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Chapitre 7Méthodes d’analyse et de séparation
des peptides et protéinesProfesseur Michel SEVE
Année universitaire 2011/2012Université Joseph Fourier de Grenoble - Tous droits réservés.
UE1 : Biomolécules (1) : Acides aminés et protéines
Méthodes de séparation et d’analyse des protéines
- Ultrafiltration- Chromatographie
- Exclusion en gel- Echange d’ion- Affinité
- Electrophorése- Protéomique- Cristallographie
CHROMATOGRAPHIES
Chromatographie sur gelChromatographie d’échange d’ionsChromatographie d’affinité
Colonne de séparation
Pompe
Solvant 1
Solvant2
Détecteur SystèmeD’acquisitionDe données
Chromatogramme
Les différents supports sur gel
SéphadexBio-gelSépharoseUltrogelBioglassBio-Beads
Zone de fractionnementP2 100-1800P4 800-4000P10 1000-6000P30 1500-20000P60 2500-40000P100 5000-100 000P150 15000-150 000P200 30000-200 000P300 60000-400 000A 1.5M 10000-1500 000A 5M 10000-5000 000A 150M 1000000-150 000 000
Chromatographie d‘échange d’ions
Les résines: sépharose, séphacrylcelluloses substituées
Les groupements:
chargés négativement (échange de cations)- sulfoniques- carboxyliques- phosphates- sulfoéthyl
chargés positivement (échange d’anions)- diéthylaminoéthyl (DEAE)- aminoéthyl- triméthylamine
Charge des protéines
- Les protéines ont des charges variables en fonction du pH
- Chaque protéine en fonction de sa séquence primaire présente une courbe particulière
- Chaque protéine a un point isoélectrique défini
Chromatographie d’affinité
Substrat EnzymeAntigéne AnticorpsMetal MetalloprotéineSucre LectineHormone Récepteur
(Lavage)
Compétition
Electrophorèse non dénaturante:Analyse des protéines plasmatiques
Profil électrophorétique classiqueDes protéines plasmatiques
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Ce document a été réalisé par la Cellule TICE de la Faculté de Médecine de Grenoble (Université Joseph Fourier – Grenoble 1)en collaboration avec l’Equipe Audiovisuel et Production Multimédia (EAEPM) de l’Université Stendhal de Grenoble.
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