CENTRO DE ESTUDIOS TECNOLOGICOS INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 122

MEMORIA DE TRABAJO

NOMBRE: JEESICA MELISA CORTES BARBERI

ESPECIALIDAD

TECNICO LABORATORISTA CLINICO

DIRECTOR

YURIDIA YADHIRA DE CARMEN BAEZ MORENO

GENERACION

2005 – 2008

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INDICE

Portada………………………………1.Índice………………………………..2.Introducción……………………..3.Control de calidad……………..4.Seguridad e higiene…………..5, 6, 7.HEMATOLOGIA; biometría hemática.......…….8.Hemoglobina…………………….9, 10.Recuentro eritrocitario……..11.Recuentro diferencial de leucocitos……………12.Plaquetas………………………...13.Reticulocitos…………………….14.Velocidad de sedimentación globular…………15.Introducción de biometría hemática completa……….16, 17, 18, 19,20.Determinación de reticulocitos……………………………….21, 22, 23.Determinación de plaquetas………………………..24.Velocidad de sedimentación globular media…………...25.Fundamentos de biometría hemática completa……..26.Tiempo de protrombina…………………………………………..27.Tiempo de tromboplastina parcial……28.Coombs directo……………………………...29 ,30.Coombs indirecto……… ……………………31, 32.Tiempo de sangrado………………………..33.Tiempo de coagulación……………………34.Anticuerpos anti HIV……………………...35.Factor reumatoide……………………..….36.VDRL…………………………………………..……37.Prueba de embarazo en orina y sangre……………….…38.Reacciones febriles………………………...39.Proteína C reactiva…………………..…….40.Antiestreptolisinas…………………………..41, 42.Química.....clínica(gluc,ua,cret,ac.u,col,tg,tgp,tgof.alc,f.ac,prot.t,alb,amilasa,F,Ca,Mg………………………………………………..43,44,45,46,47,48,49,50…58Bibliografías……………………………………..59, 60,61.

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INTRODUCCION

ESTE MANUAL HA SIDO ELABORADO PARA ESTABLECER LA ORGANIZACIÓN DEL DEPARTAMENTO DEL LABORATORIO DE ANALISIS CLINICOS Y FACILITAR EL MANEJO Y SATISFACCION DEL PACIENTE, DESDE EL MOMENTO EN QUE INGRESA AL LABORATORIO, PARA DARLE EL TRATO Y ATENCION ADECUADA, DESDE LA RECEPCION DE LA SOLICITUD, LA INFORMACION QUE SE LE DA, LA RECEPCION DE SUS MUESTRAS (CUANDO PUEDE RECOLECTARLAS EN CASA), LA TOMA DE SUS MUESTRAS (SANGUINEAS, BACTERIOLOGICAS, GINECOLOGICAS ETC.) O CUALQUIER TIPO DE MUETRAS, EL PROCESO DE SUS ESTUDIOS, HASTA LA ENTREGA DE SUS RESULTADOS.

EL RECIBIR AL PACIENTE DESDE EL INICIO ROTULAR SUS MUESTRAS CON EL NOMBRE COMPLETO, FECHA Y HORA SI ASI LO REQUIEREN ALGUNOS CASOS ESPECIALES.

EL TRASLADO, LA ORGANIZACIÓN Y DISTRIBUCIÓN DE LAS MUESTRAS A LAS DIFERENTES AREAS DEL LABORATORIO, O DIRECTAMENTE CON LAS PERSONAS ENCARGADAS DEL ÁREA, PARA SI INICIAR EL ÁNALISIS DE LAS MISMAS DE ACUERDO A LA ORGANIZACIÓN ESTABLECIDA DE ACUERDO A LAS FUNCIONES Y FINALIDAD DE CADA INTEGRANTE DEL LABORATORIO CON EL OBJETIVO DE OFRECER UN MEJOR SERVICIO Y GARANTIA DE LOS RESULTADOS AL PACIENTE.

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CONTROL DE CALIDAD

ETAPAS DEL CONTROL DE CALIDAD

Como se ha mencionado la realización de cualquier procesamiento, analítico puede estar amenazada por la comisión de un sin número de errores, algunos de los cuales pueden llegar a tener consecuencias realmente serias.

En todo proceso analítico podemos distinguir tres diferentes fases y etapas:

ETAPA PREANALITICA

ETAPA ANALITICA

ESTAPA POS – ANALITICA

Cada una de ellas tiene características diferentes, debiendo el control de calidad interno, considerar la existencia y manejo adecuado de loa aspectos de cada una, que se presentan a continuación, con el fin de lograr resultados de buena calidad

Existen diversas fuentes de variación en cada una de estas etapas las cuales se describen a continuación y deberán tomarse en cuenta para el control de calidad eficiente.

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SEGURIDAD E HIGIENE.

ELEMENTOS DE RIESGO

Nuestras manos, en algunos aspectos son como patas de las moscas, tocan la suciedad, las fuentes de infección y sin que tengamos noción clara de sus movimientos las llevamos a la boca a los ojos que son a su vez los portales de entrada de muchas infecciones. Por otro lado, las heridas, los pinchazos y abrasiones ocurren generalmente en las manos y que el resto del cuerpo este protegido por la ropa. La costumbre de morder lápices que se dejan en cualquier lugar y el llevarse un cigarrillo a la boca, el que anteriormente se apoyo sobre cualquier superficie debe también eliminarse.

La posibilidad de ingerir o beber sustancias toxicas en vasos mal lavados o contaminados por accidente debe tenerse en cuenta, de modo que lo más prudente para nuestra salud es considerar

que EL LABORATORIO es un lugar de trabajo no apto para el consumo de alimentos sólidos o líquidos.

Un paso importante en la protección de nuestra salud es aceptar sin malestar lo que denominaremos la regla de los siete NO, a la que debemos considerar como la regla de oro de la BIOSEGURIDAD.

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EN EL LABORATORIO

- NO gritar- NO correr- NO comer NI beber- NO tener alimentos en la área de proceso- NO fumar - NO maquillarse- NO usar zapato abierto

PRACTICAS DE HIGIENE

En el laboratorio se deben lavar las manos con jabón cuantas veces sean posibles y, si la tarea lo requiere, utilizar guantes. Hay una resistencia al uso de guantes basada en el argumento de que el trabajo resulta más difícil.

USO DE ROPA PROTECTORA

El uso de un guardapolvo impide daños mayores, por ejemplo salpicaduras con material infeccioso o sangre. Esta ropa debe ser higienizada periódicamente y permanecer dentro del área del laboratorio evitando el contacto con la ropa de la calle.

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CONSIDERAR QUE TODAS LAS MUESTRAS SON PELIGROSAS Y TRATARLAS COMO TAL

Este debe ser ineludible en todo ser humano sano mental y físicamente no debe ser impedido por consignas falsas en las que se confunde orden de represión. Las reglas de BIOSEGURIDAD no son represivas surgen como una forma de conservar la vida en plenitud.

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HEMATOLOGIA

BIOMETRIA HEMATICA

MACROHEMATOCRITO

FUNDAMENTO: La sangre debe centrifugarse durante 30 min. A 2000 – 2300 gravedades en un tuvo wintrobe su diámetro interno es de aprox. 3mm. Y miden 11.5c m de longitud. Están calibrados a intervalos de 1mm hasta 100 mm.

La lectura para la velocidad de VGC. Se hace en una escala ascendente al tubo la cifra obtenida en cm. Es multiplicada por 10 para dar el hematocrito como porcentaje o sea el volumen de células centrifugadas por 100mm de sangre

PROCEDIMIENTO

Se obtiene sangre venosa, se mezcla con E.D.T.A

1.- Se toma muestra se sangre con una pipeta Pasteur o una cánula y se llena el tubo wintrobe desde el fondo cuidando que no se formen burbujas de aire hasta llegar a la marca 10.

2.- Se centrifuga durante 30 min. A 2300 gravedades aprox. 3500 RPM. Con un radio interno de 15cm.

3.- Se lee la altura de la columna de eritrocitos a partir del comienzo de los glóbulos blancos haciendo referencia a la escala ascendente del lado derecho

4.- Cada raya equivale a 1%

VALORES DE REFERENCIA

MUJERES DE 42 +- 2.5%

HOMBRES DE 47 +- 2.5%

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DETERMINACION DE HEMOGLOBINA

FUNDAMENTO

La sangre se hemóliza por agregado un agente tenso activo con ferrocianuro de potasio que oxida al átomo de Fe++ a Fe+++para producir metahemoglobina. El KCN estabiliza la metahemoglobina como cianometahemoglobina. La coloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.

PROCEDIMIENTO

1.- coloca exactamente 5ml de sol. Diluyente de drabkin en un tubo de ensayo de 13 x 100

2.-se toma una pipeta de Salí muestras de sangre completa hasta la marca de 0.2ml

3.-con una boquilla se expulsa la sangre de la pipeta al tubo que contiene la sol. De drabkin

5.- se agita con la misma pipeta y luego se mezcla varias veces hasta dar una coloración homogénea

6.-se deja reposar durante 10 min. Y en seguida se hace la lectura en el espectro a 540nm.

7.-leer contra diluyente contra blanco reactivo y esperar la curva de calibración o con el factor de los cuales se obtiene un tipo de patrón

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CALCULOS. G/DL= ML. DE ST.X CONCENTRACION DE ST.(G/DL) X.251

ML TOTALES

VALORES DE REFERENCIA

HOMBRES 16 G/DL

MUJERES 14 G/DL

RECIEN NACIDOS 13 – 19 G/DL

MUJERES EMBARAZADAS 11 – 14 G/DL.

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RECUENTO ERITROCITARIO

FUNDAMENTO

Consiste en diluir la sangra con líquidos de gower en una cantidad exacta y luego examinar al microscopio en una pequeña newbauer contando el número de elementos que se encuentra en la cuadricula media y mediante una operación matemática para obtener la cifra total.

PROCEDIMIENTO

1.- se aspira sangre en la pipeta para hematíes. Hasta la marca de 0.5 2.- se limpia con gasa en el exterior de la pipeta 3.- se aspira en el líquido de dilución gower hasta la señal 101.4.-se agita durante 3 min. Para mezclar perfectamente.5.- se cargan las cámaras para hematocimetro se llena una cámara con cada pipeta. Con el cubreobjetos sobre las cámaras (encima de la plataforma reticulada, se deja que una gota de sangre diluida se introduzca debajo del cubreobjetos por atracción capilar). Deben descartarse las primeras 4 – 5 gotas antes de llenar la cámara.6.- se deja reposar de 3 – 5 min. Sobre la platina del microscopio con poco aumento se localiza el cuadro central de los nueve mayores y en el de 40. Se contaran los eritrocitos de las 4 esquinas y el cuadro central.

CALCULOS Se considera que el retículo central tiene 400 cuadritos se realiza la sig. Operación.

N X 200 X 10 X 400 =N X 10,000 80 N= No.de eritrocitos contados  

200= factor de dilución10=corrección de la alturaNX 10,000 = eritrocitos por MM3VALORES NORMALES DE 4, 000,000 – 5, 000,000. MM3RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.

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FUNDAMENTO.

Se hace una extensión de sangre sobre un portaobjetos y se tiñe con colorante de Wright o giemsa a medida que se va observando la morfología de cada leucocito este se clasifica hasta haber contado 100, 200, o 500 leucocitos cuanto más elevada es el número de células contadas es mas la precisión

PROCEDIMIENTO:

1.- se hace una extensión de sangre y se deja secar al aire libre2.- se coloca el frotis sobre un puente de tinción y se cubre con colorante de Wright. Por 3 min.3.- enjuagar el frotis con agua destilada y dejar secar.

FORMULA BLANCA VALORES NORMALES LINFOCITOS de 24 – 45%MONOCITOS de 1 – 4%EOSINOFILOS de 1 – 4 %BASOFILOS de 0 – 1 %SEGMENTADOS de 40 – 65 %BANDAS de 0 – 7 %

Eje: segmentados 2,3,4, linfocitos derecha.

PLAQUETAS

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FUNDAMENTO

CUENTA DE FROTIS

Consiste en identificar las plaquetas en un extendido de sangre periférica, lo cual permite una estimación fidedigna del número total de plaquetas. Cuando menos por cada 10 a 20 eritrocitos indican la presencia de 1 plaqueta.

CAMARA DE NEUBAWER

Consiste en cuantificar las plaquetas diluidas en oxalato de amonio al 1% por microscopia de contraste de fase.

PROCEDIMIENTO

1. Con una pipeta para glóbulos rojos aspirar dilución hasta la señal de 0.5

2. Aspirar sangre hasta la señal de 13. Nuevamente aspire liq. de dilución hasta la marca del 114. Mezclar en el agitador hemático de 2 – 3 min5. Desechar las dos primeras gotas y cargar la cámara de neubawer. Dejar

reposar durante 15 min. en una caja de petri sobre el papel filtro húmedo.

6. El recuentro se hace en el retículo central en la misma superficie para los glóbulos rojos.

CALCULOS…

El número de plaquetas contadas se multiplica por 1000 y se obtiene el número de plaquetas por mm3.

VALORES NORMALES.

De 150 – 450 mm3 de sangre total.

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RETICULOCITOS

FUNDAMENTO

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes. No nucleados que todavía contienen residuos de RNA. En su citoplasma. Al teñirlos con azul de metileno al RNA se precipita como filamentos y gránulos azulosos dentro del glóbulo rojo.

PROCEDIMIENTO

1. Con una pipeta Pasteur se depositan 3 gotas de sangre y 3 gotas de azul de metileno en un tubo y se mezclan perfectamente.

2. Dejar en reposo a temperatura ambiente de 5 a 15 min.3. Mezclar nuevamente y colorar una gota de mezcla sobre un

portaobjetos haciendo un extendido4. Contar 1000 eritrocitos con objetivo de 100X

CALCULOS…

% DE RETICULOCITOS = No. DE RETIS CONTADOS. X 100No. DE ERITROCITOS CONTADOS

VALORES DE REFERENCIA.

DE 0.5 – 1.5 %

r

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VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR

FUNDAMENTO

La VSG. Es la velocidad con la que los eritrocitos se sedimentan en el plasma, el valor, numérico en mm. Se obtiene midiendo la distancia entre el límite inferior del menisco de la superficie y el superior de sedimentos de los eritrocitos en una columna de sangre anticoagulante en reposo durante 60 min. En un tubo de winytrobe.

PROCEDIMIENTO

1. Con una pipeta Pasteur se llena el tubo wintrobe a la marca de 0 sin permitir que se formen burbujas de aire.

2. Se coloca el tuvo en posición estrictamente vertical sobre una superficie que no esté expuesta a la luz solar o vibraciones y corrientes.

3. Al cabo de 1 hora leer en forma descendente el numero de mm, que la columna de eritrocitos ha bajado

VALORES DE REFERENCIA

LIMITE SUPERIOR EN INDIVIDUOS SANOSHOMBRES 7MM/HRNIÑOS 12MM/HRESTE VALOR AUMENTA EN PERSONAS ANCIANAS PARA MAYORES DE 60 AÑOS EN HOMBRES DE 14 MM/HRMUJERES DE 20 MM/HR

DEFINICIONES

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La Biometría Hemática también denominada Hemograma, es uno de los estudios de rutina de mayor importancia, ya que la información que de aquí se deriva nos proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del paciente, consta de 2 bloques:

Formula Roja: Determina los parámetros relacionados con el eritrocito.

Formula Blanca: Determina los parámetros relacionados con los leucocitos.

Formula Roja: La determinación de la fórmula roja se compone de los siguientes parámetros:

A. Hematocrito (Ht): Es el porcentaje de la sangre que está compuesta por eritrocitos.

B. Hemoglobina (Hb): Es determinada la cantidad de esta proteína expresada en g /dl.

C. Conteo eritrocítico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro de sangre.

Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritrocítico son:

1. Cambios que inciden directamente en la circulación de eritrocitos:

Valor disminuido: Se denomina anemia, los tres parámetros disminuyen aunque este decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamaño eritrocítico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el cálculo e

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interpretación de los índices de la formula roja son de ayuda en estos casos.

Valor aumentado: Denominado policitemia, donde aumente el número de eritrocitos circulantes denominados policitemia absoluta, también puede darse un aumento transitorio en los eritrocitos circulantes denominada policitemia relativa (descritos posteriormente).

2. Cambios en el volumen plasmático:

Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratación.

Valor disminuido: Se presentan en sobre hidratación con fluidos administrados parenteralmente dando una lectura que simula anemia.

D. Índices eritrocíticos: Determinados mediante cálculos matemáticos.

1. Volumen Globular Medio (VGM): (Ht. x 10 / Eri), Es el tamaño eritrocítico expresado en femtolitros y se comporta de la siguiente forma:

Valor aumentado: Se presenta en anemia macrocítica en la que la interferencia en la síntesis del ADN causa inhibición de la división celular y la resultante es la aparición de eritrocitos de gran tamaño (como ocurre en los casos de deficiencia de vitamina B12 y ácido fólico). También aumenta transitoriamente en los casos de reticulocitosis (anemia regenerativa).

Valor disminuido: Se presenta en casos de deficiencia de hierro

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2. Hemoglobina Globular Media (HGM): (Hb. x 10 / Eri.), Se refiere a la cantidad de hemoglobina depositada en él eritrocitos expresada en picogramos.

Valor aumentado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro; la hemoglobina extracelular también está implícita, aunque el índice asume que toda la hemoglobina es intracelular por lo que se debe interpretar con reservas. Durante la reticulocitosis permanece normal o ligeramente elevado.

Valor disminuido: En los casos de deficiencia de hierro.

3. Concentración de Hemoglobina Globular Media (CHGM): (Hb x 100 / Ht) Es la cantidad de hemoglobina que está relacionada directamente con el eritrocito. Es el índice más preciso, ya que no requiere del conteo total de eritrocitos circulantes.

Valor aumentado: En los casos de hemolisis tanto in vivo como in vitro, así mismo puede incrementarse en los casos de esferocitosis marcada.

Valor disminuido: En los casos de reticulocitosis y deficiencias de hierro.

E. Morfología eritrocítica: Es determinada en el frotis sanguíneo.

1. Rouleaux: Es el agrupamiento de eritrocitos a manera de monedas amontonadas, es debido a una tendencia de sedimentación en forma paralela, trastorno que se relaciona con el incremento en la concentración de fibrinógeno y/o el cambio en las concentraciones de globulinas. En caninos y felinos puede presentarse en condiciones normales en un grado moderado y es muy marcada en casos de enfermedad inflamatoria y neoplasias. En equinos sanos es común desapareciendo en casos de anemia.

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2. Aglutinación eritrocítica: Cuando se forma un acumulo de eritrocitos, ocurre generalmente en los casos de anemias inmunomediadas, puede ser observada en las paredes del tubo colector como pequeños grumos.

3. Anisocitosis: Es la variación en el tamaño de los eritrocitos donde aparecen macrocitos y/o microcitos a lado de células de tamaño normales, se presenta como respuesta en anemias de tipo regenerativo.

Macrocitos: Son eritrocitos de gran tamaño que provocan incremento en el VGM, (reticulocitos) aparecen generalmente en anemias regenerativas.

Microcitos: Son pequeños eritrocitos con un VGM disminuido que son observados en casos de anemias dadas por deficiencia de hierro y piridoxina generalmente.

4. Esferocitos: Son considerados microcitos que cuentan con una membrana celular reducida, lo que incrementa la permeabilidad hacia el sodio, son casi exclusivos de caninos y se presentan generalmente en anemias de tipo autoinmune y en anemias hemolíticas isoinmunes así como después de una transfusión. Son removidas rápidamente de la circulación por los macrófagos esplénicos, debido a su falta de elasticidad y a que no están habilitadas para traspasar los poros capilares esplénicos.

5. Policromasia: Es una variación en la afinidad eritrocítica hacia el colorante, donde existe un tono azuloso en las células que contienen residuos de ARN, eritrocitos que generalmente son grandes y se consideran reticulocitos. La presencia de policromasia está asociada con el incremento de la actividad eritropoyetica como respuesta a una anemia, catalogada como regenerativa cuando está presente.

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6. Hipocromía: Se refiere a la presencia de palidez marcada en la región central del eritrocito dado por la disminución en la concentración de hemoglobina dentro de la célula, la causa más común en la que se presenta es la deficiencia de hierro.

7. Poiquilocitosis: Son células anormales en su forma comúnmente encontradas en anemias debidas a la pérdida crónica de sangre o a enfermedades caracterizadas por fragmentación eritrocítica, células que son retiradas prematuramente de la circulación agudizando el estado anémico. Los acantocitos, son un tipo de poiquilocitosis.

8. Leptocitos: Son células delgadas que cuentan con una membrana celular grande observadas en enfermedades crónicas debilitantes que producen anemia.

9. Estomatocitos: Son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa en la estomatocitosis hereditaria del Alaska alamud y en enfermedades hepáticas.

10. Células en diana: Son células con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de tipo regenerativo junto con policromasia, aunque cuando se presentan y no existe policromasia se pueden relacionar con enfermedad renal, hepática o esplénica.

11. Cuerpos de Howell-Jolly: Son remanentes nucleares observados frecuentemente como consecuencia de un estado anémico en procesos regenerativos, no obstante si son numerosos pueden indicar hipoesplenismo.

12. Cuerpos de Heinz: Son estructuras localizadas en la membrana eritrocítica producto de la desnaturalización de la hemoglobina causada por la acción oxidante de ciertas drogas o químicos, estos

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cuerpos desorganizan la membrana eritrocítica y se asocian con hemolisis intravascular.

13. Cuerpos eritrocíticos refráctiles: Se localizan en estados normales en aproximadamente el 10% de los eritrocitos del gato, se incrementan en la presencia de diversas enfermedades, en muchas ocasiones juegan un papel importante en el desarrollo de la anemia.

14. Eritrocitos nucleados (Ruborcitos y Metarrubrocitos): Se deben a la liberación de células eritroides inmaduras hacia la circulación sanguínea en los casos de anemia, aunque pueden ser observadas en casos de enfermedad de la médula ósea donde existe daño en el parénquima que afecta la barrera capilar, así como en casos de leucemia.

F. Determinación de Reticulocitos (Ret):

Los reticulocitos son células eritroides inmaduras que en su citoplasma cuentan con remanentes nucleares de ARN, en el canino, felino y suino, representan aproximadamente el 1% en la circulación sanguínea en condiciones normales, presentan un incremento en los casos de anemias de tipo regenerativo. En algunos laboratorios el conteo de reticulocitos se hace por medio del uso de tinciones como Giemsa en un frotis sanguíneo ordinario, aunque la determinación más exacta se realiza por medio de tinciones supravitales específicas como la de azul de cresil o la de nuevo azul de metileno, su valoración se realiza en base a los siguientes parámetros:

1. Porcentaje relativo de reticulocitos (PRR): Se obtiene al realizar varios conteos de 100 células eritroides, obteniendo el porcentaje correspondiente a aquéllas que son compatibles con reticulocitos,

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en la mayoría de las ocasiones expresa un valor que no es real, dando una falsa impresión diagnóstica debido a lo siguiente:

En la sangre de animales anémicos existe menor número de eritrocitos maduros circulantes que se mezclan con reticulocitos recién liberados de la médula ósea y una relativa reticulocitosis es observada.

Dentro de los mismos reticulocitos existen varios estadios de maduración y en respuesta a un estado anémico los reticulocitos más inmaduros son liberados, células que persisten como reticulocitos por periodos más prolongados en la sangre antes de convertirse en eritrocitos maduros.

Para lograr una corrección del porcentaje relativo de reticulocitos cuando se presentan los problemas descritos anteriormente se determina lo siguiente:

2. Conteo absoluto de reticulocitos (CAR): (PRR x Eri). Este parámetro corrige la falsa impresión de reticulocitosis expresada en el inciso anterior (1,a) debido a que se determina la cantidad total de reticulocitos circulantes.

3. Porcentaje corregido de reticulocitos (PCR): (Ht obtenido / Ht normal) x PRR] Con la ayuda de este cálculo se obtiene un porcentaje más adecuado a la realidad en los casos donde no se conoce el conteo de eritrocitos circulantes, ya que se ajusta el porcentaje de reticulocitos observados en la muestra problema con respecto a un parámetro normal (considerado de 45%), sirve para determinar el IPR.

4. Indicé de producción de reticulocitos (IPR): (PCR / Tiempo de maduración) Este índice de corrección ha sido adaptado en el canino específicamente para corregir el problema descrito en el

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inciso (1, b), ya que se utilizan diferentes tiempos de maduración del reticulocito basándose en el hematocrito observado, algunos de estos tiempos son:

Hematocrito

Tiempo de maduració

n45% 1 día35% 1.5 días25% 2 días15% 2.5 días

5. Interpretación de los parámetros reticulocitarios:

En el gato solamente son utilizados el PAR y el PCR debido a que la respuesta reticulocitaria de esta especie es menor a la del canino.

Un incremento absoluto de reticulocitos indica una respuesta de la médula ósea, es común en anemias hemorrágicas o hemolíticas, aunque la reticulocitosis es más marcada en la anemia de tipo hemolítico debido a que en esta no hay pérdida de hierro y es fácilmente reciclable durante el proceso eritropoyetico.

La reticulocitosis no se hace evidente hasta después de 72 horas de que ocurre la anemia y puede alcanzar su máximo hasta los 7 días posteriores a su presentación.

Un índice de producción de reticulocitos mayor de 1 sugiere una anemia de tipo regenerativo.

Índices entre 1 y 3 sugieren pérdida sanguínea.

Índices mayores de 3 son indicativo de un proceso hemolítico.

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G. Determinación de plaquetas:

Son estructuras producidas por los megacariocitos en la médula ósea mediante el proceso de fragmentación citoplasmática, juegan un papel muy importante en la homeostasis, su variación puede ser:

1. Trombocitopenia: Disminución en el número de plaquetas circulantes, es el trastorno más común en los animales, generalmente acompañada con severos problemas de coagulación, se puede deber a:

Destrucción plaquetaria que excede la producción ocurrida en trombocitopenias inmunomediadas (autoinmunes, isoinmunes o inducidas por drogas), Lupus Eritematoso, hiperestrogenismo, Afecciones por Ehrlichia, enfermedad causada por Riketsia, o secuestro esplénico, así como neoplasias como hemangiosarcoma.

Fallas en la producción plaquetaria que ocurre en anemias aplásticas, enfermedad de la médula ósea y quimioterapia citotóxica. Además la trombocitopenia puede dar un cuadro de coagulación intravascular diseminada, un síndrome que casi siempre acompaña a una enfermedad sistémica.

2. Trombocitosis: Incremento del número plaquetario.

En el felino puede estar acompañando un proceso viral asociado a leucocitos con síndromes mieloproliferativos.

Ocurre en procesos parasitarios donde intervienen parásitos succionadores de sangre y en casos de neoplasia.

Usualmente acompaña a anemias por deficiencias de hierro.

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Siempre que existan trastornos en la cuenta plaquetaria se debe considerar la determinación de parámetros que intervienen en la coagulación sanguínea.

Enfermedades hemorrágicas en los animales están asociadas con la disminución en el número plaquetario, así mismo las alteraciones en la morfología del trombocito se observa en anemias regenerativas, desordenes mieloproliferativos en el felino y en otros trastornos en la médula ósea.

H. Velocidad de Sedimentación globular media (Wintrobe): Es la precipitación de los eritrocitos en un lapso de tiempo estandarizado (1 hora), se relaciona directamente con la tendencia eritrocítica hacia la formación de rouleau así como a la concentración plasmática de globulinas y fibrinógeno.

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FUNDAMENTOS

1. BIOMETRIA HEMATICA

La hemoglobina reacciona con el ferrocianuro y forma metahemoglobina la cual con el ferrocianuro de potasio forma la cianometahemoglobina, las soluciones de este compuesto relativamente estables conservadas en el refrigerador, duran hasta tres años

El hematocrito se basa en la separación de los glóbulos rojos y el plasma, cuando se centrifuga la sangre a 2,200 rpm. Durante 30 min. El paquete de eritrocitos en 100 ml. Es el resultado que se informa

La cuenta de eritrocitos y de leucocitos; las muestras se diluyen con líquidos adecuados y se cuentan en la celda de una cámara hematimetro cuya capacidad se conoce.

Cuenta diferencial:Una extensión delgada de sangre y un portaobjetos se tiñe después se observa en el microscopio y se cuentan las distintas variedades que hay en 100 leucocitos.

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TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

FUNDAMENTO

Con el plasma citratado u oxalatado se le añade tramboplastina de origen extrínseco y se recalcifica, el tiempo que demora en producirse el coagulo se puede tomar como índice de la concentración de los factores I, II, V, VII ,X.

PROCEDIMIENTO

1. Mezcla 9 partes de sangre con una parte de citrato de sodio u oxalato de sodio 0.1 m.

2. Centrifúguese durante 5 min. A 2000 RPM.3. Se deposita 0.2ml de tromboplastina activada en el fondo de

un tubo de ensaye y se coloca en agua caliente hasta alcanzar los 37°.

4. Se agrega 0.1ml de plasma y se agita dentro del agua al tiempo que se activa el cronometro.

5. Pasados los seis segundos se saca el agua y se continua agitando a contra luz hasta que aparece el coagulo al momento que se detiene el cronometro

VALORES NORMALES

13 segundos.

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TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL (TPT)

FUNDAMENTO

El TPT mide el tiempo en segundos que tarda un plasma citratado en coagular después de agregarle la fracción lipídica de tromboplastina, mas calcio (Ca ++) más un activador en condiciones optimas de temperatura, pH y fuerza iónica.

TECNICA

1. Mezcle 0.5 ml de anticoagulante con 4.5ml de sangre venosa recién colectada (9 partes de sangre por una parte de anticoagulante) mezcle por inversión.

2. Centrifugue a 2000 RPM. Durante 5 min. Separar el plasma sobrenadante, consérvalo en refrigeración hasta su uso (no más de 4 hrs después).

3. Colocar 0.1ml de TPT en un tubo y ponerlo en baño maría a 37°. Incubar por 2 min.

4. Agregar 0.1 ml de plasma problema o control, mezcle bien e incubar por 2 min. (el tiempo mínimo de activación es de 2 min. Tiempos mayores de 5 min. pueden causar perdida de los factores V, VII.

5. Después de 2 min. agregar 0.1ml de cloruro de calcio 0.02m. previamente llevados a 37° simultáneamente accionar el cronometro.

6. Colocar de nuevo el tubo en el baño maría por 25 segundos, saque el tubo y observe los primeros hilos de fibrina, parar el cronometro.

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VALORES DE REFERENCIA

El intervalo de valores observados en individuos normales oscila entre 30 y 43 segundos

Se considera fuera de lo normal valores que difieren mas de 2 segundos de un plasma de control

COOMBS DIRECTO

FUNDAMENTO

La adición de suero anti globulinico (anti IgG) o anti complemento o eritrocitos lavados en sol. Salina, produce aglutinación si existen inmunoglobulinas o complemento.Esta prueba se realiza a fin de averiguar si existen anticuerpos fijados sobre la superficie de una muestra problema. Deben realizarse lavados con sol. Salina por lo menos 3 veces para eliminar otras proteínas que se encuentren en el medio pero que no estén fijadas al glóbulo rojo. El suero de coombs o antiglobulina humana detecta inmunoglobulinas unidas a la superficie de los glóbulos rojos.

PROCEDIMIENTOS

1. Se coloca la sol. Salina fresca al 0.9% en el tubo y se le introduce un aplicador de madera con glóbulos de la muestra problema.

2. Se mezcla perfectamente y se retira el aplicador se lavan los glóbulos 3 veces con sol. Salina centrifugando cada vez 1 min. A 1000 RPM. En el último lavado se elimina todo el sobrenadante y se le agrega una gota de suero de coombs.

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3. Se mezcla bien y se centrifuga a 1000 RPM. Durante 1 min.4. Se observa si hay o no aglutinación, si el resultado es negativo

se lee al microscopio. Si la muestra permanece negativa después de esto se le agrega una gota de células control de coombs se centrifuga a 1000 RPM. Y se lee. Este paso es un control cuyo resultado debe ser positivo ya que verifica que la prueba se realizo correctamente y que el suero de coombs funciona adecuadamente.

VALORES NORMALES

Es normal que la prueba sea negativa y en ella no aparezcan anticuerpos ni complemento en los eritrocitos. La aglutinación de los eritrocitos del paciente indica que esta recubiertos de anticuerpos.

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COOMBS INDIRECTO

FUNDAMENTO

La adición se suero anti globulinico (anti IgG) o complemento o eritrocitos lavados en sol. Salina, produce aglutinación si existen inmunoglobulinas o complemento.Esta prueba se realiza a fin de averiguar si existen anticuerpos fijados sobre la superficie de una muestra problema.Deben realizarse lavados con sol. Salina por lo menos 3 veces para eliminar otras proteínas que se encuentren en el medio pero que no estén fijadas al glóbulo rojo. El suero del coombs o antiglobulina humana detecta inmunoglobulinas unidas a la superficie de los glóbulos rojos.

PROCEDIMIENTO

1. La muestra de sangre fresca se centrifuga durante 1 min. A 5000 RPM. Se separa el suero sobrenadante y se colocan 2 gotas de este suero en un tubo más de una gota de glóbulos o + al 2%.

2. Se mezcla bien y se incuba 15 min. A 4°, se centrifuga durante 1 min a 1000 RPM.

3. Sin leerlos se colocan nuevamente por 15 min. En refrigeración con el propósito de que los tubos estén a esa temperatura cuando se lean.

4. A los 15 min. Se sacan y se lee5. Los mismos tubos se incuban a temperatura ambiente por 15

min. Y se centrifugan 20 segundos a 100 a RPM.

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FACE ALBUMINOSA

1. Se agregan 2 gotas de albumina bovina al 30% se mezcla y se incuba durante 20 min. A 37°

2. Se centrifuga 1 min a 1000 RPM.3. Se lava la mezcla del tubo 3 veces con solución salina.4. Se elimina el sobrenadante del 3er. Lavado y se agregan 2

gotas de suero de coombs.5. Se mezcla bien y se centrifuga 1 min. A 1000 RPM.6. Si la prueba es negativa se lee finalmente al microscopio7. Posteriormente se le agrega una gota de control de coombs,

se mezcla y se centrifuga. A 1000 RPM.

Es normal que la prueba sea negativa y en ella no aparezcan anticuerpos ni complemento en los eritrocitos. La aglutinación de los eritrocitos del paciente indica que está recubierto de anticuerpos.

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TIEMPO DE SANGRADO

FUNDAMENTO

Al hacerse una pequeña herida en la piel se produce una hemorragia que se detiene en un tiempo determinado. Los resultados que se obtienen dependen de la integridad vascular y de la función plaquetaria en respuesta a la lesión.

El tiempo de sangrado evalúa la vasoconstrucción, el tejido perivascular, el endotelio de adhesión agregación plaquetaria, la liberación de nucleótidos, los fosfolipidos plaquetarios y la producción de prostaglandinas.

PROCEDIEMIENTO

1. Se selecciona una área de la piel suave (dedo medio o lóbulo de la oreja)

2. Se limpia el área de punción en forma correcta.3. Se introduce la lanceta con un golpe seco con una profundad

de 1 mm. Y se desecha la primera gota.Inmediatamente se pone el cronometro en marcha el cronometro.

4. Se limpia la sangre con papel filtro cada 15 seg evitando el contacto con la herida.

5. El tiempo de sangría termina cuando seca el flujo inmediatamente se detiene el cronometro.

VALORES NORMALES DE 1 a 3 min.

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TIEMPO DE COAGULACION

FUNDAMENTO

El tiempo de coagulación es el tiempo necesario para que una determinada cantidad de sangre forme un coagulo in vitro bajo condiciones estándar. La finalidad de la prueba es evaluar el sistema intrínseco de coagulación sanguínea y vigilar la eficacia de administración heparina.

PROCEDIMIENTO

1. Una vez canalizada la vena en el momento en el que fluya la sangre en el tubo se pone en marcha el cronometro.

2. Extraer 2ml. De sangre3. Colocar la sangre extraída por punción venosa en dos tubos

de ensaye (1 ml en cada tubo).4. Se inspecciona un tubo cada 15 segundos, con agitación suave

y el otro cada 30 segundos con el fin de determinar el tiempo de coagulación.

5. Se registra el tiempo en que el tubo puede ser invertido en un ángulo de 90° sin que exista flujo de sangre. Sacando el promedio de los tubos se obtendrá el tiempo de coagulación.

VALORES DE REFERENCIA

DE 5 a 10 minuto.

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ANTICUERPOS ANTI – HIV.VIHFUNDAMENTO:La prueba del VIH muestra si el virus que causa el sida está presente en la sangre. Una vez que el virus es introducido al cuerpo, el sistema inmunitario comienza a producir anticuerpos. En este caso, los anticuerpos no pueden combatir la infección, pero su presencia es utilizada para detectar si una persona tiene el virus en su cuerpo. En otras palabras, la mayoría de las pruebas para el VIH buscan los anticuerpos que combaten el VIH en lugar de buscar el VIH por sí solo.

La prueba del VIH más común utiliza la sangre para detectar la infección

PROCEDIMIENTO:1. Se coloca una tira de HIV con la parte sensible hacia arriba y

se deja en una superficie plana2. Se deposita una gota de suero sobre el área sensible y se deja

subir por capilaridad hacia las aéreas marcadas con paciente y control.

Interpretación presencia de dos rayas paciente control sobre la tira = RESULTADO POSITIVO

Ausencia de dos rayas solo control: RESULTADO NEGATIVO

VALORES NORMALES

NEGATIVO

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FACTOR REUMATOIDE

FUNDAMENTO

El RF – LATEX es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa de factores reumáticos (FR) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con gamma globulina humana son aglutinadas por factores reumáticos presentes en la muestra del paciente.

PROCEDIMIENTO

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.

2. Depositar 50µl de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta o placa.

3. Homogenizar suavemente con un aplicador de madera procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear aplicadores distintos para cada muestra.

4. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 RPM. Y agitar durante 2 min. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.

VALORES DE REFERENCIA

Hasta 8UI/ML. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

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VDRL

FUNDAMENTO

La técnica de inmunoensayo del VDRL se emplea para la detención de los anticuerpos en presencia de la bacteria treponema palidium. Esta reacción se presenta positiva mediante la aglutinación de macropartículas de carbón.

PROCEDIMIENTO

- En una placa se adiciona 1 gota de reactivo- Y 50µl de muestra, se agita durante 8 min. A 100 RPM.- Observar al microscopio en objetivo seco fuerte.

REACCION POSITIVA... aglutinación de macropartículas de carbón.REACCION NEGATIVO... distribución homogénea de las partículas.

VALORES NORMALES

NEGATIVO

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PRUEBA DE EMBARAZO

ORINA O SUERO

PRINCIPIO.

La prueba inmunológica cualitativa para la detección rápida de las hormonas gonadotrofina corionica HGC. Además de las presuntivas evidencias de embarazo proporcionan las bases para las pruebas endocrinas de embarazo.

PROCEDIMIENTO

- Se introduce una tira reactiva desechable en la muestra de suero u orina con las flechas apuntando hacia la muestra sin rebasar la línea marcada con Max.

- Después de un máximo de 15 segundos se retira la tira y se coloca sobre una superficie limpia y plana y no absorbente.

- Espere a que las bandas de color aparezcan en la zona de reacción ubicada entre la zona MAZX Y la zona de color azul

RESULTADO POSITIVO: se observa en tan solo 40 segundos. Indicando 2 líneas rosas o rojas o purpuras.

RESULTADO NEGATIVO: únicamente aparece una banda de color rosa en la zona de control.

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REACCIONES FEBRILES

FUNDAMENTO

La prueba de aglutinación de reacciones febriles se utiliza para descartar la presencia de infecciones gastrointestinales por brucella abortus y proteus tífico A.B.H.O. las reacciones positivas de cada uno de estos indicadores febriles se manifiesta mediante agregados de macropartículas suspendidas sobre el suero.

PROCEDIMIENTO

- En una placa marcada con 6 círculos individuales se deposita ordenadamente una gota de cada reactivo indicador febril (H, O, A, B, PR, BR).

- Agrega 20 µl de suero (dilución 1:80) a cada círculo preparado con su respectivo reactivo febril.

- Homogenizar con un aplicador desechable hasta extender en todo el círculo.

- Agitar durante 4 minutos a 100 RPM.

INTERPRETACION

Las reacciones positivas se manifiestan mediante la aglutinación de partículas visibles a 10 aumentos en base a las diluciones

Las reacciones negativas no se presentan aglutinación, si no una distribución homogénea.

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PROTEINA C. REACTIVA

FUNDAMENTO

La PCR. Látex técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero. Las partículas de látex cubiertas con anticuerpos anti – PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.

PROCEDIMIENTO

- Atemperar reactivos y muestras- Depositar 50µl de muestra y 1 gota de cada control

POSITIVO – NEGATIVO sobre círculos distintos en un porta.- Homogenizar suavemente el reactivo de PCR. Y depositar 1

gota 50µl a cada una de las gotas anteriores- Mezclar las gotas con un aplicador procurando extender

muy bien la mezcla a toda la superficie del interior del círculo.

- Agitar rotatoriamente a 80 – 100 RPP. Durante 2 min.

REACCION POSITIVA… aglutinación de macropartículas de carbón.REACCION NEGATIVA… distribución homogénea de las partículas.

VALORES NORMALES

NEGATIVO

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ANTIESTREPTOLISINAS

FUNDAMENTO

La estreptolisina ha sido preparada y estandarizada para la determinación del título de AEL. En el suero de personas con infecciones por estreptococos del grupo A. esta se presenta en forma oxidada que es estable pero no es activa.

PREPARACION… REACTIVO

Se reconstituye con agua destilada el volumen indicado en la etiqueta del frasco, para cada 5 ml de reactivo se adiciona el hidrosulfito de sodio contenido en uno de los tubos capilares que se adjuntan. Se agita por inversión hasta homogenizar. Una vez activado debe ser empleado de inmediato ya que al reoxidarse se inactiva.

PREPARACION DE LA MUESTRA

Las diluciones del suero problema y la suspensión de glóbulos rojos deben ser preparadas con sol. Amortiguadora de PH 6.5 – 6.7. la solución amortiguadora se prepara disolviendo 7.4 de cloruro de calcio, 3.7 gr de KH2PO4 Y 1.8gr de NA 2HPPO4 en 1 litro de agua ajustándose el PH de 6.5 a 6.7 con solución de hidróxido de sodio 0.1 N.

La suspensión de glóbulos rojos, una cantidad apropiada de sangre con anticoagulante se centrifuga a 2000 RPP. Durante 5 min. Se decanta el sobrenadante y el paquete de glóbulos se lava 3 veces agregando sol. Salina al 0.85% los glóbulos rojos se suspenden en solución amortiguadora a una concentración final de 5%.

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DILUCIONES DEL SUERO

Se hace usando solución amortiguadora como diluyente.

Ejem.1:100 1 ml de la solución 1: 10 + 9ml de sol. Amortiguadora

INTERPRETACION

El titulo de AEL. Se expresa en unidades todd. Estas unidades son la reciproca de las diluciones mas lata del suero que neutraliza completamente la estreptolisina O. así un suero que no presenta hemolisis de los tubos 1 – 4, huellas de hemolisis en el tubo 5. Y hemolisis completa en todos los demás es reportado como 125 UTDDO.

VALORES NORMALES

NEGATIVO.

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QUIMICA CLINICA

GLUCOSA EN AYUNAS

FUNDAMENTO

La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrogeno formado reacciona, catalizando por peroxidasa, con fenol y 4-aminofenazona para formar un indicar de quinoneimina rojo – violeta.

MUESTRA: sangre, suero, plasma heparinizado con EDTA plasma.La glucosa es estable durante 24 horas entre + 2 y +8 °C si el suero o plasma se separa en los 30 min. Que siguen a su toma de muestra.

PROCEDIMIENTO

Pipetear en tubos de ensayo: MACRO SEMI - MACRO PATRON O BLANCO PATRON BLANCO MUESTRA O MUESTRA

PATRON OMUESTRA

20µl ------- 10 µl ----

REACTIVO(GLUCOSA)

2000µl 2000 µl 1000 µl 1000 µl

Mezclar, incubar durante 10 min. A 37°C o 25 min. 15 – 25°C y medir las absorbancias del patrón (a patrón) y de la muestra (a muestra) frente al reactivo blanco antes de 60 min.

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Valores normales.

Suero, plasma (en ayuno) 70 – 110 mg/dl.

UREA

FUNDAMENTO

La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para producir amoniaco y bióxido de carbono. El amoniaco producido en la primera reacción se combina con alfa-oxoglutarato y NADH en presencia del glutamato, deshidrogenasa para producir glutamato y NAD.+

MUESTRA: sangre, suero, plasma heparinizado, EDTA. Plasma u orina.( diluir 1 + 20 con agua destilada y multiplicar el resultado por 21).

PROCEDIMIENTO...

MUESTRA --- ---- 10 µlREACTIVO 1000 µl 1000 µl 1000 µlPATRON --- 10 µl ----AGUADESTILADA

10 µl ---- ----

Valores normales:

Suero ------ 10 - 50mg/dlOrina ------25 – 35 mg/dl

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CREATININA

FUNDAMENTO

El ensayo está basado en la reacción de la creatitina con el picrato alcalino formando un complejo rojizo.La intensidad del color es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra.La creatinina es el resultado de la degradación de la misma, componente de los músculos que puede ser trasformada en ATP(Fuente de energía para las células).Es estable 7 días a 2 – 8 °C

MUESTRA: suero, o plasma heparinizado Orina diluida en proporción 1:50 con agua destilada Multiplicar el resultado por 50.

RT.(ML) 1.0ML 1.0ML 1.0MLPATRON µl --- 100 ---MUESTRA µl ---- --- 100

Mezclar y poner en marcha el cronometro.Leer la absorbancia (a1) al cabo de 30 seg. Y al cabo de 90 seg. (a2) de la adición de la muestra.

CALCULOS:a) Muestra X 2(conc. Del patrón)=mg/dl de creat. en la muestra.a) patrón

FACTOR DE CONVERSION: mg/dl

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Valores normales

Suero o plasma

HOMBRES: 0.6 – 1.0 mg/dlMUJERES: 0.5 – 0.9 mg/dl

ACIDO URICO

FUNDAMENTO

El acido úrico se convierte en alatonina y peróxido de hidrogeno, catalizado por la uricasa. El peróxido de hidrogeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida al acido 3-5 dicloro 2 hidroxibensenosulfonico y la 4 – aminofenasona para Dar un complejo de quinoimeimina rojo violeta.

MUESTRA: suero, plasma heparinizado, plasma EDTA u orina (Dilución 1+10 con agua destilada).

PROCEDIMIENTO

REACTIVO 1.0ML 1.0ML 1.0MLPATRON µl --- 20 ---MUESTRA µl -- --- 20

Mezclar incubar durante 15 min. A 20 – 25 °C. Durante exactamente 5 min. A 37°C. Medir la absorbancia de la muestra a

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muestra de patrón a patrón frente al reactivo blanco durante 15 min. Siguientes.

Valores normales.Suero o plasma

HOMBRES: 3.4 – 7.0 mg/dlMUJERES: 2.4 – 5.7 mg/dl

COLESTEROL

FUNDAMENTOEl colesterol se determina después de la hidrólisis enzimática y oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrogeno Y4-amino – antipirina en presencia d fenol y peroxidasa.

MUESTRA: suero plasma heparinizado o EDTA plasma.

PROCEDIMIENTOAGUA DEST. 10 µlPATRON ---- 10 µl ---MUESTRA ---- ---- 10 µl

REACTIVO 1000 µl 1000 µl 1000 µl

Mezclar incubar durante 10 min. A 20 25°C o 5 min. A 37°C.Medir la absorbancia de la muestra a muestra frente al blanco antes de 60 min.

VALORES NORMALES

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VALOR INTERPRETACIONMenos de 200 mg/dl colesterol en sangre deseado

200 – 239 mg/dl colesterol en sangre limite – alto

Mayor de 240 mg/dl colesterol en sangre alto.

TRIGLICERIDOS

FUNDAMENTO Los triglicéridos se determinan después de la hidrólisis enzimática con lipasa. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrogeno y 4 amino-fenazono y 4-clorofenol bajo la influencia catalica de peroxidasa.

PROCEDIMIENTO: REACTIVO BLANCO PATRON MUESTRA

PATRON ------ 10 µl ----MUESTRA ----- ---- 10 µl

REACTIVO(TRIGLICERIDOS)

1000 µl 1000 µl 1000 µl

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Mezclar incubar durante 10 min. A 20 – 25°C o 5 min. A 37°C. Medir la absorbencia de la muestra a muestra y el patrón a patrón frente al reactivo blanco al cabo de 60 min.

Valores normalesSe recomiendan los siguientes valores para la determinación del factor de riesgo hipertrigliceridemia.

SOSPECHOSO A PARTIR DE: 150 mg/dlAUMENTADO A PARTIR DE 200mg/dl

TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA (TGP)

METODO

Este es un método estándar optimizado según las concentraciones recomendadas por la IFCC.

a – OXOGLUTARATO + L-ALANINA ------ L.GLUTAMATO + PIRUVATO

PIRUVATO + NADH + H ----- L. LACTATO + NAD

PROCEDIMIENTO Pipetear 50 µl de suero con 500 µl de reactivo.Leer inmediatamente al espectrofotómetro

Valores normalesHOMBRES: hasta 40 U/LMUJERES: hasta 31 U/L

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TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA (TGO)

METODO

Este método estándar optimizado según las concentraciones recomendadas por la IFCC.

b – OXOGLUTARATO + L-ASPARTATO ----- L.GLUTAMATO +OXALOACETATO + NADH + H ---- L- MALATO + NAD

PROCEDIMIENTO

Pipetear 50 µl se suero con 500 µl de reactivo

Leer inmediatamente al espectrofotómetro.

Valores normales

HOMBRES: hasta 37 U/LMUJERES: hasta 31 U/L.

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FOSFATASA ALCALINA (ALP)

METODO. COLORIMETRICO

Método estándar optimizado según las recomendaciones de la deutsche gesellchaft.

PRINCIPIO

P – NITOFENILFOSFATO + H2O ---- FOSFATO + P-NITROFENOL

PROCEDIMIENTO

Pipetear 10 µl se suero problema adicionándolos a 500 µl de reactivo preparado del ALP. Y leer inmediatamente en espectrofotómetro.

Valores normales

HOMBRE Y MUJER – DE 98 – 279 U/L.

Método automatizado cobas c111

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FOSFATASA ACIDA

METODO COLORIMETRICO

1 – NAFTIL – FOSFATO + H2O ---- FOSFATO + 1-NAFTOL1-NAFTOL-+ SALDE4-CLORO-2METILFENILDIAZONICO --- COLORAZO-TR-SAL.

PROCEDIMIENTO

Pipetear 50 µl de suero problema adicionándolos a 500 µl de reactivo preparado de fosfatasa acida. Y leer inmediatamente en espectrofotómetro.

Valores normales

HOMBRES: hasta 4.7 U/L MUJERES: hasta 3.7 U/L

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PROTEINAS TOTALES

FUNDAMENTO…

En medio alcalino los iones cúpricos interaccionan con los enlaces peptidico de las proteínas formando un complejo coloreado.

PROCEDIMIENTO BLANCO (µl) PATRON (µl (µl)) MUESTRA.(µl)AGUA DEST. 20 ---- ----PATRON ---- 20 ----SUERO ----- --- 20REACTIVO 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar e incubar durante 30 min.Entre 20 y 25 °C y leer.

Valores normales

ADULTOS 6.6 – 8.7 g/dlNIÑOS HASTA 6 AÑOS 5.6 – 8.5 g/dlNEAONATOS 5.3 – 8.9 g/dl.

ALBUMINA SERICA

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FUNDAMENTO.

En medio alcalino los iones cúpricos interactúan con los enlaces peptidico de las proteínas formando un complejo coloreado.

PROCEDIMIENTO

BLANCO PATRON MUESTRAAGUA DEST. 10 ---- ---PATRON ---- 10 ----SUERO ------ --- 10

REACTIVO 2 ml 2 ml 2 ml Mezclar e incubar durante 2 minEntre 20 y 25°C y leer

Valores normales

ADULTOS 3.4 - 5.0 g/dl

AMILASA

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FUNDAMENTO.La amilasa es un enzima que tiene la función de digerir el glicógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares y en el páncreas. Cuando uno de estas glándulas se inflama derrama la amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el análisis de la amilasa sérica.

METODO COLORIMETRICO

El método utiliza como sustrato un p-nitrofenil-maltoheptaosido bloqueado por benzilidina 2 enzimas indicadoras son empleadas para escindir transmitir los productos de la reacción de la amilasa (glucoamilasa). Y la alfaglucocidasa para liberar el p-nitrofenol.

La glucosa terminal del sustrato se bloquea químicamente para prevenir la escisión por las proteínas indicadoras.

PROCEDIMIENTO

Pipetear 20 µl de muestra y mezclar con 1 ml de reactivo leer inmediatamente.

Valores normales

HASTA 95 U/L.

FOSFORO

FUNDAMENTO

55

El fósforo se encuentra en el organismo formando parte de compuestos orgánicos (proteínas, lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos, etc.) o como fosfatos inorgánicos cumpliendo funciones diversas, tanto en el transporte de energía como en la estructura de los tejidos y el mantenimiento del pH de los líquidos corporales

METODO

Fosforo inorgánico reacciona con molibdato amoniaco en presencia de acido sulfuronico para formar un complejo fosfomoalibdato.

PROCEDIMIENTO

BLANCO (µl) PATRON (µl) MUESTRA (µl)AGUA DEST. 10 µl ----- ----

PATRON ---- 10 -----

SUERO ---- ---- 10

REACTIVO 1 ml 1 ml 1 mlMezclar e incubar durante 10 min. 20 – 25 °C

Valores normales2.68 – 4.5 mg/dl

CALCIO

FUNDAMENTO

56

El calcio es un ion muy abundante en el organismo, donde se combinan con el fosforó para formar las sales que constituyen el componente principal de los huesos y los dientes.

METODO

Los iones de calcio forman un complejo violeta con la O- CRESOLFTALEINA COMPLEXONA en medio alcalino.

PROCEDIMIENTO

BLANCO (µl) PATRON (µl) MUESTRA (µl)AGUA DEST. 25 ----- -----PATRON ---- 25 -----

SUERO ------ ---- 25REACTIVO 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar e incubar durante 5 – 50 min de 20 – 25 °C y leer.

Valores normales

DE 8.10 – 10.4 mg/dl

MAGNESIOFUNDAMENTO

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Los iones magnesio reaccionan en medio alcalinos con el colorante metalocromocalmagita, para formar un cromofero. El calcio se excluye de la reacción al formar un complejo con EGTA líquido cerebroespinal.

PROCEDIMIENTO

BLANCO (µl) PATRON (µl) MUESTRA (µl)AGUA DEST. 10 ---- -----PATRON ---- 10 ------SUERO ----- ----- 10REACTIVO 1 ml 1ml 1 ml

Mezclar e incubar durante 5 – 30 min de 20 – 25 ° C y leer

Valores normales

DE 1.7 – 2.7 mg/dl

BIBLIOGRAFIAS

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