DIAGNSTICA
Micologa
DIAGNSTICAPrecauciones de seguridad de ESTRICTO CUMPLIMIENTO en
un laboratorio de diagnstico micolgicoYa que muchos hongos producen
condias o esporas que se aerolizan fcilmente, las precauciones son
esenciales con el fin de prevenir la contaminacin ambiental del
laboratorio y la infeccin del personal que labora en el mismo. Una
apropiada cabina de bioseguridad puede ser usada cuando se procesa
una muestra con hongos. El cultivo de levaduras puede manejarse en
la misma forma que el cultivo bacteriano y se manipulan
rutinariamente. Debe tenerse cuidado de no salpicar material
infeccioso por flameado descuidado de la aguja o asa de alambre.
Muchos trabajadores prefieren usar incineradores para evitar este
riesgo. Los medios inclinados en tubo son ms seguros de manejar que
las placas. Las placas de Petri jams deben utilizarse si se
sospecha de Coccidioides o si los cultivos se va a enviar por
correo. Se debe realizar una preparacin hmeda de todos los hongos
antes de la siembra por deslizamiento sobre un medio de cultivo; no
coloque sobre un medio de cultivo un aislado que pueda ser
Histoplasma, Blastomyces o Coccidioides.
Micologa
DIAGNSTICASiempre que la muestra lo permita, decante el
sobrenadante dentro de recipientes con desinfectante. Todos los
materiales contaminados deben ser autoclavados antes de ser
desechados. SIEMPRE debe lavarse cuidadosamente las manos con un
jabn desinfectante despus de manejar cultivos con hongos. Las reas
de trabajo deben limpiarse con un desinfectante por lo menos
diariamente. Debe llevarse puesta la bata de laboratorio en todo
momento. Nunca debe pipetear con la boca. No se debe fumar, beber,
comer, aplicarse cosmticos o colocarse lentes de contacto en el
laboratorio. NUNCA olfatee una medio de cultivo con hongos para
determinar si tiene un olor caracterstico.
Micologa
DIAGNSTICATcnicas y MtodosConfirmacin de diagnstico de micosis
Orientacin clnica adecuada Exmenes de laboratorio ms convenientes
Tcnicas apropiadas de recoleccin de material anatomopatolgico para
estudio micolgico Caractersticas del mtodo Poner de manifiesto el
hongo en las lesiones Permitir el aislamiento del hongo por cultivo
directo o por medio de animales de laboratorio Identificacin del
hongo Investigacin de las reacciones inmunitarias del husped
ESTUDIO CON LUZ DE WOOD Suele practicarse antes que el estudio
micolgico, ms no lo sustituye til en algunas micosis superficiales
En cuarto oscuro lmpara de luz ultravioleta que emite radiaciones
de 366 nm y da fluorescencia Material para toma de muestra Barato y
alcance de todos Instrumental metlico se esteriliza por incineracin
a la flama
Micologa
DIAGNSTICAFluorescencia con la luz de WoodTia Microsprica Tia
por Favus Tia Tricoftica Pitiriasis versicolor Eritrasma
Micologa
Verde Amarillo-verdosa No hay Amarillo-verdosa Rojo coral
TOMA DE MUESTRA Suspender Cualquier tratamiento por lo menos 3
das antes Limpiar la zona afectada con alcohol, ter o cualquier
antisptico local El aislamiento e identificacin de los hongos
presentes en una muestra clnica no se lograr a menos que la misma
sea recolectada apropiadamente y enviada inmediatamente al
Laboratorio.
El mdico veterinario debe notificar al laboratorista si sospecha
de un hongo especfico, ya que: Pueden requerirse procedimientos
culturales especiales Esta informacin es til para garantizar la
seguridad del personal de laboratorio.
DIAGNSTICASangre:Recolectarse directamente en botellas que
contengan caldo y sulfonato de polyanethol sdico (SPS) en una
concentracin de 0.030.05%. Deben colocarse aproximadamente 5 ml de
sangre por cada 50 ml de caldo. Todas las botellas deben tener
entrada de aire. Tanto el caldo Soya Trypticasa como la infusin de
cerebro corazn (BHI) arrojan resultados satisfactorios, no as el
caldo tioglicolato Los medios con agar en bisel dentro de las
botellas permiten observar las caractersticas de crecimiento. Los
cultivos de muestras sanguneas suelen requerir de 20 a 30 das antes
de evidenciar crecimiento y deben ser subcultivados a intervalos
regulares de tiempo. Las levaduras se recuperan mejor de sangre
cuando se usa la tcnica de filtracin con membrana. Para la
filtracin con membrana, se recolectan 8 ml de sangre en SPS (el
tubo vacutainer con tapa amarilla elaborado por Becton Dickinson
Vacutainer Systems, Rutherford, N.J.) y se usa un filtro de 0.45 m.
El espcimen debe incubarse no ms de 1 hora a 35-37C antes de
proceder a la filtracin y siembra de la membrana filtrante.
Micologa
DIAGNSTICAMdula sea:Las muestras de mdula sea deben consistir
aproximadamente de 0.3 ml de aspirado medular recolectado con una
jeringa con heparina. Estas muestras deben enviarse directamente al
laboratorio y deben inocularse en los medios cultivo fngicos
rutinarios sin antibiticos ms un tubo de caldo BHI. Se pueden
sembrar medios de cultivo alternativos. El espcimen tambin debe
colocarse sobre laminas portaobjetos y colorearse con Giemsa o
Wright con el objeto de realizar el despistaje de Histoplasma
capsulatum.
Micologa
Fluido Cerebro Espinal (FCE):El fluido cerebroespinal (FCE) se
centrifuga a 2000 r.p.m. durante 15 minutos. No debe decantarse el
sobrenadante. Con una pipeta estril se remueve el sedimento y con l
se inoculan los medios de cultivo, preparando simultneamente lminas
para los exmenes microscpicos. Se resuspende cualquier sedimento
remanente y se reinoculan los medios de cultivo con volmenes
grandes del espcimen entero. La filtracin de Fluido Cerebro Espinal
a travs de una membrana de 0.45 m seguida por cultivo del filtro
es, a veces, el mtodo preferido.
DIAGNSTICAEspecimenes Cutneos:Piel Se toman muestras de piel de
una rea previamente limpiada con alcohol al 70%. El borde activo de
una lesin se raspa con un escalpelo o el extremo de una lmina
portaobjeto, y las escaras se colocan en una cpsula de Petri
estril. Uas Cuando se sospecha de infeccin fngica en las uas, estas
deben limpiarse con alcohol y entonces raspar profundamente para
obtener tejido de la ua recientemente invadido. Cuero cabelludo y
Pelo Los hongos que invaden cuero cabelludo y pelo se aslan mejor
cuando se cultiva la porcin basal del pelo infectado. Los pelos
infectados pueden ser seleccionados colocando al paciente bajo luz
ultravioleta (Iampara de Woods). Los pelos infectados con algunos
dermatofitos fluorescen bajo la luz ultravioleta. Deben cultivarse
los pelos que son fluorescentes, torcidos y/o fracturados.
Micologa
DIAGNSTICAExudados, pus, y drenajes:Los especimenes de exudados,
pus, y drenajes deben ser examinados para detectar la presencia de
grnulos, los cuales, en caso de estar presentes deben ser
diseccionados y estudiados microscpicamente. Algunos pueden
separarse suavemente y ser examinados, otros requieren ser lavados
varias veces con agua destilada, y aplastados con una vara de
vidrio estril, e inoculados sobre medios de cultivo apropiados
(algunos grnulos tienen origen bacterianos y deben identificarse
adecuadamente). Si no hay grnulos presentes, el espcimen se examina
microscpicamente para detectar la presencia de hifas u otros
elementos fngicos y se inocula directamente en los medios de
cultivo para aislamiento.
Micologa
Ojos:Los cultivos de hongos a partir de los ojos son muy
exitosos cuando los medios de cultivo son inoculados directamente
por el veterinario. Los raspados corneales son transferidos de la
esptula de platino al agar realizando una serie de cortes en forma
de C sobre el medio de cultivo. El material de raspado debe
limpiarse con alcohol y flameado
DIAGNSTICAFluidos:A veces los fluidos (Ej.: fluido pleural,
peritoneal, sinovial) deben ser recolectados empleando heparina
para prevenir la coagulacin. Los fluidos se centrifugan a 2500
r.p.m. durante 15 minutos, y se inoculan por los menos 0.1 ml del
sedimento en cada medio de cultivo.
Micologa
Heces:Raras veces merece la pena cultivar muestras de heces con
el objeto de aislar hongos, ya que su presencia en un material
normalmente contaminado no tiene significado. Si se cultiva el
material fecal, este debe realizarse para despistar Candida
albicans o evidenciar el crecimiento de una gran cantidad
(predominio) de levaduras. Tejidos: Las muestras de tejido debe
desmenuzarse con un escalpelo o molerse en un mortero o molinillo
de tejidos. Si se sospecha de infeccin por Zigomiceto, se debe
desmenuzar el tejido y no molerlo, ya que la molienda destruye las
hifas y disminuye la probabilidad de recuperacin de organismos
viables. Se debe examinar cuidadosamente el tejido subcutneo para
evidenciar la presencia de grnulos; si los grnulos estn presentes,
ellos deben ser manipulados como se describi previamente (seccin de
exudados, pus, y drenajes).
DIAGNSTICAOrina:La Orina debe coleccionarse en un recipiente
estril. Al llegar al laboratorio la muestra debe ser centrifugada a
2000 r.p.m. durante 15 minutos, se decanta el sobrenadante y se
colocan aproximadamente 0,1 ml de sedimento en medios de cultivo
con bisel. Tambin se coloca una gota del sedimento en una lamina
portaobjeto cubrindola con una laminilla cubreobjeto de forma de
realizar un examen microscpico. Cuando se requiere la cuantificacin
se emplea una asa calibrada para sembrar orina no centrifugada
sobre una placa de medio apropiado.
Micologa
Mtodos para el Examen Microscpico Directo de los
EspecimenesTodos los especimenes sometidos a cultivo fngico deben
ser examinados microscpicamente buscando elementos fngicos. Este
examen se hace en adiccin, pero nunca en lugar de un cultivo
fngico. As como le suministra informacin temprana al mdico
veterinario para el tratamiento, puede ser til en la determinacin
de la importancia del organismo que se pretende identificar con el
cultivo posterior.
DIAGNSTICAPreparacin con Hidrxido de Potasio (KOH) La mayora de
las sustancias orgnicas que podran confundirse con hongos cuando
son vistas a travs del microscopio se convierte a un fondo casi
claro en presencia de soluciones alcalinas moderadamente fuertes.
Los hongos no son afectados por estas soluciones y son, por
consiguiente, ms fciles de demostrar. La tinta agregada a la
solucin de KOH, permite colorear los elementos fngicos y les ayuda
a destacar del fondo. Las lminas deben examinarse microscpicamente
de una forma cuidadosa, para descubrir hifas, segmentos, esporas o
conidias, levaduras, esfrulas o cuerpos esclerticos. No deben
emplearse hisopos de algodn para la preparacin de estas lminas, ya
que las hebras de algodn se pueden parecer a las hifas. Las
preparaciones de KOH-tinta no son permanentes; los reactivos
eventualmente terminan por destruir a los hongos. La adicin de una
pequea cantidad de glicerol a la preparacin permitir la conservacin
durante varios das.
Micologa
