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8/16/2019 Metodos de Inmobilización de Enzimas
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BioquímicaEnzimas
2016
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METODOS DEINMOVILIZACIÓNDE ENZIMAS
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n!ic"
Introducción--------------------------------------------------------------------------4
Desarrollo-----------------------------------------------------------------------------5
• Definición de inmovilización de enzimas------------------------------5• Propiedades cinéticas de la enzima inmovilizada------------------5• Clasificación de los métodos de inmovilización---------------------5• Tipos de métodos de inmovilización de enzimas-------------------7
• Métodos de atrapamiento encapsulación-------------------7• Métodos de unión a un soporte----------------------------------!
• "ntrecruzamiento #reticulado o cross-lin$in%&---------------'5• (enta)as desventa)as de la inmovilización enzimatica-'*• Conclusión-------------------------------------------------------------------'!• +i,lio%rafa-------------------------------------------------------------------./
In#$o!ucci%n
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0as enzimas son protenas especializadas en la cat1lisis de reacciones
,io2umicas3 son catalizadores naturales3 es decir3 son ,iocatalizadores
Destacan por ser etraordinariamente especificas con un poder cataltico muc6o
maor 2ue el de los catalizadores ela,orados por el 6om,re
0os procesos catalizados por enzimas en la industria son cada da m1s
numerosos3 a 2ue presentan una serie de venta)as frente a los catalizadores
convencionales no ,ioló%icos
• Presentan una %ran actividad cataltica
• Muestran una %ran especificidad de sustrato
• 8on mu activos a temperatura am,iente presión atmosférica
9 pesar de estas claras venta)as3 el empleo de enzimas no se 6a %eneralizado
en los procesos 2umicos industriales de,ido a 2ue la maora de las enzimas no
son esta,les en las condiciones de tra,a)o Por otra parte al ser solu,les en
a%ua3 su separación de los sustratos productos es difcil3 por tanto3 no se
pueden reutilizar
"n esta investi%ación se detallan los métodos m1s utilizados para la
inmovilización de enzimas los cuales cu,ren los :ltimos inconvenientes dado 2ue
permite una me)ora si%nificativa de la esta,ilidad alar%ando el tiempo de uso
prote%iéndolas de las variaciones am,ientales como el p;3 temperatura3disolventes3 sales3 autodestrucción3 in6i,idores venenos3 lo 2ue 6ace posi,le
su empleo en la producción industrial de productos 2umicos3 farmacéuticos3
alimentos3 en el tratamiento de residuos3 en el dia%nóstico tratamiento de
enfermedades3 otras muc6as aplicaciones3 esto permite 2ue los procesos
,iotecnoló%icos sean económicamente renta,les siempre cuando no se alteren
si%nificativamente las propiedades cinéticas de las enzimas
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D"sa$$o&&o
Definición de Inmovilización de enzimas
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ten%a atrapada 0os procedimientos m1s comunes de inmovilización
irreversi,le son el enlace covalente3 enlace cruzado3 atrapamiento micro
encapsulado
• Métodos de Inmovilización Reversible
"n el método de inmovilización reversi,le son los métodos de adsorción a
2ue las enzimas inmovilizadas pueden ser desprendidas del soporte ,a)o
condiciones no etremas "l uso de métodos reversi,les para la inmovilización
de enzimas es altamente atractivo3 principalmente por razones económicas
de,ido a 2ue el 8oporte puede re%enerarse recar%arse con enzimas nuevas
cuando la actividad enzim1tica decae "isten distintos método de
inmovilización reversi,le 2ue se descri,en m1s adelante
ambién se clasifican en métodos de inmovilización f!sica o
"u!mica:
• Métodos de Retención #!sica: 92u entran los métodos de atrapamiento
encapsulación
• Métodos de $nión "u!mica: Incluen los de unión a soporte el
entrecruzamiento
Cada uno de los métodos antes mencionados se desarrolla a continuación
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ipos de métodos de Inmovilización de enzimas
Métodos de atrapamiento % encapsulación
8on métodos 2ue no necesitan de nin%una
propiedad 2umica de la enzima3 por lo 2ue son de
aplica,ilidad %eneral3 etendiéndose su uso a células
a or%1nulos
Durante estos métodos las moléculas de enzimas
se mantienen li,res en la solución3 pero restrin%idas
en una c1psula por una red o mem,rana de %el
Consiste en la retención fsica de la enzima en las
cavidades interiores de una matriz sólida porosa
constituida por prepolmeros fotoentrecruza,les o polmeros de tipo
poliacrilamida3 col1%eno3 al%inato3 carra%inato o resinas de poliuretano "l
proceso de inmovilización se lleva a ca,o mediante suspensión de la enzima en
una solución del monómero3 se%uidamente se inicia la polimerización 0a
estructura del polmero 2ue atrapa de,e ser lo suficientemente fuerte para
prevenir el lavado de la enzima a la vez lo suficientemente a,ierto para de)ar
penetrar el sustrato salir el producto
"isten diversas técnicas de atrapamiento encapsulación de enzimas como
el de %el #+ernfeld >an3 '!*?& o atrapamiento por fi,ras #Dinelli et al3 '!7*&3
microencapsulado #>adiac$ Car,onell3 '!75& por inclusión3 al%unas de estas
se descri,en a continuación
écnica de gel: "s la m1s ampliamente usada trata de la oclusión de la
enzima o celulosa micro,iana en %el de poliacrilamida 0a acrilamida es
polimerizada en presencia de un enlazador cruzado en un medio acuoso
conteniendo la enzima disuelta "l ,lo2ue de %el resultante puede ser
mec1nicamente dispersado en partculas del tama@o deseado
'i(u$a 1)Inmo*i&izaci%n +o$
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&trapamiento en fibras permite el atrapamiento de enzimas en la red
formada por fi,ras se%:n estas se van formando por el procedimiento de
6ilado en 6:medo3 con aparatos similares a los de la industria tetil 8e
etrusiona el polmero solu,ilizado en un disolvente or%1nico 2ue est1
formando emulsión con la disolución acuosa de enzima so,re otro disolvente
or%1nico3 como tolueno o éter de petróleo3 donde el polmero precipita3
atrapando micro%otas de la solución enzim1tica en sus cavidades "ste
método es me)or 2ue el atrapamiento en %el3 pues el 1rea de contacto red-
enzima es muc6o maor las propiedades de las fi,ras son me)ores 2ue las
de los %eles como maor resistencia a 1cidos ,ases dé,iles3 a disolventes
or%1nicos a fuerzas iónicas altas 8e pueden inmovilizar varias enzimas
#inmovilización multienzim1tica&3 aun2ue se re2uiere 2ue el sustrato osustratos no ten%an peso molecular alto "l polmero m1s usado por su
,iocompati,ilidad ,a)o costo es el acetato de celulosa 0a retención de
actividad es alta3 posi,lemente por2ue la enzima est1 en un entorno acuoso
el tiempo de contacto con los disolventes or%1nicos es corto microencapsulación: "n este método3 la enzima
2ueda atrapada en una mem,rana polimérica
esférica de di1metro comprendido entre ' '//
m3 a través de la cual difunden sustratos
productos3 lo 2ue permite la coinmovilización de
varias enzimas "isten varios métodos para
realizar la microencapsulación coacervación
#separación de fase&3 polimerización interfacial3
mem,rana surfactante #del in%lés surface active
a%ent A surfactant3 activo en la superficie& l2uida
secado de l2uidos #>iseman3 '!B5&
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o coacervación: "s un método 2umico de separación de fases "l soluto
polimérico separado en forma de pe2ue@as %otas l2uidas3 constitue el
coacervado 0a deposición de este coacervado alrededor de partculas
insolu,les dispersas en un l2uido forma c1psulas incipientes 2ue3 por una
%elificación apropiada3 da las c1psulas finales 0a coacervación puede ser
iniciada por diferentes formas cam,ios de p;3 temperatura o adición de
una se%unda sustancia como una sal iónica= este método es eficiente pero
costoso Para el proceso de microencapsulación al%unos ,iopolmeros 6an
sido utilizados para su uso como co,erturas #%oma ar1,i%a %renetina&o Polimerización interfacial 'Incompatibilidad polimérica(: "ste método
utiliza el fenómeno de separación de fases en una mezcla de dos
polmeros 2umicamente diferentes e incompati,les en un mismo solvente"l material a encapsular interaccionar1 sólo con uno de los dos polmeros
el cual se adsor,e en la superficie del material a encapsular formando una
pelcula 2ue lo en%lo,a
Métodos de unión a un soporte
"n estos métodos la enzima interacciona con la superficie de un soporte3
%eneralmente poroso "stas interacciones modifican la estructura espacial de la
enzima e3 incluso3 pueden alterar su estructura 2umica3 lo 2ue provoca
variaciones de su comportamiento como catalizador actividad3 esta,ilidad3
afinidad por sus sustratos3 etc 0a influencia de estas variaciones en las
propiedades de la enzima depende del método utilizado3 siendo menores cuanto
menos enér%icas sean las interacciones enzima-sustrato rdenando los
diversos métodos de inmovilización de maor a menor fuerza de unión soporte-
enzima se o,tiene
"nlace covalente enlace iónico enlace met1lico adsorción fsica
• Métodos de adsorción: "n estos métodos la enzima es retenida en un
soporte sólido por fuerzas diferentes al enlace covalente #por e)emplo enlace
ionico3 fuerzas de (an der >aals3 puente de 6idró%eno3 etc& 0a naturaleza de
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las fuerzas involucradas en la inmovilización no covalente resulta en un
proceso 2ue puede ser reversi,le cam,iando las condiciones 2ue influen en
la resistencia de la interacción 0a fuerza del enlace es relativamente dé,il
sumamente sensi,le a cam,ios de p;3 fuerza iónica temperatura "stos
métodos tienen la %ran venta)a de ser sencillos 0os soportes m1s usados son
polmeros or%1nicos3 sales minerales3 óidos met1licos varios metales
silceos o intercam,iadores iónicos como D"9"-8ep6ade D"9" celulosa3
aun2ue tam,ién pueden usarse soportes inor%1nicos
'i(u$a ,) Inmo*i&izaci%n +o$ a!so$ci%n
8e pueden usar diversas técnicas para 2ue la enzima entre en contacto con
el soporte procedimiento est1tico3 electrodeposición3 proceso en reactor
,afio con a%itación 0a m1s usada en el la,oratorio es la :ltima3 en la 2ue la
solución enzim1tica es puesta en contacto con el sólido en un tan2ue
termostatizado #2ue se mantiene a cierta temperatura& a%itado por vi,ración3
vaivén o movimiento or,ital3 con lo 2ue se lo%ra una deposición uniforme de
enzima 0a inmovilización se suele llevar a ca,o comercialmente en reactor3
2ue puede ser un lec6o fi)o o fluidizado o un tan2ue a%itado por 6élice3 paleta
o tur,ina3 al 2ue la solución enzim1tica se recircula o en el 2ue se a%ita dic6a
solución3 respectivamente "n el procedimiento de adsorción por
electrodeposición3 el soporte se coloca cerca de un electrodo la enzima
mi%ra 6acia él de,ido a la atracción eléctrica "l procedimiento est1tico es el
m1s lento ori%ina una deposición no uniforme3 a 2ue no 6a a%itación0os si%uientes son los diferentes enlaces 2ue se pueden dar por el método de
adsorción
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o &dsorción f!sica: 0as enzimas son unidas a la matriz a través de
puentes de 6idró%eno3 fuerzas de van der >aals3 o interacciones
6idrofó,icaso )nlace iónico: 0os enlaces iónicos de enzimas son producidos a través
de uniones con sales "n este caso se usan resinas intercam,iadoras de
iones3 2ue tienen %rupos superficiales 2ue pueden sustituir su unión
iónica a un catión o anión por uniones similares a radicales polares de la
enzima "sta unión es m1s fuerte 2ue la mera adsorción fsica3 aun2ue
no tanto como el enlace covalente "l principal pro,lema asociado a este método de inmovilización es
conse%uir 2ue la enzima se una al soporte con suficiente fuerza para 2ue
la pérdida de enzima por lavado durante la operación del reactor 2ue
conten%a la enzima inmovilizada sea mnima Con este o,)eto se
modifican 2umicamente los amino1cidos superficiales de las enzimas o
se modifican por In%eniera Eenética a@adiéndoles %rupos peptdicos
mu car%adoso )nlace met*lico: 8on a2uellas técnicas de inmovilización 2ue utilizan la
formación de 2uelatos entre metales de transición enzimas3 0os
metales de transición empleados con m1s frecuencia son el titanio #I(&
el zirconio #I(&3 a 2ue sus óidos no son tóicos De 6ec6o3 los clorurosde estos metales3 as como los de vanadio #III&3 6ierro #III& esta@o #I(&3
forman 6idróidos en medio 1cido3 2ue precipitan como %eles3 por lo 2ue
pueden ser usados como soportes para la inmovilización de enzimas 8in
em,ar%o3 el empleo de soportes porosos es m1s adecuado por sus
propiedades mec1nicas 3 en este caso3 la técnica consiste en depositar
una capa de 6idróido del metal so,re la superficie de los poros
•
Método de enlace covalente: 0a unión de las enzimas a los soportesmediante enlaces covalentes es3 pro,a,lemente3 el método %eneral de
inmovilización m1s conocido desarrollado3 dado el au%e de la sntesis
or%1nica3 es el m1s utilizado 6asta el momento3 a escala industrial en
la,oratorio para la fi)ación de enzimas a soportes "n este método3 se produce
una reacción 2umica 2ue ori%ina un enlace irreversi,le o reversi,le sólo en
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condiciones mu especficas entre la enzima los %rupos reactivos del
soporte 9 este tipo de enlace se a@aden siempre fuerzas electrost1ticas 2ue
consolidan la fi)ación 0a reacción 2umica de formación del enlace covalente
de,e ser poco desnaturalizante para la macromolécula ,ioló%ica= para ello3 es
necesario proceder a una activación previa de los %rupos del soporte
suscepti,les de reaccionar con la enzima
'i(u$a -) Inmo*i&izaci%n +o$ "n&ac" co*a&"n#"
)nlace por afinidad: "ste método de inmovilización se ,asa en 2ue las
enzimas3 al i%ual 2ue los anticuerpos otras protenas3 tienden a fi)arse a
determinados moléculas or%1nicas por las 2ue tienen afinidad3 formando
comple)os esta,les reversi,les con estas moléculas "sta propiedad 6a sido
utilizada en los :ltimos a@os para la inmovilización de enzimas a soportespoliméricos 8u inmovilización en soportes inor%1nicos sera similar3 aun2ue
con al%unas modificaciones en la activación del soporte Cuando la enzima o
protena no presente afinidad por determinados %rupos funcionales de
soportes comerciales3 se pueden a@adir a la protena dominios proteicos con
afinidad por tales %rupos utilizando técnicas de In%eniera Eenética "ste
6ec6o permite o,tener enzimas con una amplia variedad de actividades 2ue
se unan a soportes comerciales
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evidentemente3 6a li%andos especficos para muc6as enzimas 2ue se unen a
los %rupos alostéricos de las mismas
ipos de soportes:
8e pueden dividir en or%1nicos o inor%1nicos
soportes org*nicos: admiten maor car%a enzim1tica3 son m1s f1ciles de
modificar 2umicamente para la inmovilización de enzimas3 presentan una
porosidad adecuada para este fin suelen ser ,aratos Por contra3 ca,e
destacar su tendencia a cam,iar de tama@o lo 2ue modifica su porosidad 3
por tanto3 el comportamiento del ,iocatalizador en el reactor- sucompresi,ilidad -lo 2ue 6ace inadecuado el empleo de lec6os fi)os- su
tendencia a ser fuente de car,ono de microor%anismos invasores3 como
ocurre al utilizar polmeros naturales como la a%arosa3 la sefarosa3 el a%ar3 la
celulosa3 la 2uitina3 etc0os soportes or%1nicos pueden sero Polmeros naturales
- Polisac1ridos #celulosa3 almidón3 detranos3 a%ar-a%ar3 a%arosa3
al%inatos3 2uitina3 - Protenas fi,rosas #col1%eno3 2ueratina3 etc&o Polmeros sintéticos
- Poliolefinas #poliestireno&- Polmeros acrlicos #poliacrilatos3 poliacrilamidas3 polimetacrilatos3
etc&- tros #alco6ol polivinlico3 poliamidas3 etc&
soportes inorg*nicos o cer*micos: presentan una menor afinidad por las
enzimas por los compuestos or%1nicos en %eneral necesitan activar su
superficie mediante reacciones con diferentes a%entes or%anofilizadores
#como los silanos& o con sustancias 2umicas de otra clase 2ue introduzcan
funciones or%1nicas en dic6a superficie3 con las 2ue puedan reaccionar las
enzimas o al%una molécula or%1nica 2ue 6a%a de puente Por ello3
%eneralmente3 admiten menor car%a de enzima Como venta)as3 se puede
citar 2ue son poco ataca,les por microor%anismos3 presentan una estructura
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porosa r%ida definida3 no son compresi,les3 tienen una vida :til lar%a3 son
f1ciles de mane)ar3 son resistentes a los disolventes or%1nicos se pueden
re%enerar mediante pirólisis 9dem1s3 suelen ser ,aratos #al menos3 los 2ue
tienen posi,ilidad de uso industrial&
0os soportes inor%1nicos pueden ser
o Faturales arcillas como ,entonita3 piedra pómez3 slice3 etc
o Manufacturados óidos de metales vidrio de tama@o de poro
controlado3 vidrio no poroso3 al:mina3 cer1micas3 %el de slice3 etc
)n cual"uier caso un soporte debe cumplir con los siguientes re"uisitos
m!nimos:
o #!sicos: resistencia mec1nica3 incompresi,ilidad en el ran%o de varia,les
de proceso utilizado3 superficie intema adecuada3 forma %eométrica 2ue
facilite su mane)o empa2uetamiento3 permea,ilidad al sustrato3 densidad
maor 2ue el l2uido3 pérdida acepta,le de car%a en el reactoro +u!micos: ;idrofilicidad #alta polaridad de la superficie&3 no reactividad
con la enzima3 %rupos funcionales en superficie suficientemente reactivos
o f1ciles de activaro De estabilidad: mec1nica de almacenamientoo Resistencias: al ata2ue por ,acterias 6on%os3 al p;3 a la temperatuira3
a la fuerza iónica3 a los disolventes or%1nicoso De seguridad: ,iocompati,ilidad3 no toicidado )conómicos: Disponi,ilidad elevada coste ,a)o3 simplicidad del e2uipo
2ue necesita para su modificación de la 6a,ilidad técnica re2uerida para
su mane)o3 posi,ilidad de cam,io de escala uso en procesos en
continuo3 periodos elevados de utilidad posi,ilidad de reutilizacióno De reacción: escasas limitaciones a la transferencia de materia
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'i(u$a .) Mic$o"s#$uc#u$a !" a&(unos so+o$#"s !"ma#"$ia&"s usa!os +a$a inmo*i&izaci%n "nzim/#ica
)ntrecruzamiento 'reticulado o cross,lin-ing(
Mediante )nlace cruzado: "ste método se considera el m1s efectivo de todoslos mencionados anteriormente Con esta técnica los soportes no son
necesarios3 a 2ue la inmovilización se da por un enlace directo entre enzimas3
2ue puede ser mediado o no por un a%ente de unión
Eeneralmente se a@ade el a%ente de ,a)o peso molecular a la enzima en
solución3 uniendo covalentemente los %rupos funcionales de las enzimas para
formar a%re%ados
9un cuando el método es sencillo no 6a sido ampliamente utilizado3 de,ido a
las dificultades en el control del tama@o propiedades mec1nicas de los
a%re%ados "n casi todos los casos el a%ente de enlazamiento cruzado es el
%lutaralde6ido3 un dialde6ido 2ue reacciona con aminas primarias para formar
enlaces esta,les
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9un2ue el a%ente entrecruzante m1s usado es el %lutaralde6ido3 tam,ién se
usan detranos de peso molecular medio alto3 poliaminas otros polmeros
"stos polmeros tienen m1s de dos %rupos funcionales :tiles para el
entrecruzamiento3 por lo 2ue se llaman a%entes multifuncionales Con ellos se
o,tiene un entrecruzamiento m:ltiple tanto en la superficie de la enzima como de
enzima a enzima "ste entrecruzamiento suele ser m1s flei,le desactiva
menos la enzima 2ue el entrecruzamiento lo%rado con %lutaralde6ido3 pero
puede ,lo2uear o dificultar el paso de los sustratos al centro activo3 por el 6ec6o
de crear una red polimérica so,re la superficie enzim1tica 9un as3 el método
lo%ra esta,ilizar la enzima frente a a%entes desactivantes como la temperatura3
los a%entes caotrópicos o el p;
.enta/as % desventa/as de la inmovilización enzim*tica
Como venta/as de la inmovilización podemos destacar:
• 9umento de la actividad en solventes or%1nicos• 9umento de la enantioselectividad• "l aumento de la esta,ilidad de la enzima• 0a posi,le reutilización del derivado3 por lo 2ue disminuen los costos del
proceso• 0a posi,ilidad de dise@ar un reactor enzim1tico de f1cil mane)o control
adaptado a la aplicación de la enzima inmovilizada "sto permite me)oras
en la separación del producto adem1s de la posi,ilidad de aumentar la
concentración de catalizador de forma si%nificativa respecto a un proceso
en el 2ue se encuentra en suspensión Todo lleva a un aumento en
productividad 2ue 6ace al proceso económicamente m1s renta,le• "l estudio ,io2umico de sistemas proteicos in vivo 2ue difcilmente
podran ser simulados en soluciones 6omo%éneas
Como desventa/as de la inmovilización podemos destacar:
• "l derivado inmovilizado es m1s caro 2ue la enzima nativa a 2ue se
a@ade una etapa en la preparación del catalizador
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• 0a %ran 6etero%eneidad del sistema enzima-soporte donde pueden eistir
distintas fracciones de protenas inmovilizadas con diferente n:mero de
uniones al soporte• 8uele 6a,er una pérdida de actividad de la enzima durante la
inmovilización 9 menudo la inmovilización altera si%nificativamente el comportamiento de las
enzimas "n primer lu%ar en cuanto a su esta,ilidad en se%undo lu%ar en
cuanto a su actividad
Eeneralmente se o,serva un aumento en la esta,ilidad de las enzimas
después de su inmovilización de,ido a las si%uientes razones
• "sta,ilización conformacional de la enzima de,ido a la eistencia de
uniones multipuntuales enzima-soporte 9s la estructura terciaria de la
enzima ad2uiere maor ri%idez maor esta,ilidad "ste tipo de
esta,ilización se ad2uiere :nicamente en a2uellos métodos en los 2ue
intervienen enlaces de tipo covalente como el reticulado o la unión a
soportes #m1s adelante se detallan los métodos de inmovilización&• Protección frente a proteasas 8e 6a visto 2ue la unión de proteasas a
soportes elimina su capacidad proteoltica• 8e evita a%re%ación intermolecular al mantener las moléculas de enzima
retenidas en una determinada re%ión del espacio
• 9lteración del microentorno de la enzima "l microentorno de la enzima3
#p;3 contenido de a%ua3 concentración de sustrato3 o%eno3 etc 2ue GveH
la molécula de enzima& estar1 determinado por las propiedades 2umicas
del soporte3 pudiendo ser mu diferentes a las caractersticas del seno del
medio de reacción
9s mismo3 la inmovilización afecta la actividad enzim1tica "n este conteto
podra producirse la pérdida total de actividad de,ida a las si%uientes causas
• 0a unión al soporte se produce de tal forma 2ue el paso del sustrato al
centro activo est1 impedido
• 0os %rupos reactivos del soporte reaccionan con al%:n amino1cido 2ue
forme parte del centro activo o 2ue sea esencial para la actividad cataltica
de la enzima
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• 0a inmovilización puede %enerar un cam,io conformacional 2ue da lu%ar a
una forma inactiva
• 0as condiciones eperimentales del proceso causan desnaturalización o
desactivación de la enzima
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Conc&usi%n
Cada método de inmovilización es mu diferente uno del otro3 unos utilizan
soportes para darle esta,ilidad3 otros atrapan o encapsulan la enzima otros
métodos enlazan las enzimas3 la elección del método a utilizar se ,asa se%:n el
tipo de enzima3 el medio en el 2ue este o los materiales 2ue se puedan
conse%uir
8e puede concluir 2ue3 la inmovilización enzim1tica puede ser mu :til en
procesos industriales dado 2ue permite la reutilización de la enzima por2ue evita
2ue esta se pierda en las primeras reacciones3 sin em,ar%o los métodos de
inmovilización de,en realizarse con suma eactitud para no perder o alterar
demasiado la enzima 2ue esta pueda servir para realizar otras reacciones
"n todo proceso de inmovilización ocurre una disminución o aumento de la
actividad enzim1tica por lo tanto se de,e cuidar 2ue esta no sea per)udicial #mu
alta o mu ,a)a& para el proceso sea costea,le
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Bi&io($aa
• Consuelo Pizarro Mill1n3 José Mara Eonz1les 81iz #'!!4& Eeles
poliméricos II aplicaciones en ,iotecnolo%a Ku,a3 (olumen '.3 p%'*'-
'*?
• Departamento de +ioprocesos +iotecnolo%a #.//7&
Microencapsulación de compuestos de actividad ,ioló%ica Pu,licación
anual del la,oratorio tecnoló%ico del
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• 6ttp,i,liotecaucmestesis'!!7.///U/
U//4?B/.pdf
http://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/X0043802.pdfhttp://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/X0043802.pdfhttp://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/X0043802.pdfhttp://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/X0043802.pdf