LP 3. BIOCHIMIE LP 3. BIOCHIMIE CLINICĂCLINICĂ

EXPLORAREA EXPLORAREA METABOLISMULUI PROTEICMETABOLISMULUI PROTEIC

Clase de proteine Clase de proteine plasmaticeplasmatice

Plasma = amestec coloidalPlasma = amestec coloidal Clase de proteine plasmaticeClase de proteine plasmatice

– AlbuminaAlbumina– GlobulineGlobuline

Index de disproteinemieIndex de disproteinemie– Raport de concentraţieRaport de concentraţie– A/G = 0,8 – 1,2A/G = 0,8 – 1,2

Proteinemia Proteinemia concentraţia proteinelor totale din plasmă Metode:

– În ser sau plasmă: Metodă fotometrică: reacţia biuretului: în mediu

alcalin legăturile peptidice reacţionează cu ionii de Cu(II) cu formarea unui compus colorat violet, a cărei întensitatese determină la 546 nm;

– În urină sau LCR: Metoda Coomassie: utilizarea colorantului

Coomassie Brillant Blue(prag de detecţie: 1mg/L proteine)-macrometoda

pyrogallol red ( prag de detecţie: 20mgproteină/L)-micrometoda

Material biologic : ser, plasmă (heparinată), urină, LCR, lichide de puncţie –r.Rivalta (acid acetic glacial)

Metoda biuretuluiMetoda biuretului

Proteinemia

Valorinormale: – ser sau plasmă:

60 -80 g/l (adult) 45-75 g/l (nou-născuţi şi sugari)

– urină: < 150 mg/zi– LCR: 150 –450 mg/l

Disproteinemia Modificarea calitativă/cantitativă a

conţinutului în proteine a plasmei; Valori scăzute (hipoproteinemie):

– insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, enteropatii, malnutriţie / malabsorbţie, insuficienţă pancreatică;

– pseudohipoproteimemie: prin diluţie (recoltare de pe branulă)

Valori crescute (hiperproteinemie):– hiperproteinemii absolute:

hiperimunoglobulinemie:cronice, gamopatii monoclonale;

– hiperproteinemii relative: hemoconcentraţie, diabet insipid, diaree.

Albumine Albumine forma globulară, dimensiune și greutate

moleculară mică (60000-69000Da) factori stabilizanți ai echilibrului coloidal al

plasmei –solubilitate bună Dozare ser:

– metode fotometrice (verde de bromcrezol) – procentaj relativ din proteinogramă sau cantitate

absolută calculată din valoarea proteinemiei – imunodifuziune radială– nefelometrie imună alte lichide biologice

decat serul– imunturbidimetrie

Dozare urină şi LCR: nefelometrie, turbidimetrie;

Proteinuria Bence-Jones

lanţurile uşoare de tip sau kappa saulambda

apare în – plasmocitoame– macroglobulinemia Waldenström.

Metode de evidenţiere: – imunofixare (prag de sensibilitate: 20-30

mg/l) – electroforeza urinară (prag de

sensibilitate: aprox. 100 mg/l).

AlbumineAlbumine

Valori normale: – ser: 55-65% din totalul proteinelor plasmatice;

34 -48 g/l.– Urină: sub 20 mg/l;– LCR: 110-350 mg/l; (in functie de locatie: cel

mai concentrat ventriculii cerebrali, lombar, toracic, cervical)

Valori scăzute: insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, inflamaţii acute şi cronice, enteropatii, tumori maligne.

Probe biologice: ser, urină, LCR;

Electroforeza proteinelor metodă analitică de separare a particulelor

sau ansamblurilor de particule încărcate electric, sub acţiunea unui câmp electric extern

o particulă încărcată electric se va deplasa cu o viteză constantă determinată de acţiunea următoarelor forţe:

forţa de atracţie electroforetică F1: F1= Q · E forţa de frecare Stokes F2: F2 = 6π ·η· r · v

Electroforeza proteinelor

viteza electroforetică v: v = Q· E / 6 π· η· r

mobilitatea electroforetică μ: μ= v / E, μ = Q / 6π · η ·r particulele pentru care raportul Q/r

este identic vor avea mobilităţi electroforetice identice

Electroforeza proteinelor

Mediu de migrare:agaroză, pH: 8.6 (tampon TRIS barbital), Colorant: amido black, red Ponceau

Electroforeza proteinelor

Se aplică 5 μl de ser pe gelul de agaroză Se aşteaptă 10 min. (penetrarea serului în

gel) Se introduce gelul înaparatul de

electroforeză Se aplică tamponul TRIS barbital Se alege programul de migrare După migrare şi uscare se transferă gelul

în unitatea de colorare

Electroforeza proteinelor

După colorare se interpretează– Inspecţie– Interpretare densitometrică

Fracţiunile electroforetice Fracţiunile proteinelor serice:

– albumina – α1-globuline:

α1-lipoproteină (HDL), α1-glicoproteina acidă, α1-antitripsină, α 1-antichimotripsină,

– α2-globuline: haptoglobină, ceruloplasmină,, α2-macroglobulină,

– β1 şi β2 globuline: β-lipoproteine, hemopexina, factorul C3, transferina, PCR, fibrinogen.

– fracţiunea γ-globulinelor: - IgM, IgA şi IgG.

Proteinograma

Valori normale(procentual calculate din densitograme):– albumină: 54,3-65,5%– α1-globuline: 1,2-3,3 %– α2-globuline: 8,3-15,0 %– β-globuline: 9,0-17.7 %– γ-globuline: 7,1-19,5%

Interpretare

Ciroză hepatică – Ciroză hepatică cu ascită;– Proteine totale: 71 g/l– Albumină: 32 g/l– Hipoalbuminemie;– ↓α1, α2– ↑γ-globulinele– Fuziune beta-gamma;

Interpretare

Sindrom nefroticProteinurie 9,5g/24 ore;Proteine totale: 35 g/l;Albumină: 18 g/l;↓ albumine;↓ Alfa1-globulinemie;↑ alfa2-globulinemie;↑ beta-globulinemie;↓ gama-globulinele

Interpretare

Inflamaţie acută – Băiat de 2 ani;– Proteine totale: 57 g/l;– Albumină: 36 g/l;– ↓ albuminemie;– ↑alfa1-şi alfa2 globulinemie;– ↑ gammaglobulinemie

Interpretare

Anemie feriprivă Proteine totale: 73 g/l; Albumină: 43 g/l; ↑ beta-globulinemie

– (transferina!);

Interpretare

Hipogamaglobulinemie (leucemie mieloidă acută)Proteine totale: 61 g/l;Albumină: 44 g/l;↓ albuminemie;↑ alfa1-alfa2 globulinemie;↑ betaglobulinemie;↓gammaglobulinemie;

Interpretare

Hipogamaglobulinemie (leucemie limfatică cronică) Proteine totale: 55 g/l;

Albumină: 49 g/l; ↓ albuminemie; ↓ gammaglobulinemie, domina

celulele maligne, care epuizeaza maduva, celulele sanatoase nu mai ofera titrul protector;

Interpretare

Mielom multiplu – Proteine totale: 109 g/l;– Albumină: 36 g/l;– ↓ albuminemie;– Gradient M în gamma 1