LAPORAN TETAP PRAKTIKUM.pdf

LAPORAN TETAP PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI DASAR

DISUSUN OLEH :

NAM : muhammad syarif h.

NIM : B0D013059

KELOMPOK : 10

FAKULTAS PETERNAKAN

UNIVERSITAS MATARAM

2014

HALAMAN PENGESAHAN

Laporan Ini Disusun Guna Memenuhi Sebagian Syarat

Untuk Menyelesaikan Mata Kuliah

Biologi Dasar

Mataram, 3 Juni 2013

Co.Ast

Praktikan

(Hamzan Wadi)

B1D012114

KATA PENGANTAR

Tiada sepatah katapun yang patut kami ucapkan, setelah terselesainya penyusunan

Laporan Tetap Praktikum Dasar Mikrobiologi ini, kecuali ucapan tahmid dan tasyakur kehadirat

Allah SWT. Karena dari kehadirat-Nyalah datangnya semua nikmat.

Penyusunan Laporan Tetap Praktikum Dasar Mikrobiologi ini merupakan sebagian syarat

untuk menyelesaikan mata kuliah Kimia Dasar, laporan ini terdiri atas empat acara praktikum

dan tiap-tiap acara memuat tujuan, landasan teori, alat dan bahan praktikum, cara kerja serta

hasil pengamatan.

Kami menyadari akan kekurangan dan kekhilafan dalam penyusunan Laporan Tetap

Praktikum Dasar Mikrobiologi ini. Untuk itu kritik dan saran yang sifatnya konstruktif sangatlah

kami harapkan demi penyempurnaannya.

Akhir kata kami ucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu dalam

penyusunan Laporan Tetap praktikum Dasar Mikrobiologi ini. Mudah-mudahan bermanfaat bagi

kita semua. Amiin

Mataram, 3 Juni 2013

Penyusun

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL i HALAMAN PENGESAHANii KATA PENGANTAR...iii DAFTAR ISI..iv ACARA III : Isolasi Dan Pembiakan Mikroba

BAB I PENDAHULUAN

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

BAB III MATERI DAN METODE PRAKTIKUM

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

ACARA IV : Pengaruh Lingkungan Terhadap Pertumbuhan Mikroba

BAB I PENDAHULUAN





DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

ACARA V : Analisis Dan Kuantitatif Mikroba

BAB I PENDAHULUAN





DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

ACARA VI : Pengecatan Gram

BAB I PENDAHULUAN





DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

ACARA III

ISOLASI DAN PEMBIAKAN

MIKROBA

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikroorganisme terdapat dimana-mana, jadi persiapan untuk biakan murni, tidak

saja isolasi mikroorganisme tertentu dari populasi mikroba campuran di alam, tetapi juga

pemeliharaan individu yang diisolasi itu dan keturunannya pada lingkungan buatan, dan di

dalamnya dicegah pemasukan mikroorganisme lain. Mikrooganisme tidak memerlukan banyak

ruangan untuk perkembanganny, sebab itu media buatan dapat dimasukkan ke dalam sebuah

tabung percobaan, labu, atau cawan petri: ketiga jenis ini sangat umum digunakan untuk

membiakkan mikroorganisme. Pada permulaannya bejana biakan harus dijadikan steril (bebas

dari setiap mikroorganisme yang hidup) dan, setelah dimasukkan jenis mikroorganisme yang

diinginkan, bejana itu harus dilindungi terhadap kontaminasi yang berikut dari luar.

Biakan mikroorganisme yang murni yang membentuk koloni terpisah pada media

padat dapat diperoleh dengan salah satu modifikasi metode semai. Metode ini mencakup

pemisahan dan pelumpuhan organisme individu di dalam medium zat gizi yang dipadatkan

dengan agar atau dengan bahan mengeras lain yang cocok. Setiap organisme yang tumbuh

menjadi koloni dan dari sini pemindahan dapat segera dilakukan.

1.2 Tujuan Praktikum

Mahasiswa dapat mengetahui pertumbuhan dari masing-masing mikroba yang diisolasi dan diinokulasi pada medium pertumbuhan yang digunakan.

Mahasiswa dapat mengetahui media apa saja yang biasa digunakan untuk isolasi dan pembiakan bakteri.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme tidak memerlukan banyak ruangan untuk perkembangannya,

sebab itu, media buatan dapat dimasukkan ke dalam sebuah tabung percobaan, labu, atau cawan

petri. Ketiga jenis ini sangat umum digunakan untuk membiakkan mikroorganisme. Pada

permulaannya bejana biakan harus dijadikan steril (bebas dari setiap mikroorganisme yang

hidup). Dan setelah dimasukkan jenis mikroorganisme yang diinginkan, bejana itu harus

dilindungi terhadap kontaminasi yang berikut dari luar (Stanier, 1982).

Jika bakteri ditumbuhkan pada suatu medium kultur di laboratorium, sel dapat

berkelompok satu sama lainnya. Cocci misalnya, dapat bergandengan dalam bentuk rantai

(streptococci) atau tersusun dalam suatu kelompok atau staphylococci (Gaman, 1992).

BAB III

MATERI DAN METODE PRAKTIKUM

3.1 Materi Praktikum

A. Alat praktikum Adapun alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

1. cawan petri

2. ose

3. lampu Bunsen

4. inkubator

5.kertas label

B. Bahan praktikum Adapun alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

1. Medium MCA

2. Bakteri E. coli

3.2 Metode Praktikum

A. Isolasi E. Coli (pada medium MCA cawan petri secara goresan)

1. Sediakan alat dan bahan yang akan digunakan

2. Medium MCA dicairkan terlebih dahulu

3. MCA cair dituang dalam cawan petri steril dan dibiarkan hingga memadat

4. Biakan E. Coli diambil dengan ose bulat dan dipindahkan ke medium MCA dalam cawan petri

dengan cara menggoreskan secara langsung, dan kuadran

5. Ose dipijarkan kembali, dan cawan ditutup dengan baik

6. Cawan petri dimasukkan dalam incubator dengan posisi terbaik pada suhu 34oC selama 2 x 24

jam

7. Bersihakan dan kembalikan alat dan bahan praktikum pada tempatnya.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Praktikum Adapun Hasil Praktikum yang diperoleh adalah sebagai berikut:

1. Bentuk Bakteri,

Dilihat dari bagian atas cawan petri kemudian dicocokkan dengan gambar yang ada pada buku

pedoman praktikum. Maka diperoleh hasil bentuk bulat dengan tepi berserabut.

2. Warna Bakteri

Dilihat langsung terhadap koloni yang tumbuh pada cawan petri dan diperoeh hasil warna bakteri

yaitu di tengah putih dan ditepinya ungu kemerahan.

3. Margin Bakteri

Dilihat dari bagian samping cawan petri dan diperoleh hasil Margin bakteri yaitu Helus.

4. Penonjolan

Pada pengamatan penonjolan, yang diamati hanya satu koloni dan diperoleh hasil yaitu

Umbonet.

4.2 Pembahasan Dalam praktikum kali ini dilakukan percobaan mengenai isolasi dan pembiakan mikroba

dengan tujuan memindahkan mikroba untuk memperbanyak, selain ditumbuhkan juga perlu

dilakukan isolasi.

Isolasi Mikroba Beratus-ratus spesies mikroba dapat menghuni berbagai macam bagian tubuh kita, misal:

mulut, saluran pencernaan, kulit, dll. Sekali bersin dapat menyebarkan beribu-ribu

mikroorganisme. Satu gram kotoran manusia/hewan dapat mengandung jutaan bakteri. Udara,

air, tanah, juga dihuni oleh sekumpulan mikroorganisme.

Populasi mikroorganisme tersebut pada umumnya terdapat dalam populasi campuran.

Amat jarang mikroorganisme tersebut dijumpai sebagai satu spesies tunggal. Di sisi lain, untuk

mencirikan dan mengidentifikasikan suatu spesies mikroorganisme tertentu, yang pertama harus

dilakukan adalah memisahkannya dari organisme lain, hingga diperoleh biakan murni. Biakan

murni adalah biakan yang sel-selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal.Proses

pemisahan/pemurnian dari mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua pekerjaan

mikrobiologis, misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan suatu populasi

yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Teknik tersebut dikenal dengan

Isolasai Mikroba. Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu: 1) isolasi pada agar cawan,

2) isolasi pada medium cair, dan 3) Isolasi sel tunggal.

Isolasi pada agar cawan Prinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme

sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. Setiap koloni

yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah inkubasi berasal dari satu sel tunggal.

Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada agar cawan, yaitu: Metode gores kuadran, dan

metode agar cawan tuang Metode gores kuadran. Bila metode ini dilakukan dengan baik akan

menghasilkan terisolasinya mikroorganisme, dimana setiap koloni berasal dari satu sel.

Setelah diperoleh biakan murni (koloni yang berasal dari sel tunggal), mikroorganisme

tersebut siap dilakukan telaah dan identifikasi, dan kemudian ditumbuhkan sesuai tujuan.

Pertumbuhan pada mikroorganisme diartikan sebagai penambahan jumlah atau total massa

sel yang melebihi inokulum asalnya. Telah dijelaskan pada bahasan sebelumnya, bahwa sistem

reproduksi bakteri adalah dengan cara pembelahan biner melintang, satu sel membelah diri

menjadi 2 sel anakan yang identik dan terpisah. Selang waktu yang dibutuhkan bagi sel untuk

membelah diri menjadi dua kali lipat disebut sebagai waktu generasi. Waktu generasi pada setiap

bakteri tidak sama, ada yang hanya memerlukan 20 menit bahkan ada yang memerlukan sampai

berjam-jam atau berhari-hari.

Bila bakteri diinokulasikan ke dalam medium baru, pembiakan tidak segera terjadi tetapi

ada periode penyesuaian pada lingkungan yang dikenal dengan pertumbuhan. Kemudian akan

memperbanyak diri (replikasi) dengan laju yang konstan, sehingga akan diperoleh kurva

pertumbuhan. Pada kurva pertumbuhan dikenal beberapa fase pertumbuhan yaitu :

a) Fase lamban

Fase lamban merupakan periode awal dan merupakan fase penyesuaian diri (adaptasi), sehingga

tidak ada pertambahan jumlah sel bahkan kadang-kadang jumlah sel menurun.

b) Fase cepat

Fase cepat merupakan periode pembiakan yang cepat. Pada periode ini dapat teramati ciri-ciri sel

yang aktif. Waktu generasi pada setiap bakteri dapat ditentukan pada fase cepat ini. Pada fase

tersebut dapat terlihat beberapa sel mulai membelah, yang lainnya setengah membelah, dan yang

lainnya lagi selesai membelah.

c) Fase statis

Pada fase statis pembiakan mulai berkurang dan beberapa sel mati. Apabila laju pembiakan sama

dengan laju kematian, maka secara keseluruhan jumlah sel tetap konstan. Hal ini dapat

disebabkan karena berkurangnya nutrien ataupun terbentuknya produk metabolisme yang

cenderung menumpuk mungkin menjadi racun bagi bakteri yang bersangkutan.

d) Fase kematian

Fase kematian merupakan fase dimana proses pembiakan telah berhenti. Sel-selnya sudah mati,

yang kemudian akan diikuti dengan proses lisis. Apabila laju kematian melampaui laju

pembiakan, maka jumlah sel sebenarnya menurun.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan praktikum yang sudah dilaksanakan dapat disimpulkan beberapa hal sebagai

berikut:

1. Ada beberapa cara untuk menggoreskan kultur pada agar cawan yaitu:

a) Goresan langsung

b) Goresan kuadran

c) Goresan radian

2. Koloni yang tumbuh pada agar cawan dapat dibedakan berdasarkan besarnya, warna

penampakan apakah keruh atau bening, bentuk penyebarannya atau margin dan bentuk

kemunculannya di atas agar dan bentuk permukaan.

5.2 Saran Untuk mendapatkan hasil praktikum yang baik diharapkan kepada semua praktikan

datang tepat waktu, mengikuti praktikum sesuai dengan arahan dari co. assisten dan tata tertib

yang ada dan memperhatikan keselamatan kerja selama kegiatan praktikum berlangsung.

DAFTAR PUSTAKA

Gaman, P.M. 1992. Pengantar Ilmu Pangan Nutrisi dan Mikrobiologi. Yogyakarta:

Gadjah Mada University Press

Stanier, Roger Y. 1982. Dunia Mikroba I. Jakarta: Bhratara Karya Aksara

ACARA IV

PENGARUH LINGKUNGAN

TERHADAP PERTUMBUHAN

MIKROBA

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Semua mikroorganisme memerlukan kondisi lingkungan tertentu untuk

pertumbuhan dan perbanyakannya. Terdapat variasi persyaratan pertumbuhan untuk spesies

yang berbeda. Laju perbanyakan bakteri variasi menurut spesies dan kondisi pertumbuhannya.

Pada kondisi optimal, hamper semua bakteri memperbanyak diri dengan pembelahan biner sekali

setiap 20 menit. Faktor lingkungan yang dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan mikroba

diantaranya adalah suhu, tekanan osmotik, sinar ultraviolet, dan pH.

Tiap-tiap mikroorganisme memiliki suhu pertumbuhan maksimal, suhu

pertumbuhan minimal dan suhu pertumbuhan optimal, yaitu suhu yang memberikan

pertumbuhan terbaik dan perbanyakan diri tercepat. Suhu optimal biasanya lebih dekat ke suhu

maksimal daripada suhu minimal. Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 0-

20oC disebut psikofil. Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 20-50

oC

sedangkan Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 50-100oC disebut thermofil.

Tersedianya oksigen juga dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.

Bakteri diklasifikasikan menjadi empat kelompok menurut keperluan oksigennya:

a. Aerob obligat, hanya dapat tumbuh jika terdapat persediaan oksigen yang banyak.

b. Aerob fakultatif, tumbuh dengan baik jika oksigen cukup, tetapi juga dapat tumbuh secara

anaerob

c. Anaerob obligat, hanya dapat tumbuh jika tidak ada oksigen.

d. Anaerob fakultatif, tumbuh sangat baik jika tidak ada oksigen, tetapi dapat tumbuh secara aerob.


Mahasiswa dapat mengetahui bagaimana pengaruh lingkungan terhadap pertumbuhan mikroba.

Mahasiswa dapat mengetahui klasifikasi mikroorganisme berdasarkan suhu pertumbuhan yang diperlukannya.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme dapat diklasifikasikan menjadi tiga kelompok berdasarkan suhu

pertumbuhan yang diperlukannya (Gaman, 1992).

a) Psikrofil (organisme yang suka dingin) dapat tumbuh baik pada suhu di bawah 200C, kisaran

suhu optimalnya adalah 100C sampai 20

0C.

b) Mesofil (organisme yang suka pada suhu sedang) memiliki suhu pertumbuhan optimal antara

200C sampai 45

0C.

c) Termofil (organisme yang suka pada suhu tinggi) dapat tumbuh baik pada suhu di atas 450C

kisaran pertumbuhan optimalnya adalah 500C sampai 60

0C.

Umumnya cahaya mempunyai daya merusak kepada sel mikroorganisme yang

tidak mempunyai pigmen fotosintesa. Sedang cahaya dengan gelombang pendek dapat

berpengaruh terhadap jasad hidup. Sinar dengan gelombang panjang juga mempunyai daya foto

dinamik dan daya biofisik, misalnya cahaya matahari. Jika energy radiasi diabsorbsi oleh sel

mikroorganisme, akan menyebabkan terjadinya ionisasi komponen sel. Ionisasi molekul tertentu

dari protoplasma dapat menyebabkan kematian, perubahan genetik atapun dapat pula

menghambat pertumbuhan (Suriawiria, 1993).

Radiasi mungkin didefinisi sebagai transmisi energy melalui ruangan. Semua

bentuk radiasi dapat merusak mikroorganisme, yang menyebabkan kematian atau mutasi. Dua

kelompok utama radiasi yang telah digunakan untuk mengendalikan mikroorganisme adalah

radiasi pengionan (sinar-X, sinar Gamma dan sinar katode) dan sinar ultraviolet. Jika digunakan

dengan intensitas yang cukup, cahaya ultraviolet efektif dalam mematikan bakteri, tetapi

mempunyai keterbatasan utama, cahaya ultraviolet telah digunakan untuk mengurangi populasi

mikroorganisme di udara dalam ruangan operasi, laboratorium bakteriologi, pabrik roti, rumah

makan, dan tempat-tempat makanan lainnya (Volk, 1988).

BAB III



A. Alat Praktikum Adapun alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

1. Tabung Reaksi

2. Kertas label

3. Kulkas

4. Incubator

5. Ose

6. Alatradiasi UV

B. Bahan Praktikum Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah : 1. NB

(Nutrien Broth)

2. Media NA ( Nutrient Agar) 3.

Bakteri E. Coli

3.2 Metode Praktikum A. Pengaruh Suhu

1. Sediakan alat dan bahan praktikum

2. Sediakan tiga tabung reaksi dan tempatkan pada rak tabung reaksi.

3. Masukkan 1 ml NB (Nutrien Broth) ke dalam ketiga tabung reaksi.

4. Masukkan bakteri E. Coli ke dalam ketiga tabung reaksi kemudian celupkan sehingga sampai

terjadi kekeruhan.

5. Tutup ketiga tabung reaksi dengan kapas kemudian diberi label.

6. Tabung no. 1 dimasukkan ke dalam suhu ruang dengan suhu 30oC

7. Tabung no. 2 dimasukkan ke dalam incubator dengan suhu 34oC

8. Tabung no. 3 dimasukkan ke dalam kulkas dengan suhu 0-20oC

9. Ketiganya didiamkan selama 2 x 24 jam.

10. Kembalikan alat dan bahan praktikum pada tempatnya.

B. Pengaruh Sinar Ultraviolet

1. Sediakan alat dan bahan praktikum

2. Masukkan bakteri E. Coli pada cawan petri yang berisi media Na dengan goresan kuadran.

3. masukkan media biakan kedalam alat radiasi Ultraviolet selama 10 menit dengan panjang

gelombang 365 Nm.

4. Masukkan ke dalam incubator dengan suhu 34oC dengan cara posisi cawan petri dibalik.

5. Incubasi selama 2 x 24 jam.

6. Kembalikan alat dan bahan praktikum pada tempatnya.

BAB IV


4.1 Hasil Praktikum

Adapun hasil praktikum yang diperoleh adalah sebagai berikut:

1. Hasil pengamatan pengaruh suhu

No Perlakuan (Inkubasi) Hasil

1 Inkubator ++

2 Suhu Ruang +

3 Kulkas -

2. Hasil Pengamatan Pengaruh Radiasi Sinar UV

No Perlakuan (waktu/panjang gelombang) Hasil

1 Kontrol +

2 10 menit/365 Nm +

3 15 menit/365 Nm +++

Keterangan :

- : Tidak Tumbuh

+ : Sedikit

++ : Sedang

+++ : Banyak

4.2 Pembahasan Pada percobaan kali ini dilakukan percobaan bagaimana pengaruh lingkungan terhadap

pertumbuhan mikroba. Adapun hal-hal yang diamati yaitu pengaruh suhu dan pengaruh sinar

ultraviolet. Mikroba seperti makhluk hidup lainnya memerlukan nutrisi pertumbuhan.

Pengetahuan akan nutrisi pertumbuhan ini akan membantu di dalam mengkultivasi, mengisolasi,

dan mengidentifikasi mikroba. Mikroba memiliki karakteristik dan ciri yang berbeda-beda di

dalam persyaratan pertumbuhannya. Ada mikroba yang bisa hidup hanya pada media yang

mengandung sulfur dan ada pula yang tidak mampu hidup dan seterusnya. Karakteristik

persyaratan pertumbuhan mikroba inilah yang menyebabkan bermacam-macamnya media

penunjang pertumbuhan mikroba.

Di dalam mikrobiologi, media diartikan sebagai bahan yang terdiri atas campuran nutrisi

atau zat-zat hara (nutrien) yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di

dalamnya. Selain itu, media juda dapat digunakan untuk isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-

sifat fisiologis dan biokimia, serta perhitungan jumlah mikoorganisme. Ada berbagai macam

jenis media pertumbuhan mikroba. Berdasarkan sumbernya, media di bagi atas dua yaitu media

sintetik dan media alami.

Dalam percobaan ini, medium yang digunakan untuk pertumbuhan mikroba adalah

Nutrien Broth dan media Na. Perbedaan pertumbuhan mikroba sangat ditentukan dengan

perlakuan yang diberikan, baik itu perlakuan dari analis atau perlakuan fisiko kimia yang

diberikan untuk mengamati kondisi optimum pertumbuhan mikroba.

Setiap spesies mikroba memiliki aktivitas yang berbeda-beda dalam melakukan

pertumbuhan. Pertumbuhan mikroba diartikan sebagai pembelahan sel atau semakin banyaknya

organisme yang terbentuk. Mikroba akan semakin cepat pertumbuhannya apabila ia diinkubasi

dalam suasana yang disukai oleh mikroba. Kondisi pertumbuhan suatu mikroba tidak akan lepas

dari faktor fisiko-kimia, seperti pH, suhu, tekanan, salinitas, kandungan nutrisi media, sterilitas

media, kontaminan dan paparan radiasi yang bersifat inhibitor.

Percobaan ini bertujuan untuk mengamati tentang bagaimana pertumbuhan mikroba yang

dibiakkan dalam media yang divariasikan suhu dan radiasi sinar UV. Berdasarkan suhu optimum

untuk pertumbuhan maka dapat dikelompokan menjadi 3 yaitu : 1. Psikrofilik (0-20oC), 2.

Mesofilik (20-50oC), 3. Termofilik (50-60

oC). Suhu merupakan faktor lingkungan yang sangat

menentukan kehidupan mikroorganisme, pengaruh suhu berhubungan dengan aktivitas enzim.

Suhu rendah menyebabkan aktiivtas enzim menurun dan jika suhu terlalu tinggi dapat

mendenaturasi enzim. Sehingga enzim akan rusak dan tidak dapat bekerja untuk mensintesis zat-

zat yang dibutuhkan mikroba. Dalam percobaan yang dilakukan variasi kondisi yang diberikan

pada mikroba di waktu inkubasinya adalah pada suhu kamar 30oC. Dari hasil percobaan ini

diketahui kondisi optimum mikroba sampel untuk tumbuh pada suhu 34oC, dimana pada suhu

tersebut media tampak keruh, kekeruhan menandakan banyaknya mikroba yang tumbuh dalam

media tersebut.

Di prosedur kedua ingin dilihat pengaruh pemaparan sinar UV terhadap pertumbuhan

mikroba di media, variasi waktu pemaparan dilakukan selama 10 menit dan 15 menit. Pada

dasarnya sinar UV memiliki panjang gelombang 365 Nm dan dapat membunuh mikroba dengan

memaparkan radiasi yang diserap oleh asam nukleat, asam nukleat merupakan DNA bagi

mikroba sehingga apabila DNA rusak maka mikroba tidak dapat melakukan pembelahan dan

akhirnya mati. Hipotesis awal yang dapat diambil adalah pertumbuhan mikroba akan semakin

menurun seiring dengan lamanya mikroba dipaparkan oleh sinar UV.

Hasil yang diperoleh pada percobaan menunjukkan ada perbedaan terhadap mikroba

yang telah dipaparkan sinar UV dengan variasi waktu tersebut, bahkan mikroba dapat tumbuh

dengan subur di dua media. Hal ini diakibatkan terjadinya kesalahan praktikan dalam melakukan

prosedur sehingga tidak diperoleh hasil sesuai teori.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan


berikut:

1. Semua mikroorganisme memerlukan kondisi lingkungan tertentu untuk

Pertumbuhan dan perbanyakannya.

2. Tiap-tiap mikroorganisme memiliki suhu pertumbuhan maksimal, suhu pertumbuhan minimal

dan suhu pertumbuhan optimal, yaitu suhu yang memberikan pertumbuhan terbaik dan

perbanyakan diri tercepat.

3. Mikroorganisme dapat diklasifikasikan menjadi tiga kelompok berdasarkan suhu pertumbuhan

yang diperlukannya yaitu:

a) Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 0-20oC disebut psikofil.

b) Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 20-50oC

c) Mikroorganisme yang mempunyai suhu optimum antara 50-100oC disebut thermofil.

4. Faktor lingkungan yang dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan mikroba diantaranya adalah

suhu, tekanan osmotik, sinar ultraviolet, dan pH.

5.2 Saran Untuk mendapatkan hasil praktikum yang baik diharapkan kepada semua praktikan

dating tepat waktu, mengikuti praktikum sesuai dengan arahan dari co. assisten dan tata tertib


DAFTAR PUSTAKA



Suriawiria, unus. 1993. Mikrobiologi Air. Bandung: Alumni

Volk, Wesley A. 1988. Mikrobiologi sDasar. Jakarta: Erlangga

ACARA V

ANALISIS KUANTITATIF

MIKROBA

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tanah, air dan udara merupakan tempat atau sarang mikroba. Untuk mengetahui

serta menghitung jumlah sel mikroba yang terkandung pada tempat-tempat tersebut tidaklah

mudah. Terdapat tahapan serta teknik tertentu untuk dapat menghitung jumlah mikroba yang

terkandung dalam suatu suspensi.

Dalam praktikum kali ini, dilakukan metode perhitungan, namun sebelum

melakukan perhitungan dilakukan pengenceran untuk memperkecil jumlah suspensi mikroba.

Terdapat dua cara dalam memperkecil jumlah suspensi mikroba, yaitu metode hitungan cawan

(Technique Plate Count/TPC) dan metode hitungan Most Probable Number/MPN.

Pemahaman tentang satuan dalam menghitung sel mikroba khususnya bakteri

adalah sangat penting. Pada hasil akhir penghitungan bakteri pada cawan digunakan satuan

CFUs/volume atau berat. CFUs adalah singkatan dari Coloni Forming Units yang artinya unit-unit/satuan pembentuk koloni. Yang dimaksud satuan pembentuk koloni adalah sel tunggal atau

sekumpulan sel yang jika ditumbuhkan dalam cawan akan membentuk satu koloni tunggal.


Mahasiswa dapat mengetahui jumlah mikroba dalam sampel dengan metode SPC (Standar Plate Count).

Mahasiswa dapat mengetahui bagaimana cara menghitung jumlah koloni bakteri.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Di dalam suatu populasi bakteri tidak semua sel mampu hidup terus, yang di

anggap sebagai sel hidup adalah sel yang mampu membentuk koloni di dalam agar biak atau

membentuk suspensi dalam larutan biak. Sel-sel yang mampu hidup terus inilah yang dihitung

dengan berbagai metode untuk menetapkan jumlah sel hidup (Schlegel, 1994).

Perhitungan kelompok bakteri Coli mempergunakan JPT (jumlah perkiraan

terdekat) MPN (Most Probable Number), dengan jumlah 3-3-3 atau 5-5-5 tanpa memperhatikan

apakah jenis-jenis di dalam kelompok tersebut termasuk Coli fekal/FCB (Fecal Coliform

Bacterial) ataupun non-FCB. Perbedaan kedua kelompok tersebut dilakukan berdasarkan

temperature inkubasi, yaitu untuk FCB (42 1oC) dan untuk non-FCB (37 1

oC) (Suriawiria,

1992).

BAB III




1. Tabung Reaksi

2. Pipet

3. Cawan petri

4. Kertas label

5. Incubator

6. Kapas

B. Bahan Praktikum Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

1. NACL

2. Media NA

3. Sampel (kuning telur yang sudah di pasteurisasi dengan suhu 37O

C selama 5 menit)


A. Cara pengenceran

1. Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan

2. Siapkan 5 tabung reaksi

3. Tabung no.1 berisi kuning telur yang sudah di pasteurisasi dengan suhu 37oC selam 5 menit

4. Tabung no.2,3,4 dan 5 dimasukan NaCl fisiologis sebanyak 9 ml

5. Dari tabung no. 1 yang berisi kuning telur diambil 1 ml dengan pipet kemudian masukkan pada

tabung no. 2 dan dicampur sampai homogen.

6. Dari tabung no. 2 diambil 1 ml kemudian masukkan pada tabung no. 3 dan dicampur sampai

homogen.

7. Begitu seterusnya dilakukan perlakuan yang sama terhadap tabung no. 3,4 dan 5.

8. Tentukan dua dari empat tabung yang akan digunakan

9. Siapkan Petridis kemudian ambil 1 ml dari ke 2 tabung tersebut dan tuangkan ke dalam Petridis.

10. Campurkan media Na (Nutrian Agar) dengan suhu 45oC kemudian tuangkan ke dalam Petridis

11. Letakkan Petridis pada bidang datar dan goyangkan perlahan-lahan sampai membeku

12. Beri label kemudian simpan pada incubator selama 2 x 24 jam dengan posisi terbalik

13. Bersihkan dan kembalikan alat dan bahan pada tempatnya.

B. Cara menghitung jumlah koloni

1. Setelah incubasi selama 2 x 24 jam kemudian kita menghitung jumlah koloni dengan bantuan

alat coloni counter

2. Pada saat menghitung jumlah koloni posisi Petridis dalam keadaan terbalik

3. Tekan pada bagian dimana tumbuhnya koloni dengan menggunakan alat pada coloni counter

4. Jika koloni berdempetan tetap dihitung satu koloni

BAB IV


4.1 Hasil Praktikum Adapun Hasil Praktikum yang diperoleh adalah sebagai berikut:

1. Hasil penghitungan jumlah bakteri

No Sampel Pengenceran Jumlah Koloni

1 Kuning telur Fasteorisasi

37oC selama 5 menit

10-1

205


37oC selama 5 menit

10-2

257


37oC selama 5 menit

10-3

275

2. Cara Penghitungan :

Rumus: per ml = koloni x 1/FP (Faktor Pengencer)

1. Diketehui :

Jumlah koloni : 205

Faktor Pengencer : 10-1

Jawab :

Rumus: per ml = koloni x 1/FP (Faktor Pengencer) per ml = 205 x 1/10-1 = 205 x 10

1 CFU/ml

= 20,5 dibulatkan menjadi 21 x 102 CFU/ml

2. Diketehui :

Jumlah koloni : 257


Jawab :


2 CFU/ml

= 257 dibulatkan menjadi 257 x 102 CFU/ml

3. Diketehui :

Jumlah koloni : 275


Jawab :


3 CFU/ml

= 275 x 103 CFU/m

4.2 Pembahasan

Dalam praktikum ini dilakukan percobaan Analisis Kuantitatif Mikroba, dengan

sampel kuning telur yang dipasteurisasi pada suhu 37oC selama 5 menit. Sebelum melakukan

perhitungan dilakukan pengenceran untuk memperkecil jumlah suspensi mikroba. Terdapat dua

cara dalam memperkecil jumlah suspensi mikroba, yaitu metode hitungan cawan (Technique

Plate Count/TPC) dan metode hitungan Most Probable Number/MPN.

Di dalam suatu populasi bakteri tidak semua sel mampu hidup terus, yang di

anggap sebagai sel hidup adalah sel yang mampu membentuk koloni di dalam agar biak atau

membentuk suspensi dalam larutan biak. Sel-sel yang mampu hidup terus inilah yang dihitung

dengan berbagai metode untuk menetapkan jumlah sel hidup

Banyak tersedia metode untuk menganalisa jumlah mikroorganisme dalam suatu

sampel, diantaranya adalah plate count (spread plate, pour plate, spiral plate), MPN,

menghitung langsung dengan Petroff Hausser ataupun cara lainnya (misalnya aktivitas

metabolik, turbidimetri, berat kering dll.). Namun dalam percobaan ini lebih ditekankan pada

metode yang memerlukan penghitungan koloni pada cawan petri, seperti membrane filtration,

spread plate, pour plate.

Pemahaman tentang satuan dalam menghitung sel mikroba khususnya bakteri

adalah sangat penting. Pada hasil akhir penghitungan bakteri pada cawan digunakan satuan

CFUs/volume atau berat. CFUs adalah singkatan dari Coloni Forming Units yang artinya unit-unit / satuan pembentuk koloni, yang dimaksud satuan pembentuk koloni adalah sel tunggal atau

sekumpulan sel yang jika ditumbuhkan dalam cawan akan membentuk satu koloni tunggal.

Pada dasarnya sel tersebar homogen pada sampel, tetapi ada jenis bakteri yang

memang pembelahan selnya dapat terpisah baik sehingga tersebar merata tiap sel dan ada pula

bakteri yang setelah membelah sel anakan masih menempel pada induknya, seperti halnya yang

terjadi pada streptococcus, diplococcus, sarcina dll. sehingga penyebarannya berkelompok-

kelompok. Pada jenis yang seperti ini jika tersebar merata dalam kelompok-kelompok sel maka

pertumbuhan menjadi koloni tunggal bukan berasal dari satu sel saja melainkan dari beberapa

sel.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan


berikut:

1. Di dalam suatu populasi bakteri tidak semua sel mampu hidup terus, yang di anggap sebagai sel

hidup adalah sel yang mampu membentuk koloni di dalam agar biak atau membentuk suspensi

dalam larutan biak. Sel-sel yang mampu hidup terus inilah yang dihitung dengan berbagai

metode untuk menetapkan jumlah sel hidup.

2. Berbagai metode untuk menetapkan jumlah sel hidup, Metode Penghitungan tersebut adalah :

a) Metode hitung bakteri

b) Metode total bakteri hidup dan mati

c) Metode pour plate d) Metode spread plate e) Metode Most Probable Plate 3. Jumlah koloni bakteri yang hidup juga dipengaruhi oleh pengencernya.

5.2 Saran

Untuk mendapatkan hasil praktikum yang baik diharapkan kepada semua praktikan



DAFTAR PUSTAKA

Schlegel, Hans G. 1994. Mikrobiologi Umum. Yogyakarta: Gajah Mada University

Press

Suriawiria, unus. 1993. Mikrobiologi Air. Bandung: Alumni

ACARA VI

PENGECATAN GRAM

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Metode pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian Gram, pada tahun

1884. Dengan metode pengecatan Gram, bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri

Gram positif dan Gram negatif berdasarkan reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi

atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya. Oleh karena itu, pengecatan

Gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti

Mycoplasma sp. Bakteri yang dapat mengikat cat, menjadi berwarana violet jika dilihat

dengan mikroskop, adalah bakteri gram positif. Bakteri yang lain yang tidak dapat mengikat cat

adalah bakteri gram negatif dan nampak berwarna merah muda.

Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pengecatan yang dikerjakan di

laboratorium mikrobiologi untuk kepentingan identifikasi mikroorganisme. Morfologi

mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa dan sifatnya yang khas terhadap pengecatan

tertentu (pengecatan Gram) dapat digunakan untuk identifikasi awal. Pemeriksaan ini dapat

dilakukan dengan cepat dan biaya murah serta, dalam kasus tertentu, dapat membantu dokter

untuk memulai terapi suatu penyakit tanpa menunggu hasil kultur.


Mahasiswa dapat mengetahui dan memahami morfologi bakteri dengan cara melakukan pengecatan.

Mahasiswa dapat mengetahui cat yang umum dipakai dalam pengecatan bakteri yaitu pengecatan Gram.

Mahasiswa dapat mengetahui perbedaan antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Berdasarkan tehnik pengecatan gram, dibagi menjadi bakteri gram positif

(dinding sel peptidoglikan tebal) dan gram negatif ( dinding sel peptidoglikan tipis dan tertutup

oleh sebuah lapisan lipopolisakarida). Christian gram, bakteriolog Denmark, pada tahun 1843

mengelompokkan bakteri menjadi dua golongan berdasarkan reaksi pengecatan. Kedua golongan

tersebut, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif adalah bakteri

yang tidak dapat dihilangkan warnanya dengan etil alkohol 95% setelah pengecatan dengan

violet dan iodine menghasilkan warna ungu. Bakteri gram negatif adalah bakteri yang warnanya

mudah dihilangkan dengan cara sama sehingga sulit dilihat oleh mikroskop, oleh karena itu perlu

pengecatan counterstain untuk memunculkan warna merah sehingga dapat dilihat oleh

mikroskop (Sudjino, 2007).

Sel bakteri secara keseluruhan atau bagian dari sel memungkinkan untuk di cat

dengan berbagai cat atau warna. Kemampuannya untuk mengikat cat tergantung atas spesies

bakteri. Cat yang umum dipakai adalah cat Gram. Bakteri yang dapat mengikat cat, menjadi

warna violet jika dilihat dengan mikroskop adalah bakteri Gram positif, bakteri yang lain yang

tidak dapat mengikat cat adalah bakteri Gram negatif dan Nampak berwarana merah muda

(Gaman, 1992).

BAB III




1. Tabung Reaksi

2. Pipet

3. Cawan petri

4. Kertas label

5. Incubator

6. Kapas

7. Slide Glass

8. Ose

9. Lampu Bunsent

10. Mikroskop Cahaya

11. Jembatan Pengecatan

B. Bahan Praktikum Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

1. NACL

2. Media NA

3. Sampel (Kuning telur yang sudah di pasteurisasi dengan suhu 37O

C selama 5 menit)

4. Crystal Violet (Cat Dasar)

5. Cairan Lugol (Cat Penguat)

6. Etanol 96%

7. Vuchen


1. Siapkan alat dan bahan

2. Ambil satu tetes NaCl fisiologis dengan memakai pipet kemudian teteskan pada slide.

3. Ambil biakan bakteri atau mikroba (satu mata ose) kemudian campur dengan merata dengan

NaCl, kemudian setelah tercampur lakukan fiksasi (pemijaran) di atas api, panaskan sampai

mengering agar mikroba mati.

4. Setelah itu lakukan pengecatan dengan:

a. Gentian violet atau Kristal violet yang berguna sebagai cat dasar

Caranya:

preparat yang sudah kering letakkan pada jembatan pengecatan, dan teteskan 1 tetes kemudian ratakan dan diamkan selama satu menit

lakukan pencucian dengan air mengalir dan tiriskan b. pengecatan dengan lugol sebagai cat penguat dengan cara yang sama seperti pada pengecatan

pertama.

c. Pengecatan dengan Etanol 96 % sebagai cat peluntur dengan cara yang sama seperti pada

pengecatan sebelumnya dengan waktu 15 detik

d. Pengecatan dengan vuchin dengan cara sama seperti pengecatan sebelumnya dengan waktu 90

detik atau 2 menit

5. Lakukan pengeringan dengan diangin-anginkan sampai kering

6. Lakukan pemeriksaan warna morfologi morfologi di bawah mikroskop cahaya dengan

pembesaran 100x oil emertion sebanyak satu tetes untuk memperjelas objek.

7. Bersihkan dan kembalikan alat dan bahan pada tempatnya.

BAB IV


4.1 Hasil Praktikum Hasil pengamatan dengan mikroskop (pembesaran 100 x dan ditambahkan oil imersil

sebanyak satu tetes).

4.2 Pembahasan Dalam praktikum ini dilakukan percobaan mengenai Pengecatan Gram. Metode

pengecatan pertama kali ditemukan oleh Christian Gram, pada tahun 1884. Pengecatan Gram

merupakan salah satu teknik pengecatan yang dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk

kepentingan identifikasi mikroorganisme. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang

diperiksa dan sifatnya yang khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan Gram) dapat

digunakan untuk identifikasi awal.

Dalam pewarnaan mikroba, dapat digunakan satu jenis zat pewarna, cara ini

disebut pewarna sederhana. Zat-zat warna yang biasa digunakan untuk pewarna sederhana

misalnya biru methilen. Pewarna bakteri dapat dibedakan atas beberapa golongan yaitu :

pewarnaan sederhana, pewarnaan diferensial, pewarnaan structural, dan pewarnaan untuk

menguji adanya komponen tertentu di dalam sel.

Dalam praktikum ini dilakukan empat kali pengecatan yaitu: cristal violet yang

berfungsi sebagai cat dasar, setelah itu pengecatan dilakukan dengan cairan lugol yang berfungsi

sebagai cat penguat kemudian dengan etanol 96% sebagai cat peluntur dan pengecatan dengan

vuchin yang berfungsi sebagai cat penutup.

Sel bakteri secara keseluruhan atau bagian dari sel memungkinkan untuk di cat

dengan berbagai cat atau warna. Kemampuannya untuk mengikat cat tergantung atas spesies

bakteri. Cat yang umum dipakai adalah cat Gram. Dengan metode pengecatan Gram, bakteri

dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri Gram positif dan Gram negatif berdasarkan

reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh

komposisi dinding selnya. Oleh karena itu, pengecatan Gram tidak bisa dilakukan pada

mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp.

Setelah melakukan praktikum dan diamati dengan mikroskop dengan pembesaran

100 x dan ditambahkan oil imertion sebanyak satu tetes untuk memperjelas objek pada

mikroskop sehingga dihasilkan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri yang dapat

mengikat cat menjadi berwarana violet jika dilihat dengan mikroskop, adalah bakteri gram

positif. Bakteri yang lain yang tidak dapat mengikat cat adalah bakteri gram negatif dan nampak

berwarna merah muda.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan


berikut:

1. Bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri Gram positif dan Gram negatif

berdasarkan reaksi atau sifat bakteri terhadap pengecatannya.

2. Bakteri yang dapat mengikat cat, menjadi warna violet jika dilihat dengan mikroskop adalah

bakteri Gram positif dan bakteri yang lain yang tidak dapat mengikat cat adalah bakteri Gram

negatif dan nampak berwarana merah muda.

5.2 Saran

Untuk mendapatkan hasil praktikum yang baik diharapkan kepada semua praktikan



DAFTAR PUSTAKA



Sudjino, dkk. 2007. Biologi. Jakarta: Intan Pariwara

Documents

LAPORAN TETAP PRAKTIKUM.pdf