Les anaérobiesLes anaérobies

Aspect microscopique

Bacilles Gram +présentant une spore

Spore très résistante, non détruite à 100°C pendant 3 à 5 heures.

À l’EF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche

ClassificationElle se fait selon leur habitat, leurs caractères morphologiques et culturaux et leur pouvoir pathogène. On distingue:

la flore tellurique: bactéries saprophytes du sol et commensales des cavités naturelles de l'homme et des animaux.

Exemple : le genre Clostridium. Règle appliquée pour les conserves industrielles : 10

min à 120°C.

la flore de Veillon: bactéries commensales des voies respiratoires, digestives et génitales de l'homme et des animaux et qui ne peuvent survivre dans le sol, non sporulées.

Exemples : nombreux genres comme Bacteroides, Peptococcus, Mobiluncus, Fusobacterium.

Clostridium tetani

Forme végétative : bacilles à bouts carrés en chaînettes plus ou moins longues Gram +

Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement d’un nouveau Clostridium tetani.Présent dans le sol et les poussières tétanos

Pouvoir pathogène

Le tétanos est secondaire à l'introduction dans l'organisme de spores de Clostridium tetani consécutive à un traumatisme.

Si l'anaérobiose est suffisante (plaies profondes, multiplication de bactéries aérobies associées), les formes végétatives apparaissent par germination des spores.

Cependant, la multiplication bactérienne reste localisée à la porte d'entrée, la maladie est uniquement due à la toxine.

La toxine, libérée au cours de la multiplication entre par endocytose par les terminaisons nerveuses du site infecté.

Elle empêche la libération d'inhibiteurs du motoneurone (glycine, GABA) et provoque une paralysie spastique. (muscle restant en contraction)

Clostridium botulinum

Observation microscopique

Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),

Gram +, Formant une spore ovalaire

terminale déformante.

Clostridium botulinum est l'agent d'une intoxication alimentaire, le botulisme. La maladie n’est pas due à la bactérie mais à l’ingestion de sa toxine présent dans un aliment mal stérilisé.C’est une toxine thermolabile (sensible à la chaleur), il y a risque de contamination uniquement lors de l’ingestion d’aliments non chauffés.L'intoxication se traduira par une paralysie des muscles lisses essentiellement.

Caractères biochimiques:ANS, glucose +, mobile.

Clostridium perfringens

Observation au MEB

Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),

Gram +, Formant une spore ovalaire

terminale déformante.

Responsable de gangrènes gazeuses post-traumatiques, de toxi-infections alimentaires et d'entérites nécrosantes.C'est l'anaérobie le plus répandu dans l'environnement (sol, eau, air, poussières).C'est aussi un commensal des flores de l'intestin, du vagin ou des voies aériennes supérieures de l'Homme et des animaux.Sa présence dans les eaux est un critère de contamination fécale.

Angine fuso-spirochétienne de Vincent

Angine ulcéro-nécrotique accompagnée d'une fièvre élevée et d'une réaction ganglionnaire de voisinage.

Le diagnostic est bactérioscopique avec la présence d'une bactérie de type Fusobacterium et d'une bactérie de type spirochète.

Le traitement de cette angine est simple à base de pénicilline G.

Les milieux de culture des Clostridium

Milieu de SCHAEDLER

Bouillon trypticase soja 10 gPolytone Sg glucose 5 gExtrait de levure 5 g

Tris-hydroxyméthylaminométhane 3 g Hémine 0,01 gL-cystéine 0,40 g ED qsp 1 L

Source N et de C, de vitamines

Acide aminé, réducteurpH = 7,6

Ce milieu peut-être : enrichi par addition de vitamine K3. sélectif par addition d'inhibiteurs . solide par addition d'agar : gélose Schaedler.

Bouillon ou gélose Schaedler simple: bactéries non exigeantes du genre Clostridium . Bouillon ou gélose enrichi(e): bactéries exigeantes de la flore de Veillon. Milieu de culture utilisé pour les bactéries anaérobies exigeantes : gélose Schaedler + vitamine K3 + sang frais à une concentration de 5%.

Utilisation:

Facteur de croissance (synthèse des cytochromes)

Tampon (maintien du pH constant)

Milieu de Rosenow cystéineComposition

Peptone trypsique 10 gExtrait de viande de bœuf 3 gChlorure de sodium 2 g Chlorhydrate de Cystéine 0,3 gGlucose 2 gIndicateur d’Andrade 10 mL(fushine acide dans de l’ED) ED qsp 1 L

Source N et de C

Acide aminé, réducteur

Source énergétique carbonée

pH = 7,2

Ensemencement

Sources minérales

Régénérer le milieu 20 min au BM à 100°C pour assurer l’anaérobie

La présence d’un réducteur renforce l’anaérobie Ensemencer en profondeur le tube en évitant les

bulles d’air Recouvrir de paraffine fondue Incuber 24 heures à 37°C.

Ajouter dans le tube:Un morceau de marbreUn morceau de cervelle de boeuf

Indicateur d’oxydo réduction

Milieu MRS

Composition

Peptone trypsique de caséine 15 gMacération de viande 500 mLExtrait de levure 5 gAcétate de sodium 5 gCitrate d’ammonium 2 gPhosphate bipotassique 2,4 g Tween 80 1 mLSulfate de magnésium 0,2 gSulfate de manganèse 0,05 gGlucose 20 gAgar 12 g ED qsp 1 L

Source N et de C, vitamines et minéraux, d’acides aminés

Apport d’acides gras

pH = 6,5 inhibiteur

Source minérale

Inhjbiteurs (concentrations )

Ensemencement

Isolement par la technique des quadrants et incubation sous atmosphère à CO2 .

C’est un milieu d’isolement sélectif et enrichi des Lactobacillus utilisé pour l’isolement et le dénombrement de ces bactéries dans les produits laitiers.

Source énergétique de C

Sources minérales

Coloration rose à rouge carmin au niveau de la cervelle fermentation du glucose

Pas de coloration rose glucose -

Milieu de Rosenow CystéineLecture des milieux

Décoloration du milieu voir virage au vert les bactéries sont réductrices

Apparition de bulles, décollement de la paraffine production de gaz par les bactéries

Gélose de Schaedler en anaérobioseType respiratoire

Culture sur la hauteur du tube, à l’exception de la surface en contact avec l’O2 de l’air bactéries ANS.bactéries ANS.

Colonies blanches contours réguliers, bombées,type S culture sur milieu riche en culture sur milieu riche en anaérobioseanaérobiose

n° impair:Bacilles Gram - culture sur milieu culture sur milieu riche , bactéries riche , bactéries exigeantes faisant exigeantes faisant partie de la flore de partie de la flore de veillonveillon

n° pair:Bacilles Gram + sporogène bactéries faisant bactéries faisant partie de la flore partie de la flore tellurique.tellurique.

Colonies blanches contours réguliers, bombées, type S culture sur milieu riche culture sur milieu riche en anaérobioseen anaérobiose

Gélose MRS

Petites colonies blanches caractéristiques des Lactobacillus

Culture sur les boîtes mises en anaérobiose et sous atmosphère à CO2 bactéries cultivant en bactéries cultivant en absence d’Oabsence d’O22 nécessaire à la fermentation du nécessaire à la fermentation du lactose du lait lactose du lait production d’acides production d’acides responsables de l’apparition du caillé.responsables de l’apparition du caillé.

Frottis du yaourt

Coques en chaînette Gram + caractéristiques des Lactococcus

Bacilles Gram + caractéristiques des Lactobacillus

La fermentation du yaourt est due à deux types de bactérie provoquant le caillé du lait par production d’acides lors de l’utilisation du lactose.