Manual de Practicas de Laboratorio Francisco

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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Hematologa Inmunologa - Microbiologa

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CENTRO DE ESTUDIOS TECNOLGICOS INDUSTRIAL

Y DE SERVICIOS NO. 57

Ignacio Allende

ndice:

Portada........1

ndice....3

Objetivo General....4

Norma Oficial 087 Ecol.........5

Prctica No. 1 Prueba de embarazo cualitativa.....6

Prctica No. 2 Prueba de embarazo cuantitativa........10

Prctica No. 3 Espermatobioscopia..........15

Prctica No. 4 Prueba de Simms-Hunher (Post-coito)...20

Practica No. 5 Tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de Zinc..23

Practica No. 6 Reaccionmes Febriles...27

Practica No. 7 Examen general de orina...32

Practica No. 8 Amiba en Fresco.....37

Practica No. 9 Coprocultivo.40

Practica No.10 Urocultivo.45

3

Objetivo General

La prctica de laboratorio tiene como objetivos instructivos fundamentales que los

estudiantes adquieran las habilidades propias de los mtodos de la investigacin

cientfica, amplen, profundicen, consoliden, realicen, y comprueben los fundamentos

tericos de la valoracin clnica mediante la experimentacin empleando los medios de

enseanza necesarios, garantizando el trabajo en equipo e individual en la ejecucin de la

prctica.

Esta forma organizativa persigue objetivos muy similares a los de las clases prcticas, lo

que la diferencia es la fuente de que se valen para su logro. En las prcticas de

laboratorio los objetivos se cumplen a travs de la realizacin de experiencias

programadas con el apoyo de este manual.

Etapas para la realizacin de la prctica de laboratorio. Por su esencia el proceso de

realizacin de las prcticas de laboratorio constituye parte integrante del trabajo

independiente de los estudiantes, el cual est constituido por tres etapas:

Preparacin previa a la prctica

Realizacin de la prctica

Conclusiones de la prctica.

La preparacin previa a la prctica se desarrolla fundamentalmente sobre la base del

estudio terico orientado por el profesor como fundamento de la prctica, as como el

estudio de las tcnicas de los experimentos correspondientes.

El desarrollo se caracteriza por el trabajo de los estudiantes con el material de laboratorio

(utensilios, instrumentos, aparatos, y reactivos), la reproduccin de los fenmenos

deseados, el reconocimiento de los ndices caractersticos de su desarrollo, la anotacin

de las observaciones, entre otras tareas docentes.

Durante las conclusiones el estudiante deber analizar los datos de la observacin y

arribar a las conclusiones y generalizaciones que se derivan de la prctica en cuestin.

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NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental - Salud

ambiental - Residuos peligrosos biolgico-infecciosos - Clasificacin y

especificaciones de manejo.

La presente Norma Oficial Mexicana establece la clasificacin de los residuos peligrosos

biolgico-infecciosos as como las especificaciones para su manejo.

Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria para los establecimientos

que generen residuos peligrosos biolgico-infecciosos y los prestadores de servicios a

terceros que tengan relacin directa con los mismos.

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PRCTICA No. 1

PRUEBA DE EMBARAZO CUALITATIVA

(Qumica en seco)

OBJETIVO:

El alumno conocer la tcnica para la determinacin presencia de la hormona GCH en

suero o plasma para determinar si la paciente est embarazada.

FUNDAMENTO:

Bsqueda de la hormona GCH mediante un suero anti-GCH

INTRODUCCIN:

La prueba de embarazo mediante deteccin de un solo paso de GCH es un inmunoensayo

cromatogrfico para la deteccin cualitativa de gonadotropina corinica humana en la orina

para ayudar en la deteccin temprana del embarazo. La prueba utiliza una combinacin de

anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal de GCH para detectar selectivamente

niveles elevados de GCH.

El ensayo se conduce colocando una muestra de orina en la tira del reactivo y observando

la formacin de las tiras de colores. La muestra pasa a travs de la accin capilar a lo largo

de la membrana para reaccionar con el conjugado de colores.

Las muestras positivas reaccionan con el conjugado de color de GCH de anticuerpo

especfico para formar una lnea de color en la regin de lnea de prueba de la membrana.

La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo. Como control del

procedimiento, siempre aparecer una lnea de color en la regin de lneas de control si la

prueba se realiz correctamente.La tira de prueba contiene partculas anti-GCH y

revestimiento anti-GCH en la membrana.

MATERIAL Y REACTIVOS:

Tira reactiva

Orina

Suero

Tubos de ensayo

Gradilla

Pipeta Pasteur

6

Instrucciones para el paciente

Orina se recomienda la primera orina de la maana en un frasco limpio

Suero se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni

medicamentos en 48 horas

Procedimiento en el laboratorio

Suero

Nota: El paciente debe presentarse en ayuno

1.- Tomar una muestra sangunea y centrifugarla a 3500rpm a 5 min

2.- Colocar 2ml de suero en un tubo de 12x75

3.- Abra el sobre y tome la tira por el lado contrario al depsito de la muestra.

4.- Meter la tira reactiva en forma recta procurando que la parte de abajo se sumerja en el

suero o plasma

5.- Espere de 1 a 5 minutos y lea los resultados.

Orina

Nota: Antes de realizar la prueba permita que la muestra de orina se equilibre a

temperatura ambiente (18-30C).

1.- Colocar 2ml de orina en un tubo de 12x75

2.- Abra el sobre y tome la tira por el lado contrario al depsito de la muestra.

3.- Meter la tira reactiva en forma recta procurando que la parte de abajo se sumerja en el

suero o plasma

4.- Espere de 1 a 5 minutos y lea los resultados.

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Nota

Los resultados positivos se pueden observar en 40 segundos.De cualquier manera, para

confirmar los resultados negativos, se necesita esperar el tiempo completo de reaccin (5

minutos),

No lea los resultados despus de 10 minutos.

INTERPRETACION DEL RESULTADO:

Resultados Lectura

POSITIVO: Aparecen dos lneas rojas

distintivas.

NEGATIVO: Aparece una lnea roja.

NO VLIDA: Ninguna lnea roja

Conclusiones

Esta prueba es muy fcil y sencilla para su elaboracin ya que ahorro mucho tiempo ya

que es muy prctica para detectar la hormona GCH y poder determinar si la paciente est

embarazada o no, pero teniendo cuidado en el procedimiento y no tocar la tira reactiva ya

que puede ocasionar errores en los resultados.

8

BIBLIOGRAFIA:

Faustina Rubio Campal, Benjamn, Garca, Manuel Carrasco,

INMUNOLOGIA Aplicaciones prcticas en Hematologa y Microbiologa

Buenos Aires, Editorial Paraninfo , 1995

Pginas consultadas 136 a 143

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PRCTICA No. 2

PRUEBA DE EMBARAZO CUANTITATIVA

(Inmunolgica)

Objetivo: El alumno determinara la cantidad de la hormona GCH en suero y orina y

determinara la evolucin o el tiempo del embarazo basndose en la cantidad de la

hormona GCH.

Fundamento: Bsqueda de la hormona GCH en orina y suero mediante un suero

con anti-GCH.

Introduccin

Existen dos tipos de test de embarazo de sangre: el test cualitativo y el cuantitativo.

La prueba de embarazo cualitativa slo sirve para ver si hay embarazo, mientras que

con la prueba de embarazo cuantitativa, se cuenta la cantidad de GCH existente en

la sangre y puede repetirse para vigilar el correcto desarrollo del embarazo. Durante

el inicio del embarazo, la GCH aumenta rpidamente, duplicndose cada 48 a 72

horas. Es por esto que en algunos casos la prueba de embarazo cuantitativa se repite

al cabo de dos o tres das para comprobar que si se est llevando el embarazo sin

problemas. Aunque las pruebas basadas en la aglutinacin son en principio

cualitativas indican si son positivas o negativas se pueden utilizar

cuantitativamente realizando diluciones de lo orina o suero: La ultima dilucin en

la que se observa claramente un resultado positivo nos indica la cantidad de HCG

presente en la orina . El aumento de las especificidad diagnostica se logr con la

obtencin de antisueros contra el pptido carboxiterminal de la subunidad de la

HCG. Los test actuales utilizan dos clases de anticuerpos monoclonales unos anti-

lo hacen con la subunidad -HCG. La sensibilidad de los test de este tipo puede

llegar a 50Ul/l. El radioinmunoensayo especfico para la valoracin de la HCG

proporciona un test de embarazo un 100 por 100 ms especfico que el urinario de

inhibicin de la aglutinacin. Con el RIA se pueden obtener el diagnstico del

embarazo a los 8-9 das postulacin adems de evitar los falsos positivos del mtodo

de inhibicin de la aglutinacin.

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Material

20 tubos de 12x75

1 pipeta de 1ml

Gradilla

Reactivo

Ac-GCH

Equipo

Centrifuga clnica

Bao mara


Se le pide orina de 24 horas en recipiente limpio con taparosca (Indicaciones se desecha

la primera orina de la maana y se recolecta en un embase la orina del todo el da asta la

primera orina del siguiente da)

Suero se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni


Procedimiento en el laboratorio

1) Realizar diluciones de la orina tomando 1ml de orina y 1ml de solucin salina.

1:2

11

2) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

1:4

3) Tomar 1ml de la dilucin anterior y 1ml de solucin salina

1:8

4) Realizar diluciones 1:16,1:32 y 1:64

1:16 1:32 1:64

5) Colocar dos gota de cada dilucin en tubos de 12x75 y etiquetarlas ,colocarle dos

gotas de reactivo anti-GCH

6) Incubar por 30 min a 37C

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7) Centrifugar a 1500 rpm por 15 seg

8) Lee

Positivo Negativo

9) Obtener el resultado de cantidad de la hormona GCH con la siguiente formula

Volumen de orina de 24 horas x Ultima dilucin positiva x Sencivilidad de

reactivo

Sustitucin

200x32x1=6400 GCH

10) Graficar la evolucin del embarazo y valores normales

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Conclusin

Esta prueba es utilizada para determinar el tiempo que lleva el embarazo as como su

evolucin durante primeras semanas las cuales hay un aumento considerable de la

hormona hasta su punto mayor y hasta su descenso de la hormona para saber que el

embarazo va bien y no hay anomalas en el desarrollo del feto.

Bibliografa

Daz Portillo, Fernndez del Barrio Parede

Salido Aspectos bsicos de Bioqumica Clnica

Editorial Das de santo, Madrid Espaa, 1997

Pginas 297

Paginas Consultadas 189 a la 250

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PRCTICA No. 3

ESPERMATOBIOSCOPIA

OBJETIVO: Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de realizar e interpretar el

recuento de espermas, y las diferentes anormalidades de los mismospara encontrar

anomalas que produzca infertilidad en el hombres.

FUNDAMENTO: Determinar las caractersticas fsicas, qumicas y microscpicas del

espermatozoide.

INTRODUCCION:

Tambin conocido como espermograma, espermiograma, espermatograma o

seminograma, es el estudio de la calidad de una muestra de esperma. El color del semen

es normalmente blancuzco o blanco lechoso o levemente amarillento, por las flavinas

provenientes de la vescula seminal. Si el lquido eyaculado presenta un color anaranjado

o rojizo, es posible que contenga sangre, signo que se conoce como hematospermia, que

puede indicar un trastorno urolgico. El semen suele tener una consistencia de cogulo,

debido a la facilidad de solidificacin que posee gracias al fosfato de espermina y otras

protenas similares al fibringeno. Es frecuente la aparicin de grumos ms slidos, pero

ello no es indicativo de ninguna clase de problemas. El olor es peculiar y variable en cada

individuo, en funcin de mltiples factores. Se trata de caractersticas que incluyen un fuerte

componente subjetivo y emocional. Para unas personas es desagradable y para otras es

excitante. Algunas personas reconocen un leve sabor dulce y afrutado, debido a las

protenas alcalinas. El aroma puede ser muy intenso. El pH del semen es de alrededor de

7,5. Esta ligera alcalinidad favorece a los espermatozoides cuando se encuentran en la

vagina, donde el pH es cido. Menos del 10% del volumen del semen de una eyaculacin

corresponde a los espermatozoides. Ms del 90% del volumen del semen de una

eyaculacin corresponde al lquido seminal. La densidad normal de los espermatozoides

en el semen vara de 50 a 150 millones por mililitro, por lo que cada eyaculacin contiene

entre 20 a 150 millones por milmetro cbico de espermatozoides. Para que se produzca la

fecundacin del vulo, el semen debe contener ms de 20 millones de espermatozoides

por mililitro. Debido a la composicin del semen, en condiciones adecuadas, los

espermatozoides pueden permanecer vivos fuera del organismo durante varios das.

Tambin sobreviven durante cierto tiempo en los conductos excretores despus de la

muerte. Se han llegado a encontrar gametos masculinos vivos en la trompa de Falopio y en

el tero de la mujer varios das despus del coito.

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MATERIAL

Frasco de boca abierta

Pipeta de 1ml y de 5ml

Cmara de Neubauer

Tira reactiva de pH

Porta objeto

Cubre objeto

Caja petri

REACTIVOS:

Formol a 3%

Eosina al 5%

Indicaciones para el paciente

Se le indica al paciente que recoja el semen eyaculando (por masturbacin) despus de

abstinencia sexual de 4 das, cuando menos (de preferencia una semana).

La muestra se recoge en un frasco de boca ancha, limpio y seco, preferiblemente estril.

Se le pide que lleve la muestra por lo mxime 2 horas despus de la eyaculacin

intentando tener el semen a temperatura corporal.

No se recomienda obtenerla la muestra mediante el preservativo, ya que contienen

espermaticidas y daran resultados alterados.

PROCEDIMIENTO

1) Tomar la muestra y revisar los aspectos de olor y color y reportarlo

16

2) Medir la cantidad de semen con una pipeta de 5ml y reportarlo

3) Tomar una tira reactivo de pH y introducirla en el semen y leerla reportar resultado

4) Tomar una gota de semen y realizar una fijacin en fresco observar la movilidad

en % y su morfologa y reportarlo en la morfologa si hay anormalidades mayores

aun 20% se reporta

Nota: La estructura del espermatozoide consta de una sola clula dividida en: Cabeza,

Cuerpo o Segmento intermedio, Cola y un segmento terminal o flagelo, generalmente

considerado como parte de la cola. Las alteraciones pueden ser las siguientes:

Anormalidades a nivel de la cabeza

Anormalidades a nivel del cuerpo

Anormalidades a nivel de la cola

5) Tomar dos gotas de semen y una gota de Eosina y mezclar con suavidad y

realizar una fijacin en fresco observar al microscopio y reportarlo en % la

mortalidad

6) Realizar un conteo de espermatozoides

6.1) Se aspira semen hasta la marca 0.5 de una pipeta te Thoma para el

recuento de Leucocitos; y despus liquido diluyente Formol al 10% hasta la marca

11.

Nota: La dilucin del semen en el tubo es de 1:20.

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6.2) Se agita energticamente por 3 min la pipeta hasta que el lquido en el bulbo

de la pipeta sea homogneo.

6.3) Tirar las 3 primeras gotas y llenar la cmara de Neubaur dejar sedimentar

por 15 min en un ambiente hmedo dentro de una caja petri.

6.4) Se observa en el microscopio y se cuentan los espermatozoides presentes en

dos zonas cuadriculadas grandes (las reas de 1 mm2).

Clculos

El nmero de espermatozoides por ml se calcula de la siguiente manera:

N/2 x 10 x 20 x 1000 = espermatozoides/ml

Nota: El nmero de elementos contados (N)

Se dividen entre 2, para referirlo a 1 mm2

Se multiplica por 10 porque cada cuadro donde se hizo el recuento tiene 0.1 mm de

profundidad, tenindose as el volumen en que se cuentan los elementos

Se multiplica por 20 porque es el factor de dilucin.

Se multiplica por 1000 para convertir mm3 (ml) a ml.

Valores normales

Revisin Valores Normales

pH Mayor de 7.2

Color Blanco-Grisceo

Aspecto Translucido u opalescente

Mortalidad Mayor a 50%

Vitalidad Mayor al 50%

Morfologa Ms de 30% para reportar anomalas

Olor No putrefacto

N de espermas 20 a 150 millones por mililitro

Volumen 2 a 5 ml

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Conclusin

Esta prueba es de gran importancia para encontrar causas de infertilidad en el

hombre ya sea por tener un conteo por debajo de los valores normales o tener

grandes ndices de mortalidad del espermatozoide, pero nos ayuda a saber que

hay u problema como una infeccin y as poderla detectar y tratar para que la

persona pueda producir espermatozoides los cuales prueba fecundar al ovulo.

:

BIBLIOGRAFA.

Espermatobioscopia post-coito y prueba de Simms-Huhner

Autor Ma. Del consuelo Rodrguez O.

Editor M. del C. Rodrguez O., 1962

Paginas totales 87

Paginas consultadas 50 a la 58

19

PRCTICA No. 4

PRUEBA DE SIMMS-HUNHER

OBJETIVO

El alumno aprender el procedimiento de la prctica antes y despus de la toma de

espermas en moco cervical para observar su comportamiento en la vagina y as poder

diagnosticar problemas de infertilidad.

FUNDAMENTO

Observar la mortalidad y la cantidad de espermatozoides en moco cervical y su

comportamiento.

INTRODUCCIN

La prueba poscoital (PCT o prueba de Simms-Hhner) fue descrita por Simms en 1866,

quien reconociendo la importancia de la motilidad del espermatozoide y del momento de la

prueba, llev a cabo pruebas inmediatas poscoitales en muchas mujeres, y hall

espermatozoides en el moco cervical al cabo de unos pocos minutos luego del coito.

Tambin observ la presencia de espermatozoides vivos en el crvix luego de 36 a 48 horas

despus del coito. El moco del cuello uterino es una secrecin que se produce en el cuello

del tero de la mujer. Este moco facilita el pasaje de los espermatozoides en su viaje hacia

la fertilizacin de un vulo. Hay slo unos pocos das del ciclo menstrual en los que el

esperma puede sobrevivir en el moco del cuello uterino. Este examen evala el moco del

cuello uterino alrededor del momento de la ovulacin. Cerca de este momento, el moco del

cuello del tero es delgado y acuoso. Si este moco se separa, entonces puede frenar a los

espermatozoides en ese momento frtil cuando se supone que deben llegar hasta el vulo.

El examen post-coito (PCT) evala no solamente el moco del cuello uterino, sino tambin

la interaccin entre el esperma y el moco. La PCT debe realizarse lo ms cercano posible

a la ovulacin. Se instruye a la pareja de abstenerse de relaciones sexuales en los das

anteriores a la prueba. La mujer no debe aplicarse duchas intravaginales 48 horas antes,

as como la pareja tampoco debe medicarse durante este tiempo. La PCT debe realizarse

lo ms cercano posible a la ovulacin. Algunos piensan que una PCT normal es de 10

espermatozoides o ms por campo, con motilidad rectilnea. Otros consideran como normal

la presencia de 5 espermatozoides mviles rectilneos. Jette y Glass indican que una PCT

con ms de 20 espermatozoides por HPF est asociada con un ndice alto de embarazo y

anlisis normal del semen.

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MATERIAL:

1 Especulo

1 Jeringa de tuberculina

1 Pipeta

5 Porta objetos

5 cubre objetos

EQUIPO:

Microscopio

PROCEDIMIENTO:

Indicaciones antes de la muestra

1) La prueba debe realizarse lo ms cercano posible a la ovulacin.

2) La pareja de abstenerse de relaciones sexuales en los das anteriores a la prueba

3) La mujer no debe aplicarse duchas intravaginales 48 horas antes

4) La pareja no debe medicarse durante este tiempo.

5) Se le pide al paciente tener relaciones sexuales

Criterios de toma de la muestra

a) Realizarla 2 a 3 horas despus, (el momento en que la concentracin de

espermatozoides es mayor)

b) Realizar la prueba entre 6 a 8 horas despus (para la evaluacin del cuello

como reservorio de espermatozoides)

c) Realizar es de 10 a 16 horas.

Tcnica

6) Se inserta un espculo no lubricado en la vagina

7) Se aspira una muestra de secreciones del frnix vaginal

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8) Posterior con una jeringa de tuberculina sin aguja, o una pipeta o un catter con otra

jeringa, y se obtiene muestra del moco cervical del exocrvix y del canal

endocervical.

9) Cada muestra es colocada en un portaobjeto y cubierta con cubre objeto

10) Examinada con microscopio a 200 y 400 X.

11) Se determina el nmero de espermatozoides por campo,

Criterios de resultados

PCT normal es de 10 espermatozoides o ms por campo, con motilidad rectilnea.

PCT normal es de 5 espermatozoides mviles rectilneos.

PCT con ms de 20 espermatozoides est asociada con un ndice alto de embarazo y

anlisis normal del semen.

Conclusiones

El comportamiento de espermatozoide en el aparato reproductor de la mujer es de suma

importancia ya que el esperma debe tener las condiciones favorables para poder

fecundar el ovulo pero en ocasiones el espermatozoide no puede fecundar al ovulo por

anomalas en la vagina las cuales se pueden detectar si hay un comportamiento

inadecuado en la relacin de espermatozoide y moco cervical el cual se puede detectar

con la prueba de Sims- Huhner pero al tener varios criterios de toma de la muestra y de

valores normales esta prueba es mal vista ya que no pude dar un resultado concreto a un

valor normal o indicacin adecuada seguir.

BIBLIOGRAFAS

Fernando Bonilla Musoles, Reproduccin Asistida

Aborde a la prctica clnica, Editorial Panamericana

Buenos Aires Madrid, 2009. 443p


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Practica N 5

Tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de Zinc

concentracin y flotacin

Objetivo

El alumno a prendera a buscar en unas muestras fecales la presencia de los distintos

parsitos en su forma infectante o resistente e identificarlos por parmetros morfolgicas

para tener un conocimiento ms amplio sobre su deteccin.

Fundamento

Se basa en la sedimentacin y la flotacin de los quistes y/o huevos de los parsitos que

flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya

densidad es 1180.

Introduccin

Un examen coproparasitoscopico es el estudio de materia fecal para la bsqueda y

identificacin de formas parasitarias intestinales, puden ser tanto cualitativas como

cuantitativas . Las muestras fecales son seriadas con un mnimo de tres y deben

colocarse en frascos de boca ancha y guardados en un lugar fresco mientras que lleve

el tiempo de analizarlas , pues con el calor se aceleran los fenmenos de fermentacin

y con el frio se pueden destruir los quistes o trofozoitos de protozoos para conservar a

los parsitos puede utilizar refrigeracin a 10c.

Exmenes microscpicos Directo

En este estudio el material fecal ms utilizado es el recin obtenido por expulsin natural

del paciente , ya sean eses bien formadas o evacuaciones disminuidas de consistencia.

Con moco o sangre. En la suspensiones teidas con Lugol se pueden identificar con

facilidad quistes de protozoos una de estas tcnica de Faust o de flotacin con sulfato de

Zinc. Este es un mtodo en el cual la materia fecal se diluye en un lquido de alta densidad

y los parsitos que proporcionalmente son ms livianos van a la superficie. Para esta

tcnica se utiliza sulfato de zinc al 33% con densidad 1.180.( Para preparar dicha solucin

se aaden 331g de sulfato de zinc a un litro de agua tibia una vez disuelto el sulfato se

verifica con un densmetro que la densidad sea 1.180 si no es exacto se le aadir agua

o sulfato de zinc segn sea el caso esta tcnica se lleva a cabo por una cantidad de

materia fecal de aproximadamente 1g y se diluye en 10ml de agua y se filtra atreves de

una gasa cudruple se centrifuga a 2500 rpm durante un minuto se descarta el lquido

sobrenadante ( si la muestra es muy grasosa se repite el centrifugado cambiando de agua

y mezclando nuevamente) se mezcla el sedimento con 34 ml de sulfato de zinc al 33%

con densidad de 1.180 se centrifuga a 2500rpm

23

durante un minuto sin frenar la centrifuga se coloca el tubo cuidadosamente en una

gradilla se le coloca un porta objeto sobre el menisco durante 10 min de modo que en su

cara inferior quede adherida la gota que contiene huevos larvas y quistes.

Las preparaciones se montan en lugol y solucin salina y se llevan al microscopio para

buscar parsitos. Como los parsitos que flotan a la superficie de la solucin vuelven a

descender al cabo de la hora, se deben hacer preparaciones en porta objetos tan pronto

como termine la concentracin El contacto prolongado con el sulfato de zinc puede

deformar a los quistes y dificultar su identificacin , por lo tanto estas preparaciones deben

ser observadas lo antes posible. Esta tcnica es mejor para quistes de protozoos que para

huevos larvas de helmintos. El xito depende en la exactitud en la densidad del sulfato de

zinc. Cuando la materia fecal este fijada en formol al 5 10% debe utilizarse el sulfato

de zinc con densidad de 1.200. Grados Bawme

Material

Porta objetos.

Cubreobjetos.

Gasas.

Tubos de ensayo.

Embudo

Baso de precipitado

Abate lenguas

Agitadores

Reactivo

Solucin acuosa de sulfato de Zinc.

Muestra Biolgica

Materia Fecal


Se le pide que lleve un amuestra fecal de tamao de una nuez en un recipiente limpio de

boca ancha con tapa y que la mantenga a temperatura ambiente.

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Procedimiento

1) Calcular y tomar al tanteo un porcin fecal de aproximadamente 1g y diluirlo en 10

ml de agua (revolver bien)

2) Fltralo con una gasa cudruple

3) Centrifugar a 2500rpm durante un minuto y se decanta

4) Repetir el paso 3 dos veces ms

5) Se mezcla el sedimento con 34ml de sulfato de zinc al 3% (densidad 1.180)

6) Se completa con sulfato de zinc hasta llegar a 1 cm del borde del tubo y se centrifuga

a 2500rpm durante un minuto

7) Se coloca el tubo con cuidado en una gradilla

8) Elevar el nivel con sulfato de zinc hasta formar un menisco

9) Colocar un cubre- objeto sobre el menisco y se deja reposar por 10 min

10) Se le coloca una gota de lugol y se pone sobre un porta-objeto

11) Se observa a 10x y a 40 x

Nota se observa a 10x para abarcar ms campos, si se ve una figura circular se

enfoca a 40x para descartar o afirmar si es un quiste o huevecillo.

Resultados

Si se detecta un huevecillo o quiste es positivo y por su morfologa se detecta el

tipo de parasito que es para reportarlo y as se le pueda dar tratamiento.

Si no se observa ningn quiste o huevecillo es negativo.

Conclusiones

Esta tcnica es de suma importancia para la deteccin de parsitos en su forma

infectante ya que es muy sencilla y econmica lo cual es ideal para aplicarla, por

eso es la tcnica fundamental en la rea de parasitologa ya que por medio de la

flotacin de huevecillos y quistes por su densidad se logran fijar al porta objetos y

con ayuda de un colorante como el lugol permite su deteccin al microscopio.

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Bibliografas

David Botero, Marcos Restrepo, Parasitosis Humana

Editorial CIB 4 Edicin, Colombia, 2003

Paginas totales 543


Evangelina Olivas Manual de prcticas de Microbiologa y Parasitologa

Mxico, C. Jurez, Editorial UACJ

Paginas totales 109


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PRCTICA No. 6

Reacciones Febriles

Objetivo

Determinar y cuantificar atreves de estas tcnicas, la identificacin de anticuerpos

presentes en el suero sanguneo y dar el diagnstico serolgico de alguna enfermedad

bacteriana.

Fundamento

La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el antgeno

correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin macroscpica.

Introduccin:

Las llamadas reacciones febriles son un grupo de pruebas de aglutinacin que investigan

la presencia en el suero del paciente, de anticuerpos contra cepas bacterianas patgenas

que causan la fiebre de tifoidea, paratifoidea y brucelosis. Las reacciones febriles son un

conjunto de pruebas que sirven como su nombre lo indica para diagnosticar enfermedades

que cursan con fiebre, como Fiebre tifoidea (Salmonella), Brucelosis (fiebre ondulante,

fiebre de Malta) y Rickettsiosis (Fiebre Q, fiebre manchada de las montaas rocallosas). Las

reacciones febriles son pruebas que han venido a caer en desuso, sin embargo en muchos

pases en vas de desarrollo como Mxico se siguen utilizando por ser pruebas baratas y

rpidas, pero en pases desarrollados son cada vez menos utilizadas por su poco valor

diagnstico. Los antgenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del

paciente contra la Salmonella, Brucella y Rickettsia (reaccin cruzada con Proteus OX-

19) Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el organismo humano es

invadido por agentes infecciosos, responde produciendo anticuerpos aglutinantes contra

ellos los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo con el anticuerpo

especfico. El ttulo (valor) del anticuerpo depende del tipo y curso de la enfermedad. Para

que los resultados tengan un valor diagnstico el ttulo de ellos debe aumentar, por lo que

se deben tomar 2 muestras separadas por un periodo de tiempo de 4 semanas para ser

comparadas. El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideracin la

dilucin ms alta que se observe en la reaccin positiva.

27

Material

Placa de vidrio

Pipeta de 1 ml

Aplicadores de madera

Equipo

Agitador

Bao Mara

Material Biolgico

Suero

Reactivos Febriles


Se le pide al paciente venir en ayuno, no haber ingerido bebidas alcohlicas ni


Procedimiento

METODO DE AGLUTINACION EN PLACA

1) Rotular con el antgeno correspondiente en la placa de vidrio

2) Depositar en cada ovalo 0.04 ml de suero del paciente para cada uno de los antgeno

que se vaya a utilizar

3) A cada gota del suero aadir una gota de cada antgeno

4) Mezclar con un aplicador limpio (Utilizar un aplicador limpio para cada antgeno)

5) Agitar suavemente la placa por rotacin (120 rpm) durante 2 o 3 minutos

28

6) Observar la aglutinacin con ayuda de una lmpara

7) Cuando hay reaccin positiva se repite la tcnica con diluciones las cuales se

obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma

METODO DE AGLUTINACION EN TUBO

1) Numerar 7 tubos de 13x75 mm del 1 al 6 y un (T) testigo para cada antgeno

2) Adicionar 0.9 ml de solucin salina al primero y 0.5ml a los restantes

3) Agregar 0.1 ml del suero problema al tubo 1

4) Mezclar y pasar 0.5 ml del tubo 1 al tubo 2 y as sucesivamente hasta llegar al 6

eliminando 0.5 ml de esta ltima disolucin. Obtenindose diluciones 1/10, 1/20,

1/40, 1/80, 1/160 y 1/320

5) Adicionar 0.3 ml del antgeno diluido previamente 1:20 con solucin salina en cada

uno de los tubos

6) Agitar enrgicamente en incubar el bao Mara en las siguiente condiciones:

* Salmonella B 18-24hrs de 48-50C

* Salmonella H 2hrs a 37C

* Paratficos A y B 2hrs de 48-50C

* Brucella 48hrs 37C

* Proteux 0X -19 18hrs a 37C

29

7) Tomar 2 o 3 tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente a una fuente de luz que ilumine

partculas claramente.

Resultados

Placa

(-)

(+)

Tubo

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160

30

Conclusin

Las Reacciones Febriles son pruebas diagnsticas que cada vez van cayendo ms en

desuso debido a su poco valor diagnstico. Con ninguna de las reacciones febriles se puede

hacer un diagnstico definitivo de cualquier enfermedad comprendida en ellas. Para todas

las enfermedades febriles que abarcan existen pruebas ms confiables y con las que se

pueden hacer diagnsticos definitivos. El uso inadecuado de estas pruebas o su mala

interpretacin generalmente derivan en el uso injustificado de antibiticos

Bibliografa

Adriana Garibay Escobar

Manual de prcticas de inmunologa,

Hermosillo Sonora editorial UniSon, 2006

Paginas totales 137 pginas consultadas 40 a la 55

31

PRCTICA No. 7

Examen general de Orina

(EGO)

Objetivo:

Conocer cada uno de los aspectos que conforman el anlisis general de la orina y reforzar

nuestro conocimiento en el procedimiento para poder detectar anomalas en el paciente.

Fundamento:

Se basa en la los anlisis en fsico, qumico y microscpico o anlisis de sedimento de

una muestra de orina

Introduccin:

Desde hace mucho tiempo se reconoce que las propiedades fsicas y qumicas de la orina

constituyen indicadores importantes del estado de salud. Es indispensable aprovechar al

mximo los datos reportados en el examen general de orina con el propsito de solicitar

estudios confirmatorios de las alteraciones encontradas. Examen general de orina consta

de tres parmetros de revisin fsico, microscpico y qumicos.Examen

Examen Fsico

Color: que depender de las sustancias que formen la orina, puede ser en condiciones

normales desde amarillo claro hasta oscuro, tornndose rojo o negro en caso de sangre,

blanco o pardo en caso de leucocitos, cristales de fosfato etc.

Olor: este parmetro es importante en contadas ocasiones, como por ejemplo en la

fenilcetonuria en donde la orina tiene un olor a cao, en la cetonuria en donde huele a

frutas, etc.

Aspecto: el aspecto de la orina normal va desde claro hasta ligeramente turbio, y la turbidez

se puede deber a la presencia de clulas, cristales, depsitos etc.

32

Densidad o peso especfico: es una medida indirecta de la capacidad de concentracin del

rin, pero esta medicin depender de la cantidad de solutos presentes en la solucin y

de su peso.

Examen qumico

pH: refleja el estado de equilibrio cido base del organismo en general, adems se ve

modificado por la presencia de bacterias, sustancias de radiocontraste, etc.

Cetonas: productos de la conversin de acetil CoA en aceto acetato y ac. beta hiroxibutirico

y acetona, que son libremente filtradas por el rin; en caso de exceso, aparecern en la

orina.

Glucosa: Aparece en la orina cuando el umbral renal a esta molcula es sobrepasado (160-

180mg/dl)

Protenas: es normal al excrecin de protenas por la orina (entre 80+24 mg/da), pero la

mayora de stas son protenas de bajo peso molecular y solamente una cantidad entre 5-

30mg/da corresponde a la albmina (protena de alto peso molecular). Hay que tener en

cuenta que el 99% de las protenas filtradas son reabsorbidas por lo tbulos.

Nitritos: Prueba diseada para la identificacin de bacterias reductoras de nitratos a nitritos

(enterobacterias)

Bilirrubina: la bilirrubina conjugada es hidrosoluble por lo que es libremente filtrable por el

rin y en caso de aumento en la concentracin sangunea de esta, aparecer en orina.

Urobilinogeno: Producto de la accin bacteriana sobre la BD a nivel intestinal, se reabsorbe

y aumenta su concentracin en sangre cuando existe aumento en su produccin, es

libremente filtrado y aparece en orina.

Sangre: Permite la identificacin de glbulos rojos ntegros o lisados (hemolisis)

Leucocitos: reacciona ante la peroxidasa y esterasa leucocitaria y nos indica nmero

aproximado de leucocitos.

Anlisis del sedimento: bsqueda de leucocitos, glbulos rojos, cristales, cilindros, clulas

epiteliales, bacterias, hongos, parsitos etc.

33

Material

Tubos de ensaye

Gradilla

Pipetas.

Tiras reactivas para orina.

Porta objetos

Cubreobjetos

Equipo

Centrifuga

Microscopio.

Densmetro

Material Biolgico

Muestras de orina (pacientes del laboratorio)


Orina se recomienda la primera orina de la maana en un frasco limpio

Procedimiento

Examen Fsico

1) Observar el color de la muestra de orina y anotar

2) Percibir olores ftidos de la muestra y anotar

3) Tomar una gota de orina con la pipeta Pasteur y colocarla en el densmetro medir la

densidad y anotar

4) Colocar una cantidad aproximada a 10 ml de orina en un tubo de ensayo.

34

Examen Qumico

5) Sumergir la tira reactiva en la orina, procurando cubrir todas las zonas de reaccin.

6) Dejar secar y hacer la lectura comparando colores con el inserto de los reactivos.

ANOTAR Resultados

Examen Microscpico

7) Centrifugar el tubo 5 min a 1500rpm.

8) Decantar el sobrenadante y colocar el sedimento en un porta y cubrirlo con el

cubreobjetos

9) Observar al microscopio con seco fuerte (40x u objetivo azul)

10) Anotar observaciones.

Resultados

Valores Normales.

El color de la orina debe ser desde transparente hasta amarillo oscuro

La concentracin de la orina debe ser entre 1.015 a 1.025

El pH normal de la orina es 6

No debe haber presencia de: glucosa, cetonas, protenas.

Puede haber un pequeo nmero de hemates de 0-2

35

No debe haber hemoglobina

No debe de haber bilirrubina

Puede haber trazas de urobilingeno en la orina normal

No debe de haber nitritos

Puede haber hasta 5 leucocitos

Conclusin

En esta prctica pudimos elaborar y aprender cmo se realiza en s, un examen general de

orina y los pasos a seguir para que este de concretos y buenos resultados.

As como la vista al microscopio del mismo anlisis, fue una prctica llena de emociones y

efectos por parte de nosotros los alumnos ya que para muchos el manejo de la orina se les

hace fuera de lo comn.

Bibliografas

J. Daz Portillo, Fernndez del Barrio, Parede Salido

Aspectos bsicos de la bioqumica clnica, Editorial Das de Santos,

1997, Madrid Espaa, Paginas totales 297


36

Practica N. 8

Amiba en Fresco

Objetivo

El alumno detectara si el paciente tiene amibiasis por la bsqueda de trofozoitos en una

muestra fecal mediante la tcnica de amiba en fresco para reforzar sus conocimientos en

el rea de parasitologa

Fundamento

La tcnica se basa en la toma directa del ano del paciente para la bsqueda de parsitos

mediante el microscopio

Introduccin

En el rea de parasitologa se emplean diversas metodologas para apoyar el diagnstico

de parasitosis e infecciones intestinales. Este asunto en nuestro pas es muy importante si

consideramos que en la actualidad todava se presentas casos de muerte asociados con

estas patologas. El diagnstico de las enfermedades parasitarias se establece

generalmente

por la demostracin morfolgica de parsitos, a travs de diferentes metodologas tiles

para la deteccin de una gran variedad de ellos y otras particularmente tiles para uno solo

o algunos parsitos, en Laboratorios contamos con una serie de pruebas para el

diagnstico de parasitosis o infecciones intestinales,

Ameba en Fresco: La amebiasis intestinal es una infeccin causada por la Entamoeba

histolytica. La forma infectante de E. histolytica es el quistemaduro tetranucleado. El hombre

no es el nico pero s el principal reservorio de E. histolytica y como portador sano o

convaleciente, es la principal fuente de excrecin de quistes patgenos. La forma bsica de

infeccin es la ingestin de quistes maduros, que se da en medios contaminados, mal

saneados y con malos hbitos de higiene, a travs de aguas o alimentos contaminados,

manos mal lavadas o insectos vectores (como moscas o cucarachas) que propician el cierre

del ciclo ano-mano-boca. La tcnica para la identificacin de la ameba en fresco, que

requiere el anlisis microscpico de una muestra de heces se utiliza para reconocer la

presencia de trofozoitos en pacientes con enfermedad diarreica aguda y se ha

recomendado desde hace varias dcadas para confirmar el diagnstico clnico de

amebiasis.

37

Material

Hisopos estriles

Porta objetos

Cubre objetos

Bazo precipitado

Equipo

Microscopio

Bao mara

Reactivo

Formol al 10%

Solucin salina


1) Este estudio se realiza en nios menores de 1 ao, por las condiciones de la toma de la muestra.

2) El paciente debe presentarse al laboratorio.

3) No es necesario que el paciente se encuentre en ayuno.

4) El paciente debe de evitar purgantes

PROCEDIMIENTO

1) La muestra se toma directamente del recto del paciente por medio de

rotacin delicada, para lo cual se emplea un hisopo estril de algodn delgado, o

una cucharilla rectal introduciendo unos cinco centmetros en el recto

Nota: No se debe realizar solamente una vez, es decir no se debe de estar metiendo y

sacando el hisopo

2) El hisopo se coloca en un tubo de ensayo con 2 o 3 ml, de solucin

salina estril a 37C.

3) Posteriormente se coloca un poco en el portaobjetos, se coloca el

cubreobjetos y se observa de inmediato al microscopio.

38

4) Lo que se busca es la p resenc ia de trofozoitos

5) Tambin se puede utilizar formol al 10%, se introduce el hisopo en el tubo y observar al microscopio agregando una gota de azul de metileno, los trofozoitos se tien de color azul.

Presencia de amibas se reporta la muestra cmo ---------------- Positiva Ausencia de amibas se reporta la muestra cmo------------------Negativa

Conclusin

Esta prueba es vital para la deteccin y observacin de trofozoitos y quietes pero por la

forma de la toma de la muestra se limita solamente a nios menores de un ao ya que es

incmoda para pacientes mayores lo cual provoca muchos malos entendidos y

complicaciones en la toma de la muestra.

Bibliografa

Romero Cabello Ral Microbiologa y parasitologa Humana

3ra edicin Editorial Mdica Panamericana

Mxico, 2007 paginas totales 1321


39

Practica N9

Coprocultivo

Objetivo

El alumno Identificar los microorganismos responsables de alguna enfermedad del

paciente en materia fecal para la identificacin de bacterias para su tratamiento as

como reforzar su mtodos de siembra anteriormente enseados

Fundamento

Se basa en la deteccin de bacterias patgenas al ser humano las cueles pueden ser

encontradas en una muestra fecal para su siembra, aislamiento e identificacin de la

bacteria patgena.

Introduccin

Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de

cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entricas patgenas. Muestra adecuada

es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es

ms fcil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administracin de

antimicrobianos. Para realizar el examen se emplean heces que no tengan ms de media

hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodn.

Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al

laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de un lquido

conservador, o bien, depositar en ste el hisopo rectal. Las heces y los raspados rectales

son muestras que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse, en el examen

macroscpico la presencia de sangre, moco o helmintos en la inspeccin inicial. Se

suspenden los especmenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationato y se

cultivan sobre medios ordinarios as como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo

Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separacin de los bacilos gran

negativos que no fermentan la lactosa de otras bacterias entricas comunes.

Los frotis teidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos

microorganismos anormales como Cndida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para

diferenciar las bacterias entricas patgenas de las de la flora normal, por lo que deben

realizarse otro tipo de pruebas para discriminar los tipos de bacterias presentes en la

muestra como son las pruebas bioqumicas.

40

Material:

Gradilla

Mechero

Vaso de precipitado

Porta objetos

Medios de cultivo

Papel Graf

Microscopio

Asa bacteriolgica

Medios de cultivo para coprocultivos

Agar Sangre

Agar Mc Conkey

Agar EMB

Agar S-S

Agar entrico Hektoen

Agar Christensen

Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato)

Reactivos:

Lugol,

Cristal violeta,

Fucsina bsica,

Alcohol acetona

Muestra biolgica:

Muestra fecal

Recomendaciones para el paciente

Llevar una muestra fecal en un frasco de boca ancha no mayor del tamao de una nuez

Mantener en temperatura ambiente y se recomienda llevarla de inmediato al laboratorio

41

Procedimiento:

1) Colocar el papel Graf en la mesa y encima prender el mechero colocando la muestra

y los medios de siembra cerca del mechero

2) Esterilizar el asa bacteriolgica con el mechero y embarrarlo de la materia fecal

3) Abrir el medio de cultivo (Agar Sangre o Agar Mc Conkey ) y sembrarlo con la siguiente

tcnica

A) Hacer un inoculo en una esquina de la caga

B) Hacer un cuadrante de izquierda a derecha

C) Girar la caja 90 y realizar otro cuadrante

D) Girar la caja 90 y realizar otro cuadrante

E) Girar la caja 90Aislar la muestra en el ltimo cuadrante como se ve en la imagen

42

4) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C

5) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado

6) Realizar un frotis de la rea de aislamiento por tincin de Gram reportar observaciones

Tincin de Gram

Fundamento: se basa en la pared celular de la bacteria que con el cristal violeta que

es un colorante primario y un figarque es el lugol tien a los Grm + , el alcohol

acetona que sirve como descolorante y la safranina como colorante de contrate para

los Gram -.

Tecnica

A) Cristal bioleta por 1 min

B) Lugol por 1min

C) Alcohol acetona por 15 seg

D) Safranina por 45 seg

7) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

8) Realizar morfologa colonial y reportarlo

43

9) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

10) Mediante las observaciones, morfologa colonial , morfologa microscpica y pruebas

bioqumicas determinar la bacteria

Conclusin

Es un buen mtodo de identificacin de un bacteria patgena del ser humano la cual

tiene que ser secretada por la materia fecal y gracias a eso nos permite sembrar la e

identificarla para su tratamiento esta tcnica es de gran utilidad lo cual tenemos que

seguirla practicndola hasta perfeccionarla para tener resultados confiables al pasiente.

Bibliografa







Paginas totales 109


44

Practica N10

Urocultivo

Fundamento

Se basa en la identificacin de bacterias presentes en la orina, mediante un medio de

cultivo especifico que nos permite sembrar, aislar e identificar la bacteria patgena

Objetivo

El alumno realizara toda la metodologa correspondiente de la tcnica de urocultivo para

la determinacin microorganismo en vas urinarias las cuales provoquen patologa al ser

humano as reforzar el conocimiento del alumno

Introduccin

El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infeccin sintomtica del tracto

urinario o infeccin asintomtica (bacteriuria asintomtica) en pacientes con riesgo de

infeccin.

Est basada en la presencia de un nmero significativo de bacterias (generalmente

>100.000 bacterias/ml.) La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para

el diagnstico de infeccin del tracto urinario, ya que prcticamente est presente en

todas las infecciones urinarias. Una excepcin es la bacteriuria asintomtica en la que la

piuria puede estar ausente.

Es necesario que el mtodo de recogida sea el adecuado siguiendo unos protocolos de

higiene evitando as posibles contaminaciones de la muestra. Para la identificacin del

nmero de bacterias, realizaremos un recuento bacteriano y para la identificacin de los

tipos de bacterias presentes en la orina y sus patologas, se realizara una siembra en

medios de cultivo diferentes con la tcnica de siembra comnmente utilizado en el

urocultivo, segn el tipo de microorganismo comnmente encontrado en la muestra.

Material

Mechero

Vaso de precipitado

Porta objetos

Medios de cultivo

Papel Graf

Microscopio

Asa bacteriolgica

Gradilla

45

Medios de cultivo para Urocultivo

Levine

EMB

Mac Conkey

Agar Chocolate

Reactivos:

Lugol,

Cristal violeta,

Fucsina bsica,

Alcohol acetona

Muestra biolgica:

Orina

Recomendaciones para el paciente

Llevar La primera orina de la maana en un frasco de boca ancha

No a ver ingerido bebidas alcohlicas ni medicamentos en 48 horas

Procedimiento:

1) Colocar el papel Graf en la mesa y encima prender el mechero colocando la

muestra y los medios de siembra cerca del mechero

2) Esterilizar el asa bacteriolgica con el mechero y Sumergirla en la orina

previamente agitada

3) Abrir el medio de cultivo (Levine EMB Mac Conkey Agar Chocolate y sembrarlo con

la siguiente tcnica

4) Hacer un inoculo que divida a la mitad el medio de cultivo

46

5) Sembrar de derecha a izquierda sobre todo le medio de cultivo

6) Girarla 90 y hacer lo mismo

7) Incubar el medio de cultivo ya sembrado por 24 horas por 37C

8) Sacar el medio de cultivo sembrado y incubado

47

9) Realizar un frotis de la rea de aislamiento por tincin de Gram reportar

observaciones

Tincin de Gram

Fundamento

Se basa en la pared celular de la bacteria que con el cristal violeta que es un

colorante primario y un figarque es el lugol tien a los Grm + , el alcohol acetona

que sirve como descolorante y la safranina como colorante de contrate para los Gram

-.

Tecnica

E) Cristal bioleta por 1 min

F) Lugol por 1min

G) Alcohol acetona por 15 seg

H) Safranina por 45 seg

10) Resembrar hasta que el medio se a puro mediante los frotis

11) Realizar morfologa colonial y reportarlo

48

12) Realizar pruebas bioqumicas para la identificacin de Genero y especie

13) Mediante las observaciones, morfologa colonial , morfologa microscpica y

pruebas bioqumicas determinar la bacteria

Conclusin

Esta tcnica es de gran utilidad y es un buen mtodo de identificacin de bacterias

patgena del ser humano la cual tiene que ser desechadas por la va urinaria y gracias

a eso nos permite sembrarla e identificarla para su tratamiento esta tcnica es muy

sencilla y de utilidad para el reconocimiento de bacterias patgenas al hombre para la

localizacin de gnero y especie.

Bibliografa







Paginas totales 109


49

Practica N

RASPADO ANAL (PRUEBA DE GRAHAM)

Fundamento

Bsqueda huevecillos de parsitos los cuales no son identificados por muestra

fecal expulsada ya que depositan sus huevos en el ano durante la noche y los

vaca en el tero por lo tanto no se encuentran en la materia fecal y se necesita

una tcnica especial.

Objetivo

El alumno aprender una tcnica especializada para la deteccin del parasito

Enteroblus-vermicularis ya que no se pueden encontrar sus huevecillos en la

materia fecal

Introduccin

El test de Graham es una prueba utilizada para detectar enterobiasis. Se trata

de un examen no rutinario, ya que dentro de la parasitologa es una prueba

especial que consiste en colocar una tira adhesiva de papel de celofn, de unos

20 mm de ancho, en el extremo de un depresor de madera o de un porta, de tal

forma que la zona engomada quede hacia el exterior y que a cada lado del

extremo queden unos 5 cm de tira adhesiva. Para realizar la prueba se debe

colocar la tira sobre la regin anal y perianal del paciente y luego extenderla

sobre un portaobjetos, de manera que la zona engomada quede adherida al

mismo. Seguidamente, observar al microscopio con pocos aumentos (10X). La

toma debe hacerse por la maana, antes de que el paciente se asee o defeque.

Para facilitar la observacin microscpica, entre el celofn y el portaobjetos

puede colocarse una gota de lugol o de xilol

Material

Cinta de celulosa transparente adhesiva de 12 mm de ancho (cortar una banda ms corta que la longitud del portaobjetos).

Abate lenguas.

Portaobjetos Equipo

50

Microscopio Reactivo

Lugol

Procedimiento

1) Hacer la toma siempre que sea posible, por la maana al despertar el paciente, antes de que ste haya defecado, efectuado su aseo personal (bao) o caminado.

2) Cubrir la extremidad redondeada de un tubo de ensaye o del abate lenguas con el fragmento de celofn o cinta scotch, colocando la parte adhesiva hacia el exterior (

3) Hacer Inclinar al paciente hacia adelante (posicin genupectoral) exponiendo el esfnter anal y perin al abrir los glteos con la mano izquierda

4) Despegar los pliegues perianales y aplicar la cinta adhesiva en la perifea del ano y no dentro del canal anal, haciendo movimientos hacia arriba, hacia abajo y hacia los lados.

5) Colocar la cinta sobre un portaobjetos limpio y desengrasado con alcohol etlico - ter.

6) Apoyar fuertemente para que la adherencia sea perfecta para eliminar lo ms posible las burbujas de aire

7) Agregar una gota de lugol en lugar del tolueno, para que se coloreen los huevecillos.

8) Examinar la muestra con el objetivo seco dbil y con poca luz, ya que los huevecillos son muy transparentes.

9) Luego observar a seco fuerte para la identificacin de los huevos.

10) Reportar observaciones

Nota: Se puede detectar los siguientes parsitos con esta prueba Ascaris-lumbricoides, Trichuris-trichiura, Hymenolepis-nana e Enteroblus-vermicularis

51

Conclusiones

Esta prctica es una tcnica especializada para la bsqueda de parsitos los

cuales no se observan sus huevecillos en tcnicas bases como amiba en fresco

o tcnica de sulfato de zinc.

Bibliografa





52

Practica N

Hemoglobina

Fundamento

El reactivo de Drabkin lisa a los eritrocitos liberando la hemoglobina la cual reacciona

con el cianuro de potasio la cual se trasforma en metahemoglobina la cual reacciona

con el ferrocianuro de potasio y la trasforma en cianometahemoglobina la cual es una

solucin temporalmente estable que con mayor concentracin mayor absorbancia.

Objetivo

El alumno reforzara los conocimientos en la formula roja determinando la cantidad de

hemoglobina presente en una muestra problema.

Introduccin

La hemoglobina (HB) es una protena globular, que est presente en altas concentraciones en lo glbulos rojos y se encarga del transporte del oxgeno al aparato respiratorio hacia los tejidos perifricos; y de transporte de CO2 y protones (H+) de los tejidos perifricos hasta los pulmones para ser excretados. Los valores normales en sangre son de 13 18 g/ dl en el hombre y 12 16 g/ dl en la mujer. La hemoglobina es una protena con estructura cuaternaria, es decir, est constituido por cuatro cadenas polipeptdicas dos y dos la hemoglobina adulta (HbA) dos y dos g la hemoglobina feta l(HbF). En el feto humano, en un principio, no se sintetizan cadenas alfa ni beta, sino zeta (z ) y psilon (x) (Hb Gower I). Al final del primer trimestre la subunidades a han reemplazado a las subunidades z (Hb Gower II) y las subunidades g a los pptidos x. Por esto, la HbF tiene la composicin a2g2. Las subunidades b comienzan su sntesis en el tercer trimestre y no reemplazan a g en su totalidad hasta algunas semanas despus del nacimiento. Las cadenas polipeptdicas alfa contienen 141 aminocidos, las no alfa 146 (b, g, d) y difieren en la secuencia de aminocidos. Se conoce desde hace dcadas la estructura primaria de las cuatro cadenas de Hb normales. La estructura secundaria es muy similar: cada una exhibe 8 segmentos helicoidales designados con las letras A a la H. Entre ellos se encuentran 7 segmentos no helicoidales. Cada cadena a esta en contacto con las cadenas b, sin embargo, existen pocas interacciones entre las dos cadenas a o entre las dos cadenas b entre s. Las cuatro cadenas polipeptdicas de la Hb contienen cada una un grupo prosttico, el Hem, un tetrapirrol cclico, que les proporciona el color rojo a los hemates. Un grupo prosttico es una porcin no polipeptdica que forma parte de una protena en su estado funcional. El tomo de hierro se encuentra en estado de oxidacin ferroso (+2) y puede formar 5 o 6 enlaces de coordinacin dependiendo de la unin del oxgeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb). Cuatro de estos enlaces se producen con los nitrgenos pirrlicos de la porfirina en un plano horizontal. El quinto enlace de coordinacin se realiza con el nitrgeno del imidazol de una histidina denominada

53

histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del tomo ferroso es con el oxgeno, que adems est unido a un segundo imidazol de una histidina denominada histidina distal. Tanto el quinto como el sexto enlace se encuentran en un plano perpendicular al plano del anillo de porfirina. La parte porfirnica del Hem se sita dentro de una bolsa hidrofbica que se forma en cada una de las cadenas polipeptdicas. Cuando una protena esta con su grupo prosttico se denomina holoproteina, y cuando esta sin este, se lo denomina apoproteina. Adems por poseer un grupo prosttico se dice que la Hb es una protena conjugada, es una hemoproteina.

Material:

Pipeta shali o pipeta automtica de 20 ul

Boquilla

Gradilla

Gasas

Celdillas

Pipeta de 5 ml

Reactivo

Reactivo de Drabkin

Equipo

Espectrofotmetro

Material biolgico

Sangre total con anticoagulante EDTA

Muestras patrn




54

Procedimiento

1) Tomar una muestra de sangre con anticoagulante

2) Colocar los siguientes valores para obtener patrn muestra y blanco

Patrn Problema Blanco

Muestra patrn 20ul

Muestra problema 20ul

Reactivo 5ml 5ml 5ml

3) Dejar reposar por 10 min

4) Leer al espectrofotmetro a 540nm

5) Obtener el resultado con la siguiente formula

Abs-Problema x Concentracion Patron/ Abs-Patron

Valores normales

Hombre: de 13.8 a 17.2 g/dL Mujer: de 12.1 a 15.1 g/dL

Conclusin

Esta prctica es de gran ayuda para determinar anomalas en el eritrocito por deficiencia

de la hemoglobina ya que puede estar normales los niveles de eritrocitos pero con

problemas con la hemoglobina lo que provoca que no pueda trasporte oxigeno

correctamente esto se puede reconfirmar en un frotis sanguneo observan do la

coloracin del eritrocito.

Bibliografa

Muoz Zambrano, Mara E.; Morn Cortijo, Cecilia G. Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de hematologa

Editorial Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2005. Paginas consultadas 53 a la 56

55

Practica N

Hematocrito

Fundamento

Es el % de eritrocitos en una muestra problema centrifugada a velocidad constate y tiempo

determinado.

Objetivo

El alumno reforzara sus conocimientos en formula roja y determinara el hematocrito de

una muestra problema para poder observar si hay anemia o policitemia en el paciente.

Introduccin

El hematocrito es el porcentaje ocupado por glbulos rojos del volumen total de la sangre.

Los valores medios varan entre 30% a 52%. Estas cifras pueden cambiar de acuerdo a

diversos factores fisiolgicos como la edad y la condicin fsica sexo. Es una parte integral

de la biometra hemtica, junto con la medicin de hemoglobina, y el conteo de leucocitos

y plaquetas la elevacin o disminucin de este valor puede llegar al diagnstico de

anemias o policitemias.

Valores bajos de hematocrito:

La disminucin de glbulos rojos en la sangre es una anemia. Se puede relacionar con

diferentes condiciones, como hemorragia o leucemia hay numerosos factores que pueden

contribuir a desarrollar una anemia, con la baja ingesta de hierro, o pacientes con

enfermedad renal crnica, que no genera suficiente eritropoyetina para estimular la

produccin de glbulos rojos en la medula sea.

Valores altos de hematocrito:

Se puede asociar a deshidratacin o hipoxia.

Patologas como la policitemia vera consiste en una desmedida produccin de glbulos

rojos. En casos de enfermedad pulmonar obstructiva crnica, la hipoxia genera un

aumento de la produccin de eritropoyetina por el rin, lo que puede resultar en un

hematocrito alto.

56

Material

Capilares

Gradilla

Mechero

Gasas

Regla

Equipo

Microcentrifuga

Muestra biolgica





Procedimiento

1) Tomar una muestra sangunea con anticoagulante

2) Tomar el capilar y llenarlo a un 80% de sangre total

3) Sellarlo del lado contrario con la flama del mechero

4) Meterlo a centrifugar a 10000 rpm por 5 min

5) Medir con una regla los siguientes parmetros y obtener el resultado con la

siguiente formula

Datos

Volumen Total (VT)=

Volumen Globular (VG) =

Formula

Volumen total / Volumen Globular X 100%=

57

Conclusin

Esta prctica es de gran utilidad para el diagnstico de anemias o polisitemias ya

que nos proporciona el dato si hay un aumento o una disminucin delos

eritrocitos en sangre.



58

Practica N

Recuento de eritrocitos

Fundamento

El reactivo de Hayem que est compuesto de bicloruro de mercurio sulfato de sodio y

cloruro de sodio lisan a los leucocitos y plaquetas para poder observar a los

eritrocitos.

Objetivo

El alumno reforzara sus conocimientos en la formula roja y determinara el nmero de

eritrocitos en una muestra problema para encontrar anomalasen el pasiente.

Introduccin

Son las clulas ms numerosas de la sangre, su nmero flucta entre 4 a 5 millones

por milmetro cbico, se caracterizan por carecer de ncleo y organelos, tienen la

forma de un disco bicncavo de dimetro promedio de 7.2 a 7.8m, con un espesor

de 2 a 2.8m en los bordes y de 0.8 a 1m en la parte central. El eritrocito, tiene en

su citoplasma una protena bsica denominada hemoglobina, esta protena es afn

por la eosina por lo que el eritrocito se tie de color rosado claro o asalmonado. El

reticulocito es la clula predecesora del eritrocito, se caracteriza por ser una clula

sin ncleo y sin organelos, pero su citoplasma se ve con una fina red azulada que

viene a ser restos los ribosomas. Los eritrocitos son clulas elsticas, que tienen la

propiedad de pasar con facilidad por los pequeo capilares tienen un citoesqueleto

de espectrina que les permite contraerse. La vida de los eritrocitos alcanza en

promedio los 120 das, cuando llegan a la vejez, por la incapacidad de sintetizar

enzima, pierden su elasticidad y la capacidad de intercambio inico. En la superficie

de la membrana celular, aparece un grupo de oligopolisacaridos que marcan a las

clulas, de manera que al ser reconocidas por los macrfagos del bazo, hgado y

mdula sea son destruidas. Los eritrocitos que tienen un dimetro mayor a los

8m se denominan macrocitos. Los que tienen menos de 6m se denominan

microcitos. Cuando los eritrocitos se tien de un color plido se denomina

hipocroma, siendo una de las causas la baja concentracin de hemoglobina.

Cuando los eritrocitos son sometidos a soluciones hipertnicas se contraen y su

membrana adquiere una forma encogida e irregular, estos son los eritrocitos

crenados. Se denomina unisocitosis cuando tienen un elevado nmero de

eritrocitos con dimensiones anormales. Ultraestructuralmente el eritrocito est

formado por una membrana y un citoplasma sin organelos.

59

La membrana del eritrocito es una bicapa de naturaleza lipdica compuesta por

50% de protenas integrales, 40% de lpidos y 10% de carbohidratos. Esta

membrana tiene una estructura continua interrumpida por canales inicos

interpuestos, por los que se transportan los aniones. La forma caracterstica del

eritrocito es mantenida por un citoesqueleto filamentoso que tiene la forma de una

red hexagonal cuyos vrtices estn formados por protenas de anquirina, banda

4.1, banda 3 y glucoforinas, donde anclan estructuras proteicas filamentosas de

Actina y Espectrina, que tienen propiedades contrctiles que le dan elasticidad del

eritrocito. La energa para realizar sus funciones y mantener la estructura de la

clula se obtiene de la degradacin de la glucosa por la va anaerbica en un 90%,

y solo un 10% la realiza por la va aerbica de la pentosa fosfato. Los canales

inicos tienen como funcin el transporte de aniones, la protena de la banda 3.1

participa en el intercambio de bicarbonato intracelular por el cloro extracelular. Las

protenas perifricas son principalmente espectrina tetramrica, actina, banda 4.1,

aducina, banda 4.9 y tropomiosina. La red est anclada a la bicapa lipdica por la

anquirina, que interacta con la banda 4.2 y con la banda 3. En la superficie de la

membrana celular se encuentran oligopolisacridos, glucoprotenas y glucolpidos

que permiten tipificar la sangre por el sistema ABO, otro sistema de tipificacin

sangunea es el sistema MN que est dado por una glucoforina especfica. Hay

anormalidades como por ejemplo: la esferocitosis hereditaria por defecto de la

espectrina, la eliptocitosis por defecto de la protena banda 4.1.

Material

Pipeta de glbulos rojos

Gradilla

Gasas

Cmara de Neubauer

Boquilla

Tubo de 12x75

Equipo

Microscopio

Agitador automtico

Material bilgico


60




Procedimiento

1) Tomar una muestra de sangre con anticoagulante EDTA

2) Tomar sangre total con la pipeta de glbulos rojos hasta la marca de .5

limpiando con la gasa el exceso de sangre

3) Llenar la pipeta de glbulos rojos hasta la marca de 101 con reactivo de

hayem

4) Agitar por 3 minutos en el agitador automtico

5) Desechar las primeras tres gotas y llenar la cmara de Neubauer

6) Dejar reposar 3 min para dejar sedimentar a los eritrocitos

7) Observar al microscopio a 40X y realizar un conteo de eritrocitos en 5

cuadriculas como se observa en el ejemplo

8) Obtener resultado con la siguiente formula

61

Valores normales

Hombres de 4500000 a 5500000

Mujeres de 4000000 a 5000000

Conclusin

Esta prctica fue de gran utilidad para reforzar conocimientos sobre la morfologa

y funcin del eritrocito as como sus anomalas como anemias y policitemias para

un buen diagnstico y el reforzamiento de la prctica para dominar la formula

roja por completo y entregar resultados confiables al pasiente

Bibliografas



62

Practica N

Volumen de sedimentacin globular

(VSG)

Fundamento

Mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar por la relacin de paquete

globular y suero mediante la gravedad

Objetivo

El alumno reforzara el conocimiento en la formula roja y determinara la velocidad

de sedimentacin de una muestra problema para encontrar posibles anomalas

Introduccin

La sangre es un tejido lquido, al que puede considerarse como una variedad de

tejido conectivo, que circula por el aparato cardiovascular gracias al impulso que le

proporciona el corazn.

La sangre est compuesta por dos fracciones bien diferenciables clulas sanguneas

o elementos formes de la sangre

El conjunto de las clulas sanguneas suponen el 45% del volumen sanguneo. Hay

diversos tipos de elementos formes en la sangre Eritrocitos, Plaquetas, Leucocitos,

Granulocitos, Neutrfilos, Eosinfilos, Basfilos, Agranulocitos, Linfocitos y

Monocitos.

Plasma sanguneo es la sustancia intercelular lquida en la que nadan las clulas y

que puede asimilarse a la matriz extracelular en otros tipos de tejido conectivo. El

plasma sanguneo supone el 55% del volumen sanguneo y est compuesto por:

Agua Electrolitos Protenas (albmina, fibringeno, globulinas...) Nutrientes

(glucosa, lpidos, aminocidos) Sustancias nitrogenadas no proteicas (urea,

creatinina,...) Sustancias reguladoras (hormonas, vitaminas)

Hay diferencias importantes entre la matriz extracelular del tejido conectivo y el

plasma sanguneo que justifican el que la sangre sea considerada como un tipo de

tejido diferente al tejido conectivo. Estas diferencias estriban en el tipo de

compuestos qumicos que forman parte del plasma son muy diferentes a los que

componen la matriz del tejido conectivo los compuestos qumicos que forman parte

del plasma no son sintetizados por las propias clulas sanguneas, al contrario de lo

que sucede con los principales componentes del tejido conectivo que s son

sintetizados por las clulas propias del tejido (fibroblastos, osteoblastos, condrocitos)

el hecho de que buena parte de los componentes del plasma (agua, electrolitos,

molculas de pequeo peso molecular) puedan atravesar la pared de los vasos e

incorporarse al espacio intercelular conectivo.

63

Material

Tubo de Wintrobe

Gradilla

Pipeta Pasteur

Material para puncin sangunea

Material Biolgico


Procedimiento

1) Tomar un amuestra sangunea con anticoagulante EDTA

2) Con la pipeta Pasteur llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca que se

indica con cuidado de no formar burbujas

3) Colocarlo en una gradilla en forma recta donde no all movimiento

4) Leer a la hora

Valores normales

Hombres: 0 - 5 mm/hora

Mujeres: 0 - 10 mm/hora

Conclusin

Esta prctica es de gran utilidad para observar la relacin entre paquete globular

y plasma en una muestra problema con la intervencin de la gravedad para

reforzar nuestros conocimientos sobre biometras hemtica y las caractersticas

de la sangre y sus componentes.

Bibliografa



Practica N

64

Recuento de Reticulocitos

Fundamento

Bsqueda de restos nucleares de eritrocitos jvenes por medio de Azul de

Metileno por 30 min a bao Mara

Objetivo

El alumno determinara la presencia de reticulositos en sangre perifrica para

saber si hay una regeneracin normal de eritrocitos

Introduccin

Los reticulocitos son glbulos rojos que no han alcanzado su total madurez. Se

encuentran en niveles elevados en el plasma sanguneo por causa de algunas

anemias, cuando el organismo incrementa la produccin de glbulos rojos y los

enva al torrente sanguneo antes de que sean maduros. Los reticulocitos se

caracterizan por presentar una red de filamentos y grnulos que hacen que se tien

en el frotis de sangre, distinguindose as de los glbulos rojos maduros.

Normalmente representan el 0,5-1,5% del conteo de glbulos rojos,pero pueden

exceder el 4% cuando compensan la anemia Su morfologa de los reticulocitos son

clulas anucleadas predecesoras de los eritrocitos con la diferencia de que poseen

grnulos de ribosomas y algunas mitocondrias que les son tiles para sintetizar el

35% de la hemoglobina restante. Este tipo de clulas esta en circulacin perifrica

aproximadamente un da para convertirse posteriormente en un hemate maduro

que cumplir con todas las funciones biolgicas de estas clulas. A diferencia de

los hemates o glbulos rojos maduros, los reticulocitos an poseen ARN. El

reticulocito es la clula roja que antecede en maduracin al eritrocito, es el resultado

de la prdida del ncleo que sufre el eritroblasto ortocromtico. Su tamao vara de

10 - 15 micras de dimetro. El reticulocito puede mostrar alteraciones en el tamao

y/o presentar cuerpos de inclusin (punteado basfilo, cuerpos de Howell Jolly). La

gnesis del aumento de tamao, involucra una respuesta normal de la mdula sea

a un estmulo intenso de la eritopoyetna. Dependiendo del grado de estimulacin

se pueden presentar los siguientes eventos.

Incremento del nmero de reticulocitos en sangre perifrica, normales y

aumentados de tamao, a expensas del pool medular. Esto implica una disminucin

de la permanencia de estas clulas en mdula sea.

65

Presentacin en circulacin de reticulocitos que pueden alcanzar dos veces el

tamao normal, como resultado de la expulsin del ncleo del eritroblasto

policromatfilo, saltndose el estadio de eritroblasto ortocromtico.

Material

Tubo de 12x75

Material para puncin sanguina

Pipeta Pasteur

Porta objeto

Equipo

Microscopio

Bao Mara

Reactivos

Aceite de inversin

Azul de metileno




Procedimiento

1) Tomar una muestra de sangre con anticoagulante EDTA

2) Colocar cuatro gotas de sangre y cuatro gotas de Azul de Metileno en un tubo

de 12x75

3) Incubar en el bao Mara a 37C por 30 min

4) Realizar un frotis sanguneo y dejarlo secar

5) Observar al microscopio a 100x y realizar un conteo de 100 clulas

6) Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente

Cuidadosamente:

Cantidad total de glbulos rojos.

Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos.

66

Valores normales

Adultos 0,5 - 1,5%

Al nacer 2,5 - 6,0%

Conclusin

Este examen es de gran utilidad para poder saber si hay una destruccin excesiva

de eritrocitos lo cual provoca un aumento de nmeros de reticulocitos en sangre

perifrica.

Bibliografa



67

Practica N

Frotis Sanguneo

Fundamento

Obtencin de cuerpo cabeza y cola a la extensin de una gota de sangre

Objetivo

EL alumno reforzar su conocimiento en morfologa de las clulas sanguneas y a

cuantificar e identificar a los leucocitos.

Introduccin

Se define como frote, frotis o extendido, a la preparacin microscpica delgada y

transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un

lquido orgnico espeso o tejido semilquido o pastoso

El frote perifrico se utiliza para el estudio de las caractersticas citolgicas de las

clulas de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la mdula

sea a travs de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluacin de las

lneas eritrocticas, leucocitaria y megacarioctica, determinando anormalidades en

forma, tamao, color e inclusiones citoplasmticas, dando una medida cuantitativa

y cualitativa de los elementos que lo conforman.

El mtodo de preparacin de extendidos con cubreobjetos es una tcnica ms

antigua, que en la actualidad slo se usa raras veces para los extendidos de sangre

perifrica. La nica ventaja de esta preparacin es su distribucin excelente de los

leucocitos, lo que a su vez permite obtener frmulas diferenciales ms exactas.

Deben usarse cubreobjetos de vidrio completamente limpios. No obstante, rotular,

transportar, teir y almacenar estos extendidos pequeos y frgiles plantea muchos

problemas. En la figura 3 se muestra la tcnica correcta para la realizacin de este

tipo de extendidos.

a) Coloque una gota pequea de sangre o de aspirado de mdula sea sobre un

cubreobjetos limpio (22 * 22 mm) y coloque otro cubreobjetos encima, para permitir

que la sangre se esparza por ambos.

b) Seguidamente se hacen girar uno sobre otro para crear dos extendidos delgados,

uno en cada cubreobjetos.

c) Separar los cubreobjetos rpido pero con cuidado. Esto se hace jalando

lateralmente en direccin opuesta uno del otro (no hay que levantar los

cubreobjetos). Los dos extendidos pueden teirse y montarse sobre un portaobjetos

de vidrio de 75 * 25 mm.

68

Material

Porta objetos

Pipeta Pasteur de vidrio

Puente de tincin

Bazo precipitado

Mechero

Material para toma de sangre

Gasas

Equipo

Microscopio

Reactivos

Buffer

Colorante de Wright

Material bilgico





Procedimiento

1) Tomar un amuestra de sangre con anticoagulante con EDTA

2) Colocar una pequea gota de sangre en un extremo del porta objeto

3) Colocar otro porta objeto enzima de la gota de sangre y esperar que se

extienda

4) Colocar el segundo porta objeto aun ngulo de 45

5) Deslizarlo a velocidad contante hacia el lado contario para obtener cabeza

cuerpo y cola.

6) Dejarlo secar y teirlo con tincin de Wright

69

7) Colocar el porta objeto en un puente de tincin y colocar los siguientes tiempos

de reactivos

6 minutos de colorante de Wright

4 minutos de Buffer

Enjugar y dejar secar

8) Observar al microscopio a 100X la morfologa de los eritrocitos y buscar

anomalas

Resultados

Eritrocito Normal

Anormalidades en los eritrocitos

poiquilocitosis

70

Conclusin

Esta prctica es de gran ayuda para la observacin de la morfologa del eritrocito

para poder encontrar deformaciones tanto en el tamao color o en la

hemoglobina lo cual puede estar causando enfermedades al paciente

Bibliografa



71

Practica N

Recuento de Leucocitos

Fundamento

El colorante de Turk que est compuesto de cido actico glacial lisa a los

eritrocitos y el azul de metileno facilita la observacin de los leucocitos al

microscopio.

Objetivo

El alumno determinara la cantidad de leucocitos en una muestra problema y

reforzara sus conocimientos sobre la formula blanca.

Introduccin

Existen dos formas de contar los leucocitos presentes en la sangre perifrica del

individuo; por una parte podemos contar la totalidad de los leucocitos, sin distinguir

tipos, esto se denomina recuento de leucocitos totales, o bien, podemos contar los

leucocitos distinguiendo sus diferentes tipos, y es lo que se conoce como recuento

diferencial o frmula leucocitaria. El recuento de leucocitos es la determinacin del

nmero de estas clulas por unidad de volumen sanguneo. Esta tcnica es de

importancia vital para el diagnstico y seguimiento de gran nmero de patologas

tanto hematolgica como no.

Una de las principales caractersticas de la morfologa de los leucocitos es que

conservan su ncleo atendiendo a la morfologa del ncleo podemos dividir los

leucocitos en:

Mononucleares: linfocitos y monocitos, presentan un ncleo sin lobulaciones ni

estrechamientos.

En su citoplasma no aparecen granulaciones, o si lo hacen es en un nmero muy

bajo.

Polinucleares: tambin denominados granulocitos, aqu incluimos los neutrfilos,

basfilos y eosinfilos. Estas clulas poseen un solo ncleo pero a su vez ste

presenta diversas segmentaciones, por lo que parece que tienen varios ncleos.

Presentan multitud de granulaciones en su citoplasma y su nombre hace referencia

al tinte con el cual podemos teir estos grnulos: los basfilos se tien con

colorantes bsicos, adoptando tonos azules. Los eosinfilos se tien con colorantes

cidos, tomando tonos rojos, y los neutrfilos se tien con ambos tipos de tintes.

72

Material

Pipeta de glbulos blancos

Boquilla

Gasas

Gradilla

Tubos de 12x75

Cmara de Neubauer

Equipo

Documents

Manual de Practicas de Laboratorio Francisco