggal 25
Jam, (c) Waktu Tinggal 28 Jam
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 KesimpulanDari penelitian yang telah dilakukan dapat
disimpulkan, bahwa :a. Waktu reaksi optimum untuk proses fermentasi
berlangsung pada 20 28 jam.b. Rasio filtrate nanas terhadap sukrosa
berpengaruh terhadap bioethanol yang dihasilkan, semakin murni
filtrat nanas yang digunakan maka bioethanol yang dihasilkan
semakin tinggi.c. Waktu tinggal optimum proses fermentasi kontinyu
adalah 20 jam dengan menghasilkan yield dan kadar bioethanol masing
masing sebesar 94,64 % dan 7 % (v/v).5.2 SaranPada penelitian ini
ada beberapa saran yang penulisan ajukan, yaitu :a. Diperlukan
DAFTAR PUSTAKA
Kementrian Riset dan Teknologi Republik Indonesia. (2012).
Retrieved Januari 13, 2013, from Pemanfaatan Bioetanol Untuk
Kebutuhan Energi Indonesia:
http://www.ristek.go.id/index.php/module/News+News/id/10973Adejumo.
(2011). Cassava Starch : Production, Physicochemical Properties and
Hydrolysation. Retrieved from http://www.woaj.orgAS, M., Widjaja,
T., & Altway, A. (2009). PRODUKTIVITAS ETANOL PROSES FERMENTASI
KONTINYU DENGAN ZYMOMONAS MOBILIS TEKNIK IMMOBILISASI SEL
Ca-ALGINAT DAN K-KARAGINAN DI BIOREAKTOR PACKED BED. Surabaya:
Institut Teknologi Sepuluh November .Asga, P. (2006). Produksi
Etanol Menggunakan Saccharomyces Cerevisiae Yang Diamobilisasi
Dengan Agar Batang. Akta Kimia Indonesia, 110-111.BPPIPT. (2000).
Nanas. Jakarta: Mengristek.BPS. (2013). Produksi buah-buahan
menurut provinsi. Retrieved January 16, 2015, from Badan Pusat
Statistika: www.bps.go.idBrodelius, P. (1985). Enzymes and
Immobilized Cell in Biotechnology. London: Commings Publishing.BSN.
(2008). Bioetanol Terdenaturasi untk gasohol. Jakarta Pusat: Badan
Standarisasi Nasional.BVBA, A. O. (n.d.). Material safety Data
Sheet Starch. Belgium: Across Organics BVBA.Cardona, C. A. (2007).
Fuel ethanol production : Process design trends and integration
opportunities. Bioseresour Technol.Chaplin, M. (2014). Water
Structure and Science. Retrieved Januari 17, 2014, from
http://www1.lsbu.ac.uk/water/hycel.htmlDalimartha, d. S., &
Adrian, d. F. (2013). Fakta Ilmiah Buah & Sayur. Jakarta Timur:
Penebar Plus.Darmawan, R., & Widjaja, T. (2008). PENINGKATAN
PRODUKTIVITAS ETANOL DARI MOLASES DENGAN TEKNIK IMMOBILISASI DI
BIOREAKTOR PACKED - BED. Surabaya: Institut Teknologi Sepuluh
November.Dewi, W. (2006). Screening of Ethanol Tolerant Yeast of
Saccharomyces cerevisiae. 411-412.Escobar, L. A., Alvarez, U.,
& Peneuela, M. (2012). CONTINUES PRODUCTION OF ETHANOL IN
PACKED BED BIOREACTORS WITH IMMOBILIZED YEAST CELLS ON
LIGNOCELLULOSIC WASTE. Colombia: Universidad de Antioquia.ESDM, D.
(2006). ESDM. Retrieved Januari 2, 2015, from ESDM:
www.esdm.go.idESDM, D. (2006, Juni 25). ESDM. Retrieved Januari 2,
2015, from ESDM: www.esdm.go.idEuis Hermiati, D. M. (2010).
Pemanfaatan Biomassa Lignoselulosa Ampas Tebu Untuk Produksi
Bioetanol.Fardiaz. (1992). Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Gramedia
Pusaka Utama.Gozan, M. (2014). TEKNOLOGI BIOETANOL GENERASI KEDUA.
Jakarta: Erlangga.HoltZapple, M. T. (1993). Cellulose In
Enclycopedia of Food Science Food Technolgy and Nutrien.Institute,
R. P. (n.y). Carier Binding. Retrieved Januari 2, 2015, from
Rensselaer: www.rpi.eduIpak, & dkk. (2012). Cara Berkembang
Biak Bakteri. Agarillus, 1.Isroi. (2008). Karakteristik
Lignoselulosa sebagai Bahan Baku Bioetanol. Retrieved Januari 17,
2014, from
http://isroi.com/2008/05/01/karakteristik-lignoselulosa-sebagai-bahan-baku-bioetanol/Juwita,
R. (2012). Studi Produksi Alkohol Dari Tetes Tebu. Skripsi,
15.kampen, w. (2000). Nutritional Requirement in Fermentation
Processes. Retrieved from
http://200.19.144.11/luis/Books/E-Books/Engineering/Fermentation
And Biochemical Engineering Handbook/14077_03.pdfKita, Z. B.
(2013). Biologi Kelas XII: Metabolisme. Retrieved from Zona Biologi
Kita Web Site: http://zonabiokita.blogspot.com/machrus. (2006).
Bioethanol Production. Retrieved from academia:
http://www.academia.edu/Maulana, P. (2012, Desember 25).
Perpustakaan Cyber. Retrieved from Sacharomyces Cerevisae:
http://perpustakaancyber.blogspot.com/Mousdale, D. M. (2008).
Biofuels Biotechnology, Chemistry, and Sustainable Development.
London: CRC Press.Munif. (2012). home: Kesehatan Lingkungan.
Retrieved from Environmental Sanitations Web site:
environmentalsanitation.wordpress.comPetani, B. (2013). nanas.
Retrieved from Budidaya Petani Web Site:
http://budidaya-petani.blogspot.comPrentis, S. (1990).
Bioteknologi. (M. Thenawidjaya, Trans.) Jakarta:
Erlangga.Puspitasari, N. (2009). Pengaruh Jenis Vitamin B dan
Sumber Nitrogen dalam Peningkatan Kandungan Protein Kulit Ubi Kayu
Melalui Proses Fermentasi. Semarang: Undip Press.Putra, S. (2006).
Produksi Etanol Menggunakan Saccharomyces Cerevisiae. 111.renny.
(2012). 4 Jalur Fermentasi Glukosa. Retrieved from Reniwija:
http://rennywija.blogspot.com/Restmac. (2006). Bioethanol
Production and Use. Creating Marketers for Renewable Energy
Technologies EU RES Technology Marketing Campaign, 4.Riezz. (2008).
Solid State Fermentation and Submerged Fermentation. Retrieved from
Riezzs blog: https://riezz.wordpress.com/Rusmana, I. (2013). Proses
Fermentasi. Bogor: IPB.Scientific, V. G. (2004). Material Safety
Data Sheet Ethanol Absolut. Kirkland: Vee Gee
Scientific.,Inc.Shuler, M. L., & Kargi, F. (1992). Bioprocess
Engineering Basic Concept. New Jersey: Prentice-hall Inc.Sun, Y.,
& Cheng, J. (2005). Dilute Acid Pretreatment of Rye Straw and
Bermuda Grass for Ethanol Production.suprihatin. (2010). teknologi
fermentasi. surabaya: unesa press.Yani, D. A., & Widianti, Y.
(2013). Pengaruh Substrat Tepung Tapioka dan Konsentrasi Inokulum
pada Fermentasi asam Laktat menggunakan Lactobacillus Acidophilus.
Bandung Barat: Politeknik Negeri Bandung.
LAMPIRAN
