Investigacin Aplicada, S.A. de C.V. Laboratorio de Biologa
MANUAL DE TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS.
Investigacin Aplicada S.A. de C.V. 7 Norte 416, Col. Centro, Tehuacn, Pue. CP 75700 Tel. (238) 38-038-03, Fax. (238) 38-038-04 [email protected] www.iasa.com.mx
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I.- SELECCION DE MUESTRAS A) Animales vivos: Debern ser seleccionados los que sean representativos del problema observado. En el caso de aves se recomienda enviar un mnimo de 5 aves adultas y 10 aves jvenes por cada clave o parvada. En el caso de cerdos u otras especies puede enviarse 1 2 ejemplares. Los animales enviados para anlisis bacteriolgicos no debern haber recibido tratamientos con antibiticos, en caso contrario se deber notificar al laboratorio. Los animales de desecho son en general malos ejemplares para fines diagnsticos casi siempre enmascaran y confunden el problema real. El envo de animales vivos al laboratorio est justificado en los siguientes casos: a) Para certificacin de parvadas en las campaas zoosanitarias de la SAGARPA, en el caso de requerirse muestras de rganos. b) Cuando el laboratorio est cercano y no sea factible la toma de muestras en la explotacin. c) Cuando no se tenga una idea clara de la etiologa y se requiera un estudio completo. d) Cuando el aislamiento del agente etiolgico sea delicado y laborioso, por ejemplo: Pneumovirus, Haemophilus, etc. En los casos de enfermedades altamente contagiosas y de difusin rpida (ejem. Influenza aviar) se debern enviar rganos para evitar la movilizacin de los animales, por el riesgo que significa en estos casos. B) Organos y tejidos: Al tomar muestras para virologa, bacteriologa o histopatologa se debern tomar de preferencia de rganos o tejidos que muestren lesiones representativas del problema observado, y de acuerdo a los rganos y tejidos recomendados en este manual (consultar seccin de envo de muestras). Los rganos y tejidos tomados para anlisis bacteriolgicos debern tomarse de aves que no hayan recibido tratamiento con antibiticos preferentemente (ver parte II. Toma de muestras).
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C) Animales muertos: Siempre es aconsejable enviar animales muertos cuando en el problema que se presente haya mortalidad. De preferencia estos animales no debern tener ms de 1 hora de muertos. II.- TOMA DE MUESTRAS A) Muestras de rganos y tejidos para Bacteriologa: a) Se debern tomar las muestras en condiciones aspticas, de ser posible en un lugar cerrado, con mechero de alcohol, pinzas y tijeras flameadas. En caso de no reunir las condiciones anteriores, lo ms aproximado a lo descrito es aconsejable. b) Las muestras debern tomarse de animales de mortalidad reciente o bien, sacrificados con el propsito de colectar muestras ya que mientras ms tiempo transcurra, existir mayor riesgo de contaminacin con grmenes de la micro flora orgnica. En caso de tener que tomar muestras de animales muertos de ms de una hora, asegrese de incluir muestras de mdula sea. c) Las muestras podrn tomarse en frascos o bolsas estriles diferentes para cada rgano o tejido incluyendo trozos que muestren las lesiones caractersticas o bien mediante la toma con hisopos estriles especialmente diseados para enviarlos al laboratorio en un medio de transporte (disponibles previa solicitud de nuestros clientes). En caso de tomar trozos de rganos o tejidos, las muestras debern conservarse en refrigeracin (evitar su congelacin). d) En el caso de no contar con un mechero, es fundamental utilizar por lo menos torundas con alcohol con las que se pueda empapar las tijeras y pinzas de diseccin, precio a cualquier corte, cuidando que el alcohol no toque las superficies de los tejidos.
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e) Cuando se requieran muestras para aislamiento de Haemophilus paragallinarum, debern enviarse las cabezas de aves afectadas envueltas en toallas de papel y dentro de bolsas de plstico en forma individual.
B) Muestras de rganos y tejidos para Virologa: a) Se debern tomar las muestras en condiciones de la mayor asepsia posible aunque los factores de contaminacin no son tan crticos como para las muestras de bacteriologa. b) Se tomarn rganos y tejidos tanto de animales muertos como recin sacrificados. Es conveniente tratar de incluir muestras de animales en la fase aguda de la infeccin ya que el aislamiento de algunos virus nicamente se puede realizar durante las fases iniciales de la enfermedad (ejemplo EDS76). Las muestras se tomarn en frascos o bolsas estriles incluyendo rganos o tejidos distintos en frascos diferentes . Las muestras debern conservase en refrigeracin o congelacin o en caso de no contar con estos elementos en una solucin de glicerina al 50%. c) Para el envo de vacunas se debern tomar al menos 2 viales con sus diluentes respectivos y conservados conforme a los requerimientos del laboratorio productor.
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C) Muestras de rganos y tejidos para Histopatologa: a) Se debern tomar las muestras de animales muertos recientemente (1 hora mximo) o bien sacrificados para este fin, ya que al transcurrir el tiempo se presentan cambios autolticos, que impiden la apreciacin de las lesiones. b) Las muestras debern tomarse de preferencia de rganos y tejidos que muestren lesiones. c) Se debern cortar trozos de aproximadamente 1 cm. cbico para asegurar una adecuada penetracin de la solucin fijadora. d) Las muestras se debern incluir en una solucin fijadora adecuada (ver cuadro 1) de preferencia una solucin de formalina amortiguada (disponible previa solicitud de nuestros clientes) empleando un recipiente de boca ancha y tapa que selle adecuadamente. Algunos recipientes plsticos empleados para comercializar antibiticos funcionan muy bien. e) Se deber mantener una relacin de 1 volumen de muestra por 9 volmenes de la solucin fijadora.
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Cuadro 1
SOLUCIONES PARA FIJACION DE ORGANOS
SOLUCION DE FORMOL 10% Formol (37-40%) Agua limpia SOLUCION DE FORMOL 10% BUFERADA Fosfato de sodio monobsico Fosfato de sodio dibsico anhidro Formol (37-40%) Agua limpia SOLUCION BOUIN Formaldehdo comercial cido pcrico (sol. salina acuosa) cido actico glacial
100 ml 900 ml 4.0 g 6.0 g 100 ml 900 ml 250 ml 750 ml 50 ml
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D) Muestras para Citopatologa: El estudio citolgico sirve para diagnosticar diversos procesos patolgicos como son neoplasias y alteraciones inflamatorias (bacteriana, viral, mictica, parasitaria). a) Puncin con aguja delgada. Este es uno de los mtodos ms utilizados para el estudio citolgico, el material que se necesita es: Aguja del nmero 21 o 22, jeringa de 10 a 20 ml, portaobjetos y porta jeringa CADECO o Franzens (no indispensable). Los pasos para la puncin con aguja delgada son: Palpar la lesin y desinfectar con alcohol. Introducir la aguja, realizando presin negativa y movimientos suaves de abajo hacia arriba con la jeringa, depositar una gota del material aspirado en el portaobjeto, hacer el fotis y fijar. Se deben de puncionar 2 o 3 sitios de la lesin. b) Frotis. Los frotis ms utilizados para diagnstico citolgico son: Vaginal, conjuntival, de cavidad oral y de cavidad nasal. Los materiales utilizados son los siguientes: Hisopos, portaobjetos, marcador y fijador. El procedimiento para obtener las muestras de las mucosas es el siguiente: Frotar el hisopo previamente humedecido con agua destilada o solucin salina sobre las paredes de la mucosa con el fin de obtener suficientes clulas y extender el material obtenido en el hisopo frotando sobre la superficie del portaobjetos, quedando as una monocapa. c) Raspado. Este mtodo se utiliza para obtener material de lesiones planas de piel. El procedimiento consiste en cortar la mayor cantidad de pelo y desinfectar el rea afectada, raspar con hoja de bistur el rea de la lesin y desechar el material de este raspado; raspar nuevamente, hacer los fotis y fijar. Cuadro 2. METODO APLICACIN Frotis Mucosas (vaginal, oral, nasal) Improntas Piezas quirrgicas Puncin con aguja delgada Organos internos, neoplasias, ndulos cutneos. Raspados Lesiones planas de piel Lavados Nasal, gstrico, bronquial Cepillados Bronquiales, gstricos Lquidos Orina, LCR, asctico, pleural, articular
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