LyoBead Probe MasterMix - mypols.deœbersicht.pdf · ntc Getestet wurde auf die Mutation MCM6 C-13910T für Laktose toleranz/intoleranz mit dem LightMix® Kit Lactose Intolerance

Standard Curve

Log Concentration 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0

Cro

ss

ing

Po

int

40

35

30

25

20

15

10

LyoBead Probe MasterMix

• Genotypisierung

In-house TaqMan-Assay für Parvovirus B19. 3-fach Bestimmung auf Plasmid-Verdünnungsreihe (30-9045-01). Getestet wurden 109-100 Kopie/rxn.

Cp (Mittel) STABW

109 8,7 0,03

108 12,1 0,01

107 15,5 0,03

106 19,0 0,06

105 22,4 0,03

104 25,8 0,04

103 29,2 0,14

100 32,5 0,63

10 36,4 0,56

1 39,1 0,47

• lineare Amplifikation über mindestens 9 log-Stufen

Melting Peaks

Temperature (°C) 74 72 70 68 66 64 62 60 58 56 54 52 50 48 46 44 42 40

-(d

/dT

) F

luo

res

ce

nc

e (

49

8-6

40

)

1,025

0,925

0,825

0,725

0,625

0,525

0,425

0,325

0,225

0,125

0,025

-0,075

-0,175

Kontroll-DNA wild-typ Mutante

hetreozygot NTC

Getestet wurde auf die Mutation MCM6 C-13910T für Laktose toleranz/intoleranz mit dem LightMix® Kit Lactose Intolerance (40-0307-32) von TIB-Molbiol nach Manual vorgaben. Die Kontrollen sind Bestandteil des Kits, desweiteren wurden 8 DNA-Proben (2x wt, 3x mut, 3x het) getestet.

Melting Peaks

Temperature (°C) 74 72 70 68 66 64 62 60 58 56 54 52 50 48 46 44 42 40

-(d

/dT

) F

luo

res

ce

nc

e (

49

8-6

40

)

1,130

1,030

0,930

0,830

0,730

0,630

0,530

0,430

0,330

0,230

0,130

0,030

-0,070

-0,170

Amplification Curves

Cycles 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

sc

en

ce

(4

65

-51

0)

35,849

32,349

28,849

25,349

21,849

18,349

14,849

11,349

7,849

4,349

0,849


Cycles 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

sce

nc

e (

498-6

60

)

3,987

3,587

3,187

2,787

2,387

1,987

1,587

1,187

0,787

0,387

-0,013


Cycles 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

sce

nc

e (

498-6

40

)

9,133

8,233

7,333

6,433

5,533

4,633

3,733

2,833

1,933

1,033

0,133


Cycles 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

sce

nc

e (

498-6

40

)

9,042

8,142

7,242

6,342

5,442

4,542

3,642

2,742

1,842

0,942

0,042


• Hybridisierungssonden Assays (LC-Sonden)

A) Getestet wurde auf T. vaginalis mit dem LightMix® Kit Trichomonas vaginalis (40-0610-32) von TIB-Molbiol nach Manual vorgaben. Die Standard-Reihe zur quantitativen Probenbestimmung ist Bestandteil des Kits, desweiteren wurden 6 DNA-Proben getestet.


Cycles 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

scen

ce (498-6

40)

5,285

4,785

4,285

3,785

3,285

2,785

2,285

1,785

1,285

0,785

0,285

b)


Cycles 50 40 30 20 10

Flu

ore

scen

ce (498-6

60)

2,733

2,533

2,333

2,133

1,933

1,733

1,533

1,333

1,133

0,933

0,733

0,533

0,333

0,133

-0,067

c)


Cycles 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

scen

ce (498-6

40)

6,672

6,072

5,472

4,872

4,272

3,672

3,072

2,472

1,872

1,272

0,672

0,072

a)

a) Standard-Reihe 106-10 Kopien/rxn (LC640); b) T. vaginalis positive DNA-Proben (LC640); c) interne PCR Kontrolle (LC660)

B) Getestet wurde auf B. pertussis/B.parapertussis mit dem dual-color LightMix® Kit Bordetella pertussis and parapertussis (40-0575-32) von TIB-Molbiol nach Manual vorgaben. Die Standard-Reihen zur quantitativen Probenbestimmung sind Bestandteil des Kits, desweiteren wurden 6 DNA-Proben getestet (4x B.pert, 2x B.para).

a) Standard-Reihe für B.pertussis 106-10 Kopien/rxn (LC640); b) B.pertussis positive DNA-Proben (LC640); c) Standard-Reihe für B.parapertussis 106-10 Kopien/rxn (LC660); d) B.parapertussis positive DNA-Proben (LC660)

d) c)

b) a)


Cycles 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5

Flu

ore

sce

nc

e (

498-6

60

)

3,940

3,540

3,140

2,740

2,340

1,940

1,540

1,140

0,740

0,340

-0,060


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

618-6

60

)

10,969

9,969

8,969

7,969

6,969

5,969

4,969

3,969

2,969

1,969

0,969

-0,031


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

440-

488

)

84,032

76,032

68,032

60,032

52,032

44,032

36,032

28,032

20,032

12,032

4,032


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

440-4

88

)

77,039

70,039

63,039

56,039

49,039

42,039

35,039

28,039

21,039

14,039

7,039

0,039


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-5

80

)

72,332

65,332

58,332

51,332

44,332

37,332

30,332

23,332

16,332

9,332

2,332


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-5

80

)

52,350

47,350

42,350

37,350

32,350

27,350

22,350

17,350

12,350

7,350

2,350


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-5

80

)

64,549

58,549

52,549

46,549

40,549

34,549

28,549

22,549

16,549

10,549

4,549


• Hydrolysierungssonden Assays (TaqMan)

A) Getestet wurde auf T. vaginalis mit dem LightMix® Modular Trichomonas vaginalis RepeatDNA (n° 07 696 191 001) von Roche nach Manual vorgaben. Die Standard-Reihe wurde aus dem Plasmid 30-9472-02 von GenExpress erstellt, die Positiv-Kontrolle (schwarze Amplifikationskurve ist Bestandteil des Kits), desweiteren wurden 6 DNA-Proben getestet.

b)


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

618-6

60

)

15,622

14,122

12,622

11,122

9,622

8,122

6,622

5,122

3,622

2,122

0,622

c)

a) Standard-Reihe 106-10 Kopien/rxn; b) T. vaginalis positive DNA-Proben und positiv Kontrolle; c) DNA-Extraktionskontrolle PhHV

B) Getestet wurde auf B. pertussis/B.parapertussis im Tri-plex Ansatz mit den LightMix® Modular Bordetella pertussis (n° 07 730 543 001) und Bordetella parapertussis (n° 07 730 004 001) von Roche nach Manual vorgaben. Die Standard-Reihen wurden aus den Plasmiden 30-7099-01 (B.pert) und 30-8589-01 (B.para) von GenExpress erstellt, die Positiv-Kontrollen (schwarze Amplifikationskurve sind Bestandteil des Kits), desweiteren wurden 6 DNA-Proben getestet (4x B.pert, 2x B.para).

e) c)

b) a)

d)

a) Standard-Reihe für B.pertussis 106-10 Kopien/rxn; b) B.pertussis positive DNA-Proben und positiv Kontrolle; c) Standard-Reihe für B.parapertussis 106-10 Kopien/rxn ; d) B.parapertussis positive DNA-Proben und positiv Kontrolle; e) DNA-Extraktionskontrolle PhHV


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-5

80

)

61,324

55,324

49,324

43,324

37,324

31,324

25,324

19,324

13,324

7,324

1,324

a)


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-6

10

)

17,000

15,500

14,000

12,500

11,000

9,500

8,000

6,500

5,000

3,500

2,000

0,500


• Hydrolysierungssonden Assays (TaqMan)

C) Getestet wurde auf ESBL Carbapenemase im Hexa-plex Ansatz mit den LightMix® Modular VIM Carbapenemase (n° 07 042 370 001), NDM-1 Carbapenemase (n° 07 042 299 001), OXA-48 Carbapenemase (n° 07 042 302 001), KPC Carbapenemase (n° 07 042 272 001) und IMP Carbapenemase (n° 07 042 345 001) von Roche nach Manual vorgaben. Die Standard-Reihen wurden aus den Plasmiden 30-8896-02 (VIM), 30-8439-01 (NDM-1), 30-8823-01 (OXA-48), 30-8799-01 (KPC) und 30-8892-02 (IMP) von GenExpress erstellt.

a) Standard-Reihe für VIM 106-10 Kopien/rxn b) Standard-Reihe für NDM-1 106-10 Kopien/rxn c) Standard-Reihe für OXA-48 106-10 Kopien/rxn


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

440-4

88

)

58,502

53,502

48,502

43,502

38,502

33,502

28,502

23,502

18,502

13,502

8,502

3,502

-1,498


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

465-5

10

)

30,849

27,849

24,849

21,849

18,849

15,849

12,849

9,849

6,849

3,849

0,849


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-5

80

)

42,615

38,615

34,615

30,615

26,615

22,615

18,615

14,615

10,615

6,615

2,615

a) b)

c) d)


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

533-6

40

)

28,959

26,459

23,959

21,459

18,959

16,459

13,959

11,459

8,959

6,459

3,959

1,459


Cycles 40 30 20 10

Flu

ore

sce

nc

e (

618-6

60

)

10,002

9,002

8,002

7,002

6,002

5,002

4,002

3,002

2,002

1,002

0,002

e) f)

d) Standard-Reihe für KPC 106-10 Kopien/rxn e) Standard-Reihe für IMP 106-10 Kopien/rxn f) DNA-Extraktionskontrolle PhHV

Documents

LyoBead Probe MasterMix - mypols.deœbersicht.pdf · ntc Getestet wurde auf die Mutation MCM6 C-13910T für Laktose toleranz/intoleranz mit dem LightMix® Kit Lactose Intolerance