7/26/2019 Metode Uji Sitotoksik

1/2

Metode uji sitotoksik

Uji sitotoksik 3-(4,5-dimetilazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromida (MTT) merupakan

metode kolorimetri, dimana pereaksi MTT ini merupakan garam tetrazolium ang dapat dipe!a"

menjadi kristal formazan ole" sistem suksinat tetrazolium reduktase ang terdapat dalam jalur

respirasi sel pada mitokondria ang aktif pada sel ang masi" "idup# $ristal formazon ini

memberi %arna ungu ang dapat diba!a absorbansina dengan menggunakanEnzyme-linked

Immunosorbent Assay(&'*) reader(+amili", 2)# +enetapan jumla" sel ang berta"an

"idup pada uji sitotoksik dapat dilakukan berdasarkan dengan adana kerusakan membran

meliputi per"itungan sel ang mengambil (up take) atau dengan ba"an pe%arna seperti biru

tripan# edangkan peruba"an morfologi diketa"ui dengan mikroskop elektron#

Uji sitotoksik digunakan untuk menentukan parameter nilai .5# /ilai .5menunjukkan

nilai konsentrasi ang meng"asilkan "ambatan proliferasi sel sebesar 50 dan menunjukkan

potensi ketoksikan suatu sena%a ter"adap sel# /ilai ini merupakan patokan untuk melakukan uji

pengamatan kinetika sel# /ilai .5dapat menunjukkan potensi suatu sena%a sebagai sitotoksik#

emakin besar "arga .5maka sena%a tersebut semakin tidak toksik# *k"ir dari uji sitotoksik

dapat memberikan informasi 0 sel ang mampu berta"an "idup, sedangkan pada organ targetmemberikan informasi langsung tentang peruba"an ang terjadi pada fungsi sel se!ara spesifik#

+rinsip reaksi 3-(4,5-dimetilazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromida (MTT) menurut

Mosmann (13) sebagai berikut

Uji Anti kanker

Uji sitotoksik ter"adap kanker dengan metode MTT dilakukan dengan !ara el kanker

dengan konsentrasi 3 13sel1 6' didistribusikan kedalam sumuran dan diinkubasi selama

24 jam didalam inkubator .72agar sel beradaptasi dan menempel di sumuran# elanjutna pada

tiap sumuran ditamba"kan 1 6' media kultur (M$) ang mengandung sampel dengan 8ariasi

kadar dan diinkubasi kembali selama 4 jam# +ada ak"ir inkubasi, media kultur ang

mengandung sampel dibuang dan di!u!i dengan 1 6' +9 (phosphate Buffered saline)#

$emudian kedalam asing-masing sumuran ditamba"kan 1 6' media kultur ang mengandung

7/26/2019 Metode Uji Sitotoksik

2/2

MTT dan diinkubasi kembali selama 4 jam pada su"u 3:.# el ang "idup akan bereaksi

dengan MTT membentuk formazan ang ber%arna ungu# etela" 4 jam, pada tiap sumuran

ditamba"kan reagen stopper untuk membunu" sel dan melarutkan kristal formazan# +late di

s"aker selama 1 menit kemudian diinkubasi pada su"u kamar dalam ruang gelap selama

semalam# elanjutna, absorbansi tiap sumuran diba!a dengan &'* reader pada panjang

gelombang 55 nm#