TEMA 11

METODOLOGÍA PARA LA TOMA Y TRANSPORTE DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS

TOMA DE MUESTRA DE ANAEROBIOS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO

� GENERALIDADES� IMPORTANCIA DE LA MICROBIOTA ANEROBIA� RECOLECCIÓN DE MUESTRAS PARA ANAEROBIOS� TRANSPORTE DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS A LABORATORIO

� TRANSPORTE INMEDIATO� SISTEMAS DE TRANSPORTE

� SISTEMA SCOTT DE DOBLE TUBO� CULTURETTESISTEMA PORT-A CULT� SISTEMA PORT-A CULT

� INOCULACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS� CONDICIONES DE TRABAJO� MEDIOS DE CULTIVO� TUBOS ROTATORIOS

� INCUBACIÓN DE MUESTRAS ANAEROBIAS EN EL LABORATORIO� ESTUFA ANAEROBIA� JARRA PARA ANAEROBIOS� SISTEMA GAS-PACK

MUESTRAS DE ANEROBIOS

� GENERALIDADES� IMPORTANCIA DE LA MICROBIOTA ANAEROBIA EN LOS DIFERENTES ÓRGANOS

BOCA 3-10:1

RELACIÓNANAEROBIOS:AEROBIOS

� BOCA 3-10:1� SURCOS GINGIVALES 100-1.000:1� ESTÓMAGO 1:1� INTESTINO DELGADO 1:1� INTESTINO GRUESO 100-1.000:1� VAGINA 5-10:1

ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR ANAEROBIOS

Abcesos en cualquier órgano

Infección periodontal

Otitis media

Sinusitis

Endocarditis, bacteriemia y septicemia

Empiema torácicoEmpiema torácico

Apendicitis, peritonitis

Endometritis y salpingitis, absceso ovárico

Osteomielitis

Artritis séptica

Gangrena gaseosa

Mionecrosis clostrídica

Tétanos

TIPOS DE MUESTRAS QUE PUEDEN CONTENER BACTERIAS ANAEROBIAS

� ORINA� PUNCIÓN SUPRAPÚBICA

� HECES� SANGRE, LCR, otros líquidos orgánicos� TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR

� ASPIRACIÓN TRASLARÍNGEA� TORACOCENTESIS� BRONCOSCOPIA� BRONCOSCOPIA

� OIDO� TIMPANOCENTESIS

� CAVIDAD ORAL Y DIENTES� APARATO GENITAL

� MASCULINO� FEMENINO

� HISOPADO DE ENDOCÉRVIX� BARTOLINITIS

� PUS, EXUDADOS Y QUEMADURAS� MUESTRAS DE CIRUGÍA

Muestras no adecuadas para el cultivo de anaerobios

� Orina de chorro medio

� Esputo expectorado

� Heces (sólo para investigar Clostridium difficile), ni hisopados rectales

� Hisopado faríngeo y nasofaríngeo� Hisopado faríngeo y nasofaríngeo

� Hisopado de encías

� Hisopado vaginal

� Superficie de úlceras

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS PARA ANAEROBIOS CON AGUJA Y JERINGA

� MUESTRA DE ORINA POR PUNCIÓN SUPRAPÚBICA

� MUESTRA DE ORINA DE CATÉTER

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS CON AGUJA Y JERINGA

� Sangre� LCR� Otros líquidos orgánicos (sinovial, ascítico, etc.)� Abcesos, flemones, focos piogénicos

TRANSPORTE AL LABORATORIO DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS RECOGIDAS CON AGUJA Y JERINGA

MUESTRAS DEL TRI

� ASPIRACIÓN TRANSLARÍNGEA� CULTIVO DEL CATÉTER

� TORACOCENTESIS

� BROCOSCOPIA� CON CEPILLADO � CON CEPILLADO BRONQUIAL

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS CON HISOPO Y TRANSPORTE AL LABORATORIO

� Hisopado de endocérvix

� Hisopado de heridas, abscesos

� Transporte de hisopos al laboratorio� Sistema Culturette

� Sistema Scott de doble tubo

� Sistema Port-a-Cult

RECOLECCIÓN Y

TRANSPORTE DE MUESTRAS

DE ANAEROBIOS

EXAMEN MACROSCÓPICO DE LAS MUESTRAS

� Olor fétido

� Aspecto purulento

� Tejido necrótico

Presencia de gas� Presencia de gas

� Gránulos de azufre

EXAMEN MICROSCÓPICO DE LAS MUESTRAS

� Tinción de gram: muchas infecciones anaerobias pueden ser polimicrobianas

� Tinción y observación de esporas (puede indicar Clostridium)

� Observación de ramificaciones en los extremos de las células o filamentos (puede indicar Actynomices)Observación de ramificaciones en los extremos de las células o filamentos (puede indicar Actynomices)

� Observación células fusiformes (puede indicar Fusobacterium)

PRUEBAS PREVIAS AL CULTIVO

� Cromatografía de gases

MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS

Agar sangre para anaerobios con L-cistina, hemina y vitamina K

Agar chocolate

Medio no selectivo de uso general

Utilizado principalmente para aislar especies de Neisseria y Haemophilus; sin embargo, se puede requerir también para el aislamiento de anaerobios exigentes

Agar sangre con alcohol fenil etílico (PEA)/Agar Columbia con colistina y ácido nalidíxico (CNA)

Agar KVLB (kanamicina, vancomicina, sangre lacada)

Caldo tioglicolato (enriquecido con L-cistina, hemina y vitamina K)

Caldo de carne picada

aislamiento de anaerobios exigentes

Aislamiento de anaerobios obligados gram positivos

Aislamiento selectivo de bacilos gram negativos anaerobios

Caldos de enriquecimiento que se pueden usar como suplemento de medios sólidos particularmente si la muestra escasa (se pueden añadir unas gotas de parafina líquida para mantener mejor la atmósfera anaerobia). Subcultivar en medio para anaerobios

MEDIOS ANAEROBIOS PREINCUBADOS EN ANAEROBIOSIS

INCUBACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS

� ESTUFA PARA ANAEROBIOS

INCUBACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS

� JARRAS PARA ANAEROBIOS

INCUBACIÓN DE MUESTRAS DE ANAEROBIOS

� SISTEMA GAS-PACK

BO3H3 / Al/ Pd H2

H2 + O2 H2O

H2O + NaHCO3 CO2

Catalizador en la tapa

Debe aumentar la temperatura de la tapa

Indicador de azul de metileno