Alonso Rodriguez María de Jesús

Cordero Cordero Dulce María

Método para determinar en Orina Humana de manera simultanea MDEA, MDMA y los metabolitos HMA, MDA y HMMA mediante Cromatografía de gases acoplada a un Espectrómetro de masas

Introducción

Material y Métodos

VALIDACIÓN EXPERIMENTAL

Linealidad Seis puntos de calibración

Linealidad mínima aceptada r2= 0.99

LOQ

LOD Sensibilidad Evaluado con 6 replicas

Recobro

Controles

30 µg/L

300 µg/L

3000 µg/ml

+ E.I

Se realizó antes y después del procedimiento de extracción

Precisión Interensayo Desviación Estandar

relativa de 6 replicas de la curva de calibración

Precisión Intraensayo

Desviación Estandar relativa de los puntos de control

Análisis de Interferencias

Selectividad del Método

6-acetilmorfina

Acido acetilsalicílico

Cafeína

Canabidol

Diperamina

Hidromorfina

11-Tetrahidrocanabinol

Metadone

Morfina

Nicotina

Norcocaina

Estabilidad del método

Ciclos de

congelación - descongelación

Temperatura controlada durante 14 h

Refrigeración durante 72 h

Temperatura del auto muestreador

Comparado con un set de muestras preparadas en el momento

Muestras Clínicas El estudio fue aprobado por el National Institute on Drug

Abuse Institutional Review Board

Los participantes firmaron una carta de consentimiento

Grupos de Estudio

•Placebo

•Doble Ciego

•Grupo de Estudio

Recibieron una dosis oral de 1.6 mg/Kg de MDMA

1.2 h después fue recolectada la orina y almacenada a -20 ºC

ResultadosHMA* pico 1, MDA-d5 pico 2, MDA pico 3, HMMA pico 4, MDMA-d5 pico 5, MDMA pico 6, MDEA-d6 pico 7), y MDEA pico 8

Fig. 2. Extracted ion chromatograms containing 29.3 g/L HMA* (240m/z, peak 1), 50 g/L MDA-d5 (167m/z, peak 2), 46.7 g/L MDA (162m/z, peak 3), 4261.8 g/L HMMA(360 m/z, peak 4), 50 g/L MDMA-d5(258 m/z, peak 5), 1462.4 g/LMDMA (254 m/z, peak 6), and 50g/L MDEA-d6 (274 m/z, peak 7), in aurine specimen collected 1.2 h after1.6 mg/kg oral administration ofMDMA to a research participant.

Validación del MétodoLinealidad Rango de 25 – 5000 µg/L

- r2 > 0.99

AnalitoEstandar

Interno50 g/LLOD(g/L)

LOQ(g/L)

Ecuación r2

HMA d5–MDA 10 25 Y=0.0705 (0.00693) X–0.7628 (0.2236) 0.998

MDA d5–MDA 10 25 Y= 0.0421 (0.00408) X–0.2595 (0.1875) 0.998

HMMA d5–MDA 10 25 Y= 0.1605 (0.2513) X–0.6274 (0.15356) 0.999

MDMA d5–MDMA 10 25 Y=0.0475 (0.1115) X–0.1429 (0.09786) 0.999

MDEA d6–MDEA 10 25 Y=0.0270 (0.0007) X–0.1632 (0.0752) 0.999

Validación del Método Recobro

>85.5 %

Precisión •CV 6%

•El porcentaje de la concentración recobrada fue de 90 – 117 %

•Precisión interensayo fue 3.5 – 12.9 %

•Recobro 90 – 112 %

EspecificidadNo fue detectado ningún pico debido a la interferencia

Estabilidad

•Estabilidad buena CV 15% en los ciclos de congelación – descongelación

•Al analizar las muestras congeladas durante 72 h se muestra una diferencia <20%

Discusión

La selección de E.I adecuados es muy importante, ya que algunos de los metabolitos del MDMA

El método desarrollado tiene una alta sensibilidad, para cuantificar los metabolitos del MDMA hasta su tiempo de eliminación 5 vidas medias.

Uno de los pasos mas importantes fue la hidrólisis antes de la extracción.

La extracción es uno de los pasos mas importantes ya que en este se puede perder hasta el 50% del MDMA libre

La reproducibilidad inter e intra ensayo fue satisfactoria ya que se obtuvo un CV < 15%

Conclusiones

Se demostró la estabilidad a -20, 4 y 20º C por 21 semanas

Este método puede ser aceptable para estudios de farmacocinética del MDMA y sus metabolitos