PRAKTIKUM VI

PEMBUATAN MEDIA ALKALINE PEPTONE WATER 1 %

Tanggal : 17 MARET 2012

I. Judul

Pembuatan media Alkaline Peptone Water 1%

II. Tujuan

A. Tujuan Instruksional Umum

Pada akhir praktikum ini mahasiswa diharapkan terampil membuat media yang

digunakan untuk pertumbuhan awal bakteri Vibrio cholera memenuhi standar secara

kualitas dan kuantitas.

B. Tujuan Instruksional Khusus

Mahasiswa dapat membuat media APW 1 %

III. Prinsip

Ditimbang, dilarutkan dan disterilisasi

IV. Dasar Teori

Media merupakan campuran bahan tertentu dengan aquadest, yang memiliki beberapa

macam fungsi. Fungsi tersebut antara lain untuk menumbuhkan mikroba, isolasi mikroba

tertentu, memperbanyak jumlah, uji sensitivitas, uji biokimia, dan perhitungan jumlah kuman.

Media Alkaline Peptone Water merupakan media pengaya untuk Vibrio cholera dan spesies

vibrio dari makanan, air, kotoran, dan klinis. Media ini telah direkomendasikan oleh berbagai

penulis untuk meningkatkan pemulihan spesies vibrio dalam bahan tinja dan sampel lain.

Peptone memberikan niteogen, vitamin, mineral dan asam amino esensial untuk pertumbuhan.

Natrium klorida memasok elektrolit yang penting untuk transportasi dan keseimbangan

osmotik dan mendorong pertumbuhan Vibrio cholerae.

PH media mengarah ke alkalinitas media untuk menghambat sebagian besar flora yang

tidak diinginkan serta dapat mengganggu kelangsungan hidup dari spesies vibrio utuh.

Pertumbuhan pada tabung ditandai dengan kekeruhan dibandingkan dengan kontrol tanpa

makulasi. Langkah-langkah tambahan yang direkomendasikan seperti plating kemedia selektif

dan non selektif untuk isolasi dan morfologi, studi biokimia dan serologi untuk identifikasi.

Bahan klinis yang mengandung sejumlah kecil spesies vibrio harus dimokulasi kedalam

media pengaya sebelum plating kenedia selektif. Rentang pH pada media ini adalah 8,6-9,0

pada 250C.

Komposisi dari Media Alkaline Peptone Water adalah

Pancreatic digest of casein 10,0 g/l

Peptone 10,0 g/l

Sodium chloride 5,0 g/l

V. Alat dan Bahan

a. Alat

1. Neraca analitik

2. Gelas beaker

3. Spatel

4. Gelas ukur

5. Batang pengaduk

6. Erlenmeyer

7. Kompor listrik

8. Autoclave

9. Aluminium foil

10. Kapas lemak

11. Tabung reaksi + rak

12. Api Bunsen

13. Bola hisap

14. Pipet ukur 10 ml

15. Benang pulung

b. Bahan

1. Bubuk APW Merck Oxoid CM 1028

2. Aquadest

3. pH stick

VI. Cara Kerja

1. Disiapkan alat dan bahan

2. Tabung reaksi diberi label (nama, jumlah, dan tanggal pembuatan)

3. Ditimbang bubuk APW Oxoid CM 1028 sebanyak 1 gram pada neraca analitik

4. Dimasukkan ke dalam erlenmeyer

5. Ditambahakan 100 ml aquadest, diaduk hingga homogen

6. Ditutup dengan aluminium foil, dipanaskan hingga larut sempurna dengan kompor

listrik

7. Diukur pH media dengan pH stick pada pH 8-9. Kemudian dituang 10 ml ke tabung

reaksi

8. Disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit

9. Media siap digunakan

VII.Hasil Pengamatan

Media Alkaline Peptone Water 1% setelah dipanaskan pada kompor listrik media berwarna

kuning pias dan setelah disterilisasi pada autoclave media berwarna bening.

Gambar media APW 1 % dalam erlenmeyer Gambar media APW 1 % dalam tabung reaksi

VIII. Pembahasan

Media Alkaline Peptone Water merupakan media enrichment exclusive. Media ini

tergolong media Enrichment (pengaya) karena media ini digunakan untuk pengayaan spesies

Vibrio (Vibrio cholera). Media ini bersifat ekslusif karena menekan pertumbuhan

mikroba/bakteri yang bersifat asam. Berdasarkan fungsinya media ini untuk spesies Vibrio

dari sampel makanan, air dan klinis. Media ini diperuntukkan bagi bakteri yang bersifat basa

yaitu dapat tumbuh pada media dengan suasana alkali/basa.

Pada praktikum kali ini, untuk pembuatan 100 ml media Alkaline Peptone Water 1%

diperlukan bahan :

Takaran 30 g/l

Untuk 1 % = 10 g/l

X = 10 x 100 gram / L

1000

X = 1gram

Jadi, bubuk Alakline Peptone Water OXOID CM1028 yang ditimbang sebanyak 1 gram.

Berdasarkan komposisinya media Alkaline Peptone Water tidak mengandung agar dalam

penyusunnya. Hal ini menunjukkan media APW tergolong media cair yaitu media yang

tidak mengandung pemadat. Media APW 1 % memiliki pH 9. Berdasarkan nilai pH tersebut

media ini bersifat basa ( alkaline).Kebasaan ini mendukung pertumbuhan bakteri Vibrio

cholera yang merupakan bakteri yang tumbuh dengan baik pada pH di atas 8. Kebasaan

media APW ini juga berfungsi menekan atau menghambat pertumbuhan bakteri yang

bersifat asam. Pembuatan media APW 1 % memerlukan proses sterilisasi. Sterilisasi ini

bertujuan untuk mensterilkan media dari mikroba-mikroba yang dapat mengganggu

pertumbuhan mikroba. Sterilisasi dilakukan pada suhu 1210C selama 15 menit.

IX. Kesimpulan

1. Secara visual warna media setelah dipanaskan berwarna kuning pias dan setelah

disterilisasi berwarna bening.

2. Media Alkaline Peptone Water 1% merupakan Enrichment Exclusive Media untuk

Vibrio cholerae dan spesies Vibrio

3. Media Alkaline Peptone Water 1% merupakan media cair

4. Pada proses pembuatannya media disterilisasi pada suhu 1210C selama 15 menit