42
III. METODE PENELITIANA. Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium
berdasarkan prosedur yang direkomendasikan oleh World Health
Organization Pesticides Evaluation Scheme (WHOPES, 2009) dengan
menggunakan perlakuan ekstrak bawang putih (Allium sativum L.)
dengan menggunakan 3 konsentrasi.B. Tempat dan Waktu
PenelitianPembuatan ekstrak bawang putih dilakukan di Laboratorium
Kimia fakultas MIPA Universitas Lampung. Pelaksanaan uji
efektivitas dilakukan di Laboratorium Biologi fakultas MIPA
Universitas Lampung pada bulan November 2013.C. Populasi dan
Sampel1. Populasi PenelitianPopulasi yang digunakan dalam
penelitian ini adalah nyamuk Aedes aegypti betina stadium dewasa.
Telur nyamuk ini diperoleh dari Loka Litbang P2B2 (Penelitian dan
Pengembangan Pemberantasan Penyakit Bersumber Binatang) Ciamis
dalam bentuk kering dengan media kertas saring.2. Sampel
Penelitian
a. Kriteria Inklusi Nyamuk Aedes aegypti betina Nyamuk Aedes
aegypti yang dapat terbang Nyamuk Aedes aegypti berusia 2-5 hari
Nyamuk Aedes aegypti sudah dipuasakan selama 24 jamb. Kriteria
Ekslusi
Nyamuk Aedes aegypti yang mati sebelum perlakuan
3. Besar SampelSesuai dengan pedoman standar uji repellent pada
setiap kandang uji adalah 50 ekor nyamuk, penelitian ini
menggunakan 3 kandang uji sehingga total sampel yang digunakan
yaitu 450 ekor nyamuk (World Health Organization Pesticide
Evaluation Scheme, 2009). Rincian jumlah sampel yang digunakan
dalam penelitian adalah sebagai berikut :
Tabel 1. Jumlah sampel yang digunakan dalam
penelitianPerlakuanJumlah nyamuk x jumlah pengulanganTotal
Perlakuan I : 10%50 nyamuk x 3150 nyamuk
Perlakuan II : 30%50 nyamuk x 3150 nyamuk
Perlakuan III : 40%50 nyamuk x 3150 nyamuk
Jumlah total larva yang dipakai dalam penelitian450 nyamuk
4. Relawan
Penelitian ini membutuhkan 3 orang relawan karena aktifitas
repellent bawang putih akan diujikan ke lengan relawan. Pengujian
pada lengan menurut WHOPES (2009) lebih sesuai dengan kondisi
pemakaian repellent yang sebenarnya, sehingga metode pengujian ini
yang dipilih. Relawan memiliki syarat tertentu yang harus dipenuhi,
yaitu tidak sensitif atau tidak memiliki alergi terhadap gigitan
nyamuk, selain itu relawan sebaiknya bukan perokok. Persetujuan
sebagai relawan maka sebelumnya relawan menandatangani informed
consent setelah diberikan penjelasan oleh peneliti mengenai
gambaran penelitian.D. Bahan dan Alat Penelitian
1. Bahan PenelitianBahan yang digunakan dalam penelitian ini
adalaha) Bawang Putih (Allium sativum L.) yang telah dihancurkan
sebanyak 100 gram.b) Ethanol 96% sebanyak 100 ml sebagai pelarut
dalam pembuatan ekstrak.c) Alkohol 70% sebanyak 100 ml sebagai
pengencer hasil ekstrak yang akan dioleskan pada tahap uji.d)
Akuades untuk tempat berkembang stadium larva dan pupa.e) Pelet
sebagai pakan untuk larva.2. Alat PenelitianAlat penelitian yang
digunakan dalam penelitian ini adalah
a. Aspirator, untuk menangkap dan memindahkan nyamuk.
b. Kurungan nyamuk, untuk meletakkan nyamuk pada saat melakukan
uji daya tolak dan untuk rearing nyamuk.
c. Stopwatch, untuk mengukur waktu pada saat menghitung jumlah
nyamuk Aedes aegyti yang hinggap.
d. Neraca analitik, untuk menimbang bawang putih (Allium sativum
L.) sebelum dihaluskan.
e. Gelas ukur, untuk mengukur jumlah air bawang.
f. Sarung tangan, untuk membatasi daerah lengan yang akan
diuji.g. Nampan, untuk meletakkan nyamuk saat stadium telur hingga
pupa.h. Saringan, untuk menyaring ekstrak bawang putih (Allium
sativum L.).i. Pipet larva, untuk memindahkan telur, larva, dan
pupa.j. Blender, untuk menghaluskan bawang putih (Allium sativum
L.).k. Gelas plastik, untuk meletakkan beberapa konsentrasi dari
bawang putih (Allium sativum L.).l. Mangkuk, untuk meletakkan pupa
nyamuk dan kemudian dimasukkan kedalam kurungan nyamuk.E. Prosedur
PenelitianPenelitian dibagi dalam 2 tahap, yaitu:1. Tahap
Persiapana) Preparasi Bahan UjiTelur nyamuk Aedes aegypti yang
dipakai pada penelitian ini diperoleh dari Loka Litbang P2B2
(Penelitian dan Pengembangan Pemberantasan Penyakit Bersumber
Binatang) Ciamis, Pangandaran, Jawa Barat. Bawang putih diperoleh
dari pasar terdekat..b) Rearing LarvaMelakukan rearing nyamuk,
telur nyamuk Aedes aegypti yang diperoleh dimasukkan kedalam nampan
yang berisi media air selama 1-2 hari hingga menetas menjadi
stadium larva instar I-IV yang berlangsung selama 7-8 hari. Selama
masa perkembangannya, larva tersebut diberi pakan berupa pelet
hingga akhirnya berkembang menjadi stadium pupa (fase tidak makan).
Kemudian pupa dipindahkan kedalam mangkuk yang berisi media air dan
untuk selanjutnya akan dibiarkan di dalam kurungan selama 1-2 hari
hingga berkembang menjadi nyamuk dewasa.c) AklimatisasiNyamuk Aedes
aegypti dewasa yang akan diuji ditangkap dengan menggunakan
aspirator dan dipindahkan kedalam kurungan nyamuk sebanyak 3 buah.
Masing-masing kurungan berjumlah 50 ekor. Kemudian nyamuk dibiarkan
dalam ruangan uji selama kurang lebih 24 jam.d) Pembuatan Ekstrak
Bawang Putih (Allium sativum L.)Disiapkan ekstrak bawang putih yang
diperoleh dari lingkungan sekitar tempat penelitian. Pembuatan
ekstrak bawang putih ini menggunakan pelarut berupa ethanol 96%.
Bawang putih sebanyak 100 g yang telah didapat kemudian dibersihkan
dengan menggunakan air kemudian dicacah halus atau diblender (tanpa
air). Setelah diblender bawang putih ditimbang terlebih dahulu baru
kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Setelah kering,
bawang putih direndam selama 24 jam di dalam ethanol 96% sebanyak
100 ml. Setelah direndam selanjutnya bahan tersebut disaring.
Proses selanjutanya dilakukan evaporasi pada ekstrak untuk
menghilangkan kandungan ethanol sehingga diperoleh hasil akhirnya
berupa repellent ekstrak bawang putih dengan konsentrasi 100% dalam
bentuk padat. Untuk membuat berbagai konsentrasi yang diperlukan
dapat digunakan rumus:
Keterangan:
V1= volume larutan mula-mula
M1= konsentrasi mula-mula
V2= volume larutan sesudah diencerkan
M2= konsentrasi sesudah diencerkanTabel 2. Jumlah Ekstrak Bawang
Putih yang Dibutuhkan pada PenelitianX1V2X2Pengulangan
(V1 x 3)
100%1 ml10%0,1 ml0,3 ml
100%1 ml30%0,3 ml0,9 ml
100%1 ml40%0,4 ml1,2 ml
Total2,4 ml
2. Tahap PenelitianUntuk menilai dosis efektif ekstrak bawang
putih, uji aktivitas repellent dilaksanakan mengikuti prosedur yang
direkomendasikan oleh World Health Organization Pesticides
Evaluation Scheme (2009). Uji aktivitas repellent ini menggunakan
subjek manusia, metode ini dipilih karena sesuai dengan kondisi
penggunaan yang sebenarnya.a. Persiapan ekstrak bawang putih
Ekstrak bawang putih diencerkan sampai didapatkan konsentrasi 10%,
30%, dan 40%. Pengencer alkohol digunakan sebagai kontrol negatif
dalam pengujian ini.b. Persiapan nyamuk Aedes aegypti Nyamuk betina
dipisahkan dari nyamuk jantan menggunakan aspirator. Kemudian 50
ekor nyamuk betina dimasukkan ke dalam kandang dengan volume
kandang 40x40x40 cm.c. Syarat syarat relawan
Relawan harus menghindari penggunaan minyak wangi atau produk
lainnya yang bersifat wewangian minimal 12 jam sebelum pengujian
dan selama pengujian. Relawan harus bukan seorang perokok atau
paling lama tidak merokok selama 12 jam dan tidak merokok selama
pengujian. Sebelum lengan relawan dimasukkan ke dalam kandang uji,
relawan menggunakan sarung tangan yang panjangnya sampai
pergelangan tangan.d. Uji repellent ekstrak bawang putihEkstrak
bawang putih akan diaplikasikan pada lengan bawah relawan. Sebelum
dan setelah percobaan setiap area tes (lengan bawah) dicuci dengan
sabun dan dibilas dengan air, kemudian dikeringkan. Pertama lengan
kiri sebagai kontrol dioleskan dengan 1 ml alkohol 70% kemudian
dimasukkan ke dalam kandang nyamuk dan mengamati serta mencatat
jumlah nyamuk yang hinggap dalam periode waktu 30 detik. Dalam 30
detik ini akan dipastikan bahwa nyamuk yang hinggap >10 untuk
memulai pengujian. Setelah 30 detik lengan tersebut dikeluarkan
dengan hati-hati dari kandang nyamuk. Kemudian lengan yang sama
diolesi dengan dosis paling rendah yaitu 10% ekstrak bawang putih.
Kemudian dimasukkan kembali ke dalam kandang untuk diamati selama
30 detik. Selama pengujian, lengan uji diusahakan untuk tidak
bergerak.Prosedur ini diulang untuk setiap kenaikan dosis. Uji
dilakukan berurutan dan harus dilaksanakan satu dengan lainnya
tanpa penundaan dan dosis repellent pada setiap tes dihitung
sebagai penjumlahan dosis untuk mendapatkan dosis kumulatif pada
setiap tes.Pada akhir pengujian dosis, 1 ml alkohol diolesi pada
lengan kanan kemudian dikeringkan kurang lebih 1 menit. Lengan
kanan relawan dimasukkan ke dalam kandang yang sama untuk
memastikan bahwa jumlah nyamuk yang hinggap pada lengan tersebut 10
nyamuk dalam periode waktu 30 detik.WHOPES (2009) merekomendasikan
uji dilakukan minimal dengan 3 kali pengulangan. Pengujian kedua
dan ketiga dilakukan pada hari yang berbeda, yaitu hari berikutnya
pada waktu uji yang sama. Nyamuk yang digunakan pada setiap ulangan
merupakan sampel yang berbeda dari sampel nyamuk yang digunakan
pada pengujian sebelumnya.Pada akhir pengujian persentase daya
proteksi dinilai sebagai proporsi jumlah nyamuk yang hinggap pada
lengan perlakuan dengan jumlah nyamuk yang hinggap pada lengan
kontrol, dengan formula sebagai berikut:
Keterangan:C = nyamuk kontak pada lengan kontrolT = nyamuk
kontak pada lengan perlakuanPersentase daya proteksi dinilai untuk
masing-masing konsentrasi dan dirata-ratakan dengan tiap
pengulangannya. Setelah didapatkan persentase daya proteksi pada
masing-masing konsentrasi dinilai konsentrasi yang efektif untuk
memperoleh persentase daya proteksi 50% dan 99,9%.
F. Identifikasi Variabel dan Definisi Operasional Variabel1.
Identifikasi Variabela. Variabel IndependenVariabel independen
adalah konsentrasi ekstrak bawang putih (Allium sativum L.).b.
Variabel dependenVariabel dependen adalah persentase daya proteksi
terhadap kontak nyamuk Aedes aegypti pada masing-masing konsentrasi
bawang putih (Allium sativum L.).2. Definisi Operasional Variabel
Untuk memudahkan jalannya penelitian, maka dibuat definisi
operasional sebagai berikut:Tabel 3. Definisi Operasional
NoVariabelDefinisiAlat UkurCara UkurHasil UkurSkala
1Ekstrak bawang putih (Allium sativum L.)
Bawang putih (Allium sativum L.) yang telah dicuci dan
dipotong-potong, diangin-anginkan, diblender dan direndam selama 24
jam dengan ethanol 96% kemudian disaring dan diperoleh konsentrasi
sebesar 100%.
Gelas ukur 100 ml dan timbang-an.Ditimbang gram bawang putih/ml
pelarut.Kadar (%)Numerik
2Berbagai konsentrasi ekstrak bawang putih (Allium sativum
L.)
Ekstrak bawang putih dinyatakan dalam persen (%). Masing-masing
konsentrasi dibuat dengan cara pengenceran. Pada penelitian ini
dipakai konsentrasi 10%; 20%; 30% dan kontrol 0% yang kemudian
dicari dosis untuk memperoleh persentase daya proteksi 50% dan
99,9% terhadap kontak nyamuk Aedes aegypti.Gelas ukur 100 ml dan
pipet ukur 1 mlDengan meng-gunakan pipet ukur ambil konsentrasi
larutan yang diujikan.Cairan dalam mililiterNumerik
3Nyamuk Aedes aegypti
Pada penelitian ini digunakan nyamuk Aedes aegypti betina yang
di rearing di laboratorium.
Kaca pembesar---
4Persentase daya proteksi
Persentase proporsi jumlah nyamuk yang hinggap pada lengan
perlakuan dengan jumlah nyamuk yang hinggap pada lengan kontrol
berdasarkan rumus pada pedoman WHO (2009), yaitu:
Keterangan:
C = nyamuk kontak pada lengan kontrolT = nyamuk kontak pada
lengan perlakuan
Daya proteksi dihitung untuk masing-masing konsentrasi, kemudian
dihitung untuk mencari persentase daya proteksi 50% dan 99,9%
terhadap nyamuk Aedes aegypti.Kaca pembesarDihitung secara manual
kemudian dihitung dengan rumus persentase daya proteksi
WHOPersentase daya proteksi (%)Numerik
G. Analisis Data
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan diuji analisis
statistik menggunakan program SPSS versi 17.0. Hasil penelitian
dianalisis secara statistik dengan uji normalitas (Shapiro-Wilk).
Jika distribusi data normal, dilanjutkan dengan metode one way
ANOVA. Namun, apabila distribusi data tidak normal, akan diuji
dengan uji Kruskal Wallis. Jika pada uji one way ANOVA menghasilkan
nilai p
