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microbiologia
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MEDIOS DE CULTIVO Y MÉTODOS DE SIEMBRA
Área de Bacteriología. Departamento de Ciencias MicrobiológicasFacultad de Veterinaria -UdelaR
MEDIO DE CULTIVO
Una sustancia líquida o sólida, de naturaleza definida o no, natural o sintética, simple o compuesta que permite el desarrollo de diferentes microorganismos.
Preparación de medios de cultivo
A.A partir del medio comercial deshidratado
B. A partir de sus distintos componentes
Preparación de medios de cultivoPROCEDIMIENTO:
1. Pesar la cantidad estimada2. Hidratarlo con el volumen de agua destilada
correspondiente3. Calentar agitando lentamente
hasta su disolución4. Controlar pH y apariencia5. Envasar y esterilizar a
121°C por 15 min6. Enfriar y realizar control de esterilidad
CLASIFICACIÓN
1) SEGÚN SU ESTADO FÍSICO
A. SÓLIDOSB. LÍQUIDOSC. SEMISÓLIDOSD. SEMILÍQUIDOS
3) SEGÚN SU USO
A. Nutrientes (sólidos y líquidos)
B. Selectivos (sólidos)C. Diferenciales D. De enriquecimiento
(líquidos)
2) SEGÚN SU USO
• Medios nutrientes
•Pueden ser sólidos o líquidos•Son aquellos que presentan los nutrientes mínimos para el crecimiento de los microorganismos que no necesitan requerimientos especiales
• Medios selectivos
•Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de bacterias•La selectividad se consigue normalmente con un producto químico agente, tinta o antibiótico.•Son sólidos
2) SEGÚN SU USO
• Medios diferenciales
• Sólidos o líquidos•Permite diferenciar un microorganismo de otro según determinadas propiedades de crecimiento en dichos medios•Presentan algún indicador•Ej: TSIA, Citrato, etc (T-P de pruebas bioquímicas)
• Medios de enriquecimiento
•Son medios que tienen aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos•Son líquidos
Medios de cultivo MÁS COMUNES
•Agar Nutritivo (AN)
•Tryptic Soy Agar (TSA)
•Agar Sangre (AS)
•Agar Muller-Hinton (MH
•Caldo Nutriente (CN)
Medios de cultivo MÁS COMUNES
•Agar McConkey (McC)
•Xilosa-Lisina-Tergitol 4 Agar (XLT4)
•Salmonella-Shigella Agar (SSAgar)
•MSA ( Manitol Sal Agar):
•LOEWENSTEIN
•Cooked meat
MEDIOS DE CULTIVO MÁS COMUNES
¿Qué significa sembrar?
Transferir una muestra microbiológica de un
ambiente determinado a un medio de cultivo con
fines cuantitativos o cualitativos
Promover intencionalmente el
desarrollo de un microorganismo en medios de cultivo y
condiciones de laboratorio controladas
Tener en cuenta: • Temperatura de incubación• Condiciones de oxígeno• Tiempo de incubación
¿Dónde sembramos? y ¿Para qué sembramos?
Sembramos en medios de cultivo para hacer que las bacterias se reproduzcan con el objetivo de
aumentar el número de individuos de una población.
Técnica AsépticaASÉPTICO= sin microorganismos
•Se refiere a las prácticas que reducen la posibilidad de que mi cultivo de interés se
contamine con un microorganismos externo a la muestra.
•Técnica usada para evitar la contaminacióndurante la manipulación de cultivos y de medios
de cultivos
Principios del cultivo microbiológico1. Facilitar el crecimiento y el aislamiento de un
microorganismos presente en una muestra clínica
2.Tratar de determinar que microorganismo de los que podemos encontrar en una muestra es más probable que sea el causante de la afección
3.Obtener un desarrollo de microorganismos suficiente para poder identificarlos y caracterizarlos
SIEMBRA: en medio líquido
MEDIO LÍQUIDO
MEDIO LÍQUIDO
MEDIO SÓLIDO• Placa•Tubo
SIEMBRA: en medio líquido
MEDIO LÍQUIDO MEDIO LÍQUIDO
Esterilización del asa
Agitar el tubo con la muestra(Homogenización)
Destapar el tubo y flambear la boca
SIEMBRA: en medio líquido
Tomar la muestra Volver a flambear la boca del tubo
Tapar el tubo
SIEMBRA: en medio líquido
Sembrar la muestra
Destapar el tubo con el medio a inocular y flambear la boca
Flambear la boca del tubo
SIEMBRA: en medio líquido
Tapar el tubo
Esterilización del asa
INCUBAR
SIEMBRA: en medio líquido
MEDIO SÓLIDO• Placa•Tubo
MEDIO LÍQUIDO
INCUBAR
SIEMBRA: en medio semisólido
MEDIO SÓLIDO• Placa• Tubo
MEDIO SEMISÓLIDO
INCUBAR
Definición importante:
COLONIA BACTERIANA
Agrupación de bacterias originadas a partir de una bacteria madre que se establecen y
extienden en un medio.
SIEMBRA: en medio sólido
Siembra en placa:1. Por extensión2. Por inclusión3. Por estría
Siembra en tubos:A. Con agar inclinado
(Columna y Pico de flauta)
B. Con medio sólido horizontal (Pico de Flauta)
SIEMBRA: en medio sólido
1. Siembra en placa: Por extensión•Se extiende el inóculo uniformemente con una varilla acodada estéril por la superficie del medio de cultivo•Las células diseminadas sobre la superficie formaráncolonias aisladas
2. Siembra en placa: Por inclusión
SIEMBRA: en medio sólido3. Siembra por estría: PARA AISLAMIENTO
Colonias aisladasCultivo puro: colonias de igual morfología
CultivoAXÉNICO
SIEMBRA: en medio sólido
A. Siembra en tubos: En agar inclinado (Columna y Pico de flauta)
Se siembran por punción y estría (con hilo)
B. Siembra en tubos: En medio sólido horizontal (Pico de flauta)
Se siembran por estría en la superficie (con asa)