MEDIOS DE CULTIVO

Para TP N° 1

Microbiología e Inmunología Parte ALic. en Biol. MolUniversidad Nacional de San LuisMarzo 2014

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Bacterias

urbinavinos.blogspot.com

Hongos y levaduras

ProtozoosCianobacterias

PROCARIOTAS

EUCARIOTAS

Fuente de energía Fuente de carbono Categoría Ejemplos de microorganismos

Luz CO2 Fotoautotrofos Algas, bacterias ro- jas y verdes, cianobacterias.

Luz comp. Fotoheterotrofos Bacterias rojas y orgánicos verdes sencillos

Reacciones CO2 Quimioautotrofos Bacterias y Archae de óxido-reducc. entre comp. inorg.

Reacc. comp. Quimioheterotrofos Hongos, de óx-reducc. orgánicos protozoos, entre comp. org. complejos bacterias

Clasificación de los microorganismos según la fuente de energía y carbono

Factores de crecimiento

A ---- B ---- C ---- Histidina NO es factor de crecimiento 

A ---- B --X-- ….. ---- Histidina ? ES factor de crecimiento

Ejemplos: *vitaminas, como las del complejo B*algunos aminoácidos *purinas y pirimidinas

Medios de cultivo

Por su origen:

-Sintéticos o químicamente definidos:*se conoce la fórmula exacta

-Naturales o complejos:*no se conoce su composición con exactitud

-Naturales o complejos, las fórmulas de lab incluyen:

1. PEPTONAS Productos de la hidrólisis de proteínas:

Proteína de origen vegetal o animal Hidrólisis

ácida o

enzimática

Peptona:mezcla de aa y péptidos.

Sólo para QUIMIOORGANOTROFOS-Fuente de nitrógeno-Fuente de carbono y energía, cuando no hay

azúcares en el medio de cultivo

2. EXTRACTOS

-de carne: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne.

-de levadura: producto de lisis ácida o enzimática de levaduras

-de malta: producto de cebada malteada, reemplaza al extracto de levadura

Sólo para QUIMIOORGANOTROFOS-aportan factores de crecimiento,

especialmente vitaminas.

Factores de crecimiento

Agar nutritivo

(para bacterias quimioorganotrofas) 

Peptona de carne ………….. 0.5 gExtracto de carne ………….. 0.3 gNaCl ………………………… 0.5 gAgar ……………………… 1.5 – 2 gAgua destilada ……………. 100 ml

Medio de cultivo para fototrofos

Sintético o químicamente definido (fórmula exacta)

CO2 ………………… burbujeo continuo

KNO3 ……………. 1 g/l

MgSO4 …………… 0.5 g/lKH2PO4 …………… 0.035 g/lTrazas …………….. 10-4 - 10 -5 g/l(NaVO3, NiSO4, ZnCl2, H3BO3,….., etc)H2O ………………………… 1000 mlsolidificante ?? SILICAGEL

Exponer a la luz solar o artificial.

Medio de cultivo C (sintético o químicamente definido) K2HPO4 .......................................................................................................... 0.6 g KH2PO4 …………………………………………………………………………… 0.6 g NH4Cl ……………………………………………………………………………… 3 g MgSO4 …………………………………………………………………………… 0.1 g Glucosa …………………………………………………………………………… 25 g Acetato sódico …………………………………………………………………… 20 g Aminoácidos (alanina, arginina, asparagina, aspartato, cisteína, glutamato, glutamina, glicina, histidina, isolaeucina, leucina, lisina, metionina, fenilala- nina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina) ……… 100-200 µg c/u Purinas y pirimidinas (adenina, guanina, xantina, uracilo) ………….. ….10 mg c/u Vitaminas (biotina, folato, ácido nicotínico, piridoxal, piridoxamina, riboflavina, tiamina, pantotenato, ácido p-aminobenzoico) …..……0.01- 1 mg c/u Elementos traza (Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) ………………………..... 2-10 µg c/u Agua destilada …………………………………………………………………. 1000 ml

pH 7

Medio de cultivo sintético para quimioorganotrofos

Para QUIMIOOGANOTROFOSMedio de cultivo A Medio de cultivo B(sintético o quimícamente (complejo o natural) definido)

K2HPO4 ............ 7 gKH2PO4 ……… 2 g Extracto de carne ….. 3 g(NH4)2SO4 …… 1 g Peptona ……………. 5 gMgSO4 ……… 0.1 g NaCl ………………… 5 gCaCl2 ……….. 0.02 g Agua dest. ……. 1000 ml

Glucosa ……. 4-10 gTrazas: pH 7Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) …….... 2-10 µg c/uAgua destilada …….. 1000 ml

pH 7

Requerimientos de O2

a. Aerobios estrictos

b. Anaerobios obligados

c. Anaerobios facultativos

d. Microaerófilos

e. Anaerobios aerotolerantes

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

-por origen: - sintético o químicamente definidofórmula química exactamente conocida

- natural o complejocomposición química no se conoce con exactitud

-por consistencia: - líquido (sin agar)

-sólido (con agar: al 0.3% semisólido

al 1.5 – 2% sólido)

-por su composición:

- comunes: AGAR NUTRITIVO -peptona de carne

-extracto de carne

-NaCl-agar 2%

-agua destilada

- enriquecidos: AGAR SANGRE

Por su función:

-de transporte: - medio de Stuart - medio de Cary Blair

Contiene buffer + sustancias criopreservantes (glicerol)

Por su función:- de enriquecimiento (líq.) - selectivos (sólidos)

Caldo Mac Conkey(inhibidor + lactosa + púrpura de bromocresol Agar Mac Conkey

(inhibidor + lactosa + rojo neutro)

Por su función:

-diferencial

Agar triple azúcar hierro (TSI)

EnterobacterShigella

ProteusPseudomonas

Fermentación de.-glucosa ?-sacarosa ?-lactosa ?Producción de H2S ?

El medio incluye los 3 azúcares, sal de Fe2+

y un indicador de pH (rojo neutro)