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I.A. Ph.D LILLIANA HOYOSProfesora Asistente
Universidad Nacional de Colombia
Fotos: Farfán, 2009
LINA FARFÁNMic. Agrícola y veterinaria PUJ
Universidad Nacional de Colombia
Asohofrucol Universidad Nacional de Colombia
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural
Presente en cultivos de Maracuyá y Gulupa.
Causada por un complejo de bacterias:
Xanthomonas spp.
Enfermedad muy limitante en gulupa:
- Erradicación de cultivos.
- de ganancias.
- Costos de producción : Aplicaciones químicas.
(Agrios, 2005) (Benítez et al, 2009)
Xanthomonadales
Xanthomonas
Enterobacteriales
Erwinia y Pantoea
PseudomonadalesBurkholderiales
Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas.
Resistencia
Estreptomicina (Quezado et al., 2003)Validamicina (Ishikawa et al., 2004)
Oxitetraciclina (Mac Manus et al., 2002)Productos cúpricos (Spotts & Cervantes, 1995)
Aplicación de productos químicos.
Cultivo MaracuyáAntibióticos
Estreptomicina KasugamicinaValidamicina
Oxitetraciclina
Productos Cúpricos
Oxicloruro de CobreSulfato de Cobre
Resistencia
Natural Adquirida
Plásmido pEa34 Genes cop.
Evaluar la sensibilidad de cepasbacterianas asociadas a bacteriosis engulupa, a algunos antibióticos y productoscúpricos de uso agrícola.
• Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas abacteriosis en cultivos gulupa, frente a seis antibióticos:Ampicilina, Cloranfenicol, Kasugamicina, Oxitetraciclina,Sulfato de estreptomicina, Sulfato de Kanamicina yValidamicina.
• Establecer la sensibilidad de las bacterias asociadas abacteriosis en cultivos gulupa, frente a dos productoscúpricos de uso agrícola: Sulfato de cobre y Oxiclorurode cobre.
Material Biológico
119 cepas bacterianas
Antioquia - Cundinamarca Boyacá -Caldas
Cauca - HuilaMeta - Risaralda
Santander - Valle del Cauca
Xanthomonas spp.Erwinia spp.Pantoea spp.
Burkholderia spp.Stenophomonas spp.
Siembra M. Biológico (Shenge et al., 2006)
Preparación suspensiones bacterianas
1 X 10 8 UFC/mL
Siembra de 3 gotas 10µl en superficie del
medios suplementados.
Control: AN
Incubación 28ºC/ 48 ‘72h.
Evaluación de sensibilidad
Método Incorporación en Agar(Quezado et al., 2003; Loper et
al.,1991)
P. Cúpricos
Sul. y Oxic. de cobre=750ppm
Siembra suspensiones bacterianas
Antibióticos
Sul. Estr., Oxitetrac. y Kanam.= 25ppm Cloran. y Ampi.=
50ppm Kasug. y Valid.=
250ppm
Sensible: No crecimiento
Tolerante: Crecimiento
No. de cepas sensibles y tolerantes a c/producto.
Sensibilidad de las cepas, de acuerdo al número de antibióticos evaluados.
No. cepas tolerantes por
departamentos.
Determinación de antibiotipo aislamientos (Damaso, 1990).
Resistencia: Mecanismos Bioquímicos (Castro, 1995).
A.
Aislamientos sensibles (A)
B.
C.
Aislamientos Resistentes oinsensibles (B)
Control (C)
Antibiótico Evaluado
Concentración Evaluada
No. Cepas Sensibles
Géneros Bacterianos Sensibles
No. Cepas Resistentes
Géneros Bacterianos Resistentes
Sulfato de Kanamicina
25ppm 89(73%)
4 Bk, 40 Er, 9 Pt, 5 Ps, 13 Xs, 10 NI.
30(27%)
1 Bk, 14 Er, 3 Pt, 2 Ps, 6 Xs, 4 NI.
Sulfato de Estreptomicina
25ppm 95(79%)
5 Bk, 44 Er, 10 Pt, 5 Ps, Xs, 10 NI.
24(21%)
10 Er, 2 Pt, 2 Ps, 5 Xs, 4 NI.
Cloranfenicol 50ppm 100 (83%)
4 Bk, 45 Er, 11 Pt, 7 Ps, 16 Xs, 9 NI.
19(17%)
1 Bk, 9 Er, 1 Pt, 3 Xs, 5 NI.
Ampicilina 50ppm 14(13%)
1 Bk, 7 Er, 3 Pt, 1 Ps, 2 Xs.
105(87%)
4 Bk, 47 Er, 9 Pt, 6 Ps, 17 Xs, 14 NI.
Kasugamicina 200ppm 61(49,5%)
4 Bk, 25 Er, 6 Pt, 5 Ps, 8 Xs, 7 NI.
58(50,5%)
1 Bk, 29 Er, 6 Pt, 2 Ps, 11 Xs, 7 NI.
Validamicina 200ppm 5(4,5%)
1 Er, 1 Pt, 1 Ps, 2 NI.
114(95,5%)
5 Bk, 53 Er, 11 Pt, 6 Ps, 19 Xs, 12 NI
Oxitetraciclina 25ppm(22 cepas)
18(70%)
3Bk, 2Er, 2Pt, 3Ps, 8Xs.
8(30%)
2Bk, 3Er, 1Pt, 2Xs.
Bk: Burkholderia sp.; Er: cf Erwinia sp.; Pt: Pantoea sp.; Ps: Pseudomonas sp.; Xs: Xanthomonas sp.; NI: No identificados.
Resist. Cromosómica o extracromosómica.
(Damaso, 1990)
Concentraciones(Sales et al., 2005)
Resistencia en bacterias epifitas.
(Sobiczewski et al., 1991)
Resistencia desde 60s(Macmanus et al., 2002)
Xanthomonas sp.Pseudomonas sp.
E. amylovora.(Misavage et al., 1990; Spotts &
Cervantes, 1995; Russo et al., 2008)
Kasugamicina
Sul. Estreptomicina
Factor R (Remo, 1993).
Impermeabilidadde membrana
(Remo, 1993).Cloranfenicol
Resis. Natural (Linares, 2002)
β- lactamasas(Damaso, 1990)
Ampicilina
Resist. Natural X. campestris pv. campestrisRalstonia solanacearum
(Ishikawa et al., 2004)
Validamicina
0
20
40
60
80
100
120
Sulfato de Cobre Oxicloruro de cobre
No. de aislam
ientos
Producto evaluado
Sensibles
Resistentes
Resistencia de Xanthomonas sp. a [ ]
de 1-50ppm.(Quezado et al., 2003; Maneguim
et al., 2007)
[ ] denaturaciónde proteínas
(Agrios, 2005)
P. syringaeresistente 160ppm
(Spotts & Cervantes, 1995)
Sulfato de cobre
Aplicaciones constantes
(Ministerio de Agricultura, 2007)
Propagación de genes de resistencia: saprófitos
y patógenos.(Quezado et al., 2003)
Iones de cobre libres.
(Lee et al., 1993)
Genes cop(Cooksey, 1993;
Llacer, 2000)
Oxicloruro de cobre
0
5
10
15
20
25
30
35
40
6Antibioticos
5antibioticos
4antibioticos
3antibioticos
2antibioticos
1antibiotico
0antibioticos
No. de Ce
pas
No. de Antibióticos
Resistencia cruzada (Remo, 1993). Factores R heterogénicos (Dámaso, 1990).
DepartamentoNo. de
aislamientos No. Aislamientos TolerantesSK SE CL AM KA VA OX
Antioquia 2 0 0 0 2 1 2 0Boyacá 11 2 1 2 11 5 9 0Caldas 4 0 0 1 2 2 4 0
Cundinamarca 70 10 8 11 52 26 59 16Huila 5 1 0 2 5 3 5 0Meta 2 2 2 1 2 2 2 0
Risaralda 3 2 0 1 3 3 3 0Tolima 9 5 4 1 9 6 9 1
Valle del Cauca 13 8 8 0 11 8 13 1
Total 119 30 23 19 97 56 106 18SK: Sulfato de kanamicina; SE: Sulfato de estreptomicina; CL: Cloranfenicol; AM: Ampicilina; KA: Kasugamicina; VA:Validamicina; OX; Oxitetraciclina
Sul. estreptomicina e hidr. Cobre.
(1000-3000 ppm)(Castillo & Granada, 1995)
Control X. campestrispv. passiflorae en
plantas de maracuyá.(Castillo & Granada, 1995)
Valle del Cauca
Más empleados en plantaciones gulupa.
(Angulo, 2009)
Kasugamicina
Prod. cobre
Aplicaciones Resistencia: cultivos de
manzano.(Cooksey, 1990)
Antioquia, Caldas, Huila y Risaralda =
Resistencia
Sul. estreptomicina
Fotos: Farfán, 2009
Con base en las menores concentracionesempleadas, Sulfato de estreptomicinapresento el mayor porcentaje de control deaislamientos bacterianos.
Se encontró, que los mayores índices detolerancia a antibioticos se presentaron enlas evaluaciones con ampicilina yvalidamicina.
Se obtuvo aislamientos tolerantes aoxitetraciclina, pertenecientes a losgéneros de Burkholderia spp., Erwinia spp.,Pantoea spp. y Xanthomonas spp.
Se encontró, que Sulfato de cobre ejerciócontrol sobre la totalidad de la poblaciónevaluada.
Fotos: Farfán, 2009
El mayor número de aislamientossensibles se obtuvo a cuatro de los sieteantibióticos evaluados.
Cundinamarca fue el departamento conlos mayores índices de tolerancia paracada uno de los antibióticos evaluados.
Las bacterias fitopatógenas asociadas abacteriosis en gulupa (Passiflora edulisSims.), son tolerantes oxicloruro de cobrey a los antibióticos evaluados.
Los antibióticos no son efectivos parael control de bacteriosis en gulupa.