UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CIUDAD JUREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMEDICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS

ACADEMIA DE BIOQUMICA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE

BIOQUMICA MDICA (PLAN 2014)

Documento modificado, actualizado y revisado por: M. en I. Edith Enrquez GallosaM. en C. Leny Judith lvarez AraujoDocentes y Tcnicos Acadmicos de la Academia de Bioqumica

Vo.Bo.:Dra. Laura Alejandra de la Rosa CarrilloCoordinador de la Academia de Bioqumica

Autorizado por:Ph.D. Alejandro Martnez MartnezJefe del Departamento de Ciencias Qumico Biolgicas

Cd. Jurez ChihuahuaRevisin Enero 2015Manual de Practicas de Laboratorio de Bioqumica Mdica 1997Instituto de Ciencias BiomdicasUniversidad Autnoma de Ciudad Jurez

Semestre regular Enero Mayo 20XXSemestre regular Agosto Noviembre 20XXCurso de Verano Junio Julio 20XX

NOMBRE DEL ALUMNO____________________________________ MATRICULA ____________________

HORARIO DE TEORIA ____________________

HORARIO DE LABORATORIO_______________

GRUPO DE LABORATORIO _________________

NUMERO Y/O NOMBRE DEL EQUIPO ______________________

PROLOGOiP R E S E N T A C I NiiREGLAS PARA LOS ALUMNOS QUE ASISTEN A LOS LABORATORIOS DE BIOQUIMICA.iiiINSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE MANUALvPRCTICA No. 11BIOSEGURIDAD1PRCTICA No. 24CUANTIFICACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA SERICAS4PRCTICA No. 38DIGESTION DE CARBOHIDRATOS8PRCTICA No. 411PERFIL LIPIDICO11PRCTICA No. 515CUANTIFICACIN DE CIDO RICO SRICO15PRACTICA No.619DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE BILIRRUBINAS SERICAS19PRACTICA No. 723DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE TRANSAMINASAS SERICAS23

PROLOGO

El siguiente manual ha sido modificado de acuerdo a las necesidades de la nueva Curricula 2014 de la carrera de Medicina, por lo que se espera que el alumno aproveche en su totalidad la informacin aqu presentada.

El curso de Bioqumica Mdica se imparte en el Instituto de Ciencias Biomdicas como parte del programa integral del Departamento de Ciencias Qumico Biolgicas y se requiere del curso de Biqumica General como materia antecedente.

En este curso se presenta una completa orientacin hacia el rea Mdica en donde se correlacionan aspectos del metabolismo integral con las funciones especficas de los rganos y sistemas con un carcter muy fundamental teniendo en cuenta que dichas funciones se tratarn con mayor detalle en las nosologas y las clnicas respectivas.

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P R E S E N T A C I N

Uno de los aspectos fundamentales de la enseanza de materias correspondientes al rea de las Ciencias Bsicas, es que el estudiante debe de comprender los elementos tericos revisados. Con el fin de reafirmar dichos conocimientos es necesario que los practique en el Laboratorio y como consecuencia reciba los refuerzos apropiados y al final de dicho curso este compenetrado con la materia analizada.En la Academia de Bioqumica siempre ha existido el inters de que los alumnos que cursen dichas materias tengan la capacidad de comprender los fenmenos moleculares tanto a nivel celular como del organismo.El individuo que se dedique a la investigacin y/o a la enseanza de la Bioqumica, debe de estar convencido de que el ensayo de formas ms eficientes de involucrar al alumno en el estudio de sta interesante rea, es la nica manera de evolucionar positivamente en la investigacin y en la excelencia acadmica.Este manual de prcticas es el resultado del esfuerzo comn de la Academia de Bioqumica, con el nico fin de fomentar la interrelacin de los conocimientos tericos con la actividad prctica, de una manera ms organizada, en aras de un mayor aprovechamiento de la enseanza Bioqumica. En base a este pensamiento, nos comprometimos a elaborar el "Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica medica" el cual esperamos sea til durante los cursos de Bioqumica.En este Manual se pretende dar al alumno una informacin bsica, que lo motive a desarrollar un diseo experimental predeterminado y a deducir por medio del anlisis objetivo de los resultados, las posibles implicaciones que se tengan para demostrar un hecho que fue discutido previamente en la clase terica.Agradecemos la cooperacin y el apoyo recibido por parte de las autoridades Universitarias para lograr la publicacin de este Manual.

Atentamente Comisin ElaboradoraAcademia de Bioqumica

M.C. Hctor Reyes LealBiol. Hctor Esparza ValenciaQ.F.B. Gilberto Reyes Leal Biol. Daniel Chvez LicnQ.F.B. Graciela Manjarrez G. Q.B.P Jorge Bayln MonrrezQ.B.P. J. Angel Araujo Dr. David Reyes Ruvalcaba. Q.B.P. Oscar Barrozo

1997

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REGLAS PARA LOS ALUMNOS QUE ASISTEN A LOS LABORATORIOS DE BIOQUIMICA.

1. Al inscribirse en la materia queda automticamente inscrito en un grupo de Laboratorio. El maestro no est facultado para realizar cambios de grupo y/o permutas.2. La asistencia a los laboratorios es obligatoria y debern presentarse con un retardo no mayor de 10 min. de la hora de entrada.3. Para tener derecho a calificacin final del laboratorio se requiere un 80 % de asistencias.4. Toda falta a la prctica equivale a cero en su reporte.5. Es obligatorio presentarse con bata blanca de manga larga a las sesiones de laboratorio.6. Durante las sesiones de laboratorio queda estrictamente prohibido fumar e ingerir alimentos.7. En caso de reprobar el laboratorio, automticamente queda reprobado en la clase de teora.8. La calificacin final de laboratorio corresponde al promedio obtenido en las prcticas, exmenes y trabajo en el laboratorio.9. Los reportes de la semana se entregarn obligatoriamente en el horario establecido por el maestro. La aceptacin extempornea de reportes queda a consideracin del docente. El Reporte es individual.10. Los reportes ya calificados, se devolvern a la semana siguiente.11. El material que sea daado por el alumno, deber reponerse antes de finalizar el curso acompaado con la factura de compra. De no ser as no se condicionar la calificacin del alumno. 12. Si parte del material es daado o se pierde y se desconoce al responsable, el material ser repuesto por el grupo asistente a la prctica.13. Se realizarn los exmenes de laboratorio pertinentes en las fechas indicadas en la calendarizacin de la academia.14. Es obligacin del alumno entregar el material limpio cada vez que termine su prctica.15. Se recomienda mantener limpia su mesa de trabajo y guardar el mayor orden posible.16. El alumno se deber comprometer a regresar el material en las mismas condiciones en que lo recibieron.17.- Los reportes se calificarn en base a los acuerdos de la academia, teniendo mayor peso los siguientes apartados:A)ResultadosB)DiscusinC)ConclusionesD)CuestionarioE)BibliografaEl maestro detallar la forma de reportar dentro del encuadre, el da de la recepcin del grupo. Incluyendo el trabajo experimental y la discusin y participacin en la prctica.18.- Es obligacin del alumno investigar sobre el tema de la prctica previa realizacin de sta, en caso de presentarse sin haber estudiado se considerar como falta de inters, afectando la calificacin de la participacin de la misma.19.- De igual manera, para aqul alumno que no se prepare para la discusin de las prcticas, se ver afectado en la parte de su calificacin de correspondiente a la misma.

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INSTRUCCIONES PARA EL USO DE ESTE MANUAL

Con la idea de que el alumno pueda manejar de manera ms eficiente este Manual se hacen las siguientes recomendaciones:1.- Al principio del Manual se incluye un ndice de las prcticas a realizar, que permite su rpida localizacin.2.- La secuencia de prcticas, est en funcin de los programas de teora y cabe aclarar que en la primera sesin se les indicar cuales prcticas se van a realizar durante el semestre.3.- Todas las prcticas estn subdivididas en dos partes:a) Incluye la descripcin metodolgica de la prctica, que a su vez se subdivide en:- Ttulo de la prctica- Objetivo de la prctica- Prerrequisitos- Introduccin- Material y Mtodosb) Contiene los elementos correspondientes al reporte de la prctica y se subdivide en:- Resultados- Discusin- Conclusiones- Cuestionario- Bibliografa consultada4.- A continuacin se mencionan algunos aspectos significativos de cada uno de estos elementos:a) Ttulo de la prctica.- Indica el nombre de la prctica y la de manera especfica de lo que se va a realizar durante la sesin.b) Objetivo de la prctica.- Seala lo que se espera que el alumno logre al trmino de esta.c) Prerrequisitos.- Comprende una serie de puntos, que el alumno debe de conocer su significado con anterioridad a la explicacin de la prctica, para lo cual se recomienda consultar la bibliografa recomendada al final de este Manual.d) Introduccin.- Informacin bsica y muy breve, referente a la prctica a realizar.e) Mtodos y Materiales.- Es la descripcin del desarrollo de la prctica, sealando el equipo, cristalera y soluciones a utilizar en la prctica. Es importante que el alumno entienda la secuencia del desarrollo antes de iniciar el experimento, por lo cual es necesario que se lea antes de la sesin de explicacin de la prctica, para que pueda consultar sus dudas con el Docente.f) Resultados.- En esta seccin se anotan los datos obtenidos durante la sesin de la prctica, de acuerdo a las indicaciones tanto del Manual como del Profesor.h) Discusin.- Es una de las partes principales de todo experimento, ya que consiste en realizar un anlisis comparativo de los resultados esperados con respecto a los obtenidos, llevando a cabo la argumentacin necesaria de dichos resultados.i) Conclusiones.- En base a los resultados obtenidos y a la discusin desarrollada, concluir cuales son los puntos principales y que consecuencias a futuro plantean esta prctica.j) Bibliografa consultada.- En este punto se deben incluir las referencias bibliogrficas de los libros o artculos consultados, de acuerdo a los siguientes lineamientos:

En el caso de revistas:Nombre(s) del autor(es), (ao), Ttulo del artculo Nombre de la Revista, Volumen, Pginas consultadas

En el caso de libros:Nombre(s) del autores), (ao), Nombre del captulo. Nombre del libro. Editorial. Edicin. Pas. Pginas consultadas.

PRCTICA No. 1BIOSEGURIDAD

OBJETIVO:El alumno determinar la importancia de la aplicacin de la normatividad sobre la seguridad, en niveles de riesgo en cualquier laboratorio para evitar accidentes.

PRERREQUISITOS:1. Diferencias entre regla, reglamento, norma y ley. 2. Diferencia entre ley y costumbre.3. Organismos que rigen las normatividades.4. Normas involucradas en la seguridad en los laboratorios.

INTRODUCCIN: Bioseguridad es una palabra compuesta por bio (del latn que significa vida) y seguridad (del latn securitas que significa ausencia de riesgo).El riesgo es la vulnerabilidad ante un dao para personas, cosas y/o el medio ambiente. Existe una variedad de riesgos en los que se encuentran los riesgos fsicos, qumicos, biolgicos, ambientales, laborales, financieros, polticos, etc.Sin embargo en el laboratorio el nivel de bioseguridad depende del grupo de riesgo:

Tabla I.- Clasificacin de laboratorios Grupo de riesgoNivel de bioseguridadTipo de laboratorioPrcticas de laboratorioEquipo de seguridad

1BsicoNivel 1Enseanaza bsica, investigacinTMANinguno; trabajo en mesa de laboratorio al descubierto

2BsicoNivel 2Servicios de atencin primaria; diagnstico, investigacinTMA y ropa protectora; seal de riesgo biolgicoTrabajo en mesa al descubierto y CSB para posibles aerosoles

3ContencinNivel 3Diagnstico especial, investigacinPrcticas de nivel 2 ms ropa especial, acceso controlado y flujo direccional del aireCSB adems de otros medios de contencin primaria para todas las actividades

4Contencin mximaNivel 4Unidades patgenos peligrososPrcticas de nivel 3 ms cmara de entrada con cierre hermtico, salida con ducha y eliminacin especial de residuosCSB de clase iii o trajes presurizados junto con CSB de clase ii, autoclave de doble puerta (a travs de la pared), aire filtrado

TMA: tcnicas microbiolgicas apropiadas. CSB: cmara de seguridad biolgica. OMS(2005)

En los laboratorios aparte del equipo, existen soluciones reactivas las cuales tambin se manejan y deben llevar un requerimiento para su uso. Cada sustancia que se maneje en los laboratorios debe estar etiquetada y siempre deber haber a la mano la Hoja de Datos de Uso Seguro (MSDS por sus siglas en ingles), misma que refiere los cuidados que se debe tener para el manejo de las sustancias.El Sistema de Comunicacin de Riesgos (Right To Know) muy utilizado en los E.U.A. nos refiere de manera explcita de los riesgos y daos a los cuales estamos expuestos por el manejo de una sustancia y que equipo de proteccin personal se debe de utilizar. Aqu en Mxico la Secretaria de Trabajo y Previsin Social tambin se preocupa por los riesgos ocupacionales de los diferentes centros de trabajo junto con la Secretaria de Salud, por lo que tambin existen sealizaciones para determinar las reas de trabajo, puertas de acceso, y salidas, reas despejadas, cdigo de tuberas para sustancias que corran en ellas, etc. Es por eso que es muy importante tomar en cuenta las barreras y el tipo de ellas. Tambin es importante hacer hincapi en el desecho adecuado de las sustancias que se manejan en los laboratorios los cuales son vigilados por la SEMARNAT ya que estos son dispuestos al medio ambiente, llmese agua (a los drenajes que a pesar de llegar a una planta de tratamiento de agua residuales en algunas ocasiones, estas siguen su curso a canales de irrigacin y/o acequias para riego de cultivos y por ende al subsuelo), cielo abierto (por la emisin de los gases y que contaminan el aire que respiramos) o tierra (con la disposicin de los residuos slidos que impactan a el medio alterando los ciclos naturales biolgicos).

MATERIAL: Ocupado para la elaboracin de esta prctica

METODO:Investigacin del marco terico, en las diferentes referencias impresas o computarizadas sobre el cual se sustenta la minimizacin de los riesgos para la realizacin del trabajo seguro en cualquier laboratorio.

RESULTADOS:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

DISCUSION:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSION:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:

Manual de Seguridad e Higiene y Reglamento General de Laboratorios de la UACJ 2006

Reglamento Interno de la Academia de Bioqumica

Normas Oficiales Mexicanas del Diario Oficial de la Federacin

Ley General de Salud

Manual de Bioseguridad en el LaboratorioOrganizacin Mundial de la SaludTercera Edicin

CUESTIONARIO:

1._ Importancia del manejo de residuos peligrosos2._ Importancia de la NOM-087-ECOL-19973._ Funcin del rombo de seguridad en el laboratorio4._ Importancia de la Ley General de Salud en la clnica medica5._ Explique a que se refiere el acto y la condicin insegura6._ Que es un riesgo7._ Por que debemos vivir con lineamientos

PRCTICA No. 2CUANTIFICACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA SERICAS

OBJETIVO:Conocer y practicar dos tcnicas de cuantificacin de protenas del suero y analizar los resultados en relacin a posibles anormalidades desde un punto de vista metablico

PRERREQUISITOS:1. Analizar el fundamento qumico de la reaccin de Biuret2. Conocer el perfil protenico del suero3. Analizar clnicamente el termino Protenas Totales y albumina srica

INTRODUCION:Una de las fracciones orgnicas ms importantes de la sangre es la de las protenas, tanto por su contenido total de protenas del plasma es normalmente del orden de 5.7 a 8.0 g/dl. Las protenas sricas constituyen la mayor parte de los slidos del plasma y son una mezcla compleja de protenas simples y conjugadas como glucoprotenas y lipoprotenas.

Las protenas del plasma estn constituidas en tres principales: Albumina, Globulinas y Fibringeno. El Fibringeno normalmente constituye del 4 al 6% de las protenas plasmticas, es producido por el hgado y tiene importancia fundamental para la coagulacin de la sangre.

La albumina es la principal protena del suero; se halla tambin en los espacios extravasculares, linfa y otros lquidos biolgicos como el amnitico, bilis, jugo gstrico, etc. Se encuentra en la orina de pacientes con enfermedades renales y es uno de los componentes principales del lquido del edema. Las dos funciones principales de la albumina plasmtica son: El mantenimiento de la presin coloidosmtica y el transporte de algunos metabolitos tales como bilirrubinas, aminocidos, cidos grasos, enzimas, medicamentos, etc. La albumina es sintetizada por las clulas hepticas en una cantidad de 12 a 14 g/da.

Las globulinas se dividen en tres grupos principales: globulinas alfa, beta y gamma. Las globulinas alfa y beta ejercen diversas funciones principales en la circulacin tales como el transporte de metabolitos y de iones metlicos. Las globulinas gamma actan en la actividad inmunolgica y que constituyen las inmunoglobulinas que resisten a la infeccin. La mayor parte de las globulinas alfa y beta son de origen heptico pero las gamma se pueden sintetizar en tejidos heptico y linftico.

El tejido heptico es el centro principal de protenas plasmticas. La formacin de albumina y fibringeno parece estar limitada al tejido heptico; aproximadamente el 80% de las globulinas se fabrican en tejido heptico, incluyendo las lipoprotenas. El principal papel del tejido heptico en la sntesis protenica del plasma se refleja en la disminucin notable de albumina y fibringeno que tiene lugar en tejido heptico daado, como se observa en pacientes con Cirrosis o a consecuencia de una hepatectoma experimental.

Existe una gran cantidad de compuestos qumicos entre los cuales se incluyen a las drogas y los frmacos que afectan la integridad metablica de los hepatocitos. Algunos de ellos afectan la capacidad de sntesis de metabolitos como la albumina y en la mayora de los casos el efecto es tan drstico que puede llegar a ser letal. Dentro de los compuestos que han sido catalogados como hepato-txicos estn el cloroformo, el dinitrofenol, la clorpromazida, el fluoruracilo y la tetraciclina.

MATERIAL:GradillaTubos de ensaye 10 x 100 mmPipetas serolgicas de 5 mlPropipetasMicropipetas para 50 y 100 microlitrosCeldas para espectrofotmetro

EQUIPO:Centrfuga clnicaEspectrofotmetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:Solucin preparada de reactivo de BiuretSolucin patrn de protenas totales y albuminaSolucin de trabajo de reactivo de Albumina o Verde de BromocresolSolucin salinaSuero no hemolizado

MTODO:Espectrofotocolorimtrico

PROCEDIMIENTO:

a) Cuantificacin de Protenas TotalesFundamento: El sulfato de cobre en solucin alcalina reacciona con los enlaces peptidicos de la protena, dando una coloracin de azul a purpura dependiendo del tamao de la protena por la cantidad de enlaces peptidicos (Clarck, 1964), que es cuantificable espectrofotomtricamente.

Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla II. Distribucin de los reactivos para la cuantificacin de Protenas por medio del reactivo de BiuretTuboBlancoEstndar o controlProblema

Reactivo de Biuret5.0 ml5.0 ml5.0 ml

Solucin Salina0.1 ml-----------------------------------------------

Solucin estndar o control-------------------------0.1 ml------------------------

Suero no hemolizado------------------------------------------------0.1 ml

Homogenizar el contenido y dejar reposar por 15 minutos a temperatura ambiente. Se puede colocar en incubadora a 37 grados centgrados. Medir la absorbancia del estndar y del problema ajustando a cero con el blanco a 550 nm. de longitud de onda.

b) Cuantificacin de Albumina SricaFundamento: El verde de bromocresol o tambin conocido como reactivo de albumina, en medio acido reacciona con la albumina srica presente dando una coloracin verde cuantificable espectrofotomtricamente. (Doumas et al., 1971)

Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla III. Distribucin de los reactivos para la cuantificacin de la Albumina Srica por medio del reactivo de Albumina o Verde de BromocresolTuboBlancoEstndar o controlProblema

Reactivo de Albumina o Verde de Bromocresol3.0 ml3.0 ml3.0 ml

Solucin Salina0.05 ml-----------------------------------------------

Solucin estndar o control-------------------------0.05 ml------------------------

Suero no hemolizado------------------------------------------------0.05 ml

Homogenizar el contenido y dejar reposar por 10 minutos a temperatura ambiente. Se puede colocar en incubadora a 37 grados centgrados. Medir la absorbancia del estndar y del problema ajustando a cero con el blanco a 640 nm. de longitud de onda.

RESULTADOS:

Para calcular las concentraciones aplique la siguiente frmula para cada uno de los analitos trabajados:

Absorbancia del problema ConcentracinProtenas Totales =--------------------------------------------- X del estndar o control Absorbancia del estndar o control que se est usando

= [ ] g/dl

Valores de referencia:Protenas Totales 6.6 a 8.7 g/dlAlbumina Srica 3.20 5.00 g/dl

DISCUSION:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSION:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:

John M. Clack, Jr., Experimental Biochemistry, USA. W.H. Freeman and Company 1964

Doumas BT, Watson WA and Biggs HG. Albumin standards and the measurement of serumalbumin with bromocresol green. Clin Chim Acta 1971: 31: 87-96.

CUESTIONARIO:

1._ Importancia clnica de la disminucin de las protenas sricas2._ Importancia clnica del aumento de las protenas sricas3._ Importancia de la proteinuria4._ Patologas relacionadas con protenas totales y sus fracciones5._ Importancia de las diferentes enfermedades relacionadas con las globulinas

PRCTICA No. 3DIGESTION DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVO:Determinar el proceso de digestin de los carbohidratos mediante la absorcin de los mismos con el Test de OSullivan (determinacin de Diabetes Gestacional) y la prueba Postprandrial (determinacin de Diabetes por alimentacin), por el mtodo enzimtico espectrofotocolorimtrico para determinar el buen funcionamiento de los Islotes de Langerhans en el Pncreas, descartando la patologa de la Diabetes Mellitus

PRERREQUISITOS:1._ Clasificacin o tipos de Diabetes2._ Que es el ayuno y cmo influye en el metabolismo 3._ Clasificacin de ayuno4._ Importancia mdica de la prueba postprandrial5._ Importancia mdica del Test de OSullivan6._ Que es la curva de tolerancia a la glucosa7._ Que es la hemoglobina glucosilada8._ Normativa relacionada con paciente diabtico9._ Normativa relacionada con diabetes gestacional

INTRODUCCIN:La Diabetes Mellitus es un conjunto de trastornos metablicos que se caracteriza por un aumento de niveles de glucosa en sangre: hiperglucemia. La diabetes es causada por varios transtornos, siendo la ms relevante la baja produccin de la hormona insulina, la cual es secretada por las clulas de los islotes de Langerhan en el pncreas, y que regula la entrada de glucosa a las clulas. Otra es el inadecuado uso de esta hormona debido al exceso y/o deficiencia de ingesta alimentaria; y la resistencia a la insulina, que en realidad es la problemtica que hay de la cantidad insuficiente o dao de los receptores que se encargan de dar entrada a la glucosa a las clulas y que sucede comnmente en las personas obesas. Sin embargo se habla de factores genticos como otro punto importante en el desarrollo de la patologa DiabetesLa diabetes se puede clasificar en diabetes tipo I o insulino dependiente, diabetes tipo II o resistente a la insulina y diabetes gestacional, que se desarrolla solo mientras existe embarazo afectando as al metabolismo de la madreEsta patologa puede determinarse por la cuantificacin de glucosa srica mediante anlisis diferentes dependiendo del paciente: Test de OSullivan, prueba posprandrial o curva de tolerancia a la glucosa.

MATERIAL: Tubos de ensaye de 10 x 100 mmGradillaPipetas de 5 mlPropipetasMicropipetas de 25 microlitrosCeldas para espectrofotmetro

EQUIPO:Espectrofotmetro de luz visible

SUSTANCIAS REACTIVAS:Solucin reactiva de glucosa (enzimtico)Estndar de glucosaSuero no hemolizado

METODO:Enzimtico espectrotofocolorimtrico

PROCEDIMIENTO:Fundamento: La enzima glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la glucosa srica, formando cido glucnico y perxido de hidrogeno, el reactivo enzimtico de glucosa contiene tambin la enzima peroxidasa oxidasa transfiriendo el oxgeno del perxido de hidrogeno a un aceptor (Lynch, 1977) cromognico de oxgeno, el cual puede ser cuantificable espectrofotomtricamente.

Tabla IV. Distribucin de los reactivos para la cuantificacin de Glucosa Srica por medio enzimticoTuboBlancoEstndar o controlProblema

Reactivo de Glucosa 2.5 ml2.5 ml2.5 ml

Agua destilada0.025 ml-----------------------------------------

Solucin patrn o control-----------------0.025 ml-----------------

Suero no hemolizado-----------------------------------------0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mnimo a temperatura ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centgrados.

Se calibra el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 500 nm con el tubo blanco

Nota: Si el alumno analiza Glucosa Basal y Prueba Postprandrial, Glucosa basal y Test de OSullivan, en realidad sern 4 problemas y si llega a realizar una curva de tolerancia se debern incluir la glucosa basal y la cantidad de muestras despus de la carga de glucosa.

RESULTADOS:Para calcular las concentraciones aplique la siguiente frmula para cada uno de los analitos trabajados:

Absorbancia del problema ConcentracinProtenas Totales =--------------------------------------------- X del patrn o control Absorbancia del patrn o control que se est usando

= [ ] mg/dl

Valores de referencia:60-100 mg/dl o 70-110 mg/dl de glucosa

DISCUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:M.J.Lynch et. al., Mtodos de Laboratorio. Mxico. Nueva Editorial Interamericana, 1977

CUESTIONARIO:

1._ Mencione los diferentes tipo de Diabetes2._ Cuales son las caractersticas de los pacientes diabticos3._ Importancia de la deteccin oportuna de la Diabetes gestacional y sus consecuencias4._ Importancia de la supervisin de tratamientos en el diabtico

PRCTICA No. 4PERFIL LIPIDICO

OBJETIVO:Determinar el nivel de riesgo coronario y aterognesis mediante la evaluacin clnica de los metabolismos de los lpidos a partir de reacciones sricos enzimticos de un paciente.

PRERREQUISITOS:1._ Estructura y funcin de los triacilglicridos2._ Relacin metablica entre el colesterol y las lipoprotenas 3._ Importancia de las fracciones del colesterol en los riesgos coronarios y circulatorios4._ Anlisis de los efectos de las diferentes dislipidemias5._ Importancia de la relacin triacilglicridos - VLDL

INTRODUCCIN:El perfil lipdico lo constituye una serie de anlisis en las cuantificaciones sricas de diferentes lpidos como lo son las lipoprotenas localizadas en la sangre, tales como el colesterol total, el HDL colesterol, los triacilglicridos, las LDL, y las VLDL, mismas que sirven para el diagnstico y seguimiento en las enfermedades metablicas. El colesterol es el lpido ms asociado a enfermedades cardiovasculares y factor de riesgo coronario, sobre todo el unido a las LDL. (Tnez & Galvn, 2006)Sin embargo existe una relacin entre la elevada concentracin de los triacilglicridos asociada a la acumulacin de LDL y una menor cantidad de HDL colesterol situacin que evidentemente predispone a un individuo a presentar las enfermedades cardiovasculares. (Pinto, 2008)

MATERIAL: Tubos de ensayeGradillaPipetas de 5 mlMicropipetas de 25 microlitrosCeldas para espectrofotmetro

EQUIPO:Espectrofotmetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:Solucin reactiva de colesterol (enzimtico)Estndar de colesterolSolucin reactiva de triacilglicridos (enzimtico)Estndar de triacilglicridosReactivo precipitante para HDLSuero no hemolizadoAgua destilada

METODO:Enzimtico espectrotofocolorimtrico

PROCEDIMIENTO:

a) Obtencin de la fraccin HDL colesterol para cuantificacinFundamento: Las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones magnesio. El sobrenadante contiene las lipoprotenas de elevada densidad (HDL), cuyo colesterol puede ser cuantificable espectrofotomtricamente

Se coloca 0.5 ml de suero problema no hemolizado en un tubo Eppendorff que contenga 1ml de reactivo precipitante.Se homogeniza en un vortex por 2 minutos.Se centrifuga en una microcentrfuga a 10000 rpm Se trabaja con el sobrenadante etiquetndolo como HDL colesterol

b) Cuantificacin del Colesterol Total y HDL ColesterolFundamento: Los mtodos enzimticos se basan en el empleo de la enzima colesterol esterasa que hidroliza los esteres de colesterol, y el colesterol libre es el substrato de la enzima colesterol oxidasa, que oxida especficamente al colesterol liberando agua oxigenada y con la reaccin secundaria de la peroxidasa oxidasa transfiriendo el oxgeno del perxido de hidrogeno a un aceptor cromognico de oxgeno, el cual puede ser cuantificable espectrofotomtricamente.

Tabla V. Distribucin de los reactivos para la cuantificacin de Colesterol Total y HDL ColesterolTuboBlancoEstndar o controlProblema ColesterolProblemaHDL Colesterol

Reactivo Enzimtico de Colesterol2.5 ml2.5 ml2.5 ml2.5 ml

Agua destilada0.025 ml---------------------------------------------------------------

Patrn o control de Colesterol-------------0.025 ml-------------------------------------------

Suero Problema no hemolizado-----------------------------------0.025 ml----------------------

Problema HDL Colesterol---------------------------------------------------------

0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mnimo a temperatura ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centgrados.

Se calibra el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 500 nm con el tubo blanco.

c) Cuantificacin de TriacilglicridosFundamento: Al hidrolizar los triglicridos por medio de enzimas como lipoproteinlipasa, glicerol quinasa y peroxidasa oxidasa el cual transfiere oxgeno del perxido de hidrogeno a un aceptor cromognico de oxgeno, dando una coloracin roja que puede ser cuantificable espectrofotomtricamente. (Bucolo and David, 1973)

Tabla VI. Distribucin de los reactivos para la Cuantificacin de los TriacilgliceridosTuboBlancoEstndar o controlProblema

Reactivo enzimtico de Triacilglicridos2.5 ml2.5 ml2.5 ml

Agua destilada0.025 ml-----------------------------------------

Solucin patrn o control-----------------0.025 ml-----------------

Suero no hemolizado-----------------------------------------0.025 ml

Se homogenizan todos los tubos y se dejan reposar por 10 minutos mnimo a temperatura ambiente. Se pueden colocar en incubadora a 37 grados centgrados.

Se calibra el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 500 NM con el tubo blanco

RESULTADOS:

Para calcular las concentraciones aplique la siguiente frmula para cada uno de los analitos trabajados:

Absorbancia del problema ConcentracinProtenas Totales =--------------------------------------------- X del patrn o control Absorbancia del patrn o control que se est usando

= [ ] mg/dl

Valores de referencia:

Colesterol totalHasta 30 aos: 120-215 mg/dl30- 39 aos: 135-240 mg/dl40-49 aos: 140-280 mg/dl50- 59 aos: 145-295 mg/dl

Colesterol-HDLHombre > 55 mg/dlMujer > 65 mg/dl

Triglicridos36-165 mg/d

DISCUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA: I. Tnez Fiana & A. Galvn Cejudo. Practicas Generales de Bioqumica y Biologa Molecular. 2006. www..uco.es. Crdoba, Espaa

Xavier Pinto Sala. Protocolos Hipertrigliceridemias. 2008 Sociedad Espaola de Medicina Interna y Elsevier Espaa, S.L.

Giovani Bucolo and Harold David. Quantiative Determination of Serum Triglyceridesby the Use of Enzymes. CLIN. CHEM. 19/5, 476-482 (1973). 476 CLINICAL CHEMISTRY, Vol. 19, No.5, 1973

CUESTIONARIO:

1._ Factores predisponentes para un infarto2._ Importancia clnica de la Hipercolesterolemia3._ Importancia clnica de la Hipertrigliceridemia4._ Que otros rganos afectan las dislipidemias?

PRCTICA No. 5CUANTIFICACIN DE CIDO RICO SRICO

OBJETIVO GENERAL: Determinar la concentracin de cido rico srico por medio de la reaccin del cido fosfotngstico.

OBJETIVO ESPECFICO:Comparar los resultados para descartar hiperuricemia y gota.

PRERREQUISITOS:1. Describir el metabolismo de los nucletidos purcos2. Describir el catabolismo de las bases purnicas3. Enumerar las caractersticas metablicas de la Gota.4. Qu es el monourato de sodio y como se forma

INTRODUCCIN:La sntesis de nucletidos es un proceso celular dinmico y continuo. Se requiere de estos para llevar a cabo diversas actividades metablicas en el organismo, esto ltimo sin tomar en cuenta su funcin primaria que es la de ser monmeros estructurales de los cidos nucleicos.

La regulacin de esta va es compleja debido a que utiliza mecanismos de retroalimentacin negativa, regulacin alostrica, as como procesos de recuperacin de metabolitos. Con frecuencia se presentan desajustes en esta regulacin, siendo un ejemplo clsico la sobreproduccin de cido rico como parte de una descompensacin del catabolismo de los nucletidos purnicos. En la mayora de los organismos este defecto no es perceptible, ya que al ser el cido rico un producto de excrecin, es eliminado en la orina. Sin embargo, en pacientes con insuficiencia renal, la excrecin del cido rico tiende a ser ms lenta y por lo tanto su concentracin en sangre aumenta en forma considerable, generando un defecto conocido hiperuricemia. En algunos pacientes la hiperuricemia es tal, que genera depsitos de monourato sdico en los tejidos de las articulaciones de las extremidades inferiores. Estos depsitos tienden a formar cristales que a menudo lesionan los tejidos provocando dolores muy intensos que son caractersticos de la enfermedad llamada gota.

Para determinar la concentracin de cido rico en sangre se utiliza el mtodo del cido fosfotngstico (constituido por cido fosfrico y tungstato de sodio que es el que precipita las protenas con un conservador de sulfato de litio), que hace reaccionar al cido rico con el cido fosfotngstico en un medio alcalino para formar alantona y azul de tungsteno, ste ltimo genera un color muy estable que se mide en espectrofotmetro a una longitud de onda de 640 nm.

MATERIAL:GradillaTubos de ensaye de 10 x 100 mmPipetas serolgicas de 1 y 5 mlPropipetasCeldas para espectrofotmetroMicropipetas de 300 y 500 microlitros

EQUIPO:Centrfuga clnicaEspectrofotmetro

SUSTANCIAS REACTIVAS:Solucin preparada de cido fosfotngsticoSolucin patrn de cido ricoAgua destiladaSolucin de carbonato de sodio al 3.5%

MTODO:Espectrofotocolorimtrico

PROCEDIMIENTO:Preparar una serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla VII.Primera serie de tubos para la Cuantificacin de cido rico SricoReactivoTubo blancoTubo estndar o controlTubo problema

Suero------0.3 ml

Sol patrn---0.3 ml---

Agua destilada0.3 ml------

c. fosfotngstico1.0 ml1.0 ml1.0 ml

Mezclar bien cada tubo y centrifugar el tubo problema a 2,500 rpm durante 10 min. y recuperar el sobrenadante. El tubo blanco no es necesario que se centrifugue, atendiendo a las propiedades especficas de la reaccin.Prepare otra serie de tubos de acuerdo a la siguiente tabla.

Tabla VIII.Segunda serie de tubos para la Cuantificacin de cido rico SricoReactivoTubo blancoTubo estndar o controlTubo problema

Sobrenadante del tubo problema------0.5 ml

Sol. preparada deltubo patrn---0.5 ml---

Sol. preparada del tubo blanco0.5 ml------

Carbonato de sodio al 3.5%2.5 ml2.5 ml2.5 ml

Mezclar bien cada tubo y dejar reposar durante 20 min..Se calibra el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 640 NM con el tubo blanco y se obtienen la absorbancias.

RESULTADOS:Para calcular las concentraciones aplique la siguiente frmula:

Absorbancia del problema Concentracincido rico Srico =--------------------------------------------- X del patrn o control Absorbancia del patrn o control que se est usando

= [ ] mg/dl

Valores normales:Hombres: 3.5 7.5 mg/dlMujeres: 2.5 6.5 mg/dl

DISCUSIN:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSIN:

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO:

1.-Esquematice las bases pricas y pirimdicas:2.-Describa cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las purinas.3.-Mencione cuatro (4) alteraciones del metabolismo de las pirimidinas.4.- Esquematice la degradacin de las bases pricas hasta 2CO2 + 4NH4+

5.- Defina:a) Uremia:_______________________________________________________b) Uricemia:______________________________________________________c) Uricaciduria:____________________________________________________

PRACTICA No.6DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE BILIRRUBINAS SERICAS

OBJETIVO:

Determinar la concentracin de bilirrubina total y directa por la tcnica de Van der Berg y las analizar como una prueba de funcin heptica.

PREREQUISITOS:

1.- Conocer y describir el metabolismo de las bilirrubinas.

INTRODUCCION:

La bilirrubina es un compuesto cromgeno de color amarillo o naranja formado en la excresin del catabolismo de la Hemoglobina. El grupo porfirnico HEM es la fuente directa de bilirrubina y se detecta en dos formas: bilirrubina libre y conjugada con cido glucurnico, siendo esta conjugacin a nivel heptico.El hgado tiene la capacidad para concentrar y eliminar la bilirrubina por mecanismos especficos y es transportada por el torrente sanguneo unida electrostticamente a la albmina. Se liberan por da 6 gr. de hemoglobina los cuales son catabolizadas en clulas del sistema retculo endotelial donde es liberada la bilirrubina, esto se hace por medio de dos reacciones enzimticas: primero el complejo de oxigenasas microsmicas y la accin de la biliverdina reductasa.La determinacin clnica de bilirrubina srica es utilizada como prueba de funcionamiento heptico, las enfermedades ligadas con altas concentraciones de bilirrubinas se conocen como hiperbilirrubinemias y son responsables de un sndrome llamado Ictericia que determina mltiples etiologas.

MATERIAL:Tubos de ensaye de 10 x 100 mmGradillaPipetas serolgicas de 1 y 2 mlPropipetasCeldillas para espectrofotmetro

EQUIPO:Espectrofotmetro de luz visible

SUSTANCIAS REACTIVAS:cido sulfanlico 29 mM.Acelerador. (cafena + Benzoato de sodio + Acetato de sodio)Fehling II (Tartrato de sodio y potasio con Hidrxido de sodio)Solucin Salina 0.89%Suero no hemolizado.

METODO:Espectrofotocolorimetrico

FUNDAMENTO:Utilizando la tcnica de Van der Berg basado en las siguientes reacciones: El cido sulfanlico diazoico en un medio alcalino reacciona con la bilirrubina formando un complejo azobilirrubina el cual tiene una coloracin caf parda, la sensibilidad es mayor para la bilirrubina conjugada que la libre. Si se detecta sta ltima se aplica un acelerador del color (cafena, benzoato de sodio y acetato de sodio).

PROCEDIMIENTO:

a) Tcnica para Cuantificacin de Bilirrubina Total

Tabla IX. Distribucin de los reactivos para la Cuantificacin de la Bilirrubina TotalTuboBlancoProblema

cido sulfanlico0.2 ml0.2 ml

Nitrito de sodio-----0.1 ml

Acelerador1.0 ml1.0 ml

Suero problema0.2 ml0.2 ml

Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente por 30 minutosMezclar y reposar a temperatura ambiente por 30 min.

Fehling II1.0 ml1.0 ml

Mezclar y leer la absorbancia del problema a 580 nm, ajustando el espectrofotmetro a cero con el blanco.

b) Tcnica: para Bilirrubina Directa (Conjugada).

Tabla X. Distribucin de los reactivos para la Cuantificacin de la Bilirrubina Directa (Conjugada)TUBO

BLANCOPROBLEMA

Acido sulfanlico0.2 ml0.2 ml

Nitrito de sodio-----0.1 ml

Solucin salina2.0 ml2.0 ml

Suero problema0.2 ml0.2 ml

Mezclar y reposar 5 min. y leer a 510 nm ajustando el espectrofotmetro a cero con el blanco.

RESULTADOS:Para calcular las concentraciones aplique las siguientes frmulas para cada analito trabajado:

Absorbancia del problema X 10.5 = [Bilirrubina total] mg/dl.

Absorbancia del problema X 14 = [Bilirrubina Directa] mg/dl.

[Bilirrubina indirecta] mg/dl = Total - Directa.

Valores de referencias:

Hasta 1.0 mg/dl. Para bilirrubinas totales

Hasta 0.3 mg/dl. Para bilirrubinas directas

Bilirrubina Total en mg/dl. =

Bilirrubina Directa en mg/dl. =

Bilirrubina Indirecta en mg/dl.=

DISCUSION:

En base a los resultados obtenidos y el objetivo planteado analice la importancia de esta determinacin, como parte de un Perfil Heptico. Discuta la Tcnica utilizada.

CONCLUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO:

1.- Describa como se degrada la porcin porfirnica libre de hierro del grupo Hem 2.- Que cantidad de Bilirrubina se forma en un adulto diariamente3.- Cul es la funcin del Hgado en la formacin de la Bilirrubina?4.- Que rasgos clnicos presenta la Ictericia obstructiva y como se encuentran los valores de Bilirrubina?5.- Porque en la Ictericia neonatal no especificada, est indicada la fototerapia?

PRACTICA No. 7DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE TRANSAMINASAS SERICAS

OBJETIVO: El alumno determinar la transaminasa glutmico pirvica (STGP) y la transaminasa glutmico oxaloacetica (STGO) en el suero para interpretar fenmenos fisiolgicos, metablicos y patolgicos relacionados con estas enzimas.

PRERREQUISITOS: a) Funcin de las transferasas.b) fundamentos metablicos de las transaminaciones.c) Importancia Clnica de STGO y STGP.

INTRODUCCION:Las transaminasas son enzimas que realizan la interconversin de aminocidos alfa-cetocidos por transferencia de grupos amino. Existe una gran variedad de transaminasas con diferente significado fisiolgico, de ellas la STGO y la STGP son las ms importantes desde un punto de vista clnico.

La STGO promueve la siguiente reaccin:STGOL-aspartato + cetoglutarato oxaloacetato + L-glutamato

la STGP a su vez promueve la siguiente reaccin:STGPL-alanina + cetoglutarato piruvato + L-glutamato

Estas reacciones son reversibles y utilizan la fosfato de piridoxal como coenzima. Estas transaminasas estn distribuidas ampliamente en tejidos animales en forma principal de tejido heptico y tejido cardaco y en forma secundaria en plasma, bilis y fluido cerebroespinal sus niveles extracelulares deben ser bajos en condiciones normales y solo cuando hay lesin celular se podrn encontrar altos ttulos de estas enzimas.En pacientes con infarto al miocardio o con lesin heptica aguda se encontrarn altos ttulos de dichas transaminasas los cuales se mantendrn elevados por un periodo de 24 a 36 hrs. en caso de infarto y por mucho ms tiempo en caso de lesin heptica.

MATERIALES:Tubos de ensaye de 10 x 150 mmGradillaPipetas serolgicas de 5 y 10 mlPropipetasCeldillas para espectrofotmetro

EQUIPO:Espectrofotmetro de luz visibleIncubadora a 37 grados centgrados

SUSTANCIAS REACTIVAS:Solucin sustrato de TGOSolucin sustrato de TGPSolucin estndar de PiruvatoAgua destiladaSolucion de Dinitrofenilhidracina o reactivo de colorSolucin de NaOH al 0.4 NSuero no hemolizado

FUNDAMENTO: Se utilizar la reaccin de dinitrofenilhidracina para cuantificar a ambas transaminasas. Esta reaccin tiene el siguiente fundamento qumico:El substrato de alanina en solucin amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGP produciendo piruvato el cual en un medio alcalino reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidracina formando una fenilcarbazona (dinitrofenilhidrazona) que se puede cuantificar fotometricamente a 505 nm.El substrato de aspartato en solucin amortiguadora de pH 7.4 reacciona con la TGO produciendo oxaloacetato que reacciona con la dinitrofenilhidracina a Ph alcalino dando tambin una fenilcarbazona que se puede medir fotometricamente a 490 nm.

PROCEDIMIENTO:Primero se deber elaborar una curva de calibracin como se muestra en el siguiente cuadro:

a) Curva de calibracin

Tabla XI. Distribucin de los reactivos iniciales para la Curva de CalibracinTuboMl de piruvatoSustrato de GPTH2O destiladaAbsorbancia

101.00.2

20.100.900.2

30.200.800.2

40.300.700.2

50.400.600.2

Posteriormente se le van a adicionar los siguientes reactivos, dando tiempos de reposo para que reaccione el contenido.

Agregar 1.0 ml de dinitrofenilhidracina. Reposar 20 minutos a temperatura ambienteAgregar 10 ml de NaOH 0.4 N. Reposar 10 minutos a temperatura ambiente

Leer en el espectrofotmetro a 505 nm ajustando el equipo con un blanco con agua destilada

Una vez obtenidas todas las absorbancias, genere una grfica donde el eje de las X sern las Unidades Internacionales (UI) y el eje de las y las absorbancias. Recuerde que la grfica deber tener escala para poder interpretar los resultados obtenidos mediante una interpolacin.

Tabla XII. Equivalencias de las absorbancias obtenidas con las Unidades de TGO y TGP

Absorbancias obtenidasUnidades de TGO equivalentesUnidades de TGP equivalentes

00

2428

6157

11497

190150

Eje yAb

1.0

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

Eje xU.I.102030405060708090100110120130140150160170180190

Figura 1. Representacin grafica de las absorbancias obtenidas por el alumno

Para la cuantificacin de las transaminasas, solo se prepara un tubo problema por cada determinacin y se utiliza un blanco de agua destilada para ajustar el fotocolormetro.

b) Tratamiento de los problemas

Tabla XIII. Distribucin de los reactivos para la Cuantificacin de las transaminasas TGO Y TGP SricasReactivos y tiempos de incubacinTubo problemade TGOTubo problemade TGP

Solucin amortiguadora de substrato0.2 ml0.2 ml

Preincubacin a 37 C5 mins5 mins

Suero ( no hemolizado )0.2 ml0.2 ml

Mezclar e incubar a 37 C30 mins30 mins

Reactivo de Dinitrofenilhidracina0.5 ml.0.5 ml.

Mezclar y dejar reposar a temp. ambiente20 mins20 mins

Hidrxido de sodio 0.4 N5.0 ml.5.0 ml.

Mezclar y reposar 5 mins a temperatura ambiente.Medir la absorbancia del tubo de TGP a 490 nm. y de TGO a 505 nm ajustando el espectrofotmetro a cero de absorbancia con agua destilada.

RESULTADOS:

En base a la grfica Interpolar los valores de absorbancia obtenidos en la curva de calibracin para determinar las concentraciones de cada transaminasa (TGO y TGP).

Valores obtenidos:

TGO UI/mlTGP UI/ml

VALORES DE REFERENCIA:

STGO: 4 a 36 Unidades Internacionales / ml.

STGP: 4 a 32 Unidades Internacionales / ml.

DISCUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CONCLUSION:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO:

1._ Mencione cinco enfermedades en donde estn altos los ttulos de STGO y de STGP.2._ Cules sern las pruebas especficas primarias para la elaboracin de un perfil heptico?3._ Que es el coeficiente de Rittis? y que datos clnicos nos refiere. 4._ En que otro tipo de tejidos adems del heptico y cardaco es posible encontrar este tipo de transaminasas.