Manual-Biología Molecular de la Célula

5/11/2018 Manual-Biolog a Molecular de la C lula - slidepdf.com

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PE: “LICENCIATURA EN FARMACIA”

LICENCIATURA EN FARMACIA

ÁREA: ANALÍSIS CLÍNICOS

ASIGNATURA: LABORATORIO DE

BIOLOGÍA MOLECULAR DE LA CÉLULA

CÓDIGO: FARM-014 L

ELABORADO POR:

MC Ma. De Lourdes Martinez Moreno

MC Sara Silvia Domínguez BaezDC Bertha Alicia León ChávezMC Marisela Torres y SotoMC Aida Osorno TecpaMC Rafael Muñoz BedollaMC Martha Alicia Salgado JuárezMC Rosa Maria Aguilar Garduño

FEBRERO 2009

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA

DIRECCIÓN GENERALDE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS




PRÁCTICA 1.FUNDAMENTO FÍSICO, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO.

APLICACIONES DEL MICROSCOPIO

INTRODUCCIÓN.-El microscopio es el aparato más importante e indispensable en un laboratorio deBiología, su función es permitir observar la imagen considerablemente aumentadade un objeto u organismo que a simple vista pasa desapercibido. La palabramicroscopio proviene de dos raíces griegas: Micros ; que quiere decir pequeño yscopein ; que significa observar. En la actualidad existe toda una cienciadedicada a estudiar las características de estos aparatos que cada vez son masprecisos y espectaculares, nos referimos a la creación de la microscopía; ésta escada día mas importante, ya que el conocer las características de un microscopionos permite sacar el mayor provecho de él, dándole una mayor aplicación.Existen dos tipos básicos de microscopio: el simple y el compuesto.El microscopio simple está formado tan solo por una lente convergente a la quetambién se le llama "lupa", la cual nos proporciona una imagen virtual y aumentada.

El microscopio compuesto esta constituido por dos sistemas de lentes :1.- El sistema que está constituido por los objetivos, que son las lentes quedan máscerca del objeto de observación.2.- El sistema constituido por los oculares, que son las lentes que quedan más cerca delobservador.Cada sistema proporciona un aumento independiente y el producto de estos aumentosparciales dados por oculares y objetivos, determina el aumento total del microscopio.Para manejar con mayor eficiencia un microscopio, es necesario conocer cómo estáconstituido. Las partes que lo constituyen se agrupan en tres sistemas: mecánico,óptico, y de iluminación. A) El sistema mecánico está formado por: una base, la columna, el tubo delmicroscopio, la platina, los tornillos para el enfoque y el revolver.

B) El sistema óptico está representado por las lentes oculares y las lentes objetivos.C) El sistema de iluminación está representado por la fuente de luz (foco), elcondensador y el diafragma.Debemos recordar que el objetivo y el ocular del microscopio funcionan como lentes convergentes biconvexas , por lo que la imagen final que nos proporciona elmicroscopio compuesto es virtual, aumentada e invertida. Toda imagen proporcionada por el sistema óptico de un microscopio, debe reunir trescaracterísticas: poseer un buen poder de resolución, de penetración y de definición.

El poder de resolución (P.R.): es la característica del microscopio que permite ver conclaridad las estructuras finas y muy cercanas entre si; podemos ver que este poder deresolución es directamente proporcional a la longitud de onda media de la luz blanca

(550 nm) (1 nm= 10-6

mm ) e inversamente proporcional a la apertura numérica (A.N.)del objetivo. Esto es: P.R. = O.61A.N.

Donde P.R.: es la distancia mínima entre dos puntos de la muestra que permite verlosseparados; 0.61 es una constante que representa la diferencia mínima en contraste quees detectable; es la longitud de onda de la luz empleada y A.N: la apertura numéricade la lente del objetivo. Si las estructuras que se desean precisar, están colocadas a una distancia menor unade otra, necesitaremos un objetivo de mayor apertura numérica.




La apertura numérica (A.N.): es una medida del ángulo máximo con que los rayosprovenientes del objeto inciden en la lente del objetivo del microscopio y de ahí sonllevados al ojo del observador. Ahora bien, hay dos factores que determinan la apertura numérica: el ángulo que forman los rayos que penetran por el objetivo y el índice derefracción del medio que exista entre el objeto a observar y el objetivo, dicho de unamanera matemática, la apertura numérica es el producto del seno del semi ángulo deabertura (que mide la capacidad de la lente para concentrar la luz) por el índice de

refracción del medio que existe entre el objetivo y el objeto a observar. Todos losobjetivos traen grabada la apertura numérica.El poder de penetración: es la característica que permite definir simultáneamente lasestructuras existentes a diferentes niveles de la preparación; esto solo se puede lograrcon objetivos de pequeño aumento, a medida que aumenta el poder del objetivo y laapertura numérica, es menor el poder de resolución.El poder de definición: es la característica que permite una imagen clara, precisa y conbordes definidos; para esto, el microscopio debe presentar lentes bien pulidas, con susaberraciones cromática y de esfericidad, corregidas.El índice de refracción: es una medida de la velocidad comparativa de luz en unmedio. Cuando existe aire entre la lente y el cubreobjetos, parte de la luz proyectada através de la muestra es desviada (refractada), por lo que a medida que se usa un

objetivo de mayor aumento, la pérdida de resolución tiene un efecto significativo sobre lacalidad de la imagen. El uso de aceite de inmersión (que tiene el mismo índice derefracción que el vidrio) entre la muestra y la lente del objetivo de inmersión, evita el cambio del índice de refracción, y por lo tanto, mejora la resolución.

OBJETIVO.- Que el alumno identifique cada uno de los componentes del microscopio ysepa qué función desempeña cada uno, que logre paso a paso un enfoque correcto yque aprenda a detectar los errores de manejo para corregirlos; además aprenderá atener los cuidados correspondientes al microscopio.MATERIAL.- Microscopio óptico, portaobjetos, cubreobjetos y alguna muestra paraobservar al microscopio.PROCEDIMIENTO.- a) Señale cada componente del microscopio y anote su función y a

qué sistema pertenece. b) Observe los grabados en los oculares y en los objetivos yanote su significado. c) Ensaye el enfoque una preparación, empezando con el objetivode menor aumento, anotando el aumento total que logra de su imagen en cada caso.d) Indique cuál es el poder de resolución de cada objetivo. e) Mida el grosor, largo yancho del portaobjetos y del cubreobjetos. f) Ensaye la iluminación KöhlerAJUSTE.- en la actualidad casi todos los microscopistas practican la iluminación basadaen los principios establecidos por Köhler, conocida como iluminación de Köhler. Su finalidad es obtener una distribución homogénea de la iluminación, sobre el espécimen a observar, a pesar de las irregularidades de la fuente de luz.Pasos a seguir para la iluminación de Köhler:

1. Prender la fuente de luz (foco).2. Enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento (10X)3. Subir el condensador hasta el tope, con mucho cuidado.4. Cerrar por completo el diafragma de la lámpara ( o diafragma de campo)

colocado en la base del microscopio (de dónde sale la luz).5. Cerrar por completo el diafragma de Iris.6. Observar la figura geométrica que aparece en el campo (hexágono), y a la cual

se le llama diafragma. 7. Bajar el condensador lentamente hasta lograr la máxima nitidez de los bordes de

la figura geométrica o diafragma




8. Si no está centrado el diafragma en el campo, entonces:9. Centrar el diafragma en el campo con los tornillos de centrado que están en el

condensador, moviéndolos simultáneamente y lentamente, para evitar que eldiafragma salga del campo.

10. Abrir el diafragma de campo luminoso (o de la lámpara) hasta obtener iluminadaun área igual al campo visual.

11. Si el diafragma está centrado en el campo, ningún vértice debe salir del campo y

los espacios que hay entre vértice y vértice, deben ser iguales.12. Si no es el caso, debe cerrarse un poco el diafragma de campo luminoso y repetir

los pasos 9, 10 y 11.13.Abrir completamente el diafragma de campo luminoso. (Éste debe estar

siempre, completamente abierto o ligeramente cerrado, sólo se cierracuando se hace la iluminación Köhler).

14. Abrir poco a poco el diafragma de Iris, hasta obtener una iluminación que nolastime a los ojos.

15. Ajustar la intensidad de la luz con el tornillo de control de la intensidad, hastadonde no lastime a los ojos.

16. Ajustar la altura del condensador dependiendo del objetivo a utilizar.

17. Verificar el ajuste observando por el ocular, el campo debe estar iluminado total yhomogéneamente.

Pasos a seguir para enfocar el espécimen o muestra:1) Con los tornillos macrométricos, bajar con cuidado la platina hasta el tope.2) Con el revolver, colocar el objetivo de menor aumento (seco débil) en dirección

del orificio de la platina.3) Colocar el portaobjetos que contiene la muestra, en la platina, centrándolo en el

área del orificio de la platina.4) Asegurar el portaobjetos con las pinzas que hay en la platina.5) Con los tornillos macrométricos, sin ver por los oculares, subir lentamente la

platina hasta que llegue al tope (actualmente la mayoría de los microscopioscompuestos tienen un tope sólo para el objetivo seco débil, se recomiendaverificar esto antes de colocar un portaobjetos).

6) Sin ver todavía por los oculares, verificar hacia que sentido (si es hacia mi, ohacia fuera) se tienen que mover los tornillos macrométricos para bajar la platina.

7) Prender la fuente de luz (lámpara o foco).8) Con los tornillos macrométricos, bajar la platina lentamente hasta obtener una

imagen del espécimen.9) Afinar la imagen con los tornillos micrométricos.10) Ajustar la altura del condensador.11) Ajustar la cantidad de luz con el diafragma de iris.

12) Ajustar la intensidad de luz con el tornillo de control de la intensidad.13) Observar la muestra.Si se va a observar con los otros objetivos: 14) Con el revolver cambiar primero al objetivo seco fuerte y seguir los pasos 9 a 13.15) Con el revolver cambiar al objetivo de inmersión y seguir los pasos 9 a 1316) Antes de colocar el objetivo de inmersión en dirección de la muestra, debe

siempre colocarse una gotita de aceite de inmersión.




Recomendaciones para el uso de los objetivos:

CaracterísticaObjetivo

Seco débilObjetivo

Seco fuerteObjetivo deInmersión

Altura delcondensador

Aproximadamentede 1- 2 cm pordebajo de la

platina

Aproximadamentede 1- 2 cm pordebajo de la

platina

Condensadorpegado a la platina

Cantidad de luz(Diafragma de Iris)

Poca X Media XX Mucha XXX

Intensidad de luz(Tornillo decontrol deintensidad)

Baja X Media XX Alta XXX

X: significa una medida cualitativa a manera de comparación.

MICROSCOPIO COMPUESTO Y SUSCOMPONENTES PRINCIPALES

OCULARES

REVOLVER

OBJETIVOS

PLATIN

FOCO

BASE

CABEZAL

BRAZO

DESPLAZAMIENTOPLATINA

MACROMÉTRICO

MICROMÉTRIC

CONDENSADOR




PROCEDIMIENTO:- Identificar cada componente del microscopio, señalar su función.- Observar y anotar las cifras grabadas en el ocular y objetivos.- Enfoque de varias preparaciones.

Reporte: Elabore una matriz de información.




PRÁCTICA NO. 2LA CÉLULA VEGETAL.

INTRODUCCIÓN. Es de todos conocida la importancia que representa el Reino Vegetal.Los vegetales son casi los únicos seres vivos capacitados para captar energía, la cual, enunión de las sustancias inorgánicas que toman del aire y del suelo la emplean para la

elaboración de sus propios alimentos; la energía así utilizada la obtienen de la luz solar.Los otros organismos como las plantas no verdes y los animales, obtienen esa energía delos alimentos que toman de otros seres vivos, donde ésta se encuentra almacenada y enestado potencial. Por lo tanto casi toda la energía contenida en las substancias de que sehallan compuestas los organismos, inclusive el hombre, procede en último término de laluz solar captada por los vegetales verdes.Por consiguiente los vegetales verdes son e capital importancia para el mantenimiento dela vida.Los vegetales comprenden desde plantas unicelulares, por ejemplo levaduras y algunasalgas verdes, hasta las plantas mayormente diferenciadas.Para apreciar la organización de los procesos bioquímicos comprendidos en la producción

de los metabolitos primarios y secundarios de la plantas es necesario tener conocimientode la delicada estructura de la célula vegetal.

OBJETIVO: Que el alumno conozca algunas estructuras de la célula vegetal y puedaidentificarlas.

MATERIAL: Microscopio, bisturí, agujas, cuentagotas, portaobjetos, cubreobjetos, cajapetri, pipetas Pasteur.

MATERIAL BIOLÓGICO: Trocitos de cebolla, papa, plátano, semillas de legumbres,cereales, tallos y pétalos de flores, cáscara de cítricos, lechuga, jitomate, zanahoria, pera,

aceituna.

REACTIVOS: Solución de nitrato de plata al 0.1N. sol’n de lugol, sol’n de EDTA 0.1 M,glicerina verde de metilo acético, ácido acético, alcohol de 70°, carmín alumínico, vedebrillante.

PROCEDIMIENTO:a) Limpie la cebolla de las hojas exteriores secas, separe una de las hojas

internas y desprenda la membrana tenue que está adherida por su carainterna cóncava. Lleve esta muestra al portaobjetos evitando que se formenburbujas de aire. Séquelo al aire, vierta unas gotas de verde de metilo

acético por 5 minutos, lave con agua para quitar el exceso de colorante,agregue una gota de glicerina, coloque encima el cubreobjetos y observe almicroscopio. Observará las células de formas alargadas y bastante grandes.La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Losnúcleos son grandes y muy visibles, en su interior pueden llegar aobservarse granulaciones; son los nucleótidos. El citoplasma tiene aspectobastante claro, en el que se distinguen algunas vacuolas grandes coloreadasdébilmente.




b) Tome una hoja externa seca de la cebolla y corte un trocito de 1 cmcuadrado, deposítelo sobre un portaobjetos que contenga una gota deglicerina y observe al microscopio. Observará capas de células secas, conpoco contenido celular y las membranas de unas capas de células con otrassuperpuestas. Al enfocar con cuidado observará unas formas poliédricastransparentes con aspecto cristalino, si enfoca en distintos planos, podrá

observar las caras de cristales de oxalato de calcio. Estos son abundantesen los vegetales y tienen formas variadas, agujas, prismas alargados ypuntiagudos, etc. En la cebolla presentan aspecto de prisma.

c) Para hacer evidentes los cloroplastos y poderlos observar fácilmente,podemos usar una sustancia que puede ser reducida por ellos, (capacidadreductora de los plástidos) como el nitrato de plata. Extender nuevamente unpedacito de membrana de la cebolla en un portaobjetos evitando que seformen burbujas, agregará una gota de solución de nitrato de plata 0.1N yobserve a 40X. Espere el efecto de ennegrecimiento de los cloroplastos.

d) Los amiloplastos son importantes porque representan la sustancia dereserva (almidón), de la célula vegetal, se puede encontrar en mayorproporción en los cereales y semillas de legumbres, así como algunostubérculos o frutos, para identificarlos parta y raspe el cereal, leguminosa otubérculo con el bisturí, deposite el producto obtenido en el portaobjetos.Agregue una gota de agua y una de lugol, coloque el cubreobjetos y observe.Los granos de almidón se tiñen de color violeta intenso debido al lugol quecontiene yodo.

e) Los cromoplastos contienen substancias del tipo de los carotenos y puedenobservarse de la siguiente forma: Coloque una pequeña muestra de jitomateen un portaobjetos sin agregar agua, coloque el cubreobjetos y comprimasuavemente, observe al microscopio. La pulpa del jitomate muestra por logeneral las células bastante sueltas unas de otras, se percibe en elcitoplasma una serie de gránulos rojizos- anaranjados que son loscromoplastos. También puede obtener un corte fino de zanahoria, deposíteloen un portaobjetos, agregue una gota de agua, colóquele el cubreobjetos yobserve al microscopio. En las células de la zanahoria se observan unamultitud de corpúsculos irregulares de color rojizo débil hasta anaranjado.

f) Los tallos o pecíolos de las plantas tienen una resistencia mecánica relativa ysirven de sostén, debido a que las células tienen gran cantidad de celulosaque las engruesa. A este tejido se le da el nombre de colénquima y estáformado por células alargadas. Corte secciones transversales de tallo opecíolos de malva lo más finamente posible, fije con alcohol de 70° durantedos minutos, lave con agua y tiña con carmín alumínico por 15 minutos, laveabundantemente con agua y monte el corte en un portaobjetos con una gotade glicerina, cubra y observe. Con seco débil observará una especie degranulado de puntos rojos, cambie a seco fuerte y después a inmersión.




g) El mesocarpio del fruto de la pera y la aceituna representan elesclerénquima. Este tejido está formado por grupos o “nidos” de célulasimpregnadas de lignina a esto se debe la dureza de los frutos cuando noestán maduros. La Lignina se tiñe con verde brillante. Perta la pera y laaceituna y obtenga un raspado de cada uno por separado, colóquelo en unportaobjetos y agregue una gota de verde brillante, dejarlo actuar por un

minuto y lavar cuidadosamente con agua, seque el exceso con papel filtro yponga una gota de glicerina, cubra y observe al microscopio.

h) La cáscara o pericarpio de los frutos cítricos (naranja, mandarina, limón,toronja, etc) poseen cavidades hechas por las mismas células y están llenasdel aceite esencial al que deben su aroma. Haga cortes delgados de lacáscara de los frutos, coloque la muestra en un portaobjetos, agregue unagota de agua, cúbralo y observe con poco aumento.

i) Los tallos de lechuga o acelga tienen vasos llenos de látex que los hace

menos transparentes. Haga cortes longitudinales del tallo de la lechuga oacelga, colóquelos en el portaobjetos con una gota de agua, se observanramificaciones irregulares que tienen color más oscuro que el resto de lascélulas que corresponden a los vasos de látex.

Reporte: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.




PRÁCTICA Nº 3.OBSERVACIÓN DE CÉLULAS PROCARIÓTICAS Y SUS

CARACTERÍSTICAS TINTORIALES

INTRODUCCION.- La fijación de las células o tejidos puede ser definida como elprocedimiento que permite la preservación selectiva de su organización morfológica y de

su composición química para ser observados al microscopio.Los mejores fijadores contienen una o más sustancias que precipitan las proteínas de lascélulas, o que las hacen insolubles sin llegar a precipitarlas. Según cual sea el fijador y lascondiciones bajo las cuales se lo utilice, la fase sólida de protoplasma se separa de laacuosa en forma de fibrillas, gránulos, redes o vacuolas. La separación de la fase sólidase produce esencialmente debido a las uniones entre las moléculas proteicas,aumentando de esta manera su estabilidad para los tratamientos posteriores y laobservaciónEl fijador usado debe ser seleccionado de acuerdo a su actividad química específica, demanera que aquellas estructuras que se deseen conservar, sean preservadas conexclusión de otros materiales que podrían interferir con el efecto deseado. Es necesario

también evitar toda destrucción del material que va a ser estudiado y distribuir el efecto delfijador uniformemente en toda la célula.Por otro lado, la selección de un colorante para el estudio de las células por medio delmicroscopio óptico, depende de distintos factores, que incluyen la naturaleza del material aestudiar, el tipo de fijador utilizado y la reactividad química del colorante.La tinción de las bacterias por el método de Gram, permite clasificar a las bacteriasselectivamente en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Las primeras retienen elcolorante cristal violeta sin decolorarse por los reactivos diferenciadores que se aplican enla técnica de tinción.Las bacterias Gram positivas aparecen en visión microscópica teñidas de un color moradointenso, por el cristal violeta, debido a la capa gruesa de peptidoglicanos

Las bacterias Gram negativas, aparecen en visión microscópica teñidas de un colorsonrosado débil, por la Safranina., debido a la capa fina de peptidoglicanos.

OBJETIVO.- Que el alumno conozca a las bacterias como el principal ejemplo de célulasprocarióticas y que aprenda a emplear la técnica de tinción de Gram para bacterias, comointroducción a la identificación morfológica y afinidad de las células a los colorantes.

MATERIAL BIOLÓGICO: Nódulos de las raíces de leguminosas, alfalfa, trébol, soya, etc.Vino agriado, yogurt, infusión vegetal.

REACTIVOS: Alcohol etílico al 96° o alcohol etílico-acetona 1:1, cristal violeta, lugol,safranina, aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO:1. Se lavan los nódulos de las raíces de leguminosas, se parten y colocan sobre

portaobjetos, se agrega una gota de agua, se quitan los residuos y se fijan a lallama del mechero, se colocan en el puente de tinción y se tiñen.




2. Con una asa se toma una pequeña porción de la superficie del vino agriado y seextiende sobre un porta con una gota de agua, se fija a la llama del mechero y setiñe.

3. Con una pipeta Pasteur se toma una pequeña gota de de yogurt y se coloca en elportaobjetos en el que previamente se depositó una gota de agua destilada, semezcla y se hace una extensión delgada y se seca a la llama del mechero. Lavar la

preparación con xilol por escurrimiento, para eliminar la grasa que contiene elyogurt y dejar que se seque al aire.4. Se toma una pequeña porción de la película fina que aparece en la superficie de la

infusión, haciendo un frote sobre un portaobjetos, se seca a la llama del mechero yse tiñe.

TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM

1.. Coloque la laminilla en el soporte de la tina de tinción, cuidando que quedecompletamente horizontal.

2.. Agregue unas gotas del colorante cristal violeta, cubriendo la extensión; el tiempo deactuación del colorante es de dos minutos.3.. Lave con agua destilada para arrastrar el colorante, se hace por goteo con una pipetaPasteur, sin exceder el lavado y nunca directamente sobre el extendido para evitar elarrastre del mismo.4.. Vuelva a colocar la laminilla en el soporte de la tina de tinción.5.. Agregue solución de lugol, cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto.6.. Lave nuevamente con agua destilada.7.. Agregue unas gotas de alcohol etílico al 96° o alcohol etílico-acetona 1:1, cubriendo elfrotis y deje actuar de 30 segundos a un minuto, para arrastrar el colorante que queda librey decolorar.

8.. Lave cuidadosamente con agua destilada.9.. Agregue unas gotas de safranina cubriendo el frotis y deje actuar durante un minuto.10.. Lave con agua destilada.11.. Seque al aire, perfectamente .12..Agregue una “gotita” de aceite de inmersión y observe a 100 X.

Identifique en cada muestra la forma de las bacterias y, por el color cuáles son Gramnegativas y cuáles son Gram positivas.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONESSolución A:Cristal violeta 2 gr.Alcohol etílico 20 ml.

Solución BOxalato de amonio 0.8 grH2O destilada 80 ml.

Mezclar A y B para madurarlo y filtrar.




LugolYodo 1 gr.Yoduro de potasio 2 grH2O destilada 300 ml

Alcohol etílico-acetona 1:1Safranina.

REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.




PRÁCTICA 4.

CÉLULAS EUCARIÓTICAS Y SU DIVERSIDAD

INTRODUCCIÓN.- Las células vivas son entidades dinámicas, que cambian y se muevenconstantemente. Las células fijadas y teñidas son estables, y ya no cambian. Cuando mucho, las

imágenes obtenidas con material fijado solo pueden ser "instantáneas" de las células dinámicas. Amenudo es necesario reconstruir una cadena de acontecimientos por el estudio cuidadoso de muchasde estas instantáneas a intervalos diversos. Las células procarióticas por su tamaño no pueden serobservadas tan fácilmente sin fijar y teñir En cambio las células eucarióticas pueden observarse enmovimiento como algunos seres unicelulares, por ejemplo; los protozoarios, si es que se cuida deconservarlos bajo las condiciones de su medio natural. Pero la célula vegetal es más fácil deobservar debido a su tamaño y a la pared celular que recubre a la membrana plasmática. Puedeteñirse para contrastar sus estructuras más importantes, tales como núcleo y plástidos.El uso de colorantes adecuados para resaltar determinadas estructuras es frecuente, tomando encuenta la composición química de tales estructuras.

OBJETIVO.- Que el alumno identifique algunos organismos unicelulares (protozoarios) comoejemplo de célula viva, obtenidos de medios adecuados, y que observe células vegetales paraidentificar en ellas características que las hacen tan diferentes de las células procarióticas. Ademásde que conozca e identifique mohos, como ejemplo de hongos.

MATERIAL.- Microscopio, portaobjetos, cubreobjetos, pipetas Pasteur con chuzo, navaja, alfilereso agujas. Como material biológico: agua estancada (de florero con agua "podrida"), células decebolla o pétalos de flor, pan o tortilla con moho.

PROCEDIMIENTO.- A) Con la pipeta Pasteur tome una gota de agua estancada y colóquela en unportaobjetos; cúbrala inmediatamente con un cubreobjetos y observe a seco débil. Una vez enfocadala muestra, puede pasar a mayor aumento. Bajo el microscopio podrá ver muchas especies deorganismos unicelulares nadando activamente en la gota de agua. Estos organismos son protozoariosque han estado viviendo en el medio adecuado para su crecimiento y proliferación. Trate deidentificarlos con ayuda de los esquemas anexos.

B) Tome ahora la cebolla o el pétalo de una flor y haga una incisión que le permita separar una capadelgada para obtener un trocito y extenderlo perfectamente sobre el portaobjetos. A la célula de lacebolla puede agregarle una gota de colorante como el verde de metilo. Con éste se teñirán losnúcleos. Al corte de flor no es necesario teñirla pues las células poseen una vacuola de pigmentocoloreado que las hace muy visibles con su contorno bien delimitado por la pared celular.

C) Con la punta de un alfiler o de una aguja, tome una porción muy pequeña del moho del pan o detortilla, colóquelo en un portaobjetos que previamente tendrá una gota de agua destilada, luegoagregue una gota de colorante azul de metileno. Identifique las partes que constituyen al moho.




PRÁCTICA NO 5. PERMEABILIDAD CELULAR.

INTRODUCCIÓN: Una membrana celular es una capa de macromoléculas que

encierra todas las células y muchos organelos, se denomina membrana plasmáticacuando forma el límite exterior de una célula, Todas las membranas, sin considerar eltipo de organismo o célula, se construyen del mismo modo a partir del mismo modo, apartir de dos tipos de macromoléculas: los fosfolípidos que proveen la estructura; ylas proteínas, que proveen las funciones específicas de la membrana. Las membranasanimales también contienen el colesterol, que estabiliza la capa de fosfolípidos.

La estructura única de una membrana celular se describe frecuentemente como unmosaico fluido. Es un fluido porque antes que un sólido, el fosfolípido es un líquido, esun mosaico a causa de la disposición de diversas proteínas dentro de la capa defosfolípidos.

Una membrana celular es una barrera selectivamente permeable: algunos

materiales cruzan de manera libre y otros cruzan sólo en ciertos momentos. El paso escontrolado por la misma bicapa de fosfolípidos, y por el particular ordenamiento de lasproteínas en ella empotradas.

La estructura fosfolipídica es impermeable a muchos materiales. Sólo materialesmuy pequeños o sin ninguna carga eléctrica pueden penetrar esta barrera. Losmateriales cruzan las membranas celulares de cuatro maneras: difusión simple,difusión facilitada, transporte activo y transporte de volumen, y se resumen en lasiguiente tabla:

TIPO DETRANSPORTE

TIPOS DEMATERIALES DIRECCIÓN REQUISITOS

Difusión simple Esteroides, grasa,O2, CO2, H2O Altas a bajasconcentraciones NingunoDifusión facilitada Glucosa, Iones Altas a bajas

concentracionesProteína de canal,proteína receptora

Transporte activo Aminoácidos Bajas a altasconcentraciones

Proteínas detransporte, energía

Transporte departículas ensuspensión

Hormonas noesteroideas,enzimas, moco,microbios,neutronsmisores,

residuos

Dentro o fuera dela célula segúnnecesidad

Energía, algunasveces proteínasreceptoras.

OSMOSIS: La difusión de agua a través de una membrana celular tiene un nombreespecial, ósmosis. Las moléculas de agua son suficientemente pequeñas para difundirsemediante orificios en la estructura de fosfolípidos, mientras que muchas moléculas e ionesno lo son. El agua se difunde desde el lado de la membrana donde se concentra más (esdecir, donde hay menos materiales disueltos) al lado donde es menos concentrada (esdecir, donde hay más materiales disueltos). La dirección de la ósmosis es muy importante




para la célula. El hecho de que el agua entre o salga de una célula depende de lasconcentraciones relativas de materiales disueltos dentro y fuera de la célula. Tres términosdescriben estas concentraciones relativas: isotónico, (mismo), hipertónico, (por encimade), e hipotónico (por debajo de). Estas concentraciones y sus efectos de definen en lasiguiente tabla:

TÉRMINO CONCENTRACIÓNDE MATERIALESDISUELTOS

CONCENTRACIÓNDE AGUA DIRECCIÓN NETADE FLUJO DEAGUA

Ambiente isotónico Igualdad dentro yfuera de la célula

Igualdad dentro yfuera de la célula

Ninguna

AmbienteHipertónico

Más alta fuera de lacélula

Más baja fuera dela célula

Fuera de la célula

AmbienteHipotónico

Más baja fuera dela célula

Más alta fuera de lacélula

Dentro de la célula

OBJETIVO: Que el alumno compruebe la función de permeabilidad de la membranacitoplasmática, y su función de separar dos medios, el intracelular y el extracelular, tantoen células animales como en células vegetales, así como observar los efectos que sobrela célula ejercen sustancias diferentes al medio intracelular.

MATERIAL: Microscopio, tubos de ensaye, lancetas, portaobjetos, cubreobjetos, bisturí,pipetas Pasteur.

MATERIAL BIOLÓGICO: Sangre capilar, o sangre venosa con anticoagulante (paraobservar eritrocitos), pétalos de flores, de preferencia de color fuerte, para que lasvacuolas de antocianinas sean más visibles con el efecto de las soluciones.

REACTIVOS: Anticoagulante, solución salina isotónica, solución salina hipertónica ysolución salina hipotónica, agua destilada.

PROCEDIMIENTO:1. Obtenga unas gotas de sangre, por punción en la yema del dedo, y deposítelas en

un tubo con anticoagulante.2. Marque sus tubos como 1, 2, 3 y 4 y coloque unas gotas de solución isotónica en el

primer tubo, hipotónica en el segundo, hipertónica en el tercero y agua destilada enel cuarto.

3. Agite suavemente (para no romper los eritrocitos) y mezcle. Tome una gota y

deposítela en un portaobjetos, cúbralo con un cubreobjetos y observe a seco fuertey anote sus resultados.4. Tome un pétalo y haga una incisión con el bisturí hasta la mitad del grosor del

pétalo y desprenda la capa “aterciopelada”.5. Coloque en portaobjetos un fragmento de esta capa, 3 cortes en cada uno y

agregue al primero solución isotónica, al segundo solución hipertónica y al tercero,solución hipotónica. Observe a seco fuerte y anote sus resultados.

Reporte :Explique los resultados de cada observación




PRÁCTICA NO. 6.

DIVISIÓN CELULAR POR MITOSIS

INTRODUCCIÓN: Toda célula procede de otra célula preexistente. Las células vegetalescrecen debido sobre todo a la toma de agua. Cuando alcanzan un tamaño determinado sedividen, formando cada una de ellas dos células hijas idénticas. Las diversas partes de lacélula a menudo están distribuidas asimétricamente y han de repartirse entre las doscélulas hijas de tal modo que las nuevas células sean copias exactas de la célula original.En los eucariontes, el material hereditario forma parte de cromosomas complejos, larepartición equitativa de este material requiere por tanto un mecanismo más complicado,mediante el cual los cromosomas se dupliquen, se separen y se distribuyan de unamanera precisa entre dos células hijas, este mecanismo es la MITOSIS.La mitosis o división celular, apareció evolutivamente como una solución al problema de

asegurar una repartición equitativa del material nuclear entre las células hijas, en losorganismos eucarióticos. Es un proceso continuo que convencionalmente se divide encuatro fases principales, profase, metafase, anafase y telofase. En el tiempo antes ydespués de la mitosis la célula está en interfase. En la mitosis los cromosomas aparecencomo largas fibras estiradas que se van acortando a medida que avanza su enrollamientoy que se dirigen hacia el centro de la célula cuando se han contraído completamente.Entonces se escinden longitudinalmente en las dos mitades idénticas, las cuales sonllevadas a los polos opuestos de la célula mediante una serie de microtúbulos. En estosdos grupos equivalentes genéticamente, los cromosomas se desenrollan y se establecenen los núcleos de las células hijas.Una planta conserva la mayoría de las células que se forman durante su vida y vaproduciendo otras nuevas en regiones en activa división celular, localizadas en los ápicesde las ramas y las raíces.En los ápices se localizan áreas especializadas de división celular activa, llamadasmeristemas (del griego meristos = dividido). En el extremo de cada tallo hay un meristemaapical que produce un flujo continuo de células hijas a medida que el tallo se alarga más ymás. Este alargamiento es el resultado no solo de la división celular, sino también de quelas células nuevas absorben agua y aumentan de tamaño. Luego las células sediferencian en formas adaptadas a la función que desempeñan en la planta adulta.El meristema apical de la raíz produce células hijas hacia delante y hacia atrás. Haciadelante originan la “pilorriza”, una cubierta dura de células que se desgasta continuamentea medida que la raíz avanza a través del suelo y que es regenerada desde atrás pordivisión celular por el sistema apical.

OBJETIVO: Que el alumno observe en células vegetales las diferentes etapas de lamitosis..

MATERIAL.- Microscopio, tubos pyrex chicos, portaobjetos, cubreobjetos, bisturí o navajade un filo nueva y 2-4 agujas largas, aplicadores de madera, pinzas para los tubos,mechero Bunsen, caja de petri.

MATERIAL BIOLOGICO.- Un bulbo de cebolla tierna (de cambray), con raíz.




REACTIVOS.- Solución de acetocarmín en frascos goteros, esmalte transparentepara uñas.

PROCEDIMIENTO:

1. Con tres días de anticipación a la práctica, coloque un bulbo de cebolla (fresca y quetenga raíces largas de más de 3 cm) en un recipiente con agua, para estimular elcrecimiento de las raíces.2. Elija la parte final de una raíz de 4 cm de longitud, córtela por la base con un bisturí ycolóquela sobre un portaobjetos.3. Sujétela por la base y con el bisturí elimine perfectamente la cofia (cubierta protectoracuyas células no están en división).4. Inmediatamente por debajo de la cofia se encuentran ya las células meristemáticas,corte con el bisturí una porción de 0.5 cm de la parte apical y colóquela dentro de un tubode ensaye pyrex.Es recomendable procesar de 2 a 3 raíces, para asegurar el obtener células en

división.5. Agregar la solución carmín-acético a que cubra la porción de raíz (aproximadamente 2ml).6. Se calienta el tubo hasta que la solución carmín-acético entre en ebullición y semantiene durante 15 segundos. Tenga cuidado de que no se bote el contenido del tubo.7. Transcurrido este tiempo se pasa el contenido a una caja Petri y se coloca la raíz conuna pinza sobre un portaobjetos.8. Coloque sobre el portaobjetos que contiene la-s raíces otro portaobjetos y presionefirmemente para lograr el aplastamiento y por lo tanto la separación de las capascelulares.9. Retire con mucho cuidado el portaobjetos de encima de la raíz, coloque un cubreobjetos

y presione nuevamente, cuidando de no romperlo.10. Selle los bordes del cubreobjetos con el esmalte para uñas, transparente. (Para evitarque se seque la muestra y que al enfocar con los objetivos se vaya a mover elcubreobjetos y las capas celulares)11. Examine al microscopio con objetivo de inmersión, colocando una pequeña gota deaceite de inmersión sobre el cubreobjetos, para observar células meristemáticas enmitosis12. Tenga paciencia para revisar célula por célula en busca de las diferentes fases de ladivisión celular.

REPORTE: Elabore un mapa conceptual o una V Gowin.




PRÁCTICA NO. 7

MEDICIONES EN EL MICROSCOPIO

INTRODUCCIÓN.- La medición de objetos microscópicos es relativamente sencilla,aunque implica el empleo de los siguientes medios auxiliares o accesorios: ocular demedición, micrómetro objetivo y micrómetro ocular.El micrómetro objetivo: es un portaobjetos de 76 x 25.5 mm, en cuyo centro se hallagrabada una escala. La escala es por lo general, de 1 a 2 mm de longitud, y presenta de100 o 200 divisiones, respectivamente, cada una de las cuales mide 10 micras.El micrómetro ocular: es un disco de vidrio de 12 mm de diámetro o bien un ocularespecial, ambos presentan grabada una escala de 5 mm, cada milímetro tiene 10divisiones de 100 micras cada una. En el caso del disco, éste se coloca sobre el diafragmade cualquier ocular. Y en el caso del ocular éste debe ser del mismo modelo delmicroscopio.

Coeficiente micrométrico:es una cifra que expresa la

equivalencia en micrasde una

división de la escala del micrómetro ocular, al emplear cada objetivo del microscopio.Suele denominarse factor y la operación para obtenerlo, calibración del microscopio.El coeficiente micrométrico es inversamente proporcional al poder de amplificación de losobjetivos utilizados. Usualmente se obtienen tres coeficientes micrométricos para cadamicroscopio, uno para cada tipo de objetivo (10X, 40X y 100X).Una vez que ha sido calibrado el microscopio, no deben intercambiarse ni el ocularmicrométrico ni los objetivos del mismo con los oculares micrométricos u objetivos de otromicroscopio.Aplicación de las mediciones en el microscopio: en algunas áreas y/o disciplinas esmuy importante hacer la medición de ciertas estructuras, por ejemplo en Parasitología

médica para diferenciar un parásito de otro, hay que medirlos, ya que producenenfermedades diferentes y su tratamiento y complicaciones difieren. En Hematología lamedición de células permite diferenciar cierto tipo de anemias. En el árae de Farmacia serequiere de cierto de tamaño de las partículas de las suspensiones, para que éstascumplan con su función. En el área de alimentos por ejemplo los corpúsculos de grasadeben tener cierto tamaño para que puedan ser absorbidos a nivel intestinal.

OBJETIVO.- Que el alumno aprenda a tomar medidas microscópicas y las distintasaplicaciones que se tienen en diversas disciplinas.

MATERIAL.- Microscopio, micrómetro ocular, micrómetro objetivo, preparaciones

biológicas-PROCEDIMIENTO.-

I) 1.- Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca como cualquierpreparación con el objetivo seco débil, con cuidado se localiza la escala y se enfoca hastaque las líneas de la escala se vean claramente.2.- Se coloca el micrómetro ocular en el ocular de medición Si el microscopio es biocular,se elige uno de ellos). Si se trata del disco micrómetro, se desenrosca primero la parteinferior del ocular y después se inserta la plaquita del micrómetro (con la división hacia




arriba y evitando tocar la escala con los dedos), dejándolo caer suavemente y se vuelve aenroscar la parte inferior del ocular.

Si se trata del ocular especial, se sustituye por el ocular normal.

3.- Se corrige el enfoque de ambas escalas (del objetivo y del ocular) hasta queaparezcan igualmente nítidas.

4.- Luego se colocan paralelas las escalas, muy próximas entre sí o superpuestas,ayudándose con el movimiento de la platina y girando el ocular .5.- Es necesario hacer coincidir o superponer exactamente dos líneas de ambas escalasempezando por las líneas de cero de ambas escalas,6.- Luego busque hacia la derecha de las líneas de cero que otra línea coincide de unaescala con la otra.7.- Cuente el número de divisiones que hay para cada escala entre las dos líneascoincidentes (entre el cero y la línea de la derecha).8.- Aplique la siguiente fórmula matemática para obtener el coeficiente micrométrico:

C.M. = NDMOB x 10 / NDMO

En donde NDMOB = número de divisiones del micrómetro objetivo;

NDMO = número de divisiones del micrómetro ocular y 10 son las micras que mideexactamente cada una de las divisiones del micrómetro objetivo y C.M. = es el númerode micras de una división de la escala del micrómetro ocular.

Ejemplo: Se hacen coincidir las dos escalas de los micrómetros como en la figurasiguiente, cuando la línea 0 del micrómetro objetivo coincide con la línea 0 del ocular,luego la línea 27 del ocular coincide con la línea 20 del objetivo, por lo tanto, sustituyendoen la fórmula:

C.M. = 20 x 10 / 27 = 7.4 micrasRecuerde: El valor micrométrico encontrado de esta manera, vale únicamente para el

objetivo con el cual se ha efectuado la calibración.




9.- Retire el micrómetro objetivo de la platina.

II) Repita los pasos del 1-9 para el objetivo seco fuerte y luego para el objetivo deinmersión.III) Coloque en la platina alguna muestra que le proporcione su profesora-or, enfoque ymida una célula con la escala del micrómetro ocular, con el objetivo seco débil, contandoel número de divisiones que ocupa o abarca la célula de interés y aplique la siguienteexpresión matemática:

NDMOM X C.M. = Talla de la estructura medida expresada en micrasDonde NDMOM: es el número de divisiones de la escala del ocular que ocupó o abarcó lacélula o estructura de interés; C.M.: es el factor que obtuvo para ése objetivo dónde midióla estructura.

IV) Repita el anterior proceso con la misma célula pero con el objetivo seco fuerte y luegocon el objetivo de inmersión.

V) Anote sus resultados en la siguiente hoja y haga un análisis de los mismos.

1.- Con el objetivo 10X (seco débil), el número de divisiones coincidentes con el

micrómetro objetivo fueron: _________ y el número de divisiones coincidentes con el

micrómetro ocular fueron:________ . Por tanto sustituyendo en la fórmula el Coeficiente

Micrométrico para éste objetivo fue: ___________________________

2.- Con el objetivo 40X (seco fuerte), el número de divisiones coincidentes con el




3.- Con el objetivo 100X (inmersión), el número de divisiones coincidentes con el




4.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco débil fue de _________

micras.5.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco fuerte fue de _________

micras.

6.- El tamaño de la estructura que medí con el objetivo seco de inmersión fue de

_________ micras.




REPORTE: Informar los resultados obtenidos para cada objetivo




PRÁCTICA NO. 8

IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS, PROTEÍNAS Y LÍPIDOS.

INTRODUCCIÓN: Los compuestos orgánicos más importantes de las células son: loscarbohidratos, las proteínas, los lípidos, las vitaminas y los ácidos nucleicos. Dentro de

ellos, algunos como los carbohidratos y lípidos son necesarios como fuente de energía, lasproteínas también se pueden considerar como fuente de energía, pero no directamente,puesto que esencialmente actúan como reguladoras del metabolismo (enzimas) o parapreservar la integridad de las células (proteínas estructurales), y como anticuerpos delsistema inmune.La proteínas son los constituyentes orgánicos más abundantes y hay varios tipos. En casitodas las partes de la célula, las proteínas están presentes de alguna manera. Ciertostipos que se encuentran en el citoplasma, constituyen el ingrediente principal de los gelesprotoplásmicos, entre ellos se incluyen las globulinas. Otras proteínas simples seencuentran en el núcleo, como las histonas, importantes en cuanto a la estructura yfunción de los cromosomas, algunas proteínas son complejos formados por una proteína y

otra sustancia. Estas proteínas se llaman proteínas conjugadas. Las nucleoproteínas delnúcleo y del citoplasma, las lipoproteínas de la membrana citoplasmática, lascromoproteínas como la hemoglobina y muchas enzimas, constituyen ejemplos de estetipo.Los carbohidratos incluyen varios azúcares, almidones y celulosa de la pared de lascélulas vegetales.Los lípidos son componentes estructurales de las membranas citoplasmáticas y aparecentambién como inclusiones insolubles en el hialoplasma. Los fosfolípidos son compuestosimportantes que se encuentran en distintos organelos celulares.

OBJETIVO Comprobar la presencia (macroscópicamente), de carbohidratos, lípidos yproteínas en productos comestibles.

MATERIAL: Gradilla, tubos de ensaye, pinzas para tubo, mortero, parrilla eléctrica, Vasode precipitado de 600 ml.MATERIAL BIOLÓGICO: Muestras de pan, frutos, cereales, semillas, frutas secas yfrescas, lácteos, ...REACTIVOS: Benedict, ácido nítrico, solución de yodo 0.1N, cloroformo, Sudán III,solución de sacarosa, de almidón y de gelatina.

PROCEDIMIENTO:1. Marque 4 tubos y en ellas realizará las reacciones testigo o patrón que le permitirá

observar fácilmente la presencia de azúcares, lípidos, y proteínas.Tubo 1. Deposite 5 ml de solución de sacarosa y agregar 1 ml de reactivo de Benedict.Caliente a baño maría y observe el cambio de color.Tubo 2. Deposite 5 ml de solución de almidón y agregue 1 ml de solución de yodo0.1N. Observe el cambio de color.Tubo 3. Deposite 5 ml de solución de gelatina, agregue 1 ml de ácido nítrico y calienteel tubo. Anote el cambio de color.Tubo 4. Deposite 1 ml de aceite y agregue 3 ml de agua y 3 de cloroformo, enseguidaagregue unas gotas e Sudán III y agite cuidadosamente. (LEJOS DE CUALQUIERMECHERO O FLAMA) y observe el resultado.




Los 6 tubos restantes le servirán para determinar en los comestibles que llevó,triturándolos previamente en un mortero, la presencia de proteína, lípidos,carbohidratos sencillos y polisacáridos, Anote sus resultados y compare con susdeterminaciones testigo.Las pruebas anteriores demostrarán macroscópicamente, las substancias orgánicasque se encuentran en forma más abundante en los productos comestibles que le

permitirán relacionar a éstos con su origen químico.REPORTE: ALIMENTOS Y ENERGÍA. ESTIMA:Cada día hay que ingerir un cierto número de calorías si se desea mantener una buenacondición física. La energía que tu necesitas depende de tu edad , sexo, tamaño, y el tipode actividades que realizas. En promedio, una persona como tu requiere cerca de 1 800kcal al día solo para mantener el calor del cuerpo y asegurar que continúen todas lasfunciones metabólicas, (metabolismo basal). Esto es lo mínimo que tienes que tomar parasobrevivir durmiendo todo el día en una cama. Pero si haces otras cosas, hay que sumarlas calorías extras que se necesitan. La siguiente tabla indica el consumo de calorías al

realizar algunas actividades:ACTIVIDAD KCAL POR HORA ACTIVIDAD KCAL POR HORASentado(ver tv oleer)

25 Tender la cama 230

Sentado(comiendo)

35 Nadar 320

De pie 40 Bailar 400Caminar 100 Andar en bicicleta 200Correr 400 Jugar fútbol 520Subir escaleras 800 Jugar basquetbol 400

Bañarse 25 Jugar voleibol 120

Haz una lista de tus actividades diarias y del número de horas que gastas en cada una deellas. Estima la cantidad del total de calorías que requieres para hacer cada una de ellas yanota tus resultados en la siguiente tabla.

ACTIVIDAD NO. HORAS KCALREQUERIDAS

ACTIVIDAD NO. HORAS KCALREQUERIDAS

A) ¿Cuántas kcal extras requieres al día?B) ¿Cuántas kcal totales requieres al día?Esta energía la obtienes de los alimentos que ingieres, consulta un libro de nutrición dondeencontrarás el contenido de carbohidratos, grasas y proteínas de algunos alimentoscomunes. Organízate en equipo con tus compañeros de equipo y usen esta informaciónpara diseñar un menú balanceado (desayuno, comida y cena) que les proporcione lascalorías que requieren al día.




PRÁCTICA N°8

OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS

INTRODUCCIÓNEn biología, se denomina cromosoma (del griego χρώµα, -τος chroma , color y σώµα, -τος soma , cuerpo o elemento) a cada uno de los pequeños cuerpos en forma de bastoncillosen que se organiza la cromatina del núcleo celular durante las divisiones celulares (mitosisy meiosis). La cromatina es un material microscópico que lleva la información genética delos organismos eucariotas y está constituida por ADN asociado a proteínas especialesllamadas histonas. Este material se encuentra en el núcleo de las células eucariotas y sevisualiza como una maraña de hilos delgados. Cuando el núcleo celular comienza elproceso de división (cariocinesis), esa maraña de hilos inicia un fenómeno decondensación progresivo que finaliza en la formación de entidades discretas e

independientes: los cromosomas. Por lo tanto, cromatina y cromosoma son dos aspectosmorfológicamente distintos de una misma entidad celular.

Cuando se examinan con detalle durante la mitosis, se observa que los cromosomaspresentan una forma y un tamaño característicos. Cada cromosoma tiene una regióncondensada, o constreñida, llamada centrómero, que confiere la apariencia general decada cromosoma y que permite clasificarlos según la posición del centrómero a lo largodel cromosoma. Otra observación que se puede realizar es que el número de cromosomasde los individuos de la misma especie es constante. Esta cantidad de cromosomas sedenomina número diploide y se simboliza como 2n . Cuando se examina la longitud detales cromosomas y la situación del centrómero surge el segundo rasgo general: para

cada cromosoma con una longitud y una posición del centrómero determinada existe otrocromosoma con rasgos idénticos, o sea, casi todos los cromosomas se encuentranformando parejas. Los miembros de cada par se denominan cromosomas homólogos.En la figura de la derecha se presentan todos los cromosomas mitóticos de una niña,ordenados por parejas de homólogos y por su longitud, lo que se denomina cariotipo.Puede observarse que en ese cariotipo hay 46 cromosomas (o sea, 2n=46) que es elnúmero cromosómico de la especie humana. Se puede advertir, también, que cadacromosoma tiene una estructura doble, con dos cromátidas hermanas que yacen paralelasentre sí y unidas por un único centrómero. Durante la mitosis las cromátidas hermanas,que son idénticas, se separan una de otra hacia dos nuevas células. Las parejas decromosomas homólogos que se observan en la imagen tienen, además, una semejanza

genética fundamental: presentan los mismos genes situados en los mismos lugares a lolargo del cromosoma (tales lugares se denominan locus o loci en plural). Esto indica quecada miembro del par de homólogos lleva información genética para las mismascaracterísticas del organismo. En organismos con reproducción sexual, uno de losmiembros del par de cromosomas homólogos proviene de la madre (a través del óvulo) yel otro del padre (a través del espermatozoide). Por ello, y como consecuencia de laherencia biparental, cada organismo diploide tiene dos copias de cada uno de los genes,cada una ubicada en uno de los cromosomas homólogos. Una excepción importante en elconcepto de parejas de cromosomas homólogos es que en muchas especies losmiembros de una pareja, los cromosomas que determinan el sexo o cromosomas




sexuales, no tienen usualmente el mismo tamaño, igual situación del centrómero, la mismaproporción entre los brazos o, incluso, los mismos loci . En la imagen puede observarse,por ejemplo, que el cromosoma Y (que determina el sexo masculino en humanos) es demenor tamaño y carece de la mayoría de los loci que se encuentran en el cromosoma X.

Para conocer o estudiar los cromososmas, se pueden usar distintos tejidos o muestras

biológicas, ya sea de humanos, vegetales o animales; por ejemplo, en el humano, sangreperiférica, medula ósea, fluido amniótico y productos de la concepción (para fines dediagnóstico). En vegetales el clásico estudio se hace en células de cebolla. Y en animalesel clásico estudio se hace en la mosca de la fruta o del vinagre, Drosophila melanogaster.

Aunque las técnicas específicas difieren según el tejido usado, el método básico paraobtener preparaciones de cromosomas es así:

• Recolección de la muestra y preparación inicial.

• Cultivo celular.

• Adición de un inhibidor de la mitosis para detener las células en metafase.

• Recogida de las células. Este paso es muy importante para obtener preparacionesde alta calidad. Implica exponer las células a una disolución hipotónica, seguida deuna serie de disoluciones fijadoras. Esto hace que las células se expandan, demodo que los cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente.

• Tinción de las preparaciones cromosómicas para detectar los posibles cambiosnuméricos y estructurales.

OBJETIVO.- Que el alumno conozca los cromosomas, su morfología e importancia a nivel

biológico, así como el que aprenda a realizar una técnica de estudio de los cromosomas.

MATERIAL.- Microscopio, laminillas de colección permanentes, material de acuerdo a latécnica a realizar y de acuerdo al material biológico (sangre, cebolla o la mosca de la frutao del vinagre, Drosophila melanogaster) Procedimiento:Cuando se trata de los glóbulos blancos, se toma una muestra de sangre por su fácilaccesibilidad.Siembra: se realiza agregando aproximadamente 1 mililitro de sangre entera heparinizadaa un medio de cultivo enriquecido con suero fetal bobino, antibióticos y mitógenos, lo cualestimulará el crecimiento y división de las células.

Incubación: Se mantiene a 38.0 grados centígrados con una atmósfera de CO2 al 5 % yhumedad por 72 horas idealmente.Cosecha: Se agrega colchicina a la muestra para detener los núcleos ceulares enmetafase, posteriormente se cenfrifuga la mezcla para retirar el sobrenadante (suerosanguíneo y medio de cultivo). Se agrega solución hipotónica de cloruro de potasio pararomper las membranas celulares y para finalizar el paso de la cosecha se realizan 3lavados con una solución de metanol-ácido acético 3:1.Goteo: Posterior a los lavados, por medio de centrifugación, se obtiene un botón celularblanco, el cual se suspende en la misma solución fijadora metanol-ácido acético 3:1 y se




procede a gotear en un portaobjetos a unos cuantos centímetros, esto es con el objetivode "reventar" las células y obtener los cromosomas.Envejecimiento: En este paso se espera a que los cromosomas pierdan humedad. Sepuede aplicar calor al portaobjetos para deshidratar la muestra.Tinción: Existen muchos tipos de tinciones para observar los cromosomas. La másutilizada es la tinción con colorante Giemsa, se conoce como técnica de bandas GTG. En

este caso se expone la muestra del portaobjetos a tripsina, con el objetivo dedesnaturalizar algunas de las proteínas constitucionales de los cromosomas.Posteriormente se tiñen con dos colorantes, Giemsa y Wrigth, en algunos laboratoriospuede emplearse un solo colorante, pero el empleo de los dos mejora la calidad delresultado, puesto que facilita el análisis al microscopio para el citogenetista creando uncontraste de color en las bandas que se formaron al emplear la tripsina. Por medio deestas bandas podemos distinguir las características de un cromosoma y determinar si esnormal o presenta alguna anomalía estructural. Existen otras técnicas de tinción, comobandas NOR, ICH, bandas Q, bandas R, técnicas para teñir centrómero yheterocromatina. Con este tipo de técnicas se puede llegar a realizar un diagnósticocitogenético acerca de una enfermedad cromosómica.

Lectura: El último paso consiste en leer por lo menos 20 metafases, es decir 20 célulasreventadas y formar un cariotipo o cariograma, donde se acomodan los cromosomas porgrúpos según el tamaño y la localización del centrómero.

REPORTE:Dibuje los cromosomas que observo y anote los nombres de cada de las partes que loconstituyen.




CRITERIOS DE EVALUACIÓN

La acreditación del Laboratorio de Citología te da derecho a la evaluación de la Teoría.Asistencia 100%. (dos retardos equivalen a una falta).

Elaboración en equipo de un mapa conceptual de cada sesión de laboratorio.

Exámenes parcialesExposiciones por equipo

BIBLIOGRAFÍA

1- Thompson, James S. Genética médica . Barcelona : Salvat Editores, 1975

2- Wells, Albert Laurence The microscope made easy . New York : Frederick Warne,1957

3- Bernis Matev, J. Atlas de microscopía . Barcelona : Juver, 1973.

4- De Haro Vera, A. Atlas de biología / Barcelona : Jover, 1974.

5- Castillo, Luis Felipe del. El fenómeno mágico de la ósmosis / Mèxico : F.C.E. ; 1986,reimpresión

6- Herrath, Ernest Von. Atlas de citología, histología y anatomí Barcelona : cientificomedica, 1975.

7.- Karp Gerald. Biología celular y molecular. Edit. Mc Graw-Hill Interamericana.

8.- Albert Bruce, Bray Denis. Biología molecular de la célula. Edit. Omega.

9.- De Robertis, Eduardo D.P. Biología molecular. Edit. El Ateneo. Última edición

10.- Lodish, Harvey. Biología molecular y celular. Edit. Médica Panamericana.

11.- Paulsen Douglas F.. Histología Básica. Edit. Manual Moderno

12.- Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiología médica. Edit. Manual Moderno




Reglamento del Laboratorio de Biología

El alumno deberá:1- Siempre presentarse con bata blanca, incluso si en la sesión sólo se llevan a cabo

seminarios y o exámenes.2- Cumplir con las actividades y o tareas solicitadas por la profesora.

3- Asistir puntualmente a las sesiones, sólo tendrá 10 minutos de tolerancia, una vezque se pase lista, si llega después, se considerará como falta.4- Colocar fuera de las mesas de trabajo, mochilas, suéteres, chamarras u otros

objetos que no requiera para la realización de la práctica.5- Traer el material biológico o de otro tipo solicitado por la profesora.6- Siempre traer guantes, cubreboca y perilla para las pipetas.7- Siempre traer jabón y papel sanitario para el aseo de las manos y para la limpieza

del material de vidrio y de las mesas de trabajo.8- Solicitar el material que requiere para las prácticas por medio de un vale, ya sea a

la profesora o a la persona encargada del área del material y reactivos.9- Manejar con mucho cuidado el material, las soluciones o reactivos.

10- Siempre pipetear las soluciones, con la perilla correspondiente y nunca con laboca.11-Dejar los frascos de las soluciones en el lugar de donde los tomó, después de su

uso.12-No desechar soluciones de colorantes, papeles, muestras biológicas sólidas

(vegetales), ni material de vidrio roto (portaobjetos, cubreobjetos, tubos) en lastarjas.

13- No dejar pipetas contaminadas directamente sobre las mesas.14-Colocar el material contaminado en las bolsas o recipientes correspondientes, de

acuerdo a la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Protección ambiental-Saludambiental- Residuos peligrosos biológicos infecciosos- Clasificación y

especificaciones de manejo.15-Manejar y cuidar los microscopios de acuerdo a la información proporcionada alinicio del curso.

16-Anotarse en la libreta que está al lado del microscopio que utilice, y en su casoreportar cualquier anomalía o desperfecto hallado en el microscopio antes odurante su manejo.

17-Limpiar el aceite de inmersión de los objetivos del microscopio, de acuerdo a lasindicaciones dadas por la profesora.

18-Al término de la práctica, dejar desconectados los microscopios, cubrir elmicroscopio con su correspondiente funda y dejar cerrada la caja con llave.

19-Al término de la práctica, dejar limpias las mesas, libres de papeles, material

biológico o de otro tipo.20- Al concluir la práctica, entregar el material que empleó según las indicaciones dela profesora, así como solicitar la devolución del vale.

21- En caso de romper algún material, deberá reponerlo a la brevedad posible, para locual se le retendrá el vale.

22- En caso de algún incidente o accidente, deberá informarle a la profesora, para quese tomen las medidas pertinentes.

23-Antes de retirarse del laboratorio, checar que no se le olvide algo, ya que laprofesora no se hará responsable por manuales, celulares, libros, batas, etc,olvidados.




Documents

Manual-Biología Molecular de la Célula