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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICODE MÉXICO
FES ZARAGOZAFES ZARAGOZA
Inmunología LaboratorioInmunología Laboratorio
Equipo: #3Equipo: #3
IntegrantesIntegrantesMillán Mejia Laura EdithMillán Mejia Laura Edith Fezay Reyes DanielaFezay Reyes Daniela
Díaz Estrada Chairel Ivonne Díaz Estrada Chairel Ivonne
Practica No. 3 Manejo de AnimalesPractica No. 3 Manejo de Animales
IInmunidadnmunidad
EspecificaEspecifica
• INMUNIDADINMUNIDAD
No especificaNo especifica
Características de la Inmunidad Características de la Inmunidad específica.específica.
Característica Significado funcional
Especificidad Respuestas específicas para cada antígeno específico
Diversidad Permite al sistema inmune responder a una larga variedad de antígenos.
Memoria Permite respuestas más eficientes y amplificadas ante la exposición de antígenos ya conocidos.
Especialización Genera respuestas óptimas para la defensa contra diferentes tipos de microorganismos.
Auto limitación Regula la respuesta inmune para que el sistema pueda responder a nuevos antígenos
Tolerancia Previene lesiones al anfitrión durante la respuestas a los antígenos extraños
Comparación de la respuesta inmunitaria Humoral Primaria Comparación de la respuesta inmunitaria Humoral Primaria y Secundariay Secundaria
Parámetro Parámetro Respuesta primariaRespuesta primaria Respuesta Respuesta secundaria secundaria
Linfocito B que Linfocito B que responderesponde
Linfocitos B vírgenesLinfocitos B vírgenes Linfocitos B de Linfocitos B de memoria memoria
Células de Células de presentación de Agpresentación de Ag
Principalmente Principalmente macrófagos macrófagos
Los linfocitos B Los linfocitos B adquieren mas adquieren mas importanciaimportancia
Periodo de latencia Periodo de latencia 5-10 dias5-10 dias 1-3 dias 1-3 dias
Pico de titulo de AbPico de titulo de Ab Relativamente bajoRelativamente bajo Relativamente altoRelativamente alto
ParámetroParámetro Respuesta primariaRespuesta primaria Respuesta Respuesta secundaria secundaria
Persistencia del titulo de Persistencia del titulo de Ab Ab
BreveBreve ProlongadaProlongada
Anticuerpos Anticuerpos predominante predominante
Ig M > Ig G Ig M > Ig G Ig G, Ig AIg G, Ig A
Afinidad de los Ab por el Afinidad de los Ab por el AgAg
Relativamente bajaRelativamente baja Relativamente elevada Relativamente elevada
Inducción de la respuestaInducción de la respuesta Todos los Todos los inmunogenos inmunogenos
Solo Ag proteicos. Por Solo Ag proteicos. Por tanto es T tanto es T dependientedependiente
Dosis de inmunogeno Dosis de inmunogeno necesario para inducir la necesario para inducir la respuesta respuesta
Relativamente Relativamente elevadas se requieres elevadas se requieres de adyuvantesde adyuvantes
Relativamente bajas Relativamente bajas no se requieren no se requieren adyuvantesadyuvantes
Antigeno
Macromoléculas Productos extraños a un
organismo que mediante su contacto provoca una respuesta inmunitaría
Ej. Bacterias,parasitos,e incluso medicamentos
Respuesta inmune primaria y Respuesta inmune primaria y secundaria secundaria AntígenoAntígeno
Primer contacto:Primer contacto: Respuesta primariaRespuesta primaria
Contactos posteriores: Contactos posteriores: Respuesta secundariaRespuesta secundaria
Anticuerpos IgM Anticuerpos IgM Anticuerpos IgG (IgAs en Anticuerpos IgG (IgAs en mucosas) / Cambio de mucosas) / Cambio de isotipo / Mutaciones isotipo / Mutaciones somáticas somáticas
Menor intensidad Menor intensidad Mayor intensidad Mayor intensidad
Producción de células de Producción de células de memoria memoria
Anticuerpos de mayor Anticuerpos de mayor afinidad afinidad
INMUNOGENOINMUNOGENO
Alto peso MolecularAlto peso Molecular
Son de origen orgánicoSon de origen orgánico • Sustancia extraña Pueden ser químicamenteSustancia extraña Pueden ser químicamente
capaz de inducir una inmunogenos capaz de inducir una inmunogenos
respuesta inmune ( Proteínas ,azucares ,ácidosrespuesta inmune ( Proteínas ,azucares ,ácidos
nucleicos, etc.) nucleicos, etc.)
Paratopo Paratopo EpitopeEpitope
INMUNOGENO
InmunizaciónInmunización
• Inducción deliberada de una Inducción deliberada de una respuesta inmunitaria.respuesta inmunitaria.
• Experimentales se llevan Experimentales se llevan
acabo: Inyectando un antígeno acabo: Inyectando un antígeno
a un animala un animal
Factores EN OBTENCION DE SUERO:Factores EN OBTENCION DE SUERO:
• Mayor cantidad de antígenoMayor cantidad de antígeno• Menor grado de contaminación Menor grado de contaminación
con otros componentescon otros componentes• Uso de adyuvantesUso de adyuvantes• Vía de inoculación Vía de inoculación • Especie animalEspecie animal• Capacidad de respuesta Capacidad de respuesta
inmuneinmune
• Los antisueros tempranos tienen Los antisueros tempranos tienen títulos relativamente bajos y títulos relativamente bajos y tienden a cruzar menos con otros tienden a cruzar menos con otros antígenos.antígenos.
• Los antisueros tardíos tienen Los antisueros tardíos tienen títulos elevados, pero tienden a títulos elevados, pero tienden a cruzar con otros antígenos.cruzar con otros antígenos.
• Tiempo en que se sangra al Tiempo en que se sangra al animalanimal
ADYUVANTEADYUVANTE
Sustancia que potencializa la Sustancia que potencializa la respuesta inmunológica respuesta inmunológica
El adyuvante incompleto de Freund El adyuvante incompleto de Freund Detergente + aceite mineral.Detergente + aceite mineral.
El adyuvante completoEl adyuvante completo
Nujol +Twe80+ 1 mg/ml Pared de Nujol +Twe80+ 1 mg/ml Pared de Mycobacteria tuberculosis BCGMycobacteria tuberculosis BCG
TIPO DE ADYUVANTE
EJEMPLO EFECTOS PRINCIPALES
Adyuvante completo (CFA)Fosfato de aluminio, Fosfato de calcio
Liberación lenta del antígeno y granuloma local
BacterianoMycobacteria
Bordetella
Polisacáridos bacterianos
BCG
Bordetella pertussis
Microorganismos gramnegativos
Estimulación de la actividad del macrófago, aumento del número de células productoras de ac.Activación de macrófagos, linfocitos.Activación de linfocitos
QuímicoLabilizantes de lisozima
Polisacáridos de los hongos
Vit. A, sales de berilio, sílicaLentinano
Activación de macrófagos.
Se desconoce.
Manejo de AnimalesManejo de Animales
Bioterio Bioterio Es el lugar físico donde Es el lugar físico donde
se crían, mantienen y/o se crían, mantienen y/o utilizan animales de utilizan animales de laboratorio, que cuentan laboratorio, que cuentan con una calidad genética con una calidad genética y microbiológica definida. y microbiológica definida. Dichos animales son Dichos animales son reactivos biológicos reactivos biológicos generalmente utilizados generalmente utilizados en investigación o para en investigación o para producción. producción.
NOM-062-1999NOM-062-1999
Su objetivo es:Su objetivo es:
Asegurar la procedencia de animales sanos, que Asegurar la procedencia de animales sanos, que muestren respuestas estándar a la manipulación muestren respuestas estándar a la manipulación experimental, con el fin de obtener resultados confiables experimental, con el fin de obtener resultados confiables y reproducibles.y reproducibles.
Requieren de:Requieren de:
Instalaciones.Instalaciones. Jaulas específicas para cada especie.Jaulas específicas para cada especie. Temperatura óptima.Temperatura óptima. LimpiezaLimpieza Seguridad en alimentos y en el agua de consumoSeguridad en alimentos y en el agua de consumo
Clasificación de animales Clasificación de animales
Tipo de animal Tipo de animal CaracterísticasCaracterísticasAxénicoAxénico CesáreaCesárea
Amamantado y criado en condiciones asépticaAmamantado y criado en condiciones aséptica
Mantenidos en un aisladorMantenidos en un aislador
XenobióticoXenobiótico Previamente axénicoPreviamente axénico
No patógena y poca cantidadNo patógena y poca cantidad
Libres de gérmenes, Mantenidos en aisladoresLibres de gérmenes, Mantenidos en aisladores
DefinidoDefinido Previamente axénicoPreviamente axénico
Asociado intencionalmente con uno o más Asociado intencionalmente con uno o más microorganismosmicroorganismos
Mantenido en barrerasMantenido en barreras Monitorear la presencia de m.oMonitorear la presencia de m.o
ConvencionalConvencional Carga microbiana desconocida e incontrolada.Carga microbiana desconocida e incontrolada.
Uso de animales en el LaboratorioUso de animales en el Laboratorio
• Rata de Laboratorio
• Comportamiento bien definido, dócil, sumamente inteligente y relativamente saludable.
• Satisface un amplio rango de procedimientos en investigaciones para el control de enfermedades y su erradicación.
Técnicas de manejoTécnicas de manejo
• Fácil de manejar si está al Fácil de manejar si está al contacto humanocontacto humano
• Poca fuerza Poca fuerza • Sujeción por la cola Sujeción por la cola • Captura en jaulaCaptura en jaula• Sujeción con 2 manosSujeción con 2 manos
Ratón de laboratorioRatón de laboratorio
Animal de laboratorio más utilizado por su:
•Tamaño pequeño•Temprana madurez sexual•Alta posición relativa en la escala evolutiva
Sujeción por cola y transporteSujeción por cola y transporte
• Sujetar al ratón de la región Sujetar al ratón de la región media de la cola con los dedos media de la cola con los dedos índice y pulgar.índice y pulgar.
• Para transportar, Para transportar, generalmente se sujetan de la generalmente se sujetan de la
cola.cola.
Métodos de sujeción y manipulación en el Métodos de sujeción y manipulación en el ratónratón
Sujeción del hámster. Sujeción del hámster.
ConejoConejo
Características :Características :
*Temperamento asustadizo*Temperamento asustadizo
*Propensos al pánico*Propensos al pánico
*Rasguñan con sus miembros *Rasguñan con sus miembros posteriores y algunas veces posteriores y algunas veces llegan a morderllegan a morder
Utilidad en el laboratorio:
Preparación de antisueros
Probar la toxicidad de drogas y productos biológicos
Pruebas de rutina de diagnostico
Técnicas de ManejoTécnicas de Manejo
• Se carga tomándolos con la mano por el lomo.
• Con la mano derecha se suspende de la piel floja de la región del dorso y con la mano izquierda se le sujetan las patas.
Conejos con heridas u otros problemas:Sujetarse con la mano de la piel del cuello y sostener el lomo de modo que el conejo quede boca arriba.
Para su transportación y tomas de sangre colocarlos en la jaula de Para su transportación y tomas de sangre colocarlos en la jaula de
restricción para tomas de sangre.restricción para tomas de sangre.
Vía de administración Vía de administración Características Características
Oral Oral Por sondeo esofágico mediante Por sondeo esofágico mediante sondas sondas
apropiadas.apropiadas.
IntramuscularIntramuscular En los músculos de los miembros En los músculos de los miembros posteriores posteriores
Aguja calibre 22x32Aguja calibre 22x32
SubcutáneaSubcutánea Se realiza debajo de la piel del Se realiza debajo de la piel del cuello; levantar un pliegue de la cuello; levantar un pliegue de la piel laxa de la espalda e introducir piel laxa de la espalda e introducir rápidamente la agujarápidamente la aguja con aguja con aguja calibre 22x32.calibre 22x32.
Vía de administración Vía de administración Características Características
Intraperitoneal Intraperitoneal Parte posterior del abdomen, Parte posterior del abdomen, dirección paramedial. Aguja dirección paramedial. Aguja calibre 25x16. Se pueden calibre 25x16. Se pueden administrar de 15 – 25ml de fluido.administrar de 15 – 25ml de fluido.
IntravenosaIntravenosa Vena lateral de la cola. Vena Vena lateral de la cola. Vena caudal: se localiza a lo largo de la caudal: se localiza a lo largo de la línea media, parte ventral de la línea media, parte ventral de la cola. Aguja calibre 25x16cola. Aguja calibre 25x16
Método de sujeción para inyecciones y Método de sujeción para inyecciones y
movimiento del cobayomovimiento del cobayo
EXTRACCIÓN DE SANGRE EXTRACCIÓN DE SANGRE EN ANIMALES DE EN ANIMALES DE
LABORATORIOLABORATORIO
Toma de muestra de sangre en Toma de muestra de sangre en rata:rata:
• Volumen requeridoVolumen requerido• Frecuencia de la tomaFrecuencia de la toma• Posible uso de agentes Posible uso de agentes
anestésicosanestésicos• El destino para saber si la El destino para saber si la
muestra tiene que ser muestra tiene que ser tomada asépticamente.tomada asépticamente.
• El efecto de la toma de la El efecto de la toma de la muestra en los muestra en los parámetros a evaluar.parámetros a evaluar.
Variables a controlarVariables a controlar
Variable Variable ¿Que afecta? ¿Que afecta?
Estrés y técnica •Parámetros sanguíneos hormonales.
Anestésicos • Balance ácido – base
• Hb
•Volumen de células plaquetarias
•Proteínas plasmática
•Niveles de Ca y Mg
Tamaño de la aguja
•Coagulación de la sangre
•Laceración de la vena. •Hematomas
TECNICAS DE SANGRADO TECNICAS DE SANGRADO Técnica Técnica Características Características
Vena coccígeasVena coccígeas •Venas en la porción dorso lateral (dilatar Venas en la porción dorso lateral (dilatar con frotamiento, calor o uso de xilol - con frotamiento, calor o uso de xilol - etanol).etanol).• Obtención de pequeños volúmenes de Obtención de pequeños volúmenes de sangre (menos de 5mm)sangre (menos de 5mm)
Plexo venoso oftálmicoPlexo venoso oftálmico •Muestras repetidas de pequeños Muestras repetidas de pequeños volúmenes de sangre alternando los ojos.volúmenes de sangre alternando los ojos.•Una pipeta Pasteur en el saco conjuntival Una pipeta Pasteur en el saco conjuntival inferior y se gira la pipeta haciendo en un inferior y se gira la pipeta haciendo en un ángulo de 45° produciendo una hemorragia ángulo de 45° produciendo una hemorragia profusa y sube por capilaridad la sangre al profusa y sube por capilaridad la sangre al tubo.tubo.
Técnica Técnica Características Características
Vena metatarsal dorsal (en Vena metatarsal dorsal (en el cojinete plantar)el cojinete plantar)
ØSe utiliza en toma de muestras para administración de Se utiliza en toma de muestras para administración de medicamentos. medicamentos. ØSe sujeta al animal y se empuña la región metatarsal del Se sujeta al animal y se empuña la región metatarsal del pie, flexionando la 1ª articulación falangeapie, flexionando la 1ª articulación falangeaØLa cantidad obtenida es aproximadamente 0.1 y 0.2 ml.La cantidad obtenida es aproximadamente 0.1 y 0.2 ml.
Corte de vena axilarCorte de vena axilar •El animal se coloca en posición ventral y con un bisturí realice una incisión en el área axilar, y colectar la sangre.
Punción cardiacaPunción cardiaca •Se sujeta a la rata de las extremidades boca arriba sobre la Se sujeta a la rata de las extremidades boca arriba sobre la mesamesa•Se localiza el corazón y se realiza la punción extrayendo la Se localiza el corazón y se realiza la punción extrayendo la sangre lentamente.sangre lentamente.
Animal Animal Técnica Técnica RATONESRATONES IntracardiacaIntracardiaca
Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbitalVena de la cola o por corte de la punta de la cola.Vena de la cola o por corte de la punta de la cola.
HAMSTERHAMSTER Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbital Punción intracardiaca.Punción intracardiaca.
CuyosCuyos Plexo retro-orbitalPlexo retro-orbitalPunción intracardiaca.Punción intracardiaca.
ConejosConejos Punción intracardiacaPunción intracardiacaCorte de la vena marginal de la orejaCorte de la vena marginal de la oreja
GallinasGallinas Vena branquialVena branquial
La Punción Venosa (volúmenes del orden de 0.1 mL)La Punción Venosa (volúmenes del orden de 0.1 mL)
• Se puede pinchar una vena superficial para obtener sangre Se puede pinchar una vena superficial para obtener sangre destinada a valoraciones hematológicas o químicas que requieran destinada a valoraciones hematológicas o químicas que requieran
el equivalente a 1-4 gotas).el equivalente a 1-4 gotas).
Recolección de las ArteriasRecolección de las Arterias
• La razón principal para extraer sangre de las arterias es que se La razón principal para extraer sangre de las arterias es que se pueden obtener grandes muestras rápidamente y de manera pueden obtener grandes muestras rápidamente y de manera relativamente fácil. relativamente fácil.
• Habitualmente se utiliza la arteria carótida. O bien en los conejos el Habitualmente se utiliza la arteria carótida. O bien en los conejos el sangrado de la arteria central de la oreja.sangrado de la arteria central de la oreja.
Como regla general, usualmente resulta Como regla general, usualmente resulta seguro tomar aproximadamente 0.5 seguro tomar aproximadamente 0.5 mL/Kg. de peso corporal en todas las mL/Kg. de peso corporal en todas las especies. especies.
EutanasiaEutanasia
Aturdimiento con desangrado. Provocar la hemorragia cerebral masiva y depresión de SNC.
Dislocación Cervical. Interrumpir la comunicación entre el cerebro y la médula espinal.
Agentes anestésicos inhalados. Éter o cloroformo
Gases no anestésicos. Monóxido de carbono, Dióxido de Carbono, Nitrógeno o cianuro.
Agentes tranquilizantes. Pentobarbital sódico
BibliografíaBibliografía
• Altamirano B A. “Manual de manejo de animales de laboratorio” Fes Altamirano B A. “Manual de manejo de animales de laboratorio” Fes Zaragoza ,Primera Edición 1994, México Pág.. 3-97Zaragoza ,Primera Edición 1994, México Pág.. 3-97
• http://www.secal.es/word-pdf/sangre.pdf. . Extracción de sangre en mamíferos y animales de laboratorioExtracción de sangre en mamíferos y animales de laboratorio http://cinvestav.mx/upeal/PI-11-02.html
• Roitt Ivan M, Delves Meter J. Inmunología: Fundamentos. 10ª ed. Argentina (Buenos Aires): Médica Panamericana; 2003.
• Regueiro González J. R, López Larrea C, González Rodríguez S, Martínez Naves E. Inmunología: Biología y Patología del Sistema Inmune. 3ª ed. España: Panamericana; 2003.
Por su atención GraciasPor su atención Gracias