Metabolismo MicrobianoTodas las clulas requieren energa para sobrevivir. Esa energa, tpicamente en forma de ATP, procede del catabolismo ordenado de varios sustratos orgnicos (hidratos de carbono lpidos y protenas). La energa producida se puede usar despus para la sntesis de constituyentes celulares (paredes, protenas, cidos grasos y cidos nuclecos), mediante un proceso denominado anabolismo.

El metabolismo de cualquier ser vivo requiere materiales, una fuerza conductora y un plan. Sin embargo, existen algunas diferencias entre los distintos tipos de microorganismos.

OBJETIVO: Demostrar que las bacterias tienen diferentes requerimientos energticos

Diseo ExperimentalCepas microbianas: E. coli, Enterobacter, Proteus, Klebsiella, Pseudomonas, Salmonella , Shigella, Bacillus subtilis

Medios de Cultivo Caldo Clark Lubs, Caldo lactosado, Agar Almidn, Caldo peptonado, agar sangre, Agar TSI, Agar LIA, Agar Nitrato, Agar urea de Cristensen, Agar citrato de Simmons, galatina nutritiva, agar mantequillaMechero. Asa bacteriolgica

METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS UTILIZACIN DE LA GLUCOSACepa bacteriana Medio Caldo Clark Lubs Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas

Agregar 5 gotas del reactivo de rojo de metilo lecturaPrueba de Rojo de Metilo (realizar la lectura a las 48 horas)

LECTURA RM positiva (+) = despus de adicionar el indicador, el medio de cultivo deber permanecer de un color rojo en la superficie-RM negativo ( -) = Color amarillo en la superficie del medio

Prueba de Voges ProsKauer ( realizar la lectura a las 24 horas)

Agregar: 0,6 mL/ o 12 gotas del reactivo alfa naftol al 5% 0,2 mL /o 4 gotas de KOH al 40%LECTURA VP positivo (+) = despus de adicionar el indicador, el medio de cultivo deber aparecer de un color rojo en la superficie ( despus de 15 minutos)VP negativo ( -) = Color amarillo cobrizo en la superficie del medio

FERMENTACIN DE LA LACTOSA

Cepa bacteriana Caldo Lactosado Incubar a 35- 37C por 24 a 48 horasLACTOSA positiva (+) = Se manifiesta por un cambio de color del indicador en el medio de cultivo de rojo a amarilloLACTOSA negativa ( -) Si no se presenta cambio de color en el medioGAS positivo( +) =Se presenta por la presencia de una burbuja en la campana de Durham por la acumulacin de gasGAS negativo ( -) = No hay presencia de burbujas

HIDRLISIS DEL ALMIDN/ PRODUCCIN DE AMILASA

Cepa bacteriana Agar almidn Agregar el reactivo de Lugol Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas

LECTURA AMILASA positiva (+) = Si alrededor de la colonia se observa zonas o halos claros lo que indica que el almidn se ha hidrolizado por la presencia de la enzimaAMILASA negativa ( -) = Si no se observa zonas o halos claro alrededor de la colonia

METABOLISMO DE LAS PROTENASHidrlisis de la Gelatina

Cepa bacteriana Medio gelatina Refrigera por 10 minutos Incubar a 35- 37C 24 horas a 14 das

GELATINASA positiva ( +) = Si hay presencia de liquefaccinGELATINASA NEGATIVA ( - ) = Si no se observa liquefaccin

PRODUCCIN DE INDOL

Cepa bacteriana Caldo peptonado y Agregar el reactivo de Kovac /o Caldo triptfano 15 gotas Incubar a 35- 37C por 18 a 24 horas

LECTURAINDOL positivo (+) = Formacin de un anillo de color rojo en la superficieINDOL negativo (- ) = Formacin de un anillo amarillo o anaranjado en la superficie

PRODUCCIN DE HIDRGENO SULFURADO

Cepa bacteriana Caldo peptonado con papel impregnado de acetato de plomo Incubar a 35-37C por 24 a 48 horasLECTURAH2S positivo = Cuando se ennegrece el papelH2S negativo = Ausencia del color en el papel

HIDRLISIS DE LA UREA

Cepa bacteriana Agar-urea de Christensen Incubar a 35-37C por 18 a 24 horasLECTURAUreasa + = medio se torna de color rojoUreasa - = medio conserva su color original amarillo

METABOLISMO DE LOS LPIDOS.

Cepa bacteriana agar mantequilla Incubar a 35-37C por 24 a 48 horasLIPASA positiva (+)= Colonia de color rojoLIPASA negativa (-)= No hay cambio de color

METABOLISMO DE AMINOCIDOSDESCABOXILACIN DE LA LISINA

Cepa bacteriana Agar LIA Siembra tres punturas y estra Incubar a 35-37C por 18 a 24 horasLECTURALISINA DESCARBOXILASA positiva (+) = Si aparece un color prpura intensoLISINA DESCARBOXILASA negativa (-) = No hay cambio de color

PRODUCCIN DE ENZIMASPRODUCCIN DE HEMOLISINAS

Cepa bacteriana Agar sangre Incubar a 35- 37C por 24 horasLECTURA HEMOLISIS= Halos translcidos, por la degradacin completa de la hemoglobina HEMOLISIS= Halos opacos verdosos, por la degradacin parcial de la hemoglobina HEMOLISIS= ausencia de halos

Hidrolisis del ADNCepa bacteriana Agar ADNSiembra a lo largo de la placaIncubar a 35-37|C por 24 horasagregar Agregar HCl al 1%LECTURA: ADNasa + alrededor de la colonia halo claro Adnasa alrededor de la colonia no presenta halo claro

Hidrolisis del ADNCepa bacteriana Agar Siembra a lo largo de la placaIncubar a 35-37|C por 24 horasagregar Agregar HCl al 1%LECTURA: ADNasa + alrededor de la colonia halo claro Adnasa alrededor de la colonia no presenta halo claro

Prueba de la fenilalanina desaminasaCepa bacteriana

Agar fenilalaninaSiembra por estraIncubar a 35-37C por 24 horasAgregar unas gotas de cloruro frricoLectura: fenilalanina desaminasa + : color verde fenilalanina desaminasa - : color amarillo

METABOLISMO DE FUENTES INORGNICASUTILIZACIN DEL CITRATO

Cepa bacteriana Agar Citrato de Simmons Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas

CITRATO positivo = Cambio de color vira de verde al azul. Desarrollo visible en el medioCITRATO negativo = No hay cambio de color ni crecimiento observable

LECTURA

REDUCCIN DEL NITRATO

Cepa bacteriana Caldo nitrato/ agar nitrato Agregar: 1 ml de

Incubar a 35-37C Solucin A ( cido Sulfanilico) por 18 a 24 horas Solucin B ( alfa naftilamina) LECTURANITRATO positivo (+) = desarrolla un color rojo en 30 seg despus de agregar los reactivosNITRATO negativo (-) = No hay reaccin de color

MEDIO UTILIZADO EN LA FERMENTACIN DE HIDRATOS DE CARBONO Y PRODUCCIN DE HIDRGENO SULFURADO

Cepa bacteriana Agar TSI ( Triple Sugar Iron ) siembra por puntura y estria Incubar a 35-37C por 18 a 24 horasLECTURAPico de flauta alcalino/ profundidad alcalina (K/K) = No fermentacin de hidratos de carbonoPico de flauta alcalino/ profundidad cida ( K/A/ gas) = Glucosa fermentada; lactosa y sacarosa no fermentada, Pico de flauta alcalino/ profundidad cido negra( K/A/H2S) = Glucosa fermentada, lactosa y sacarosa no fermentada, produccin de hidrgeno sulfuradoPico de flauta cida/ profundidad cida A/A= Glucosa , lactosa y sacarosa fermentadas

Pruebas mixtasProduccin de Hidrogeno sulfurado, Indol y movilidad:A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

LECTURACepas mviles:producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra. Cepas inmviles:el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra. Cepas SH2positivas:ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Cepas SH2negativas:el medio permanece sin cambio de color. Cepas indol positivas:desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich. Cepas indol negativas:sin cambio de color.