METODY TESTOVÁNÍ GENOTOXICITY

METODY METODY TESTOVÁNÍ TESTOVÁNÍ

GENOTOXICITYGENOTOXICITY

Testy genotoxicityčlenění dle řady kritérií

Druh organizmu:

Alternativní metody:

Úkoly EU pro testování genotoxicity

bakterierostlinyobratlovci

jednoduché organizmytkáňové kultury

- minimální počet zvířat- bezbolestivé procedury- preference testů in vitro (tkáňové kultury)

UPRAVUJE

VYHLÁŠKA 443 / 2004 Sb. kterou se stanoví základní metody pro zkoušení toxicity chemických

látek a chemických přípravků

Dále uvedené a popsané metody jsou v souladu

s právem Evropského společenství

Příloha č. 1 - Seznam základních metod pro zkoušení toxicity chemických látek nebo přípravků

B.1 bisB.1 bis Akutní toxicita orální (per os) - Akutní toxicita orální (per os) -

metoda fixní dávkymetoda fixní dávky

Seznam základních metod pro zkoušení Seznam základních metod pro zkoušení toxicity chemických látek nebo přípravkůtoxicity chemických látek nebo přípravků

B.1 trisB.1 tris Akutní toxicita orální (per os) -Akutní toxicita orální (per os) - metoda stanovení třídy metoda stanovení třídy

akutní toxicity akutní toxicity


B.2B.2 Akutní toxicita inhalační Akutní toxicita inhalační


B.3B.3 Akutní toxicita dermální Akutní toxicita dermální


B.4B.4 Kožní dráždivostKožní dráždivost


B.5B.5 Oční dráždivostOční dráždivost


B.6B.6 Senzibilizace kůže Senzibilizace kůže


B.7B.7 Subakutní toxicita orální (per os) Subakutní toxicita orální (per os) (28denní opakovaná aplikace) (28denní opakovaná aplikace)


B.8B.8 Subakutní toxicita inhalačníSubakutní toxicita inhalační

(28denní opakovaná aplikace)(28denní opakovaná aplikace)


B.9B.9 Subakutní toxicita dermální Subakutní toxicita dermální (28denní opakovaná aplikace) (28denní opakovaná aplikace)


B.10B.10 Mutagenita – testMutagenita – test chromozómových chromozómových aberací u savčích buněk in vitro aberací u savčích buněk in vitro


(tkáňová kultura savčích buněk se vystaví (tkáňová kultura savčích buněk se vystaví expozici testované látky bez metabolické expozici testované látky bez metabolické aktivace nebo po předchozí metabolické aktivace nebo po předchozí metabolické aktivaci)aktivaci)

B.11B.11 Mutagenita - test chromozómových Mutagenita - test chromozómových aberací v kostní dřeni savců in vivoaberací v kostní dřeni savců in vivo


(zvíře se vystaví působení testované látky a (zvíře se vystaví působení testované látky a následně se před usmrcením aplikuje např. následně se před usmrcením aplikuje např. kolchicin pro zastavení mitoz ve vhodné kolchicin pro zastavení mitoz ve vhodné fázi – metafázi)fázi – metafázi)

B.12B.12 Mutagenita - in vivo mikronukleus Mutagenita - in vivo mikronukleus test v savčích erytrocytech test v savčích erytrocytech


(vychází z předpokladu, že testovaná látka (vychází z předpokladu, že testovaná látka vytváří fragmentaci DNA a vznik vytváří fragmentaci DNA a vznik mikrojader, které se v preparátu buněk mikrojader, které se v preparátu buněk např. z kostní dřeně zjišťují – obdoba např. z kostní dřeně zjišťují – obdoba „kometového testu“)„kometového testu“)

B.13/14B.13/14 Mutagenita - test reverzních Mutagenita - test reverzních

mutací u baktérií mutací u baktérií (Amensův(Amensův test) test)


(plotna s naočkovanými bakteriemi se (plotna s naočkovanými bakteriemi se vystaví působení test. látky a vyhodnocuje vystaví působení test. látky a vyhodnocuje se vznik reverzní mutace – získání se vznik reverzní mutace – získání schopnosti tvořit určitý metabolit)schopnosti tvořit určitý metabolit)

B.15B.15 Genové mutace - Saccharomyces Genové mutace - Saccharomyces cerevisiae cerevisiae


(obdoba metody B.14 s tím, že se využívají (obdoba metody B.14 s tím, že se využívají namísto bakterií kvasinky, které mohou být namísto bakterií kvasinky, které mohou být buď v haploidní nebo diploidní formě)buď v haploidní nebo diploidní formě)

B.16B.16 MitotickMitotickáá rekombinace - rekombinace - Saccharomyces cerevisiaSaccharomyces cerevisiaee


(specifická metoda založená na zjišťování (specifická metoda založená na zjišťování výskytu rekombinací po působení testované výskytu rekombinací po působení testované látky)látky)

B.17B.17 Mutagenita - test genových mutací Mutagenita - test genových mutací v savčích buňkách in vitro v savčích buňkách in vitro


(použije se klon savčích buněk s forward (použije se klon savčích buněk s forward mutací – ztrátou např. určitého enzymu mutací – ztrátou např. určitého enzymu nebo jeho aktivity a po expozici testovanou nebo jeho aktivity a po expozici testovanou látkou se měří reverzní mutační frekvence)látkou se měří reverzní mutační frekvence)

B.18B.18 Poškození DNAPoškození DNA a a reparace reparace


(po záměrném odstranění části DNA se (po záměrném odstranění části DNA se měří po expozici testované látky rychlost měří po expozici testované látky rychlost reparace např. s využitím inkorporace reparace např. s využitím inkorporace radioaktivně značeného thiminu)radioaktivně značeného thiminu)

B.19B.19 SCE - výměna sesterských SCE - výměna sesterských chromatid in vitro chromatid in vitro


(výměna úseků mezi chromatidami jako (výměna úseků mezi chromatidami jako důsledek působení testované látky vyžaduje důsledek působení testované látky vyžaduje jejich zlom a opětovné spojení – metoda jejich zlom a opětovné spojení – metoda detekuje výměnu chromatid, což umožňuje detekuje výměnu chromatid, což umožňuje jejich rozdílné značení) jejich rozdílné značení)

B.20B.20 Recesivní letální mutace vázané Recesivní letální mutace vázané na pohlaví u Drosophila na pohlaví u Drosophila melanogaster melanogaster


(využívá toho, že recesivní mutace v X (využívá toho, že recesivní mutace v X chromozomu se projeví u samců v chromozomu se projeví u samců v hemizygotním stavu, jde-li o letální mutace hemizygotním stavu, jde-li o letální mutace genu v X chromozomu znamená, že v genu v X chromozomu znamená, že v potomstvu D.m. se nevyskytují samečci)potomstvu D.m. se nevyskytují samečci)

B.21B.21 Test transformace savčích buněk Test transformace savčích buněk in vitro in vitro


(po působení testované látky se měří vznik (po působení testované látky se měří vznik morfologických změn v buňkách tkáňové morfologických změn v buňkách tkáňové kultury, např. vznik maligních transformací kultury, např. vznik maligních transformací – vhodný test pro stanovení karcinogenity)– vhodný test pro stanovení karcinogenity)

B.22B.22 Dominantní letální test u hlodavců Dominantní letální test u hlodavců


(na samečky se před připouštěním na (na samečky se před připouštěním na neovlivněné samice působí testovanou neovlivněné samice působí testovanou látkou – u samic se následně hodnotí látkou – u samic se následně hodnotí

preinmplantační -preinmplantační -dle žlutých tělísek- dle žlutých tělísek- a a postimplantační ztráty,jejichž součet je postimplantační ztráty,jejichž součet je

Celková Dominantní Letalita)Celková Dominantní Letalita)

B.23B.23 Analýza chromozómových aberacíAnalýza chromozómových aberací u savčích spermatogoniíu savčích spermatogonií


(klasická cytogenetická metoda využívající (klasická cytogenetická metoda využívající diferenční citlivost zárodečných buněk-diferenční citlivost zárodečných buněk-spermatogonií-spermatogonií- k testované látce, jinak k testované látce, jinak stejně jako stejně jako B11B11 – zvířata se exponují – zvířata se exponují test.látkou, podání cytostatika, a test.látkou, podání cytostatika, a vyhodnocení karyotypu) vyhodnocení karyotypu)

B.24B.24 Spot test u myšíSpot test u myší


(in vivo test kdy je test. látka podávána v (in vivo test kdy je test. látka podávána v počátku embryogeneze a vyvolané mutace počátku embryogeneze a vyvolané mutace způsobují změnu genů melanoblastů, což se způsobují změnu genů melanoblastů, což se projevuje změnou barvy srsti na určitých projevuje změnou barvy srsti na určitých místech u narozených myší – místech u narozených myší – skvrny – skvrny – spotsspots))

B.25B.25 Přenosné translokace u myšíPřenosné translokace u myší


(cytogenetická metoda detekující (cytogenetická metoda detekující chromozomální aberace chromozomální aberace v prvnív první generaci generaci potomků vzniklých od rodičů, kdy jeden, potomků vzniklých od rodičů, kdy jeden, nebo oba byli ovlivněni testovanou látkou)nebo oba byli ovlivněni testovanou látkou)

B.26B.26 Test subchronické orální toxicity Test subchronické orální toxicity (90denní studie orální toxicity s (90denní studie orální toxicity s opakovanou aplikací hlodavcům) opakovanou aplikací hlodavcům)


B.27B.27 Test subchronické orální toxicity Test subchronické orální toxicity (90denní studie orální toxicity s (90denní studie orální toxicity s opakovanou aplikací nehlodavcům) opakovanou aplikací nehlodavcům)


B.28B.28 Subchronická toxicita dermální Subchronická toxicita dermální (90denní opakovaná aplikace, (90denní opakovaná aplikace, studie na hlodavcích) studie na hlodavcích)


Documents

METODY TESTOVÁNÍ GENOTOXICITY