LE BOUILLON NITRATÉ :Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

1. Intérêt

Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE.

2. Composition

Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO3 (1% = 1 g / 100 mL)

3. Principe

Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO3- sont réduits par la nitrate

réductase :- Soit en NITRITES NO2

- : glucose produits oxydés + n e-

NO3- + ……… + ……… NO2

- + ………nitrate réductase(stade nitrites)

- Soit en DIAZOTE N2 : glucose produits oxydés + n e-

NO3- + ……… + ……… N2 + ………

nitrate réductase(stade diazote)

LE BOUILLON NITRATÉ :Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

-LE RÉACTIF DE GRIESS :

Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + -naphtylamine (nitrite 2)

Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO2- :

Réactif de Griess + ions nitrites NO2- COMPLEXE ROUGE

-LE ZINC (Zn) :

Composition : Zinc pur (en poudre)

Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO3- :

Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO3- (éventuellement présents)

en ions nitrites NO2-. Ces ions nitrites NO2

- peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge

4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)

5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube)

LE BOUILLON NITRATÉ :Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

Réactif de Griess

(nit1 + nit2)

Zinc

Observation : coloration rougeInterprétation : présence de NO2

- issus de la réduction des NO3

-

Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO2-)

Observation : coloration rougeInterprétation : le Zn a réduit les NO3

- encore présents en NO2

- qui sont révélés par le réactif de Griess. => Pas de réduction de NO3

- en N2

Conclusion : NITRATE REDUCTASE -

Observation : pas de coloration rougeInterprétation : pas de présence de NO2

- issus des NO3-. Les NO3

- été réduits en N2 par la bactérieConclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N2)

NIT 1

NIT

2