MAKALAH MIKROBIOLOGI
MAKALAH MIKROBIOLOGIPEMERIKSAAN MAKANAN DENGAN METODE MPN (MOST
PROPABLE NUMBER)NAMA : FRISKA CANDRA UTARI KELAS : XI KIMIA
ANALISIS 5
BAB IPENDAHULUAN1.1 Latar belakangMengingat bahwa makanan yang
digunakan kemungkinan mengandungbakteri patogen maka sebelum
digunakan harus diperiksa terlebih dahulu, sebab makanan harus
bebas dari bakteri-bakteri patogen tersebut. Untuk pemeriksaan
tersebutdiperlukan pengujian bakteriologis makanan di laboratorium.
Pengujianinidapatmenentukan makanan yang diperiksa tersebut
mengandung bakteri patogen atau tidak. Alamprakteknya pengujian
makanan secara bakteriologis untuk menentukan ada tidaknya
bakteribentuk koli.Makanan yang bersih yang layak dimakan, semakin
langka di perkotaan. Makanan-makanan yang menjadi sumbernya sudah
tercemar berbagai macam limbah, mulai daribuangan sampah organik,
rumah tangga hingga limbah beracun dariindustri. Makanan yang sudah
tidak aman dijadikan bahan makanan karena telah terkontaminasi.
Itulah salah satu alasan mengapamakanan dalam kemasan yang
disebut-sebut menggunakan bahan yang baik sehinggabanyak
dikonsumsi. Namun, harga makanan dari berbagai merek yang terus
meningkatmembuat konsumen mencari alternatif baru yang murah, yaitu
penggunaan makanan yang tidak bermerk..Uji kualitas makanan Ke
dalamparametermikrobiologis hanya dicantumkan Colitinja
dantotalColiforms.a)Coli tinja, makana yang mengandung coli tinja
berarti makanatersebut tercemar tinja. Tinja dari penderita sangat
potensial menularkan penyakityang berhubungan denganair.b)Total
Coliforms, bila makanan yang tercemar coliformdapat mengakibatkan
penyakit-penyakit saluran pernafasan.Standar makanan, menurut
standar WHO semua sampel tidak bolehmengandungE. colidan sebaiknya
juga bebas dari bakteri coliform. Standar WHO:Dalam setiap tahun,
95% dari sampel-sampel tidak boleh mengandung coliform dalam100 ml,
Tidak ada sampel yang mengandung E. coli dalam 100 ml, Tidak ada
sampelyang mengandung coliform lebih dari 10 dalam 100 ml, Tidak
boleh ada coliformdalam 100 ml dan dua sampel yang berurutan (AOAC,
2000). Bakteri coliform adalahgolongan bakteriintestinal, yaitu
hidup dalam saluran pencernaan manusia. Baktericoliform adalah
bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih
tepatnya,sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri
indikator adanya pencemaranbakteri patogen. Penentuan coliform
fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah koloninya
pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain
itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana
daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Contoh bakteri coliform
adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, coliform
adalah indikator kualitas makanan. Makin sedikit kandungan
coliform, artinya, kualitas makanan semakin baik.E. coli jika masuk
ke dalam saluran pencernaan dalam jumlah banyak dapat membahayakan
kesehatan. WalaupunE.coli merupakan bagian dari mikroba normal
saluran pencernaan, tapi saat ini telah terbukti bahwa galur-galur
tertentu mampu menyebabkan gastroeritris taraf sedang hingga parah
pada manusia dan hewan. Sehingga, makanan yang akan digunakan untuk
keperluan sehari-hari seperti bahaya yaitu dapat menimbulkan
penyakit infeksius.Menurut Soetarto (2008), semua organisme selalu
membutuhkan makanan untuk kelangsungan hidupnya. Hal ini disebabkan
semua reaksi biologis yang berlangsung di dalam tubuh makhluk hidup
berlangsung dalam medium makanan. Oleh karena itu dapat dikatakan
bahwa tidak mungkin ada kehidupan tanpa adanya makanan. makanan
memegang peranan penting dalam kehidupan manusia. Tetapi sering
sekali terjadi pengotoran dan pencemaran makanan dengan
kotoran-kotoran dan sampah. Oleh karena itu makanan dapat menjadi
sumber atau perantaraberbagai penyakit seperti tipus, desentri, dan
kolera. Bakteri-bakteri yang dapat menyebabkan penyakit tersebut
adalahSalmonella typhosa, Shigella dysenteriae,dan Vibrio
koma.Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri
patogenik lain. Lebih tepatnya, bakteri coliform fekal adalah
bakteri indikator adanya pencemaran bakteri patogen. Penentuan
coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah
koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri
patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat,
dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain.Contoh
bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter
aerogenes. Jadi, coliform adalah indikator kualitas air. Makin
sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas makanan semakin
baik.Terdapatnya bakteri coliform dalam makanan dapat menjadi
indikasi kemungkinan besar adanya organisme patogen lainnya.
Bakteri coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu faecal coliform
dan non-faecal coliform. E. coli adalah bagian dari faecal
coliform. Keberadaan E. coli dalam makanan dapat menjadi indikator
adanya pencemaran air oleh tinja. E. coli digunakan sebagai
indikator pemeriksaan kualitas bakteriologis secara universal dalam
analisis dengan alasan; a) E. coli secara normal hanya ditemukan di
saluran pencernaan manusia (sebagai flora normal) atau hewan
mamalia, atau bahan yang telah terkontaminasi dengan tinja manusia
atau hewan; jarang sekali ditemukan dalam makanan dengan kualitas
kebersihan yang tinggi, b) E. coli mudah diperiksa di laboratorium
dan sensitivitasnya tinggi jika pemeriksaan dilakukan dengan benar,
c) Bila dalam makanan tersebut ditemukan E. coli, maka makanan
tersebut dianggap berbahaya bagi penggunaan domestik, d) Ada
kemungkinan bakteri enterik patogen yang lain dapat ditemukan
bersama-sama dengan E. coli dalam makanan tersebut. Maka, untuk
mendapat gambaran yang jelas mengenai kualitas makanan khususnya
kandungan bakteri total coli dan Escherichia coli (fecal coli)
dalam makanan yang telah tersedia, maka dilakukan penelitian
tentang kualitas makanan.
1.2Maksud dan Tujuan Maksuddari praktikum ini adalah untuk
mengetahui apakah sampel yang diperiksa berupa air kemasan Aquapro
dan air sumur oleh bakteri coliform dengan metode MPN.Tujuan dari
praktikum ini adalah untuk mengidentifikasi makanan dan minuman
berupa air kemasan Aquapro dan air sumur yang tercemar oleh bakteri
coliform metode MPN.
1.3Kerangka OperasionalSampel Kemasan Aquapro dan air sumur
LB (lactose broth)Inkubasi 37selama 24 jam
BGLB(Brilliant Green Lactosa Bile Broth)
Inkubasi 37selama 24 jam
EMBA Mc Conkey ENDO TSIA Inkubasi 37selama 24 jam
UJI IMVIC DAN UJI BIOKIMIAInkubasi 37selama 24 jam
BAB IITINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan Tentang MPN (Most Probable Number)Prinsip
penggunaan metode ini adalah menggunakan larutan sebagai media
pertumbuhan atau disebut sebagai media cair (broth) yang
ditempatkan dalam tabung reaksi. Hasil perhitungannya dilakukan
dengan melihat jumlah tabung yang positif gas. Umumnya setiap
pengenceran digunakan 3-5 buah tabung. Lebih banyak tabung yang
digunakan menunjukan ketelitian yang lebih tinggi.Pengenceran harus
dilakukan sedemikian rupa sehingga beberapa tabung ditumbuhi satu
sel saja sedangkan tabung lain tidak mengandung sel. Setelah
inkubasi diharapkan pada beberapa tabung terjadi pertumbuhan (+)
sedangkan lainnya (-).Pemilihan kombinasi yaitu berdasrkan pada
pengenceran terakhir dimana semua tabung memberikan reasi positif,
kemudian diambil dua pengenceran berikutnya.Perhitungan koloni
bakteri berdasarkan atas aktivitas bakteri tersebut dalam melakukan
metabolisme. Metode ini disebut juga sebagai APM (Most Probable
Number). Bahan uji yang akan dihitung populasi diencerkan beberapa
kali, dilanjutkan dengan inokulasi hasil pengenceran tersebut dalam
media tertentu yang dapat mendeteksi adanya aktifitas metabolisme
bakteri uji. Hasil yang diperoleh kemudian dirujuk pada table APM
atau MPN, sehingga populasi dapat diketahui dengan pendekatan
tersebut.Metode APM atau MPN sering dipakai untuk menghitung jumlah
populasi bakteri E.coli dalam air limbah, karena kemampuannya dalam
melakukan fermentasi dalam substrat media cair lactose Broth.
Metabolitnya berupa gas karbon dioksida yang akan terperangkap
dalam tabung Durham yang sengaja dimasukan dalam tabung reaksinya
dengan posisi terbalik.Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit
tumbuh (growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming
unit) dalam sampel. Namun, pada umumnya, nilai MPN juga diartikan
sebagai perkiraan jumlah individu bakteri. Satuan yang digunakan,
umumnya per 100 mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai MPN
10/g dalam sebuah sampel air, artinya dalam sampel air tersebut
diperkirakan setidaknya mengandung 10 coliform pada setiap gramnya.
Makin kecil nilai MPN, maka air tersebut makin tinggi kualitasnya,
dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit kepercayaan 95
persen sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN
terendah dan nilai MPN tertinggi.2.2 Metode MPN (Most Probable
Number)Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan
(presumtive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji
kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan
coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam
dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel.
Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki sifat
fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali
kebenaran adanya coliform dengan bantuan medium selektif
diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji
konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan
mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram
negatif, tidak-berspora.Adapun ragamnya yaitu:Ada 3 ragam yang
biasanya dipakai pada pemeriksaan MPN yaitu :1. Ragam 511-5 tabung
yang berisi LB double X 10 ml-1 tabung yang berisi LB single X 1
ml-1 tabung yang berisi LB single X 0,1 ml2. Ragam 555-5 tabung
yang berisi LB double X 10 ml-5 tabung yang berisi LB single X 1
ml-5 tabung yang berisi LB single X 0,1 ml
3. Ragam 333-3 tabung yang berisi LB double X 10 ml-3 tabung
yang berisi LB single X 1 ml-3 tabung yang berisi LB single X 0,1
ml
BAB IIIMETODE KERJA3.1. Alat dan Bahan:Alat :Tabung reaksi
sterilBunsenKaret pengisapPipet steril 10ml. 1 ml, dan 0,1
mlInkubatorErlenmeyarBahan :NaCl sterilSampel air kemasan JSMedia
Endo, Mac Concey dan EMBA,LB double dan single,BGLBKapas3.2.
Prosedur Kerja :Untuk specimen yang sudah diolah atas angka kuman
nya diperkirakan rendah dengan ragam 5 X 10 ml, 1 X1 ml, dan 1 X
0,1 ml.Untuk sampel padat, terlebih dahulu di encerkan dengan NaCl
steril yang ada dalam Erlenmeyer. Dengan menggunakan metode
511,sampel yang telah diencerkan dipipet kedalam media LB double
sebanyak 10 ml,ke media LB single sebanyak 1 ml dan 0,1 ml.1.Sisa
penipisan 10x dari angka kuman tersebut ditanamkan ke dalam :5
tabung Lactose Broth triple strength a 10 ml5 tabung Lactose Broth
triple strength a 1 ml5 tabung Lactose Broth triple strength a 0,1
mlMasuk incubator 37C 48 jam.Sedangkan untuk minuman yang belum
atau sudah diolah, digunakan ragam 331, seperti air gallon yaitu:5
tabung Lactose Broth double 10 ml5 tabung Lactose Broth single 1
ml5 tabung Lactose Broth single 0,1 ml
2.Lactose Broth yang menunjukkan positif gas diambil 1 ose / 1
tetes ditanam kedalam Brilliant Greent Lactose Bile Broth (BGLB).
Masuk incubator 37C 48 jam.3.Dibaca dan dicatat BGLB yang
menunjukkan positif gas, masing-masing ditanam pada Endo agar,
masuk incubator 37C 24 jam.Untuk mendapatkan index MPN coliform,
dengan dasargas tersebut hasil pencatatan BGLB positif gas tersebut
diatas, dicari di table MPN.4.Koloni yang berwarna merah hitam
methalic di Endo agar, ditanam pada TSI agar, SIM medium, dan
Simmons Citrate agar, untuk memastikan adanya Escherichia coli.
Inkubasi 37C 24 jam.5.Dibaca pada TSIA, SIM medium dan Simmon
Citrate agar, mana yang betul E.coli dan yang bukan. Dengan dasar
itu, dicari ditabel menentukan berapa index MPN E. coli.
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN4.1. Hasil PemeriksaanDari hasil
pemeriksaan didapatkan sebagai berikutsetelah sampel dipipet ke
dalam media LB double dan single
Keterangan ; a. LB double yang berisi sampel Air sumur b. LB
single yang berisi sampel air sumurc. LB double yang berisi sampel
air kemasan b. LB single yang berisi sampel air kemasan
Hasil media LB
Keterangan :a)LB kue air kemasan metode 5555 tabung LB double
positif (+) gas2 tabung LB single negatif (-) gasb)LB Air Galon
Metode 333Semua tabung menunjukkan hasil yang negatifHasil pada
media BGLB
Pada BGLB 5 tabung yang positif gas
PerhitunganRumus (A + B + C) X (Dit A = 3 B = 0 C = 1MPN :
(A+B+C) X ( = 5 + 5 + 5 = 15 X =15 = 1500
Koloni pada media MC dan EMBA Media MC Media EMBA
Hasil uji biokimia
TSIA
Acid-acid
Uji IMVIC1.MR (+)2.VP (-)3. SIM : Sulfur (-),Indol (-),
Motilyti(+)4.SC (-)
MR VP SIM SCuji gula-gula Glu lak suk mal man urea (+) (+) (-)
(+) (+) (-)4.2. PembahasanUji kualitas air ini menggunakan sampel
kue dona-doni dan air galon. Masing-masingsampel air ini dibuat 3
seri larutan perlakuan. Untuk larutan seri pertama, sampel
airdipipet sebanyak 10 ml dan dimasukkan ke dalam 3 tabung reaksi
berisi medium LB10 mL yang telah berisi tabung durham. Sedangkan
larutan seri kedua berupa 1 mLsampel air yang dimasukkan ke dalam
tabung reaksi berisi medium LB 10 mL yangdidalamnya juga mengandung
tabung durham.Larutan yang terakhir adalah larutanseri ketiga yang
dibuat dengan mencampur 0,1 mL sampel air dalam 10 mL LB didalam
tabung reaksi berisi tabung durham. Ketiga seri larutan uji ini
kemudian diinkubasi pada suhu 35-370C selama 24 jam. Hasil dari
penelitian ini menunjukkan bahwa tidak ditemukan gelembung gas pada
tabung kultur air sample galon, sehingga ini menunjukkan bahwa
dalam air sampel galon Air minum tidak mengandung bakteri koliform,
karena setelah masa inkubasi pada kaldu laktosa tidak terbentuk gas
dalam tabung Durham. Ini membuktikan tidak terjadi fermentasi
laktosa oleh bakteri yang tergolong ke dalam kelompok koliform.Pada
pemerikasaa MPN sampel padat, terlebih dahulu ditimbang sebanyak 10
gram kemudian dilakukan penghancuran dan dilarutkan dalam NaCl o,9
%. Sampel di diamkan sampai mengendap kemudian dipipet kedalam LB
double dan LB single sebanyak 10 ml untuk 5 tabung LB double dan 1
ml dan 0,1 ml untuk 2 tabung LB single. Sampel ditanam pada laktosa
broth, yang positif gas dipindahkan pada brilliant green lactose
bile broth, yang positif gas (= coliform positif) ditanam pada
Endo, EMBA agar. Di Endo/EMB agar yang menunjukan hijau methalic (
E. coli tersangka ), dipastikan dengan indol, SC, MR,
motyliti.Media LB yang telah ditanami diinkubasi pada suhu 35-370C
selama 24 jam. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa
ditemukan gelembung gas pada tabung kultur sample kue Dona-Doni,
sehingga ini menunjukkan bahwa dalam kue Dona_doni mengandung
bakteri koliform. Dilanjutkan pada BGLB inkubasi 370C 24 jam. Yang
positif di BGLB kemudian dilanjutkan pada media Enda/EMB agar
inkubasi 370C 24 jam. Pada media menunjukan cirri-ciri dari E. coli
:Endo Agar : Koloni besar, bulat, smooth, merah merah tua,
metalicEMB Agar : Koloni sedang, smooth, keeping kehijau hijauan,
metallicDitanam pada TSIA, IMVIC, dan media gula-gula, karena
setelah masa inkubasi pada kaldu laktosa terbentuk gas dalam tabung
Durham. Ini membuktikan terjadi fermentasi laktosa oleh bakteri
yang tergolong ke dalam kelompok koliform.
BAB VKESIMPULAN DAN SARAN5.1.KesimpulanDari data yang diperoleh
dapat disimpulkan bahwa:1.Pada sampel air sumur pada media LB
double dan Single terdapat gas sehingga dikatakan positif dan
setelah di pindahkan di BGLB juga positif.. Penanaman pada media MC
dan EMBA juga menunjukkan koloni yang sama dengan koloni pada
bakteriEscherichia colijuga pada uji biokimia yang menunjukkan
hasil yang sama. Maka dapat disimpulkan bahwa sampel air sumur
terdapat bakteriEscherichia coli.Tapi hal ini bias saja
berkemungkinan dari cara kerja yang salah serta kesterilan alat
yang kurang2.Air sumur memenuhi syarat sebagai air minum yang
bersih danterbebas dari kontaminasi bakteri koliform.3.Proses
sterilisasi dan penyaringan pada air kemasan memenuhi syarat
sebagai air bersih dan terbebas dari kontaminasi mikroba (bakteri
koliform).5.2.SaranPerlu dilakukan uji lanjut, yaitu Uji penguat
dengan tujuanmendeteksi adanyabakteriEscherichia coli, karena pada
penelitian ini belum melakukan uji penguat untukmengetahui lebih
lanjut keberadaan bakteriEscherichia coli.
Daftar
Pustakahttp://ahmadakhsan.blogspot.com/2011/05/mpn.html
