Les BacillusLes Bacillus

Aspect microscopique

Bacilles Gram +présentant une spore

Distinction de trois groupes:

Bacillus à spore ovale non déformante,

Bacillus à spore ovale déformante,

Bacillus à spore ronde déformante

À l’EF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche

Observation au MEB

Forme végétative : bacilles à bouts arrondis

Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement d’un nouveau Bacillus.

Bacillus anthracis

Observation microscopique

Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),

Gram +, Formant une spore ovalaire

centrale non déformante. immobiles capsulé

Il élabore une toxine comprenant trois facteurs agissant en synergie:

facteur I oedématogène facteur II immunogène facteur III létal

Caractères biochimiques:AAF, glucose +, non exigeant, VP + (caractère de la classification des Bacillus), gélatinase +, uréase -, maltose +, saccharose +

Les milieux de culture des Bacillus

Gélose à l’amidon

Gélose nutritive à 1% d’amidon de riz ou de pomme de terre

Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne.Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose

Incuber 24 heures à 37°C

Gélose à l’oeuf

Gélose trypticase-soja à 10% de jaune d’œuf stérile

Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne.Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose

Incuber 24 heures à 37°C

Milieu TCAComposition

Peptone trypsique de caséine 20 gChlorure de sodium 5 g Sulfite de sodium 0,5 gCystine 0,5 gRouge de phénol 0,017 gGélose 2,5 g ED qsp 1 L

Source N

Source de C et N

Indicateur de pH

pH = 6,8 à 7

Ensemencement

Sources minérales

Régénérer les milieux 20 min au BM à 100°C.Refroidir les tubes à 45°C.Incorporer le sucre désiré pour une concentration

finale de 1% (10g.L-1).Solidifier les milieux sous l’eau froide.Ensemencer par piqûre centrale.Incuber 24 heures à 37°C.

Milieu de Mossel

Composition

Extrait de viande 1 gPeptone 10 gMannitol 10 gChlorure de sodium 10 g Rouge de phénol 0,025 gAgar 12 g ED qsp 1 L

Source N

Indicateur de pH

pH = 7,1

Sources minérales

Sources de carbone

Au moment de l’emploi, ajouter à 90 mL de milieu: 10 mL de jaune d’œuf dilué au ½ dans de l’eau

physiologique 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine à 1 mg/mL

(Inhibiteur)

Ensemencement

Isolement par la technique des quadrants.

C’est un milieu d’isolement sélectif des Bacillus de l’espèce Bacillus cereus à partir des aliments ou des selles.

Gélose au lait

Gélose blanche à 2,5 à 3% d’agar en solution dans l’eau dans laquelle on ajoute la même quantité de lait stérile.

Ensemencer en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose

Incuber 24 heures à 37°C

Recouvrir de lugol la gélose après culture Pas de coloration noire autour

des cultures: absence d’amidon il a été hydrolysé par les bactéries, test positifColoration noire autour des cultures: présence d’amidon test négatif

Gélose à l’amidonLecture des milieux

Gélose à l’œuf Lecture directe:Éclaircissement du milieu de culture les bactéries ont hydrolysé les lécithines du jaune d’œuf , test positif

Pas de changement du milieu test négatif

Gélose Mossel

Colonies rouges entourées d’un halo opaque et blanchâtre suspicion de Bacillus cereus, LECITHINASE +++

Présence d’un halo: hydrolyse des lécithines par une lécithinase, en choline soluble et diglycéride insoluble qui précipite dans le milieu en formant un trouble.

Colonies rouges pas d’utilisation de mannitol par les bactéries MANNITOL -

Lecture directe après cultureHalo clair autour de la culture hydrolyse de la caséine, test positif

Pas de modification du milieu autour de la culture test négatif, la caséine n’est pas hydrolysée.

Gélose au lait

Correction du TP1er jour

N° impair: Bacilles en chaînette Gram +

N° pair: Bacilles en chaînette Gram + présence d’une spore déformante dans le bacille.

2nd jourN° pair: présence d’une spore centrale ovoïde déformanteColoration des spores au vert de

Malachite

Lecture du VF

N° impair: culture en surface AS

N° pair: culture dans tout le tube AAF

1ère orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogène), AS orientation vers le genre Bacillus.

1ère orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporogènes, AAF orientation vers le genre Bacillus.

Lecture des milieux CTA

N° impair

glucoseVirage de l’indicateur

de pH glucose +

xyloseVirage de l’indicateur

de pH xylose +

arabinoseVirage de l’indicateur

de pH arabinose +

N° pair

glucoseVirage de l’indicateur

de pH glucose +

xylosePas de virage de

l’indicateur de pH xylose -

arabinosePas de virage de

l’indicateur de pH arabinose -

Lecture de la gélose à l’amidon (n°pair et impair)

Pas de coloration autour de la culture absence d’amidon qui a été hydrolysée par l’-amylase des Bacillus.

Lecture de la gélose au lait (n°pair et impair)

Présence d’un halo d’éclaircissement autour de la culture de la caséine a été hydrolysée par les protéases des Bacillus.

Lecture de la gélose à l’œuf

Présence d’un halo clair autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.

n° pair

n° impairPas de modification autour de la culture les lécithines n’ont pas été hydrolysées.

Lecture de la gélose de Mossel

n° pair Colonie rose pas d’utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL -

Présence d’un halo clair autour de la culture les protéines du jaune d’oeuf ont été hydrolysées par les protéases des Bacillus.

Présence d’un halo opaque autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.

Suspicion de Bacillus cereus

Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, lécithinase, protéases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractéristique sur Mossel Bacillus cereus.

Lecture de la gélose de Mossel

n° impair

Colonie jaune Utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL +

Absence d’un halo opaque autour de la culture les lécithines n’ont pas été hydrolysées par les Bacillus.

Il s’agit d’un Bacillus autre que Bacillus cereus

Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, protéases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre).